DE69615535T2 - Neue fungizide cyclohexapeptide - Google Patents

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
• Die vorliegende Erfindung betrifft neue Cyclohexapeptidverbindungen, die als antifungale und Anti-Pneumocystis-Mittel geeignet sind.
• Aufgrund eines Anstiegs der Zahl von Isolaten, die gegenüber herkömmlichen Mitteln resistent sind, besteht derzeit ein Bedarf an antifungalen und Anti-Pneumocystis-Mitteln. Zusätzlich zeigen herkömmliche Mittel etwas hohe Toxizitätswerte, die ihre Eignung einschränken. Schließlich ist das Auftreten von Pneumocystis-carinii-Pneumonie steigend, insbesondere angesichts des hohen Auftretens von infektionsanfälligen immunbeeinträchtigten Patienten, wie z. B. denjenigen, die an AIDS leiden.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung, Verbindung I (Seq.- Ident.-Nr. 1-6), sind dadurch gekennzeichnet, daß sie ein Kohlenstoffatom besitzen, das an den Cyclohexapeptidring am 5-Kohlenstoffatom der 4- Hydroxyornithinkomponente (hierin nachfolgend "C-5-orn") gebunden ist, und können dargestellt werden durch die Formel:
• worin
• R&sub1; H oder OH ist;
• R&sub2; H, CH&sub3; oder OH ist;
• R&sub3; H, CH&sub3;, CH&sub2;OONH&sub2;, CH&sub2;ON, CH&sub2;OH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;CH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C=NH)RVII ist;
• R&sub4; H oder CH&sub3; ist;
• R&sub5; H, OH oder OSO&sub3;H ist;
• R&sub6; H oder OH ist;
• R&sub1; C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkyl,
• C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkenyl,
• C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxyphenyl,
• C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxynaphthyl oder
• ist,
• Ra C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkyl oder (CH&sub2;)qNRbRc ist, wobei Rb und Rc unabhängig H, C&sub1;-C&sub1;&sub0;- Alkyl sind oder Rb und Rc zusammen mit dem Stickstoffatom
• oder
• sind,
• wobei
• Rd C&sub1;-C&sub1;&sub6;-Alkyl, Cyclohexylmethyl, Phenyl oder Benzyl ist,
• p 1 oder 2 ist und
• q 2, 3 oder 4 ist;
• RII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;OH, C=NH(RVII), (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, COCH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI ist;
• RIII H, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRIV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI ist oder
• RII und RIII zusammen -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;)&sub5;-, -(CH&sub2;)&sub2;O(CH&sub2;)&sub2;- oder -(CH&sub2;)&sub2;NH(CH&sub2;)&sub2;- sind;
• RIV C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;
• RV H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;
• RVI H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;
• RVII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;
• X Cl, Br oder I ist; oder
• ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
• Zusätzlich sind quartäre Ammoniumsalze der Formel
• offenbart, worin R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, R&sub4;, R&sub5;, R&sub6;, RI, RIV und X wie zuvor definiert sind.
• Ebenfalls offenbart sind Verbindungen der Formel
• worin
• R&sub1; H oder OH ist;
• R&sub2; H, CH&sub3; oder OH ist;
• H, CH&sub3;, CH&sub2;ONH&sub2;, CH&sub2;CN, CH&sub2;OH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;OH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C=NH)RVII ist;
• R&sub4; H oder CH&sub3; ist;
• R&sub5; H, OH oder OSO&sub3;H ist;
• R&sub6; H oder OH ist;
• RII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;OH, C=NH(RVII), (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;. (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;-NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, COCH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI ist;
• RIII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI ist oder
• RII und RIII zusammen -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;)&sub5;-, -(CH&sub2;)&sub2;O(CH&sub2;)&sub2;- oder -(CH&sub2;)&sub2;NH(CH&sub2;)&sub2;- sind;
• RIV C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;
• RV H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;
• RVI H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;
• RVII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;
• X Cl, Br oder I ist; oder
• ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, die zur Herstellung der Verbindungen I und II der Erfindung geeignet sind.
• Bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind diejenigen von Verbindung I, worin
• R&sub1; und R&sub6; OH sind,
• R&sub2; und R&sub5; H sind,
• R&sub3; CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2; ist,
• R&sub4; CH&sub3; ist,
• RI 9,11-Dimethyltridecyl,
• ist,
• RII H, CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2;, COCH&sub2;NH&sub2;, COCH&sub2;CH&sub2;NH&sub2; oder COCH(NH&sub2;)CH&sub2;NH&sub2; ist und
• RIII H ist.
• Die Verbindungen dieser Erfindung können zu pharmazeutischen Zusammensetzungen formuliert werden, die aus den Verbindungen der Formel I oder II in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger bestehen.
• Die Verbindungen dieser Erfindung eignen sich zur Behandlung von Pilzinfektionen, wie z. B. denjenigen, die durch Candida und Aspergillus hervorgerufen werden, und zur Behandlung und Prävention von Infektionen, die durch Pneumocystis carinii hervorgerufen werden. Diese Infektionen finden sich häufig bei immunbeeinträchtigten Patienten, wie z. B. denjenigen, die an AIDS leiden.
• In der Beschreibung und den angefügten Ansprüchen soll eine chemische Formel oder eine chemische Bezeichnung alle optischen und Stereoisomere sowie racemischen Mischungen umfassen, wenn solche Isomere und Mischungen existieren.
• Die Bezeichnung Alkyl bedeutet Kohlenwasserstoffgruppen mit gerader, verzweigter oder cyclischer Kette, z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Pentyl, Hexyl, Heptyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cyclohexylmethyl und dergleichen.
• Die Bezeichnung Cycloalkyl bedeutet eine Alkylspezies mit 3 bis 15 Kohlenstoffatomen ohne alternierende oder mesomeriefähige Doppelbindungen zwischen den Kohlenstoffatomen.
• Die Bezeichnung Alkenyl bedeutet Gruppe, wie z. B. Vinyl, 1-Propen-2- yl, 1-Buten-4-yl, 2-Buten-4-yl, 1-Penten-5-yl und dergleichen.
• Die Bezeichnung Alkoxy bedeutet gerad- der verzweigtkettige Oxyalkylgruppen, wie z. B. Methoxy, Ethoxy, Butoxy, Heptoxy, Dodecyloxy und dergleichen.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden im allgemeinen als Mischungen aus Stereoisomerenformen erhalten, in denen eine Form üblicherweise überwiegt. Die Bedingungen können durch Mittel, die den normalen Fähigkeiten des Fachmanns entsprechen, angepaßt werden, um überwiegend das erwünschte Isomer zu erhalten. Die Verbindungen mit der bevorzugten Stereoisomerenform, die hier als die "normale" Form bezeichnet wird, sind diejenigen, bei denen die Gruppe in der "C-5-orn"-Stellung unterhalb der Ebene an dieser Stellung liegt. Die Bezeichnung "epi" wurde für diejenigen Verbindungen verwendet, bei denen die Gruppe in der "C-5- orn"-Stellung oberhalb der Ebene liegt.
• Pharmazeutisch annehmbare Salze, die sich als Säureadditionssalze eignen, sind diejenigen von Säuren wie Salz-, Bromwasserstoff-, Phosphor-, Schwefel-, Malein-, Citronen-, Essig-, Wein-, Succin-, Oxal-, Äpfel-, Glutaminsäure und dergleichen und umfassen andere Säuren, die mit den in Journal of Pharmaceutical Science, 66: 2 (1977), aufgeführten verwandt sind.
• Wenn der Acyl-Substituent in der 2-Stellung am 4-Hydroxyornithin- Stickstoff eine aromatische Kette enthält, unterscheidet er sich von den Naturprodukten und bekannten Verbindungen. Die offenbarte aromatische Kette enthält ein bis drei Phenylgruppen, die durch Substituenten in der para-Stellung weiter verlängert wird.
• Repräsentative Kerne für die Derivate der vorliegenden Erfindung (Verbindungen I & II) und die Sequenz-Ident. für diese Verbindungen können der folgenden Tabelle entnommen werden. Da der Peptidkern der gleiche wäre, unabhängig von den Substituenten R&sub1;, R&sub2;, R&sub5;, R&sub6;, RI, RII oder RIII, und da die Sequenzidentifikationsnummer den Kernvariationen zugeordnet wird, haben die Amine und Salze die gleichen Sequenzidentifikationsnummern.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind in Wasser, Niedrigalkoholen und in polaren aprotischen Lösungsmitteln, wie z. B. N,N-Dimethylformamid (DMF), Dimethylsulfoxid (DMSO) und Pyridin, löslich. In Lösungsmitteln wie Diethylether und Acetonitril sind sie unlöslich.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind als Antibiotikum, insbesondere als ein antifungales Mittel oder als ein antiprotozoisches Mittel, geeignet. Als antifungale Mittel sind sie zur Bekämpfung von sowohl filamentösen Pilzen als auch Hefen geeignet. Sie werden besonders geeignet zur Behandlung mykotischer Infektionen bei Säugetieren eingesetzt, speziell für solche, die durch Candida-Arten, wie z. B. C. albicans, C. tropicalis und C. pseudotropicalis, Cryptococcus-Arten, wie z. B. C. neoformans, und Aspergillus-Arten, wie z. B. A. fumigatus, A. flavus und A. niger, hervorgerufen werden. Sie eignen sich auch zur Behandlung und/oder Prävention von Pneumocystis-carinii-Pneumonie, für die immunbeeinträchtigte Patienten besonders anfällig sind, wie es hierin nachfolgend beschrieben ist.
• Der Strukturaspekt, der die Verbindungen der vorliegenden Erfindung von früher offenbarten Cyclohexapeptiden unterscheidet, ist der Kohlenstoff, der an den Cyclohexapeptidring am 5-Kohlenstoff des 4-Hydroxyor- nithinrests gebunden ist.
• Die wichtigsten natürlich vorkommenden Echinocandine und Pneumocandine haben eine labile C-O-Bindung in der C-5-orn-Stellung. Andere Pneumocandine, wie sie in dem US-Patent Nr. 5 378 804, erteilt am 3. Januar 1995, offenbart sind, haben eine labile C-N-Bindung am C-5-orn. Die hier offenbarten Verbindungen haben eine C-C-Bindung am C-5-orn, was den Verbindungen Stabilität verleiht, während sie die wirkungsvolle antifungale und Anti-Pneumocystis-Aktivität noch beibehalten.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können aus Cyclohexapeptiden mit der Formel
• durch eine Reihe von Reaktionen, bei denen das Sauerstoffatom am "C-5-orn" (welches auch als die Halbaminalstellung bezeichnet werden kann) letztlich durch Kohlenstoff ersetzt wird, hergestellt werden. Die Ausgangsmaterialien können Naturprodukte oder modifizierte Naturprodukte sein, wie es nachfolgend beschrieben ist.
• Die Sequenzidentitätsnummern der Ausgangsmaterialien sind in der nachstehenden Tabelle aufgeführt:
• Eine Verbindung, bei der R&sub1; OH ist, R&sub2; H ist, R&sub3; CH&sub2;CONH&sub2; ist, R&sub4; CH&sub3; ist, R&sub5; H ist und R&sub6; OH ist und RI Dimethyltridecyl ist, ist in der Literatur als Pneumocandin B&sub0; bezeichnet worden; eine ähnliche Verbindung, bei der R&sub2; CH&sub3; ist, ist als Pneumocandin A&sub0; bezeichnet worden, und eine dritte Verbindung, bei der R&sub2; OH ist und R&sub6; H ist, ist als Pneumocandin C&sub0; bezeichnet worden (J. Antibiotics 45: 1855-60, Dez. 1992). Eine ähnliche Verbindung, bei der R&sub2; und R&sub6; OH sind und RI Dimethyltridecyl ist, ist als Pneumocandin D&sub0; bezeichnet worden (J. Antibiotics 47: 755-764, Juli 1994).
