CZ298749B6

CZ298749B6 - Inhibitory serinových proteáz a farmaceutické prostředky s jejich obsahem

Info

Publication number: CZ298749B6
Application number: CZ0134099A
Authority: CZ
Inventors: D. Tung@Roger; L. Harbeson@Scott; D. Deininger@David; A. Murcko@Mark; Rao Bhisetti@Govinda; J. Farmer@Luc
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date: 1996-10-18
Filing date: 1997-10-17
Publication date: 2008-01-16
Also published as: ATE212037T1; IS5028A; BR9712544A; AU719984B2; PL194025B1; DE69709671T2; DK0932617T3; US8314141B2; EP2409985A2; CN1133649C; GEP20012471B; IL191905A0; US6265380B1; BR9712544B1; US20040266731A1; CA2268391A1; US7388017B2; SK286105B6; JP4080541B2; JP5301523B2

Abstract

Peptidové deriváty obecného vzorce II, a farmaceutické prostředky s jejich obsahem, použitelné pro inhibici proteáz, zejména serinových proteáz, obzvláště HCV NS3 proteáz. Jejich použití pro inhibici viru, zejména HCV viru, a to buď samotně, nebo v kombinaci.

Description

Předkládaný vynález se týká nové třídy sloučenin, které jsou vhodné jako inhibitory proteáz, zejména jako inhibitory serinových proteáz a zvláště jako inhibitory proteázy hepatitidy CNS3. Jako takové působí pomocí zasahování do životního cyklu viru hepatitidy C a jsou také vhodné jako antivirová činidla.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících tyto sloučeniny. Sloučeniny a farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu jsou zvláště vhodné pro inhibici aktivity HCV NS3 proteázy a tedy mohou být s výhodou použity jako terapeutická činidla proti viru hepatitidy C a jiným virům, jejichž proliferace je závislá na serinové proteáze.

Dosavadní stav techniky

Infekce virem hepatitidy C („HCV“) je závažný problém humánní medicíny. HCV se považuje za příčinu většiny non-A, non-B hepatitid s odhadovanou lidskou seroprevalencí na úrovni 1 %. Viz. Purcell R. H., „Hepatitis C virus: Historical perspective and current concepts“, FEMS Microbiology Reviews 14, 181-192 (1984); Van der Poel C. L., „Hepatitis C Virus, Epidemiology, transmission and Prevention in Hepatitis C Virus, Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, H. W. Reesink, Ed., (BasehKarger), 137-163 (1994). Pouze ve Spojených státech mohou být nakaženy 4 miliony lidí (Alter M. J. a Mast Ε. E., „The Eoidemiology of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North. Am. 23, 437—455 (1994)).

Po první expozici HCV pouze asi 20 % nakažených osob onemocní akutní klinickou hepatitidou, zatímco ostatní vypadají, že infekci zvládli spontánně. Ve většině případů ale virus způsobí chro30 nickou infekci, která trvá desetiletí (Iwarson S., „The Natural Course of Chronic hepatitis“ FEMS Microbiology Reviews 14, 201-204 (1994)). Toto obvykle vede k opakovaným a progresivně se zhoršujícím zánětům jater, které často vedou k závažnějším onemocněním jako je cirhosa a rakovina jatemích buněk (Kew M. C. „Hepatitis C and Hepatocellular Caricoma“, FEMS Microbiology Reviews 14, 211-220 (1994); Saitol. a další, „Hepatitis C Virus Infection is Associated with Development of Hepatocellular Carcinoma“ Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87, 6547-6549 (1990)). Bohužel zatím neexistuje úplné účinné léčení oslabující progrese chronické HCV.

HCV genom kóduje polypeprotein 3010-3033 aminokyselin (Choo Q. L. a další, „Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus“, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 88, 2451-2455 (1991); Kato N. a další, Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From

Japanese Ptients with non-A, non-B Hepatitis“, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87, 9524-9528 (1990); Takizawa A. a další „Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers“, J. Virol. 65, 1105-1113 (1991). Předpokládá se, že HCV nestruktumí (NS) proteiny působí jako nezbytný katalyzátor replikace viru. NS proteiny pochá45 zejí z proteolytického štěpení polyproteinu (Bartenschlager R. a další, „Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions“, J. Virol 67, 3835-3844 (1993); Grakoui A. a další „Characterization of Hepatitis C Virus-Encoded Serin Protease: Determination of Proteinase-Dependent Polypropetin Cleavage Sites“, J. Virol. 67, 2832-2843 (1993) Grakoui A. a další, Expression and Identification oof Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products“, J. Virol. 67, 1385-1395 (1993); Tomei L. a další, „NS3 is a Serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein“, J. Virol. 67, 4017^1026 (1993)).

HCV NS protein 3 (NS3) má aktivitu serinové proteázy, která pomáhá zpracovat většinu enzymů viru, a proto se považuje za nezbytnou pro replikaci a infekčnost viru. Je známo, že mutace

-1 CZ 298749 B6 proteázy NS viru žluté zimnice snižuje infekčnost viru (Chambers T. J. a další, „Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Sire-Specifíc Cleavages in the Viral Polyprotein“, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87, 8898-8902 (1990). Bylo dokázáno, že prvních 181 aminokyselin NS3 (zbytky 1027-1207 polyproteinu viru) obsahuje doménu serinové proteázy NS3, která zpracovává všechny 4 po proudu směřující místa HCV polyproteinu (C. Lín a další, „Hepatitis C Virus NS3 Serine Protease: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics“, J. Virol. 68, 8147-8157 (1994)).

ío HCV NS3 serinová proteáza a její asociovaný kofaktor NS4 pomáhá zpracovat všechny enzymy viru, a proto se považuje za nezbytnou pro replikaci viru. Toto zpracování se jeví jako analogické ke zpracování prováděnému aspartylovou proteázou viru lidské ztráty imunity, které se také podílí na zpracování inhibitorů proteáz enzymu viru HIV, které inhibují zpracování proteinu viru a jsou silná antivirová činidla u lidí. To znamená, že přerušení tohoto stádia životního cyklu viru vede k terapeuticky aktivním činidlům. V důsledku toho se jedná o atraktivní cíl farmaceutického výzkumu. Bohužel dosud nejsou k dispozici žádné inhibitory serinových proteáz ani anti-HCV činidla.

Mimoto současné poznání HCV nevedlo k žádnému úspěšnému anti-HCV činidlu ani léčení.

Jediná používaná terapie HCV je interferonové léčení. Interferony mají ale značné vedlejší účinky (Janssen a další, 1994; Renault a Hoofnagle, 1989). Viz. Jansen H. L. A. a další, „Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis“, J. Hepatol. 21, 241-243 (1994), Renault P. F. a Hoofnagle J. H. „Side effects of alpha interferon Seminars in Liver Disease 9, 273-277 (1989). Interferony dlouhodobě působí také jen v malé části případů (Weiland O. „Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection“ FEMS Microbiol. Rev. 14, 279-288 (1994)). Navíc vyhlídky na účinné anti-HCV vakcíny jsou neurčité.

Proto existuje potřeba účinnější anti-HCV léčby. Uvedené inhibitory mají terapeutický potenciál jako inhibitory proteáz, zejména serinových proteáz a konkrétněji HCV NS3 proteáz. Taková činidla mohou být užitečná jako antivirová činidla zejména proti HCV.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty, které jsou vhodné jako inhibitory proteáz, zejména jako inhibitory serinových proteáz a zvláště jako inhibitory HCV NS3 proteázy. Tyto sloučeniny mohou být použity samotné nebo ve spojení s imunomodulačními činidly, jako jsou interferony α, β nebo γ; jiná antivirová činidla, jako je ribavirin a amantadin; jiné inhibitory proteázy hepatitidy C; inhibitory jiných cílů v životním cyklu HCV včetně helikázy, polymerázy, metalloproteázy nebo interních ribozomových vstupů; nebo jejich kombinace.

Předkládaný vynález také poskytuje farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny podle vynálezu, stejně jako mnohosložkové prostředky obsahující další imunomodulační činidla, jako jsou interferony α, β nebo γ; jiná antivirová činidla, jako je ribavirin a amantadin; jiné inhibitory proteázy hepatitidy C; inhibitory jiných cílů v životním cyklu HCV včetně helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo interních ribozomových vstupů; nebo jejich kombinace.

Podrobný popis vynálezu

Aby mohl být předkládaný vynález lépe pochopen, je přiložen následující podrobný popis. V popisu jsou použity následující zkratky:

-2CZ 298749 B6

Označení Činidlo nebo fragment

Abu

Ac

AcOH Bn Boc Bz Cbz

CDI DCE DCM DIEA DMA

DMAP DMF DPPA DMSO Et

EtOAc FMOC HbtU HOBt HPLC

Me MS NMP ND Pip

Prz

PyBrop

Pyr

THF

TFA

TFE Tol kyselina aminobutanová acetyl kyselina octová benzyl terc.butoxykarbonyl benzoyl karbobenzyloxy karbonyldiimidazol

1,2-dichlormethan dichlormethan diisopropylethylamin dimethylacetamid dimethylaminopyridin dimethylformamid difenylfosforylazid dimethylsulfoxid ethyl ethylacetát

9-fluorenylmethoxykarbonyl

O-benzotriazolyl-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfát

N-hydroxybenzotriazol vysokotlaká kapalinová chromatografie methyl hmotová spektroskopie

N-methylpyrrolidon neurčeno piperidin piperazin brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát pyridin tetrahydrofuran kyselina trifluoroctová trifluorethanol toluen

Pokud není uvedeno jinak, mají následující termíny používané v rámci vynálezu následující významy:

Pokud není uvedeno jinak, termíny ,,-SO₂-„ a ,,-S(O)₂-„ znamenají sulfon nebo deriváty sulfonu (tj. obě připojené skupiny jsou vázány na atom síry) a ne ester sulfinátu.

Termín „substituovaný“ znamená náhradu jednoho nebo více atomů vodíku v dané struktuře 45 zbytkem vybraným ze specifické skupiny. Pokud může být nahrazen více než jeden atom vodíku substituentem vybraným ze stejné specifické skupiny, substituenty ve všech polohách mohou být buď stejné nebo různé.

Termín „aminoskupina“ znamená trojvazný atom dusíku, který může být primární nebo může být 50 substituovaný jednou až dvěma alkylovými skupinami.

Termín „alkylová skupina“, samotný nebo v kombinaci s jiným termínem, je přímý nebo rozvětvený nasycený alifatický uhlovodíkový zbytek obsahující specifický počet atomů uhlíku, nebo, pokud není uvedeno žádné číslo, s výhodou obsahuje 1 až 10, výhodněji 1 až 5, atomů uhlíku.

Mezi příklady alkylových skupin patří methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová sku-3CZ 298749 B6 pina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, isobutylová skupina, sek-butylová skupina, terc-butylová skupina, pentylová skupina, isoamylová skupina, n-hexylová skupina a podobně, vynález se však neomezuje na uvedené příklady.

Termín „alkenylová skupina“ nebo „alkenová skupina“ samotný nebo ve spojení, znamená přímý nebo rozvětvený mono- nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový zbytek obsahující specifikovaný počet atomů uhlíku nebo, pokud není uvedeno žádné číslo, 2 až 10 atomů uhlíku a výhodněji 2 až 5 atomů uhlíku. Příklady alkenylových zbytků zahrnují ethylenovou skupinu, E- a Z-propenylovou skupinu, E- a Z-isobutenylovou skupinu, E- a Z-pentenylovou skupinu, ίο E- a Z-hexenylovou skupinu, Ε,Ε-, Ε,Ζ-, Ζ,Ε-, a Z-Z-hexadienylovou skupinu a podobně, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Termín „alkinylová skupina“ nebo „alkinová skupina“ samotný nebo v kombinaci s jakýmkoli jiným termínem, znamená přímý nebo rozvětvený mono nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový řetězec obsahující specifikovaný počet atomů uhlíku, nebo, pokud není uvedeno žádné číslo, s výhodou 2 až 10 atomů uhlíku a výhodněji 2 až 5 atomů uhlíku, kde nejméně jeden z nenasycených alifatických uhlovodíkových zbytků obsahuje trojnou vazbu. Příklady alkinylových skupin zahrnují ethinylovou skupinu, propinylovou skupinu, isobutinylovou skupinu, pentinylovou skupinu, hexinylovou skupinu, hexeninylovou skupinu a podobně, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Termín „arylová skupina“, samotný nebo v kombinaci s jakýmkoli jiným termínem, znamená karbocyklický aromatický zbytek obsahující specifikovaný počet atomů uhlíku a který může být popřípadě spojen, například spojen s benzoskupinou, s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými a heteroaromatickými kruhy. Výhodné arylové skupiny obsahují 6 až 14 atomů uhlíku a výhodnější skupiny obsahují 6 až 10 atomů uhlíku. Mezi příklady arylových skupin patří fenylová skupina, nafiylová skupina, anthracenylová skupina a podobně, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Termín „karbocyklus“, samotný nebo kombinaci s jakýmkoli jiným termínem, znamená stabilní nearomatický tříčlenný až osmičlenný uhlíkový kruhový zbytek, kteiý může být nasycený, mononenasycený nebo polynenasycený, a který může být popřípadě spojen, například s benzoskupinou, s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy. Karbocyklus může být připojen na jakémkoli endocyklickém atomu uhlíku, přičemž musí vzniknout stabilní struktura.

Termíny „cykloalkylová skupina“ nebo „cykloalkanová skupina“, samotné nebo v kombinaci s jinými termíny, znamenají stabilní nearomatický tříčlenný až osmičlenný uhlíkový kruhový zbytek, který je nasycený a který může být popřípadě spojen, například spojen s benzoskupinou, s jednou až třemi cykloalkylovými skupinami, aromatickými skupinami, heterocyklickými skupinami, nebo heteroaromatickými skupinami. Cykloalkylová skupina může být připojena na jakémkoli endocyklickém atomů uhlíku, pokud vznikne stabilní struktura. Výhodné karbocykly mají 5 až 6 atomů uhlíku. Příklady karbocyklických zbytků jsou cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklohexylová skupina, cykloheptylová skupina, cyklopentenylová skupina, cyklohexenylová skupina, indanová skupina, tetrahydronaftalenová skupina a podobně, vynález se však neomezuje pouze na uvedené příklady.

Termín „cykloalkenylová skupina“ nebo „cykloalkenová skupina“, samotný nebo v kombinaci s jiným termínem, znamená stabilní cyklický uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující nejméně jednu endocyklickou dvojnou vazbu uhlík-uhlík. Karbocyklus může být připojen na jakémkoli cyklickém atomu uhlíku, pokud vznikne stabilní struktura. Pokud není uveden počet atomů uhlíku, cykloalkenylový zbytek má s výhodou 5 až 7 atomů uhlíku. Příklady cykloalkenylových zbytků jsou cyklopentenylová skupina, cyklohexenylová skupina, cyklopentadienylová skupina, indenylová skupina a podobně, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Termín „cykloalkylidenylová skupina“, samotný nebo kombinaci s jakýmkoli jiným termínem, znamená stabilní uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující alespoň jednu endocyklickou dvojnou

-4CZ 298749 B6 vazbu uhlík-uhlík, kde cyklický uhlovodíkový kruh může být popřípadě spojen, například spojen s benzoskupinou, s jednou až třemi cykloalkylovými skupinami, aromatickými skupinami, heterocyklickými skupinami nebo heteroaromatickými skupinami. Karbocyklus může být připojen na jakémkoli cyklickém atomu uhlíku, pokud vznikne stabilní struktura. Pokud není uveden počet atomů uhlíku, cykloalkenylový zbytek má s výhodou 5 až 7 atomů uhlíku. Příklady cykloalkylidenylových zbytků jsou cyklopentylidenylová skupina, cyklohexylidenylová skupina, cyklopentenylidenylová skupina a podobně, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Odborníkům v této oblasti bude zřejmé, že určité skupiny mohou být klasifikovány buď jako cykloalkanové skupiny, nebo jako arylové skupiny. Mezi příklady takových skupin patří indanylová skulo pina a tetrahydronaflylová skupina.

Termín „monocyklus“ nebo „monocyklický“, samotný nebo ve spojení s jiným termínem, pokud není uvedeno jinak, znamená pětičlenný až sedmičlenný kruhový systém.

Termín „bicyklus“ nebo „bicyklický“, samotný nebo ve spojení s jiným termínem, pokud není uvedeno jinak, znamená šestičlenný až jedenáctičlenný kruhový systém.

Termín „tricyklus“ nebo „tricyklický“, samotný nebo ve spojení s jiným termínem, pokud není uvedeno jinak, znamená jedenáctičlenný až patnáctičlenný kruhový systém.

Termíny „heterocyklylová skupina“ nebo „heterocyklus“, samotné nebo ve spojení s jiným termínem, pokud není uvedeno jinak, znamenají stabilní pětičlenný až patnáctičlenný mono-, bi- nebo tricyklický, heterocyklický kruh, který je buď nasycený, nebo částečně nenasycený, ale není aromatický, a který může být popřípadě spojený, například spojený s benzoskupinou, s jed25 nou až třemi cykloalkylovými skupinami, aromatickými skupinami, heterocyklickými skupinami nebo heteroaromatickými skupinami. Každý heterocyklus se skládá z jednoho nebo více atomů uhlíku a z jednoho až čtyř heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry. Termíny „dusíkový nebo sírový heteroatom“ zahrnují jakoukoli oxidovanou formu dusíku a síry a kvartemizovanou formu jakéhokoli bazického atomu dusíku. Heterocyklus může být připojen na jakémkoli endocyklickém atomu uhlíku nebo heteroatomů, pokud vznikne stabilní struktura.

