CZ295283B6

CZ295283B6 - Derivát pyridazinonu pro léčení neurohumorální nerovnováhy

Info

Publication number: CZ295283B6
Application number: CZ20004554A
Authority: CZ
Inventors: Heimo Haikala; Piero Pollesello; Juha Kaivola; Jouko Levijoki
Original assignee: Orion Corporation
Priority date: 1998-06-19
Filing date: 1999-05-26
Publication date: 2005-06-15
Also published as: WO1999066932A1; TR200003772T2; IL140032A0; EE04658B1; ATE261305T1; DE69915475T2; EP1087769A1; AU760379B2; NZ508444A; CZ20004554A3; PL345036A1; AU4516699A; PL194344B1; SK285004B6; BR9911237A; HUP0202836A2; CA2334910A1; CA2334910C; HUP0202836A3; US5905078A

Abstract

Použití (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamidu pro výrobu léčiva pro léčení neurohumorální nerovnováhy způsobené změnami srdeční funkce za účelem zabránění vývoji srdečního selhání a/nebo zvýšení citlivosti kontraktilních bílkovin srdečního svalu vůči vápníku.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká použití určitého derivátu pyridazinu pro výrobu léčiva pro léčení neurohumorální nerovnováhy způsobené změnami srdeční funkce za účelem zabránění vývoji srdečního selhání a/nebo zvýšení citlivosti kontraktilních bílkovin srdečního svalu vůči vápníku.

Dosavadní stav techniky

Racemický N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamid byl dříve popsán jako hypotenzní (US 3 746 712) a jeho kardiotonická látka mající inotropní aktivitu (US 4 397 854). Bylo zjištěno, že inotropní účinek racemickéhoN-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-6-oxo-3pyridazinyl)fenyl]acetamidu je založen na inhibici enzymu fosfodiesterázy III (PDEΙΠ) (Ishimori T. et al., Arzheim.-Forsch. (1994), 44(5), 583-8). Sloučenina I má asymetrický uhlíkový atom a může proto existovat v stereoizomemích formách. (R)- a (S)- enantiomery sloučeniny I byly dříve popsány v japonské patentové přihlášce (Heisei) JP 3163050. Údaje týkající se biologické aktivity enantiomerů však nebyly popsány.

V současnosti probíhá celá řada klinických studií na léčbu srdečního selhání s inotropními sloučeninami, např. milrinonem, jejichž mechanizmusje založen na inhibici PDE III. Tyto sloučeniny zvyšují kontraktilitu srdečního svalu zvýšením přenosu kalcia do srdečního svalu, čímž dochází k vazodilataci. Kontrakce srdečního svalu je spouštěna vazbou kalcia na troponin v tenkém filamentu kontraktilních bílkovin. Je však možné, že dlouhodobá aplikace inhibitorů PDE HI vede k přetížení srdečního svalu kalciem, které může vést k rozvoji arytmie. Proto hlavním mechanizmem zvyšujícím srdeční kontraktilitu by měl být mechanizmus, který nevede k přetížení kalciem. Zvýšení obratu intracelulámího kalcia uvolněného ze sarkoplazmatického retikula a zvýšení citlivosti kontraktilních bílkovin vůči kalciu jsou ty mechanizmy, které nevyvolávají přetížení kalciem.

Pokud má pacient závažné poškození srdeční funkce, může být pořád kontraktilita srdečního svalu udržena prostřednictvím neurohumorální aktivace v těle, což vede ke zvýšenému přísunu kalcia do srdečního svalu. V této situaci může přetížení kalciem vyvolat arytmie a prolongovaná neurohumorální aktivace vede k akceleraci rozvoje srdečního selhání. Neurohumorální nerovnováha může být indikována například změnami koncentrací reninu a noradrenalinu v plazmě pacientů. Inhibitory PDE III nemohou být používány chronicky v léčbě neurohumorální nerovnováhy, protože mohou dále zvyšovat přísun kalcia do srdečního svalu. Avšak použití látek zvyšujících citlivost vůči kalciu může dostatečně zvyšovat kontraktilitu již za normálních a snížených koncentrací kalcia, čímž dochází ke snížení potřeby neurohumorální aktivace a tímto i k zabránění rozvoje srdečního selhání.

