ES2199257T3 - Compuestos de ester y acido boronico, sintesis y usos. - Google Patents

Compuestos de ester y acido boronico, sintesis y usos.

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Abstract

SE MUESTRA AQUI UN METODO PARA REDUCIR LA TASA DE DEGRADACION DE PROTEINAS EN UN ANIMAL QUE SUPONE LA PUESTA EN CONTACTO DE CELULAS DEL ANIMAL CON CIERTOS COMPUESTOS ACIDOS Y DE ESTER BORONICO. TAMBIEN SE MUESTRAN AQUI NUEVOS COMPUESTOS ACIDOS Y DE ESTER BORONICO, SU SINTESIS Y USOS.

Description

Compuestos de éster y ácido borónico, síntesis y usos.
Fundamento de la invención 1. Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos de éster y ácido borónico, a su síntesis y a su uso.
2. Descripción de la técnica relacionada
La síntesis de compuestos de éster y ácido peptidil borónico N-terminal, en general y de compuestos específicos, ha sido descrita con anterioridad (Shenvi et al., documento USPN 4.499.082 expedido el 12 de febrero de 1985; Shenvi et al., documento USPN 4.537.773 expedido el 27 de agosto de 1985; Siman et al., documento WO 91/13094 publicado el 19 de septiembre de 1991; Kettner et al., J. Biol. Chem. 259 (24): 15106-15114 (1984)). Se ha demostrado que estos compuestos son inhibidores de ciertas enzimas proteolíticas (Shenvi et al., documento USPN 4.499.082 expedido el 12 de febrero de 1985; Shenvi et al., documento USPN 4.537.773; Siman et al., documento WO 91/13094 publicado el 19 de septiembre de 1991; Kettner et al., J. Biol. Chem. 259 (24): 15106-15114 (1984)). Se ha demostrado que una clase de compuestos de éster y ácido borónico de tripéptido N-terminal inhiben el desarrollo de células cancerosas (Kinder et al., documento USPN 5.106.948 expedido el 21 de abril de 1992). Se ha demostrado que una amplia clase de compuestos de éster y ácido borónico de tripéptido N-terminal y análogos de los mismos inhiben la renina (Kleeman et al., documento USPN 5.169.841 expedido el 8 de diciembre de 1992).
En la célula, hay una ruta proteolítica soluble que requiere ATP e implica la conjugación covalente de las proteínas celulares con el pequeño polipéptido ubiquitina (``Ub'') (Hershko et al., A. Rev. Biochem. 61: 761-807 (1992); Rechsteiner et al., A. Rev. Cell Biol. 3: 1-30 (1987)). Después de ello, las proteínas conjugadas son hidrolizadas por un complejo proteolítico 26S que contiene una partícula degradativa 20S llamada el proteasoma (Goldberg, Eur. J. Biochem. 203: 9-23 (1992); Goldberg et al., Nature 357: 375-379 (1992). Se sabe que este sistema multicomponentes cataliza la degradación selectiva de proteínas altamente anómalas y proteínas reguladoras de vida corta.
El proteasoma 20S está compuesto por aproximadamente 15 subunidades distintas de 20-30 kDa. Contiene tres actividades de peptidasa diferentes que segmentan específicamente en el lado del carboxilo de los aminoácidos hidrófobos, básicos y ácidos (Goldberg et al., Nature 357: 375-379 (1992); Goldberg, Eur. J. Biochem. 203: 9-23 (1992); Orlowski, Biochemistry 29: 10289 (1990); Rivett et al., Archs. Biochem. Biophys. 218: 1 (1989); Rivett et al., J. Biol. Chem. 264 (12.215-12.219 (1989); Tanaka et al., New Biol. 4: 1-11 (1992)). Estas actividades de peptidasa se denominan actividad tipo quimotripsina, actividad tipo tripsina y actividad hidrolizante de peptidilglutamilo, respectivamente.
Se han publicado varios inhibidores de las actividades de peptidasa del proteosoma (Dick et al., Biochemistry 30: 2755-2734 (1991); Goldberg et al., Nature 357: 375-379 (1992); Goldberg, Eur. J. Biochem. 203: 9-23 (1992); Orlowski, Biochemistry 29: 10289 (1990); Rivett et al., Archs. Biochem. Biophys. 218: 1 (1989); Rivett et al., J. Biol. Chem. 264: 12.215-12.219 (1989); Tanaka et al., New Biol. 4: 1-11 (1992); Murakami et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83: 7588-7592 (1986); Li et al., Biochemistry 30: 9709-9715 (1991); Goldberg, Eur. J. Biochem. 203: 9-23 (1992); Aoyagi et al., Proteases and Biological Control, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1975), p. 429-454.
Stein et al., en el documento WO 95/24914, describen el uso de aldehídos de péptido para 1) reducir la velocidad de pérdida de masa muscular en un animal, poniendo en contacto células del músculo con un inhibidor del proteasoma de aldehído de péptido, 2) reducir la velocidad de rotura de proteína intracelular en un animal, poniendo en contacto células del animal con un inhibidor del proteasoma de aldehído de péptido, y 3) reducir la velocidad de degradación de la proteína p53 en un animal, administrando al animal un inhibidor del proteasoma de aldehído de péptido.
Palombella et al., en el documento WO 95/25533, describen el uso de aldehídos de péptido para reducir el contenido y la actividad celulares de NF-\kappaB en un animal, poniendo en contacto células del animal con un inhibidor de aldehído de péptido de la función del proteosoma o de la conjugación de la ubiquitina.
El factor de transcripción NF-\kappaB o otros miembros de la familia rel de complejos de proteína desempeñan un papel central en la regulación de un juego de genes notablemente diverso implicados en las respuestas inmunitaria e inflamatoria (Grilli et al., International Review of Cytology 143: 1-62 (1993)). El NF-\kappaB existe en forma inactiva en el citoplasma, complejado con una proteína inhibidora, I\kappaB. Para que el NF-\kappaB se vuelva activo y lleve a cabo su función, ha de entrar en el núcleo de la célula. Sin embargo, no puede hacerlo hasta que la porción I\kappaB del complejo sea eliminada, proceso que los expertos en la técnica denominan activación o procesamiento del NF-\kappaB. En algunas enfermedades, el rendimiento normal de su función por el NF-\kappaB puede ser perjudicial para la salud del paciente. Por ejemplo, el NF-\kappaB es esencial para la expresión del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). En consecuencia, un proceso que previniese la activación del NF-\kappaB en pacientes que padecen de tales enfermedades podría ser terapéuticamente beneficioso.
Goldberg y Rock, en el documento WO 94/17816, presentado el 27 de enero de 1994, describen el uso de inhbidores del proteasoma para inhibir la presentación de antígenos del MHC-1. Se demuestra que la ruta de ubiquitinación/proteolisis está implicada en el procesamiento de antígenos virales o celulares internalizados para dar péptidos antigénicos que se unen a moléculas del MHC-1 en una célula presentadora del antígeno. En consecuencia, los inhibidores de esta ruta serían útiles para el tratamiento de enfermedades que resultan de una no deseada respuesta a la presentación del antígeno, incluyendo enfermedades autoinmunitarias y rechazo de trasplantes.
Las ciclinas son proteínas que están implicadas en el control del ciclo celular en eucariotas. Presumiblemente, las ciclinas actúan regulando la actividad de proteína-quinasas, y su degradación programada en etapas específicas del ciclo celular es necesaria para la transición desde una etapa a la siguiente. Experimentos utilizando ubiquitina modificada (Glotzer et al., Nature 349: 132-138 (1991); Herskho et al., J. Biol. Chem. 266: 376 (1991)) han establecido que la ruta de ubiquitinación/ proteolisis está implicada en la degradación de la ciclina. En consecuencia, los compuestos que inhiben esta ruta provocarían la detención del ciclo celular y serían útiles en el tratamiento del cáncer, la psoriasis, la reestenosis y otras enfermedades de proliferación celular.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona compuestos no conocidos de ácido y de éster de peptidilo de ácido borónico. La presente invención proporciona también métodos para usar los compuestos de ácido y de éster de aminoácido de ácido borónico, en general, como inhibidores de la función del proteasoma.
En una primera realización, la presente invención proporciona nuevos compuestos de ácido y éster borónico que tienen la fórmula (1a) que se expone más adelante.
Un aspecto adicional de la presente invención está relacionado con el descubrimiento de que los ácidos y ésteres borónicos de aminoácido y peptidilo, en general, son inihibidores del proteasoma potentes y altamente selectivos y pueden ser empleados para inhibir la función del proteasoma. La inhibición de la función del proteasoma tiene varias aplicaciones prácticas terapéuticas y profilácticas.
En una segunda realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se define más adelante, para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de la proteína muscular en una célula, que comprende poner en contacto dicha célula con dicho inhibidor del proteasoma. Este aspecto de la presente invención encuentra una utilidad práctica en la inhibición (reducción o prevención) de la rotura acelerada de proteínas musculares, que acompaña a varios estados fisiológicos y patológicos, y es responsable en gran medida de la pérdida de masa muscular (atrofia) que sigue a una lesión nerviosa, al ayuno, a la fiebre, a la acidosis y a determinadas endocrinopatías.
En una tercera realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para reducir la actividad del NF-\kappaB en una célula, que comprende poner en contacto la célula con dicho inhibidor del proteasoma. Los inhibidores empleados en la práctica de la presente invención son capaces de prevenir esta activación. Así, se considera que el bloqueo de la actividad del NF-\kappaB posee una aplicación práctica importante en varias áreas de la Medicina, por ejemplo la inflamación, sepsis, SIDA y similares.
En una cuarta realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de la proteína p53 en una célula, que comprende administrar a la célula dicho inhibidor del proteasoma.
En una quinta realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para la inhibición de la degradación de la ciclina en una célula, que comprende poner en contacto dichas células con dicho inhibidor del proteasoma. Se considera que la inhibición de la degradación de la ciclina posee una importante aplicación práctica en el tratamiento de enfermedades proliferativas celulares tales como cáncer, restenosis y psoriasis.
En una sexta realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para inhibir el crecimiento de una célula cancerosa, que comprende poner en contacto dicha célula con dicho inhibidor del proteasoma.
En una séptima realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para inhibir la presentación del antígeno en una célula, que comprende administrar a la célula dicho inhibidor del proteasoma.
En una octava realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para la inhibición de la adhesión celular inducible dependiente del NK-\kappaB en un animal, que comprende administrar a dicho animal dicho inhibidor del proteasoma.
En una novena realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para inhibir la replicación de VIH en una animal, que comprende administrar a dicho animal dicho inhibidor del proteasoma.
En una décima realización, la presente invención proporciona el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula (1a) como se expone más adelante, para la elaboración de un medicamento para inhibir las respuestas inmunitarias citolíticas. Los inhibidores del proteasoma de la invención (1b) o (2b) pueden ser usados para inhibir el procesamiento de antígenos virales o celulares internalizados para formar péptidos antigénicos que se unen a moléculas del MHC- I en un animal, y son por tanto útiles para la elaboración de un medicamento para tratar enfermedades autoinmunitarias y prevenir el rechazo de tejidos extraños, tales como órganos trasplantados o injertos.
En una undécima realización, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (1a), (1b), (2a) o (2b) en una cantidad efectiva para inhibir la función del proteasoma en un mamífero, y un vehículo o diluyente aceptable farmacéuticamente.
Breve descripción de las figuras
Figura 1. 3-Metilhistidina urinaria acumulativa de tres días.
Figura 2. Actividad de unión de NF-\kappaB.
Figura 3. Inhibición por MG-273.