Mezi výhodné heterocykly definované výše patří například imidazolidinylová skupina, indazolinolylová skupina, perhydropyridazylová skupina, pyrrolinylová skupina, pyrrolidinylová skupi35 na, piperidinylová skupina, pyrazolinylová skupina, piperazinylová skupina, morfolinylová skupina, thiomorfolinylová skupina, β-karbolinylová skupina, thiazolidinylová skupina, thiamorfolonylsulfonová skupina, oxopiperidinylová skupina, oxopyrrolidinylová skupina, oxoazepinylová skupina, azepinylová skupina, furazanylová skupina, tetrahydropyranylová skupina, tetrahydrafuranylová skupina, oxathiolylová skupina, dithiolylová skupina, tetrahydrothiofenylová skupina, dioxanylová skupina, dioxolanylová skupina, tetrahydrofurotetrahydrofuranylová skupina, tetrahydropyranotetrahydrofuranylová skupina, tetrahydrofurodihydrofuranylová skupina, tetrahydropyranodihydrofuranylová skupina, dihydropyranylová skupina, dihydrofuranylová skupina, dihydrofurotetrahydrofuranylová skupina, dihydropyranotetrahydrofuranylová skupina, sulfolanylová skupina a podobně.

Termíny „heteroarylová skupina“ a „heteroaromatická skupina“, samotné nebo v kombinaci s jakýmkoli jiným termínem, pokud není uvedeno jinak, znamenají stabilní tříčlenný až sedmičlenný monocyklický heterocyklický kruh, který je aromatický, a který může být popřípadě spojený, například spojený s benzoskupinou, s jednou až třemi cykloalkylovými skupinami, aroma50 tickými skupinami, heterocylickými skupinami nebo heteroaromatickými skupinami. Každý heteroaromatický kruh obsahuje jeden nebo více atomů uhlíku a jeden až čtyři heteroatomy vybrané ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry. Termíny „dusíkový a sírový heteroatom“ zahrnují jakoukoli oxidovanou formu dusíku a síry a kvartemizovanou formu jakéhokoli bazického atomu dusíku. Heteroaromatický kruh může být připojen na jakémkoli endocyklickém atomu uhlíku nebo heteroatomů, pokud vznikne stabilní aromatická struktura.

-5 CZ 298749 B6

Výhodnými heteroaromatickými skupinami definovanými výše jsou například benzimidazolylová skupina, imidazolylová skupina, chinolylová skupina, isochinolylová skupina, indolylová skupina, indazolylová skupina, pyridazylová skupina, pyridylová skupina, pyrrolylová skupina, pyrazolylová skupina, pyrazinylová skupina, chinoxalylová skupina, pyranylová skupina, pyrimidinylová skupina, pyridazinylová skupina, fuiylová skupina, thienylová skupina, triazolylová skupina, thiazolylová skupina, tetrazolylová skupina, benzofuranylová skupina, oxazolylová skupina, benzoxazolylová skupina, isoxazolylová skupina, isothiazolylová skupina, thiadiazolylová skupina, thiofenylová skupina a podobně.

Termín „atom halogenu“ znamená atom fluoru, atom chloru, atom bromu nebo atom jodu. Výhodnými atomy halogenu jsou atomy fluoru a atom chloru.

V chemických vzorcích se používají závorky, aby se označila 1) přítomnost více než jednoho atomu nebo skupiny vázané na stejný atom nebo skupinu; nebo 2) místo větvení řetězce (tj. skupinu nebo atom těsně před začátkem závorek je vázán přímo ke skupině nebo atomu těsně za uzavřením závorek). Příkladem prvního použití je „N(R')₂“, což znamená, že jsou dvě skupiny R¹ vázané k atomu dusíku. Příkladem druhého použití je ,,-C(O)R’“, což znamená, že jsou atom kyslíku a skupina R¹ vázány ke stejnému atomu uhlíku jako v následující struktuře:

O

„B“ znamená atom boru.

Předkládaný vynález poskytuje sloučeniny, které jsou vhodné jako inhibitory proteáz, zvláště jako inhibitory serin proteáz a zejména jako inhibitory HCV NS3 proteázy. Jako takové působí tak, že zasahují do životního cyklu HCV viru a jiných virů, jejichž proliferace je závislá na serin proteáze. Proto jsou tyto sloučeniny vhodné jako antivirová činidla.

Podle prvního provedení předkládaný vynález poskytuje peptidový derivát obecného vzorce II:

(II),

-6CZ 298749 B6 kde W je skupina:

každá skupina R² je nezávisle atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, arylalkenylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, cykloalkenylová skupina, cykloalkenylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heterocyklylalkenylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina, nebo dvě skupiny R², které jsou vázány ke stejnému atomu dusíku, tvoří společně s tímto atomem dusíku pětičlenný až sedmičlenný monocyklický heterocyklický kruhový systém; přičemž jakýkoliv atom uhlíku R² je popřípadě substituovaný skupinou J;

J je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, arylalkoxyskupina, cykloalkylová skupina, cykloalkoxyskupina, heterocyklylová skupina, hete15 rocyklyloxyskupina, heterocyklylalkylová skupina, ketoskupina, hydroxylová skupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, alkanoylaminoskupina, aroylaminoskupina, arylalkanoylaminoskupina, karboxylová skupina, karboxyalkylová skupina, karboxamidoalkylová skupina, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, formylová skupina, acylová skupina, sulfonylová skupina nebo sulfonamidoskupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J¹;

J¹ je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, heterocyklylová skupina, heterocyklyloxyskupina, ketoskupina, hydroxylová skupina, aminoskupina, alkanoylaminoskupina, aroylaminoskupina; karboxylová skupina, karboxyalkylová skupina, karboxamidoalkylová skupina, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, formylová sku25 pina, sulfonylová skupina nebo sulfonamidoskupina;

L je alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkynylová skupina, kde jakýkoli atom vodíku je popřípadě substituovaný atomem halogenu, a kde jakýkoli atom vodíku nebo atom halogenu vázaný k jakémukoli poslednímu atomu uhlíku je popřípadě substituovaný sulfhydrylovou skupi30 nou nebo hydroxylovou skupinou;

-7CZ 298749 B6

A¹ je skupina

R⁵ a R⁶ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová sku5 pina, arylalkylová skupina, arylalkenylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, cykloalkenylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

ίο X je vazba, skupina -C(H)(R⁷)-, skupina -0-, skupina -S- nebo skupina -N(R⁸)-;

R⁷ je atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

R⁸ je atom vodíku, alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, arylalkanoylová skupina, heterocyklanoylová skupina, heteroarylalkanoylová skupina, skupina -C(0)R¹⁴, skupina -SO₂Rⁱ⁴ nebo karboxamidoskupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J; nebo R⁸ a Z, společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří mono- nebo bicyklický systém obsahující atom dusíku, popřípadě substituovaný jednou až třemi skupinami J;

R¹⁴ je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina;

Y je vazba, skupina -CH₂-, skupina -C(O)-, skupina -C(O)C(O)-, skupina -S(O)-, skupina -S(O)₂— nebo skupina-S(O)(NR⁷)-, kde R⁷ je definováno výše;

Z je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, cykloalkylová skupina, cyklo30 alkylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, skupina -OR² nebo skupina -N(R²)₂, kde jakýkoli atom uhlíku je popřípadě substituovaný skupinou J, kde R² je definováno výše;

-8CZ 298749 B6

A² je vazba nebo skupina

R⁹ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová sku5 pina, karboxyalkylová skupina nebo karboxamidalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

M je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J, kde jakýkoli atom uhlíku může být nahrazen heteroatomem;

V je vazba, skupina -CH₂~, skupina -C(H)(R¹¹)-, skupina -0-, skupina -S- nebo skupina -N(Rⁿ);

R¹¹ je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku;

K je vazba, skupina -0-, skupina -S-, skupina -C(O)-, skupina -S(O)-, skupina -S(O)₂nebo skupina -S(0)(NRⁿ)-, kde R¹¹ je definováno výše;

12 12 12*

T je skupina -R , skupina -alkyl-R , skupina -alkenyl-R ; skupina -alkynyl-R , skupina -OR¹², skupina -N(R¹²)₂, skupina -C(O)R¹², skupina -C(=NOalkyl)R¹² nebo skupina

R¹² je atom vodíku, arylová skupina, heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, hetero25 cyklylová skupina, cykloalkylidenylová skupina nebo heterocykloalkylidenylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J, nebo první skupina R¹² a druhá skupina R¹², společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvoří mono- nebo bicyklický kruhový systém, popřípadě substituovaný jednou až třemi skupinami J;

R¹⁰ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, karboxyalkylová skupina nebo karboxamidoalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

R¹⁵ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroaiylová skupina, heteroarylalkylová skupina, karboxyalkylová skupina nebo karboxamidoalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J; a

-9CZ 298749 B6

R¹⁶ je atom vodíku, alkylová skupina, arylová skupina, heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina nebo heterocyklylová skupina;

přičemž alkylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje nasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku; alkenylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje mono- nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 10 atomů uhlíku; alkynylová skupina, samotná nebo v kombinaci ío s libovolným dalším výrazem, označuje mono- nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 10 atomů uhlíku; arylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje karbocyklický aromatický zbytek obsahující 6 až 14 atomů uhlíku, který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; cyklo15 alkylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní nearomatický 3- až 8-členný uhlíkatý kruhový zbytek, který je nasycený a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; cykloalkenylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní cyklický 5- až 7-členný uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující alespoň jednu endocyklickou dvojnou vazbu uhlík-uhlík; cykloalkylidenylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní cyklický 5- až 7-členný uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující alespoň jednu exocyklickou dvojnou vazbu uhlík-uhlík, přičemž cyklický uhlovodíkový kruh může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; hetero25 cyklylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní cyklický 5- až 15-členný mono-, bi- nebo tricyklický, heterocyklický kruh, který je buď nasycený, nebo částečně nenasycený, ale nikoliv aromatický, a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy, a který sestává z jednoho nebo více atomů uhlíku a z jednoho až čtyř heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z dusíku, kyslíku a síry; heteroarylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní 3- až 7-ělenný monocyklický heterocyklický kruh, který je aromatický, a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy, a který sestává z jednoho nebo více atomů uhlíku a z jednoho až čtyř heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z dusíku, kyslíku a síry. (Definice jednotlivých skupin uvedené v tomto odstavci obecně platí pro dané skupiny i v dalším textu, pokud tam však není upřesněno jinak.)

- 10CZ 298749 B6

Výhodněji je W skupina

R² kde R² je arylalkylová skupina; nebo skupina

O

II

-P—Oaryl

I

Oaryl

S výhodou J je alkylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, arylalkoxyskupina, atom halogenu, heteroarylová skupina, kyanoskupina, aminoskupina, nitroskupina, heterocyklylová skupina, acylová skupina, karboxylová skupina, karboxyalkylová skupina, alkylaminoskupina, hydroxylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, arylalkanoylaminoskupina, aroylaminoskupina, alkanoylaminoskupina, formylová skupina nebo ketoskupina.

Výhodněji J je terc-butylová skupina, methylová skupina, trifluormethylová skupina, methoxyskupina, ethoxyskupina, trifluormethoxyskupina, karboxylová skupina, fenylová skupina, benzylová skupina, fenoxyskupina, benzyloxyskupina, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, isoxa15 zolylová skupina, pyridinylová skupina, piperidinylová skupina, karboxymethylová skupina, karboxyethylová skupina; dialkylaminoskupina, morfolinylmethylová skupina, fenylacetylaminoskupina nebo acylaminoskupina.

S výhodou J¹ je alkoxyskupina, alkylová skupina, atom halogenu nebo arylová skupina.

Výhodněji J¹ je alkoxyskupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, atom chloru, alkylová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku nebo fenylová skupina.

S výhodou L je alkylová skupina, alkenylová skupina, allylová skupina nebo propargylová sku25 pina,

Výhodněji L je trihalomethylová skupina, sulfhydrylová skupina nebo alkylová skupina substituovaná trihalogenmethylovou skupinou, sulfhydrylovou skupinou nebo hydroxylovou skupinou.

S výhodou R⁵ a R⁶ jsou atom vodíku.

S výhodou X je skupina -O- nebo skupina -N(R⁸)-.

S výhodou R⁸ je atom vodíku.

S výhodou X je skupina-CH₂-, skupina -C(O)-, skupina-C(O)C(O)- nebo skupina -S(O)₂-11 CZ 298749 B6

S výhodou R² je atom vodíku, atom fluoru, trifluormethylová skupina, alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heteroarylalkylová skupina, heterocyklylová skupina nebo heterocyklylalkylová skupina.

S výhodou Z je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, cykloalkylová skupina, heteroarylová skupina, skupina OR² nebo skupina N(R²)₂, kde R² je s výhodou arylalkylová skupina nebo alkenylová skupina.

Výhodněji Z je fenylová skupina, 1,4-benzodioxanylová skupina, 1,3-benzodioxolylová skupina, ío benzothiazolylová skupina, naftylová skupina, benzylová skupina, oxadiazolylová skupina, isoxazolylová skupina, chinolylová skupina, benzothiofenylová skupina, thiazolylová skupina, cyklohexylová skupina, butylová skupina, naftylová skupina, dioxolanylová skupina, benzylová skupina, pyridinylová skupina, morfolinylová skupina, N-anilinylová skupina, N-aminobenzothiazolová skupina, N-aminobenzodioxolová skupina, N-aminonafitylenová skupina, N-benzyl15 aminoskupina, N-aminopyridinová skupina, benzyloxyskupina, allyloxyskupina nebo fenethylová skupina a je popřípadě substituovaná skupinou J.

Nejvýhodněji Z je naftylová skupina, 3,4-dichlorfenylová skupina, 2-karbomethoxyfenylová skupina.

S výhodou R⁹ je alkylová skupina. Výhodněji R⁹ je propylová skupina. Nejvýhodněji R⁹ je isopropylová skupina.

S výhodou M je alkylová skupina; heteroarylalkylová skupina, arylová skupina, cykloalkyl25 alkylová skupina, arylalkylová skupina nebo arylalkylová skupina, kde jeden z atomů uhlíku alkylové skupiny je nahrazen atomem kyslíku nebo atomem síry.

Výhodněji M je propylová skupina, methylová skupina, pyridylmethylová skupina, benzylová skupina, nafltylmethylová skupina, fenylová skupina, imidazolylmethylová skupina, thiofenyl30 methylová skupina, cyklohexylmethylová skupina, fenethylová skupina, benzylthiomethylová skupina nebo benzyloxyethylová skupina.

S výhodou V je skupina -N(Rⁿ)-.

S výhodou R¹¹ je atom vodíku.

S výhodou K je skupina -C(O)- nebo skupina -S(O)₂17 17 17 17

S výhodou T je skupina -R , skupina -alkyl-R , skupina -alkenyl-R , skupina -OR , skupina

-N(R¹²)₂, skupina -C(=NOalkyl)R¹² nebo skupina

Výhodněji T je skupina -R¹² nebo skupina -alkyl-R¹².

S výhodou R¹² je arylová skupina nebo heteroarylová skupina je popřípadě substituovaná jednou 45 až třemi skupinami J. Výhodněji R¹² je 1-naftylová skupina, isochinolylová skupina, indolylová skupina, nebo 2-alkoxy-l-naftylová skupina.

- 12CZ 298749 B6

S výhodou R¹⁰ je alkylová skupina substituovaná karboxylovou skupinou. Výhodněji R¹⁰ je alky lová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku substituovaná karboxylovou skupinou.

S výhodou R¹⁵ je alkylová skupina substituovaná karboxylovou skupinou. Výhodněji R¹⁵ je alky lová skupina obsahující 1 až 3 atomy uhlíku substituovaná karboxylovou skupinou.

Ve výhodném provedení sloučenin obecného vzorce II A¹ je

ío A² je vazba.

S výhodou v tomto výhodném provedení X je atom kyslíku.

Výhodněji Y je skupina -CH₂15

Alternativně Y je skupina -C(O)-.

Alternativně Y je skupina -C(O)- a Z je skupina -N(R²)₂.

Alternativně v tomto výhodném provedení X je skupina -N(R⁸)-.

Výhodněji Y je skupina -C(O)-.

Alternativně Y je skupina -S(O)₂25

Alternativně Y je skupina -S(O)- a Z je skupina -N(R²)₂.

Alternativně v tomto výhodném provedení X je skupina -N(R⁸)-, kde R⁸ je skupina -C(O)R nebo skupina -S(O)₂R¹⁴.

Výhodněji pokud R⁸ je skupina-C(O)R¹⁴, Y je skupina -C(O)-.

Alternativně Y je skupina -S(O)₂35 Alternativně Y je skupina -C(O)- a Z je skupina -N(R²)_Z.

Výhodněji, pokud R⁸ je skupina -S(O)2R¹⁴, Y je skupina -C(O)-. a Z je skupina -N(R²)2.

- 13 CZ 298749 B6

Ve výhodnějším provedení podle předkládaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce II, kde A¹ je

kde X je skupina -O- a Y je skupina -CH₂-; A² je skupina

V je skupina -(NR¹¹)- a 10 K je skupina -C(O)-.

V jiném výhodnějším provedení podle předkládaného vynálezu mají sloučeniny obecný vzorec II, kde A¹ je:

kde X je atom kyslíku a Y je methylenová skupina,

-14CZ 298749 B6

A² je:

V je skupina -N(Rⁿ)- a

K je skupina -S(0)₂-.

kde X je atom kyslíku a Y je methylenová skupina.

A² je vazba;

V je skupina-N(Rⁿ)-, a K je skupina -C(O)-.

V jiném výhodnějším provedení podle předkládaného vynálezu mají sloučeniny obecný vzo20 rec II, kde A¹ je:

kde X je atom kyslíku a Y je methylenová skupina,

- 15CZ 298749 B6

A² je vazba;

V je skupina -N(R”)-, a

K je skupina -S(0)2S výhodou je v tomto výhodnějším provedení W skupina:

Výhodněji je W skupina

kde R² je arylalkylová skupina; nebo skupina

O

II

-P—Oaryl

Oaryl

S výhodou v těchto výhodnějších provedeních L je alkylová skupina, alkenylová skupina, ally lová skupina nebo propargylová skupina.