• Wenn in der Ausgangsverbindung R&sub3; H, CH&sub3; oder CH&sub2;CONH&sub2; ist, können sie direkt eingesetzt werden. Wenn R&sub3; CH&sub2;CN, CH&sub2;CH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;CH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C=NH)RVII ist, müssen die Amide zuerst in CH&sub2;CN oder CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2; umgewandelt und anschließend modifiziert werden.
• * Die Stellung ist das "C-5-orn" oder die Halbaminalstellung.
• In Schritt A läßt man das Ausgangsmaterial, Verbindung A, ein Alkylthiol oder Arylthiol und Säure in einem aprotischen Lösungsmittel unter wasserfreien Bedingungen eine für den Ablauf der Reaktion ausreichend lange Zeit reagieren, um Verbindung B (Seq.-Ident.-Nr. 13-18) zu bilden, wie es in der nachstehenden Tabelle angegeben ist. Es wurde gefunden, daß sich Aminoethanthiol für diesen Schritt besonders gut eignet.
• Für Schritt A sind geeignete Säuren u. a. stärke organische Säure und Mineralsäuren. Beispiele für starke organische Säuren sind Camphersulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Trifluoressigsäure und Methansulfonsäure. Mineralsäuren sind u. a. Salzsäure und Bromwasserstoffsäure. Camphersulfonsäure ist bevorzugt.
• Geeignete Lösungsmittel sind u. a. DMF, DMSO, 1-Methyl-2-pyrrolidinon und Hexamethylphosphortriamid (HMPA). DMF oder DMSO ist bevorzugt.
• Die Reaktion wird im allgemeinen bei Umgebungstemperatur bis 60ºC etwa 3 Stunden bis etwa 10 Tage lang durchgeführt.
• Bei der Reaktionsdurchführung werden die Cyclohexapeptidverbindung, die Thiolverbindung und die Säure zusammen in einem geeigneten Lösungsmittel gerührt, bis die Reaktion im wesentlichen beendet ist. Die Reaktionsmischung wird dann mit Wasser verdünnt und auf Umkehrphasenharzen unter Verwendung von 10 bis 40 Prozent Acetonitril/Wasser (das 0,1% Trifluoressigsäure enthält) als Elutionsmittel flashchromatographiert. Trifluoressigsäure kann hier nachfolgend als "TFA" bezeichnet sein. Die Fraktionen, die das erwünschte Produkt enthalten, können eingeengt und gefriergetrocknet und das gefriergetrocknete Material durch präparative Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) gereinigt werden.
• Geeignete HPLC-Säulen sind im Handel erhältliche Säulen, die unter Markennamen oder Handelsbezeichnungen wie etwa "ZORBAX" (DuPont), "DeltaPak" (Waters), "LICHROPREP" RP18 (E. Merck), verkauft werden. Die speziellen Säulen sind in den Arbeitsbeispielen angegeben.
• In Schritt B wird Verbindung C (Seq.-Ident.-Nr. 13-18), ein Sulfon, durch die Oxidation von Verbindung B erhalten. Geeignete Oxidationsmittel oder Oxidantien sind u. a. "OXONE" (KHSO&sub5;·KHSO&sub4;·K&sub2;SO&sub4; 2 : 1 : 1, Aldrich Chemicals), Metachlorperoxybenzoesäure und Peroxyessigsäure. Die Sequenz-Ident. von Verbindung C ist dieselbe wie die von Verbindung B, da das Atom, das an den halbaminalen Kohlenstoff gebunden ist, noch immer Schwefel ist. Somit sind die Sequenzidentifikationsnummern der Sulfone wie folgt:
• Die Oxidation des Thioethers (Verbindung B) zum Sulfon (Verbindung C) wird mit etwa zweimolaren Mengen des Oxidationsmittels durchgeführt. Wenn eine einmolare Menge Oxidationsmittel eingesetzt wird, ist das Produkt ein Sulfoxid, das dann in das Sulfon überführt werden kann. Die Sulfoxide können als ein Zwischenprodukt bei der Bildung des Nitrils verwendet werden, das Sulfon ist jedoch bevorzugt. Ein leichter Überschuß über die zweimolare Menge des Oxidationsmittels wird eingesetzt.
• Die Reaktion wird in einem wäßrigen Medium durchgeführt, vorzugsweise in einer Mischung aus Acetonitril und Wasser. Etwa gleiche Mengen sind bevorzugt, obwohl ein Bereich von 1 : 9 bis 9 : 1 eingesetzt werden kann.
• Bei der Durchführung der Reaktion wird das Oxidationsmittel zu einer Lösung von Verbindung B (Seq.-Ident.-Nr. 13-18) in 1 : 1 Acetonitril/Wasser zugegeben, und man läßt die Mischung bei Umgebungstemperatur eine zur Beendigung der Reaktion ausreichend lang Zeit stehen, im allgemeinen etwa 30 Minuten bis eine Stunde lang, um Verbindung C zu erhalten.
• Nach dem Reaktionsende wird die Verbindung aus der Reaktionsmischung durch Verdünnen mit Wasser und Chromatographie gewonnen. Für diesen Reinigungsschritt eignet sich die Umkehrphasen(C18)-Flashsäulenchromatographie. Das bevorzugte Elutionsmittel ist 30-45 Prozent Acetonitril/Wasser (0,1% TFA) in 5-Prozent-Stufen-Gradienten. Die passenden Fraktionen werden gefriergetrocknet, um das erwünschte Sulfon-Zwischenprodukt, Verbindung C (Seq.-Ident.-Nr. 13-18), zu gewinnen. Das Zwischenprodukt neigt zur Instabilität, deshalb sollte die Isolierung so schnell wie möglich erfolgen. Alternativ kann die Reaktionsmischung gefriergetrocknet und das rohe Sulfon unbehandelt im nachfolgenden Schritt eingesetzt werden.
• Die Verbindung C kann in eine Verbindung umgewandelt werden, bei der ein Kohlenstoff direkt an das "0-5-orn" gebunden ist. Wie in dem Flußdiagramm zu sehen ist, erzeugt die Umsetzung von Verbindung C mit einem Alkalimetallcyanid ein Nitril in dieser Stellung (Verbindung D). Das Nitril kann anschließend mit Natriumborhydrid und Cobalt(II)chlorid umgesetzt werden, um den Aminoalkyl-Substituenten zu ergeben, der wie nachstehend beschrieben in ein substituiertes Amin umgewandelt werden kann. Verbindung D ist ein wichtiges Zwischenprodukt für die meisten Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Die Sequenzidentifikationsnummern für Verbindung D, das Nitril, sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:
• Das Nitril kann erhalten werden durch Zugabe von Alkalimetallcyanid zu einer Lösung des Sulfons in einem aprotischen Lösungsmittel, wobei bei Umgebungstemperatur eine ausreichend lange Zeit gerührt wird, um die Reaktion unter Bildung des Cyanids, wie durch HPLC-Analyse ermittelt, zu beenden. Die Reaktionsmischung kann dann mit Wasser verdünnt und anschließend chromatographiert werden, um das erwünschte Nitril (Verbindung von der Reaktionsmischung abzutrennen. Die Umkehrphasen(C18)-Flashsäulenchromatographie unter Verwendung von 20-60% Acetonitril/Wasser (0,1% TFA) in 10%-Stufen-Gradienten eignet sich für dieses Verfahren.
• Das Nitril (Verbindung D) kann dann zu einer Verbindung mit einer freien Aminogruppe (Verbindung E) reduziert werden.
• Die Reduktion kann entweder durch chemische oder katalytische Reduktion durchgeführt werden. Wenn die chemische Reduktion verwendet wird, haben sich Hydrid oder Hydridkombinationen als geeignet erwiesen.
• Natriumborhydrid mit Cobalt(II)chlorid in alkoholischem Lösungsmittel hat sich als besonders geeignet erwiesen. Wenn diese Reagenzienkombination verwendet wird, werden etwa 5 bis 50 Moläquivalent Natriumborhydrid und 2 bis 20 Moläquivalent Cobalt(II)chlorid für jede Molmenge des Nitrils verwendet.
• Andere Reduktionsmittel, wie z. B. Raney-Nickel, Natriumcyanoborhydrid, Aluminiumhydrid, Diboran, Diisobutylaluminiumhydrid und dergleichen können ebenfalls verwendet werden, Oft werden diese Reduktionsmittel in Kombination mit einer Lewissäure, wie z. B. Cobalt(II)chlorid oder Aluminiumchlorid, verwendet, wie in der vorliegenden Kombination aus Natriumborhydrid und Cobaltchlorid.
• Die katalytische Hydrierung kann auch mit einer Vielzahl von Katalysatoren, einschließlich Palladium auf Kohle, Platinoxid oder Rhodium auf Aluminiumoxid, durchgeführt werden. Die katalytische Niederdruck- Reduktion über Pd/C als Katalysator ist besonders bevorzugt.
• Typische Lösungsmittel, abhängig vom Reagenz, sind u. a. Alkohole, insbesondere Methanol und Ethanol, Dimethylformamid, Pyridin, Tetrahydrofuran oder andere Ether.
• Verbindungen, die ein selektiv derivatisiertes Amin in der C&sub5;-orn- Stellung in Gegenwart eines Amins an R&sub3; enthalten (d. h. R&sub3; = CH&sub2;dH&sub2;NH&sub2;), können hergestellt werden, indem zunächst das C5-orn-Amin eingeführt wird, wenn R&sub3; = CH&sub2;CONH&sub2;. Das C5-orn-Amin kann dann substituiert werden, um Verbindungen zu ergeben, worin RII und RIII nicht H sind. Schließlich kann das primäre Amid an R&sub3; durch Nacharbeiten etablierter Verfahren in ein Amin umgewandelt werden. Alternativ kann das Amin von R&sub3; vor der Reduktion des C5-orn-Nitrils zu einem Amid als ein CBZ-Derivat geschützt werden.
• Das so erhaltene Amin kann durch herkömmliche Mittel unter Verwendung von CBZ-geschützter Aminosäure in ein acyliertes Amin umgewandelt werden, um nach dem Entfernender Schutzgruppen Verbindung I zu ergeben, worin RIICOCH(NH&sub2;)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NH&sub2; ist und RIII H ist.
• Verbindung I, worin RII und/oder RIII Alkyl sind, kann durch ein beliebiges geeignetes bekanntes Verfahren zur Herstellung sekundärer oder tertiärer Amine hergestellt werden. Wenn die erwünschte Alkylgruppe am Stickstoff Methyl ist, kann das Kohlenstoff durch Formylierung, gefolgt von der Reduktion der Hydroxymethylgruppe mit Natriumcyanoborhydrid oder einem anderen Reduktionsmittel, eingeführt werden. Alternativ kann die Alkylierung durchgeführt werden, indem man ein passend substituiertes Alkylhalogenid mit dem Amin in einem aprotischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Base reagieren läßt.
• Um Verbindungen herzustellen, bei denen das R&sub3;-Amin (z. B. R&sub3; = CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2;) selektiv in Gegenwart eines Amins am C5-orn derivatisiert ist, kann das R&sub3;-Amin vor der Reduktion des Nitrils am C5-orn substituiert werden.
• Die Erfindung umfaßt auch quartäre Ammoniumsalze der Formel (II). Diese können durch Behandeln eines Amins mit einem Alkylhalogenid und Base in einem protischen oder aprotischen Lösungsmittel hergestellt werden. Ein typisches Verfahren wäre, einen Überschuß Methyliodid zu einer Lösung des Amins und Natriumhydrogencarbonat in DMF bei Raumtemperatur zuzugeben. Das Produkt kann durch Verdünnen mit H&sub2;O, gefolgt von C&sub1;&sub8;-HPLC, isoliert werden.
• Die Erfindung umfaßt auch Säureadditionssalze. Die Verbindung wird im normalen Verlauf der Isolierung als ein Säureadditionssalz erhalten. Im allgemeinen liegt sie als ein Trifluoressigsäuresalz oder Essigsäuresalz vor. Das so erhaltene Salz kann in Wasser aufgelöst und durch eine Anionenaustauschsäule geleitet werden, die das erwünschte Anion trägt. Das Eluat, welches das erwünschte Salz enthält, kann eingeengt werden, um das Salz als ein festes Produkt zu gewinnen.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind in ihren protonierten oder dauerhaft geladenen quartären Formen wasserlöslich. Dies stellt einen Vorteil gegenüber den neutralen, ungeladenen Echinocandinen dar, die nicht wasserlöslich sind.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind gegen viele Pilze und insbesondere gegen Candida-Arte wirksam. Die antifungalen Eigenschaften können durch die Bestimmung der minimalen Fungizidkonzentration (MFC) gegen bestimmte Candida-Organismen in einer Mikronährlösungs- Verdünnungsuntersuchung, die in einem Hefe-Stickstoff-Basis(Difco)-Medium mit 1% Dextrose (YNBD) durchgeführt wird, veranschaulicht werden.