Descripción de las realizaciones preferidas
Un primer aspecto de la presente invención se dirige a nuevos subconjuntos de compuestos de ácido y éster borónico que tienen la fórmula (1a) que sigue. Los nuevos compuestos de fórmula (1a) incluyen los siguientes:
1
o una sal aceptable farmacéticamente de los mismos;
en donde
P es R^{7}-(CO)-, R^{7}-NH-(CO)-, R^{7}-O-(CO)- ó R^{7}-SO_{2}-, en donde R^{7} es heteroarilo o heteroarilalquilo; o, cuando P es R^{7}-(CO)-, R^{7} puede también ser N-morfolinilo;
B^{1}, en cada aparición, es independientemente uno entre N ó CH;
X^{1}, en cada aparición, es independientemente uno de los grupos -C(O)-NH-, -CH_{2}-NH-, -CH(OH)-CH_{2}-, -CH(OH)-CH(OH)-, -CH(OH)-CH_{2}-NH-, -CH=CH-, -C(O)-CH_{2}, -SO_{2}-NH-, -SO_{2}-CH_{2}- ó -CH(OH)-CH_{2}-C(O)-NH-, con la condición de que cuando B^{1} es N, entonces el grupo X^{1} unido a dicho B^{1} es -C(O)-NH-;
X^{2} es uno entre los grupos -C(O)-NH-, -CH(OH)-CH_{2}-, -CH(OH)-CH(OH)-, -C(O)-CH_{2}, -SO_{2}-NH-, -SO_{2}-CH_{2}- ó -CH(OH)-CH_{2}-C(O)-NH-;
R es hidrógeno o alquilo, o R forma, junto con el grupo R^{1} adyacente, un sistema de anillo nitrogenado saturado o parcialmente saturado, mono-, bi- o tri-cíclico, que tiene de 4 a 14 miembros en el anillo, que puede estar opcionalmente sustituido con uno o dos entre los grupos ceto, hidroxi, alquilo, arilo, aralquilo, alcoxi o ariloxi;
R^{1}, en cada aparición, es independientemente uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{2} es uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en el anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{3} es uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en el anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{5}, en cada caso, es uno entre los grupos arilo, aralquilo, alcarilo, cicloalquilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -W-R^{6}, en donde W es un chalcógeno y R^{6} es alquilo, en donde la porción en el anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
Z^{1} y Z^{2} son independientemente uno entre los grupos alquilo, hidroxi, alcoxi o ariloxi, o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi que tiene al menos dos grupos hidroxi separados por al menos dos átomos de conexión en una cadena o anillo, comprendiendo dicha cadena o dicho anillo átomos de carbono y, opcionalmente, un heteroátomo o heteroátomos que pueden ser N, S u O; y
A es 0, 1 ó 2.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (1a) en una cantidad efectiva para inhibir la función del proteasoma en un mamífero, y un vehículo o diluyente aceptable farmacéuticamente, están dentro del alcance de la presente invención.
Un segundo aspecto de la presente invención estriba en el descubrimiento de que los derivados de ácido y éster borónico de aminoácidos y péptidos, en general, así como sus variaciones isostéricas, inhiben la función del proteasoma. Así, la presente invención se refiere también al uso de inhibidores del proteasoma que tienen la fórmula(1a) para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de la rotura de proteína intracelular dependiente del proteasoma, tal como reducir la velocidad de degradación de la proteína muscular, reducir la velocidad de degradación de la proteína p53, e inhibir la degradación de la ciclina, y para inhibir la actividad del NF-\kappaB en una célula.
Finalmente, la presente invención se refiere al uso de inhibidores del proteasoma que tienen la fórmula (1a) para la elaboración de un medicamento para tratar condiciones específicas en animales, que están mediadas o exacerbadas, directa o indirectamente, por funciones del proteasoma. Estas condiciones incluyen condiciones inflamatorias tales como el rechazo de tejidos, rechazo de órganos, artritis, infección, dermatosis, enfermedad inflamatoria intestinal, asma, osteoporosis, osteoartritis y enfermedades autoinmunitarias tales como lupus y esclerosis múltiple; enfermedades celulares proliferativas tales como cáncer, psoriasis y reestenosis; y rotura acelerada de la proteína muscular que acompaña a varios estados fisológicos y patológicos y es responsable en gran medida de la pérdida de masa muscular (atrofia) que sigue a una lesión nerviosa, ayuno, fiebre, acidosis y determinadas endocrinopatías.
Como se usa en el presente texto, se entiende que el término ``heterociclo'' significa restos estables heterocíclicos monocíclicos de 5 a 7 miembros o bicíclicos de 7 a 10 miembros, que son saturados o bien insaturados, y que consisten en átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos elegidos independientemente entre el grupo formado por N, O y S, en donde los heteroátomos nitrógeno y azufre pueden opcionalmente estar oxidados, el nitrógeno puede opcionalmente ser cuaternarizado, e incluyendo cualquier grupo bicíclico en el que cualquiera de los anillos heterocíclicos anteriormente definidos está fusionado con un anillo de benceno. El anillo heterocíclico puede estar unido por su grupo colgante a cualquier heteroátomo o átomo de carbono que tenga por resultado una fórmula estable. Los anillos heterocíclicos descritos en el presente texto pueden estar sustituidos en un átomo de carbono o en uno de nitrógeno, si el compuesto resultante es estable. Los ejemplos de tales heterociclos incluyen, pero no se limitan a ellos, piridilo, pirimidinilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, indolilo, indolenilo, quinoleinilo, isoquinoleinilo, bencimidazolilo, piperidinilo, pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo, pirrolinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidroquinoleinilo, tetrahidroisoquinoleinilo, decahidroquinoleinilo u octahidroisoquinoleinilo, azocinilo, triazinilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, tiofeno(ilo), tiantrenilo, furanilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, fenoxantiinilo, 2H-pirrolilo, pirrol, imidazolilo, pirazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, 1H-indazolilo, purinilo, 4H-quinoleizinilo, isoquinoleinilo, quinoleinilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, 4aH-carbazolilo, carbazolilo, \beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, furazanilo, fenoxazinilo, isocromanilo, cromanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, piperazinilo, indolinilo, isoindolinilo, quinuclidinilo, morfolinilo u oxazolidinilo. También están incluidos compuestos de anillos fusionados y espiro que contienen, por ejemplo, los heterociclos anteriores.
El término ``sustituido'', como se usa en el presente texto, significa que uno o más hidrógenos del resto designado están reemplazados con una selección entre el grupo indicado, con la condición de que no se exceda la valencia normal del átomo, y que la sustitución tenga por resultado un compuesto estable. Cuando un sustituyente es ceto (es decir, =O), entonces se reemplazan dos hidrógenos unidos a un átomo del resto.
Por ``compuesto estable'' o ``fórmula estable'' se entiende en el presente texto un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado de pureza útil, a partir de una mezcla de reacción, y a su inclusión en un agente terapéutico eficaz.
El término ``heteroarilo'', como se emplea en el presente texto, se refiere a grupos que tienen de 5 a 14 átomos en el anillo; 6, 10 o 14 electrones \pi compartidos en una disposición cíclica; y que contienen átomos de carbono y 1, 2 ó 3 heteroátomos de oxígeno, nitrógeno o azufre (en donde son ejemplos de grupos heteroarilo los grupos: tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3b]tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, benzoxazolilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatiinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinoleílo, quinoleílo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, 4aH-carbazolilo, carbazolilo, \beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, isoxazolilo, furazanilo y fenoxazinilo).
Las expresiones ``heteroarilo sustituido'' o ``heteroarilo opcionalmente sustituido'', usadas en la referencia para R^{1}, se refieren a grupos heteroarilo, como se definieron anteriormente, que tienen uno o más sustituyentes elegidos entre halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, carboxi, amino, alquilamino C_{1}-C_{6} y/o dialquilamino C_{1}-C_{6}.
El término ``arilo'' como se emplea en el presente texto, por sí mismo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos aromáticos monocíclicos o bicíclicos que contienen de 6 a 12 átomos de carbono en la porción de anillo, preferentemente de 6 a 10 átomos de carbono en la porción de anillo, tal como fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo.
La expresión ``arilo sustituido'', como se emplea en el presente texto, incluye grupos arilo, como se definieron antes, que incluyen uno o dos sustituyentes en el grupo fenilo o en el grupo naftilo elegidos entre alquilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{8}, alquilo (C_{1}-C_{6})-cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, ciano, amino, alquilamino C_{1}-C_{6}, dialquilamino C_{1}-C_{6}, bencilamino, dibencilamino, nitro, carboxi, carbo(C_{1}-C_{6})alcoxi, trifluorometilo, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, arilo (C_{6}-C_{10})-alcoxi (C_{1}-C_{6}), hidroxi, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilsulfinilo C_{1}-C_{6}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, arilo (C_{6}-C_{10}), ariltio (C_{6}-C_{10}), arilsulfinilo (C_{6}-C_{10}) y/o arilsulfonilo (C_{6}-C_{10}).
El término ``alquilo'', como se emplea en el presente texto, incluye radicales de cadena tanto lineal como ramificada, de hasta 12 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 8 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo y dodecilo.
La expresión ``alquilo sustituido'', como se emplea en el presente texto, incluye grupos alquilo como se definieron antes que tienen uno, dos o tres sustituyentes halo, o un alquilo(C_{1}-C_{6})-arilo(C_{6}-C_{10}), haloarilo(C_{6}-C_{10}), cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), alquilo(C_{1}-C_{6})-cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), alquenilo(C_{2}-C_{8}), alquinilo(C_{2}-C_{8}), hidroxi y/o carboxi.
El término ``cicloalquilo'', como se usa en el presente texto, incluye grupos hidrocarburo cíclico saturado que contienen de 3 a 12 carbonos, preferentemente de 3 a 8 carbonos, que incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclodecilo y ciclododecilo, cualquiera de los cuales grupos puede estar sustituido con sustituyentes tales como un grupo halógeno, alquilo(C_{1}-C_{6}), alcoxi y/o hidroxi.
El término ``aralquilo'' o ``arilalquilo'' como se usa en el presente texto, por sí mismo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos alquilo (C_{1}-C_{6}), como se discutieron antes, que tienen un sustituyente arilo, tal como bencilo.
El término ``halógeno'' o ``halo'' como se usa en el presente texto, por sí mismo o como parte de otro grupo, se refiere a cloro, bromo, flúor o yodo, siendo preferido el cloro.
Para uso medicinal, se prefieren las sales de adición de ácido y base aceptables farmacéuticamente, aquellas sales en las que el anión no contribuye de forma significativa a la toxicidad ni a la actividad farmacológica del catión orgánico. Las sales básicas se forman mezclando una solución de un ácido borónico (Z^{1} y Z^{2} son ambos OH) de la presente invención con una solución de una base no tóxica aceptable farmacéuticamente, tal como hidróxido sódico, hidróxido potásico, bicarbonato sódico, carbonato sódico, o un compuesto amino tal como hidróxido de colina, Tris, bis-Tris, N-metilglucamina o arginina. Se prefieren las sales solubles en agua. Así, las sales adecuadas incluyen: sales de metal alcalino (sodio, potasio, etc.), sales de metal alcalinotérreo (magnesio, calcio, etc.), sales de amonio y sales de aminas aceptables farmacéuticamente (tetrametilamonio, trietilamina, metilamina, dimetilamina, ciclopentilamina, bencilamina, fenetilamina, piperidina, monoetanolamina, dietanolamina, tris(hidroximetil)amina, lisina, arginina y N-metil-D-glucamina).