Výhodněji L je trihalogenmethylová skupina, sulfhydrylová skupina nebo alkylová skupina sub stituovaná trihalogenmethylovou skupinou, sulfhydrylovou skupinou nebo hydroxylovou skupí nou.

V jiném výhodném provedení obecného vzorce II A¹ je skupina

-16CZ 298749 B6 a A² je vazba. Výhodné skupiny tohoto výhodného provedení jsou popsány výše.

V jiném výhodném provedení obecného vzorce II, A¹ je vazba. Výhodné skupiny tohoto výhodného provedení jsou popsány výše.

V jiném výhodném provedení obecného vzorce II, A¹ je

Výhodné, výhodnější a nejvýhodnější skupiny tohoto provedení jsou popsány výše.

Tento vynález předpokládá, že mnoho aktivních míst řízených inhibitorů NS3 proteázy může mít peptidomimetickou povahu a mohou být tedy navrženy na základě přírodního substrátu. Proto výhodné substituenty v peptidomimetických inhibitorech podle předkládaného vynálezu zahrnují takové substituenty, které odpovídají páteři nebo místu řetězce přírodních substrátů nebo syntetických substrátů s velkou afinitou k enzymu (nízké K_m).

Odborníkům v této oblasti bude zřejmé, že některé skupiny mohou být klasifikovány buď jako heterocyklické skupiny nebo jako heteroaromatické skupiny v závislosti na místě připojení.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více asymetrických uhlíkových atomů a mohou se tedy vyskytovat jako racemáty a racemické směsi, jednotlivé enantiomery, diastereoizomemí směsi a jednotlivé diastereoizomery. Všechny takové izomemí formy těchto sloučenin jsou předmětem podle předkládaného vynálezu. Každý stereogenní atom uhlíku může mít konfiguraci R nebo S. Jsou možné pouze takové kombinace a záměny substituentů podle předkládaného vynálezu, které poskytnout stabilní sloučeniny. Termín „stabilní“ podle předkládaného vynálezu znamená sloučeniny, které mají stabilitu dostatečnou pro zpracování sloučeniny, a které zůstávají celistvé po dostatečný časový úsek, aby byly využitelné pro účely podrobně popsané podle vynálezu (například léčebné nebo profylaktické podávání savcům nebo pro použití při afinitní chromatografií). Typicky jsou takové sloučeniny stabilní při teplotě 40 °C nebo nižší, v nepřítomnosti vlhkosti nebo jiných chemicky reaktivních podmínek, nejméně týden.

- 17CZ 298749 B6

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny za použití běžných postupů. S výhodou se tyto sloučeniny obvykle připravují ze snadno dostupných výchozích látek.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu, včetně sloučenin vzorce I a II, jsou definovány tak, že zahrnují jejich farmaceuticky přijatelné deriváty a proléčiva. Termín „farmaceuticky přijatelný derivát nebo proléěivo“ znamená jakoukoli farmaceuticky přijatelnou sůl, ester, sůl esteru nebo jiný derivát sloučeniny podle předkládaného vynálezu, který je po podání pacientovi schopný poskytnout (přímo nebo nepřímo) sloučeninu podle předkládaného vynálezu.

Předkládaný vynález tedy také poskytuje proléčiva sloučenin podle předkládaného vynálezu, které jsou deriváty navrženými tak, aby se zlepšily biologické vlastnosti jako je orální absorpce, odbourání, metabolické nebo distribuce do biologického úseku. Takové deriváty jsou odborníkům v této oblasti známé.

Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být upraveny připojením vhodných funkčních skupin, čímž se zlepší vybrané biologické vlastnosti. Takové úpravy jsou odborníkům v této oblasti známé a patří mezi ně takové změny, které zlepšují biologickou průchodnost do daného biologického úseku (například krve, mízního systému, ventrálního nervového systému), zvyšují orální využitelnost, zvyšují rozpustnost a tak umožňují injekční podávání, mění metabolismus a mění rychlost vylučování.

Termín „chráněný“ znamená, že k vybrané funkční skupině je připojena vhodná chemická skupina (chránící skupina). Příklady vhodných skupin chránících aminoskupinu a jiných chránících skupin jsou uvedeny v T. W. Grene a P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, druhé vydání, John Wiley and Sons (1991); L. Fieser a M. Fieser, Fieser and Fieseťs Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); L. Paquette, Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995); a příklady jsou uvedeny u specifických sloučenin použitých podle předkládaného vynálezu.

Zvláště výhodné deriváty a proléčiva jsou ty, které zvyšují biologickou využitelnost sloučenin podle předkládaného vynálezu, pokud se tyto sloučeniny podávají savcům (například umožňují při orálním podávání lepší absorpci do krve), mají výhodnější rychlost odbourání nebo metabolické profily nebo zlepšují dodání určité sloučeniny do biologického úseku (například mozku nebo mízního systému) vzhledem k původní sloučenině. Mezi výhodná proléčiva patří deriváty, kde je ke struktuře obecného vzorce 1 nebo II připojena skupina zvyšující rozpustnost ve vodě nebo aktivní transport přes střevní stěnu.

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle předkládaného vynálezu zahrnují takové soli, které jsou odvozeny od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Pří40 klady vhodných solí kyselin zahrnují acetát, adipát, alginát, asparát, benzoát, benzensulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, kaířát, kafrsulfonát, cyklopentanpropionát, diglukonát, dodecylsulfát, ethansulfonát, formiát, fumarát, glukoheptanoát, glycerofosfát, glykolát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethansulfonát, laktát, maleát, malonát, methansulfonát, 2-nafitalensulfonát, nikotinát, nitrát, oxalát, palmoát, pektinát, persulfát, 345 fenylpropionát, fosfát, pikrát, pivalát, propionát, salicylát, sukcinát, sulfát, tartrát, thiokyanát, tosylát a undekanoát. Jiné kyseliny, jako je kyselina šťavelová, protože samotné nejsou farmaceuticky přijatelné, se mohou použít při přípravě solí využitelných jako meziprodukty při získávání sloučenin podle předkládaného vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí.

Soli odvozené od vhodných bází zahrnují soli alkalických kovů (například sodnou a draselnou), kovů alkalických zemin (například hořečnatou), amonné soli a soli N-(alkyl)₄ ⁺ obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku. Předkládaný vynález také předpokládá kvartemizaci jakékoli bazické skupiny obsahující atom dusíku sloučenin podle předkládaného vynálezu. Takto mohou být kvartemizovány produkty, které jsou rozpustné nebo dispergovatelné ve vodě.

-18CZ 298749 B6

Obecně se sloučeniny vzorce I a II připraví pomocí způsobů ilustrovaných v příkladech 1 až 8. Jak bude odborníkům v této oblasti zřejmé, schémata přípravy uvedené podle vynálezu však nejsou určena ktomu, aby obsahovala úplný seznam všech způsobů, pomocí kterých mohou být popsané a nárokované sloučeniny podle předkládaného vynálezu připraveny. Další způsoby budou odborníkům v této oblasti zřejmé. Dále mohou být různé syntetické kroky popsané výše provedeny v alternativním pořadí za získání požadovaných sloučenin.

Předpokládáme, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu interagují s aktivním místem HCV ío NS3 proteázy a jiných serinových proteáz buď kovalentně, nebo nekovalentně, čímž inhibují schopnost takového enzymu štěpit přírodní nebo syntetický substrát. Nekovalentní interakce jsou výhodné v tom, že mají relativně vyšší specifitu inhibice a nebudou inhibovat jiné nežádoucí cíle, například cysteinové proteázy. Tyto sloučeniny budou mít proto lepší terapeutický index, pokud se budou podávat savcům, než kovalentní proteázové inhibitory, které mohou interagovat se širokým spektrem proteáz a způsobovat nežádoucí toxické účinky. Naproti tomu, kovalentní interakce jsou výhodné vtom, že mají větší inhibiční sílu umožňující podávání nižších dávek a tak se zmírňují problémy způsobené specifitou.

Nové sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou výbornými inhibitory proteáz, zejména serinové proteázy a zvláště HCV NS3 proteázy. Tyto sloučeniny jsou tedy schopné zasažení a inhibice proteáz, zejména serinových proteáz a zvláště HCV NS3 proteázy. Jako takové tyto sloučeniny zasahují do životního cyklu virů, včetně HCV a jsou tedy vhodné jako antivirová činidla. Inhibice může být měřena pomocí různých způsobů, jako jsou způsoby uvedené v příkladu 11.

Termín „antivirové činidlo“ znamená sloučeninu nebo léčivo, které má virovou inhibiční aktivitu. Mezi taková činidla patří inhibitory reverzní transkriptázy (včetně nukleosidových a nenukleosidových analog) a inhibitory proteázy. S výhodou je inhibitorem proteázy inhibitor HCV proteázy.

Termín „léčba“ znamená zmírnění symptomů určité poruchy u pacienta nebo zlepšení měřitelných veličin spojených s určitou poruchou. Termín „pacient“ podle vynálezu, znamená savce včetně člověka.

Tedy podle jiného provedení předkládaný vynález poskytuje farmaceutické prostředky obsahující sloučeninu obecného vzorce I nebo II nebo její farmaceuticky přijatelné soli; další činidlo vybrané z imunomodulačních činidel, jako je alfa-, beta- nebo gemainterferon; jiná antivirová činidla, jako je ribavirin nebo amantadin; jiné inhibitory HCV proteázy; inhibitory s jiným cílem v životním cyklu HCV, jako je helikáza, polymeráza nebo metaloproteáza; nebo jejich kombinace a jakýkoli farmaceuticky přijatelný nosič, adjuvant nebo vehikulum. Alternativní provedení podle předkládaného vynálezu poskytuje prostředky obsahující sloučeninu obecného vzorce I nebo II nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl; a farmaceuticky přijatelný nosič, adjuvant nebo vehikulum. Takové prostředky mohou popřípadě obsahovat další Činidla vybraná ze skupiny, kterou tvoří imunomodulační činidla, jako jsou alfa-, beta- nebo gemainterferon; jiná antivirová činidla, jako je ribavirin; jiné inhibitory HCV proteázy; inhibitory HCV helikázy nebo jejich kombinace.

Termín „farmaceuticky přijatelný nosič nebo adjuvant“ znamená nosič nebo adjuvant, který může být podáván pacientovi společně se sloučeninou podle předkládaného vynálezu, a který nezasahuje do její farmakologické aktivity a je netoxický, pokud se podává v dávkách, které jsou dostatečné pro nesení sloučeniny.

Farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvanty a vehikula, která mohou být použita ve farmaceutických prostředcích podle předkládaného vynálezu zahrnují iontoměniče, aluminu, stearát hlinitý, samoemulgační systém pro dodání léků (SEDDS, jako je dalfa-tokoferol, polyethylenglykol

1 000 sukcinát, povrchově aktivní látky používané ve farmaceutických dávkovačích formách, jako

-19CZ 298749 B6 je Tweens nebo jiné podobné polymemí dodávací matrice, sérové proteiny, jako je lidský sérový albumin, pufrovací látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyseliny sorbová, sorban draselný, směsi částečných glyceridů nasycených rostlinných mastných kyselin, voda, soli nebo elektrolyty, jako je protaminsulfát, hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní oxid křemičitý, trisilikát hořečnatý, polyvinylpyrrolidon, látky založené na celulóze, polyethylenglykol, sodná sůl karboxymethylcelulózy, polyakryláty, vosky, polymemí bloky polyethylen-polypropylen, polyethylenglykol a lanolin. Pro zlepšení dodání sloučenin obecného vzorce I nebo II mohou být také s výhodou použity cyklodextriny, jako je alfa-, beta- a gamacyklodextrin nebo chemicky modifikované deriváty, jako jsou hydroxyalkylcyklodextriny, včetně

2- a 3-hydroxypropyl-beta-cyklodextrinů, nebo jiné rozpustné deriváty.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být podávány orálně, parenterálně, pomocí inhalačního spreje, místně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo pomocí implantovaného zásobníku. Dáváme přednost orálnímu podávání nebo podávání pomocí injekce.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvanty nebo vehikula. V některých případech může být pH prostředku upraveno farmaceuticky přijatelnými kyselinami, bázemi nebo pufry, čímž se zlepší stabilita upravené sloučeniny nebo její dávkovači formy. Termín parenterální podávání zahrnuje podle vynálezu podkožní, nitrokožní, nitrožilní, nitrosvalové, intraartikulámí, intrasynoviální, intrastenální, intratekální, intralesionální a intrakrainální injekční nebo infuzní podávání.

Farmaceutické prostředky mohou být ve formě sterilního injekčního prostředku, například ve formě sterilní injektovatelné vodní nebo olejové suspenze. Tato suspenze může být připravena podle postupů, které jsou odborníkům v této oblasti známé, za použití vhodných dispergačních nebo zvlhčujících činidel (jako je například Tween 80) a suspendujících činidel. Sterilní injektovatelné prostředky mohou být také sterilní injektovatelné roztoky nebo suspenze v netoxických parenterálně přijatelných ředidlech nebo rozpouštědlech, například jako roztoky v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která mohou být použita, patří mannitol, voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Dále se jako běžná rozpouštědla nebo suspendující činidla používají sterilní, stabilizované oleje. Pro tento účel je možné použít jakýkoli nedráždivý stabilizovaný olej, včetně syntetických mono- nebo diglyceridů. Pro injektovatelné prostředky jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, stejně jako přírodní farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricínový olej, zejména jejich polyethoxylované formy. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsa35 hovat ředidlo nebo dispergační alkoholové činidlo s dlouhým řetězcem, jako jsou ty uvedené v Pharmacopeia Helvetica (Ph. Helv.) nebo podobné alkoholy neb karboxymethylcelulózu nebo podobná disperguj ící činidla, která se běžně používají při přípravě farmaceuticky přijatelných dávkovačích forem, jako jsou emulze a/nebo suspenze. Pro přípravu prostředků podle vynálezu se mohou také použít jiné běžně používané povrchově aktivní látky jako je Tween nebo Spans a/nebo jiná podobná emulgační činidla nebo látky zvyšující biologickou využitelnost roztoky v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštědla, která mohou být použita, patří mannitol, voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Dále se jako běžná rozpouštědla nebo suspendující činidla používají sterilní, stabilizované oleje. Pro tento účel je možné použít jakýkoli nedráždivý stabilizovaný olej, včetně syntetických mono- nebo diglyceridů. Pro injekto45 vatelné prostředky jsou vhodné mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, stejně jako přírodní farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricínový olej, zejména jejich polyethoxylované formy. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsahovat ředidlo nebo dispergační alkoholové činidlo s dlouhým řetězcem, jako jsou ty uvedené v Pharmacopeia Helvetica (Ph. Helv.) nebo podobné alkoholy nebo karboxymethylcelulózu nebo podobná disperguj ící činidla, která se běžně používají při přípravě farmaceuticky přijatelných dávkovačích forem, jako jsou emulze a/nebo suspenze. Pro přípravu prostředků podle vynálezu se mohou také použít jiné běžně používané povrchově aktivní látky jako je Tween nebo Spans a/nebo jiná podobná emulgační činidla nebo látky zvyšující biologickou využitelnost, které se běžně používají při přípravě farmaceuticky přijatelných pevných, kapalných nebo jiných dávko55 vacích forem.

-20CZ 298749 B6

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být orálně podávány v jakékoli orálně přijatelné dávkovači formě včetně tobolek, tablet a vodných suspenzí a roztoků. V případě tablet pro orální podávání se jako nosiče běžně použijí laktóza a kukuřičný škrob. Typicky se také přidávají běžná mazadla, jako je stearát hořečnatý. Pro orální podávání ve formě tobolek se jako vhodné ředidlo použije laktóza nebo sušený kukuřičný škrob. Pokud se orálně podává vodná suspenze, aktivní složka se smísí s emulgačním a suspendujícím činidlem. Pokud je to vhodné, mohou se přidat určitá sladidla a/nebo příchutě a/nebo barviva.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být také podávány ve formě čípků pro rektální použití. Tyto prostředky mohou být připraveny smísením sloučeniny podle předkládaného vynálezu s vhodnou nedráždivou přísadou, která je pevná při teplotě místnosti, ale kapalná při rektální teplotě, a proto taje v rektu za uvolnění aktivní složky. Mezi takové látky patří kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.

Místní podávání farmaceutických prostředků podle předkládaného vynálezu je zvláště vhodné, pokud se požaduje léčení míst nebo orgánů, které jsou snadno dostupné pro místní aplikaci. Pro místní aplikaci na pokožku mohou být farmaceutické prostředky upraveny s vhodnými mastmi obsahujícími aktivní složky suspendované nebo rozpuštěné v nosiči. Nosiče pro místní podávání sloučenin podle předkládaného vynálezu zahrnují minerální oleje, kapalné ropné frakce, bílá vazelína, propylenglykol, polyethylen-polyoxypropylenové sloučeniny, emulgaění vosky a voda. Alternativně mohou být farmaceutické prostředky upraveny s vhodnými vodami a krémy obsahujícími aktivní sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou v nosiči. Mezi vhodné nosiče patří minerální oleje, sorbitan monostearát, polysorbát 60, cetylestery vosku, cetearylalkohol,

2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být také místně aplikovány do dolní části trávicího traktu pomocí rektálních čípkových prostředků nebo vhodných klistýrových prostředků. Předkládaný vynález také zahrnuje místní transdermální náplasti.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být podávány pomocí nosního aerosolu nebo inhalačně. Takové prostředky se připraví pomocí známých postupů, které se používají při přípravě farmaceutických prostředků a mohou se připravit jako roztoky v solance za použití benzylalkoholu nebo jiných vhodných konzervačních látek, látek podporujících absorpci pro zlepšení biologické využitelnosti, fluorovaných uhlovodíků a/nebo jiných známých solubili35 zujících nebo dispergačních činidel.

Při monoterapií pro prevenci a léčbu antivirových, zejména anti-HCV zprostředkovaných onemocnění jsou vhodné dávkovači hladiny 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti na den, s výhodou 0,5 až 75 mg/kg tělesné hmotnosti na den, sloučeniny inhibují proteázu popsané podle vynálezu.

