DK167518B1

DK167518B1 - Tilberedninger til syntese af prostaglandiner og hydroxyfedtsyrer i biologiske systemer og anvendelse af disse til fremstilling af laegemidler

Info

Publication number: DK167518B1
Application number: DK235687A
Authority: DK
Inventors: Klaus Ulrich Weithmann
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1986-05-09
Filing date: 1987-05-08
Publication date: 1993-11-15
Also published as: HUT44433A; AU7264187A; DE3615710A1; IE60273B1; JPS62267222A; EP0244832A2; US5043328A; PT84841A; HU201671B; CA1302266C; GR3005768T3; IL82459A; DK235687A; DK235687D0; PT84841B; KR870010867A; ES2051705T3; EP0244832A3; IL82459A0; AU603574B2

Description

Lsrv ιυ/ti ιυ u i

Den foreliggende opfindelse angår tilberedninger med indhold af umættede fedtsyrer til syntese af prostaglan-diner og hydroxyfedtsyrer i biologiske systemer samt anvendelsen af disse tilberedninger til fremstilling af lægemid-5 ler.

Langkædede, flerumættede fedtsyrer eller disses estere og andre derivater har betydning som udgangsmateriale ved den enzymkatalyserede fremstilling af prosta-glandiner og hydroxyfedtsyrer. Således kan der f.eks. ved 10 hjælp af celler eller cellehomogenater eller cellefraktioner især ud fra substraterne dihomogammalinolensyre, ara-chidonsyre eller eicosapentaensyre ad biokemisk vej præparativt udvindes produkter, der ellers kun kan fremstilles ved kostbare kemiske fremgangsmåder. Ved sådanne præ-15 parative problemstillinger vil man tilstræbe en stimulering af dannelsen af det ønskede prostaglandin. Dette kan opnås ved tilsætning af egnede enzym-cofaktorer. De nævnte fedtsyrer kan dog også anvendes til medicinske formål, når man f.eks. klinisk kontrollerer evnen hos le-20 gemsceller, eller cellehomognater eller cellefraktioner (f.eks. keratinocytter, ved biopsi tagne blodkarceller, eller celler eller homogenater af nyremedulla) til at me-tabolisere de pågældende fedtsyrer eller til at omsættes til prostaglandiner med en bestemt biologisk virkning.

25 ved sådanne medicinske opgaver kommer det ikke an på det dannede prostaglandins ensartethed, men man tilsigter en stimulering af dannelsen af det prostaglandin, der tjener som medicinsk målestok.

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukend-30 te holdbare tilberedninger, der indeholder langkædede, flerumættede fedtsyrer, og ved hjælp af hvilke der med fordel kan fremstilles prostaglandiner og hydroxyfedtsyrer, der kan anvendes til de nævnte formål.

Det er kendt, at omsætningen af flerumættede 25 fedtsyrer, såsom arachidonsyre, ved hjælp af prostaglan-dinsyntetiserende enzymer kan stimuleres ved hjælp af visse co-faktorer og derved også syntesen af ganske be- 2 uiv ib/bia bi stemte prostaglandiner fremmes. Således beskrives i Biochemical Pharmacology 31, 3591 (1982) et in vitro-system, der omsætter arachidonsyre ved hjælp af et fra fåresædblærer udvundet enzym med eller uden tilsætning af co-faktorerne 5 glutathion og hydroquinon. Samme sted side 3595 anføres, at omsætningen fremskyndes ved hjælp af de nævnte co-faktorer.

Et lignende system af arachidonsyre, homogenat af kanin-nyremedulla, glutathion og hydroquinon er beskrevet i Life Sciences 26, 765 (1980).

10 I WO offentliggørelsesskrift nr. 84/02271 beskrives der en blanding, der indeholder polyumættede fedtsyrer og stabilisatorer. Som stabilisatorer nævnes bl.a. vitamin E og glycerol.

I DE offentliggørelsesskrift nr. 3.226.232 beskrives 15 der ligeledes en blanding af umættede fedtsyrer, der desuden også indeholder a-, /8- eller nr-cyclodextrin, dvs. såkaldte stabilisatorer.

Endelig angår også FR patentskrift nr. 2.231.379 en blanding af polyumættede fedtsyrer og vitamin E, dvs. en 20 stabilisator.

Der tilvejebringes således ifølge opfindelsen til de tidligere nævnte formål tilberedninger, som indeholder de flerumættede fedtsyrer kombineret med stimulerende enzym-co--faktorer. Sådanne tilberedninger er ikke blot hidtil ukend-25 te, men de udviser også uventede egenskaber. Således som det er omtalt detaljeret nedenfor, ændrer disse stimulatorer uden undtagelse på overraskende måde fedtsyrernes holdbarhed. Således kan der i løbet af kort tid klart dannes flere uønskede nedbrydnings- og omdannelsesprodukter af arachidonsyre 30 i glutathion- eller hydroquinon-holdige arachidonsyre-til-beredninger, end tilfældet er i tilberedninger, som ikke indeholder disse tilsætninger. Disse biprodukter er højreaktive og kan udløse uønskede, også biologiske, sidereaktioner.

De undersøgelser, der er beskrevet mere indgående nedenfor, 35 viser imidlertid, at prostaglandinsyntesen også kan stimuleres af blandinger, der indeholder flerumættede fedtsyrer, 3 såsom arachidonsyre, sammen med andre svovlholdige forbindelser, såsom disulfidet liponsyre, eller de reducerede thioler homocystein og cystein eller deres ved nitrogenatomet acylerede derivater, hvorved der i tilberedninger ifølge 5 opfindelsen dannes langt færre uønskede biprodukter. Dette er overraskende, da disse fordelagtige virkninger ikke kan opnås med andre, i naturen forekommende eller af naturlige forbindelser afledte svovlforbindelser, såsom co-enzym A, eller disses spaltnings- eller hydrolyseprodukter cysteamin 10 og pantethein eller dihydroliponsyre, cystin og mono- eller polythiolsukkerforbindelser, såsom dithiothreitol eller dithioerythritol. I den eksperimentelle del gøres der rede for, at de uønskede sidereaktioner helt kan undertrykkes ved tilsætning af liponsyre, medens de ved tilsætning af de 15 andre svovlholdige forbindelser i vidt omfang, men dog ikke fuldstændigt kan undertrykkes.

Det er kendt, at arachidonsyreomsætningen eller syntesen af bestemte prostaglandiner også kan stimuleres ved tilsætning af stoffer uden indhold af svovl, f.eks. som 20 anført ovenfor ved hjælp af hydroquinon, men også med phenol, adrenalin, noradrenalin, tryptophan, 5-hydroxytryptophan og ascorbinsyre. Det har imidlertid vist sig, at den uønskede nedbrydning af flerumættede fedtsyrer, f.eks. arachidonsyre, fremskyndes i vandige medier ved hjælp af disse stimulatorer. 25 Anvendelsen af f.eks. 2-butanol eller pyridin i stedet for vand virker desuden destabiliserende, medens der ved anvendelse af dimethylsulfoxid, eller etahnol eller polyoler, såsom glycerol eller polyethylenglycol, ikke optræder uønskede biprodukter. Organiske opløsningsmidler har imidlertid 30 den ulempe, at de denaturerer enzymer; de skal altså fjernes før enzymreaktionen eller fortyndes med vand. Den remanens, der bliver tilbage, efter at opløsningsmidlet er fjernet, og som består af en intim blanding af umættet fedtsyre og stimulator, er imidlertid igen ustabil. Det har endnu ikke 35 været beskrevet, at man uventet kan få fordelagtige vandige tilberedninger til stimulering af prostaglandinsyntese med uiv ib/b itf b i 4 tyrosin. Som forklaret i den eksperimentelle del er tilberedninger, der indeholder umættede fedtsyrer og tyrosin eller tyrosin-lignende forbindelser, helt uventet fuldt ud stabile.