Las sales de adición de ácido se obtienen por reacción de una base orgánica de fórmula (1a) con un ácido orgánico o inorgánico, preferentemente por contacto en solución, o por cualquiera de los métodos estándar detallados en la bibliografía disponible para cualquier experto en la técnica. Los ejemplos de ácidos orgánicos útiles son ácidos carboxílicos tales como ácido maleico, ácido acético, ácido tartarico, ácido propiónico, ácido fumárico, ácido isetiónico, ácido succínico, ácido ciclámico, ácido piválico, y similares; los ácidos inorgánicos útiles son ácidos de hidrohaluros tales como HCl, HBr, HI; ácido sulfúrico; ácido fosfórico y similares. Los ácidos preferidos para formar sales de adición de ácido incluyen HCl y ácido acético.
Los ésteres boronato de compuestos de ácido borónico de la presente invención son también preferidos. Estos ésteres se forman haciendo reaccionar los grupos ácidos del ácido borónico con un compuesto hidroxi. Los compuestos hidroxi preferidos son compuestos dihidroxi, especialmente pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Más preferentemente, P es uno de los grupos R^{7}-C(O)- o R^{7}-SO_{2}-, en los que R^{7} es heteroarilo o heteroarilalquilo, o cuando P es R^{7}-C(O)-, R^{7} puede ser también N-morfolinilo.
Son grupos heteroarilo preferidos quinoleinilo, quinoxalinilo, piridilo, pirazinilo, furanilo o pirrolilo. Los valores útiles de heteroarilo R^{7} incluyen 8-quinoleinilo, 2-quinoxalinilo, 2-pirazinilo, 3-furanilo, 2-piridilo, 3-piridilo y 4-piridilo.
Valores de P especialmente preferidos son 2-pirazinacarbonilo, 8-quinoleinsulfonilo y N-morfolinoílo.
Como se señaló antes, A en la fórmula (1a) puede ser 0, 1 ó 2. Entonces, cuando A es cero, el resto entre corchetes no está presente y el inhibidor es un dipéptido. Des mismo modo, cuando A es 1, está presente el aminoácido o resto isostérico dentro de los corchetes, y el inhibidor es un tripéptido. Cuando A es 2, el inhibidor es un tetrapéptido. Lo más preferentemente A es cero.
Se prefiere que R^{1}, R^{2} y R^{3} en la fórmula (1a) sean cada uno de ellos independientemente un grupo entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}), cicloalquilo(C_{3}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10}), un grupo heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros, o -CH_{2}-R^{5}, y más preferentemente alquilo (C_{1}-C_{8}) o -CH_{2}-R^{5}, en donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{5} son opcionalmente sustituidos. Más preferentemente R^{1}, R^{2} y R^{3} son independientemente cada uno de ellos un resto entre alquilo (C_{1}-C_{4}), p. ej. metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo y t-butilo, o -CH_{2}-R^{5}, en donde R^{5} es un grupo entre cicloalquilo, arilo o heterociclo. R^{5} es preferentemente un grupo entre arilo(C_{6}-C_{10}), ar(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), alc(C_{1}-C_{6})arilo(C_{6}-C_{10}), cicloalquilo(C_{3}-C_{10}), alcoxi(C_{1}-C_{8}), alquiltio(C_{1}-C_{8}), o un grupo heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros.
La porción de anillo de dichos grupos arilo, aralquilo, alcarilo o grupos heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros de R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{5} pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes elegidos independientemente entre el grupo formado por alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), alquil(C_{1}-C_{6})-cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, ciano, amino, alquilamino C_{1}-C_{6}, dialquilamino C_{1}-C_{6}, bencilamino, dibencilamino, nitro, carboxi, carboalcoxi (C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, arilo (C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), aril(C_{6}-C_{10})-alcoxi (C_{1}-C_{6}), hidroxi, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilsulfinilo C_{1}-C_{6}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, ariltio (C_{6}-C_{10}), arilsulfinilo (C_{6}-C_{10}), arilsulfonilo (C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10}), alquil(C_{1}-C_{6})-arilo(C_{6}-C_{10}) y haloarilo(C_{6}-C_{10}).
Es más preferido que al menos uno de los grupos R^{1} y R^{2} sea isobutilo ó -CH_{2}-R^{5}, y lo más preferido es que R^{2} sea -CH_{2}-R^{5}. Se prefiere que R^{5} sea arilo(C_{6}-C_{10}), un grupo heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros que tiene de uno a tres heteroátomos elegidos independientemente entre O, N y S.
Lo más preferentemente, R^{2} es isobutilo, 6-quinoleinilmetilo, 3-indolilmetilo, 4-piridilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-piridilmetilo, bencilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo, 4-fluorobencilo, 4-benciloxibencilo, 4-(2'-piridilmetoxi)bencilo o bencilnaftilmetilo.
Preferentemente, R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{12}), más preferentemente alquilo (C_{1}-C_{6}), lo más preferentemente alquilo C_{4}, tal como isobutilo.
Cuando R^{1}, R^{2} o R^{3} es un alquilo sustituido, es preferentemente alquilo (C_{1}-C_{4}) sustituido con al menos un grupo cicloalquilo, preferentemente un grupo cicloalquilo (C_{5}-C_{6}).
Cuando R^{1}, R^{2}, R^{3} ó R^{5} es arilo sustituido o heterociclo sustituido, está preferentemente sustituido con al menos un grupo alquilo (C_{1}-C_{4}).
Cuando R^{1}, R^{2}, R^{3} ó R^{5} es cicloalquilo, es preferentemente cicloalquilo (C_{5}-C_{6}), p. ej. ciclopentilo o ciclohexilo, y puede estar opcionalmente sustituido con al menos un grupo arilo (C_{6}-C_{10}) o al menos un grupo alquilo, preferentemente un grupo alquilo (C_{1}-C_{4}).
Cuando R^{5} es -W-R^{6}, W es un chalcógeno, preferentemente oxígeno o azufre, más preferentemente azufre, y R^{6} es alquilo, preferentemente alquilo (C_{1}-C_{4}), p. ej. metilo, etilo, propilo, butilo, o isómeros de los mismos.
Los valores de R preferidos incluyen hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{8}), más preferentemente alquilo (C_{1}-C_{4}). Los valores útiles de R incluyen metilo, etilo, isopropilo, isobutilo y n-butilo. Adicionalmente, R puede formar, junto con el R^{1} adyacente, o cuando A es cero, junto con el R^{2} adyacente, un sistema de anillos mono-, bi- o tri-cíclico, saturado o parcialmente saturado, que contiene nitrógeno, que tiene de 4 a 14 miembros en los anillos, y puede ser opcionalmente sustituido con uno o dos entre los grupos ceto, hidroxi, arilo, alcoxi o ariloxi. Se prefiere que el sistema de anillos se elija entre uno de los siguientes:
(Fórmula pasa a página siguiente)
2
El nitrógeno en cada una de las fórmulas anteriores está unido a P en la fórmula (1a) y la valencia del carbono abierta está unida a X^{1} o bien a X^{2}.
Se prefiere que Z^{1} y Z^{2} sean cada uno de ellos independientemente un grupo entre alquilo (C_{1}-C_{4}), hidroxi, alcoxi(C_{1}-C_{6)} y ariloxi (C_{6}-C_{10}); o juntos Z^{1} y Z^{2} forman preferentemente un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo consistente en pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina, u otros grupos equivalentes que son evidentes para un experto en la técnica. Los valores útiles incluyen metilo, etilo, propilo y n-butilo. Lo más preferentemente, Z^{1} y Z^{2} son hidroxi.
Una realización preferida de la invención se dirige a un subgénero de compuestos que tienen la fórmula (1a) anterior, en la que P es R^{7}-C(O)- ó R^{7}-SO_{2}-, y R^{7} es uno entre los radicales quinoleinilo, quinoxalinilo, piridilo, pirazinilo, furanilo o pirrolilo, y cuando P es R^{7}-C(O)-, R^{7} puede ser también N-morfolinilo.
Un grupo preferido de compuestos de esta realización son compuestos de fórmula (1a) en la que P es un radical entre quinoleinacarbonilo, piridinacarbonilo, quinoleinasulfonilo, quinoxalinacarbonilo, quinoxalinasulfonilo, pirazinacarbonilo, pirazinasulfonilo, furanocarbonilo, furanosulfonilo o N-morfolinilcarbonilo; A es cero; X^{2} es -C(O)-NH-; R es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{8}); R^{2} y R^{3} son cada uno de ellos independientemente un grupo entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}), cicloalquilo (C_{3}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}), ar(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), piridilmetilo o quinoleinilmetilo; y Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, alcoxi (C_{1}-C_{6}) o ariloxi (C_{6}-C_{10}), o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Son incluso más preferidos los compuestos en los que: P es 8-quinoleinacarbonilo, 8-quinoleinasulfonilo, 2-quinoxalinacarbonilo, 2-quinoxalinasulfonilo, 2-pirazinacarbonilo, 2-pirazinasulfonilo, 3-piridinacarbonilo, 3-piridinasulfonilo, 3-furanocarbonilo, 3-furanosulfonilo o N-morfolinacarbonilo; R es hidrógeno; R^{3} es isobutilo; R^{2} es isobutilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-piridilmetilo, 6-quinoleinilmetilo, 3-indolilmetilo, bencilo, 4-fluorobencilo, 4-hidroxibencilo, 4-(2'-piridilmetoxi)bencilo, 4-(benciloxi)bencilo, bencilnaftilmetilo o fenetilo; y Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Otra realización preferida de la presente invención se dirige a compuestos de fórmula (1a) en la que A es cero. Estos compuestos poseen una potencia y selectividad inesperadamente altas como inhibidores de la función del proteasoma.
Un tercer subgénero de compuestos preferido son los compuestos de fórmula (1a) en la que uno de los grupos R^{1}, R^{2} o R^{3} corresponde a una cadena lateral de aminoácido que corresponde a tirosina o a un derivado de tirosina O-sustituido, formado haciendo reaccionar el grupo hidroxilo de la cadena lateral de tirosina con un compuesto que tiene un grupo funcional reactivo. Este subgénero incluye compuestos que tienen la fórmula (1a), en la que al menos uno de los grupos R^{1}, R^{2} o R^{3} es:
3
en donde R^{9} es uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, en donde el alquilo es opcionalmente sustituido con uno entre los grupos alquilo (C_{1}-C_{6}), halógeno, monohaloalquilo (C_{1}-C_{6}) y trifluorometilo; y en donde dichos grupos cicloalquilo, arilo, aralquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o dos de los grupos alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquilo (C_{1}-C_{6})-cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquenilo (C_{2}-C_{8}), alquinilo (C_{2}-C_{8}), ciano, amino, alquilamino (C_{1}-C_{6}), dialquilamino (C_{1}-C_{6}), bencilamino, dibencilamino, nitro, carboxi, carboalcoxi(C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, arilo (C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), arilo(C_{6}-C_{10})-alcoxi(C_{1}-C_{6}), hidroxi, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilsulfinilo (C_{1}-C_{6}), alquilsulfonilo (C_{1}-C_{6)}, ariltio (C_{6}-C_{10}), arilsulfinilo (C_{6}-C_{10}), arilsulfonilo (C_{6}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}), alquilo (C_{1}-C_{6})-arilo (C_{6}-C_{10}) y halo arilo (C_{6}-C_{10}); y
A^{1} y A^{2} son independientemente un grupo entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}), halógeno, monohalo-alquilo (C_{1}-C_{6}) o trifluorometilo.
El grupo -O-R^{9} está en posición orto o en posición para, prefiriéndose la posición para. Los grupos A^{1} y A^{2} pueden estar en cualquier posición que quede en el anillo de fenilo.
