PL194344B1

PL194344B1 - Zastosowanie pochodnej pirydazynonu

Info

Publication number: PL194344B1
Application number: PL99345036A
Authority: PL
Inventors: Heimo Haikala; Piero Pollesello; Juha Kaivola; Jouko Levijoki
Original assignee: Orion Corp
Priority date: 1998-06-19
Filing date: 1999-05-26
Publication date: 2007-05-31
Also published as: WO1999066932A1; CZ295283B6; TR200003772T2; IL140032A0; EE04658B1; ATE261305T1; DE69915475T2; EP1087769A1; AU760379B2; NZ508444A; CZ20004554A3; PL345036A1; AU4516699A; SK285004B6; BR9911237A; HUP0202836A2; CA2334910A1; CA2334910C; HUP0202836A3; US5905078A

Abstract

1. Zastosowanie (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]aceta- midu do wytwarzania leku do stosowania w leczeniu nierównowagi neurohumoralnej spowodowa- nej zmianami w czynnosci serca w celu zapobiezenia rozwojowi niewydolnosci serca. 2. Zastosowanie (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]aceta- midu do wytwarzania leku do zwiekszania wrazliwosci bialek kurczliwych miesnia sercowego na wapn. PL PL PL

Description

Opis wynalazku

Wynalazek dotyczy zastosowania pochodnej pirydazynonu -(R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu.

Racemiczny N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamid (I) opisano już wcześniej jako środek hipotensyjny (patent USA 3 746 712) oraz jako środek kardiotoniczny o aktywności inotropowej (patent USA 4 397 54). Jak donoszono, inotropowe działanie racemicznego N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu opiera się na zahamowaniu enzymu fosfodiesterazy III (PDE III) (Ishimori i in., Arzneim.-Forsch. (1994), 44(5), 583-8). Związek (I) zawiera asymetryczny atom węgla, a zatem może występować w postaci dwóch stereoizomerów. W japońskim zgłoszeniu patentowym nr (Heisei) JP 3163050 opisano już enancjomery (R) i (S) związku (I), jednakże nie ujawniono danych dotyczących ich aktywności biologicznej.

W chwili obecnej prowadzi się badania kliniczne wielu związków inotropowych do leczenia niewydolności serca, np, milrinonu, których mechanizm jest oparty na zahamowaniu PDE III. Związki te zwiększają kurczliwość mięśnia sercowego przez wzrost prądu wapniowego w mięśniu sercowym i powodują rozszerzenie naczyń. Skurcz mięśnia sercowego następuje w wyniku wiązania wapnia z troponiną w cienkim włókienku białek kurczliwych. Istnieje jednakże możliwość, że długotrwałe podawanie inhibitorów PDE III doprowadzi do nadmiaru wapnia w mięśniu sercowym, co może spowodować arytmię. A zatem, główny mechanizm zwiększenia kurczliwości serca powinien być mechanizmem nie powodującym przeciążenia wapniem. Takimi mechanizmami, są np. zwiększenie obrotu metabolicznego wewnątrzkomórkowego wapnia uwalnianego z sarkoplazmatycznego retikulum i zwiększenie wrażliwości białek kurczliwych na wapń.

Gdy u pacjenta występują szkodliwe zmiany w czynności serca, kurczliwość mięśnia sercowego można nadal utrzymać przez neurohumoralną aktywację organizmu, która zwiększa pobór wapnia w mięśniu sercowym. W takiej sytuacji przeciążenie wapniem może wywołać arytmię, a przedłużona aktywacja neurohumoralna przyspieszy rozwój niewydolności serca. Nierównowagę neurohumoralną można wykazać, na przykład, przez zmianę stężeń reniny i noradrenaliny w osoczu pacjenta.

Inhibitorów PDE III nie można stosować przewlekle w leczeniu nierównowagi neurohumoralnej, ponieważ powodują one dalszy wzrost poboru wapnia w mięśniu sercowym. Jednakże, zastosowanie środka uwrażliwiającego na wapń może wystarczająco zwiększyć kurczliwość przy normalnych i zmniejszonych stężeniach wapnia, co z kolei zmniejszy potrzebę aktywacji neurohumoralnej, a tym samym zapobiegnie rozwojowi niewydolności serca.

W J. Med. Chem. ujawniono N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamid wykazujący dodatnią aktywność inotropową z powodu hamowania PDE III. Jednak, jak wynika z tej publikacji, nie przypuszczano, aby inhibitory PDE mogły być użyteczne w normalizowaniu przeciążenia wapniem, które występuje w stanie nierównowagi neurohumoralnej.