5 Også vandige blandinger eller opløsninger af umættet fedtsyre og de andre ovennævnte stimulatorer kan stabiliseres fuldstændigt ved tilsætning af vandopløselige eller i vand emulgerbare lipider eller af f.eks. af humant eller pat-tedyreblod fremstillelige proteiner, såsom serumalbumin 10 eller globuliner, såsom gammaglobulin, eller porphyrin-hol-dige proteiner, såsom hæmoglobin, methæmoglobin eller cyto-chrom. Ifølge opfindelsen egner sig også vitaminer indenfor E-serien, såsom flavonoider, især sådanne med en sukkerandel, f.eks. rutin eller troxerutin (med hensyn til nomenklatur 15 henvises til "The Merck Index", 10. udg. 1983, Rahway, N.J., USA), hvorimod sukker uden en flavonandel, såsom rhamnoglu-cose, glucose og sorbitol, ikke stabiliserer. Ved hjælp af cyclodextriner kan der overraskende fremstilles tilberedninger ifølge opfindelsen.

20 Med hensyn til stabilisering med serumalbuminer er det dog kendt, at albuminer kan binde langkædede fedtsyrer på energetisk lavt niveau, men så meget mere overraskende er det, at de således bundne fedtsyrer i reagenstilberedningerne ifølge opfindelsen opfører sig som frit 25 opløste fedtsyrer, dvs. uhindret kan omsættes enzymatisk.

Det er kendt [jf. f.eks. Journal of Biological Chemistry 253. 5061 (1978)], at prostaglandinsyntesens enzymer har bundet hæm eller andre porphyriner som prostetiske grupper. Hertil kræves der dog kun ganske små mængder por-30 phyrin-holdige enzymer, der ikke har nogen stabiliserende virkning på de tilsatte mængder umættet fedtsyre. I litteraturen findes ingen omtale af, at der med en større andel porphyrin-holdige proteiner kan fremstilles et stabiliseret reagens til stimulering af den enzymka-35 talyserede prostaglandinsyntese.

5 I DE offentliggørelsesskrift nr. 3.419.799 er omtalt stabile sammensætninger, der indeholder fedtsyrer med 20-22 carbonatomer med hver 3 eller flere dobbeltbindinger og som stabilisatorer en andel på op til 30 vægt% phospholipider, 5 f.eks. lecithin. Sådanne stabile tilberedninger kan ligeledes anvendes til opfindelsen kombineret med de allerede omtalte stimulatorer.

Som anført i den eksperimentelle del er det dog mere formålstjenligt, når der til tilberedningerne af de umættede 10 fedtsyrer med 18-22 carbonatomer sættes mere end 30 vægt% phospholipid, f.eks. lecithin, fordi der så opnås mere stabile blandinger. Fordelagtigt indeholder en tilberedning op til 90 vægt% phospholipid, især 50-80 vægt% phospholipid.

Med hensyn til medicinsk virkning foretrækkes en tilbered-15 ning, som indeholder fedtsyrer med 18 carbonatomer. En tilberedning med indhold af umættede fedtsyrer og med en andel på mere end 30 vægt% phospholipider er kendt som diæteticum (EP offentliggørelsesskrift nr. 0.148.303). Phospholipiders stabiliserende virkninger på de umættede fedtsyrer omtales 20 ikke i EP offentliggørelsesskrift nr. 0.148.303. Det omtales heller ikke deri, at sådanne tilberedninger bestående af umættede fedtsyrer, phospholipider og stimulatorer med fordel kan anvendes til medicinske formål.

Opfindelsen angår således faste eller flydende til-25 beredninger af den allerede angivne art, hvilke tilberedninger er ejendommelige ved, at de indeholder (A) en eller flere umættede fedtsyrer, der er karakteriseret ved 3-5 isoleret anbragte dobbeltbindinger og 18--22 carbonatomer i lige kæder, hvilke fedtsyrer ved et eller 30 to carbonatomer i stilling 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19 eller 20 kan være methyleret eller ethyleret, som fri carboxylsyre med endestillet -CO2H eller som carboxylsyreamid eller -CO2X, idet X er en under sure betingelser fraspaltelig beskyttelsesgruppe eller et 1- eller 2-lysophospholipid eller en 35 metal- eller aminkation eller den kationiske form af en ionbytter, og 6

UK I Ό/Ο IS Β I

(B) som stimulatorer med delvis samtidig stabiliserende virkning en eller flere forbindelser valgt blandt (B^_) en phenolisk forbindelse med formlen 5 R1

OH

hvor R2 og R3 er hydroxylgrupper eller hydrogen, og 10 R1 er -OH, -C02H, -CH2-C02H, -CH=CH-C02H, -CH2-CHR4R5, -CHOH-CH2-NH-R6, hvor R4 er -H eller -C02H, og R5 er -H eller -NH2, og R6 er -H, -CH3 eller -C2H5, (B2) et indol-derivat med formlen

N

hvor R7 er hydrogen eller -C00H, R8 er hydrogen eller -NH2, 20 og R9 er hydrogen eller OH, (B3) cystein, homocystein eller liponsyre, hvis a-cycliske alkylgruppe kan være forkortet med op til fire methylengrupper, (B4) et peptid bestående af maksimalt 10 aminosyrer, 25 hvor en eller flere af aminosyreme hver er erstattet med en af forbindelserne ifølge (B^) — (B3), (B5) en aminoforbindelse ifølge (B^) - (B4), hvori et N-atom kan være substitueret med en C1_4-alkanoylgruppe, (B6) et flavon-derivat, der er substitueret med i 30 det mindste én hydroxylgruppe, som bærer en sukkerrest, (By) et salt af de ioniske former af forbindelserne (B^)—(B6) og eventuelt (Bg) en carboxylsyreforbindelse ifølge (Bi) -(B7), der kan være forestret med en alkoxygruppe eller foreligger 35 som carboxylsyreamid, der kan være mono- eller dialkyleret, og eventuelt 7 (C) som stabilisatorer en eller flere forbindelser valgt blandt følgende grupper: (Ci) dimethylsulfoxid, ethanol, polyoler eller poly-olestere, og 5 (C2) phospholipider, sukkerlipider, cyclodextriner, proteiner, cytochromer af C-rækken, vitaminer af E-rækken eller flavon-derivater uden sukkerrest, i fast eller flydende form.

Som metalkationer X kan der f.eks. anvendes 10 sådanne af alkalimetaller som lithium, natrium og kalium og af jordalkalimetaller som magnesium og calcium, men også kationiske former af andre metaller, såsom aluminium, zink og jern, eventuelt chelateret med citronsyre, ethyl-endiamintetraeddikesyre og lignende. Som aminkationer 15 kan nævnes sådanne af primære, sekundære eller tertiære aminer, såsom alkylaminerne, f.eks. mono-, di- og trime-thyl eller -ethyl-, -propyl-, -isopropyl-, -butyl-, -isobutyl- , -tert.butyl- samt N-(methylhexyl)-, N-methyl-hex-yl-, benzyl-, β-phenyl-ethylamin, ethylendiamin, diethyl-entriamin, pyrrolidin, piperidin, morpholin, piperazin, mono-, di- og triethanolamin, ethyldiethanolamin, n-bu-tylethanolamin, tris-(hydroxymethyl)-aminomethan og lignende. Egnede aminsalte er f.eks. sådanne af tryptamin, cystein samt de basiske aminsalte af lysin og arginin.