Se prefiere que R^{9} sea uno de los grupos alquilo (C_{1}-C_{8}), cicloalquilo (C_{3}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}), ar(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), heteroarilo de 5 a 10 miembros o heteroaril de 5-6 miembros-alquilo(C_{1}-C_{6}).
Los valores útiles de R^{9} incluyen bencilo, fenetilo, piridilo, piridilmetilo, furanilmetilo, pirrolilmetilo, pirrolidilmetilo, oxazolilmetilo e imidazolilmetilo.
La porción de anillo de cualquiera de dichos grupos arilo, aralquilo, alcarilo o grupos heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros de R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{5} pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes elegidos independientemente entre el grupo formado por alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquilo (C_{1}-C_{6})-cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquenilo C_{2}-C_{8}, alquinilo C_{2}-C_{8}, ciano, amino, alquilamino C_{1}-C_{6}, dialquilamino C_{1}-C_{6}, bencilamino, dibencilamino, nitro, carboxi, carboalcoxi (C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, arilo (C_{6}-C_{10}), aril(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), aril (C_{6}-C_{10})-alcoxi (C_{1}-C_{6}), hidroxi, alquiltio C_{1}-C_{6}, alquilsulfinilo C_{1}-C_{6}, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, ariltio (C_{6}-C_{10}), arilsulfinilo (C_{6}-C_{10}), arilsulfonilo (C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10}), alquil (C_{1}-C_{6})-arilo (C_{6}-C_{10}) y haloarilo(C_{6}-C_{10}).
Una clase preferida de compuestos de esta realización son compuestos de fórmula (1a) en la que A es cero, P es uno de los grupos R^{7}-C(O)-, R^{7}-SO_{2}-, R^{7}-NH-C(O)- ó R^{7}-O-C(O)-; R^{7} es uno entre los radicales quinoleinilo, quinoxalinilo, piridilo, pirazinilo, furanilo o pirrolilo, o cuando P es R^{7}-C(O)-, R^{7} puede ser también N-morfolinilo; X^{2} es -C(O)-NH-; R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}); R^{2} es:
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en donde A^{1} y A^{2} son independientemente un grupo entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}), halógeno, monohalo-alquilo (C_{1}-C_{6}) o trifluorometilo; y R^{9} es un grupo entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{6}), fenilo, bencilo, fenetilo o piridilmetilo; y
Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, alcoxi (C_{1}-C_{6}) o ariloxi (C_{6}-C_{10}), o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Incluso más preferidos son los compuestos de fórmula (1a) en la que: A es cero; P es 8-quinoleinacarbonilo, 8-quinoleinasulfonilo, 2-quinoxalinacarbonilo, 2-quinoxalinasulfonilo, 2-pirazinacarbonilo, 2-pirazinasulfonilo, 3-piridinacarbonilo, 3-piridinasulfonilo, 3-furanocarbonilo, 3-furanosulfonilo o N-morfolinacarbonilo; X^{2} es -C(O)-NH-; R^{3} es isobutilo; R^{2} es
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en donde A^{1} y A^{2} son independientemente un grupo entre hidrógeno, metilo, etilo, cloro, fluoro o trifluorometilo; y R^{9} es un grupo entre hidrógeno, metilo, etilo, butilo, fenilo, bencilo, fenetilo o piridilmetilo; y
Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Un cuarto subgénero de compuestos preferido incluye compuestos de fórmula (1a) en la que una de las cadenas laterales de aminoácido, preferentemente la cadena lateral definida por R^{2}, es un aminoácido no natural elegido entre naftilmetilo, piridilmetilo y quinoleinilmetilo, siendo el más preferido quinoleinilmetilo. Así, este subgénero incluye compuestos de fórmula (1a) en la que al menos un R^{1}, R^{2} o R^{3} es naftilmetilo, piridilmetilo o quinoleinilmetilo; con la condición de que el compuesto es distinto de isovaleril-fenilalanina-norvalina-[(naftilmetil), (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano-2-il)]metilamida o (3-t-butilsulfonil)propinil-norvalina-(1-naftil, dihidroxiboril)metilamida.
Un quinto subgénero preferido incluye compuestos de fórmula (1a) en la que R, junto con R^{1}, o con R^{2} cuando A es cero, forma un heterociclo que contiene nitrógeno. Este subgénero incluye compuestos que tienen la fórmula (1a), en la que:
R forma, junto con el R^{1} adyacente, o cuando A es cero, junto con el R^{2} adyacente, un sistema de anillos mono-, bi- o tri-cíclico, saturado o parcialmente saturado, que contiene nitrógeno, que tiene de 4 a 14 miembros en los anillos, y uno o dos sustituyentes opcionales elegidos entre el grupo formado por ceto, hidroxi, arilo, alcoxi y ariloxi;
cuando A es 2, el R^{1} que no es adyacente a N-R es un grupo entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclo o -CH_{2}-R^{5}; y cuando A es 1 ó 2, R^{2} es un grupo entre hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclo o -CH_{2}-R^{5}, en donde R^{5} se define como anteriormente.
Incluso más preferidos son los compuestos en los que R forma, junto con el R^{2} adyacente, un sistema de anillos que contiene nitrógeno, que tiene una de las estructuras mostradas antes; R^{3} es isobutilo; y Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
Los ejemplos de inhibidores del proteasoma incluyen sin limitación los siguientes compuestos, así como sales y ésteres boronato farmacéuticamente aceptables de los mismos:
Acido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico,
ácido N-(8-quinoleína)sulfonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico,
ácido N-(2-pirazina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido L-prolina-L-leucina borónico,
ácido N-(2-quinoleína)carbonil-L-homofenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(3-piridina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-(O-bencil)-L-tirosina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-L-tirosina-L-leucina borónico, y
ácido N-(4-morfolina)carbonil-[O-(2-piridilmetil)]-L-tirosina-L-leucina borónico
En la fórmula (1a), X^{1} representa un enlace peptídico o un isóstero que puede usarse como sustituto del enlace peptídico en los inhibidores del proteasoma para aumentar la biodisponibilidad y reducir el metabolismo hidrolítico. Como se señaló anteriormente, X^{1} puede ser uno entre los grupos -C(O)NH-, -CH_{2}-NH-, -CH(OH)-CH(OH)-, -CH(OH)-CH_{2}-CH(OH)-CH_{2}-NH-, -CH=CH-, -C(O)-CH_{2}, -SO_{2}-NH-, -SO_{2}-CH_{2}- ó -CH(OH)-CH_{2}-C(O)-NH-. Preferentemente X^{1} es -C(O)NH-.
La introducción de estos restos X^{1} en los inhibidores del proteasoma tiene por resultado lo siguiente, en donde R_{x} y R_{y} tienen las mismas definiciones que R^{1} y R^{2} anteriores y P, Z^{1}, Z^{2} y R^{3} son como se definieron antes para la fórmula (1a).
6 enlace peptídico
7 isóstero cetometileno
8 enlace peptídico reducido
9 isóstero hidroxietileno
10 isóstero dihidroxietileno
11 isóstero hidroxietilamina
12 isóstero alqueno
13 isóstero sulfonamida
14 isóstero sulfona metileno
15 análogo de estatina
Así, por ejemplo, si se encuentra que Z-Leu-Leu-Leu-B(OH)_{2} experimenta un rápido metabolismo hidrolítico para producir Z-Leu-OH y H_{2}N-Leu-Leu-B(OH)_{2}, puede prepararse el isóstero de hidroxietileno para eliminar esta reacción:
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Otro grupo de compuestos de la presente invención son isósteros de aza-péptido. Este es el resultado de reemplazar el átomo de carbono \alpha de un aminoácido con un átomo de nitrógeno, p. ej.,
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en donde R_{x} representa R^{1}, R_{y} representa R^{2}, P, Z^{1}, Z^{2} y R^{3} son como se definieron antes para la fórmula (1a).
Cuando P y R son ambos H, la fórmula (1) existirá en equilibrio con la fórmula cíclica (4), que se considera cubierta por la presente invención:
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Los compuestos de éster y ácido borónico antes descritos incluyen ambas configuraciones D y L peptidilo. Sin embargo, se prefieren las configuraciones L.
La presente invención se refiere al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de proteína muscular en una célula, que comprende poner en contacto dicha célula con dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención se refiere al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de proteína muscular en un animal, que comprende poner en contacto las células del músculo con dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la actividad del NF-\kappaB en una célula, que comprende poner en contacto la célula con dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la actividad del NF-\kappaB en un animal, que comprende poner en contacto células del animal con dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de rotura de la proteína intracelular dependiente del proteasoma, que comprende poner en contacto las células con dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de rotura de la proteína intracelular dependiente del proteasoma en un animal, que comprende poner en contacto las células del animal con dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de la proteína p53 en una célula, que comprende administrar a la célula dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención proporciona además el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para reducir la velocidad de degradación de la proteína p53 en un animal (preferentemente un animal sometido a fármacos o radiación nocivos para el DNA), que comprende administrar a dicho animal dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la degradación de la ciclina en una célula, que comprende poner en contacto dichas células con dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la degradación de la ciclina en un animal, que comprende poner en contacto las células de dicho animal con dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención proporciona también el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para tratar el cáncer, la psoriasis, la reestenosis u otras enfermedades celulares proliferativas en un paciente, que comprende administrar al paciente dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la presentación del antígeno en una célula, que comprende administrar a la célula dicho inhibidor del proteasoma. Más específicamente, la presente invención se refiere también al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la presentación del antígeno en un animal, que comprende administrar al animal dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención proporciona también el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la adhesión celular inducible dependiente de NF-\kappaB en un animal, que comprende administrar a dicho animal dicho inhibidor del proteasoma.
La presente invención proporciona también el uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) como se describió anteriormente para la elaboración de un medicamento para inhibir la infección por VIH en un animal, que comprende administrar a dicho animal dicho inhibidor del proteasoma.
Los ``animales'' mencionados aquí son preferentemente mamíferos. Se entiende que ambos términos incluyen a los seres humanos.
Preferentemente, los usos descritos anteriormente suministran el inhibidor del proteasoma poniendo en contacto células del animal con un inhibidor del proteasoma descrito anteriormente, o bien administrando al animal un inhibidor del proteasoma descrito anteriormente.
Los compuestos de la presente invención inhiben el funcionamiento del proteasoma. Esta actividad de inhibición del proteasoma tiene por resultado la inhibición o el bloqueo de diversas funciones intracelulares. En particular, la inhibición de la función del proteasoma inhibe la activación o el procesamiento del factor de transcripción NF-\kappaB. El NF-\kappaB desempeña un papel central en la regulación de un juego diverso de genes implicados en las respuestas inmunitaria e inflamatoria. La inhibición de la función del proteasoma inhibe también la ruta de ubiquitinación/proteolisis. Esta ruta cataliza la degradación selectiva de proteínas altamente anómales y proteínas reguladoras de vida corta. La ruta de ubiquitinación-proteolisis está también implicada en el procesamiento de antígenos celulares o virales internalizados, para dar péptidos antigénicos que se unen a moléculas del MHC-I. Así, los inhibidores del proteasoma de la presente invención pueden usarse en la elaboración de un medicamento para reducir la actividad del sistema proteolítico dependiente de ATP citosólico-ubiquitina, en varios tipos de células.
Los inhibidores pueden usarse in vitro o in vivo. Pueden administrarse por cualquiera de las vías conocidas, incluyendo oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intratecal, tópica y por infusión (Platt et al., petente de EE.UU. nº 4.510.130; Badalamente et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86: 5983-5987 (1989); Staubli et al., Brain Research 444: 153-158 (1988)) y generalmente se administrarán en combinación con un vehículo aceptable fisiológicamente (p. ej. solución salina fisiológica). La cantidad efectiva de inhibidor administrada se determinará empíricamente y se basará en consideraciones tales como el inhibidor usado en particular, el estado del individuo, y su tamaño y peso. Es de esperar que el intervalo de dosis para aplicación de uso general final será aproximadamente de 0,01 a 100 mg por kg por día, preferentemente de 0,1 a 75 mg por kg por día, para un efecto terapéutico eficaz.