Typicky se farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu budou podávat 1 až 5krát denně nebo alternativně jako kontinuální infuze. Takové podávání se může použít při chronické a akutní léčbě. Množství aktivní složky, které může být kombinován s nosičem za vzniku jednotlivé dávkovači formy se bude měnit v závislosti na léčeném pacientovi a konkrétním způsobu podávání. Typický prostředek bude obsahovat asi 5 až 95 % hmotnostních aktivní sloučeniny.

S výhodou takové prostředky obsahují 20 až 80 % hmotnostních aktivní sloučeniny.

Pokud prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují kombinaci sloučeniny obecného vzorce 1 nebo II a jednoho nebo více dalších terapeutických nebo profýlaktických činidel, jak sloučenina, tak další činidlo by mělo být přítomno v dávkovači hladině mezi 10 až 100% a výhodněji 10 až 80 % dávky běžně používané při monoterapií.

V souladu s jedním provedením farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu obsahují další imunomodulaění činidlo. Příklady dalších imunomodulačních činidel zahrnují alfabeta- a gama-interferony, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

-21 CZ 298749 B6

Podle dalšího provedení farmaceutický prostředek podle předkládaného vynálezu může dále obsahovat antivirové činidlo. Příklady antivirových činidel jsou ribavirin a amantadin.

Podle dalšího alternativního provedení farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou dále obsahovat jiné inhibitory HCV proteázy.

Podle ještě dalšího alternativního provedení mohou farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu dále obsahovat inhibitor jiného cíle HCV životního cyklu, jako je helikáza, polymeráza nebo metalloproteáza.

Po zlepšení stavu pacienta je možné podávat udržovací dávku sloučeniny, prostředku nebo kombinace podle předkládaného vynálezu. Potom se může dávka nebo frekvence podávání nebo oboje s nížit, jako funkce symptomů, na hladinu, při které se udržuje zlepšený stav. Pokud již bylo dosaženo požadovaného zmírnění stavu, léčba se může ukončit. Pacienti však mohou vyža15 dovát občasnou léčbu po dlouhou dobu při opakování symptomů onemocnění.

Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že může být vhodné podávat vyšší nebo nižší dávky, než bylo uvedeno výše. Specifické dávkování a režim léčby určitého pacienta bude záviset na mnoha faktorech, jako je aktivita použité specifické sloučeniny, věk, tělesná hmotnost, celkový zdra20 votní stav, pohlaví, dieta, doba podávání, rychlost vylučování, kombinace léků, závažnost a průběh nákazy, dispozice pacienta k nákaze a úsudek lékaře.

Pokud se tyto sloučeniny nebo jiných farmaceuticky přijatelné soli upraví společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči, mohou být vzniklé prostředky podávány in vivo savcům, jako je člověk, za inhibice serinových proteáz, zejména HCV NS3 proteázy nebo pro léčbu nebo prevenci virové infekce, zejména infekce HCV virem. Takové léčby může být také dosaženo za použití sloučenin podle předkládaného vynálezu v kombinaci s činidly, mezi které patří imunomodilační činidla, jako je alfa-, beta- nebo gamainterferon; jiná antivirová činidla, jako je ribavirin, amatadin; jiné inhibitory HCV NS3 proteázy; inhibitory jiných cílů životního cyklu HCV, jako je helokáza, polymeráza, metalloproteáza nebo interní ribizómový vstup; nebo jejich kombinace, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Tato další činidla mohou být kombinována se sloučeninami podle předkládaného vynálezu za vzniku jednotlivých dávkovačích forem. Alternativně mohou být tato činidla podávána savcům odděleně jako součást mnohočetných dávkovačích forem.

Další provedení podle předkládaného vynálezu tedy poskytuje způsob inhibice aktivity serinové proteázy u savců podáváním sloučeniny obecného vzorce I nebo II, kde substituenty jsou definovány výše. S výhodou je serinovou proteázou HCV NS3.

V alternativním provedení předkládaný vynález poskytuje způsoby inhibice aktivity HCV NS3 u savců zahrnujících krok podávání sloučeniny vzorce I nebo II, kde substituenty jsou definovány výše, savcům.

V alternativním provedení předkládaný vynález poskytuje způsob potlačení aktivity serinové proteázy u savců zahrnující krok podávání jakéhokoli farmaceutického prostředku a kombinace podle předkládaného vynálezu savcům. Pokud farmaceutický prostředek obsahuje pouze sloučeninu podle předkládaného vynálezu jako aktivní složku, mohou takové způsoby dále obsahovat krok podávání činidla vybraného z imunomodilačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteázy nebo inhibitoru jiného cíle v životním cyklu HCV, savcům. Takové další činidlo může být savcům podáváno před, současně nebo po podání prostředku inhibitoru HCV. Ve výhodném provedení jsou tyto způsoby vhodné pro potlačení aktivity HCVNS3 proteázy u savců. Pokud se farmaceutický prostředek skládá pouze ze sloučenin podle předkládaného vynálezu jako aktivní složky, může způsob dále zahrnovat krok podávání činidla vybraného z imunomodilačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteázy nebo inhibitoru jiného cíle v životním cyklu HCV, jako je helikóza, polymeráza nebo metalloproteázy, savcům. Takové

-22CZ 298749 B6 další činidlo může být savcům podáváno před, současně nebo po podání prostředku inhibitoru HCV.

V alternativním výhodným provedení jsou tyto způsoby vhodné pro inhibici virové replikace u savců. Takové způsoby jsou vhodné při léčbě nebo prevenci, například virového onemocnění, jako je HCV. Pokud se farmaceutický prostředek skládá pouze ze sloučenin podle předkládaného vynálezu jako aktivní složky, může takový způsob dále zahrnovat krok podávání činidla vybraného z imunomodilačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteázy nebo inhibitoru jiného cíle v životním cyklu HCV. Takové další činidlo může být savcům podáván před, sou10 časně nebo po podání prostředku podle předkládaného vynálezu.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být také použity jako laboratorní činidla. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro ošetření nebo prevenci virového znečištění materiálu, a proto snižují nebezpečí virové infekce laboratorního a lékařského perso15 nálu nebo pacientů, kteří přijdou do styku s takovým materiálem. Mezi takové materiály patří biologické materiály jako je krev, tkáně a tak dále; chirurgické nástroje; laboratorní nástroje a oděvy; a zařízení a materiály pro odebírání krve, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Aby mohl být vynález lépe pochopen, jsou dále uvedeny příklady. Tyto příklady slouží pouze pro účely ilustrace a v žádném ohledu neomezují rozsah podle předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Obecnou syntetickou metodologii přípravy sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem uvádí příklad 1. Specifičtější metodologie přípravy sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem zahrnující sloučeniny 1-198 uvádí příklady 2-9.

Údaje o HPLC uvedené v tabulkách 1-7 jsou vyjádřeny ve formě gradient rozpouštědla; retenční čas; procento čistoty. Ve všech způsobech byla použita deionizovaná voda.

Přesné (M + H)⁺ a/nebo (M + Na)⁺ molekulové ionty všech sloučenin byly získány buď laserovou desorpční matricovou hmotnostní spektrometrií (Kratos MALDII), nebo elektronsprejovou spektrometrií (MICROMASS Quatro II).

Příklad 1

Řadu aminokyselin použitých při syntézách peptidylových a peptidomimetických sloučenin v souladu s předkládaným vynálezem lze koupit například od společnosti Sigma Chemical Company nebo Bachem Feinchemíkalien AG (Švýcarsko). Aminokyseliny, které nejsou komerčně dostupné, lze připravit známými syntetickými postupy („Kinetic Resolution ofUnnatural and Rarely Occurring Amino Acids: Enantioselective Hydrolysis of N-Acyl Amin Acids Catalyzed by Acylase I“, Chenault Η. K. a další, J. Am. Chem., Soc. 111, 6354-6364 (1989) a tam uvedené odkazy; „Synthesis of β-γ-Unsaturated Amino Acids by the Strecker Reaction, Greenleer W. J., Org. Chem. 49, 2632-2634 (1969); „Recent Stereoselective Synthetic Approaches to Beta-amino Acids“, Cole D., Tetrahedron 50: 9517 (1999); „The Chemistry ofCyclic Alfa Amino Acids“, Mauger A. B.; Volume 4 of „Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptids, and Proso teins“, Weinstein B. editor, Marcel Dekker (1977); „Recent Progress in the Synthesis and Reaction of Substituted Piperidins“, Org. Prep. Proceduře Int. 29, 585-621 (1992). Všechny tyto postupy jsou zde uvedeny jako odkazy.

Určité sloučeniny vzorce (I) nebo (II) lze syntetizovat z aminokyselin postupy, které jsou v oblasti peptidové a organické syntézy dobře známé. Příklady takových syntéz jsou obecně uve-23 CZ 298749 B6 děny v knize Bodanszky a Bodoanszky, „The Practice of Peptid Synthesis“, Springer-Verlag, Berlin, Germany (1989), „The Peptids“, Gross a Meinhofes, eds; Academie Press 1979, Vols. I—III, a Stewart, J. M. and Yung J. D.: „Solid Phase Peptid Synthesis, Second Edition“, Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984); „Recent Advances in the Generation of Molecular

Diversity“, Moos W. H., Green G. D. a Pavia M. R„ „Annual Reports in Medicial Chemistry, Vol. 28“ stránky 315-324; Bristol, J. A., ed.; Academie Press, San Diego, CA (1993). Všechny tyto práce jsou zde uvedeny jako odkazy.

Při syntéze peptidu v roztoku se typicky nejprve ochrání α-aminoskupina aminokyseliny, která ío se bude napojovat, urethanem např. Hoc, Cbz, Fmoc nebo Alloc, zatímco se volná karboxylová skupina aktivuje reakcí s karbodiimidem jako je DCC, EDC nebo DIC (popřípadě v přítomnosti katalyzátoru jako je HOBT, HOAt, HOSu nebo DMAP). Vhodné jsou i další postupy, které zahrnují jako intermediát aktivované estery, halogenidy kyselin, enzymy aktivované aminokyseliny a anhydridy včetně fosfoniových činidel jako BOP, Py-HOP, N-karboxyanhydridy, symetrické anhydridy, směsné karboxylové anhydridy, karboxyfosfinové a karboxy-fosforečné anhydridy. Po vytvoření peptidu lze chránící skupiny odstranit způsoby popsanými ve výše uvedených referencích, jako je hydrogenace v přítomnosti palladiového, platinového nebo rhodiového katalyzátoru, působení sodíku v kapalném amoniaku, chlorovodíkové, fluorovodíkové, bromovodíkové, mravenčí, trifluormethansulfonové nebo trifluoroctové kyseliny, sekundárních aminů, fluorido20 vých iontů, trimethylsilylhalogenidů včetně bromidu a jodidu nebo alkálií. Při automatizaci syntetického postupu (za použití výše uvedených technik) lze použít komerčně dostupné přístroje jako (ale nejen) Advanced Chemtech 357 FBS a 996 MOS: Tecan CombiTec a Applied Hiosystems 933A. Specifické aplikace těchto metod a jejich ekvivalentů v závislosti na cílové sloučenině jsou odborníkům v této oblasti zřejmé. Modifikace chemických procesů a výběr pří25 strojů patří do běžných zkušeností každého praktika.

Příklad 2

Sloučeniny 1-26 (tabulka 1) se připraví podle schématu 1.

-24Schéma 1

300

NHj

QjH

301

1. HBtU. HOBl OIEA. OMF

Ϊ. 25% TFA/DCM 3. 10%DIEA/DMF

HBtU. HOBt DIEA, DMF

1. 25¾ TFA/DCM

1C% DISA/DMF

301

1. r moc-Val, 1-ST'J ΗΟΒΙ.ΟΙΞΑ.ΝΜΡ

2. 25% piďDMF

Fmoc.Va!, HSTU HOBtDlEA.NMP 25% ριρΌΜΡ Prz-Oh, HBTJ KO3i.DIEA.NMP

-25CZ 298749 B6

Syntéza látek 301-306 Krok A - syntéza látky 301

Na fritě se promyje 4-methylbenzhydrylaminová pryskyřice (1,05 mmol/g; 20,0 g) dimethylformamidem (3 x 75 ml), objemově 10% roztokem diisopropylethylaminu (DIEA) v dimethylformamidu (2x75 ml) a nakonec dimethylformamidem (4x75 ml). K pryskyřici se přidá dostatek dimethylformamidu, aby vznikla řídká kaše, a látka 300 (8,0 g; 20,8 mmol; připravená z (2S)—2— (t-butyloxykarbonylamino)butyraldehydu podle A. M. Murfy a další, J. Am. Chem. Soc., 119, ío 3156-31,57 (1992)), 1-hydroxybenzotriazolhydrátu (HOBT-H₂O; 3,22 g, 21,0 mmol),

0-benzotriazol-N,N,N,N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu (HBTU; 8,0 g, 21,0 mmol) a DIEA (11,0 ml, 63 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti za použití třepačky. Pryskyřice se odstraní na fritě vakuovou filtrací a promyje se dimethylformamidem (3x75 ml). Nezreagované aminové skupiny se ochrání reakcí pryskyřice s 20% (objemově) směsí acetanhydridu a dimethylformamidu (2x50 ml) přímo na fritě (promývání 10 minut). Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x75 ml) a dichlormethanem (3x75 ml). Potom se přes noc suší ve vakuu za získání látky 300a (26,3 g; výtěžek 81 %).

Chrániči t-Boc skupina se z pryskyřice 300a odstraní za použití Advanced ChemTech 396

Multiplet Peptid syntetizátoru následujícím postupem. Pryskyřice 300a (0,05 mmol) se nabobtná promytím dichlormethanem (3x1 ml) a následně se t-Boc chránicí skupina odštěpí lOminutovým mícháním s 50% (objemově) směsí trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (1,0 ml) a následným 30minutovým mícháním s čerstvým činidlem (1 ml). Pryskyřice se pak promyje dichlormethanem (3x1 ml), dimethylformamidem (3x1 ml), 10% (objemové) směsí DIEA/dimethyl25 formamid (2x1 ml) a nakonec N-methylpyrrolidonem (3x1 ml) za získání pryskyřice 301.

Krok B - syntéza látky 303

Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 301 (0,05 mmol) za použití Advanced ChemTech 396

Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice 301 se acyluje 0,4M roztokem látky 302 a 0,4M roztokem HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamídem (3x1 ml) a pak dichlormethanem (3x1 ml) za získání pryskyřice 303.

Krok C - syntéza látky 305

Syntéza sloučeniny navázané na pryskyřici se dokončí za použití Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice se promyje dichlormethanem (3x 1 ml) a pak se odštěpí t40 Boc chránicí skupina 10 minutovým mícháním s 50% směsí (objemově) trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (1,0 ml) a pak s 1 ml čerstvého činidla po dobu 30 min. Pryskyřice se pak promyje dichlormethanem (3x1 ml), pak dimethylformamidem (3x1 ml), pak 10% (objemově) směsí DIEA a dimethylformamidu (2x1 ml) a nakonec N-methylpyrrolidonem (3x1 ml) za získání pryskyřice 304. Tato pryskyřice se pak acyluje 0,4M roztokem Fmoc-valinu a 0,4M roztokem

HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Automatický cyklus tvoří:

(1) promytí pryskyřice dimethylformamidem (3x1 ml);

(2) odstranění chránicí skupiny 25% (objemově) roztokem piperidinu v dimethylformamidu (1 ml) po dobu 3 minut a pak čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 min.

(3) promytí pryskyřice dimethylformamidem (3x1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x1 ml) před spojením popsaným výše.

-26CZ 298749 B6

Tímto způsobem byly spojeny Fmoc-valin a pyrazin-2-karboxylová kyselina.

Krok D - syntéza látky 306 5

Před štěpením se pryskyřice promyje 1:1 směsí dichlormethanu a methanolu (3x1 ml) a pak se vysuší ve vakuu. Aldehyd se z pryskyřice odštěpí buď směsí 95 % trifluoroctové kyseliny a 5 % vody (objemově; 1,5 ml) po dobu 30 min při teplotě místnosti, nebo působením směsi tetrahydrofuranu 30% formalinu a IN HC1 v poměru 9:1:1 (objemově) po dobu 1 hodiny při teplotě místío nosti. Po promytí pryskyřice štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty zředí vodou a lyofilizují za získání surové látky 306 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí semipreparativní RP-HPLC s Waters Delta/Pak 300 A Cl8 kolonou (15 μ, 30 x 300 mm) za eluce lineárním acetonitrilovým gradientem obsahujícím 0,1 % trifluoroctové kyseliny (objemově) po dobu 45 min při průtoku ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizují za získání látky 306.

-27CZ 298749 B6

Příklad 3

Sloučeniny 27-29 (tabulka 1) se připraví podle schématu 2.

Schéma 2

1. HBtíl, HOSt DIEA. DMF

2- 25% TrA/DCM

3. ltJ% DlEATDMF

301

1. FmaoVal. HBTU HCSl.DiEA.NMP

2. 25% pip/DMF

3. FmaoVal. HBTU HO31.OIČA.NMF

4. 25% pijyOMF

5. Prz-C>- HETU HOSi.DlcA.NM?

DIEA. OMAÍ □CM

-28CZ 298749 B6

Krok A - syntéza látky 301 - viz. krok A, schéma metodiky 1

Krok B - syntéza látky 308

Pryskyřice 301 (6,0 g; 0,65 mmol/g; 3,9 mmol) se nabobtná na fritě promýváním dichlormethanem (3x50 ml). Chrániči Boc skupina se pak odštěpí 50% směsí (objemově) trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (50 ml) po dobu 10 minut (občasné míchání) a pak po dobu 30 min čerstvým činidlem (50 ml). Pryskyřice se pak promyje dichlormethanem (3x50 ml), dimethylformio amidem (2x50 ml), 10% směsí DIEA a dimethylformamidu (objemově) (2x50 ml) a nakonec Nmethylpyrrolidonem (3x50 ml). Po převedení pryskyřice do 100 ml baňky se přidá N-methylpyrrolidon za získání řídké kaše a pak se přidá látka 307 (2,83 g; 8,0 mmol), HOBT H₂O (1,22 g;

8,0 mmol), HBTU (3,03 g; 6,0 mmol) a DIEA (4,2 ml, 24 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti za použití třepačky. Zpracování pryskyřice a odstranění chránící skupiny

20% (objemově) acetanhydridem v dimethylformamidu se provede jako u látky 301 za získání látky 308 (6,86 g, kvantitativní výtěžek).