Obecnie stwierdzono, że enancjomer (R) N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu działa na cienkie włókienka kurczliwych białek w sposób uwrażliwiający na wapń, co stanowi główny mechanizm wzrostu kurczliwości serca. Działanie takie jest nieoczekiwane, ponieważ, jak donoszono, mechanizm działania racemicznego związku (I) wiąże się z zahamowaniem PDE III. Tak więc, jako środek uwrażliwiający na wapń, enancjomer (R) N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu, ma zastosowanie w leczeniu nierównowagi neurohumoralnej spowodowanej zmianami w czynności serca, a tym samym w zapobieganiu rozwojowi niewydolności serca.

Niniejszy wynalazek umożliwia leczenie nierównowagi neurohumoralnej spowodowanej zmianami w czynności serca, przez podawanie pacjentowi wymagającemu takiego leczenia, np. doustnie lub pozajelitowo, w stałej lub ciekłej postaci użytkowej, skutecznej ilości enancjomeru (R) związku (I), a tym samym - umożliwia zapobieżenie rozwojowi niewydolności serca.

Niniejszy wynalazek umożliwia także zwiększenie wrażliwości kurczliwych białek na wapń przez podawanie pacjentowi, który tego wymaga, skutecznej ilości enancjomeru (R) związku (I).

Przedmiotem wynalazku jest więc zastosowanie enancjomeru (R) N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu do wytwarzania leku do stosowania do leczenia nierównowagi neurohumoralnej spowodowanej zmianami w czynności serca, w celu zapobieżenia rozwojowi niewydolności serca.

PL 194 344B1

Ponadto, przedmiotem wynalazku jest zastosowania enancjomeru (R) N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu do wytwarzania leku do zwiększania wrażliwości białek kurczliwych mięśnia sercowego na wapń.

Farmaceutycznie czynny związek stosowany zgodnie z obecnym wynalazkiem przeprowadza się w postaci użytkowe, zgodnie ze znanymi w technice zasadami. Związek podaje się pacjentowi jako taki lub w kombinacji z odpowiednimi farmaceutycznymi substancjami pomocniczymi w postaci tabletek, drażetek, kapsułek, czopków, emulsji, zawiesin lub roztworów. Kompozycja przygotowana na podstawie wynalazku zawiera terapeutycznie skuteczną ilość farmaceutycznie czynnego związku według wynalazku. Zawartość czynnego związku w kompozycji wynosi od około 0,5 do 100% wagowych.

Związek stosowany zgodnie z wynalazkiem można podawać człowiekowi w dawkach doustnych w zakresie od około 0,1 do 500 mg, korzystnie 0,5 do 10 mg dziennie. Dobór odpowiednich składników kompozycji jest sprawą rutynową dla specjalisty w tej dziedzinie techniki. Oczywiste, że można stosować odpowiednie nośniki, rozpuszczalniki, składniki tworzące żel, składniki tworzące dyspersje, przeciwutleniacze, barwniki, substancje słodzące, środki zwilżające i inne powszechnie stosowane substancje w tej dziedzinie technologii.

Wynalazek zilustrowano poniżej następującymi przykładami.

P r z y k ł a d 1. Wytwarzanie (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu

Zmieszano (R)-6-(4-aminofenylo)-4,5-dihydro-5-metylo-3(2H)-pirydazynon (30,0 g) i acetonitryl (600 ml) i mieszaninę ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną, aż do rozpuszczenia substancji wyjściowych. Do wrzącej mieszaniny dodano bezwodnik octowy. Po 10 minutach roztwór pozostawiono, aby oziębił się do temperatury pokojowej. Produkt przesączono, przemyto acetonitrylem i wysuszono. Wydajność: 30,8 mg, temp. topn. 230-232°C, ¹H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 1,06 (d, 3H, J = 7,3 Hz), 2,06 (s, 3H(, 2,22 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 2,67 (dd, 1H, J = 16,6 Hz, 6,8 Hz), 3,35 (m, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 7,72 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 10,09 (s, 1H), 10,88 (s, 1H). [a]D²⁰ = -466° (c=2 mg/ml, DMF).

Badanie działania środka uwrażliwiającego na wapń w pozbawionym błony komórkowym włóknie sercowym

Mięsień brodawkowaty lewej komory świnki morskiej wycięto i przepłukano w oziębionym lodem roztworze Tyrode. Następnie mięsień brodawkowaty zanurzono w roztworze zawierającym (mM): 74,7 octanu potasu, 10 EGTA, 5,4 MgSO4, 4 ATP-Na2, 1DTE, 20 MOPS, o pH dostosowanym do 7,0 (przy użyciu 1,0 M KOH), po czym poddano sonikacji przy 10 wat przez 60 sekund. Odległość pomiędzy sondą ultradźwiękową i mięśniem brodawkowatym wynosiła 10 mm. Włókna (o średnicy < 200 mm) odcięto od powierzchni sonikowanych mięśni brodawkowatych. Ponadto, poddane sonikacji i odcięte włókna utrzymywano przez 30 minut w roztworze „ściągającym (oziębionym lodem), który oprócz innych składników zawierał saponinę (250 mg/ml). W czasie tej obróbki roztwór w sposób ciągły mieszano, stosując mieszadło magnetyczne.