La presente invención se refiere al uso de un inhibidor del proteasoma de fórmula 1(a) para la elaboración de un medicamento para inhibir (reducir o prevenir) la proteolisis acelerada o potenciada que tiene lugar en músculos atrofiados y que se sabe que es debida a la activación de un proceso que requiere ATP no lisosomal, en el que la ubiquitina juega un papel crítico.
La inhibición de la ruta dependiente de ATP-ubiquitina es un nuevo planteamiento para tratar el equilibrio negativo de nitrógeno en estados catabólicos. Esto puede efectuarse usando un inhibidor de la presente invención, con el resultado de la reducción de la pérdida de masa muscular en condiciones en las que ocurre. Una pérdida excesiva de proteína es común en muchos tipos de pacientes, incluyendo individuos con sepsis, quemaduras, traumatismos, muchos cánceres, infecciones crónicas o sistémicas, enfermedad neuromotriz degenerativa, tal como distrofia muscular, acidosis o lesiones espinales o nerviosas. También ocurre en individuos que reciben corticoesteroides, y aquellos en los que se reduce la ingesta de alimentos y/o está comprometida la absorción. Además, los inhibidores de la ruta de rotura de proteínas podrían ser valiosos en animales, p. ej. para combatir la ``fiebre del embarque'', que frecuentemente da lugar a una mayor pérdida de peso en el ganado bovino o de cerda.
La proteolisis acelerada evidente en la atrofia de músculos esqueléticos al tener lugar denervación o en el ayuno, está catalizada por la ruta degradativa dependiente del ATP no lisosomal. Se ha demostrado que en diversos estados catabólicos (p. ej. denervación, ayuno, fiebre, ciertas endocrinopatías o acidosis metabólica) la pérdida de músculo se debe principalmente a la rotura acelerada de las proteínas y, además, a que el aumento de la proteolisis es el resultado de la activación del sistema proteolítico dependiente de ATP citosólico-ubiquitina, que anteriormente se creía que servía solamente para la rápida eliminación de proteínas anómalas y ciertas enzimas de vida corta. Es descubrimiento de que esta ruta es responsable de la aceleración de la proteolisis en estos estados catabólicos, se basa en estudios en los que diferentes rutas proteolíticas fueron bloqueadas o medidas selectivamente en músculos incubados, y el hallazgo del aumento de mRNA para componentes de esta ruta (p. ej. para subunidades de ubiquitina y proteasoma) y de mayores niveles de conjugados de ubiquitina-proteína en los músculos en atrofia. El proceso proteolítico dependiente de ATP no lisosomal-ubiquitina aumenta en el músculo en estas condiciones y es responsable de la mayor parte de la proteolisis acelerada que tiene lugar en músculos en atrofia. Hay un aumento específico en el mRNA de ubiquitina, inducción del mRNA por el proteasoma y mayor contenido de proteína ubiquitinada en músculos en atrofia que no se observa en tejido no muscular bajo las mismas condiciones.
Los inhibidores de la presente invención pueden usarse para reducir (total o parcialmente) la degradación de proteínas dependiente del ATP no lisosomal, que se ha demostrado que es responsable de la mayor parte del aumento de degradación de las proteínas que tiene lugar durante el ayuno, la denervación o el desuso (inactividad), la terapia con esteroides, infección febril y otras condiciones.
Un planteamiento para probar candidatos de fármacos en cuanto a su capacidad para inhibir el proceso degradador dependiente de ATP-ubiquitina es medir la proteolisis en células cultivadas (Rosk et al., Cell 78: 761 (1994)). Por ejemplo, la degradación de proteínas intracelulares de vida larga puede medirse en células de mioblasto C2C12 de ratón. Las células se incuban con ^{35}S-metionina durante 48 horas para marcar las proteínas de vida larga y después se cazan durante 2 horas con medio que contiene metionina sin marcar. Después del periodo de caza, las células se incuban durante 4 horas en presencia o en ausencia del compuesto de ensayo. La cantidad de degradación de proteína en la célula puede medirse cuantificando la radiactividad soluble en ácido tricloroacético liberada por las proteínas premarcadas al medio de crecimiento (un indicador de la proteolisis intracelular).
Los inhibidores también pueden ensayarse en cuanto a su capacidad para reducir el desgaste muscular in vivo. La excreción urinaria del aminoácido modificado 3-metil-histidina (3-MH) es probablemente el método mejor caracterizado para estudiar la degradación de la proteína miofibrillar in vivo (véase Young y Munro, Federation Proc. 37: 229-2300 (1978)). La 3-metil-histidina es un aminoácido modificado post-traduccionalmente que no puede ser reutilizado para la síntesis de proteínas, y se sabe solamente que aparece en la actina y la miosina. Se presenta en actina aislada de todas las fuentes, incluyendo la actina citoplásmica de muchos tipos de células diferentes. También se presenta en la cadena pesada de miosina de las fibras musculares de contracción rápida (blanca, tipo II), pero está ausente de la miosina del músculo cardíaco y la miosina de las fibras musculares de contracción lenta (roja, tipo I). Debido a su presencia en la actina de otros tejidos distintos del músculo esquelético, otros tejidos contribuirán a la 3-MH urinaria. Se ha estimado que el músculo esquelético contribuye al 38-74% de la 3-MH urinaria en ratas normales y al 79-86% de la 3-MH urinaria en ratas tratadas con corticosterona (100 mg/kg/día, subcutánea) durante 2-4 días (Millward y Bates, Biochem. J. 214: 607-615 (1983); Kayali et al., Am. J. Physiol. 252: E621-E626 (1987)).
El tratamiento con dosis altas de glucocorticoide se usa para inducir un estado de desgaste muscular en ratas. El tratamiento de ratas con inyecciones subcutáneas diarias de corticosterona (100 mg/kg) produce un aumento de aproximadamente el doble en la 3-MH urinaria. El aumento de la excreción de 3-MH es transitorio, con un aumento máximo después de 2-4 días de tratamiento y un retorno a los valores de base al cabo de 6-7 días de tratamiento (Odedra et al., Biochem. J. 214: 617-627 (1983); Kayali et al., Am. J. Physiol. 252: E621-E626 (1987)). Se ha demostrado que los glucocorticoides activan la ruta proteolítica dependiente de ATP-ubiquitina en el músculo esquelético (Wing y Goldberg, Am. J. Physiol. 264: E668-E676 (1993)) y por ello es de esperar que los inhibidores del proteasoma inhiban el desgaste muscular que tiene lugar después del tratamiento con glucocorticoides.
Los inhibidores del proteasoma pueden ser administrados solos o en combinación con otro inhibidor o con un inhibidor de otra ruta (p. ej. una ruta lisomal o dependiente del Ca^{++}) responsable de la pérdida de masa muscular.
Uso de inhibidores del proteasoma como agentes que protegen selectivamente a las células normales de los daños al DNA durante el tratamiento de tumores con radiación y quimioterapia
Los inhibidores de la presente invención bloquearán la degradación de la proteína p53 supresora de tumores. Esta proteína es degradada por la proteolisis dependiente de ATP-ubiquitina por el proteasoma (véase Scheffner et al., Cell 75: 495-505 (1993)).
Los estudios de ratones knockout (ratones con gen anulado) para p53 (gen p53 nulo) indican un importante papel para la proteína p53 en la reducción de la incidencia de tumores (Donehower et al., Nature 356: 215-221 (1992)). En células normales que expresan p53 de tipo silvestre, no mutada, los niveles de base de p53 son muy bajos debido a la muy rápida degradación de dicha proteína p53. Sin embargo, la expresión de la proteína p53 en las células normales es estimulada en respuesta a la radiación y a fármacos que inducen daños en el DNA (Kastan et al., Cancer Res. 51: 6304-6311 (1991)). Estos altos niveles inducidos de p53 de tipo silvestre, no mutada, inducen la detención de la proliferación de células normales en la etapa G1 del ciclo celular (Kastan et al., supra; Kuerbitz, PNAS 89: 7491-7495 (1992)). Esta detención de la proliferación celular permite la reparación del DNA dañado. En cambio, en células tumorales que expresan formas mutantes de p53, los fármacos o la radiación que dañan el DNA no inducen la detención del ciclo celular (Kastan et al., supra; Kastan et al., Cell 71: 587-597 (1992)). En consecuencia, las células tumorales son dañadas de forma selectiva por la radiación y los fármacos citotóxicos.
La respuesta de detención selectiva de las células normales por la inducción de p53 sugiere que potenciar la respuesta de p53 puede permitir el tratamiento del tumor con dosis tumoricidas de radiación o de fármacos antineoplásicos más altas y/o más prologadas. La idea de que la inducción de p53 por un agente no tóxico como adjunto a la radioterapia ya ha sido publicada anteriormente (Lane, Nature 358}: 15-16 (1992), pero no se ha descrito ningún método para llevarla a la práctica.
El uso de inhibidores del proteasoma proporciona un método para aumentar la expresión de p53 en células normales previniendo su degradación por el proteasoma. Un ejemplo de esto sería la administración sistémica de inhibidor del proteasoma en una dosis suficiente para inhibir la degradación de p53 por el proteasoma durante el tratamiento del tumor con fármacos citotóxicos o radiación. Esto prologará e incrementará los niveles de expresión de p53 en las células normales y potenciará la detención de la proliferación de las células normales, reduciendo su sensibilidad a dosis más altas de radiación o de fármacos citotóxicos. La administración de inhibidores del proteasoma permitiría por tanto exponer el tumor a dosis más altas de radiación, aumentando la destrucción de cálulas tumorales. Así, los inhibidores del proteasoma pueden usarse como coadyuvantes en la terapia con agentes tumoricidas tales como la radiación y los fármacos citotóxicos.
Aplicación tópica de inhibidores del proteasoma para potenciar la expresión de p53 en la piel
La expresión de p53 en la piel normal es inducida por la exposición de la piel a la radiación UV, que inhibe la replicación del DNA que es necesaria para la división celular (Maltzman et al., Mol. Cell. Biol. 4: 1689 (1984); Hall et al., Oncogene 8: 203-207 (1993)). Esto protege la piel normal frente al daño del DNA cromosómico, dejando tiempo para la reparación del DNA antes de su replicación.
Los defectos en la ruta de respuesta de p53, tales como los que se observan con la ataxia-telangiectasia, tienen por resultado el aumento de la susceptibilidad a tumores de la piel inducidos por la radiación ionizante (Kastan et al., Cell 71: 587-597 (1992)). Está bien establecido que la exposición de individuos normales hace aumentar el riesgo de muchos tipos de cáncer de piel. Este riesgo puede disminuir mediante productos filtrantes del UV en las cremas para la piel. Otro planteamiento sería promover la resistencia del DNA de las células de la piel ante el daño del DNA mediante la aplicación tópica de agentes que potencian la expresión de p53 en la piel en respuesta a la luz UV. La inhibición de la degradación de p53 mediante la aplicación tópica de inhibidores del proteasoma proporciona un método para potenciar la respuesta de p53.
La aplicación tópica de inhibidores del proteasoma puede reducir el riesgo conocido de cánceres de piel que resulta del tratamiento de la psoriasis usando luz UV, que frecuentemente se combina con psoralenos o alquitrán mineral. Cada uno de estos agentes puede inducir daños en el DNA.
