CZ283599A3 - Azolové fungicidy obsahující ester aminokyseliny - Google Patents

Description

Způsob izolace galanthaminu ecln in i k

Předmětem předkládaného vynálezu je způsob izolace alkaloidu galanthaminu, samotný galanthamin vyrobený podle tohoto způsobu, použití takto vyrobeného galanthaminu galenických formách přípravků, jakož i použití takto vyrobeného galanthaminu k ošetření glaukomu uzavřeného úhlu, Alzheimerovy choroby a závislosti na alkoholu a nikotinu.

4¼ v +<?ckn<Utp.

Galanthamin (4a,5,9,10,11,12-hexahydro-3-methoxy-11-methyl-6-H-benzofuro-(3a,3, 2-ef)-(2)-benzazepin-6-ol) je tetracyklický alkaloid, který na základě svých farmakologických vlastností patří ke skupině reverzibilně působících látek tlumících cholinesterasu a ve svých účincích má blízko k fyzostigminu a neostigminu. Má však také některé specifické vlastnosti, jako například silné analgetické účinky srovnatelné s morfinem. Jako látka inhibující cholinesterazu má galanthamin na základě své nízké toxicity ve srovnání k fyzostigminem a neostigminem nižší toxicitu a třikrát až šestkrát větší terapeutickou šíři. Tato výhoda vyvažuje ve vztahu k dávkování jeho o něco nižší účinek při tlumení cholinesterazy. Galanthamin se používá při poliomyelitis a různých onemocněních nervového systému, hlavně však při ošetření glaukomu uzavřeného úhlu a jako antidotum po podání kurare. Pokusně se galanthamin používá při Alzheimerově chorobě. V nejnovější době byla popsána také léčba závislosti na alkoholu a nikotinu (DE-OS 40 10 079, DE-OS 43 01 782).

Jak terapie Alzheimerovy choroby, závislosti na alkoholu a nikotinu, tak i glaukomu uzavřeného úhlu vyžaduje dlouhodobě účinné lékové formy, přizpůsobené zvláštním okolnostem. Jako taková se nabízí při ošetření glaukomu uzavřeného úhlu oční mast. Obtížná terapeutická schémata a trvalé infúze nepřicházejí ze zřejmých důvodů při léčbě Alzheimerovy choroby, závislosti na alkoholu a nikotinu v úvahu. U těchto onemocnění se mnohem více nabízí transdermální terapeutický systém (TTS), jak je to například popsáno v DE-OS 43 01 783. Ani netknutá pokožka, ani ječná zma v oku nedovolují resorbci solí účinné látky. Galanthamin. Hydrochlorid nebo hydrobromid galanthaminu může tudíž být používán v mastech nebo v TTS při terapii glaukomu uzavřeného úhlu, Alzheimerovy choroby a závislosti na alkoholu nebo nikotinu. Z tohoto důvodu se proto musí používat čistá galanthaminová báze.

Na základě své komplikované tetracyklické struktury se třemi opticky aktivními uhlovodíkovými atomy není hospodárná syntéza galanthaminové báze možná. Galanthamin se tedy izoluje obvykle z rostlin rodu amarylkovitých (Amaryllidaceae), například z druhu Galanthus, jako jsou sněženky nebo bledulí (Leucojum aestivum). Tyto rostliny mají sice tu výhodu, že obsahují galanthamin v koncentracích až 0,3 % za současného malého podílu vedlejších alkaloidů, takže se dá použít metoda extrakce popsaná v DE-PS 11 93 061. Jak druhy Galanthus, tak i Leucojum aestivum jsou ale v přírodě chráněny. Způsob extrakce popsaný v DEPS 11 93 061 používá s výhodou chlorované uhlovodíky, které se ale z toxikologických důvodů zavrhují. Lékopisy západního světa proto vyžadují omezit zbytkový obsah chlorovaných uhlovodíků na < 10 ppm. Chlorované uhlovodíky by se tudíž pokud možno neměly používat při přípravě léčiv. Kromě toho se musí u známého způsobu extrakt z rozpouštědla adsorbovat, aby se zajistilo oddělení pryskyřic a vedlejších alkaloidů. Z roztoku získaného po odfiltrování oxidu hlinitého se potom získá vyčištěním galanthamin přes galanthaminhydrobromid s tím spojenou likvidací halogenových solí. Pro použití do mastí a TTS se potom musí galanthaminová báze uvolnit ještě i z tohoto galanthaminhydrobromidu.