• Bei einer repräsentativen Untersuchung wurden die Verbindungen in 100%igem Dimethylsulfoxid (DMSO) mit einer Anfangskonzentration von 5 mg/ml gelöst. Nach dem Auflösen wurde die Arzneistoff-Ausgangslösung durch Verdünnen in Wasser auf eine Konzentration von 512 ug/ml gebracht, so daß die DMSO-Endkonzentration etwa 10 Prozent betrug. Die Lösung wurde dann mittels eines Mehrkanal-Pipettierers auf die erste Reihe einer Platte mit 96 Vertiefungen (jede Vertiefung enthält 0,075 ml YNBD) verteilt, was eine Arzneistoffkonzentration von 256 ug/ml ergibt. Die Verbindungen in der ersten Reihe wurden quer über die Reihen 2fach verdünnt, was Arzneistoff- Endkonzentrationen im Bereich von 256 ug/ml bis 0,12 ug/ml ergab.
• Vier-Stunden-Nährlösungskulturen von zu testenden Organismen wurden unter Verwendung eines Spektralphotometers bei 600 nm justiert, um einem 0,5-McFarland-Standard zu entsprechen. Diese Suspension wurde 1 : 100 in YNBD verdünnt, um eine Zellkonzentration von 1-5 · 10&sup4; kolonienbildende Einheiten (CFU)/ml zu ergeben. Aliquote der Suspension (0,075 ml) wurden in jede Vertiefung der Mikrotiterplatte eingeimpft, wodurch sich eine End- Zellbeimpfung von 5-25 · 10³ CFU/ml und Arzneistoff-Endkonzentrationen im Bereich von 128 ug/ml bis 0,06 ug/ml ergaben. Jede Untersuchung beinhaltet eine Reihe für arzneistofffreie Kontrollvertiefungen und eine Reihe für zellfreie Kontrollvertiefungen.
• Nach 24 Stunden Inkubation wurden die Mikrotiterplatten auf einer Schüttelvorrichtung leicht geschüttelt, um die Zellen erneut zu suspendieren. Der MIC-2000-Inokulator wurde verwendet, um eine 1,5-Mikroliter-Probe von jeder Vertiefung der Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen an eine Ein- Behälter-Inokulumplatte, die Sabouraud-Dextroseagar (SDA) enthielt, zu überführen. Die beimpften SDA-Platten wurden 24 Stunden lang bei 35ºC inkubiert und anschließend abgelesen, um die minimale Fungizidkonzentration (MFC) zu ermitteln. Die MFC ist definiert als die niedrigste Arzneistoffkonzentration bei der kein Wachstum oder weniger als 4 Kolonien pro Tüpfelstelle auftreten. Verbindung I-A, worin R&sub1; = OH, R&sub2; = H, R&sub3; = CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2;, R&sub4; = CH&sub3;, R&sub5; = H, R&sub6; = OH, RI = Dimethyltridecyl, RII = H und RIII = H als das Bishydrochloridsalz hatte die folgenden MFCs (pg/ml):
• Candida albicans (MY 1055) < 0,06
• Candida tropicalis (MY 1012) < 0,06
• Candida glabrata (MY 1381) 0,25
• Die In-vivo-Wirksamkeit der Verbindungen gegen Pilze kann durch die folgende Untersuchung gezeigt werden.
• Das über Nacht Gewachsene einer SDA-Kultur von Candida albicans MY 1055 wurde in steriler Kochsalzlösung suspendiert und die Zellkonzentration durch Hämocytometer-Zählung ermittelt und die Zellsuspension auf 3,75 · 10&sup5; Zellen/ml justiert. Dann wurden 0,2 Milliliter dieser Suspension intravenös in die Schwanzvene von Mäusen verabreicht, so daß die Endbeimpfung 7,5 · 10&sup4;, Zellen/Maus betrug.
• Die Untersuchung wurde dann durch intraperitoneale (i. p.) Verabreichung wäßriger Lösungen von Verbindung I-A in verschiedenen Konzentrationen, zweimal am Tag (BID), vier Tage in Folge, an 18 bis 20 Gramm schwere weibliche DBA/2-Mäuse, die zuvor in obenbeschriebener Weise mit Candida albicans (MY 1055) infiziert worden waren, durchgeführt. Als Kontrollversuche wurde destilliertes Wasser i.p. an mit C. albicans infizierte Mäuse verabreicht. Nach sieben Tagen wurden die Mäuse durch Kohlendioxidgas getötet, die paarigen Nieren aseptisch entfernt und in sterile Polyethylenbeutel, die 5 Milliliter sterile Kochsalzlösung enthielten, gelegt. Die Nieren wurden in den Beuteln homogenisiert, in steriler Kochsalzlösung in Reihe verdünnt und Aliquote auf der Oberfläche von SDA-Platten verteilt. Die Platten wurden bei 35ºC 48 Stunden lang inkubiert, und Hefekolonien wurden zur Bestimmung von kolonienbildenden Einheiten (CFU) pro Gramm Nieren ausgezählt. Die Verbindung I-A ergab eine mehr als 90%ige Reduzierung von wiedergewinnbaren Candida-CFU bei 0,02 mg/kg i.p., zweimal am Tag, vier Tage in Folge.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auch gegen Aspergillus-Arten wirksam. Die In-vivo-Wirksamkeit der Verbindungen gegen Aspergillus ist aus der nachfolgenden Untersuchung ersichtlich.
• Konidien von Aspergillus fumigatus MF 5668 wurden von der Oberfläche von mehreren (3-4) 3-5-Tage-SDA-Schrägröhrchenkulturen mit steriler Kochsalzlösung plus 0,01% Tween 20 abgewaschen. Die Konidiensuspension wurde durch Hämocytometer-Zählung quantitativ erfaßt und an die passende Konzentration in steriler Kochsalzlösung angeglichen.
• Weibliche DBA/2-Mäuse wurden i.v. mit 1,40 · 10&sup6; Konidien/Maus infiziert. Innerhalb fünfzehn Minuten nach der Infizierung wurden wäßrige Lösungen von Verbindung I-A intraperitoneal (i.p.) in verschiedenen Konzentrationen zweimal am Tag (BID) insgesamt fünf Tage lang verabreicht. Die Dosis von Verbindung I-A, die zur Erhöhung der 28-Tage-Überlebensrate um wenigstens 50%, verglichen mit unbehandelten Kontrollen, erforderlich ist, betrug 0,02 mg/kg.
• Eine schädliche und potentiell tödliche Nebenreaktion einer Reihe von Arzneistoffen, einschließlich bestimmter antibiotisch wirksamer Echinocandin-Verbindung, ist die Zell-Lyse roter Blutkörperchen. Dies ist bei Verbindungen mit dem vorliegenden Kern nicht zu erkennen, was ein weiterer Vorteil der Verbindungen dieser Erfindung ist.
• Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch zur Inhibierung oder Linderung von Pneumocystis-carinii-Infektionen bei immunbeeinträchtigen Patienten geeignet sein. Die Wirksamkeit der Verbindungen der vorliegenden Erfindung für therapeutische oder antiinfektiöse Zwecke kann durch Untersuchungen an immunsupprimierten Ratten veranschaulicht werden.
• Sprague-Dawley-Ratten (mit einem Gewicht von ungefähr 250 Gramm) wurden mit Dexamethason im Trinkwasser (2,0 mg/l) immunsupprimiert und sieben Wochen lang mit einer proteinarmen Nahrung gehalten, um die Entwicklung von Pneumocystis-Pneumonie aus einer latenten Infektion zu stimulieren. Vor der Arzneistoffbehandlung wurden zwei Ratten getötet, um das Vorliegen von Pneumocystis-carinii-Pneumonie (PCP) zu bestätigen. Fünf Ratten (mit einem Gewicht von ungefähr 150 Gramm) wurden zweimal am Tag vier Tage lang subkutan (s.c.) Verbindung I-A in 0,25 ml Vehikel (destilliertes Wasser) injiziert. Ein Kontrollversuch mit Vehikel wurde ebenso durchgeführt. Alle Tiere erhielten während der Behandlungszeit weiterhin Dexamethason im Trinkwasser und proteinarme Nahrung. Nach dem Behandlungsende wurden alle Tiere getötet, die Lungen entfernt und bearbeitet und das Ausmaß der Erkrankung durch mikroskopische Analyse von gefärbten Schnittpräparaten bestimmt. Die Verhinderung oder Verringerung von Zysten war in den Schnittpräparaten der Lungen von behandelten Ratten zu erkennen, wenn sie mit der Anzahl der Zysten in den Lungen von unbehandelten Kontrollen oder Lösungsmittel-Kontrollen verglichen wurden. Die Ergebnisse dieser Untersuchung zeigten, daß Verbindung L-A P.-carinii- Zysten in 5 Ratten um wenigstens 90 Prozent verringerten, wenn sie mit 0,02 mg/kg dosiert wurde, wobei alle Ratten überlebten.
• Die hervorragenden Eigenschaften kommen am wirkungsvollsten zum Einsatz, wenn die Verbindungen in neue pharmazeutische Zusammensetzungen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger gemäß herkömmlichen pharmazeutischen Compoundierverfahren formuliert werden.
• Die neuen Zusammensetzungen enthalten wenigstens eine therapeutische antifungale oder antipneumocystische Menge der Wirkverbindung. Im allgemeinen enthält die Zusammensetzung wenigstens 1 Gew.-% von Verbindung I oder II. Konzentratzusammensetzungen, die für Verdünnungen vor der Verwendung geeignet sind, können 90 Gew.-% oder mehr enthalten. Die Zusammensetzungen sind u. a. Zusammensetzungen, die zur oralen, topischen, parenteralen (einschließlich intraperitonealen, subkutanen, intramuskulären und intravenösen), nasalen und Zäpfchenverabreichung oder zur Insufflation geeignet sind. Die Zusammensetzungen können durch inniges Vermischen von Verbindung I oder II mit den für das erwünschte Medium geeigneten Komponenten vorverpackt werden.
• Zusammensetzungen, die zur oralen Verabreichung formuliert sind, können flüssige oder feste Zusammensetzungen sein. Bei flüssigen Präparaten kann das therapeutische Mittel mit flüssigen Trägern, wie z. B. Wasser, Glycolen, Ölen, Alkoholen und dergleichen, und bei festen Präparaten, wie z. B. Kapseln und Tabletten, mit festen Trägern, wie z. B. Stärken, Zuckern, Ethylcellulose, Calcium- und Natriumcarbonat, Calciumphosphat, Kaolin, Talk, Lactose, im allgemeinen mit Gleitmitteln, wie z. B. Calciumstearat, zusammen mit Bindemitteln, Sprengmitteln und dergleichen formuliert werden. Wegen ihrer einfachen Verabreichung stellen Tabletten und Kapseln die vorteilhafteste orale Dosisform dar. Es ist insbesondere von Vorteil, zur einfachen Verabreichung und gleichmäßigen Dosierung die Zusammensetzungen in Einheitsdosisform zu formulieren. Zusammensetzungen in Einheitsdosisform bilden einen Aspekt der vorliegenden Erfindung.
• Die Zusammensetzungen können zur Injektion formuliert werden und können Formen wie Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen in öligen oder wäßrigen Vehikeln einnehmen, wie z. B. 0,85 Prozent Natriumchlorid oder 5 Prozent Dextrose in Wasser, und können Formuliermittel, wie z. B. Suspensions-, Stabilisierungs- und/oder Dispersionsmittel, enthalten. Pufferungsmittel sowie Additive, wie z. B. Kochsalzlösung oder Glukose, können hinzugegeben werden, um die Lösungen isotonisch zu machen. Die Verbindung kann auch in Alkohol-Propylenglycol oder Polyethylenglycol zur intravenösen Tropfverabreichung gelöst werden. Diese Zusammensetzungen können auch in Einzeldosisform in Ampullen oder in Multidosisbehältern dargereicht werden, vorzugsweise mit beigefügtem Konservierungsmittel. Alternativ können die Wirkstoffe in Pulverform zur Herstellung mit einem geeigneten Vehikel vor der Verabreichung vorliegen.
• Die Bezeichnung "Einheitsdosisform", so wie sie in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendet wird, bezieht sich auf physikalisch getrennte Einheiten, wobei jede Einheit eine vorbestimmte Menge Wirkstoff enthält, die so berechnet ist, daß sie in Verbindung mit dem pharmazeutischen Träger die erwünschte therapeutische Wirkung erzielt. Beispiele für solche Einheitsdosisformen sind Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulverpäckchen, Oblaten, abgemessene Einheiten in Ampullen oder in Multidosisbehältern und dergleichen. Eine Einheitsdosisform der vorliegenden Erfindung wird im allgemeinen 100 bis 200 Milligramm von einer der Verbindungen enthalten.