Egnede kvaternære ammoniumkationer er f.eks. tetramethyl-ammonium, tetraethylammonium og benzyltrimethylammonium.

Disse kationer kan også anvendes til saltdannelse af de anioniske former af forbindelserne ifølge (B.)-(B,.),

X O

hvorimod der til saltdannelse ved de kationiske former foretrækkes chlorid og fluorid.

Fortrinsvis omsættes enzymatisk fedtsyrerne med betegnelserne 18:2uj-6, 20:4ct>-6, 22:501-6, 18:3cO-3, 20:5co-3, 33:6co-3, 18:3lC-6, 30:3cO-6, 22:4cO-6 og 22 4u>-3, idet ifølge gængs nomenklatur det første tal 25 betyder antallet af carbonatomer, tallet efter : er antallet af dobbeltbindinger, og tallet efter cu er den første 8 o dobbeltbindings stilling regnet fra molekylets methylende. Produkterne, af bestemte fedtsyrer er kendt, og det er ligeledes kendt, at man ved anvendelse af visse stimulatorer kan fremskynde de umættede fedtsyrers omsætningshastighed samt dannelsen af bestemte produkter. Som det er

O

forklaret nærmere i den eksperimentelle del, gør den foreliggende opfindelse det muligt at stimulere dannelsen af bestemte fedtsyreprodukter på fordelagtig måde.

Det vil således afhænge fuldstændigt af den pågældende 10 opgave, hvorledes sammensætningen af tilberedningen i-følge opfindelsen skal vælges med hensyn til de umættede fedtsyrers art, stimulatorens art, men også stabilisatorens art. Når det for stimulatorernes vedkommende drejer sig om aminosyrer eller peptider, kan både L-15 og D-formerne, men også blandinger af D- og L-former anvendes .

2 3

Stimulatorer med formlen I, hvor R = R = -H, og R^ = -CE^-CHiNI^J-CC^H, samt peptider, som indeholder disse, eller liponsyre, hvis sidekæde kan være for-20 kortet, eller flavonoider er særlig foretrukne, fordi de forøger fedtsyrernes holdbarhed også uden yderligere stabilisatorer.

Også de mængder af umættede fedtsyrer, der skal anvendes i tilberedningerne ifølge opfindelsen, afhænger 25 af den ønskede anvendelse. Til præparativ fremstilling af prostaglandiner kan der til tilberedningen sættes enhver ønsket mængde. Til fremstilling af reagenstilberedninger ifølge opfindelsen, der skal tjene til anvendelse ved klinisk/kemiske opgaver, dvs. f.eks. til måling af 3q evnen hos celler eller cellebestanddele, såsom blodlegemer eller biopsimateriale fra nyrer, lunger, mave osv. , til at omsætte umættede fedtsyrer, eller at syntetisere prostaglandiner med en bestemt biologisk virkning, er sådanne reagensblandinger ifølge opfindelsen tilstrækkelige, der 35 indeholder 5 mg til 1 pg, fortrinsvis 100^,ug til 1 ng u-mættet fedtsyre. Reagenserne kan foreligge som suspen-

O

9 sion eller opløst,f.eks. i vand, ethanol, ethylenglycol, polyethylenglycolet eller glycerol eller blandinger af disse opløsningsmidler. Efter at opløsningsmidlet er fjernet, foreligger reagenserne i form af blandinger el- 5 ler sammenblandinger. Fjernelse af de organiske opløsningsmidler er særlig nødvendig, når reagensblandingerne skal anvendes til enzymkatalyserede reaktioner in vitro.

Enzymsystemer, der kan udvindes af biologisk materiale, til fremstilling af prostaglandiner er i og 10 for sig kendte. Det er ligeledes kendt, at der alt efter oprindelsen og arten af det biologiske materiale kan syntetiseres forskellige prostaglandiner. Reagenserne i-følge opfindelsen kan nu anvendes til fremstilling af disse prostaglandiner. Hertil blandes en opløsning eller en 15 suspension eller et homogenat af det biologiske materiale med tilberedningerne ifølge opfindelsen og inkuberes på kendt måde. Ved valg af stimulator kan syntesen af bestemte prostaglandiner styres indtil et vist omfang. Uønskede fedtsyre-produkter, som throiaboxan eller leuco-20 triener, kan ifølge kendt teknik inhiberes ved tilsætning af thromboxanhæmmere eller lipoxygenase-hæmmere. Dersom den umættede fedtsyre i reagenset foreligger i bunden form, f.eks. som ester, må der drages omsorg for, at den før eller under den enzymatiske omsætning overføres til 25 den frie form, eventuelt ved hjælp af de i det biologiske materiale i forvejen forkommende lipase-enzymer, eller ved tilsætning af egnede lipase-enzymer, eller allerede før den enzymatiske omsætning ved hjælp af den kendte fremgangsmåde ved kemisk hydrolyse. Efter ekstraktion 30 af det dannede prostaglandin eller de dannede prostaglandiner ved hjælp af egnede ekstraktionsmidler, f.eks. a-cetylacetat, kan det ønskede prostaglandin fremstilles i ren form, f.eks. ved hjælp af kendte chromatografiske metoder, såsom højtryksvæskechromatografi. Mængdeforholde-35 10

Ulv Ib/O lo bl ne mellem bestanddelene i tilberedningerne kan variere inden for et bredt interval. De afhænger af arten af den umættede fedtsyre, den anvendte stimulator eller stabilisator og også af det tilsigtede anvendelsesformål. Vægtforholdet 5 mellem umættet fedtsyre (beregnet på den frie syre) og stimulator ligger i reglen mellem 50 og 0,1, fortrinsvis mellem 20 og 0,5. Mængden af den tilsatte stabilisator er således afpasset, at vægtandelen heraf, beregnet på den frie umættede fedtsyre, ligger mellem ca. 0,5 og ca. 100, fortrinsvis 10 mellem 1 og 15 og især mellem 2 og ca. 8-10.

Biologiske systemer kan også in vivo behandles med de medicinsk egnede tilberedninger ifølge opfindelsen og endog med større fordel end det er muligt med de enkelte komponenter i tilberedningerne ifølge opfindelsen.

En systemisk (f.eks. intravenøs) indgift af tilberedningerne ifølge opfindelsen er ganske vist ikke hensigtsmæssig, fordi de umættede fedtsyrer kan metaboliseres, før de når frem til virkningsstedet. Direkte tilgængelige er derimod f.eks. celler i huden, munden, spiserør, næse, 20 Øjne, tarme og mave samt bronchier og lunger.