Krok C - syntéza látky 309

Tato látka se připraví z pryskyřice 308 (0,15 mmol) za použití Tecan CombiTec syntetizátoru. Pryskyřice 308 (0,076 mmol) se promyje dimethylformamidem (3x2 ml), odstraní se chránící skupina 25% roztokem (objemově) piperidinu v dimethylformamidu (2,5 ml) po dobu 5 min a pak čerstvým činidlem (2 ml) po dobu 20 min. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x2,5 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x2,5 ml) a pak se acyluje roztokem 0,4M Fmoc-valinu a 0,4M HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,8 ml) a roztokem 0,4M HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,8 ml) a roztokem 1,6M DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,6 ml). Reakční směs se třepe 8 hodin při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Odstranění chránící skupiny a napojení bylo opakováno, aby se přidal druhý valinový zbytek a koncový zbytek pyrazin-2-karboxylové kyseliny. Pryskyřice se pak promyje dichlormethanem (3x2,5 ml) za získání látky 309.

Krok D - syntéza látky 310

K pryskyřici 309 se přidá 1:1 směs pyridinu dichlormethanu (objemově; 1 ml), 0,8M roztok dimethylaminopyridinu v dimethylformamidu (0,2 ml) 0,2M roztok Z-COC1 v dichlormethanu (1,5 ml) a reakční směs se třepe 8 hodin při teplotě místnosti. Acylační reakce se opakuje. Pryskyřice se promyje dichlormethanem (3x2,5 ml), dimethylformamidem (3x2,5 ml), dichlormethanem (3x2,5 ml) a nakonec 1:1 směsí dichlormethan/methanol (3x2,5 ml) za získání pryskyřice 310.

Krok E - syntéza látky 311

Před štěpením se pryskyřice promyje 1:1 směsí dichlormethan/methanol (3x1 ml) a pak se vysuší ve vakuu. Aldehyd se z pryskyřice odštěpí působením směsi tetrahydrofuran/formalin/kyselina octová/ΙΝ HCI 5:1:1:0,1 (objemově) po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po promytí prysky45 řiče štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty zředí vodou a lyofilizují za získání surové látky 311 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí semipreparativní RP-HPLC s Waters DeltaPak 300 A 08 kolonou (15 μ, 30 x 300 mm) za eluce lineárním acetonitrilovým gradientem obsahujícím 0,1 % trifluoroctové kyseliny (objemově) po dobu 45 min při průtoku 20 m/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí za získání látky 311.

-29CZ 298749 B6

Příklad 4

Sloučeniny 30-56 (tabulka 1) se připraví podle schématu 3.

Schéma 3

HBtU. HOSt DIEA. DMF

2. 25%TFA/OCM

3. 10%DIEA/DMF

P^: · NCCZ7oV55°C nebo · CC2H/DPPA Oi=A/7o!,'55⁰C

1. Fmoc-Val, H27U HQ3t,0IEA,NM?

2. 25% pe/OM

prysk.

Fmoc-Vai. H3’U HOet.DiEA.NMF 25% pi»PMF Pra-CH. HETU HC3t.DltA.NM?

95% TFA/5% H2C nebo

THF/h₂CO/1 NHCI

B²

N-H

Krok A - syntéza látky 301 - viz. krok A, metodika pro schéma 1.

Krok B - syntéza látky 308 - viz. krok B, metodika pro schéma 2.

-30CZ 298749 B6

Krok C - syntéza látky 312

Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 308 (0,15 mmol) za použití Tecan CombiTec syntetizátoru. Pryskyřice 308 se promyje toluenem (3x2,5 ml) a pak se suspenduje v toluenu (1,0 ml).

K této směsi se přidá buď 0,8M roztok R₉ δ-isokyanatu v toluenu (1,0 ml) a pak 0,8M roztok DIEA v toluenu (1,0 ml), nebo 0,8M roztok R₃ δ-karboxylové kyseliny s 0,8M roztokem DIEA v toluenu (1,0 ml) a pak 0,8M roztok difenylfosforylazidu v toluenu (1,0 ml). Reakční směs se 8 hodin třepe při teplotě 55 °C. Pryskyřice se pak promyje toluenem (3x2,5 ml) a dimethylformamidem (4x2,5 ml) za získání pryskyřice 312.

Krok D - syntéza látky 313 - viz krok D, metodika schématu 2.

Krok E - syntéza látky 314 - viz krok E, metodika schématu 2.

-31 CZ 298749 B6

Příklad 5

Sloučeniny 57-70 (tabulka 1) se připraví podle schématu 4.

Schéma 4

1. HBtU, HOBt DÍEA. DMF

Z. 25% TFA/DCM 3. 10% DIEA/DMF

301

1. HBU.HOSt DÍEA, DMF

Z-COjHMBIU/HOS!

nebo

Z-CCCiOEA/OMF nebo

Z-SCjCV^yr/DCM nebo fR^jNCO/DM?

nebo

Z-CKC/ NaCN9H3fDMr/HOAe

317a-ť ⁿ-nh c

301

2. 25% TFA/DCM

3. 10% DIEA/DMF

prysk

1. Fmoc-Vaí. 5-íSTTJ HOBt.DIEA.NMF

2. 25% aíp/OMF

3. rmoc-Val. H6T1J HOSt.DlEA.NMP

4. 25% pi»OM?

5. Prc-OH. KS7U HOBt.DlEA.ISMF

95% TFA/S% H2O nebo

Triř/HjCO/1 NHCf

318

„ prysk.

Krok A - syntéza látky 301 viz. krok A, metodika schématu 1. Krok B - syntéza látky 316

-32CZ 298749 B6

Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 301 (0,05 mmol) za použití Advanced ChemTec 396 Multiplet Peptid syntatizátoru. Pryskyřice 301 se acyluje 0,4M roztokem látky 315 a 0,4M roztokem HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a pak dichlormethanem (3x1 ml). Chrániči Boc skupiny se pak odštěpí 50% směsí (objemově) trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (1,0 ml) po dobu 10 min za míchání a pak po dobu 30 min čerstvým činidlem (1,0 ml). Pryskyřice se pak promyje dichlormethanem (3x1,0 ml), dimethylformamidem (2x1,0 ml), 10% roztokem DIEA v dimethylformío amidu (objemově; 2x1,0 ml), dimethylformamidem (3x1,0 ml) a nakonec dichlormethanem (3x1,0 ml) za získání látky 316.

Krok C - syntéza látky 317a

Pryskyřice 316 se acyluje 0,4M roztokem Z-CO₂H a 0,4M roztokem HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml) za získání pryskyřice 317a.

Krok C - syntéza látky 317b

Pryskyřice 316 se acyluje 0,5M roztokem Z-COC1 v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M roztokem DIBA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Pryskyřice promyje dimethylformamidem (3x2,5 ml) za získání pryskyřice 317b.

Krok C - syntéza látky 317c

Pryskyřice 316 se nechá reagovat s l,0M roztokem Z-sulfonylchloridu v dichlormethanu (0,5 ml) a 1M roztokem pyridinu v dichlormethanu (0,60 ml) po dobu 4 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se promyje dichlormethanem (3x1,0 ml) a pak dimethylformamidem (3x1,0 ml) za získání pryskyřice 317c.

Krok C - syntéza látky 317δ

Pryskyřice 316 se nechá reagovat s 0,5M roztokem Z-izokyanatu v dimethylformamidu (1,2 ml) po dobu 8 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1,0 ml) za získání pryskyřice 317d.

Krok C - syntéza látky 317e

Pryskyřice 316 se nechá reagovat s 0,5M Z-CHO v dimethylformamidu (1,2 ml) v přítomnosti octové kyseliny (0,1 ml) a kyanoborhydridu sodného (200 mg) po dobu 4 hodin při teplotě míst45 nosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3 x 1,0 ml) za získání pryskyřice 317e.

Krok D - syntéza látky 318

Syntéza se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiplet Peptid syntetizátoru. Po přidání Fmoc-valinu se použije automatický cyklus popsaný v kroku C schématu 1. Potom se přidá další Fmoc-valin a nakonec pyrazin-2-karboxylová kyselina.

Krok E - syntéza látky 319 - viz. krok E v metodice schématu 2.

-33 CZ 298749 B6

Příklad 6

Sloučeniny 81-100 a 127-142 (tabulky 3 a 4) se připraví podle schématu 5.

Schéma 5

1. HBtU. HCBt DIEA. DMF

2. 25% TFAOCM

3. 10% DlEA/DMF

1. Pmoc-A'. HBTU

Haat.DIEA.NMP

2. 25% piptQMF

3. řrpoc.Vel. HBTU

HOBt.DiEA.NMF

4. 25% pVDMF

FmoeNK D-jjH i

M

HBTU. KOBt. OtEA.NMP

6. 25%pip/OMF

nebo

T-SCjCi/Fyr/DCM nebo

ÍRfyjNCC/OVř

T-COjH/HĎtU/KOai nebo

T-CCCt/DlEA/DM?

V,

Vel-A

'.ΝΗ'^γΠ •NH.

O k,—' rr>

95% TrA/5% H2O nebo

THF/WjCO/INHCI _t-^knh_A.

I

M

i

O

321*-d 'prysk.

O

322

Krok A - syntéza látky 301 - viz. krok A v metodice schématu 1.

Krok B - syntéza látky 320 ío Syntéza látky navázané na pryskyřici se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru a vychází z pryskyřice 165 (0,05 mmol). Po přidání Fmoc-A¹ se použije automatický cyklus popsaný v kroku C u schématu 1. Pak se přidá Fmoc-valin a nakonec koncová Fmoc-aminokyselina. Fmoc skupina se odstraní, jak je popsáno výše, pomocí 25% roztoku piperidinu v dimethylformamidu (objemově) za získání pryskyřice 166.

-34CZ 298749 B6

Krok C - syntéza látky 321a

Pryskyřice 320 se acyluje 0,4M roztokem T-CO₂H a 0,4M roztokem HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 mL) a 1,6M roztokem DIBA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) a reakční směs se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a směsí 1:1 dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1 ml) za získání pryskyřice 321a.

i o Krok C - syntéza látky 321b

Pryskyřice 320 se acyluje 0,5M roztokem T-COC1 v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml) po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a 1:1 směsí dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1,0 ml) za získání pryskyřice

321b.

Krok C - syntéza látky 321c

Pryskyřice 320 se nechá reagovat s l,0M roztokem T-sulfonylchloridu v dichlormethanu (0,5 ml) a IM roztokem pyridinu v dichlormethanu (0,60 ml) po dobu 4 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1,0 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a 1:1 směsí dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1,0 ml) za získání pryskyřice 303c.

Krok C - syntéza sloučeniny 32ld.

Pryskyřice 320 se nechá reagovat s 0,5M roztokem T-izokyanatu v dimethylformamidu (1,2 ml) po dobu 8 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethyl30 formamidem (3x10,0 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a směsí 1:1 dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1,0 ml) za získání pryskyřice 32ld.

Krok D - syntéza látky 322

Aldehyd se z pryskyřice odštěpí a globálně odehrání působením 95% trifluoroctové kyseliny (5 % vody; objemově; 1,5 ml) po dobu 45 min při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice čerstvým štěpícím činidlem (1 ml) se spojené filtráty přidají do chladné 1:1 směsi etheru a pentanu (12 ml) a sraženina se oddělí odstředěním a dekantací. Vzniklé kuličky se rozpustí ve směsi 10 % acetonitrilu, 90 % vody a 0,1 % trifluoroctové kyseliny (15 ml) a lyofilizují se za získán surové látky 322 jako bílého prášku. Sloučenina se čistí semipreparativní RP-HPLC s Waters DeltaPak

300 A Cl8 kolonou (15 μ, 30 x 300 mm) za eluce lineárním acetonitrilovým gradientem obsahujícím 0,1 % trifluoroctové kyseliny (objemově) po dobu 45 min při průtoku 20 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se slijí a lyofilizují za získání látky 322.

-35CZ 298749 B6

Příklad 7

Sloučeniny 143-197 (tabulka 6) se připraví podle schématu 6.

Schéma 6

i. Haiu. HOR DiEA. DM?

2. 25% TFA/DCM

3. 10% DlEA/DMr

nebo

T-SOjCl/íyr.-OCM nebo {R^1Z)2NCC/DMF

V 25%pia/DMr

2. T-CCjKHasU/HOSt nebo

T-COCUDlEA/DMr

95% TrA/5% H2O nebo

THF/H₂CC/1NHC|

32«

Krok A - syntéza látky 301 - viz. krok A v metodice schématu 1.

Krok B - syntéza látky 326

Tato sloučenina se připraví z pryskyřice 301 (0,50 mmol) za použití Applied Biosystems Model ίο 433A peptidového syntetizátoru. K pryskyřici 301 se za pomoci standardních spojovacích cyklů

-36CZ 298749 B6 používajících HBTU a HOBt jako spojovacích činidel v N-methylpyrrolidinonu postupně přidají N“-Fmoc-chráněné aminokyseliny za získání pryskyřice 326.

Krok C- syntéza látky 327a

Syntéza se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice 326 (0,05 mmol) se odehrání 25% (objemově) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) po dobu 3 minut a pak čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 min. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x1 ml). Pryskyřice se acyluje 0,4M roztokem Τι o CO₂H a 0,4M roztokem HOBT v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml), 0,4M roztokem HBTU v N-methylpyrrolidonu (0,5 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidonu (0,35 ml).

Reakce se třepe 4 hodiny při teplotě místnosti. Spojovací reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a 1:1 směsí dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1 ml) za získání pryskyřice 327a.

Krok C - syntéza látky 327b

Syntéza se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice 326 (0,05 mmol) se odehrání 25% (objemově) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) po dobu

3 min a pak čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 min. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a N-methylpyrrolidonem (3x1 ml). Pryskyřice se acyluje 0,5M roztokem T-COC1 v dimethylformamidu (1 ml) a 1,6M roztokem DIEA v N-methylpyrrolidone (0,35 ml) po dobu hodin při teplotě místnosti. Acylační krok se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a směsí 1:1 dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1 ml) za získání pryskyřice 327b.

Krok C - syntéza látky 327c

Syntéza se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice

3 26 (0,05 mmol) se odehrání 25% (objemově) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) po dobu min a pak čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 min. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a dichlormethanem (3x1 ml) a pak se nechá reagovat s l,0M roztokem T-sulfonylchloridu v dichlormethanu (0,5 ml) a s 1M roztokem pyridinu v dichlormethanu (0,60 ml) po dobu 4 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a směsí 1:1 dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1,0 ml) za získání pryskyřice 327c.

Krok C - syntéza látky 327δ

Syntéza se provede pomocí Advanced ChemTech 396 Multiple Peptid syntetizátoru. Pryskyřice 326 (0,05 mmol) se odehrání 25% (objemově) piperidinem v dimethylformamidu (1 ml) po dobu 3 min a pak čerstvým činidlem (1 ml) po dobu 10 min. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem (3x1 ml) a pak se nechá reagovat s 0,5M roztokem T-izokyanatu v dimethylformamidu (1,2 ml) po dobu 8 hodin při teplotě místnosti. Reakce se opakuje. Pryskyřice se pak promyje dimethylformamidem (3x1 ml), dichlormethanem (3x1,0 ml) a směsí 1:1 dichlormethanu a methanolu (objemově; 3x1,0 ml) za získání pryskyřice 327d.

Krok D - syntéza látky 328 - viz krok D v metodice schématu 1.

-37CZ 298749 B6

Příklad 8

Sloučeniny 79-80 a 101-123 (tabulky 2, 3 a 4) se připraví podle schématu 7.

Schéma 7

O.Shf

329

330

251'. pic DMF 'O .

< o kx—^: ^prysk' ⁰ ó

1. Fmoc-A¹, KBTU HO8t.DIEA.NMP

2. 25% plp/DMP

3. Ffnsc-Vai. H3TU HO5t.DIEA.NMP

331

4. 25% ptp/OMF

5. Fmcc-Val. HBTU HO3’.DIEA.NMP

5. 25% pis/DMF 7. Uzavřeno T-CO;ii

T-CO-Vai-Vai-A -HN

332

CO-vai-Vai-Α'-ΗΝ-^γ^οΗ

O =y3 rcp ΟΙΞΑ

333

DMA/DC * 7-C r ?

r-CC-Vai-Vat-A' -HN “'γ'N'R^J)_Zc

t.) S ^0 /

-^l-OAr'0CM

A;D OAí i

2.) 50%TFA/0CM

334 f ?

r-CO-Val-VaEA'-'riN'*^x--^x*'N(R^tij c

335

Krok A - syntéza látky 330

2-Chlorchlortritylová pryskyřice (2,2 mmol/g, 1,69 g) se nechá reagovat s látkou 329 (0,385 g,

1,1 mmol, připraví se podle práce S. L. Harbeson a další, J. Med. Chem. 37, 2918, 1994)) ío v dichlormethanu v přítomnosti DIEA (0,47 ml, 2,7 mmol) při teplotě místnosti po dobu hodiny. Reakce se ukončí přidáním methanolu a pryskyřice se oddělí na fritě vakuovou filtrací

-38CZ 298749 B6 a promyje se dichlormethanem (3x25 ml). Pryskyřice se přes noc vysuší ve vakuu za získání látky 330 (1,92 g, 0,49 meq/g).