Úkolem předkládaného vynálezu je tudíž poskytnout způsob k izolaci a čištění galanthaminu, který nevykazuje nevýhody způsobu, známého ze stavu techniky. Zejména by se mělo ulehčit čištění, použití chlorovaných uhlovodíků a vyhnout se čištění přes sole galanthaminu. Úkol je řešen podle vynálezu způsobem význaky nároku 1. Výhodná provedení jsou charakterizována v závislých nárocích.

Vlastním předmětem vynálezu je způsob izolace galanthaminu z biologického materiálu, který se získává ze zemědělsky pěstovaných druhů rodu amarylkovitých (Amaryllidaceae) nebo z takových druhů, které se obecně považují za plevel a nejsou v přírodě chráněny, s výhodou z cibulek těchto rostlin. K těmto amarylkovitým (Amaryllidaceae) se počítají například narcisy, popřípadě druhy Crinum. Zvláště vhodné jsou Narcissus pseudonarcissus „Carlton“ nebo asijská popínavá rostlina Crinum amabile. I když tyto rostliny mají jen asi desetinu množství galanthaminu, obsaženého v rostlinách v přírodě chráněných a kromě toho ještě až dvanáct vedlejších alkaloidů, je překvapivé, že se daří pomocí způsobu podle vynálezu izolovat galanthaminovou bázi v čistotě vhodné pro léčiva.

Podle vynálezu se galanthamin uvolní z jej obsahujícího biologického materiálu, který je s výhodou rozmělněn tím, že se smísí s práškovitou alkálií, s výhodou šupinkami hydroxidu sodného, sodou, potaši nebo podobnými solemi, které jsou vhodné pro uvolňování bází z biologického materiálu a k tvorbě farmakologicky účinných látek, extrahuje a galanthamin se vyčistí z tohoto extraktu pomocí extrakce kapalina/kapalina. Zvláštní význam pro úspěch způsobu podle vynálezu má dodržení hodnoty pH v prvním stupni extrakce kapalina/kapalina. Extrakce kapalina/kapalina se provádí v prvním stupni při hodnotě pH asi 4 a v druhém stupni při hodnotě pH asi 9. Pro nastavení hodnoty pH je možno vedle koncentrovaného amoniaku použít i roztok sody nebo jinou bázi. Jako toxikologicky bezproblémové organické rozpouštědlo se používá diethyléter nebo speciální benzín. S výhodou se používá speciální benzín, protože se tím dá docílit již určité předčištění. Rozpouštědlo se odstraňuje, galanthamin se překrystalizuje z vhodného rozpouštědla, s výhodou z isopropanolu. Získá se bílá galanthaminová báze s bodem tání 129 až 130 °C. Čistota takto získaného galanthaminu se ukáže v HPLC chromatogramu (obr. 2).