Uso de inhibidores del proteasoma para reducir la actividad del NF-\kappaB
El NF-\kappaB existe en forma inactiva en el citoplasma, complejado con una proteína inhibidora, I\kappaB. Para que el NF-\kappaB se vuelva activo y realice su función, ha de entrar en el núcleo de la célula. Sin embargo, no puede hacerlo hasta que la porción I\kappaB del complejo sea eliminada, proceso que los expertos en la técnica denominan activación o procesamiento del NF-\kappaB. En algunas enfermedades, el rendimiento normal de su función por el NF-\kappaB puede ser perjudicial para la salud del paciente. Por ejemplo, como se mencionó anteriormente, el NF-\kappaB es esencial para la expresión del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). En consecuencia, un proceso que previniese la activación del NF-\kappaB en pacientes que padecen de tales enfermedades podría ser terapéuticamente beneficioso. Los inhibidores empleados en la práctica de la presente invención son capaces de prevenir esta activación. Así, el bloqueo de la actividad de NF-\kappaB podría tener una importante aplicación práctica en varias áreas de la Medicina, por ejemplo en la inflamación, a través de la inhibición de la expresión de citocinas inflamatorias y moléculas de adhesión celular (ref. Grilli et al., International Review of Cytology 143: 1-62 (1993)), sepsis, SIDA y similares.
Más específicamente, la actividad del NF-\kappaB está altamente regulada (Grilli et al., International Review of Cytology 143: 1-62 (1993); Berg et al., Genes and Development 7: 2064-2070 (1993)). El NF-\kappaB comprende dos subunidades, p50 y un miembro adicional de la familia génica rel, p. ej. p65 (también conocida como Rel A). En la mayor parte de las células, las p50 y p65 están presentes en forma de precursor inactivo en el citoplasma, unidas a I\kappaB. Además, la subunidad p50 del NF-\kappaB es generada por el procesamiento proteolítico de una proteína precursora de 105 kD NF-\kappaB_{1} (p105), y este procesamiento está también regulado. La secuencia de la porción de 50 kD N-terminal de p105 es similar a la de p65 y otros miembros de la familia génica rel (el dominio de homología rel). En cambio, la porción de 55 kD C-terminal de p105 tiene un acusado parecido con I\kappaB-\alpha (también conocido como MAD3). Significativamente, la p105 no procesada puede asociarse con p65 y otros miembros de la familia rel para formar un heterodímero p65/p105. El procesamiento de p105 tiene por resultado la producción de p50, que puede formar el heterodímero p50/p65 transcripcionalmente activo. La secuencia homóloga de I\kappaB-\alpha C-terminal de p105 se degrada rápidamente en el procesamiento.
Hay otra proteína relacionada con rel, la NF-\kappaB_{2} (p100) que es similar a p105 en el hecho de que también es procesada para dar una subunidad de unión con DNA, p52 (Neri et al., Cell 67: 1075 (1991); Schmid et al., Nature 352: 733 (1991); Bours et al., Molecular and Cellular Biology 12: 685 (1992); Mercurio et al., DNA Cell Biology 11: 523 (1992)). Muchas de las características estructurales y reguladoras de p100 son similares a las de p105. Además, la proteína p100 puede formar también un heterodímero con p65 y otros miembros de la familia rel.
En resumen, la actividad transcripcional de los heterodímeros consistentes en p50 y una de las muchas proteínas de la familia rel, tal como p65, puede ser regulada por al menos dos mecanismos. En primer lugar, los heterodímeros se asocian con I\kappaB-\alpha para formar un complejo citoplásmico ternario inactivo. En segundo lugar, los miembros de la familia rel se asocian con p105 y p100 para formar complejos inactivos. El complejo ternario puede ser activado por la disociación y destrucción de I\kappaB-\alpha, mientras que los heterodímeros p65/p105 y p65/p100 puede ser activados por procesamiento de p105 y p100, respectivamente.
La disociación de I\kappaB-\alpha puede ser inducida por un número notablemente elevado de señales extracelulares, tales como lipopolisacáridos, ésteres de forbol, TNF-\alpha y diversas citocinas. El I\kappaB-\alpha es después degradado rápidamente. Estudios recientes sugieren que el procesamiento de p105 y p100 puede ser también inducido por al menos alguna de estas señales extracelulares.
Hay estudios que han demostrado que la p105, o una forma truncada de p105 (p60Tth), puede ser procesada a p50 in vitro (Fan et al., Nature 354: 395-398 (1991)). Algunos de los requerimientos y características de esta reacción de procesamiento in vitro (p. ej. dependencia de ATP/Mg^{++}) suponían la implicación de la ruta de degradación de proteínas medida por ubiquitina (Goldberg, Eur. J. Biochem. 203: 9-23 (1992), Hershko et al., Annu. Rev. Biochem. 61: 761-807 (1992)).
El proteasoma se requiere para el procesamiento de p105 a p50. Las proteínas p105/p60Tth no son procesadas en extractos citoplásmicos de células de mamíferos agotados de actividad del proteasoma. Sin embargo, la adición de proteasomas 26S purificados a estos extractos agotados restablece la actividad procesadora. Adicionalmente, los inhibidores específicos del proteasoma bloquean la formación de p50 en extractos de células de mamífero y también in vivo. También, la p105 de mamífero es procesada a p50 in vivo en Saccharomyces cerevisiae, y un mutante deficiente en la actividad de tipo quimotripsina del proteasoma mostró un descenso significativo en el procesamiento de p105. La p60Tth es ubiquitinada in vitro y esta ubiquitinación es un requisito previo para el procesamiento de p105.
Como se mencionó anteriormente, la mitad C-terminal de la p105 (p105C') es rápidamente degradada durante la formación de p50, y la secuencia de p105C' es notablemente similar a la de I\kappaB. La I\kappaB se degrada rápidamente en respuesta a inductores del NF-\kappaB y se ha demostrado que esta degradación es necesaria para la activación (Mellits et al., Nucleic Acids Research 21(22): 5059-5066 (1993); Henkel et al., Nature 365: 182-185; Beg et al., Molecular and Cellular Biology 13 (6): 3301-3310 (1993)). La degradación de I\kappaB y la activación del NF-\kappaB son también bloqueados por inhibidores de la función del proteasoma o de la conjugación con ubiquitina (Palombella et al., Cell 78: 773-785 (1994)).
En consecuencia, el proteasoma juega un papel esencial en la regulación de la actividad del NF-\kappaB. En primer lugar, el proteasoma se requiere para el procesamiento de p105 y posiblemente de p100. La degradación del término C inhibidor puede requerir también el proteasoma. En segundo lugar, el proteasoma parece ser necesario para la degradación de I\kappaB-\alpha en respuesta a inductores extracelulares.
La presente invención se refiere a un método para reducir la actividad del NF-\kappaB en un animal, que comprende poner en contacto células del animal con inhibidores de la función del proteasoma.
Los compuestos pueden ser ensayados en relación con su capacidad para inhibir la activación del NF-\kappaB por medio de un ensayo de unión de DNA (Palombella et al., Cell 78: 773 (1994)). Se preparan extractos de células completas a partir de células no tratadas o tratadas con TNF-\alpha que han sido pretratadas durante 1 hora con el compuesto de ensayo. La actividad de unión de DNA del NF-\kappaB se mide mediante un ensayo de desplazamiento de la movilidad electroforética usando la sonda PRDII del promotor del gen de IFN-\beta humana.
Como medida indirecta de la activación del NF-\kappaB, puede determinarse la expresión en la superficie de la célula de E-selectina, 1-CAM-1 y V-CAM-1 en células endoteliales primarias de la vena del cordón umbilical humano (HUVEC) por medio de un ensayo de inmuno-unión fluorescente a la superficie celular. Como la E-selectina, 1-CAM-1 y V-CAM-1 están bajo el control regulador del NF-\kappaB, la inhibición de la activación del NF-\kappaB tiene por resultado niveles reducidos de estas moléculas de adhesión en la superficie de la célula.
Los compuestos pueden también ser ensayados en relación con su capacidad para inhibir una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado en ratones. La hipersensibilidad es una manisfestación de una respuesta inmunitaria mediada por células T in vivo (Friedmann, Curr. Opinion Immunology, 1: 690-693 (1989)). Aunque el mecanismo molecular exacto que regula las interacciones celulares y los cambios vasculares implicados en la respuesta sigue siendo oscuro, está claro que el proceso depende de la interacción de mediadores solubles, moléculas de adhesión y la red de citocina (Piguet et al., J. Exp. Med. 173: 673-679 (1991); Nickoloff et al., J. Invest. Dermatol. 94: 151S-157S (1990)). El NF-\kappaB, mediando acontecimientos tales como la producción de citocinas y la inducción y utilización de moléculas de adhesión a la superficie celular, es un regulador central y coordinador implicado en las respuestas inmunitarias.
Los compuestos de la presente invención pueden ser usados para tratar la inflamación crónica o aguda que es el resultado del rechazo de un trasplante, la artritis, la artritis reumatoide, infección, dermatosis, enfermedad intestinal inflamatoria, asma, osteoporosis, osteoartritis y enfermedades autoinmunitarias. Adicionalmente, también puede tratarse la inflamación asociada a la psoriasis y la reestenosis.
Se entiende que la expresión ``tratamiento de la inflamación'' o ``tratar la inflamación'' incluye la administración a un sujeto de compuestos de la presente invención con propósitos que pueden incluir profilaxis, mejora, prevención o curación de una respuesta inflamatoria. No es necesario que tal tratamiento mejore completamente la respuesta inflamatora. Además, tal tratamiento puede usarse junto con otros tratamientos tradicionales para reducir la condición inflamatoria, conocidos por los expertos en la técnica.
Los inhibidores del proteasoma de la invención pueden ser proporcionados como tratamiento ``preventivo'' antes de la detección de un estado inflamatorio, para evitar que se desarrolle tal estado en pacientes en riesgo de padecerlo, tales como, por ejemplo, pacientes sometidos a trasplante.
Pueden administrarse niveles eficaces de inhibidores del proteasoma de la invención para proporcionar beneficios terapéuticos contra los efectos secundarios perjudiciales de la inflamación. Por ``nivel eficaz'' de una composición de la invención se entiende un nivel en el que se proporciona un cierto alivio al paciente receptor del tratamiento. Por estado inflamatorio ``anormal'' del hospedador se entiende un nivel de inflamación en el sujeto en un sitio, que excede la norma para el estado médico sano del sujeto, o que excede un nivel deseado. Por daño ``secundario'' del tejido o efectos tóxicos se entiende el daño en los tejidos o los efectos tóxicos que se presentan en tejidos, órganos y células de los mismos, que de otra forma estarían sanos, debido a la presencia de una respuesta inflamatoria, incluyendo como resultado de una respuesta inflamatoria ``primaria'' en cualquier parte del cuerpo.
Las cantidades y regímenes de administración de los inhibidores del proteasoma y composiciones de la presente invención pueden ser determinadas fácilmente por los profesionales con una experiencia normal en la técnica clínica del tratamiento de trastornos relacionados con la inflamación, tales como artritis, lesiones de tejidos y rechazo de tejidos. Generalmente, la dosificación de la composición de la invención variará dependiendo de consideraciones tales como: tipo de composición farmaceutica empleada; edad; estado de salud; condiciones médicas que se estén tratando; tipo de tratamiento concurrente, si lo hay; frecuencia del tratamiento y naturaleza del efecto deseado; magnitud del daño del tejido; género; duración de los síntomas; y contraindicaciones, si las hay, y otras variables a ajustar por el médico en cada caso. Puede administrarse la dosificación deseada en una o más aplicaciones para obtener los resultados deseados. Las composiciones farmacéuticas que contienen los inhibidores del proteasoma de la invención pueden ser proporcionadas en formas de dosificación unitaria.