• Wenn die Verbindung für antifungale Zwecke bestimmt ist, kann eine beliebige Verabreichungsmethode angewendet werden. Zur Behandlung mykotischer Infektionen ist die orale oder intravenöse Verabreichung üblicherweise bevorzugt.
• Wenn die Verbindung zur Bekämpfung von Pneumocystis-Infektionen eingesetzt wird, ist es wünschenswert, die Lunge und Bronchien direkt zu behandeln. Aus diesem Grund sind Inhalationsmethoden bevorzugt. Zur Verabreichung durch Inhalation werden die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zweckmäßigerweise in der Form einer Aerosolspray-Gabe aus Druckpackungen oder Zerstäubern zugeführt. Das bevorzugte Zufuhrsystem zur Inhalation ist ein Aerosol zur Inhalation einer abgemessenen Dosis (MDI), das als eine Suspension oder Lösung von Verbindung I oder II in geeigneten Treibmitteln, wie z. B. Fluorkohlenstoffen oder Kohlenwasserstoffen, formuliert werden kann. Bevorzugte Treibmittel sind diejenigen, die die Ozonschicht nicht beschädigen.
• Obwohl die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Tabletten, Kapseln, topische Zusammensetzungen, Insufflationspulver, Zäpfchen und dergleichen eingesetzt werden können, macht die Löslichkeit der Verbindungen der vorliegenden Erfindung in Wasser und wäßrigen Medien diese zur Verwendung in injizierbaren Formulierungen und auch in flüssigen Zusammensetzungen, die für Aerosolsprays geeignet sind, verwendbar.
• Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung, sie sollen jedoch nicht als einschränkend aufgefaßt werden. Alle Temperaturen sind, sofern nichts anderes angegeben ist, in Grad Celsius (ºC) BEISPIEL 1
Teil A: Herstellung von Thioether-Zwischenprodukt
• Trifluoressigsäure (0,4 ml, 5,3 mmol) wurde zu einer Lösung von
• (22,9 g, 21,1 mmol) und 2-Aminoethanthiol-Hydrochlorid (47,9 g, 422 mmol) in 100 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid bei 60ºC zugegeben. Nach einem Zeitraum von 4 Stunden wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 400 ml H&sub2;O verdünnt. Der Filtration der resultierenden Lösung schloß sich die Pump-Injektion des Filtrats auf einer Waters-Delta- Pak-C18-100Å-Rundkartusche (47 mm · 30 mm) mit einer Rate von 50 ml/Minute an. Die Elution mit 25-30% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) in einem 5%-Stufen- Gradienten ergab nach der Gefriertrocknung der passenden Fraktionen 6,5 g des nor-Thioethers und 6,8 g des epi-Thioethers als Bistrifluoracetatsalze. Gemäß analytischer HPLC (Zorbax RX-C18, 40% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH), UV bei 210 nm) waren die Thioether ausreichen rein (> 80%) für die Umwandlung zum Sulfon, wie sie nachstehend beschrieben ist. Die erneute Chromatographie der einzelnen Isomere, gefolgt vom Ionenaustausch auf einer Bio- Rad-AG2-X8(Cl&supmin;)-Säule mit H&sub2;O als Elutionsmittel ergab nach der Gefriertrocknung reine Bishydrochloride als amorphe Feststoffe. Nor-Thioether:
• ¹H-NMR (400 MHz, CD&sub3;OD) d 1,17 (d, J = 6,2 Hz; 3H), 2,9 (m, 2H), 3,06 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,20 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 4,91 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 4,99 (d, J = 3,4 Hz), 5,27 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,6 Hz, 2H); FAB-MS (Li) m/z 1117 (MH + Li)&spplus;. Epi-Thioether: ¹H-NMR (400 MHz, CD&sub3;OD) d 2,23 (m, 3H), 2,41 (dd, J = 7,4 und 13,1 Hz, 1H), 2,92 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 3,06-3,29 (m, 4H), 4,01 (m, 1H), 4,10 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 7,2 und 10,9 Hz, 1H), 4,69 (br. s, 1H), 4,95 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,6 Hz, 2H); FAB-MS (Li) m/z 1117 (MH + Li)&spplus;.
Teil B: Sulfonherstellung
• Zu einer gerührten Lösung des epi-Thioethers von Teil A (6,5 g, -70% rein) in 55 ml 1 : 1 Acetonitril/Wasser bei 25ºC wurde OXONE® (3,1 g) zugegeben. Nach einem Zeitraum von 15 Minuten zeigte die Analyse durch C18-HPLC, daß die Umwandlung in ein polareres Produkt beendet war. Die Reaktionsmischung wurde gefriergetrocknet, um das rohe Sulfon zu ergeben, das ohne Reinigung im nachfolgenden Schritt verwendet wurde.
Teil C: Nitrilherstellung
• Eine Lösung des epi-Sulfonbistrifluoracetats von Teil B (2,3 g, 73% rein, 1,23 mmol, reinheitsberichtigt) in 123 ml 0,5M Lithiumcyanid in N,N- Dimethylformamid wurde 15 Minuten lang bei 25C gerührt. Die HPLC-Analyse [RP-C18, 45% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH)] der Reaktionsmischung zeigte die vollständige Umwandlung in zwei weniger polare Produkte. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser (400 ml) verdünnt, und die resultierende heterogene Mischung wurde auf eine Umkehrphasen-Flashsäule (C18, 30 g), die in 20% CH&sub3;CN/H&sub2;O gepackt war, geladen. Die Elution mit H&sub2;O (200 ml) wurde gefolgt von 20-70% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) in 10%-Stufen-Gradienten, wobei bei jedem Schritt 100 ml gesammelt wurden. Der unlösliche Kuchen blieb oben auf der Säule und wurde entfernt und in 70% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) gelöst. Diese Lösung wurde mit den produkthaltigen Fraktionen vereint und gefriergetrocknet, um 1,5 g rohe Nitrile zu ergeben. Die Umkehrphasen-HPLC dieses Materials [C18, 30-45% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) in 5%-Stufen-Gradienten] ergab nach der Gefriertrocknung die passenden Fraktionen, 220 mg (21%) des nor-Nitrils und 270 mg (36%) des epi-Nitrils als Trifluoracetatsalze. Nor-Nitril: ¹H-NMR (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,16 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,60 (m, 2H), 1,81 (m, 1H), 2,44 (dd, J = 7,0 und 13,0 Hz, 1H); 3,06 (m, 2H), 3,83 (m, 3H), 3,95 (dd, J = 3,2 und 11,2 Hz, 1H), 4,03 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,54 (dd, J = 7,1 und 11,7 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 3,4 und 6,2 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 2H); ESI-MS (M + H)&spplus; = 1060,7. Epi-Nitril: ¹H-NMR (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,23 (d, J = 6,0 Hz), 2,05 (m, 1H), 2,42 (dd, J = 6,6 und 13,5 Hz, 1H), 3,10 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,76 (m, 3H), 3,94 (dd, J = 3,2 und 11,2 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,11 (m, 1H), 4,62 (dd, J = 3,9 und 11,4 Hz, 1H), 4,81 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,88 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,11,(d, J = 8,5 Hz, 2H); ESI-MS (M + H)&spplus; = 1060,7. BEISPIEL 2
• Natriumborhydrid (91,2 mg, 2,41 mmol) wurde portionsweise zu einer Lösung von CoCl&sub2;·6H&sub2;O (115 mg, 0,482 mmol) und dem nor-Nitril (Beispiel 1, 283 mg, 0,241 mmol) in MeOH (9 ml) zugegeben. Die einsetzende exotherme Reaktion erzeugte einen Niederschlag, während ausgiebige Mengen Wasserstoff entwickelt wurden. Die HPLC-Analyse (Zorbax RX-C18, 4,6 mm · 25 cm; 45% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) bei 1,5 ml/Minute; UV-Detektion bei 210 und 277 nm) nach 10 Minuten zeigte eine 70 %ige Umwandlung in ein polareres Produkt (tR = 3,0 Minuten). 2 N CF&sub3;COOH (7,8 ml) wurde zu der Reaktionsmischung zugegeben und das Rühren 30 Minuten lang fortgesetzt, was zur Auflösung des Niederschlags führte. Die Mischung wurde mit H&sub2;O (40 ml) verdünnt und anschließend durch ein gepacktes Bett Diatomeenerde filtriert. Das Filtrat wurde auf eine Zorbax-RX-C18-HPLC-Säule (21,2 mm · 25 cm) in 30% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) pumpinjiziert. Die Elution mit 30-45% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) in 5%-Stufen-Gradienten bei einer Fließrate von 10 ml/Minute, gefolgt von der Gefriertrocknung der passenden Fraktionen, ergab 93 mg des Bisamins als das Trifluoracetat. Das Bistrifluoracetat wurde in H&sub2;O (10 ml) gelöst und die Lösung auf eine Bio-Rad-AG2-X8(Cl&supmin;)- Polyprep-Säule (2 ml Harzbett) geladen. Die Schwerkraftelution mit Wasser (3 · 10 ml), gefolgt von der Gefriertrocknung des Eluats, ergab 80 mg der obigen Verbindung. Ausbeute (korrigiert) = 34%. ¹H-NMR (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,18 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,80 (m, 1H), 1,92-2,12 (m, 4H), 2,18-2,36. (m, 4H), 2,43 (dd, J = 6,5 und 12,9 Hz, 1H), 3,07 (m, 2H), 3,16 (dd, J = 5,4 und 13,2 Hz, 1H), 3,23 (dd, J = 3,9 und 13,2 Hz, 1H), 3,80 (m, 3H), 3,99 (dd, J = 3,1 und 11,1 Hz, 1H), 4,02-4,10 (m, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,19 (dd, J = 1,5 und 8,1 Hz, 1H), 4,51-4,65 (m, 4H), 4,97 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,6 Hz, 2H); ESI-MS m/z 1064,6 (M + H)&spplus;, 532,9 (M + H)&spplus;&spplus;. BEISPIEL 3
Teil A: Herstellung von Thioether-Zwischenprodukt
• (1S)-(+)-10-Camphersulfonsäure (2,39 g, 10,3 mmol) wurde zu einer Lösung von
• (11,0 g, 10,3 mmol) und 2-Aminoethanthiol-Hydrochlorid (53 g, 467 mmol) in 200 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid bei 250 zugegeben. Nach einem Zeitraum von 72 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit H&sub2;O (400 ml) verdünnt und auf eine in 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O gepackte Umkehrphasen-Flashsäule (C18, 110 g) geladen. Die Elution mit 10-60% CH&sub3;CN/H&sub2;O in 10%-Stufen- Gradienten, gefolgt von der Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen (40-50% CH&sub3;CN/H&sub2;O), ergab 8,7 g unreine Thioether. Die präparative HPLC dieser Mischung (Waters-Delta-Pak-C18-100Å-Rundkartusche, 47 mm · 30 cm) mit 20-40% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) als Elutionsmittel bei 50 ml/Minute in 10%-Stufen-Gradienten ergab nach dem Gefriertrocknen der passenden Fraktionen 2,0 g des nor-Thioethers (Ausbeute = 16%, HPLC-Reinheit > 95%) und 5,2 g des epi-Thioethers (Ausbeute = 40%, HPLC-Reinheit ca. 85%) als die Trifluoracetatsalze. Nor-Thioether: ¹H-NMR (400 MHz, CD&sub3;OD) d 1,14 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 2,83 (m, 2H), 5,44 (d, J = 1,8 Hz, 1H); FAB-MS (Li) m/z 1131 (M + H + Li)&spplus;. Epi-Thioether: ¹H-NMR (400 MHz, CD&sub3;OD) d 1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 2,89 (m, 2H), 4,72 (d, J = 4,9 Hz, 1H); FAB-MS (Li) m/z 1131 (M + H + Li)&spplus;.
Teil B: Sulfonherstellung
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 1, Teil B, beschriebene wurde das epi-Sulfon aus dem epi-Thioether hergestellt.
Teil C: Nitrilherstellung