Prostaglandinmangeltilstande hos mennesker eller dyr, f.eks. i mave-tarmkanalen, der f.eks. fører til forstyrret mavesaftsekretion og til gastrointestinale læsioner (bylder), kan f.eks. behandles med tilberedninger-25 ne ifølge opfindelsen i form af orale (perorale) medicinformer. Tarmen kan også behandles med enterisk (mavesy-reuopløseligt) overtrukne medicinformer. Dersom man f. eks. ved forstoppelse ønsker at fremkalde diarré, kan der også anvendes lægemiddelformer til rektal terapi, me-30 dens der til udløsning af veer, f.eks. som indledning til fødsel, kan anvendes lægemiddelformer til intravaginal terapi. Fejlfunktioner i huden og det nedenunder liggende bindevævs område kan behandles ved hjælp af dermale tilberedninger ifølge opfindelsen. Orale tilberedninger 35 eller suppositorier til terapi af mennesker afmåles således, at de pr. doseringsenhed indeholder mellem 0,5 og c 0 11

LM\ 10/0 ΙΟ D I

2000 mg, i reglen mellem 2 og 1000 mg og især mellem 5 og 250 mg umættet fedtsyre. Ved særlig behandlingsresistente sygdomme, f.eks. ved hårdnakket forstoppelse, kan det også anbefales at anvende en doseringsenhed på op g til 6000 mg eller mere umættet fedtsyre. Det har overraskende vist sig, at de ligekædede fedtsyrer med 18, endvidere også de med 22 carbonatomer er lige så virksomme terapeutica til mave-tarmlæsioner som de, der indeholder 20 carbonatomer. Dette er af medicinsk betydning, fordi de 10 udløser færre bivirkninger, såsom diarré. En egnet terapi består f.eks. i indgift af en, to eller flere, fortrinsvis 3-8 enkeltdoseringer pr. dag af tilberedningen ifølge opfindelsen, idet den nødvendige mængde afhænger af antallet af enkeltdoseringer og også af den sygdom, der skal behandles, 15 og en dosering kan f.eks. også bestå af flere, samtidig indgivne enkeltdoseringer.

Opfindelsen angår således også anvendelsen af en tilberedning ifølge opfindelsen til fremstilling af et lægemiddel til ophævelse af prostaglandinmangeltilstande hos 20 mennesker eller dyr eller helbredelse eller forebyggelse af sygdomme i mavetarmkanalen.

Det er kendt, at der som uønskede bivirkninger af visse lægemidler kan optræde en manglende gastrointestinal tolerance, der fører til gastrointestinale byl-25 der. Til forebyggelse eller til behandling af sådanne gastrointestinale slimhindelæsioner er tilberedningerne ifølge opfindelsen ligeledes egnede. Behandlingen med tilberedningerne kan ske både før og samtidig eller efter indgift af de slimhindebeskadigende medikamenter.

30 Det er særlig fordelagtigt at kombinere reagenserne i- følge opfindelsen med de maveslimhindebeskadigende medikamenter i en egnet farmaceutisk tilberedning. Derved kan komponenterne både være opdelt, men også foreligge i blanding. Der kendes talrige lægemidler, der fører 35 til maveforstyrrelser eller gastrointestinale læsioner.

12

Lrlv 10/010 οι o

Hertil hører antirheumatica (steroide og ikke-steroide antiphlogistica), såsom corticosteroider (f.eks. "Cor-tison"), salicylsyre-derivater (f.eks. acetylsalicylsy-res, "Diflunisal") eller phenylalkansyrer (f.eks. "Piroxi-5 cam", "Acemetacin", "Pimetacin", "Nambumeton", "Carpro-fen", "Priprofen", "Fenclofenac", "Sulindac", "Indometa-cin", "Fenoprofen", "Tiaprofensyre", "Tolmetin", "Flurbiprofen" , "Suprofen", "Indoprofen", "Ibuprofen", "Naproxen", "Alclofenac", "Ketoprofen", "Diclofenac") eller 10 pyrazoloner C'Phenylbutazon", "Metamizol") , men også blodtrykssænkende midler (f.eks. "Reserpin"), kardilatorer på xanthinbasis (f.eks. "Pentoxifyllin"), tuberkulosehæmmende midler (f.eks. "Rifampicin") eller cytostatica (f. eks. "Methohexat").

15 De som farmaceutiske præparater medicinsk an vendte tilberedninger ifølge opfindelsen kan indeholde de gængse farmaceutiske hjælpe- og bærestoffer, der er egnede til tilberedning af oralt og dermalt (også f. eks. nasalt, sublingualt, r'ectalt og intravaginalt) akti-20 ve lægemidler. Hertil hører f.eks. stivelse, saccharose, calciumsulfat, gelatine, stivelsespasta, sirup, hvede- og majsstivelse, stearinsyre, stearatsalte, sukker, saccharin, næringsmiddelbestanddele til dyr, såsom fedtstoffer, carbonhydrater, proteiner og mineralske fa-25 ste stoffer; konserveringsmidler, sødemidler, farvestoffer, smagsstoffer eller suspensionsmidler, mineralske og vegetabilske olier, såsom jordnødde-, oliven-, natlys-, soja-, solsikke-, bomuldsfrø-, fiske- og sesamolie eller fraktioner af disse olier samt ioniske og ikke-ioniske 30 detergenter (f.eks. som beskrevet nedenfor), konserveringsmidler og antisvampemidler, såsom parabener, chlor-butanol, benzylalkohol, phenol, "Thimerosal", isotoni-ske midler, såsom sukker eller natriumchlorid. De fler-umættede fedtsyrer kan også adsorberes på polydextran 35 eller polycarylamid-, alkylsulfat- eller -phosphatgeler

O

13 eller på aluminiumhydroxid eller kiselsyre eller blandes hermed.

Præparaterne til dermal indgift er f.eks. vandige, alkoholiske eller polyol-holdige opløsninger eller 5 suspensioner, olieopløsninger eller -suspensioner, pulvere til efterfølgende indarbejdning i en dermal anvendelig form ved tilsætning af det nødvendige bærestof. Opløsningerne eller suspensionerne tilberedes med de nødvendige farmaceutiske hjælpe- og bærestoffer inde-10 holdende f.eks. fedtstoffer, voksarter, vaseline eller paraffin, samt konserveringsmidler, suspensions- og dispersionsmidler og isotoniske midler, som f.eks. methyl-og propylparabener, natriumchlorid, polyethylenglycoler, især polyethylenglycol 4000, natriumcarboxymethylcellu-15 lose, natriumalginat, polyvinylpyrrolidon, sorbimakrogcfl-oleat, kondensationsprodukt af ethylenoxid med fedtsyrer, f.eks. polyoxyethylenstearat, eller med fedtalkoholer, som f.eks. heptadecaethylenoxycetanol, eller med partielle estere, som f.eks. polyoxyethylen-sorbi'feol-monooleat, 20 eller hexitaner, som stammer fra sorbitol,som f.eks. poly-oxyethylen-sorbitan-monooleat. Suspensioner i olieagti-ge medier fremstilles ved, at det aktive stof disperge-res i de ovennævnte olier. Disse suspensioner kan indeholde midler, som forsinker adsorption, som f.eks. alu-25 miniummonostearat. Et tørret, f.eks. frysetørret, præparat, som på det ønskede tidspunkt kan blandes med en egnet farmaceutisk bærer, udgør endnu en udførelsesform. Præparater af det aktive stof, som f.eks. tabletter, kapsler, suppositorier, sirupper, opløsninger, sus-30 pensioner og eliksirer, indeholder farmaceutiske hjælpestoffer, som gør præparaterne egnede til disse indgiftsformer til opnåelse af den medicinske virkning. Blandingerne ifølge opfindelsen blandes med farmaceutiske hjælpestoffer, såsom lactose, stivelse, acaciegummi, ge-35 latine, talkum og lignende og oparbejdes til kapsler, tabletter og lignende eller til gængse suppositoriemas-