Krok B - syntéza látky 332

Syntéza sloučeniny navázané na pryskyřici se provede pomocí Applied Biosystems Model 433A peptidového syntetizátoru, kdy se vychází z pryskyřice 330 (0,74 mmol). Pro přidání Fmoc-A¹a pak Fmoc-A² a Fmoc-A³ se použijí automatické cykly popsané v kroku C u schématu 1. Skupina Fmoc se odstraní, jak je popsáno výše, 25% (objemově) piperidinem v dimethylformamidu ío za získání pryskyřice 332.

Krok C - syntéza látky 333

Před štěpením se pryskyřice promyje 1:1 směsí dichlormethanu a methanolu (3x1 ml) a pak se vysuší ve vakuu. Peptid se z pryskyřice odštěpí působením směsi octové kyseliny, trifluorethanolu a dichlormethanu (1:1:3) po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po promytí pryskyřice dichlormethanem se spojené filtráty zahustí ve vakuu za získání surové látky 333 jako bílého prášku (0,48 g, 76 %).

Krok D - syntéza látky 335

Sloučenina 333 (0,05 g, 0,058 mmol) se rozpustí v dimethylacetamidu (1 ml) a přidá se DIEA (0,17 mmol), příslušný amin (0,20 mmol) a PyBrop (0,12 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při 70 °C. Směs se potom zředí vodou (8 ml) a pak se odstředí za získání sraženiny, která se vysuší ve vakuu za získání surové látky 334, která se pak přímo oxiduje na sloučeninu 335. Surová sloučenina 334 se rozpustí v N-methylpyrrolidonu (3 ml) a nechá se přes noc reagovat s Dess-Martinovým perjodnanem (110 mg, 0,26 mmol) při teplotě místnosti. Pak se k reakční směsi přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a 10% vodný roztok (hmotnost : objem) thiosíranu sodného (5 ml). Směs se míchá a přidá se voda (40 ml).

Sraženina se odstraní odstředěním a pevná látka se vysuší ve vakuu. V případě potřeby se chránící skupiny citlivé na kyselé prostředí odstraní působením 1:1 směsi trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu po dobu 30 min při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a surová sloučenina se čistí semipreparativní RP-HPLC s Waters DeltaPak 300 A Cl8 kolonou (15 μ, 30x300 mm) za eluce lineárním acetonitrilovým gradient obsahujícím 0,1% (objemově) trifluor35 octové kyseliny po dobu 45 min při průtoku 20 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizují za získání látky 335.

Příklad 9

Sloučeniny 71-78 a 124-126 se připraví z vhodně chráněných peptidových kyselin. Chráněné peptidové kyseliny se připraví, jak je popsáno výše ve schématu 7 za použití 2-chlorchlortritylové pryskyřice. Tyto peptidové kyseliny se pak připojí k jedné z následujících skupin za použití standardní metodologie spojování peptidů na pevné fázi. Zároveň jsou uvedeny odkazy pro pří45 právu těchto skupin.

HBf NHj

OR

J. Olksyszyn a další, Synthesis 985-986 (1979)

-39CZ 298749 B6

S. Elgendy a další, Tetrahedron 50, 3803-3812 (1994)

OH

HC1 NH₂

M. R. Angelestro a další, Tetrahedron Letters 33, 3265-3268 (1992)

OH

HCI NH₂

'c;h₂ch₃

T. T. Curran, J. Organic Chemistry 58, 6360-6363 (1993)

OH

HCI NH₂

Heteroaryl

E. Edwards a další, J. Medicinal Chemistry 38, 3972-3982 (1995) ίο V případě potřeby se získané produkty oxidují na ketony za použití Dess Martinova perjodnanu jak je popsáno u schématu 7. V případě potřeby se na kyselé prostředí citlivé chránící skupiny odstraní působením směsi 1:1 trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu po dobu 30 min při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a surová sloučenina se čistí semipreparativní RP-HPLC s Waters DeltaPak 300 A Cl8 kolonou (15 μ, 30x300 mm) za eluce lineárním aceto15 nitrilovým gradientem obsahujícím 0,1% (objemově) trifluoroctové kyseliny po dobu 45 min při průtoku 20 ml/min. Frakce obsahující požadovaný produkt se spojí za získání konečných produktů 71-78 a 124-126.

Příklad 10

Sloučenina 198 se připraví modifikací obecné metodologie popsané v příkladu 1.

-40CZ 298749 B6

Tabulka 1 - Struktury a analytická data - sloučeniny 1-70

	2	X	Y	MS Data	HPLC
1		0	ch₂	ND	40-80%B; 5,484 min.; 6,580 min; 75.25 rychlý:pomalý
2	Z f yj v/	0	ch₂	(M+Na)= 693.2	40-80%3; 5 37S min; 95%

-41 CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	2	X	Y	MS Data	HPLC
3		0	CK₂	(M+H)= 664.0 (M+Na)= 685.2	20-60%S, 8,527 min.; 100%
4	N-0	0	ch₂	(M+Na}= 714.3	20-60%B, 8.885 min.; 100%
5	N-0 I	0	ch₂	(M+H)= 682.S , (M+Na}= 704.0	20-o0%3, 7,541 mm.; 95.6%
6	N—O .	0	ch₂	(M+H)= 644.0 , (M+Na)= 664.0	20-60%3; 7 822 min.; 100%
7	Cl xicu	0	ch₂	(M+H)= 746.7 , (M+Na)= 765.7	40-80%3; 4,228 min.; 92%
8	y	0	ch₂	(M+H)= 671.5, (M+Na)= 694.0	20-60%3; 3,554 mm.; 98%
9		0	ch₂	(M+Na}= 700.9	40-80%S; 4,588 mm.; 100%
10	'(X	0	ch₂	(M+Na)= 686.3	40-80%3; 4,630 mm.; 94%
11		0	ch₂	(M+H)= 671.1, (M+Na)= 693.2	40-80% B; 5.323 min.; 5,435 min.; 88:12, rychlý:pomalý
12		0	ch₂	(M+H}= 613.7, (M+Na)= 636.2	20-60%3; 5 696 min.; 100%

-42CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Data	HPLC
13		0	ch₂	(M+Na)=695.3	20-60%S; 9,045 min.; 100%
14	z o N—O \	o	ch₂	(M+Na)=7l4.9	20-60%B; 7,729 min.; 100%
15	a.	0	ch₂	(M+Na)= 642.72	20-60%3; 7 133 min.; 100% ^Z
16		0	ch₂	(M+Na)= 685.6	20-60% B; 10/77 min.; 100%
17	''η UL·	0	ch₂	{M+Na)= 685.6	20-60%B; 10,265 min.; 100%
18	' 'Gá: r	0	ch₂	(M+Na)= 700.9	20-60%B; 10,696 min.; 100%
13	'CO	0	ch₂	(M+Na)= 709.4	30-70%8; 9,216 min.; 100%
20	'TO	0	ch₂	(M+Na)= 667.3	20-60%B; 10 225 min; 100%
21	' -σ	0	ch₂	(M+Na)= 641.8	20-60%8, 7 15 min.; 100%
22	Q_f	0	ch₂	(M+Na)= 653.1	20-60%B; 8 822 min.; 100%

-43CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	l^Y	MS Data	\| HPLC
23	• /_yB	0	ích₂	(M+Na)= 707.3	20-607=3; 11,362 min.; 100%
24		0	ch₂	(M+Na)= 733.S	20-50% 3; 10,364 min.; 100%
25		0	ch₂	(M+Na)= 823.2	40-807=3; 7,040 min.; 100%

	M
26		0	ch₂	(M+Na)= 667.5	30-70%3, 8,307 min.; 3673
	cP				1
27	Q-	o	C(O}	(M+H) = 677.3	10-60%3; 10,83 mm; 80%
	Cí
28		0	C(O)	(M+H) = 603.3	10-607:2; 3,55 min, 937c
	o
23		0	C(O)	(M+H) = 583.6	10-607c8; 5,52 mm; 98%
30	Ν' ^! r GY	0	C(O)	(M+H) = 632.3	10-607= 3, 11,52 min; 987'o (pcn/ ); 1060%3; 10.73 mm; 907ó ( ry=h. )
	M				I
	1 ct				I i i

-44CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	2	X	Y	MS Data	HPLC
31	• N a:	0	C(O)	(M+H) = 692.3	10-60%8; 11,21 mm; 98% ( p^o,r· ' ); 1060%3; 10,23 mm; 99%
32	_N-· óu	0	C(O)	(M+H) = 658.4	10-60% 8; 10,72 mm; 98%
33	N	0	C(O)	(M+H) = 707.48	10-60%8; 9,9 min; 58%
34	p N O 0	0	C(O)	(M+H) = 752.6	10-60%8; 10,37 min; 98%
35	Ý	0	c<0)	(M+H) = 681.5	10-60%3; 8,40 min, 98%
36	N^* o	0	C(O)	(M+H) = 666.6	10-60%3; 8,57 mm; 86%

-45CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Data	\| HPLC
37	ó Λ	0	C(O)	(M^H) = 655.6	10-6G%5. 3^70 mi. 35%
32 i	N cc	0	C(0)	(M+H) = 649.5	10-60%; 9,44 min. 38%
39	X N 0 í + o%	0	C(0)	(M+H) = 56S.6	10-60%B: 10 06 m;n, 94%
40	n + i O	0	C(0)	(M+H) = 669.6	10-60%B; 110 mm; 56% ( pot, ); 10-60%E; 10 12 min; 93% { --ych. J i
41	• >*· N' J. r» íV' o	0	C(0)	(M*H) = 654.6	10-60%3: 9,81 mm, 95%
42	N o. i	0	C(0)	(M+H) = 654.6	10-60%B. 9 52 mm; 93%
43 L.	s	0	C(0)	(M+H) - 654.6	10-6Q%3; 3 73 mm. 33%

-46CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Data	HPLC
44	&	0	C(O)	(M+H) = 668.56	10-60%3, 8.35 min; 92% '
45	”ťr”	0	C(O)	(M+Na) = 716.5	10-60%8; 8.86 min; 80%
46	ó, 1 ^Ci Cl	0	C(O)	(M+Na) = 716.1	10-60%B; 11,26/11.58 min (1:7); 98%; 10-60%B; 1127/11,56 min (2:1); 98%
47	Φ	0	C(O)	(M+Na) = 678.1	10-60%3; 8 33 min; 96%
48	_N'-	0	C(O)	(M+Na) = 697.8	10-60%8; 9.73 min; 90%
49	Ν'* 0	0	C(O)	(M+Na) = 547.2	10-60%5; 8 59 min; 90% '
50	Ν’*” ď	0	C(O)	(M+Na) - 660.6	10-60%3; 8 35 min; 94%

-47CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Data	HPLC
51	s N	0	C(O)	(M+H) = 623.3	10-60%B, 9,42 min/10.37 min, 85%
52	á°	0	C(O)	(M+H) = 700.4	10-60%B; 10,59 min; 96%
53	Q„ ó	0	C(O)	(M+H) = 716.3	10-60%3; 11,24/12,18 min; 95%
54	,x,	0	C(O)	(M+H) = 656.4	10-60%B; 9,97 min; 98%
55	o— . o=Z	0	C(0)	(M+H) = 682.3	10-60%3; 9 89 min; 98%
56	_N'~ ó_r	o	c<0)	(M+H) = 656.3	10-60%3; 10,34 min; 98%
57	Cl Cl	NH	C(0)	(M+H) = 676.31	20-60%B; 9,023 min.; 100%

-48CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Dala	HPLC
58	• ‘/7	NH	C(O)	(M+H)- 637.5	20-80%B, 5 152 min,; 100%
59	— _Ό	NH	C(O)	(M+H)= 617.5	20-80%3, 3,216 min.; 100%
eo		NH	C(O)	(M+H)= 638.5	20-80%3; 6 221 min.; 100%
61		NH	C(O)	(M+H)= 588.4	20-80%B; 4,503 min.; 100%
62	Ό	NH	C(O)	(M+H)= 608.5	20-80%B; 5,055 min.; 100%
63	'Ό	NH	C(O)	(M+H)= 636.5	20-80% B; 5,697 min.; 100%
64	Ό	NH	C(O) C(O)	(M+H)= 636.5	20-80%B; 5.548 min.; 100%
65		NH	S<0),	(M+H)= 658.4	20-80%B; 5,632 min.; 100%
66	«	NH	C(O)	(M+H)= 658.5	20-80%B; 6,690 min.; 100%
67	Ό	NH	ch₂	(M+H)= 594.5	20-80%3; 5,114 min.; 100%
68	Ό	NH	C(O)	(M+H)= 614.5	20-80%B, 5,559 min.; 100%

-49CZ 298749 B6

Tabulka 1 - pokračování

	Z	X	Y	MS Data	HPLC
69	Ό	0	ch₂	(M+H}=550 4	20-80% 2. 8,062 min, 100%
70		0	ch₂	(M+H}= 623 3	20-80%3; S,SSO miř..; 100% í

Tabulka 2 - Struktury a analytické údaje - sloučeniny 71-79

( z

	Z	w	MS Data	HPLC
71		u	(M+H)= 863.3	40-80% 3; 8/812:8,320 min.; 2:1 směs v ASu; 100%
72		0	(M+H)= 849.4	40-80%5: 8,380:8/539 mn.: 2:1 str.ěs v Abu; 100%
73		b	(M+H}= 799.5	20-60%S, 12,513 min.; 95%

-50CZ 298749 B6

Tabulka 2 - pokračování

1 z	w	MS Data	HPLC
74	•	ffy		(M+H)= 716	15,62 mm.; >9554
1			°y%Z/
75		0	O F S<^F r r	(M*H)=7 13	13,47 min.
76	« Ί	0	C 0 ΛΛ- F F	(M+H)=7 17	13^05 min.; >90%
77	• (	0	11 o	(M+rí}= 703	10-90%S, 8,5 min.; 8,6 min (2:1 j; >95%
78	V.	i I u	0	{M+H)= 727	8,7 min.; 10 min. (2:1); 95%
79	'fy	H	0	(M+H}= 743	10-80%9; 5,4 min.; 95%
		U	0 k^		I

Tabulka 3 - Struktury a analytické údaje - sloučeniny 80-88

-51 CZ 298749 B6

	T	w	MS Data	HPLC
80	0 O—⁷ V—N O 0	0^	(M+H)= 947	20-70%8; 5,15 min.; 95%
81	C<	C(O)H	(M+Na)= 553.60	5-45% 5; 11,699 min.; 100%
82		C(O)H	(M-H)= 547.4	5-45%B; 11,083 min.; 100%
83	ry^-	C(O)H	(M+Na}= 625.3	5-45%B; 12,258 min.; 100%
84	°ΊΓ^- 0	C{O)H	(M+Na)= 626.5	5-45% B; 11,083 min.; 100%
85		C(O)H	(M+Na)= 569.5	5-45%B; 11,606 min.; 100%
86	o o · cr^c	C(O)H	(M+Na)= 717.2	5-45%B; 7,942 min.; 100%
87	ά	C(O)H	(M+H)= 655.3	15-55%B; 10,735 min.; 100%
88	řX...	C(O)H	(M+Na)= 644.1	20-60% 3; 11,360 min.; 98%

-52CZ 298749 B6

Tabulka 4 - Struktury a analytické údaje - sloučeniny 89-126

	T	w	MS Data	i HPLC
89	Mm	C(O)H	(M+H}= 555.9	545¾ B; 10,771 mm.; 99%
90	.-0'· I	C(O)H	(M-rH)= 556.0	545% B; 13,055 min.;95%
91	\ o . i	C(O)H	522.4	5-45%B; S,4S5 min.; 57%
92	_e _c>0	C(O)H	(M+H)= 522.55	S-45%3; 9,072 min.; 100%
93	•	C(O)H	(M+H)= 505.33	5-45%3, 11,775 min.; 97%
94		C(O)H	(M+Na)= 525.6	5-45%a; 8,822 min.; 100%
95	ζϊ^χ·	C(O)H	(M+H)= 518.	5-4 5% 3; 8,484 min.; 100%
96	^XN^>	C(O)H	(M+H)= 619.6	545%B, 9,944 min.; 90%

-53CZ 298749 B6

Tabulka 4 - pokračování

	T	w	MS Data	[ HPLC
97	•	C(O)H	(M+H)= 538.7	5-45%3; 9 099 min.; 100%
98	S l ď	C(O)H	(M+H)= 588.5	5-45%3, 10,388 min.; 95%
99	O	C(O)H	(Μ+Η)= 541.1	5-45%B; 8,326 min.; 100%
o o	/ o \	C(O)H	(M+Na)= 587.3	35-75%B, 6,763 min.; 95%
101	0 ,WY' V—N 0 0	Λ° 0	(M+H)= 729	10-80%B; 3,0 min; 95%
102	JrQ V—N 0 O	⁰ 0	(M+H)= 819; (M+Na}= 840	20-70%3; 6,9 min; 95%
103	čL<<° V—N 0 0	xOO II o	(M+H)-848; (M+Na}= 870	20-70%B; 6,3 min; 95%

-54CZ 298749 B6

Tabulka 4 - pokračování

	T	w	(MS Data	t HPLC
104	0 3	N—\ O O 0	'/''O	(M+H)= 833	20-70%B, 7,3 min; 95%
105	1	<-Q O 0	V— 0	(M+H)=77Q; (M+Na)=792	20-70%B, 6,0 min; 95%
106	o :i V-Ν	<<7 O 0	0 ¹	(M+H)= 801; (M+Na)= 822	20-70%; 5,9 min; 95%
107	o 1	(Ý O 0	O fS^N 0	(M+H)=819; (M+Na)= 841	20-70%8; 3,24 min; 95%
108	0 1	N—/ O O o	O O—\ Ζ^γ^Ν\Λ/ O	(M+H)=812; (M+Na)=834	20-70%B; 4,9 min; 95%
109	0 0=/ o )—	^N— O O	O li ¹ 1 0	(M+H}=798; (M+Na)=820	20-70%B; 4/21 min; 95%
110	(· N	r	0 li 0	(M+H)= 550	10-40%B; 7,0 min; 95%