• Eine Lösung des epi-Sulfons (1,0 g) in 79 ml 0,5M Lithiumcyanid in N,N-Dimethylformamid wurde 10 Minuten lang bei 25ºC gerührt. Die HPLC- Analyse [RP-C18, 50% CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH)] der Reaktionsmischung zeigte die vollständige Umwandlung in zwei weniger polare Produkte. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser (240 ml) verdünnt, und die resultierende Lösung wurde auf eine Umkehrphasen-Flashsäule (C18, 20 g), die in 10% CH&sub3;CN/H&sub2;O gepackt war, geladen. Die Elution mit 20-70% CH&sub3;CN/H&sub2;O in 10%- Stufen-Gradienten, bei der bei jedem Schritt 100 ml gesammelt wurden, gefolgt von der Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen, ergab 610 ml rohe Nitrile. Die Umkehrphasen-HPLC dieser Mischung (C18, 45-55% CH&sub3;CN/H&sub2;O in 5%-Stufen-Gradienten) ergab nach der Gefriertrocknung die passenden Fraktionen, 87 mg (Ausbeute = 10%, HPLC-Reinheit bei 210 nm = 97%) des nor-Nitrils und 190 mg (Ausbeute = 22%, HPLC-Reinheit bei 210 nm = 99%)) des epi-Nitrils als weiße amorphe Feststoffe. Nor-Nitril: ¹H-NMR (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,14 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,59 (m, 2H), 1,93-2,08 (m, 3H), 2,15-2,27 (m, 5H), 2,43 (m, 1H), 2,47 (dd, J = 9,5 und 15,4 Hz, 1H), 2,74 (dd, J = 3,8 und 15,4 Hz, 1H), 3,78 (m, 2H), 3,97 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 4,39 (dd, J = 4,4 und 12,8 Hz, 1H), 4,55 (m, 3H), 4,98 (m, 2H), 5,07 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 2H); ESI-MS (M + H)&spplus; = 1074,5. Epi-Nitril: ¹H-NMR (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,59 (m, 2H), 1,76 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,07 (m, 2H), 2,22 (m, 3H), 2, 39 (dd, J = 7,4 und 13,2 Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 8,0 und 15,1 Hz, 1H), 2,57 (dd, J = 5,4 und 15,1 Hz, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,07 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,31 (dd, J = 1,9 und 7,9 Hz, 1H), 4,36 (m, 4H), 4,55 (m, 3H), 4,63 (dd, J = 7,4 und 10,6 Hz), 5,04 (d, J = 3,4 Hz), 6,76 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 2H); ESI-MS (M + H)&spplus; = 1074,4. BEISPIEL 4
• Auf ähnliche Weise wie die in Beispiel 2 beschriebene wurde das nor- Nitril von Beispiel 3 zum oben gezeigten Amin reduziert. Ausbeute = 44% (CF&sub3;COOH-Salz). ¹H-NMR des Hydrochloridsalzes (500 MHz, CD&sub3;OD) d 1,16 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,9-2,1 (m, 3H), 2,23 (m, 4H), 2,42 (dd, J = 6,6 und 12,6 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 9,4 und 15,4 Hz, 1H), 2,75 (dd, J = 3,7 und 15,4 Hz, 1H), 3,15 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,80 (m, 2H), 3,96 (m, 2H), 4,06 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,23 (dd, J = 1,4 und 7,8 Hz, 1H), 4,57 (m, 4H), 5,00 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,6 Hz, 2H); ESI-MS m/z 1078,7 (M + H)&spplus;, 531,1 (M - H&sub2;O + H)&spplus;&spplus;. BEISPIEL 5
• Zu einer gerührten Lösung des Amintrifluoracetats von Beispiel 4 (153 mg, 0,128 mmol) und 1 N Natriumhydroxid (130 ul, 0,130 mmol) in Wasser (5 ml) und N,N-Dimethylformamid (5 ml) wird Ethylacetimidat-Hydrochlorid (160 mg, 1,29 mmol) zugegeben. Nach einem Zeitraum von 18 Stunden bei pH 8,5 wird Trifluoressigsäure bis zu pH 7 zugegeben. Der Umkehrphasen-(C18)- Flash-Säulenchromatographie der neutralisierten Reaktionsmischung mit Acetohitril/Wasser als Elutionsmittel schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen, an. Der präparativen Umkehrphasen-(C18)- HPLC dieses Materials schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen an, um das Acetamidin als das Trifluoracetatsalz zu ergeben: C&sub5;&sub5;H&sub8;&sub7;F&sub3;N&sub1;&sub0;O&sub1;&sub8;, Formelgewicht = 1233,36. BEISPIEL 6
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 5 beschriebene wird das Bisamin von Beispiel 2 in das oben gezeigte Bisacetamidin umgewandelt: C&sub5;&sub9;H&sub9;&sub3;F&sub6;N&sub1;&sub1;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1374,45. BEISPIEL 7
• Zu einer gerührten Lösung des Amintrifluoracetats von Beispiel 4 (163 mg, 0,137 mmol) und 1M Natriumhydrogencarbonat (150 ul, 0,150 mmol) in absolutem Methanol (5 ml) wird Aminoiminomethansulfonsäure (30 mg, 0,242 mmol) zugegeben. Nach einem Zeitraum von 1,5 Stunden wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der präparativen Umkehrphasen-HPLC (C18) des Rückstandes mit Acetonitril/Wasser (0,1% Trifluoressigsäure) als Elutionsmittel schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen an, um das Guanidintrifluoracetat zu ergeben: C&sub5;&sub4;H&sub8;&sub6;F&sub3;N&sub1;&sub1;O&sub1;&sub8;, Formelgewicht = 1234,35. BEISPIEL 8
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 7 beschriebene wird das Bisamin von Beispiel 2 in das oben gezeigte Bisguanidin umgewandelt: C&sub5;&sub7;H&sub9;&sub1;F&sub6;N&sub1;&sub3;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1376, 43. BEISPIEL 9
• Zu einer gerührten Lösung des Amintrifluoracetats von Beispiel 4 (149 mg, 0,125 mmol) in N,N-Dimethylformamid (10 ml) und 1 M Natriumhydrogencarbonat (2 ml, 2 mmol) wird Iodmethan (2 ml, 32,1 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird 18 Stunden lang gerührt. Die Mischung wird mit Wasser (2mal) verdünnt und chromatographiert. Der Umkehrphasen- (C18)-Flash-Säulenchromatographie mit Acetonitril/Wasser als Elutionsmittel schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen an, um das Trimethylammoniumiodid zu ergeben: C&sub5;&sub4;H&sub9;&sub0;IN&sub9;O&sub1;&sub6;, Formelgewicht = 1248,27. BEISPIEL 10
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 9 beschriebene wird das Bisamin von Beispiel 2 in das oben gezeigte Bistrimethylammoniumiodid umgewandelt: C&sub5;&sub7;H&sub9;&sub9;I&sub2;N&sub9;O&sub1;&sub5;, Formelgewicht = 1404,28. BEISPIEL 11
Teil A: Herstellung von CBZ-Glyamid
• Das Amintrifluoracetat von Beispiel 4 (215 mg, 0,180 mm) wird in N,N-Dimethylformamid (2 ml) gelöst. Zu dieser Lösung werden 1M Natriumhydrogencarbonat (200 ul, 0,200 mmol) und Pentafluorphenyl-N-benzyloxycarbonylglycinat (106 mg, 0,270 mmol) zugegeben. Nach 1 Stunde wird die Reaktionsmischung mit Wasser (2mal) verdünnt. Die Isolierung durch Umkehrphasen-(C18)-Flash-Säulenchromatographie mit Acetonitril/Wasser als Elutionsmittel ergibt nach der Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen das N-CBZ-Glyamid: C&sub6;&sub1;H&sub9;&sub2;N&sub1;&sub0;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1269,47.
Teil B: Entfernung der Schutzgruppe
• Eine Lösung des N-CBZ-Glyamids von Teil A in Eisessig wird unter Ballondruck in Gegenwart von 10% Pd/C 1,5 Stunden lang hydriert. Die Reaktionsmischung wird filtriert, um den Katalysator zu entfernen, und das Filtrat wird gefriergetrocknet, um das Glyamid als das Acetatsalz zu ergeben: C&sub5;&sub5;H&sub9;&sub0;N&sub1;&sub0;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1195,39. BEISPIEL 12
Teil A. Herstellung des Deacylierungsenzyms
• P. acidovorans ATCC 53942, gehalten auf Luria-Bertani-Medium-Agar- Schrägröhrchen, wurde verwendet, um das Deacylierungsenzym zu erzeugen.
• Eine Impfkultur wurde durch Animpfen einer 50-ml-Portion Luria- Bertani-Medium in einem 250-ml-Kolben mit einem Loop des Bakteriums hergestellt, und die Kultur wurde etwa 24 Stunden lang bei 27ºC unter konstantem Schütteln inkubiert. Die Zellen für die Deacylierung wurden durch Animpfen von 15 Liter Luria-Bertani-Medium in einem gerührten Fermenter mit 30 ml der Impfkultur und Inkubieren unter Rühren bei 400 U/Minute und Belüften mit 7,5 Liter/Minute bei 28ºC 20 bis 24 Stunden lang kultiviert. Die Zellen wurden mit 50 mM Kaliumphosphatpuffer, pH 7,5, gewaschen und in etwa 4 Liter des gleichen Puffers erneut suspendiert. Die Suspension wurde auf 37ºC äquilibriert, um das Deacylierungsenzym zu erhalten.
Teil B. Deacylierung
• Das Bisamin von Beispiel 2 (3,5 g) wird in 900 ml destilliertem Wasser gelöst und langsam innerhalb eines Zeitraums von 1 Stunde zu 2 Liter der Suspension von P.-acidovorans-Zellen von Teil A zugegeben. Die resultierende Mischung wird bei 37ºC gehalten, wobei ohne Belüftung mit etwa 300 U/Minute gerührt wird. Nach 24 Stunden wird die Deacylierungsmischung durch Zentrifugation von P.-acidovorans-Zellen befreit und der Kern vom Überstand durch C18-Hochdruck-Flüssigchromatographie isoliert.
• Der Elution mit 0-2% CH&sub3;CN/H&sub2;O, das 0,1% CF&sub3;COOH enthält, in 0,5%-Stufen- Gradienten schließt sich die Gefriertrocknung der kernhaltigen Fraktionen an, um das oben gezeigte deacylierte Produkt als das Tristrifluoracetatsalz zu ergeben: C&sub4;&sub1;H&sub5;&sub8;F&sub9;N&sub9;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1167,95. BEISPIEL 13
Teil A: Selektives Schützen und erneute Acylierung des Kerns
• Zu einer gerührten Lösung des Kerns (102 mg, 0,087 mmol) von Beispiel 12 und Benzyl-4-nitrophenylcarbonat (47,4 mg, 0,173 mmol) in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (3,5 ml) wird Triethylamin (48,4 ul, 0,347 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird 1 Stunde lang gerührt. 4-(n-Pentoxyphenyl)-4'-pentafluorphenoxycarbonylbiphenyl (46 mg, 0,087 mmol), hergestellt wie in "Herstellung der Ausgangsmaterialien" beschrieben, wird zugegeben und das Rühren wird 60 Stunden lang fortgesetzt. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser (3,5 ml) verdünnt und das Produkt durch C18-Festphasenextraktion zunächst mit CH&sub3;CN/H&sub2;O und dann mit CH&sub3;OH als Elutionsmittel isoliert. Das Einengen der produkthaltigen CH&sub3;OH- Fraktionen, ermittelt durch analytische HPLC, ergibt rohes Bis-CBZ- pentoxyterphenyl-Zwischenprodukt: C&sub7;&sub5;H&sub8;&sub9;N&sub9;O&sub2;&sub0;, Molekulargewicht = 1436,59.
Teil B. Schutzgruppenentfernung
• Eine Lösung des rohen Bis-CBZ-terphenyl-Zwischenprodukts von Teil A in Methanol (10 ml) und Eisessig (4 ml) wird unter Ballondruck in Gegenwart von 10% Pd/C 1,75 Stunden lang hydriert. Die Reaktionsmischung wird durch ein Bett Diatomeenerde filtriert, um den Katalysator zu entfernen, wobei mit MeOH gespült wird. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt. Der präparativen C18-HPLC des Rückstands, geladen in mobiler Phase, die ausreichend CH&sub3;OH enthält, um ihn vollständig zu lösen, mit CH&sub3;CN/H&sub2;O, das 0,1% CF&sub3;COOH enthält, als Elutionsmittel, schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen, ermittelt durch analytische HPLC, an, um die oben gezeigte Pentoxyterphenylverbindung als das Bistrifluoracetatsalz zu ergeben: C&sub6;&sub3;H&sub7;&sub9;F&sub6;N&sub9;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1396,37. BEISPIEL 14
Teil A: Selektives Schützen und erneute Acylierung des Kerns
• Zu einer gerührten Lösung des Kerns (102 mg, 0,087 mmol) von Beispiel 12 und Benzyl-4-nitrophenylcarbonat (47,4 mg, 0,173 mmol) in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (3,5 ml) wird Triethylamin (48,4 ul, 0,347 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird 1 Stunde lang gerührt. Pentafluorphenyl-6-octyloxy-2-naphthoat (39 mg, 0,087 mmol), hergestellt wie in "Herstellung der Ausgangsmaterialien" beschrieben, wird zugegeben und das Rühren wird 60 Stunden lang fortgesetzt. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser (3,5 ml) verdünnt und das Produkt durch C18-Festphasenextraktion zunächst mit CH&sub3;CN/H&sub2;O und dann mit CH&sub3;OH als Elutionsmittel isoliert. Das Einengen der produkthaltigen CH&sub3;OH-Fraktionen, ermittelt durch analytische HPLC, ergibt rohes Bis-CBZ-octyloxynaphthoyl-Zwischenprodukt: C&sub7;&sub0;H&sub8;&sub9;N&sub9;O&sub2;&sub0;, Molekulargewicht = 1376,54.
Teil B. Schutzgruppenentfernung