O

14 ser, f.eks. på triglyceridbasis, såsom "Witepsol"-sup-positoriemasser [H.P. Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiet, bd. 9, 548-50 og 632-634 (1971) eller til intravaginale suppositorier, USA 263.Q26 og 663.145]; eventuelt fedtalkoho-5 ler, faste carbonhydrider, såsom vaseline eller paraffin solidum, mættede fedtsyrer, såsom laurinsyre, myristin-syre, palmitinsyre og stearinsyre, emulgatorer, såsom ethoxylerede triglycerider, polyethoxylerede planteolier, fedtsyresukkerestere, silikone, gelatine, methylcellulo-se, hydroxypropoxycellulose, hydroxypropylcellulose, po-lyethylenglycoler, polyvinylpyrrolidon, polyvinyl-alkohol, polyacrylsyre og disses salte blandet, indeholdende eller blandet med vand, suspensionsmidler, saccha-15 rose, konserveringsstoffer eller hydro-alkoholiske bærere og oparbejdet til suspensioner, opløsninger eller e-liksirer. Det kan være ønskeligt, at den umættede fedtsyre frigøres langsomt og forhalet fra den farmaceutiske tilberedning. En sådan forhalet frigørelse kan opnås 20 ifølge kendt teknik. Det afhænger af det biologiske mediums pH, om den forhalede frigørelse opnås med f.eks. polystyren eller polyacrylderivater ("Eudragit'^j eller f.eks. ved binding til en egnet ionbytter. Der kan også fremstilles enterisk overtrukne præparater, f.eks. som 25 tabletter, kapsler, piller, små kugler eller mikrokugler. De foreligger i form af doseringsenheder, f.eks. som enkelte tabletter eller kapsler eller i form af en kollektion af piller, mikrokugler eller mikrosfærer, som har enteriske egenskaber og protraheret virkning. Sådanne 30 enterisk overtrukne præparater og de hertil anvendte o-vertræksstoffer er beskrevet i litteraturen, f.eks. i US patentskrifterne nr. 2.093.462 og 2.196.768 (cellu-loseacetatphthalat), 2.897.121 (copolymere af styren og maleinsyre), 3.081.233 m.v.

35

IV IU/vl ΙΟ D I

15

Opfindelsen angår også en lægemiddelpakning, hvormed stofferne ifølge krav 1-15 foreligger adskilt, men i det mindste ét stof adskilt og andre i forbindelse med hinanden, men til fælles indgift.

5

Eksperimentel del

Fremgangsmåde 1; Afprøvning af de umættede fedtsyrers holdbarhed i tilberedningerne Substansers stabiliserende virkning på fleru-10 mættede fedtsyrer afprøves på følgende måde:

Prøve A til vandopløselige substanser: 0,125 mg u-mættet fedtsyre eller natriumsalt (jf. tabeller) ("Na-triumarachidonat", Fa. Sigma, Hiinchen, Tyskland) opløses i 0,05 ml vand. Heri blandes 0,2 ml vandig opløsning, 15 som indeholder 2 mg stabilisator og yderligere kan indeholde 2 mg stimulator (jfr. tabel I), hvorpå der straks udtages 0,1 ml, ekstraheres og analyseres (jfr. nedenfor). Yderligere oparbejdning ifølge modifikation 1 eller 2.

20 Modifikation 1 til vandige opløsninger: Efter in kubation i 24 timer ved 37°C udtages igen 0,1 ml, eks-traheres og analyseres (jfr. nedenfor).

Modifikation 2 til faste blandinger (lyophilisater); Prøveopløsningen lyophiliseres, lyophilisatet inkuberes i 24 timer ved 37°C, derpå udtages igen, opløst 25 i den tidligere vandmængde, 0,1 ml, ekstraheres og analyseres (jfr. nedenfor).

Prøve B til ikke-vandopløselige substanser: 0,125 mg umættet fedtsyre (arachidonsyre, 5,8,11,14,17-eicosapen- taensyre, 9,11,14-eicosatriensyre, fa. Sigma, Munchen) 30 opløses i 0,05 ml ethanol eller dimethylsulfoxid. Hertil sættes 0,2 ml ethanol (eller dimethylsulfoxid), som indeholder 2 mg stabilisator og yderligere kan indeholde 2 mg stimulator (jfr. tabel I), der udtages straks 0,1 ml og ekstraheres og analyseres som nedenfor. Yder-35 ligere behandling ifølge modifikation 1 eller 2.

16 o

Modifikation 1 til opløsninger: Efter inkubation i 24 timer ved 37°C udtages igen 0,1 ml, blandes med 0,1 ml vand, ekstraheres og analyseres.

Modifikation 2 til faste blandinger; Den tilovers-5 bievne opløsning befries for opløsningsmidlet, inkuberes i 24 timer ved 37°C, opløses igen i 0,15 ml opløsningsmiddel, der udtages 0,1 ml, blandes med 0,1 ml vand, ekstraheres og analyseres.

Ekstraktion og analyse. Til de opnåede prøver 10 sættes 0,05 ml 1,2 M vandig citronsyreopløsning, der ekstraheres 2 gange med hver 0,5 ml acetylacetat, acetylacetatet fjernes fra de kombinerede ekstraker, og remanensen opløses i 0,8 ml methanol og analyseres ved hjælp af højtryksvæskechromatografi (HPLC) (kolonne "Rad Pak" 15 C-18,100 x 8 mm, fra fa. Waters, Konigstein, Tyskland, 1,5 ml/min., elueringsmiddel 800 ml methanol, 200 ml vand og 0,1 ml iseddike). Adskillelsen sker med en i handelen værende UV-detektor ved 206 nm.

Fremgangsmåde 2; Prostaglandinsyntese 20 0,3 ml 0,03 M kaliumphosphatpuffer, pH 8,0. in deholder 0,5 mg enzym (som fåresædblærevesikler) [Biochemistry 10, 2372 (1971)] eller homogenat af den indre nyre-medulla [Life Sciences .26, 765 (1980)], 2,75^,ug 14-C-ara-chidonsyre (0,5^,uCi) og 0/5 mg stimulator og eventuelt 25 0,5 mg stabilisatorstof (jf. tabel I). Efter 10 minut ters inkubation ved 37°C afbrydes med 0,05 ml 1,2 M citronsyre, ekstraheres to gange med hver 0,5 ml acetylacetat, de kombinerede ekstrakter befries for opløsningsmiddel , remanensen opløses i 0,2 ml methanol, der fortyn-30 des 1:1 med vand og adskilles via HPLC (kolonne "Nucleo-sil" C-18, 125 x 4,6 mm, fa. Bischoff, Leonberg, Tyskland, elueringsmiddel 300 ml acetonitril, 700 ml vand, 1 ml iseddike, efter 30 minutter ren methanol). Adskillelsen af de radioaktive fraktioner sker med en monitor 35 ("LB 504" fra fa. Berthold, Wildbad, Tyskland). De dan- DK 167518 B1 17 nede produkter, såsom 6-keto-prostaglandin-F2a, prostaglandin prostaglandin-F2a. og prostaglandin D2, adskilles under disse betingelser.

5 Tabel I; Stimulering af prostaglandindannelsen i stabiliserede fedtsyretilberedninger Prostaglandinerne PGE2, PGF2a og PGD2 kvantificeres som produkter af arachidonsyre ved hjælp af fremgangsmåde 2, og summerne refereres som "totalprostaglan-10 din" til 100%. Den mængde "totalprostaglandin", der opnås uden tilsætning af stimulator*·,sættes til f = lj den efter stimulering opnåede mængde beregnes i forhold hertil. f = 2 eller f = 3 betyder altså dobbelt eller tredobbelt stimulering under fremgangsmåde 2's betingelser.