Así pues, los inhibidores del proteasoma son útiles para tratar condiciones tales como rechazo de tejidos, artritis, infecciones locales, dermatosis, enfermedades intestinales inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, etc. Los inhibidores del proteasoma de la presente invención pueden emplearse para prevenir el rechazo o la inflamación de tejidos u órganos trasplantados de cualquier tipo, por ejemplo corazón, pulmón, riñón, hígado, injertos de piel e injertos de tejido.
Los compuestos de la presente invención inhiben el crecimiento de células cancerosas. Así, los compuestos pueden ser empleados para tratar el cáncer, la psoriasis, la reestenosis u otras enfermedades proliferativas celulares, en un paciente necesitado de tal tratamiento.
Por la expresión ``tratamiento del cáncer'' o ``tratar el cáncer'' se entiende la descripción de una actividad de compuestos de la presente invención en la que dicha actividad previene o alivia o mejora cualquiera de los fenómenos específicos conocidos en la técnica por estar asociados con la patología conocida comúnmente como ``cáncer''. El término ``cáncer'' se refiere al espectro de síntomas patológicos asociados con la iniciación o el progreso, así como la metástasis, de tumores malignos. Por el término ``tumor'' se entiende, para los fines de la presente invención, un nuevo crecimiento de tejido en el que la multiplicación de las células es incontrolable y progresiva. El tumor que es particularmente relevante para la invención es el tumor maligno, en el que el tumor primario tiene las propiedades de invasión o metástasis o que muestra un mayor grado de anaplasia que en el caso de los tumores benignos.
Así, ``tratamiento del cáncer'' o ``tratar el cáncer'' se refiere a una actividad que previene, alivia o mejora cualquiera de los fenómenos primarios (iniciación, progresión, metástasis) o síntomas secundarios asociados con la enfermedad. Los cánceres tratables se dividen de forma amplia en las categorías de carcinoma, linfoma y sarcoma. Los ejemplos de carcinomas que pueden ser tratados por la composición de la presente invención incluyen, pero sin limitarse a ellos: adenocarcinoma, adenocarcinoma de células acínicas, carcinomas corticales adrenales, carcinoma de células alveolares, carcinoma anaplásico, carcionoma basaloide, carcinoma de células basales, carcinoma broquiolar, carcinoma broncogénico, carcinoma renaladinol, carcinoma embrionario, carcinoma anometroide, carcinoma de células hepáticas fibrolamelar, carcinomas foliculares, carcinomas de células gigantes, carcinoma hepatocelular, carcinoma intraepidérmico, carcinoma intraepitelial, carcinoma leptomanigio, carcinoma medular, carcinoma melanótico, carcinoma menigal, carcinoma mesometonéfrico, carcinoma de células pequeñas (``oat-cell''), carcinoma de células escamosas, carcinoma &&sweet gland, carcinoma de células de transición, y carcinoma de células tubulares. Los sarcomas que pueden ser tratados por la composición de la presente invención incluyen, pero sin limitarse a ellos: sarcoma amelioblástico, sarcoma angiolítico, sarcoma botroide, sarcoma del estroma de endometrio, sarcoma de Ewing, sarcoma fascicular, sarcoma de células gigantes, sarcoma granulosítico, sarcoma inmunoblástico, sarcoma osteogénico &juxaccordial, sarcoma &coppices, sarcoma leucocítico (leucemia), sarcoma linfático (linfosarcoma), sarcoma medular, sarcoma mieloide (sarcoma granulocítico``, sarcoma &austiogenci, sarcoma periosteal, sarcoma de células del retículo (linfoma histiocítico), sarcoma de células redondas, sarcoma de células fusiformes, sarcoma sinovial, y sarcoma audiogénico telangiectático. Los linfomas que pueden ser tratados por la composición de la presente invención incluyen, pero sin limitarse a ellos: enfermedad de Hodgkin y linfomas linfocíticos tales como el linfoma de Burkitt, NPDL, NML, NH y linfomas difusos.
Los compuestos de fórmulas (1b) y (2b) parecen ser particularmente útiles para tratar metástasis.
Las cantidades en el régimen de administración de los inhibidores del proteasoma y composiciones de la invención pueden ser determinados fácilmente por los profesionales con experiencia normal en la técnica del tratamiento de trastornos relacionados con el cáncer, tales como los fenómenos primarios (iniciación, progreso, metástasis) o síntomas secundarios asociados con la enfermedad. Generalmente, la dosificación de la composición de la invención variará dependiendo de consideraciones tales como: tipo de composición empleada; edad; salud; condiciones médicas que se estén tratando; tipo de tratamiento concurrente, si lo hay; frecuencia del tratamiento y naturaleza del efecto deseado; magnitud del daño del tejido; género; duración de los síntomas; y contraindicaciones, si las hay, y otras variables a ajustar por el médico en cada caso. Puede administrarse la dosificación deseada en una o más aplicaciones para obtener los resultados deseados. Las composiciones farmacéuticas que contiene los inhibidores del proteasoma de la invención pueden ser proporcionadas en formas de dosificación unitaria.
La presente invención se ilustrará ahora mediante los ejemplos que siguen, que se entiende que no son limitantes en modo alguno.
Ejemplos
La mayoría de los compuestos de fórmula (1a) fueron preparados de acuerdo con la secuencia de reacciones general representada en el Esquema 1. R^{2} y R^{3} son como se definieron anteriormente. PG representa un resto protector del grupo amino. Los procedimientos generales empleados para cada compuesto se resumen en la Tabla 1, y en los Ejemplos se proporcionan descripciones detalladas de estos procedimientos. Las síntesis que no son conformes con la secuencia general de reacciones se describen en su totalidad en los Ejemplos. La sal triacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato fue preparada como se ha publicado con anterioridad (Kettner, C.A.; Shenvi, A.B., J. Biol. Chem. 259: 15106 (1984)). Los aminoácidos N-protegidos (Boc-, Cbz- o Fmoc-) eran disponibles comercialmente o fueron preparados a partir del correspondiente aminoácido libre mediante métodos de protección estándar, a menos que se describa otra cosa en los Ejemplos. Se emplearon hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)-fosfonio (reactivo BOP) o tetrafluoroborato de O-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (TBTU) como reactivos de acoplamiento (Sheehan, J.C. et al., J. Am. Chem. Soc. 87: 2492 (1965); Castro, B, et al., Synthesis 11: 751 (1976); Tetrahedron Lett. 30 1927 (1989)). Todos los compuestos fueron caracterizados mediante espectroscopía de resonancia magnética nuclear de protón (NMR). La pureza de los productos se comprobó por cromatografía en capa fina y por cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC).
Se apreciará que los Ejemplos marcados con un asterisco (*) se proporcionan para mostrar procesos análogos que pueden ser usados para producir compuestos de la invención.
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Esquema 1
19
TABLA I 
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|l|l|l|l|}\hline\multicolumn{4}{|c|}{Síntesis
de compuestos de éster y ácido borónico}\\\hline  Compuesto  \+
Agente de acoplamiento  \+ Desprotección del ácido  \+ Protección 
N-terminal \\   \+  \+ borónico ^{a}  \+ \\\hline 
MG-261 ^{*}   \+ EDC  \+ -  \+ - \\ 
MG-262 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ - \\ 
MG-264 ^{*}   \+ BOP  \+ -  \+ - \\ 
MG-267 ^{*}   \+ EDC  \+ -  \+ - \\ 
MG-268 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ NaH, MeI \\ 
MG-270 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ - \\ 
MG-272 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ - \\ 
MG-273  \+ EDC  \+ A,B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-274 ^{*}   \+ BOP  \+ A  \+ - \\ 
MG-278  \+ EDC  \+ A  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-282 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ - \\ 
MG-283 ^{*}   \+ BOP  \+ A  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-284 ^{*}   \+ -  \+ B  \+ RC(O)Cl
\\  MG-285  \+ BOP  \+ A  \+ RC(O)Cl
\\  MG-286  \+ EDC  \+ A,B  \+ RC(O)Cl
\\  MG-287 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-288 ^{*}   \+ EDC  \+ A  \+ RC(O)Cl
\\  MG-289 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
TABLA I (Continuación)
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|l|l|l|l|}\hline\multicolumn{4}{|c|}{Síntesis
de compuestos de éster y ácido borónico}\\\hline  Compuesto  \+
Agente de acoplamiento  \+ Desprotección del ácido  \+ Protección 
N-terminal \\   \+  \+ borónico ^{a}  \+ \\\hline 
MG-290 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-291 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl \\  MG-292  \+ BOP  \+ B
 \+ RC(O)Cl \\  MG-293  \+ TBTU  \+ B 
\+ RC(O)Cl \\  MG-294 ^{*}   \+ EDC 
\+ B  \+ - \\  MG-295 ^{*}   \+ BOP  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl \\  MG-296  \+ EDC  \+ B
 \+ RS(O) _{2} Cl \\  MG-297 ^{*}   \+
EDC  \+ B \+ RS(O) _{2} Cl \\  MG-298 
\+ EDC  \+ B  \+ RC(O)Cl \\  MG-299 
\+ EDC  \+ B  \+ RC(O)Cl \\  MG-300 
\+ EDC  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-301 ^{*}   \+ BOP  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-302 ^{*}   \+ EDC  \+ B \+ \\ 
MG-303 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+ HCl, éter \\ 
MG-304 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+ - \\ 
MG-305  \+ EDC  \+ B \+ RC(O)Cl \\ 
MG-306  \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-307  \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-308  \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-309  \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-310 ^{*}   \+ BOP  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-311  \+ BOP  \+ B  \+ HCl, dioxano \\ 
MG-312  \+ EDC  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-313 ^{*}   \+ -  \+ B  \+ RCO _{2} H, TBTU \\ 
MG-314  \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-315  \+ BOP  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-316 ^{*}   \+ BOP  \+ B \+ \\ 
MG-319 ^{*}   \+ TBTU  \+ B \+ \\ 
MG-321 \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-322 \+ TBTU  \+ B  \+ RC(O)Cl \\ 
MG-323 ^{*}   \+ -  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-325  \+ TBTU  \+ B  \+ RCO _{2} H, TBTU \\ 
MG-328 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-329 ^{*}   \+ TBTU  \+
B  \+ RC(O)Cl \\  MG-332 ^{*}   \+
TBTU  \+ B  \+ NaH, MeI \\  MG-333 ^{*}   \+ TBTU 
\+ B  \+ NaH, MeI \\  MG-334 ^{*}   \+ TBTU  \+ B 
\+ NaH, MeI \\  MG-336  \+ TBTU  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-337 ^{*}   \+ TBTU  \+
B  \+ HCl, dioxano \\  MG-338  \+ EDC  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-339 ^{*}  \+ TBTU  \+ B
 \+ HCl, dioxano \\  MG-340 ^{*}  \+ TBTU  \+ B  \+
HCl, dioxano \\  MG-341 \+ TBTU  \+ B  \+ RCO _{2} H
TBTU \\  MG-342 ^{*}   \+ -  \+ B  \+ RNH _{2} ,
TBTU \\  MG-343 \+ TBTU  \+ B  \+ RCO _{2} H, TBTU
\\  MG-344 ^{*}   \+ BOP  \+ B  \+ Ac _{2} O \\ 
MG-345 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+ RC(O)Cl
\\  MG-346 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-347  \+ EDC  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl \\  MG-348 ^{*}   \+
TBTU  \+ B  \+ HCl, dioxano \\  MG-349 ^{*}   \+
TBTU  \+ B  \+ HCl, dioxano
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
TABLA I (Continuación)
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|l|l|l|l|}\hline\multicolumn{4}{|c|}{Síntesis
de compuestos de éster y ácido borónico}\\\hline  Compuesto  \+
Agente de acoplamiento  \+ Desprotección del ácido  \+ Protección 
N-terminal \\   \+  \+ borónico ^{a}  \+ \\\hline 
MG-350 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+ PhCH _{2} NCO \\ 
MG-351 ^{*}   \+ EDC  \+ B  \+ - \\ 
MG-352 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+ RCO _{2} H, TBTU \\ 
MG-353 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-354  \+ BOP  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl \\  MG-356 ^{*}   \+
TBTU  \+ B  \+ - \\  MG-357 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
HCl, dioxano \\  MG-358  \+ TBTU  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-359 ^{*}   \+ TBTU  \+
B  \+ HCl, dioxano \\  MG-361  \+ TBTU  \+ B  \+
RCO _{2} H, TBTU \\  MG-362 ^{*}   \+ -  \+ B  \+
PhCH _{2} NCO \\  MG-363 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
HCl, dioxano \\  MG-364 ^{*}   \+ -  \+ B  \+
RCO _{2} H, TBTU \\  MG-366 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
HCl, dioxano \\  MG-367  \+ -  \+ B  \+
RC(O)Cl \\  MG-368  \+ EDC  \+ B  \+
TBTU \\  MG-369 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+ HCl,
dioxano \\  MG-380  \+ TBTU  \+ B  \+
RS(O) _{2} Cl \\  MG-382  \+ TBTU  \+
B  \+ RCO _{2} H, TBTU \\  MG-383 ^{*}   \+ TBTU  \+
B  \+ RCO _{2} H, TBTU \\  MG-385 ^{*}   \+ TBTU  \+
B  \+ HCl, dioxano \\  MG-386 \+ TBTU  \+ B  \+ HCl,
dioxano \\  MG-387 ^{*}   \+ TBTU  \+ B  \+
RC(O)Cl
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
^{a}A = NaIO_{4}, NH_{4}OAc, acetona-agua; B = i-BuB(OH)_{2}, HCl 1N, MeOH-hexano. Véanse los Ejemplos para las descripciones detalladas de los procedimientos.