Tento výsledek je o to překvapující, že se dosud používaný způsob z DEPS 11 93 061 k izolaci galanthaminu z biologického materiálu, který obsahuje málo galanthaminu a obsahuje až 12 vedlejších alkaloidů, ukázal být nedostačující. Způsobem popsaným v DE-PS 11 93 061 vzniká emulze, která se nedá rozdělit, přidá 23 I dichlorethanu. Směs se nechá stát 10 hodin; poté se odlije rozpouštědlo. Cibule se znovu přelijí 23 I dichlorethanu, který se odlije po 2 až 3 hodinách. Poté se na cibulky potřetí nalije 17 I dichlorethanu. Spojené dichlorethanové extrakty se extrahují 10 procentní kyselinou sírovou (2 % na každých 600 ml; 2x na každých 300 ml). Kyselé extrakty se spojí a vytřepáním diethyléterem se vyčistí od stop dichlorethanu. Potom se za míchání a chlazení na 15 až 20 °C přidává asi 200 ml 25 procentního vodného amoniakálního roztoku až do alkalické lakmusové reakce. Hodnota pH je kolem 7 až 8. Jinak než jak je to uvedeno ve stavu techniky vedlejší alkaloidy nevypadávají. Alkalický roztok se nasytí kuchyňskou solí a extrahuje diethyléterem. Po odpaření etheru zůstane, jinak než jak je to uvedeno ve stavu techniky, zanedbatelně malý zbytek. Nasycením potaši se nastaví pH hodnota vodní fáze na asi 14. Vodní fáze se vícekrát extrahuje diethyléterem. Spojené éterové extrakty se odpaří do sucha, zůstávající zbytek obsahující galanthamin se rozpustí v acetonu (50 mi). Na rozdíl od známého stavu techniky se nevytvoří sraženina. Dolije se 350 ml acetonu, přidá se 200 g oxidu hlinitého a míchá se 45 minut. Oxid hlinitý se odfiltruje a dvakrát se propere 100 ml acetonu. Spojené acetonové roztoky se odpaří do sucha. Získá se 1,3 g olejovitého zbytku, který se prozkoumá pomocí HPLC. Chromatogram ukazuje obr. 1. Je vyznačena hlavní špička, galanthamin. Zřetelně lze rozeznat, že takto izolovaný galanthamin je znečištěn minimálně čtyřmi látkami.

Příklad 3

100 kg na vzduchu usušených rozmělněných cibulek Narcissus pseudonarcissus „Carlton“ se pečlivě smíchá se 4 kg uhličitanu sodného. Směs se rozdělí na tři stejné díly a každý díl se přelije 15 I speciálního benzínu 80/110. Nechá se 24 hodin stát. Rozpouštědlo se dvakrát obnoví, sesbírá dohromady a nechá se do sucha odpařit za slabého vakua. Extrakty se dají do 2 procentního vodného roztoku kyseliny sírové a nastaví se koncentrovaným roztokem amoniaku ve vodě na hodnotu pH 4. Poté se extrahuje pětkrát diethyléterem. Ve vodní fázi se nastaví koncentrovaným amoniakem hodnota pH na 9 a pětkrát se extrahuje diethyléterem. Tyto etherové takže není možná extrakce. Mírně upravený způsob vedl k olejovitému zbytku, který je podle HPLC chromatogramu znečištěn nejméně čtyřmi sloučeninami (obr. 1).

Proto se musí považovat za vysloveně překvapující, že se z biologického materiálu, který obsahuje málo galanthaminu vedle velkého počtu vedlejších alkaloidů dá pomocí jednoduchého způsobu podle vynálezu izolovat volná galanthaminová báze v čisté formě a s dobrým výtěžkem, aniž by byl potřebný další adsorpční stupeň na oxidu hlinitém.

Galanthaminová báze vyrobená podle vynálezu se dá použít k léčbě glaukomu uzavřeného úhlu, k léčbě Alzheimerovy nemoci nebo závislosti na alkoholu a nikotinu. Galanthaminová báze vyrobená podle vynálezu se dá kromě toho použít v galenických formách, jako například v očních mastech nebo v transdermálních terapeutických systémech, které mohou být rovněž použity k léčbě výše uvedených nemocí.

V lodty pvov-ec/ewf

Následující příklady mají objasnit vynález aniž by ho omezovaly:

Příklad 1 (srovnávací):

Analogicky ke způsobu, který je popsán v DE-PS 11 93 061 se 10 kg na vzduchu usušených, rozmělněných cibulek Narcissus pseudonarcissus „Carlton“ pečlivě smísí s 2,5 I 8 procentního vodného roztoku amoniaku. Materiál nabobtná; celá násada se změní na maz. Přídavek 23 I dichloretanu kvůli extrakci vede k emulzi, kterou se nedaří rozbít.