Bylo zjištěno, že (R)-enantiomer N-[4-( 1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyljacetamidu zvyšuje citlivost vůči kalciu na tenkých filamentech kontraktilních bílkovin, a toto je jeho hlavní mechanizmus zvýšení srdeční kontraktility. Tento efekt byl neočekávaný, protože bylo popsáno, že mechanizmus účinku racemické sloučeniny I spočívá v inhibici PDE III. Z tohoto důvodu jako látka zvyšující citlivost vůči kalciu má (R)-enantiomer N-[4-(l,4,5,6tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamidu využití v léčbě neurohumorální nerovnováhy způsobené poruchami srdeční funkce za účelem zabránění srdečního selhání.

-1 CZ 295283 B6

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je použití (R)-N-[4—(1,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyljacetamidu pro výrobu léčiva pro léčení neurohumorální nerovnováhy způsobené změnami srdeční funkce za účelem zabránění vývoji srdečního selhání.

Předmětem vynálezu je dále také použití (R)-N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3pyridazinyl)fenyl]acetamidu pro výrobu léčiva pro zvýšení citlivosti kontraktilních bílkovin srdečního svalu vůči vápníku.

Farmaceuticky účinná sloučenina podle tohoto vynálezu je formulována do dávkových forem za použití principů známých v oboru. Tato je podána pacientovi jako taková nebo v kombinaci s vhodnými farmaceutickými excipienty ve formě tablet, dražé, kapslí, čípků, emulzí, suspenzí nebo roztoků. Preparát podle vynálezu obsahuje terapeuticky účinné množství farmaceuticky aktivní sloučeniny, která je předmětem vynálezu. Obsah aktivní sloučeniny je v preparátu okolo 0,5 až 100% hmotnostně.

V nárokovaném způsobu může být sloučenina, která je předmětem vynálezu, podána v perorálních dávkách v rozmezí od zhruba 0,1 až do 500 mg, přednostně od 0,5 do 10 mg za den. Volba vhodných složek preparátu je rutinní záležitosti pro osoby běžně znalé oboru. Je zřejmé, že mohou být použity také vhodné nosiče, rozpouštědla, složky vytvářející gel či disperze, antioxidanty, barviva, sladící látky, zvlhčující sloučeniny a další složky normálně používané na tomto technologickém poli.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklad bude dále ilustrovat vynález.

Příklad 1

Příprava (R)-N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4—methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamidu (R)-6-[4-ammofenyl)-4,5-dihydro-5-methyl-3-(2H)-pyridazinon (30,0 g) a acetonitril (600 ml) byly smíseny a směs byla zahřívána pod zpětným chlazením až do rozpuštění výchozího materiálu. Ke směsi byl přidán acetanhydrid (30,0 ml). Po 10 minutách byla směs ochlazena na pokojovou teplotu. Produkt byl zfíltrován, promyt acetonitrilem a vysušen. Výtěžek byl 30,8 g, teplota tání 230 až 232 °C, 'H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) 1,06 (d, 3H, J= 7,3 Hz), 2,06 (s, 3H), 2,22 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 2,67 (dd, 1H, J = 16,6 Hz, 6,8 Hz), 3,35 (m, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 10,09 (s, 1H), 10,88 (s, 1H). [a]_D ²⁰ =-466° (c = 2 mg/ml, DMF).

Použití sloučeniny, která je předmětem vynálezu, je demonstrováno následujícími experimenty. Sloučenina A je (R)-N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamid.

Účinek zvyšující citlivost obnažených srdečních vláken vůči kalciu

Levý ventrikulární papilámí sval morčete byl odříznut a promyt v ledovém Tyrodově roztoku. Poté byl papilární sval ponořen do roztoku obsahujícím (mM): Octan draselný 74,7, EGTA 10, MgSO₄ 5,4, ATP-Na₂ 4, DTE 1, MOPS 20, pH 7,0 (pomocí 1 Μ KOH). Následně byl papilámí sval sonikován při 10 Wattech po dobu 60 sekund v tomto ledovém roztoku. Vzdálenost mezi ultrazvukovou sondou a papilámím svalem byla 10 mm. Vlákna (méně než 200 pm v průměru) byla odříznuta od povrchu sonikovaných papilámích svalů. Sonikovaná a odříznutá vlákna byla

-2CZ 295283 B6 navíc udržována po dobu 30 minut v obnažovacím (ledovém) roztoku obsahujícím spolu s dalšími složkami saponin (250 pg/ml). Během tohoto postupu bylo průběžně prováděno magnetické promíchávání.