-55CZ 298749 B6

Tabulka 4 - pokračování

	T .	w	MS Data	\| HPLC
111	0	0	(M+Na)= 886	10-50%Β; 7.5 min; 95%
112	0'·	⁰ YY 0	(Μ+Η)= 638	1Ο-8Ο%3; 6.5 min; 95%
113	0''	„Α'-'Ό N Y° 0	(Μ+Η)= 865	40-80%3; 5.7 min; 95%
114	(Y’ N	° YY ⁰ Y	(Μ+Η)= 669; (M+Na)= 693	25-40%8; 11.6 min; 95%
115	(Y ’ N	Ύ'Χι	(Μ+Η)= 653	10-80%3; 6.80 min; 95%
116		.χ'Υγΰ	(Μ+Η)= 653	10-80%Β; 6.7 min; 95%
117	0	⁰ ΥΥ 0 =	{Μ+Η)= 653	10-80%3; 6.7 min; 95%
118		ο 0	(M+Na)=611	10-80%Β; 5.62 min; 95%
119	0''	ο ⁰ γγ	(Μ+Η)= 624	10-80%θ; 12.1 min; 95%

-56CZ 298749 B6

Tabulka 4 - pokračování

	I T	W	(MS Data	j HPLC
120	O'	.Αγθ	(M+H)= 667	10-80%B; 13^4 min; 95%
121	a/	o YY ° k	(M+H)= 667	10-80%B; 13,3 min; 95%
122	(Y'	° Y M o ¹	(M+H)= 605	10-80%B; 11,0 min; 95%
123	(X'	O θ' o	(M+H)= 621	10-80%B; 9,7 min; 95%
124	y ⁰ II 0	•y.	(M+H)= 761	13.65 min.; 90%
125	°Y° ⁰ Y	0 'Y?	<M+H)= 727	ND
126	y ~Ύγ o	0 Cl »V-y ) N—V v—' Cl	(M+H)= 856	ND

-57CZ 298749 B6

Tabulka 5 - Struktury a analytické údaje - sloučeniny 127-142

M | MS Data |HPLC

127		(M+H)= 644.30	15-55%3; 6,08 mm; 100%
128	°-O~\	(M+H)= 681.3	20-50%3; 8,11 min, 100% I !
129		(M+H)= 750.6	30-70%3; 5,55 min; 100%
130	CbCK	(M+H)= 720.2	30-7Q%5; 6,71 miř.; 100% 1
131	a,. U '	(M+Na)= 715.4	30-70%E; 5,54 mm; 100%
132		(M+Na)= 715.2	30-70%3; 5,53 min, 100%
133	O.	(M+H)= 630,9	30-70%3; 3,78 mm. í 100% 1

-58CZ 298749 B6

Tabulka 5 - pokračování

	\| M	MS Data	Ihplc
134		(M+H)= 634.0	15-55%B; 5,90 min; 100%
135	^w ·	(M+H)= 691.60	30-70%B, 4,22 min; 100%
136	a •	(M+H)= 651.20	40-80%B; 5,59 min; 100%
137	cP	(M+H)= 659.10	40-80%3; 4,65 min; 100%
138		(M+H)= 651.70	40-80%3; 3,83 min; 100%
139	« + · ·3	(M+H)= 582.90	40-80%B; 2,34 min; 100%
140	(h_.	(M+H)= 690.70	40-80%3: 5,15 min, 100%
141		(M+Na}= 664.80	40-80%5; 3,93 min; 100%
142	Q-w	(M+Na)= 708.80	40-80%S; 5,398 min; 100%

-59CZ 298749 B6

Tabulka 6 - Struktury a analytické údaje - sloučeniny 143-197

O

	T	u	i MS Data	I HPLC
143		S(O₂)	(M+Na)= 566.71	20-80% 3; 10,186 min.; >95%
144	0'·	S{O₂)	(M+Na)= 552.26	20-80%3; 9/985 min.; 90%
145	σ-	C(O)	(M+Na)= 531.60	20-80%3; 9,378 min; 95%
146	cn	C(O)	(M+Na)= 542.37	20-80%3; 10,404 min; 95%
147	CX	C(O)	(M+Na)= 544 42	20-80% 3; 10,246 min; 95% .
148	h₃c·^ -	C(O)	(M+Na}= 454.26	20-80%3; 7/109 min; 95%
149	0'·	C(O)	(M+Na)= 516.05	20-80% 3, 9,668 min; 95%
150		C(O)	(M+Na)= 649.17	20-80%3; 9,880 min; 95%

-60CZ 298749 B6

Tabulka 6 - pokračování

	T	υ~~	i MS Data	I HPLC
151	θΥΟ·	C(O)	(M+Na)= 648.45	2O-80%3, 10,030 min; 95%
152	λΧΧ'-	C(O)	(M+Na)= 587.08	20-80%3, 7,892 min; 95%
153 ί	<r'	C(0)	{M+Na)= 505.47	20-80%5; 8,583 min; 95%
154		C(O)	(M+Na)= 554.96	20-80% B; 10/111 min; 95%
155	ΎΤ'·	C(O)	(M+Na)= 551.90	20-80%3; 6,737 min; 95%
156	'/σ'	C(O)	(M+Na)= 566.11	20-80%B; 9,227 min; 95%
157		C(O)	(M+Na}= 594.59	20-80% 3, 7,557 min; 95%
158	i	C(0)	(M+Na)= 567.00	20-80% B; 10,409 min; 95%
159	6?	C(O)	(M-Na}= 566.10	20-80% B; 10,715 min; 95%
160	f σ-	C(O)	(M+Na)= 559.27	20-80% B; 10,597 min; 95%

-61 CZ 298749 B6

Tabulka 6 - pokračování

	T	u	I MS Data	t HPLC
161	O_x .0 ČG	C(O)	(M+Na)= 574.65	20-80%B, 9,723 min, 95%
162	σ°υ	C(O)	(M^j-Na)= 607.43	20-80%3; 12,019 min; 95%
163	Cr-.	C(0)	(M+H)= 514.83	20-80% B; 6,170 min; 95%
164	o' ď'-	C(O)	(M+H)= 538.87	20-80%8; 7,094 min; 99%; 20-80%8; 6,712 min; 99%
165	GjO 0	C(O)	(M+Na)= 620.77	20-80% 5; 8,390 min; 99%
166	C—	C(O)	(M+H)= 536.44	20-80%8; 7,787 min; 99%
167	TO.	C(O)	(M+H)= 525.58	20-80%B; 7,023 min; 99%
168		C(O)	(M+Na}= 582.25	20-80%B; 7,220 min; 98%
169	O-	C(O)	(M+H)= 552.32	20-80%B; 6,410 min; 99%
170	cG-	C(O)	(M+H)= 550.77	20-80%3; 6,663 min; 99%

-62CZ 298749 B6

Tabulka 6 - pokračování

	T	u	MS Data	HPLC
171	σ—	C(O)	(M+H)= 538.87	20-80%B, 7.101 min; 99%
172	0 \=o / < / ·	C(O)	(M+Na)= 554.79	20-80%B; 7,011 min; 99%
173	QX	C(O)	(M+H)= 551.59	20-80%B; 8/029 min; 96%
174	/ \	C(O)	(M+H}= 549.86	20-80%8; 7,320 min; 99%
175	•	C(O)	{M+Na)= 554,79	20-80%B; 6,413 min; 99%
176	XI I i	C(O)	555.05	20-80%3; 7,065 min; 99%
177		C(O)	(M+Na)- 584.55	20-80%E; 9/099 min; 99%
178	ď'	C(O)	(M+H)= 535.23	20-80%B; 8,038 min; 99%
179	Sr	C(O)	(M+Na)= 569.07	10-80%B; 5/885, 98%

-63 CZ 298749 B6

Tabulka 6 - pokračování

	T	i u	MS Data	Thřlč
180	c	C(O)	(M+H)= 548.03	10-80% B; 5,991. 99%
181	X	C(O)	(M+Na)= 533.91	10-80%3; 7,237; 99%
182	^Cl	C(O)	(M+Na)= 630.91	10-80%3; 9.382; 95%
183	ďP	C(O)	(M+H)= 599.4	10-80% B; 7,0 min; 99%
184		C(O)	(M+Na}= 545.27	10-S0%8; 5,89 min; 99%
185		C(O)	(M+Na)= 643.91	10-80% 3; 10,43 min; 99%
185	Cl ·	C(O)	(M+Na)= 664.69	10-80%5; 9,95 min; 99%
187	Op..	C(O)	(M+Na)= 595.53	10-80%3; 8,61 min; 99%
188		C(O)	(M+Na)= 596.45	10-80%3. 9,0 min; 92%

-64CZ 298749 B6

Tabulka 6 - pokračování

	T	u	MS Data	HPLC
189		C{0)	(M+Na}= 533.73	10-80%B; 8,438; 99%
190	•	C(O)	(M+Na)= 554.20	10-80%B; 7,930; 99%
191	γ.	C(O)	(M+Na)= 557.74	10-80%3; 9,06 min; 99%
192	aú o	C(O)	(M+Na)= 545.70	10-80%B; 10,11 min; 99%
193	97	C(O)	(M+Na)= 544.06	10-80%B; 8,41 min, 93%
194	Q,	C(O)	{M+Na)= 545.49	10-80%3; 8,41 min; 96%
195	a 9r	C(O)	(M+Na)= 534.05	10-80%3; 8/3 min; 99%
196	*	C(O)	(M+H)= 574.3	10-80%B; 8,84 min; 98%
197		C(O)	(M+H)= 588.4	10-80%B; 9,37 min; 99%

-65CZ 298749 B6

Tabulka 7 - Struktury a analytické údaje - sloučenina 198

Příklad 11

Protože jsou sloučeniny obecného vzorce I nebo II schopné inhibovat NS3 serinovou proteázu, jsou zřejmě klinicky využitelné pro léčbu virových onemocnění, včetně HCV. Tyto testu předpoio vídají schopnost sloučenin inhibovat HCV in vivo.

Peptidy a testy

Peptidy EDVV abuCSMSY (Abu je kyselina aminobutanová), DEMEECSQHLPYT,

ECTTPCSGSWLRD a EDVV AbuC-p-nitroanilid se získají od AnaSpec lne. (San Jose, CA)

Obsah peptidů v čištěných, lyofilizovaných peptidech a vnitřních peptidů se určí pomocí kvantitativní dusíkové analýzy a příslušné hodnoty se použijí při přípravě zásobního roztoku peptidů (Galbreath). Určení pKa se provede pomocí Robertson Microlyt Laboratories, lne. (Madison,

NJ).

HPLC štěpící test se provede za použití 25 nM až 3,0 μΜ enzymu v 100 μΐ objemech při 30 °C obsahujících 50 mM HEPES.KOH (pH 7,8), 100 mM chlorid sodný, 20% glycerol, 5 mM DTT a vhodné množství substrátu (v dimethylsulfoxidu), s nebo bez NS4A peptidů tak, že konečná koncentrace dimethylsulfoxidu nepřesáhne 4 %. Zvláštní kontrolní experimenty ověřily, že tento procentuální obsah dimethylsulfoxidu neovlivní enzymatickou aktivitu. Štěpící reakce se ukončí přidáním stejného objemu směsi 10% kyselina trifluoroctová:acetonitril (1:1) a aktivita se testuje na HPLC koloně s reverzní fází (Rainin Cl8, Microsorb-MV, 5 mm, 4,6x250 mm; 0 až 50% acetonitril, 0,1 % kyselina octová, 3,33 % min) za použití přístroje Hewlett Packard 1050 s automatickým nástřikem a detekcí soustavou diod při 210 nm a 280 nm (pokud je to vhodné). Odeberou se eluované fragmenty peptidů a identifikují se pomocí hmotové spektroskopie a N-koncové sekvenční analýzy. Identita fragmentu a koncentrace se dále ověří pomocí autentických syntetizovaných produktů. Počáteční rychlost štěpení se určí při < 20% konverzi substrátu a katalytické parametry se určí podle kinetické rovnice Michaelise a Mentenové za použití pro35 gramu MultiFit (Day Computing, Cambridge, MA).

Spektrofotometrické testy se provádějí v 96jamkové mikrotitrační desce při 30 °C za použití přístroje SpectraMax 250 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) s kinetickou schopností. Štěpení substrátu EDVV AbuC-p-nitroanilid (5A-pNA) se provádí s nebo bez NS4A ve stejném pufru použitém pro HPLC test při 30 °C a uvolnění pNA se sleduje při 405 nm. Extinkční koeficient p-nitroanilinu je nezávislý na pH při hodnotě 5,5 a vyšší [Tuppy, H., a kol., Hoppe Seyler's Z.

-66CZ 298749 B6

Physiol. Chem., 329, str. 278-288 (1962)]; Raybuck a Luong, nepublikované výsledky). Procentuální obsah dimethylsulfoxidu při teplotě testech nepřekročí 4 %.

Určení pH závislosti V_max, K_m, a V_max/K_m se určí za použití série pufrů o konstantní iontové síle obsahujících 50 mM MES, 25 Nm Tris, 25 mM ethanolaminu a O,1M chlorid sodný [Morrison, J. F. a Stone, R. F., Biochemistry, 27, str. 5499-5506 (1988)]. Inflexní bod pro údaje log v se vypočte pomocí nelineární metody nejmenších čtverců údajů z rovnice.

log v = log[V_max/(l+H/K_a)] [DixonM. a Webb, E. C., Enzymes; Academie Press: New York; díl., str. 138-164 (1979)]. Inflexní body pro údaje log(V/K) se vypočtou pomocí nelineární metody nejmenších čtverců podle rovnice log v = log[V_max/(l+H/K_a+K_b/H)] [DixonM. a Webb, E. C., Enzymes; Academie Press: New York; díl., str. 138-164 (1979)].

V obou případech se použije program KineTic (BioKin FtD).

Kinetické konstanty pro bisulfátovou reakci uspořádanou s rychlým ustavením rovnováhy se určí z rychlosti vs' [4A], [EDVV AbuC-pNA] údajů pomocí nelineární metody nejmenších čtverců podle rovnice 1 Morrison, J. F., Biochem. Biophys. Acta., 185, str. 269-286 (1969)] jak je popsáno v textu. Hodnoty K_i; a K_IS pro peptidylové inhibitory se určí z rychlosti vs [inhibitor], [substrát] údajů a podle rovnice pro smíšenou inhibici:

rychlost = V_raax[S]/(Km(l+[I]/Kis) + [S] (1+[I]/Kii)].

V obou postupech se použije komerční program KinetAsyst (StateCollege, PA). Hodnoty Ki se vypočtou z rychlosti vs [inhibitor] nákresu pomocí nelineární metody nejmenších čtverců údajů zMorrisonovy rovnice pro těsnou vazebnou kompetitivní inhibici [Morrison, J. F., Biochin. Biophys. Acta, 185, str. 269-286 (1969)]. Pro tento postup se použije program KineTic (BioKin Ftd).

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 9. Hodnoty K; jsou vyjádřeny v μΜ. Skupina „A“ znamená <1 μΜ inhibici; skupina „B“ znamená 1-100 μΜ inhibici; skupina „C“ znamená > 100 μΜ inhibici. Označení „ND“ znamená, že se sloučenina netestovala.

-67CZ 298749 B6

Tabulka 9 - Enzymové inhibiční údaje pro sloučeniny 1-198

Sl. Č.	Ki (μΜ)	Si. č.	Ki(μΜ)	Sl. č.
1	B	42	B	83
2	3	43	S	84
3	3	44	3	85
4	3	45	3	86
5	5	46	3	87
z* 0	B	47	3	68
·» t	3	48	3	89
8	B	49	B	90
9	3	50	3	91
10	B	51	3	92
L1	3	52	3	93
12	B	53	3	94
13	3	54	3	q ς, _Z —'
14	3	55	3	96
15	3	56	C	97
16	B	57	3	98
17	B	58	B	99
18	B	59	π	100
19	n	60	f	101
20	3	61	c	102
21	3	62	3	103
22	η	63	3	104
23	3	64	3	105
24	3	65	3	106
25	3	6 6		107
2 6	3	67	c	108
27	£3	68		109
28	3	69	3	110
29	B	70	3	111
30	3	71	A	112
1 1	B	72	3	113
32	3	73	3	114
33	c	74	3	115
34	3	75	3	116
35	3	76	C	117
3 6	C	77	C	118
37	3	7 8	3	119
38	B	79	3	120
35	3	80	A	121
40	3	81	3	122
41	3	82	B

K-(μΜ) tn in ni tn in in ω ra tn ui

B —i

B

Ξ

T a

j-.

a

2,

A

B

B z—

B

C r

B

C

-68CZ 298749 B6

Tabulka 9 - pokračování

si. e.	Ki (uM)	si. e.	i<; (uM)	Sl . č.	Ki i
123	S	149	n	174	B
124	B	150	B	175	s
125	S	151		176	c
125	C	152	c	177	r·
127	c	153	B	178	c
12S	g	154	3	179	B
129	5	155	B	160	r·
130	C	155	B	181	c
131	B	157	3	182	c
132	π	158	£5	183	B
133	E	159	B	164	B
134	C	160	E	185	s
135	B	161	C	186	c
13 o	B	162	g	187
137	B	163	c	188	c
138	3	164	c	189	c
139	C	165	c	190	c
14 0	3	166	c	191	c
141	B	167	r* V	192	c
142	3	168	B	193	c
143	C	169	C	194
144	C	170	C	195	3
14 5	s	171	c	196	3
14 6	3	172	c	i S í	B
147	C	173	c	198	Ti
148	c

Protože jsme výše uvedli mnoho provedení podle předkládaného vynálezu, je zřejmé, že základní konstrukce mohou být obměněny za získání jiných provedení, která využijí způsoby podle vynálezu. Proto je třeba poznamenat, že rozsah podle předkládaného vynálezu je definován v nárocích připojených k popisu spíše než ve specifických provedeních, která byla uvedena pouze formou ío příkladů.