Włókna, które dalej pocięto (o średnicy < 100 mm) przymocowano klejem (octan celulozy w acetonie) pionowo pomiędzy stalowym prętem wystającym z przetwornika siły izometrycznej ze wskaźnikiem napięcia (wskaźnik napięcia AME-801, Horten Electronics, Norwegia) i szklanym prętem przyłączonym do mikromanipulatora. Przetwornik siły połączono ze wzmacniaczem. Włókna utrzymywano w roztworze „rozluźniającym zawierającym (mM):

imidazolu, 10 ATP-Na2, 5 NaN3, 5 EGTA, 12,5 MgCl2 i 350 U kreatynokinazy. Temperatura roztworu wynosiła 22°C, a pH doprowadzono do wartości 6,7 przez dodatek 1M KOH. Siłę jonową wyregulowano stosując 1M KCl, aby odpowiadała sile jonowej roztworu „aktywującego. Skład roztworu „aktywującego był taki sam, jak skład roztworu „rozluźniającego, z tym wyjątkiem, że roztwór „aktywujący zawierał również CaCl2. Włókna pobudzono do kurczenia się w żądanym wolnym pCas (log[Ca²⁺]), który uzyskano przez odpowiednie zmieszanie roztworu „rozluźniającego i „aktywującego. Napięcie wytworzone przez włókno przy pCa 4,8 przyjęto jako odpowiedź maksymalną. Na początku badania włókno rozciągnięto, jak opisano powyżej.

W tabeli 1 przedstawiono działanie uwrażliwiające na wapń związku A i milrinonu.

PL 194 344B1

T a be l a 1

Działanie uwrażliwiające na wapńw pozbawionym błony komórkowej włóknie przy pCa 5,6

	Zmiany siły/% kontroli
Związek A	3 mM	+26 ± 6 (n = 7)
	3 mM	+ 109 ± 35 (n = 7)
Milrinon	nieskuteczny

Dodatnie działanie inotropowe w stymulowanym mięśniu sercowym

W badaniu stosowano czterotygodniowe świnki morskie o ciężarze około 350 g. Mięsień brodawkowaty prawej komory serca umocowano do pomiaru ciśnienia izometrycznego w kąpieli organicznej zawierającej zmodyfikowany roztwór Tyrode (37°C) barbotowany 95% O2, 5% CO2.

Skład zmodyfikowanego roztworu Tyrode był następujący (mM:): 135 NaCl; 1 MgCl₂-6H₂O; 5 -KCl; 2 CaCl₂-2H₂O; 15 NaHCO₃; 1 Na₂HPO₄-2H₂O; 10 glukozy; pH 7,3-7,4. Objętość otwartej pionowej komory wynosiła 1 ml, a szybkość przepływu roztworu do superfuzji przez komorę wynosiła 5 ml/min. Mięsień brodawkowaty (o średnicy <1 mm) rozciągnięto pionowo pomiędzy pomiędzy skokowym przetwornikiem siły (FT 0,3 C) a igłą zamocowaną w dnie komory. Do mięśnia przykładano na początku napięcie rozciągające 300 mg i mięsień stymulowano elektrycznie (Stimulator model SEC 48 F, Grass Instruments) za pomocą platynowych elektrod przy 1 Hz z prostopadłymi impulsami (czas trwania 4 ms). Stymulowanie prowadzono przy dwukrotnym napięciu progowym w celu uzyskania jednoczesnego aktywacji wszystkich miocytów w mięśniu brodawkowatym. Skokowy przetwornik siły podłączono do wzmacniacza z napędzanym poligrafem DC (model 7 DA, Grass Instruments) i programowalnym skanerem (model SI 5010, Tetronix). Wzmocnione sygnały przetworzono na sygnały cyfrowe przy częstotliwości 1 kHz, stosując programowalny przetwornik analogowo-cyfrowy (model 390 A, Sony Tetronix).

Działanieinotropowe związku A i milrinonu przedstawiono wtabeli 2.

T a be l a 2

Dodatnie działanie inotropowe w mięśniu brodawkowatym świnki morskiej

Claims

1. Zastosowanie (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu do wytwarzania leku do stosowania w leczeniu nierównowagi neurohumoralnej spowodowanej zmianami w czynności serca w celu zapobieżenia rozwojowi niewydolności serca.

2. Zastosowanie (R)-N-[4-(1,4,5,6-tetrahydro-4-metylo-6-okso-3-pirydazynylo)fenylo]acetamidu do wytwarzania leku dozwiększania wrażliwości białekkurczliwychmięśnia sercowego na wapń.