Vlákna, která byla dále seříznuta (méně než 100 μπι v průměru) byla poté horizontálně umístěna spolu s lepidlem (celulóza acetát v acetonu) mezi ocelovou tyčinku snímače izometrické síly (měřicí přístroj napětí AME-801, Horten Electronics, Norsko) a skleněnou tyčinku připojenou k mikromanipulátoru. Snímač síly byl připojen k zesilovači. Vlákna byla udržována v relaxačním roztoku obsahujícím (mM): imidazol 30, ATP-Na₂ 10, NaN₃ 5, EGTA 5, MgCl₂ 12,5 a 350 U kreatinkinázy. Teplota roztoku byla 22 °C a pH bylo nastaveno na 6,7 pomocí 1M KOH. Iontová síla byla upravena pomocí 1M KC1, aby odpovídala aktivačnímu roztoku. Složení aktivačního roztoku bylo stejné jako složení relaxačního roztoku s výjimkou, že aktivační roztok obsahoval také CaCl₂. Vlákna byla indukována ke kontrakci v požadovaných volných pCa (-log[Ca²⁺J), které byly získány vhodným smíšením relaxačních a aktivačních roztoků. Napětí vytvořené vláknem při pCa 4,8 bylo bráno jako maximální odpověď. Na počátku experimentu bylo vlákno napnuto tak, jak je popsáno výše.

Účinky zvyšující citlivost pro kalcium jsou uvedeny pro Sloučeninu A a milrinon vTabulce 1.

Tabulka 1. Účinek zvyšující citlivost obnaženého vlákna vůči kalciu při pCa 5,6

	Změna v síle/% kontroly
Sloučenina A	0,3 μΜ	+ 26±6(N = 7)
3μΜ	+109±35(N = 7)
Milrinon	Neúčinný

Pozitivně inotropní účinek na stimulovaném srdečním svalu

Byla použita čtyři týdny stará morčata vážící okolo 350 g. V experimentech byl pravý ventrikulámí papilární srdeční sval umístěn pro měření izometrického napětí v orgánové lázni obsahující modifikovaný Tyrodův roztok (37 °C) probublávaný 95% O₂, 5% CO₂. Složení modifikovaného Tyrodova roztoku bylo (mM) NaCl 135; MgCl₂.6 H₂O 1; KC1 5; CaCl₂.2 H₂O 2; NaHCO₃ 15; Na₂HPO₄ . 2H₂O 1; glukóza 10; pH 7,3-7,4. Objem otevřené horizontální komory byl 1 ml a průtok perfúzního roztoku protékajícího komorou byl 5 ml/min. Papilární sval (méně než 1 mm v průměru) byl napnut horizontálně mezi snímač posunu síly (FT 0,3 C) a jehlu fixovanou ke dnu komory. Na sval byla aplikována iniciální natahovací síla 300 mg, která byla elektricky stimulována (Stimulator model SEC 48 F, Grass Instruments) platinovými elektrodami při 1 Hz pomocí pravoúhlých pulzů (trvání 4 ms). Stimulace byla prováděna při napětí dvojnásobném než je napětí prahové, aby bylo dosaženo simultánní aktivace všech myocytů v kapilárním svalu. Snímač posunu síly byl připojen k zesilovači (polygraph D. C. driver, model 7 DA, Grass Instruments) a programovatelnému skeneru (model SI 5010, Tetronix). Amplifíkovaný signál byl digitalizován 1 kHz frekvencí programovatelným digitalizačním zařízením (model 390 A, Sony Tetronix).

Inotropní účinky Sloučeniny A a milrinonu jsou uvedeny v Tabulce 2.

Tabulka 2. Pozitivně inotropní účinek na papilární sval morčete

	ECso/μΜ
Sloučenina A	0,1
Milrinon	2

-3CZ 295283 B6

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

5 1. Použití (Rý-N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamidu pro výrobu léčiva pro léčení neurohumorální nerovnováhy způsobené změnami srdeční funkce za účelem zabránění vývoje srdečního selhání.
2. Použití (R)-N-[4-(l,4,5,6-tetrahydro-4-methyl-6-oxo-3-pyridazinyl)fenyl]acetamidu pro ío výrobu léčiva pro zvýšení citlivosti kontraktilních bílkovin srdečního svalu vůči vápnku.