• Eine Lösung des rohen Bis-CBZ-octyloxynaphthoyl-Zwischenprodukts von Teil A in Methanol und Eisessig (2,5 : 1) wird unter Ballondruck in Gegenwart von 10% Pd/C 1,75 Stunden lang hydriert. Die Reaktionsmischung wird durch ein Bett Diatomeenerde filtriert, um den Katalysator zu entfernen, wobei mit MeOH gespült wird. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt. Der präparativen C18-HPLC des Rückstands, geladen in mobiler Phase, die ausreichend CH&sub3;OH enthält, um ihn vollständig zu lösen, mit CH&sub3;CN/H&sub2;O, das 0,1% CF&sub3;COOH enthält, als Elutionsmittel, schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen, ermittelt durch analytische HPLC, an, um die oben gezeigte Octyloxynaphthoylverbindung als das Bistrifluoracetatsalz zu ergeben: C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub9;F&sub6;N&sub9;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1336,32. BEISPIEL 15
Teil A: Alkylierung
• Zu einer kräftig gerührten Lösung des Amintrifluoracetats von Beispiel 4 (149 mg, 0,125 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (16,2 mg, 0,125 mmol) in N,N-Dimethylformamid (10 ml) wird tropfenweise eine. Lösung von 2-(Benzyloxycarbonyl)aminoethylbromid (32,3 mg, 0,125 mmol) in N,N- Dimethylformamid (5 ml) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird gerührt, bis die C18-HPLC-Analyse mit CH&sub3;CN/H&sub2;O den vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials anzeigt. Die Mischung wird mit Wasser verdünnt und chromatographiert. Der Umkehrphasen-(C18)-Flash-Säulenchromatographie mit CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen an, um das (Benzyloxycarbonyl)aminoethyl-Zwischenprodukt zu ergeben: C&sub6;&sub1;H&sub9;&sub4;N&sub1;&sub0;O&sub1;&sub8;, Formelgewicht = 1255,49.
Teil B: Schutzgruppenentfernung
• Eine Lösung des CBZ-geschützten Zwischenprodukts von Teil A in Eisessig wird unter Ballondruck in Gegenwart von 10% Pd/C 1,5 Stunden lang hydriert. Die Reaktionsmischung wird filtriert, um den Katalysator zu entfernen, und das Filtrat wird gefriergetrocknet. Die präparative C18- HPLC des Gefriergetrockneten mit CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) als Elutionsmittel ergibt das oben gezeigte Bisamin als das Ditrifluoracetatsalz: C&sub5;&sub7;H&sub9;&sub0;F&sub6;N&sub1;&sub0;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1349,40. BEISPIEL 16
• Eine Suspension des Bisaminditrifluoracetats von Beispiel 15 (169 mg, 0,125 mmol) in wasserfreiem Tetrahydrofuran (10 ml) wird auf 0-4ºC abgekühlt. Unverdünntes BH&sub3;·S(CH&sub3;)&sub2; (107 mg, 1,41 mmol) wird langsam zugegeben. Die resultierende Reaktionsmischung wird bei ca. 0ºC 4 Stunden lang gerührt. Die Mischung wird langsam mit 2 N HCl (352 ul) gequencht und mit Wasser verdünnt. Der präparativen C18-HPLC dieser Lösung mit CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) als Elutionsmittel, gefolgt von der Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen, ergibt das oben gezeigte Trisamin als das Tritrifluoracetatsalz: C&sub5;&sub9;H&sub9;&sub3;F&sub9;N&sub1;&sub0;O&sub2;&sub1;, Formelgewicht = 1449,44. BEISPIEL 17
Teil A: Herstellung von CBZ-geschütztem Amin
• Zu einer gerührten Lösung des Ausgangs-Amintrifluoracetats von Beispiel 1 (92 mg, 0,087 mmol) und Benzyl-4-nitrophenylcarbonat (26,1 mg, 0,095 mmol) in wasserfreiem N,N-Dimethylformamid (3,5 ml) wird Triethylamin (24,3 ul, 0,174 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wird gerührt, bis die C18-HPLC-Analyse den vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials anzeigt. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser (3,5 ml) verdünnt, und das Produkt wird durch C18-Festphasenextraktion zunächst mit CH&sub3;CN/H&sub2;O und dann mit CH&sub3;OH als Elutionsmittel isoliert. Das Einengen der produkthaltigen CH&sub3;OH-Fraktionen, ermittelt durch analytische HPLC, ergibt rohes CBZ- Zwischenprodukt: C&sub5;&sub9;H&sub8;&sub7;N&sub9;O&sub1;&sub7;, Formelgewicht = 1194,4.
Teil B: Nitrilreduktion
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 2 beschriebene wird das Nitril aus Teil A reduziert und das Aminprodukt als das Trifluoracetatsalz isoliert: C&sub6;&sub1;H&sub9;&sub2;F&sub3;N&sub9;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1312,46.
Teil C: Herstellung des CBZ-geschützten Glyamids
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 11, Teil A, beschriebene wird das Amin aus dem obigen Teil B in ein CBZ-geschütztes Glyamid-Derivat umgewandelt: C&sub6;&sub9;H&sub1;&sub0;&sub0;N&sub1;&sub0;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1389,62.
Teil D: Schutzgruppenentfernung
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 11, Teil B, beschriebene ergibt das Entfernen der Schutzgruppe vom Zwischenprodukt von Teil C das oben gezeigte Glyamid-Derivat als das Diacetatsalz. Die Reinigung durch präparative C18-HPLC mit CH&sub3;CN/H&sub2;O (0,1% CF&sub3;COOH) als Elutionsmittel ergibt das Ditrifluoracetatsalz: C&sub5;&sub7;H&sub9;&sub0;F&sub6;N&sub1;&sub0;O&sub2;&sub0;, Formelgewicht = 1349,4. BEISPIEL 18
Teil A: Herstellung von Guanidin
• Zu einer gerührten Lösung des Ausgangs-Amintrifluoracetats von Beispiel 1 (145 mg, 0,137 mmol) und 1M Natriumhydrogencarbonat (150 ul, 0,150 mmol) in absolutem Methanol (5 ml) wird Aminoiminomethansulfonsäure (30 mg, 0,242 mmol) zugegeben. Nach einem Zeitraum von 1,5 Stunden wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der präparativen Umkehrphasen-HPLC (C18) des Rückstandes mit Acetonitril/Wasser (0,1% Trifluoressigsäure) schließt sich die Gefriertrocknung der produkthaltigen Fraktionen an, um das Guanidintrifluoracetatsalz zu ergeben: C&sub5;&sub4;H&sub8;&sub4;F&sub3;N&sub1;&sub1;O&sub1;&sub7;, Formelgewicht = 1216,33.
Teil B: Nitrilreduktion
• Auf eine ähnliche Weise wie die in Beispiel 2 beschriebene wird das Nitril von Teil A reduziert, und das oben gezeigte Produkt wird als das Bistrifluoracetatsalz isoliert: C&sub5;&sub6;H&sub8;&sub9;F&sub6;N&sub1;&sub1;O&sub1;&sub9;, Formelgewicht = 1334,39.
• Die folgenden nichtlimitierenden Beispiele veranschaulichen repräsentative Zusammensetzungen, die die Verbindungen der Erfindung enthalten.
ZUSAMMENSETZUNGSBEISPIEL A
• 1000 Gepreßte Tabletten, die jeweils 500 mg der Verbindung von Beispiel 4 enthalten, werden aus der folgenden Formulierung hergestellt:
Verbindung Gramm
• Verbindung von Beispiel 4 500
• Stärke 750
• Zweibasisches wäßriges Calciumphosphat 5000
• Calciumstearat 2,5
• Die fein pulverisierten Bestandteile werden gut vermischt und mit 10 Prozent Stärkepaste granuliert. Die Granulation wird getrocknet und zu Tabletten gepreßt.
BEISPIEL B
• 1000 Hartgelatinekapseln, die jeweils 500 mg der Verbindung enthalten, werden aus der folgenden Formulierung hergestellt:
Verbindung Gramm
• Verbindung von Beispiel 4 500
• Stärke 250
• Lactose 750
• Talk 250
• Calciumstearat 10
• Eine gleichförmige Mischung der Bestandteile wird durch Vermischen hergestellt und verwendet, um zweiteilige Hartgelatinekapseln zu füllen.
BEISPIEL C
• Eine Aerosolzusammensetzung mit der folgenden Formulierung kann hergestellt werden:
Pro Kanister
• Verbindung von Beispiel 4 24 mg
• Lecithin-NF-Flüssigkonzentr. 1,2 mg
• Trichlorfluormethan, NF 4,026 g
• Dichlordifluormethan, NF 12,15 g
BEISPIEL D
• 250 Milliliter einer injizierbaren Lösung mit der folgenden Formulierung können durch herkömmliche Verfahren hergestellt werden:
• Dextrose 12,5 g
• Wasser 250 ml
• Verbindung von Beispiel 4 400 mg
• Die Bestandteile werden vermischt und anschließend zum Gebrauch sterilisiert.
HERSTELLUNG DER AUSGANGSMATERIALIEN
• Verbindungen, worin RI Dimethyltridecyl ist und R&sub1; OH ist, R&sub2; H ist, R&sub3; CH&sub2;CONH&sub2; ist, R&sub4; CH&sub3; ist und R&sub6; OH ist, können durch Kultivieren von Zalerion arboricola ATCC 20868 in einem Nährmedium, das Mannit als primäre Kohlenstoffquelle enthält, hergestellt werden, wie es in US-Patent Nr. 5 021 341, erteilt am 4. Juni 1991, beschrieben ist.
• Verbindungen, bei denen R&sub3; H ist und RI 11-Methyltridecyl ist, können durch Kultivieren von Aspergillus sydowi in Nährmedium wie in J. Antibiotics XL (Nr. 3), S. 28 (1987), beschrieben hergestellt werden.
• Verbindungen bei denen R&sub3; CH&sub3; ist und RI Linoleyl ist, können durch Kultivieren von Aspergillus nidulans NRRL 11440 in Nährmedium wie in US- Patent Nr. 4 288 549, erteilt am 8. September 1981, beschrieben hergestellt werden.
• Verbindungen, bei denen R&sub3; CH&sub2;CN ist, können durch die Umsetzung einer Verbindung mit einer Carboxamidgruppe in der entsprechenden Stellung mit einem Überschuß Cyanurchlorid in einem aprotischen Lösungsmittel hergestellt werden. Bei dieser Reaktion können Molekularsiebe eingesetzt werden. Nach dem Reaktionsende werden die Siebe, falls sie eingesetzt wurden, entfernt und das Filtrat eingeengt, um die Nitrilverbindung zu erhalten, wie es genauer in dem US-Patent Nr. 5 348 940, erteilt am 20. September 1994, beschrieben ist.
• Verbindungen bei denen R&sub3; CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2; ist, können entweder durch chemische oder katalytische Reduktion des Nitrils hergestellt werden. Zweckmäßigerweise geschieht dies durch Verwendung eines großen molaren Überschusses an Natriumborhydrid mit Cobalt(II)chlorid, wie es genauer in der anhängigen Anmeldung mit der Seriennummer 936 558, eingereicht am 3. September 1992, beschrieben ist.
• Verbindungen, bei denen R&sub3; CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2; ist, können auch direkt aus dem Carboxamid unter Verwendung eines großen molaren Überschusses an Diboran hergestellt werden.
• Verbindungen, bei denen R&sub5; OH oder OSO&sub3;H ist, sind in den Europäischen Patentanmeldungen 0 431 350 und 0 462 531 von Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., beschrieben.
• Ausgangsmaterialien, bei denen RI eine Gruppe ist, die sich von der des Naturprodukts unterscheidet, können erhalten werden durch Deacylierung der lipophilen Gruppe des Naturprodukts, indem das Naturprodukt einem deacylierenden Enzym in einem Nährmedium ausgesetzt wird, bis im wesentlichen Deacylierung erfolgt, wobei das Enzym zuerst durch Kultivieren eines Mikroorganismus aus der Familie Pseudomondaceae oder Actinoplanaceae erhalten worden ist, so wie es in Experentia 34, 1670 (1978) oder in der US-Patentanmeldung Nr. 4 293 482 beschrieben ist, und anschließender Gewinnung des deacylierten Cyclopeptids und Acylierung des deacylierten Cyclopeptids durch Vermischen mit einem geeigneten aktiven Ester RICOX, um Verbindung A mit der erwünschten Acylgruppe zu erhalten.
• Der aktive Ester RICOX kann durch Verfahren hergestellt werden, die dem geschulten Chemiker bekannt sind und die in den folgenden Beispielen veranschaulicht sind. Obwohl jeder beliebige aktive Ester geeignet ist, sind die Verbindung mit Pentafluorphenylestern veranschaulicht.
Herstellung von Alkoxyterphenyl-Seitenketten
• Die Terphenylcarbonsäureester können durch die folgende Reaktionssequenz hergestellt werden, die im folgenden durch ein spezielles Beispiel veranschaulicht werden: A. Herstellung von pentyloxysubstituierter Terphenylcarbonsäure
Teil A: 4-(4-n-Pentyloxyohenyl)brombenzol