Příklad 2 (srovnávací)

Způsob známý ze stavu techniky k izolaci galanthaminu (DE-PS 11 93 061) byl modifikován. 10 kg na vzduchu usušených, rozmělněných cibulek Narcissus pseudonarcissus „Carlton“ se pečlivě smísí s 400 g uhličitanu sodného. Potom se frakce se dají dohromady usuší se síranem sodným a zkoncentrují. Získá se 20 g nažloutlého olejovitého zbytku, který se překrystalizuje z horkého isopropanolu. Získá se 10 g bílé galanthaminové báze s bodem taní 129-130 °C. V HPLC chromatogramu je vidět jenom jedno špička (obr. 2). jec/en pi’lA

Claims (24)

1. Patentové nároky

   1. Způsob izolace galanthaminu, vyznačující se tím, že se biologický materiál obsahující galanthamin extrahuje toxikologicky bezproblémovým organickým rozpouštědlem a galanthamin z tohoto extraktu se vyčistí extrakcí kapalina/kapalina, přičemž extrakce kapalina/kapalina se provádí v prvním stupni při pH hodnotě asi 4.
2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se biologický materiál před extrakcí rozmělní a smíchá se s práškovou alkálií.
3. 3. Způsob podle jednoho z nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se extrakce kapalina/kapalina provádí v druhém stupni při hodnotě pH asi 9.
4. 4. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se jako prášková alkálie použije uhličitan sodný.
5. 5. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se jako toxikologicky bezproblémové organické rozpouštědlo použije diethyléter nebo speciální benzín, s výhodou speciální benzín.
6. 6. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že se obsažený galanthamin překrystalizuje z vhodného rozpouštědla.
7. 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že se jako rozpouštědlo použije isopropanol.
8. 8. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že se jako biologický materiál použijí části rostlin, s výhodou cibulky rodu Amaryllidaceae.
9. 9. Způsoby podle jednoho z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že se jako Amaryllidaceae použijí druhy narcisů, s výhodou Narcissus pseudonarcissus „Carlton“ nebo druhy Crinum, s výhodou Crinum amabile.
10. 10. Galanthamin, vyrobený podle způsobu podle jednoho z nároků 1 až 9.
11. 11. Použití galanthaminu podle nároku 10 v galenických formách přípravků.
12. 12. Použití galanthaminu podle nároku 10 v očních mastích.
13. 13. Použití galanthaminu podle nároku 10 v transdermálních terapeutických systémech.
14. 14. Galanthamin podle nároku 10 k léčbě glaukomu uzavřeného úhlu.
15. 15. Galanthamin podle nároku 10 k léčbě Alzheimerovy choroby.
16. 16. Galanthamin podle nároku 10 k léčbě alkoholové závislosti.
17. 17. Galanthamin podle nároku 10 k léčbě nikotinové závislosti.
18. 18. Farmaceutický preparát, vyznačující se tím, že obsahuje vedle o sobě známých farmaceutických pomocných látek galanthamin podle nároku 10.
19. 19. Farmaceutický preparát podle nároku 18 k místním aplikacím.
20. 20. Farmaceutický preparát podle nároku 18 nebo 19 k léčbě glaukomu uzavřeného úhlu.
21. 21. Farmaceutický preparát podle nároku 18 nebo 19 k léčbě Alzheimerovy choroby.
22. 22. Farmaceutický preparát podle nároku 18 nebo 19 k léčbě alkoholové závislosti.
23. 23. Farmaceutický preparát podle nároku 18 nebo 19 k léčbě nikotinové závislosti.
24. 24. Způsob k terapeutické léčbě lidského organismu, vyznačující se tím, že se použije galanthamin podle nároku 10 nebo farmaceutický preparát podle jednoho z nároků 18 nebo 19.