15 Prøvens stabilitet undersøges ved hjælp af fremgangsmåde 1 (højre spalte). Uden tilsætninger (højre spalte: A) opnås under disse betingelser i vandig opløsning 25-28% arachidonsyre. Værdier over 25-28% betyder altså stabilisering, værdier under 25-28% destabilisering. Eksem-20 pel 1 foretages uden stimulator. Virkningerne opnås med stabiliserede tilberedninger ifølge de tilsvarende betegnede eksempler. De med hensyn til stabilisering afprøvede stoffer (mægnder, jf. fremgangsmåde 1) er: (A) vandig opløsning uden tilsætning af stabilisator, (B) ethanolisk opløs-25 ning uden yderligere tilsætning, (C) pyridinopløsning, (D) med rutin, forud opløst i dimethylsulfoxid, hvorpå dimethyl-sulfoxid fjernes, (E) som (B) med lecithin, ethanol fjernet, (F) som (A) med "Cytochrom c" fra hestehjerte (fa. Boehringer, Mannheim, Tyskland), (G) som (A) med methæmoglobin 30 (human) (fa. Sigma, Munchen, Tyskland), (H) som (A) med serumalbumin fra okse (fa. Calbiochem, Frankfurt, Tyskland), (J) som (A) eller (B), opløsningsmiddel dog fjernet, (K) som (J) med "Cytochrom c, (L) som (J) med hæmoglobin (humant) (fa. Behringwerke, Marburg, Tyskland), (M) som (J) med hu-35 manserumalbumin (fa. Behringwerke, Marburg, Tyskland).

Tabel I ; 18 i i i i·« t

Arachidonsyre-produkt (fremgangsmåde 2) ;

Stimulator relativt. PGE2 PGF2alpha P®2 Holdbarhed — total (% tilbaqevæ- prosta’- rende arachidon-

Nr* glandin syre efter fr.g.måde __________________________-__________________________________________1]__________ _£ % i_%_

Sam. lign.

wtasigeise '· · A 26 C 90 1) uden stimulator l 83 2 15 B 100 H 100 C 13 J 0 D 97 X 100 E 90 L 85 F 98 M 100

Eksempler med forbindelser, der ikke indgår i tilberedningerne omfattet af opfindelsen 2) m-Cresol 0,61 98 0 2 3) Phenol 0,95 77 5 18 4) L-Phenylalanin 0,9 80 2 18 trans-kanelsyre °»9

Eksempler med forbind. med formel I

6) Rj —CH2-CH-NH2 5,5 81 2 17 A 91 J 98 CO2H B 100 X 100 C 67 M 100

R2 * R3 —H

7) Ri «-CH2-CH2-NH2 *»° 80 3 17 A 87

R2 * R3 —H

8) Ri —CH2-CH2-CO2H A 5 83 1 16 A 89 R2 * R3 ·*Η DK 167518 B1 19 9) Ri — CH2-Oi-NH2 9,4 70 14 16 A 15 F 97 C02H B 97 G ' 96 C 93 M 100

R2 —OH R3 — H

10) Ri —CH2-CH2-NH2 6,0 52 3S 13 A 17 H 100 R2 —OH B 95 K 98 R3 —H C 9 M 100

O

11) Ri ““ffl2-gjNH-£-CH3 (Stimulering: positiv) A (stabilis.: positiv) 12) Ri —CHQH-CH2-NH2 8,3 66 17 17 A 11 F 99 R2 —OH B 93 G 95 R3 — H D 93 M 100 13) Ri — CH0H-CH2-NHCH3 13 70 12 18 A 9 H 97

RZ —OH B 92 JO

R3 —Η E 94 M 100 14) Ri —OH 3,2 69 12 19 A 7 G 99 R2 « R3 —H D 97 K 97 .. F 98 M 99 15) Ri —CO2H 5,1 71 12 17 A 22 F 98 R2 —OCH3 B 100 G 96 R3 —H D 98 J 17 16) Ri — C02H 4,5 69 13 18 A 21 F 98 R2 - R3 —Η B 98 G 96 D 97 H 99 17) Rj -CH-mC02H 5,7 70 13 17 A 19 H 99

Il G 95 M 98

Eksempler med forbindelser med formlen II

18) Ri —C02H 9,8 76 3 21 A 18 H 98 R2 "NH2 “I® I »i, r3 —H b yy 19) Ri — C02H 10,1 79 3 18 A 17 E 95 p- k-NHi B 95 F 97

Rl-^U2 D 96 G 95 1

Ri — C02H 5,1 82 2 16 A 20 F 98 R7 - Rt —Η B 100 H 99 R2 K5 E 96 M 99 20 21) Ri —COzH 5,7 80 3 17 X 18 G 962) RZ —Η B 99 H 97 R3 —OH F 98 J 12 22) Ri —H 10,6 75 S 20 A 16 F 98 R2 —NH2 B 99 K 98 R3 —OH E 96 L 100 23) Ri —H 6,1 81 3 16 A 20 F 98 R2 —NH2 D 100 G 97 R3 —Η E 97D H 100

Eksempler med tyrosin-(Tyr)-el. tryptophan-(Trp)-holdige peptider 24) Trp-Trp 11,7 75 2 23 A 17 D 97 B 98 F 97 C 12 G 96 25) Gly-Trp-Gly 13,0 79 1 20 A 18 H 99 F 96 J 7 G 97 K 99 26) Trp-Ala 12,6 77 1 22 A 19 E 92 D 98 F 96 27) Leu-Trp 17,0 77 1 22 A 20 F 98 B 99 M 100 28) Trp-Mst-Asp-Phe 11,8 73 7 20 A 17 D 97^ D 97 F 96 29) Leu-Trp-Met 10,8 69 9 22 A 18 H 99 B 99 J 7 D 97 K 100 30) Tyr-Tyr-Tyr-0CH3 5,3 75 4 11 A 94 J 98 B 98 K 100 31) Tyr-Trp 6,3 73 3 14 A 80 D 98 B 97 M 100 32) Cyclo-Trp-Tyr (Stimulering: positiv) (Stabilis.: positiv)

Eksempler med svovlholdige forbindelser 33) L-Cystein 4,0 56 17 27 A 9 D 95 B 95 H 96 D 943) M 96 34) D-Cystein 3,5 63 14 23 A 13 H 97 D 96 J S2) D 95 K 98 DK 167518 Bl 21 35) Glutathion 13,5 100 0 0 A 0 H 91

B 80 JO

C 0 L 92 36) Liponsyre 5,5 43 49 8 A 92 G 100 E 94 J 90 F 100 L 100 37) N-Acetylcystein 4,0 61 14 25 A 9 E 93 B 93 F 98 D 95 G 98 38) Tyr-Cys-Glu-His- -Phe-Axg-Trp-Gly (Stimulering: positiv) M 100

Svovlholdige forbindelser, der ikke indgår i tilberedningerne 39) Dithiothreit 0,8 40) Dithioerythrit 0,85 41) Cystin 1,0 85 0 15 · 4 2) ‘Dihydroliponsyre 1,0 43) Cysteamin 0,9 44) Mercaptoethanol 0,95 45) Coenzym A 1,0 46) Pantethein 0,95 1) - 3); I stedet for arachidonsyre anvendes (1) 5,8,11,14,17-eicosa-pentaensyre eller (2) 8,11,14-eicosatriensyre eller (3) 9,12,-15-linolensyre.