• Zu einer gerührten Lösung von 25,5 g 4-(4-Bromphenyl)phenol (Verbindung (a)) in 400 ml Dimethylsulfoxid wurden 40,9 ml 2,5 N NaOH zugegeben, gefolgt von 12,7 ml n-Pentylbromid, und die resultierende Mischung wurde 18 Stunden lang auf 70ºC erwärmt, um in der Mischung Verbindung (b) zu ergeben. Die Mischung wurde zwischen 1000 ml Ethylacetat und 500 ml Wasser aufgetrennt, und aus der organischen Phase wurden nach dem Waschen mit Wasser und Salzlösung und dem Trocknen 30,9 Gramm Verbindung (b) als ein weißer Feststoff erhalten.
• ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d&sub6;) &delta; 0,93 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,41 (m, 4H), 1,79 (m, 2H), 3,97 (t, 6,6 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 8,6 Hz, 2H).
Teil B: 4-(4-n-Pentyloxyphenyl)phenylboronsäure
• Zu einer gerührten Suspension von 1,0 Gramm Verbindung (b) in 20 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran bei -78ºC unter einer Stickstoffatmosphäre wurden 1,32 ml 2,5M n-Butyllithium in Hexanen zugegeben. Nach 15 Minuten wurden 0,760 ml Triisopropylborat zugegeben und das Rühren 15 Minuten lang bei -78ºC und anschließend 40 Minuten lang bei 25ºC fortgesetzt. Die Mischung wurde angesäuert und zwischen Ether und Wasser aufgetrennt, um die Boronsäureverbindung (c) in der Reaktionsmischung zu erhalten. Die Verbindung wurde durch Waschen mit Wasser und Salzlösung und Trocknen gewonnen, wobei 750 mg 4-(4-n-Pentyloxyphenyl)phenylboronsäure als weißer Feststoff mit dem folgenden ¹H-NMR erhalten wurden:
• ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d&sub6;) &delta; 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,38 (m, 4H), 1,72 (m, 2H), 3,99 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,83 (d, J = 8,2 Hz, 2H).
Teil C: Pentafluorphenyl-4"-(n-pentyloxy)-[1,1':4',1"-terphenyl]-4- carboxylat
• Zu einer gerührten Mischung von 1,0 g der Boronsäure und 0,0874 ml 4-Iodbenzoesäure in 11 ml Ethanol und 30 ml Toluol wurden 5,3 ml einer 2M wäßrigen Lösung von Natriumcarbonat zugegeben, gefolgt von 204 mg Tetrakis(triphenylphosphin)palladium, und die Reaktionsmischung wurde 18 Stunden lang am Rückfluß (100ºC) erhitzt. Anschließend wurde die Mischung abgekühlt, angesäuert und zwischen Ethylacetat und Wasser aufgetrennt. Die organische Phase wurde mit Wasser und Salzlösung gewaschen und getrocknet, dann durch ein Celite-Bett filtriert, um nach dem Entfernen des Lösungsmittels und der Reinigung mit Flash-Kieselgelchromatographie 4"-(n- Pentyloxy)[1,1':4',1"-terphenyl]-4-carbonsäure zu ergeben.
• ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d&sub6;) &delta; 0,89 (t, 3H), 1,37 (m, 4H), 1,72 (m, 2H), 3,98 (t, 2H), 7,01 (d, 2H).
• Zu einer Mischung aus 4"-(n-Pentyloxy)-[1,1':4',1"-terphenyl]-4- carbonsäure (10,5 mmol) und Dicyclohexylcarbodiimid (10,5 mmol) in Ethylacetat bei 0ºC wird Pentafluorphenol (11,5 mmol) zugegeben. Die Mischung wird bei 25ºC 18 Stunden lang gerührt, wobei ein Niederschlag erzeugt wird. Die Mischung wird filtriert. Das Filtrat wird mit Wasser und Salzlösung gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt, um Pentafluorphenyl-4"-(n-pentyloxy)-[1,1':41,1"- terphenyl]-4-carboxylat, C&sub3;&sub0;H&sub2;&sub3;F&sub5;O&sub3;, MG = 526,5, zu ergeben.
Herstellung von Alkoxybiphenyl-Seitenketten
• Die Biphenylcarbonsäureester können durch die folgende Reaktionssequenz, die nachstehend veranschaulicht ist, erhalten werden. A. Herstellung von Octyloxybiphenylcarbonsäure
• Die Säure wird wie in der EP 462531 von Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd., beschrieben hergestellt.
B. Herstellung von Pentafluorphenylester
• Pentafluorphenol (11,5 mmol) wird bei 0ºC zu einer Mischung aus 10,5 mmol 4'-n-Octyloxy[1,1'-biphenyl]-4-ylcarbonsäure und 10,5 mmol Dicyclohexylcarbodiimid in Ethylacetat zugegeben. Die Mischung wird bei 25ºC 18 Stunden lang gerührt, wobei sich ein Niederschlag bildet. Die Reaktionsmischung wird filtriert, das Filtrat mit Wasser und Salzlösung gewaschen und getrocknet, das Lösungsmittel im Vakuum entfernt, um Pentafluorphenyl- 4'-n-octyloxy [1,1'-biphenyl]-4-ylcarboxylat, C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub5;F&sub5;O&sub3;, MG 492,5, zu ergeben. Herstellung von Aminoethyloxybiphenyl-Seitenketten Herstellung von 4'-(2-[4-Cyclohexylmethylpiperidin-1-yl]ethoxy)-[1,1'- biphenyl]-4-ylcarbonsäurepentafluorphenylester
Teil A: Herstellung von 4-Cyclohexylmethylpiperidin
• 4-Benzylpiperidin wird in Eisessig, der PtO&sub2; (etwa 50 Gew.-%) enthält, gelöst. Eine Paar-Hydrierapparatur wird verwendet, und das Reaktionsgefäß wird mit H&sub2; gespült und unter 3 atm Druck gesetzt. Die Mischung wird eine ausreichend lange Zeit geschüttelt, um eine Reduktion des aromatischen Rings zum vollständig gesättigten Produkt zu ergeben, was durch die Aufnahme von 3 Moläquivalenten HZ ermittelt wird. Der schwarze Feststoff wird abfiltriert und, die Essigsäure durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt, um das Produkt als ein Acetatsalz zu ergeben.
Teil B: Herstellung von 1-(2-Hydroxyethyl)-4-cyclohexylmethylpiperidin
• Das Produkt von Teil A (1,0 Äquiv.) wird in Dichlormethan, das eine äquimolare Menge Diisopropylethylamin enthält, gelöst. Ethylenoxid (10 Äquiv.) wird zugegeben und die Mischung gerührt, bis das Ausgangsmaterial verbraucht ist. Das erwünschte Produkt wird durch Entfernen des Lösungsmittels im Vakuum, gefolgt von der Reinigung durch Säulenchromatographie, erhalten.
Teil C: Herstellung von 4'-(2-[4-Cyclohexylmethylpiperidin-1-yl]ethoxy)-[1,1-'-biphenyl]-4-ylcarbonsäure
• 4'-Hydroxy-[1,1'-biphenyl-4-ylcarbonsäuremethylester (1,0 Äquiv.) wird in Dichlormethan und Triphenylphosphin (1,3 Äquiv.) gelöst und mit der Hydroxyethylverbindung (1,0 Äquiv.) von Teil B versetzt. Anschließend wird Diethylazodicarboxylat (1,3 Äquiv.) zugegeben und die Mischung gerührt, bis das Ausgangsmaterial verbraucht ist. Die Mischung wird mit Dichlormethan verdünnt und mit Wasser gewaschen. Die organische Schicht wird mit MgSO&sub4; getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wird im Vakuum entfernt und der Rückstand in Ethanol gelöst. Ein Überschuß an 3 N Natriumhydroxid wird zugegeben und die Mischung mehrere Stunden lang gerührt. Die Reaktion wird mit 2 N HCl neutralisiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wird mit MgSO&sub4; getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft. Das erwünschte Produkt wird in im wesentlichen reiner Form durch Säulenchromatographie erhalten.
Teil D: Herstellung des Pentafluorphenylesters
• Die Carbonsäure (1,0 Äquiv.) und Dicyclohexylcarbodiimid (1,0 Äquiv.) werden in Ethylacetat gelöst und die Lösung auf 0ºC abgekühlt. Pentafluorphenol (1,05 Äquiv.) wird zugegeben, anschließend wird das Eisbad entfernt und die Reaktion bei Umgebungstemperatur 18-24 Stunden lang gerührt. Ein gleiches Volumen Ether wird zugegeben, die Mischung filtriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Das Produkt (MG = 587,64) kann in für die Verwendung zur Kern-Acylierung ausreichend reiner Form erhalten werden. Herstellung von 4'-(2-[4-Undecylpiperazin-1-yl]ethoxy)-[1,1'-biphenyl]-4- ylcarbonsäurepentafluorphenylester
Teil A: Herstellung von 4-Undecylpiperazin
• Ein Überschuß an Piperazin (5 Äquiv.) und 1-Bromundecan (1,0 Äquiv.) werden in Dichlormethan gelöst, und man läßt sie über Nacht reagieren. Die Mischung wird mit wäßrigem Natriumhydrogencarbonat extrahiert und die organische Schicht mit Natriumsulfat getrocknet. Die Mischung wird filtriert, das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie gereinigt.
Teil B: Herstellung von 1-(2-Hydroxyethyl)-4-undecylpiperazin
• Das obige substituierte Piperazin (1,0 Äquiv.) wird in n-Propanol gelöst und mit Bromethanol (1,0 Äquiv.) zusammen mit Diisopropylethylamin (1,1 Äquiv.) versetzt. Nach mehreren Stunden wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand in Dichlormethan gelöst. Die organische Schicht wird mit Wasser und anschließend wäßrigem Natriumhydrogencarbonat gewaschen. Die organische Schicht wird mit MgSO&sub4; getrocknet und filtriert. Der Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum schließt sich die Reinigung durch Säulenchromatographie an.
Teil C: Herstellung der Carbonsäure
• Das Verfahren ist im wesentlichen das gleiche wie das in dem obigen Teil C beschriebene, außer daß das Hydroxyethylpiperidin durch das obige Hydroxyethylpiperazin substituiert wird.
Teil D: Herstellung des Pentafluorphenylesters
• Das Verfahren ist identisch mit dem obigen Teil D, außer daß piperazinylsubstituierte Biphenylcarbonsäure verwendet wird. Das Produkt. (MG = 646,75) kann in ausreichend reiner Form erhalten werden, um "so wie es ist" bei der Kern-Acylierung verwendet zu werden. Herstellung von Pentafluorphenyl-6-octyloxy-2-naphthoat
• Zu einer Suspension von 6-Octyloxy-2-naphthoesäure (3,15 g, 10,5 mmol) und Dicyclohexylcarbodiimid in Ethylacetat (25 ml) bei 0ºC wurde Pentafluorphenol (2,12 g, 11,5 mmol) zugegeben. Die Mischung wurde bei 25ºC 18 Stunden lang gerührt. Der Niederschlag wurde durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde mit Wasser (2 · 150 ml) und Salzlösung gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Das Entfernen des Ethylacetats im Vakuum ergab 5,4 g Pentafluorphenyl-6-octyloxy-2-naphthoat als einen Feststoff: ¹H-NMR (400 MHz, CD&sub3;OD) &delta; 0,88 (t, 3, J = 6,9 Hz), 4,10 (t, 2, J = 6,6 Hz), 7,16 (d, 1), 7,21 (d, 1), 7,80 (d, 1), 7,87 (d, 1), 8,08 (dd, 1), 8,69 (d, 1H).
SEQUENZAUFLISTUNG (1) ALLGEMEINE INFORMATION:
• (i) ANMELDER: BOUFFARD, FRANCES A
• (ii) TITEL DER ERFINDUNG: NEUE ANTIFUNGALE CYCLOHEXAPEPTIDE
• (iii) ANZAHL AN SEQUENZEN: 24
• (iv) KORRESPONDENZADRESSE:
• (A) NAME: ELLIOTT KORSEN
• (B) STRASSE: 126 E. LINCOLN AVE, P. O. BOX 2000
• (C) STADT: RAHWAY
• (D) STAAT: NJ
• (E) LAND: USA
• (F) PLZ: 07065
• (v) COMPUTERLESBARE FORM:
• (A) ART DES MEDIUMS: Diskette
• (B) COMPUTER: IBM-PC-Kompatibel
• (C) BETRIEBSSYSTEM: PC-DOS/MS-DOS
• (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, Version #1.25
• (vi) MOMENTANE ANMELDUNGSDATEN:
• (A) ANMELDUNGSNUMMER: US
• (B) EINREICHUNGSDATUM: 26. JAN. 1995
• (C) KLASSIFIZIERUNG:
• (viii) INFORMATIONEN ÜBER PATENTANWALT/VERTRETER:
• (A) NAME: KORSEN, ELLIOTT
• (B) REGISTRIERNUMMER: 32705
• (C) REFERENZNUMMER/ZEICHEN: 19354
• (ix) TELEKOMMUNIKATIONSINFORMATION:
• (A) TELEFON: 908-594-5493
• (B) TELEFAX: 908-594-4005
(2) INFORMATION FÜR SEQ.-IDENT.-NR.: 1
• (i) SEQUENZMERKMALE:
• (A) LÄNGE: 6 Aminosäuren
• (B) TYP: Aminosäure
• (C) STRANGIGKEIT: unbekannt
• (D) TOPOLOGIE: ringförmig
• (ii) MOLEKÜLART: Peptid
• (iii) HYPOTHETISCH: Nein
• (iv) ANTI-SENSE: Nein (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ.-IDENT.-NR.: 1
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• (i) SEQUENZMERKMALE:
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• (i) SEQUENZMERKMALE:
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• (i) SEQUENZMERKMALE:
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• (ii) MOLEKÜLART: Peptid (xi) SEQUENZBESCHREIBUNG: SEQ.-IDENT.-NR.: 24