-69CZ 298749 B6

Claims

1. Peptidový derivát obecného vzorce II:

nebo '<O)_mFT (O)_mR io m je 0 nebol;

každá skupina R² je nezávisle atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, arylalkenylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, cykloalkenylová skupina, cykloalkenylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, hete15 rocyklylalkylová skupina, heterocyklylalkenylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroary laiky lová skupina, nebo dvě skupiny R², které jsou vázány ke stejnému atomu dusíku, tvoří společně s tímto atomem dusíku pětičlenný až sedmičlenný monocyklický heterocyklický kruhový systém; přičemž jakýkoliv atom uhlíku R² je popřípadě substituovaný skupinou J;

20 J je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, arylalkoxyskupina, cykloalkylová skupina, cykloalkoxyskupina, heterocyklylová skupina, hetero-70CZ 298749 B6 cyklyloxyskupina, heterocyklylalkylová skupina, ketoskupina, hydroxylová skupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, alkanoylaminoskupina, aroylaminoskupina, arylalkanoylaminoskupina, karboxylová skupina, karboxyalkylová skupina, karboxamidoalkylová skupina, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, formylová skupina, acylová skupina, sulfonylová skupina nebo sul5 fonamidoskupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J¹;

J¹ je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, aryloxyskupina, heterocyklylová skupina, heterocyklyloxyskupina, ketoskupina, hydroxylová skupina, aminoskupina, alkanoylaminoskupina, aroylaminoskupina; karboxylová skupina, karboxyalkylová skulo pina, karboxamidoalkylová skupina, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, formylová skupina, sulfonylová skupina nebo sulfonamidoskupina;

L je alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkynylová skupina, kde jakýkoli atom vodíku je popřípadě substituovaný atomem halogenu, a kde jakýkoli atom vodíku nebo atom halogenu

15 vázaný k jakémukoli poslednímu atomu uhlíku je popřípadě substituovaný sulfhydrylovou skupinou nebo hydroxylovou skupinou;

A¹ je skupina

20 R⁵ a R⁶ jsou nezávisle na sobě atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, arylalkenylová skupina, cykloalkylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, cykloalkenylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

X je vazba, skupina -C(H)(R⁷)-, skupina -0-, skupina -S- nebo skupina -N(R⁸)-;

R⁷ je atom vodíku, alkylová skupina, alkenylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo hetero30 arylalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

R⁸ je atom vodíku, alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, arylalkanoylová skupina, heterocyklanoylová skupina, heteroarylalkanoylová skupina, skupina

35 -C(O)R¹⁴, skupina -SO₂R¹⁴ nebo karboxamidoskupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J; nebo R⁸ a Z, společně s atomy, ke kterým jsou vázány, tvoří mono- nebo bicyklický systém obsahující atom dusíku, popřípadě substituovaný jednou až třemi skupinami J;

R¹⁴ je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, hetero40 cyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina nebo heteroarylalkylová skupina;

-71 CZ 298749 B6

Y je vazba, skupina -CH₂-, skupina -C(0)-, skupina -C(O)C(O}-, skupina -S(0)-, skupina —S(O)₂— nebo skupina -S(O)(NR⁷)-, kde R⁷ je definováno výše;

Z je alkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, cykloalkylová skupina, cyklo5 alkylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, skupina -OR² nebo skupina -N(R²)₂, kde jakýkoli atom uhlíku je popřípadě substituovaný skupinou J, kde R² je definováno výše;

A² je vazba nebo skupina

R⁹ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, karboxyalkylová skupina nebo karboxamidalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J;

V je vazba, skupina -CH₂-, skupina -C(H)(Rⁿ)-, skupina -0-, skupina -S- nebo skupina -N(Rⁿ);

K je vazba, skupina -0-, skupina -S-, skupina -C(O)-, skupina -S(O)-, skupina —S(O)₂— nebo skupina -S(O)(NRⁿ)-, kde R¹¹ je definováno výše;

T je skupina -R¹², skupina -alkyl-R¹², skupina -alkenyl-R¹²; skupina -alkynyl-R¹², skupina 30 -OR¹², skupina -N(R¹²)₂, skupina -G(0)R¹², skupina -C(=NOalkyl)R¹² nebo skupina

R¹² je atom vodíku, arylová skupina, heteroarylová skupina, cykloalkylová skupina, heterocyklylová skupina, cykloalkylidenylová skupina nebo heterocykloalkylidenylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J, nebo první skupina R¹² a druhá skupina

35 R¹², společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvoří mono- nebo bicyklický kruhový systém, popřípadě substituovaný jednou až třemi skupinami J;

-72CZ 298749 B6

R¹⁵ je alkylová skupina, cykloalkylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, heterocyklylová skupina, heterocyklylalkylová skupina, heteroarylová skupina, heteroarylalkylová skupina, karboxyalkylová skupina nebo karboxamidoalkylová skupina, a je popřípadě substituovaná jednou až třemi skupinami J; a

přičemž alkylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje

15 nasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku; alkenylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje mono- nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 10 atomů uhlíku; alkynylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje mono- nebo polynenasycený alifatický uhlovodíkový

20 zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 10 atomů uhlíku; arylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje karbocyklický aromatický zbytek obsahující 6 až 14 atomů uhlíku, který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; cykloalkylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní

25 nearomatický 3- až 8-členný uhlíkatý kruhový zbytek, který je nasycený a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; cykloalkenylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní cyklický 5- až 7-členný uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující alespoň jednu endocyklickou dvojnou vazbu uhlík-uhlík; cykloalkylidenylová skupina,

30 samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní cyklický 5- až 7členný uhlovodíkový kruhový zbytek obsahující alespoň jednu exocyklickou dvojnou vazbu uhlík-uhlík, přičemž cyklický uhlovodíkový kruh může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy; heterocyklylová skupina, samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje

35 stabilní cyklický 5- až 15-členný mono-, bi- nebo tricyklický, heterocyklický kruh, který je buď nasycený, nebo částečně nenasycený, ale nikoliv aromatický, a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy, a který sestává z jednoho nebo více atomů uhlíku a z jednoho až čtyř heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z dusíku, kyslíku a síry; heteroarylová skupina,

40 samotná nebo v kombinaci s libovolným dalším výrazem, označuje stabilní 3- až 7-členný monocyklický heterocyklický kruh, který je aromatický, a který může být popřípadě kondenzovaný s jedním až třemi cykloalkylovými, aromatickými, heterocyklickými nebo heteroaromatickými kruhy, a který sestává zjednoho nebo více atomů uhlíku a zjednoho až čtyř heteroatomů vybraných ze skupiny sestávající z dusíku, kyslíku a síry.

2. Peptidový derivát podle nároku 1 obecného vzorce II, kde R⁵ a R⁶ jsou atom vodíku.

-73CZ 298749 B6

3. Peptidový derivát podle nároku 2 obecného vzorce II, kde A² je skupina:

a R⁹ je alkylová skupina.

5 4. Peptidový derivát podle nároku 3 obecného vzorce II, kde R⁹ je izopropylová skupina.

5. Peptidový derivát podle nároku 4 obecného vzorce II, kde

L je alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkynylová skupina, kde jakýkoli atom vodíku ío je popřípadě substituovaný atomem halogenu, a kde jakýkoli atom vodíku nebo atom halogenu vázaný k jakémukoliv koncovému atomu uhlíku je popřípadě substituovaný sulfhydrylovou skupinou nebo hydroxylovou skupinou.

6. Peptidový derivát podle nároku 5 obecného vzorce II, kde 15

L je trihalogenmethylová skupina, sulfhydrylová skupina nebo alkylová skupina substituovaná trihalogenmethylovou skupinou, sulfhydrylovou skupinou nebo hydroxylovou skupinou.

7. Peptidový derivát podle nároku 6 obecného vzorce II, kde

X je skupina -O- nebo skupina -N(H)-; a

Y je methylenová skupina, skupina -C(O)- nebo skupina -S(O)₂-.

25

8. Peptidový derivát podle nároku 7 obecného vzorce II, kde

V je skupina -N(H)- a K je skupina -C(O)- nebo skupina -S(O)₂9. Peptidový derivát podle nároku 2 obecného vzorce II, kde 30

A² je vazba;

L je ethylová skupina;

35 X je skupina -O-;

Y je methylová skupina;

V je skupina -N(H)-; a 40

K je skupina -C(O)- nebo skupina -S(O)₂10. Peptidový derivát podle nároku

9 obecného vzorce II, kde 45 M je isopropylová skupina

-74CZ 298749 B6

11. Peptidový derivát podle nároku 10 obecného vzorce II, kde Z je arylová skupina nebo heteroarylová skupina.

5 12. Peptidový derivát podle nároku 11 obecného vzorce II, kde

Z je fenylová skupina.

13. Peptidový derivát podle nároku 12 obecného vzorce II, kde

19 19 19 19 19

T je skupina -R , -alkyl-R , skupina -alkenyl-R , skupina -OR , skupina -N(R )₂, sku pina -C(=NOalkyl)R¹², nebo skupina

R

14. Peptidový derivát podle nároku 1 obecného vzorce II, kde

R a R⁵ a R⁶ jsou atom vodíku; A² je:

II a R⁹ je isopropylová skupina; L je ethylová skupina;

-75CZ 298749 B6

X je skupina -O- nebo skupina -N(H)-;

Y je methylenová skupina, skupina -C(O)- nebo skupina -S(O)₂-;

V je skupina -N(H)-; a

K je skupina -C(O)-.

10 15. Peptidový derivát podle nároku 14 obecného vzorce II, kde

M je isopropylová skupina.

16. Peptidový derivát podle nároku 15 obecného vzorce II, kde 15

Z je arylová skupina nebo heteroarylová skupina.

17. Peptidový derivát podle nároku 16 obecného vzorce II, kde 20 T je arylová skupina nebo heteroarylová skupina.

18. Peptidový derivát podle nároku 17 obecného vzorce II, kde

T je pyrazinová skupina.

19. Peptidový derivát podle nároku 14 obecného vzorce II, kde X je skupina -O- a Y je methylenová skupina.

30 20. Peptidový derivát podle nároku 19 obecného vzorce II, kde

Z je arylová skupina nebo heteroarylová skupina.

21. Peptidový derivát podle nároku 20 obecného vzorce II, kde

Z je arylová skupina.

22. Peptidový derivát podle nároku 21 obecného vzorce II, kde 40 M je isopropylová skupina.

23. Peptidový derivát podle nároku 14 obecného vzorce II, kde T je skupina -R¹², skupina -OR¹², skupina -N(R¹²)₂ nebo

-76CZ 298749 B6

24. Peptidový derivát podle nároku 23 obecného vzorce II, kde

M je alkylová skupina, heteroarylalkylová skupina, arylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, arylalkylová skupina, arylová skupina, cykloalkylalkylová skupina, arylalkylová skupina

5 nebo arylalkylová skupina, kde jeden z atomů uhlíku alkylové skupiny je nahrazen atomem kyslíku nebo atomem síry.

25. Peptidový derivát podle nároku 24 obecného vzorce II, kde ίο M je propylová skupina, methylová skupina, pyridylmethylová skupina, benzylová skupina, naftylmethylová skupina, fenylová skupina, imidazolylmethylová skupina, thiofenylmethylová skupina, cyklohexylmethylová skupina, fenylethylová skupina, benzylthiomethylová skupina nebo benzyloxyethylová skupina.

15 26. Peptidový derivát podle nároku 25 obecného vzorce II, kde

T je arylová skupina nebo heteroarylová skupina.

27. Peptidový derivát podle nároku 26 obecného vzorce II, kde

T je pyrazinová skupina.

28. Peptidový derivát podle nároku 1 obecného vzorce II, kde

25 A² je skupina

29. Peptidový derivát podle nároku 28 obecného vzorce II, kde

M je isopropylová skupina a K je skupina -C(O)-.

30. Peptidový derivát podle nároku 29 obecného vzorce II, kde

T je skupina -R¹², -alkyl-R¹², skupina -alkenyl-R¹², skupina -OR¹², skupina -N(R¹²)₂, skupina -C(=NOalkyl)R¹² nebo skupina

31. Peptidový derivát podle nároku 1 obecného vzorce II, kde

Z je fenylová skupina, ve které je jakýkoliv atom uhlíku popřípadě substituovaný skupinou J.

-77CZ 298749 B6

32. Peptidový derivát podle nároku 1, přičemž tímto peptidovým derivátem je jakákoliv slouče nina vybraná z následujících sloučenin:

kde mají substituenty následující definice:

Z X Y 1 W O ch₂ 2 o ch₂ 3 N-O 0 ch₂ 4 0 ch₂

-78CZ 298749 B6

Z X Y 5 N-q I Ύ 0 ch₂ 6 ÁV 0 ch₂ Ί _F ^z τ 0 ch₂ 8 cY 0 ch₂ 9 0 ch₂ 10 'CC 0 ch₂ 11 o-b 0 ch₂ 12 •ú 0 ch₂ 13 JW 0 ch₂

-79CZ 298749 B6

Z X Y 14 0 ch₂ 15 '(X 0 ch₂ 16 '0^ 0 ch₂ 17 'Cy 0 ch₂ 18 ’Χ’γ 0 ch₂ 19 'CO 0 ch₂ 20 'CO 0 ch₂ 21 'X 0 ch₂ 22 'X o ch₂ 23 ^_c. 0 ch₂

-80CZ 298749 B6

Z X v 24 0 ch₂ 25 0 ch₂ 26 χ 0 ch₂ 27 X O- Cl 0 C(O) 28 v o 0 C(O) 29 0 C(O) 30 HN * <r Cl 0 C(O) 31 HN G 0 C(0)

-81 CZ 298749 B6

2 X Ý¹ 32 HN'^ ó. 0 C(0) 33 HN «ΧΧι NHa 0 C(0) 34 X HN 0<-·' o⁵ 0 C(0) 35 HN 0 C(0) 3G HN 0 0 C(0) 37 HN ^X 0 C(0)

-82CZ 298749 B6

Z X Y 38 HN CU 0 C(0) 39 HN ¥ O 0 0 C<0) 40 HN * Čk / 0 0 C(0) 41 HN * -.xr o C(0) 42 O— r-O 0 C{0) 43 HN * ď' 0 C(0)

-83CZ 298749 B6

Z X Y 44 HN * k 0—' 0 G(O) 45 HN * “fy/¹ 0 C(O) 46 HN'* ςκ, Cl 0 C(O) 47 HN * 0 C(O) 48 óo 0 C(O) 49 δ 0 C(O) 50 HN'* ď 0 C(O)

-84CZ 298749 B6

Z X Y 51 HN ^X ciXiXa 0 C(0) 52 0 C(0) 53 HN á. ó 0 C(0) 54 HN*” . čú 0 C(0) 55 0 C(0) 56 HN όφ 0 C<0) 57 q Cl Cl NH C(0)

-85CZ 298749 B6

Z [x Y 58 no NH C(0) 59 -O NH C(0) 60 ''O NH C(0) 61 NH C(0) 62 '0 NH C(0) 63 'OO NH C(0) 64 '0 NH C<0) C(0) 65 Ό NH 5(0)2 66 NH C(0) 67 '0 NH CH₂ 68 '0 NH C(0)

-86CZ 298749 B6 kde mají substituenty následující definice:

Z w 71 'GC 9 72 'CO 9

-87CZ 298749 B6

Z w 73 Ό rO b 74 Ό 75 '0 -?4 76 '0 -W F F 77 '0 II 0 78 Ό o 79 Ό ^<Sf

-88CZ 298749 B6 kde mají substituenty následující definice:

T w 80 O=T r~N o o Z H -Vno 81 ch7 C(O)H 82 C{O)H 83 O' C(O)H 84 O C(O)H 85 H ^V C(O)H 86 9, H O^OH C(O)H

-89CZ 298749 B6

-90CZ 298749 B6

Μ 131 132 133 0. 134 ΠΝ-ν Si < 135 MH 136 TO 137 ď' 138 ťr- 139 CH3 140 TO- 141 TO

-91 CZ 298749 B6

-92CZ 298749 B6

T u 148 C(O) 149 0' C(O) 150 cuccr N C(O) 151 Ογ-χΑ C(0) 152 JCC' H C(O) 153 0 Č(O) 154 H N CP' C(O) 155 C{0) 156 C(O) 157 <° C(O)

-93 CZ 298749 B6

T u 158 OO i C(O) 159 6? C(O) 160 C(O) 161 o. „o - á- C<0) 162 σΌ' C(O) 163 O' C(O) 164 -X σ' C(0) 165 OH C(O) 166 0— C(O)

-94CZ 298749 B6

T u 167 C(0> 168 C(O) 169 o \ C(0) 170 C(0) 171 C(0) 172 HO C(O) 173 C(0) 174 o C(O) 175 C(O)

-95CZ 298749 B6

Τ u 176 C(O) 177 cd C{0) 178 ď C(O) 179 % H C<0) 180 /9 H C(O) 181 /*=( C(O) 182 C(O) 183 dd C(O)

-96CZ 298749 B6

Τ ll 184 C(0) 185 C(0) 186 C(0) 187 09. C(0) 188 C(0) 189 Ύτ Α C(0) 190 Η C(0) 191 C(0) 192 fy). OH C(O)

-97CZ 298749 B6

T u 193 9c C(O) 194 9- C{O) 195 9- Br C(O) 196 C(O) 197 C(O>

33. Farmaceuticky přijatelný prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje peptidový derivát podle kteréhokoli z nároků 1 až 32 a farmaceuticky přijatelný nosič.

34. Použití peptidového derivátu podle kteréhokoli z nároků 1 až 32 pro přípravu léčiva pro inhibici aktivity serinové proteázy.

35. Použití podle nároku 34, kde serinovou proteázou je HCV NS3 proteáza.

36. Použití peptidového derivátu podle kteréhokoli z nároků 1 až 32 pro přípravu léčiva pro léčbu nebo prevenci virové infekce hepatitidy C u pacienta.

37. Použití podle nároku 36, kde jmenovaná sloučenina je upravena společně s farmaceuticky 15 přijatelným nosičem.

20 Konec dokumentu