4): Ganma-globulin fra harer (fa. Calbiochem, Frankfurt).

22

Tabel II

Undersøgelser af egenskaber hos vitaminer, flavonoider, cyclo-dextriner og (sukker)-lipidforbindelser. De ved stabiliseringsforsøget anvendte fedtsyrer er anført i parentes. (A = arachi-donsyre, E = 5,8,11,14,17-eicosapentaensyre)

Arachidonsyre-produkt Stabilisering (fremgangsmåde 2) (% tilbagevær.

umættet fedtsyre

Stimulator relativt P6E2 PGF2alpha PGD2 eft. fremg. 1)

Eks. totalpro- „ staglan-

Nr* din _f % %_%_

Vitaminer, der ikke indgår i tilberedningerne 47) Vitamin Q10 0,8 8 78 14 8% (A) 48) Vitamin B12 0% (å) 49) Vitamin C 0% få)

Vitaminer, der indgår i tilberedningerne 50) DL-alpha-Tocopherol *78% (A) 51) D-alpha-Tocopheryl- quinon 0,5 80 5 15 98t (A)

Sukkerholdige flavonoider, der indgår i tilberedningerne 52) Rutin 6 76 6 18 97% (A) 96% (E) 53) Phloridzin 3 80 2 18 97% (E) 54) Naringin 1 83 2 15 96% (A)

Flavonoider uden sukkerandel, der indgår i tilberedningerne 55) Naringenin 1,S 80 0 20 96% (A) 56) Kaanpferol 0,5 76 11 13 98% (E) 23 DK i67b lo di 57) Quercetin 0,3 72 18 10 92% (E) 58) Catechin 0,2 70 18 12 90% (A) 59) Epicatechin 0,15 71 17 12 89% (A) 60) Phloretin 0,15 76 11 13 97% (A) 61) Morin 0,08 54 27 19 100% (E)

Alle undersøgte flavonoider stabiliserer de flerunættede fedtsyrer.

Ifølge opfindelsen er de sukkerholdige flavonoider særlig egnede, fordi de stimulerer dannelsen af prostaglandiner. Især til anvendelse in vitro er flavonoider uden sukkerandel ikke så godt egnede, fordi de hæmmer prostaglandinsyntesen.

Cyclodextriner, der indgår i tilberedningerne ifølge opfindelsen 62) alpha-Dextrm ...

(Cyclohexaaroylose) %AJ

63) beta-Dextrin

(Cydoheptaaraylose) 901 *AJ

88% (E) 64) gamma-Dextrin fQyclooctaaniYlose) 75% (A)

Lipider, der indgår i tilberedningerne ifølge opfindelsen (fa. Serva, Heidelberg) 65J Saccharose-palmitat- (A) stearat 7 ^ 92% (E) SPS-7 66) Saccharose-palmitat- , , stearat 15 ' 92% (A) SPS-15 67) Dioctylsulfosuccinat, 94% (A)

Na-salt 24 o

Eksempler på stabile tilberedninger ifølge opfindelsen inkl. farmaceutiske tilberedninger Eksempel 68-70

Under sterile betingelser opløses 50 ml natri-5 umarachidonat, 500 mg serumalbumin fra okse og 500 mg L-tyrosin i 10 ml bidestilleret vand og opbevares i en brun flaske ligeledes under sterile betingelser. 93,5% af den oprindeligt tilstedeværende arachidonsyre genfindes efter opbevaring i 6 uger ved stuetemperatur, medens 10 den samme natriumarachidonsyreopløsning uden tilsætninger efter dette tidsrum praktisk taget ikke indeholder arachidonsyre (indhold0,8%). Den således fremstillede stabiliserede opløsning

Eksempel 68) fyldes til medicinske formål i 15 en drikkeampul

Eksempel 69) får en tilsætning af 15 mg fåre-sædblærevesikler, inkuberes i 60 minutter ved 37°C, og de så-20 ledes dannede prostaglandiner ekstraheres og fremstilles præparativt som beskrevet under fremgangsmåde 2, eller 25 Eksempel 70) anvendes til klinisk-biokemisk bestemmelse af thrombosedannel-sestilbøjelighed hos patienter, idet der til 0,01 ml af denne stabiliserede natriumarachidonat-30 opløsning sættes 1 ml lyset blod- pladerigt blodplasma fra disse patienter, hvorefter der ekstraheres efter 30 minutters inkubation ved 25°C. Det dannede prosta- 35 glandin D^ (fremgangsmåde 2) tje ner som målestok for patienternes tilbøjelighed til thrombosedannelse.

DK 167518 81 25

O

Eksempel 71 100 mg 5,8,11,14,17-eicosapentaensyre og 500 mg rutin optages sammen i 15 ml dimethylsulfoxid, dime-thylsulfoxidet fjernes helt, og remanensen overføres 5 sammen med acetylsalicylsyre-krystaller (500 mg "R 95 D",

Rohm Pharma, Darmstadt, Tyskland) i gelatinekapsler størrelse 0 (fa- Kapsugel, Basel,Schweiz).

Eksempel 72 10 I 10 ml bidestilleret vand irøres 1 g L-a-le- cithin, β,γ-dipalmitoyl (fa. Calbiochem GmbH, Frank-furt/Main, Tyskland), 100 mg arachidonsyre, 100 mg li-ponsyre og 100 mg DL-a-tocopherolacetat (fa. Aldrich, Steinheim, Tyskland) og homogeniseres ved ultralydbe-15 handling.

Eksempel 73 170 mg hvedestivelse, 450 mg lactose, 20 mg magnesiumstearat, 5 mg natriumarachidonat, 10 mg tryp-20 tophan og 20 mg "Troxerutin" (fa. Aldrich, Steinheim,

Tyskland) formales, blandes intimt og presses til en tablet.

Eksempel 74 25 150 mg hvedestivelse, 435 mg lactose, 15 mg magnesiumstearat, 5 mg natriumarachidonat og 15 mg li-ponsyre blandes intimt ved formaling og presses til en tablet.

30 Eksempel 75 10 mg natriumarachidonat optages med 20 mg serotonin og 100 mg hæmoglobin (reduceret, fa. Calbiochem GmbH, Frankfurt) i 3,5 ml bidestilleret vand og lyophi-liseres. Remanensen kan oparbejdes til dosisenheder i oc kapsler (gelatinekapsler størrelse 0, fa. Kapsugel, Basel, Schweiz).

26 o

Eksempel 76 15 mg 8,11,14-eicosatriensyre optages sammen med 50 mg N-acetyleystein og 100 mg cytochrom c fra hestehjerte (fa. Aldrich, Steinheim, Tyskland) i 2 ml 5 bidestilleret vand.

Eksempel 77 40 mg arachidonsyre optages under sterile betingelser sammen med 180 mg β-cyclodextrin og 60 mg 5-10 -hydroxytryptamin i 50 ml bidestilleret vand.

Eksempel 78 a-f

Der fremstilles 6 tilberedninger a, b, c, d, e og f, som hver i 1 ml ethanol indeholder 0,7 mg arachidonsyre og 15 (a) 1, (b) 5, (c) 10, (d) 25, (e) 50 og (f) 100 mg li- ponsyre. Efter fjernelse af ethanolen kan disse tilberedninger opbevares i mindst 12 dage ved 37°C. Bestemmelsen ifølge fremgangsmåde 2 giver efter 12 dage stadig 99+2% arachidonsyre i tilberedningerne.