Claims (19)

1. Eine Verbindung mit der Formel

worin

R&sub1; H oder OH ist;

R&sub2; H, CH&sub3; oder OH ist;

R&sub3; H, CH&sub3;, CH&sub2;CONH&sub2;, CH&sub2;CN, CH&sub2;CH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;CH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C=NH)RVII ist;

R&sub4; H oder CH&sub3; ist;

R&sub5; H, OH oder OSO&sub3;H ist;

R&sub6; H oder OH ist;

RI C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkyl,

C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkenyl,

C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxyphenyl,

C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxynaphthyl oder

ist,

wobei

Ra C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkyl oder (CH&sub2;)qNRbRc ist, wobei Rb und Rc unabhängig H, C&sub1;-C&sub1;&sub0; Alkyl sind oder Rb und Rc zusammen mit dem Stickstoffatom

sind,

wobei

Rd C&sub1;-C&sub1;&sub6;-Alkyl, Cyclohexylmethyl, Phenyl oder Benzyl ist,

p 1 oder 2 ist und

q 2, 3 oder 4 ist;

RII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;OH, C=NH(RVII), (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;OH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, COCH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI ist;

RIII H, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRIV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI ist oder

RII und RIII zusammen -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;)&sub5;-, -(CH&sub2;)&sub2;O(CH&sub2;)&sub2;- oder -(CH&sub2;)&sub2;NH(CH&sub2;)&sub2;- sind;

RIV C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;

RV H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;

RVI H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;

RVII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;

X Cl, Br oder I ist; oder

ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

2. Eine Verbindung mit der Formel

worin

R&sub1; H oder OH ist;

R&sub2; H, CH&sub3; oder OH ist;

R&sub3; H, CH&sub3;, CH&sub2;CONH&sub2;, CH&sub2;CN, CH&sub2;OH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;OH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;OH&sub2;NH(C=NH)RVII ist;

R&sub4; H oder CH&sub3; ist;

R&sub5; H, OH oder OSO&sub3;H ist;

R&sub6; H oder OH ist;

RI C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkyl,

C&sub9;-C&sub2;&sub1;-Alkenyl,

C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxyphenyl,

C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkoxynaphthyl oder

ist,

wobei

Ra C&sub1;-C&sub1;&sub0;-Alkyl oder (CH&sub2;)qNRbRc ist, wobei Rb und RC unabhängig H, C&sub1;-C&sub1;&sub0;- Alkyl sind oder Rb und RC zusammen mit dem Stickstoffatom

sind,

wobei

Rd C&sub1;-C&sub1;&sub6;-Alkyl, Cyclohexylmethyl, Phenyl oder Benzyl ist,

p 1 oder 2 ist,

q 2, 3 oder 4 ist;

RIV C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist und

X Cl, Br oder I ist.

3. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung, worin

R&sub1; OH ist;

R&sub2; H ist;

R&sub3; CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2;, CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)&sub3;&spplus;I&supmin; oder CH&sub2;OH&sub2;NH(C=NH)NH&sub2; ist;

R&sub4; CH&sub3; ist;

R&sub5; H ist;

R&sub6; OH ist;

RI 9,11-Dimethyltridecyl ist;

RII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;OH, C=NH(RVII), (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, COCH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI ist und

RIII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI ist.

4. Die wie in Anspruch 2 definierte Verbindung, worin

R&sub1; OH ist;

R&sub2; H ist;

R&sub3; CH&sub2;CH&sub2;NH&sub2;, CH&sub2;CH&sub2;N(CH&sub3;)&sub3;&spplus;I&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C= NH)NH&sub2; ist;

R&sub4; CH&sub3; ist;

R&sub5; H ist;

R&sub6; OH ist;

RI 9,11-Dimethyltridecyl ist; .

RIV CH&sub3; ist und

X I ist.

5. Eine Verbindung mit der Formel

worin

R&sub1; H oder OH ist;

R&sub2; H, CH&sub3; oder OH ist;

R&sub3; H, CH&sub3;, CH&sub2;CONH&sub2;, CH&sub2;CN, CH&sub2;CH&sub2;NRIIRIII, CH&sub2;CH&sub2;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin; oder CH&sub2;CH&sub2;NH(C=NH)RVII ist;

R&sub4; H oder CH&sub3; ist;

R&sub5; H, OH oder OSO&sub3;H ist;

R&sub6; H oder OH ist;

RII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;OH, C=NH(RVII), (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;-NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, COCH(NRVRVI) (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI ist;

RIII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;N(RIV)&sub3;&spplus;X&supmin;, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NH(C=NH)RVII, (CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;CH(NRVRVI)(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub4;NRVRVI, (CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRV(CH&sub2;)&sub2;&submin;&sub4;NRVRVI ist oder

RII und RIII zusammen -(CH&sub2;)&sub4;-, -(CH&sub2;)&sub5;-, -(CH&sub2;)&sub2;O(CH&sub2;)&sub2;- oder -(CH&sub2;)&sub2;NH(CH&sub2;)&sub2;- sind;

RIV C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;

RV H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;

RVI H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkyl ist;

RVII H, C&sub1;-C&sub4;-Alkyl oder NH&sub2; ist;

X Cl, Br oder I ist; oder

ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

6. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung mit der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

7. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung mit der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

8. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung mit der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

9. Die wie in Anspruch 2 definierte Verbindung mit der Formel

10. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung mit der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

11. Die wie in Anspruch 1 definierte Verbindung mit der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

12. Die wie in Anspruch 5 definierte Verbindung mit der Formel

13. Eine antifungale Zusammensetzung, die eine wirksame Menge einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger dafür enthält.

14. Eine Zusammensetzung gemäß Anspruch 13 in einer Einheitsdosisform, in der die Verbindung nach Anspruch 1 in einer Menge von 10 mg bis 200 Milligramm vorliegt.

15. Die Verwendung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Pilzinfektionen.

16. Die Verwendung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Pilzinfektionen, die durch Candida sp. hervorgerufen werden.

17. Die Verwendung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Pilzinfektionen, die durch Aspergillus sp. hervorgerufen werden.

18. Die Verwendung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Pneumocystis- carinii-Infektion.

19. Die Verwendung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Prävention einer Pneumocystis- carinii-Infektion.