20

Eksempel 79-82 0,125 mg arachidonsyre optages i 0,25 ml vand, som indeholder 25, 50 eller 75 vægt% dimethylsulfoxid, og inkuberes ved 37°C. Efter 24 timer følger ekstraktion 25 og analyse. En typisk analyse giver % dimethylsulfoxid % arachidonsyre Eksempel 79 5 54

Eksempel 80 25 75 30 Eksempel 81 50 83

Eksempel 82 75 94

Eksempel 83 2 g arachidonsyre samt 1 g tyrosamin røres i 35 o 5 ml glyceroltriacetat og fordeles ved 30 C ved hjælp af ultralydbehandling.

Claims

1. Tilberedninger til syntese af prostaglandiner og hydroxyfedtsyrer i biologiske systemer, kendetegnet ved, at de indeholder 5 (A) en eller flere umættede fedtsyrer, der er karak teriseret ved 3-5 isoleret anbragte dobbeltbindinger og 18--22 carbonatomer i lige kæder, hvilke fedtsyrer ved et eller to carbonatomer i stilling 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19 eller 20 kan være methyleret eller ethyleret, som fri carboxylsyre 10 med endestillet -CO2H eller som carboxylsyreamid eller -C02X, idet X er en under sure betingelser fraspaltelig beskyttelsesgruppe eller et 1- eller 2-lysophospholipid eller en metal- eller aminkation eller den kationiske form af en ionbytter, og 15 (B) som stimulatorer med delvis samtidig stabilise rende virkning en eller flere forbindelser valgt blandt (Bi) en phenolisk forbindelse med formlen R1 20 5_Ml 2 (I) OH hvor R2 og R3 er hydroxylgrupper eller hydrogen, og R1 er -OH, -C02H, -CH2-C02H, -CH=CH-C02H, -CH2-CHR4R5,

25 -CHOH-CH2-NH-R6, hvor R4 er -H eller -C02H, og R5 er -H eller -NH2, og R6 er -H, -CH3 eller -C2H5, (B2) et indol-derivat med formlen RXO^0VHr7 N hvor R7 er hydrogen eller -COOH, R8 er hydrogen eller -NH2, og R9 er hydrogen eller OH, 35 (B3) cystein, homocystein eller liponsyre, hvis a- cycliske alkylgruppe kan være forkortet med op til fire 28 methylengrupper, (B4) et peptid bestående af maksimalt 10 aminosyrer, hvor en eller flere af aminosyrerne hver er erstattet med en af forbindelserne ifølge (8^-(83), 5 (B5) en aminoforbindelse ifølge (B^)—(B4), hvori et N-atom kan være substitueret med en 0^4-alkanoylgruppe, (Bg) et flavon-derivat, der er substitueret med i det mindste én hydroxylgruppe, som bærer en sukkerrest, (B7) et salt af de ioniske former af forbindelserne 10 (B^)—(Bg) og eventuelt (Bg) en carboxylsyreforbindelse ifølge (B^J-fBy), der kan være forestret med en alkoxygruppe eller foreligger som carboxylsyreamid, der kan være mono- eller dialkyleret, og eventuelt 15 (C) som stabilisatorer en eller flere forbindelser valgt blandt følgende grupper: (C^) dimethylsulfoxid, ethanol, polyoler eller poly-olestere, og (C2) phospholipider, sukkerlipider, cyclodextriner, 20 proteiner, cytochromer af C-rækken, vitaminer af E-rækken eller flavon-derivater uden sukkerrest, i fast eller flydende form.

2. Tilberedninger ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de polyoler eller polyolestere, der skal 25 anvendes som stabilisatorer i gruppen (C-l) , er glycerol, ethylenglycol, polyethylenglycol eller glyceroltriacetat.

3. Tilberedninger ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de som fedtsyrer i gruppen (A) indeholder 18:2ω-6-, 20:4ω-6-, 22:5ω-6-, 18:3ω-3-, 20:5ω-3-, 22:6ω-3-, 30 18:3ω-6-, 20:3ω-6-, 22:4ω-6- eller 22:4<u-3-fedtsyrer, som stimulatorer i gruppe (B) forbindelser med formlen I, hvori R2 og R3 er hydrogen, og R1 er gruppen -CH2-CH(NH2)COOH, eller peptider, som indeholder sådanne forbindelser, eller liponsyre, hvis sidekæde kan være forkortet med op til 4 35 CH2-grupper, eller et flavon-derivat, og at eventuelt ingen tilsætning af en stabilisator fra gruppen (C) er nødvendig. DK 167518 B1 29

4. Tilberedning ifølge krav 1, kendetegnet ved, at stabilisatorerne i gruppe (C) er /3-dextrin, lecithin, proteiner, der kan fremstilles af humant eller pattedyreblod, eller cytochromer af C-rækken.

5. Tilberedninger ifølge krav 1 og 3, kende tegnet ved, at der som sukkerholdige flavon-derivater anvendes rutin eller troxerutin.

6. Tilberedninger ifølge krav 4, kendetegnet ved, at de som stabilisatorer i gruppe (C) indeholder 10 hæmoglobin eller methæmoglobin, globulin eller serumalbumin.

7. Tilberedninger ifølge krav 1-6, kendetegnet ved, at de som fedtsyrer i gruppe (A) indeholder arachidonsyre, 5,8,11,14,17-eicosapentaensyre, 8,11,14-eico-satriensyre eller 9,12,15-linolensyre.

8. Tilberedninger ifølge krav 1-7, kendeteg net ved, at vægtforholdet mellem umættet fedtsyre i gruppe (A) og stimulator i gruppe (B) ligger mellem 50 og 0,1.

9. Tilberedninger ifølge krav 8, kendetegnet ved, at vægtforholdet ligger mellem 20 og 0,5.

10. Tilberedninger ifølge krav 1-7, kendeteg net ved, at vægtforholdet mellem umættet fedtsyre i gruppe (A) og stabilisator i gruppe (C) ligger mellem 100 og 0,5.

11. Tilberedninger ifølge krav 10, kendetegnet ved, at vægtforholdet ligger mellem 15 og 1.

12. Tilberedninger ifølge krav 1-11, kendeteg net ved, at de foreligger i en form, der skal anvendes dermalt, oralt, peroralt eller som suppositorier.

13. Tilberedninger ifølge krav 12, kendetegnet ved, at de pr. doseringsenhed indeholder mellem 0,5 30 og 2000 mg, fortrinsvis mellem 5 og 250 mg umættet fedtsyre.

14. Tilberedninger ifølge krav 1-13, kendetegnet ved, at de umættede fedtsyrer i det mindste delvis foreligger i retarderet form.

15. Tilberedninger ifølge krav 1, kendeteg- 35 net ved, at de indeholder en eller flere forbindelser fra gruppe (A), en eller flere forbindelser fra gruppe (B), 30 for så vidt de har stabiliserende virkning, og eventuelt en eller flere forbindelser fra gruppe (C).

16. Anvendelse af en tilberedning ifølge krav 1-15 til fremstilling af et lægemiddel til ophævelse af prosta- 5 glandinmangeltilstande hos mennesker eller dyr.

17. Anvendelse af en tilberedning ifølge krav 16, kendetegnet ved, at lægemidlet anvendes til helbredelse eller forebyggelse af sygdomme i mavetarmkanalen.

18. Lægemiddelpakning, hvormed stofferne ifølge krav 10 1-15 foreligger adskilt, men i det mindste ét stof adskilt og andre i forbindelse med hinanden, men til fælles indgift.