Ejemplo 1 Acido N-(4-Morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico [MG-273] A. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato
A una solución de sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R, 5S)-pinanodiol leucina boronato (664 mg, 1,76 mmoles) y N-Boc-\beta-(1-naftil)-L-alanina (555 mg, 1,76 mmoles) en DMF (10 mL) a 0ºC, se añadió hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (404 mg, 2,11 mmoles), 1-nidroxibenzotriazol monohidrato (HOBT) (285 mg, 2,11 mmoles) y N-metilmorfolina (NMM) (0,3 mL, 2,64 mmoles). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La reacción se apagó con agua (100 mL) y la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (4 x 25 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución acuosa de HCl al 5% y solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, se secó sobre MgSO_{4} anhidro, se filtró y se concentró para dar un aceite amarillo. Se añadió agua y el precipitado gomoso resultante se extrajo con éter (3 x 25 mL). La capa orgánica se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (202 mg) en forma de una espuma blanca.
B. Sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato
A una solución del producto del Ejemplo 1A (930 mg, 1,39 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) a 0ºC, se añadió ácido trifluoracético (5 mL) y tioanisol (1 mL). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Al cabo de 4 h, la mezcla de reacción se concetró a sequedad y se secó bajo vacío. El residuo se usó en la reacción siguiente sin más purificación.
C. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato
Se añadieron cloruro de 4-morfolinacarbonilo (50 mL, 0,42 mmoles) y trietilamina (150 mL, 1,08 mmoles) a una solución del producto del Ejemplo 1B (0,25 g, 0,36 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (6 mL). Al cabo de 24 h, se añadió más cloruro de 4-morfolinacarbonilo (50 mL) y trietilamina (150 mL). Después de 2 días de tiempo total de reacción, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1N y solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró. La purificación mediante cromatografía en columna rápida (elución con EtOAc/hexanos 1:2 y hexanos/ EtOAc/MeOH 4:4:1) dio el compuesto del título (124 mg).
D. Acido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico
A una solución agitada del producto del Ejemplo 1C (124 mg, 0,21 mmoles) en acetona (10 mL), se añadió solución acuosa de NH_{4}OAc (0,1 N, 5 mL, 1,0 mmol), seguido por NaIO_{4} (120 mg, 0,21 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 h y después se evaporó la acetona. La capa acuosa se acidificó a pH 3 con HCl 1N y se extrajo con EtOAc (3 x 20 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} anhidro, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía rápida (elución con hexano/EtOAc 1:1, hexanos/EtOAc/MeOH 2:2:1 y MeOH/EtOAc/HOAc 1:1:unas pocas gotas) para dar el compuesto del título (29 mg).
Ejemplo 2 Acido N-Cbz-L-leucina-L-leucina borónico [MG-274]^{*} A. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Cbz-L-leucina-L-leucina boronato
Se añadió hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfonio (reactivo BOP, 827 mg, 1,87 mmoles), en una porción, a una mezcla de sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (595 mg, 1,58 mmoles), N-Cbz-L-leucina (500 mg, 1,87 mmoles) en acetonitrilo (30 mL), a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se apagó con salmuera (50 mL) y la mezcla se extrajo von EtOAc (3 x 50 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con solución acuosa de HCl al 5%, solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y solución acuosa saturada de NaCl, y después se secaron (MgSO_{4} anhidro), se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 20-30% de acetona/hexanos) para dar el compuesto del título (539 mg).
B. Acido N-Cbz-L-leucina-L-leucina borónico
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1D, el compuestos de Ejemplo 2A anterior (539 mg) fue desprotegido mediante tratamiento con metaperyodato sódico (1,2 mg, 5,61 mmoles) y solución acuosa de NH_{4}OAc (0,1 N, 10 mL, 1,0 mmol) para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (154 mg).
Ejemplo 3 Sal hidrocloruro del ácido \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico [MG-302]^{*} y ácido \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico [MG-303]^{*} A. Sal hidrocloruro del (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato
A una solución de sal trifluoracetato de (1S,2S,3R, 5S)-pinanodiol \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato (preparada como se describe en el Ejemplo 1B, 536 mg, 0,93 mmoles) en éter (2 mL), se añadieron 10 mL de HCl 1N. Lamezcla se sometió a ultrasonidos durante varios minutos. Se dejó evaporar lentamente el éter. Los cristales resultantes se recogieron, se lavaron con H_{2}O y éter y se secaron bajo vacío para dar el compuesto del título (300 mg).
B. Sal hidrocloruro del ácido \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico; y ácido \beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico
Al producto del Ejemplo 3A (290 mg, 0,58 mmoles) en una mezcla de hexano (4 mL), MeOH (4 mL) y HCl 1N (1,3 mL), se añadió i-BuB(OH)_{2} (71 mg, 0,70 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante 72 h a temperatura ambiente. La capa de MeOH-H_{2}O se lavó con hexanos y el MeOH se evaporó. La solución acuosa se alcalinizó con NaOH y se lavó con éter-EtOAc (1:1). La capa acuosa se liofilizó para dar 640 mg de un sólido amarillo. El sólido se disolvió en MeOH, se añadió HCl 4N en 1,4-dioxano, y la solución se filtró para eliminar un sólido blanco. El filtrado se concentró y el residuo se purificó mediante HPLC en fase inversa (elución con CH_{3}CN-H_{2}O) para dar 45 mg de MG-302 y 10 mg de MG-303.
Ejemplo 4 Acido N-(4-morfolina)carbonil-(O-bencil)-L-tirosina-L-leucina borónico [MG-306] A. N-Boc-O-Bencil-L-tirosina
Una suspensión de O-bencil-L-tirosina (3,12 g, 11,5 mmoles) en una mezcla de 1,4-dioxano (14 mL) y agua (14 mL) fue tratada, por este orden, con trietilamina (50 mL, 35,9 mmoles) y una solución de (Boc)_{2}O (2,86 g, 13,1 mmoles) en 1,4 dioxano (12 mL). Al cabo de 19 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua (140 mL) y se lavó con éter. La capa acuosa se acidificó con ácido cítrico 1N (35 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 mL). Se añadió más ácido cítrico 15 mL) a la capa acuosa, que de nuevo se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (100 mL). Los extractos orgánicos reunidos se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron para dar el producto crudo (4,5 g), que se usó directamente en la reacción siguiente.
B. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-O-Bencil-L-tirosina-L-leucina boronato
A una solución agitada y fría (0ºC) de sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato (preparada como se describe en el Ejemplo 1B, 3,03 g, 7,98 mmoles), se añadieron N-Boc-O-bencil-L-tirosina (2,97 g, 7,99 mmoles) y TBTU (3,35 g, 8,84 mmoles) en DMF anhidra (30 mL) mediante una bomba de jeringa, a razón de 1,9 mL/h, DIEA (4,2 mL, 24,1 mmoles). Una vez terminada la adición, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 30 minutos y después fue añadida gota a gota a 30 mL de agua agitada rápidamente. Se añadió más agua y la mezcla se filtró. El sólido recogido se disolvió en MeOH, se concentró casi a sequedad y de nuevo se añadió a agua agitada rápidamente (300 mL). El sólido blanco resultante se recogió mediante filtración por succión, se lavó con agua, se congeló y se liofilizó para dar el compuesto del titulo (4,49 g).
C. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol (O-bencil)-L-tirosina-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 4B (4,47 g, 7,23 mmoles) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (40 mL) y se enfrió a 0ºC. Se añadió una solución de HCl 4N en dioxano (40 mL, 0,16 moles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 h. La concentración dio un sólido amarillo que se trituró con hexano-éter (1:1, 100 mL). La filtración dio el compuesto del título (3,65 g) en forma de un sólido amarillo pálido.
D. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-(4-morfolina)carbonil-(O-bencil)-L-tirosina-L-leucina boronato
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1C, se trató el producto del Ejemplo 4C (2,53 g, 4,56 mmoles) con cloruro de 4-morfolinacarbonilo (0,75 mL, 6,43 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (2,35 g) en forma de un sólido amarillo pálido.
E. Acido N-(4-morfolina)carbonil-(O-bencil)-L-tirosina-L-leucina borónico
El producto del Ejemplo 4D (0,39 g, 0,62 mmoles) fue desprotegido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B para proporcionar el compuesto del título (146 mg) en forma de un sólido blanco.
Ejemplo 5 Acido N-metil-N-Cbz-L-leucina-L-leucina borónico [MG-268]* A. N-Metil-N-Cbz-L-leucina
A una solución de N-Cbz-leucina (1,38 g, 5,2 mmoles) en THF (15 mL) a 0ºC, se añadió yoduro de metilo (2,5 mL, 40,1 mmoles). Se añadió cuidadosamente hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite, 0,6 g, 15 mmoles) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (25 mL) y se añadió agua (2 mL) gota a gota. La mezcla se concentró a sequedad y el residuo se repartió entre éter (15 mL) y agua (50 mL). La capa orgánica se extrajo con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (25 mL), y los extractos acuosos reunidos se acidificaron a pH 2 con HCl 3N. El producto se extrajo con EtOAc (3 x 25 mL), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (1,41 g) en forma de un sólido amarillo.
B. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-metil-N-Cbz-L-leucina-L-leucina boronato
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1A, el producto del Ejemplo 5A (85,1 mg, 0,30 mmoles) se acopló con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (105 mg, 0,28 mmoles) en presencia de EDC (64 mg, 0,33 mmoles), HOBT (45 mg, 0,33 mmoles) y NMM (37 mg, 0,37 mmoles) para proporcionar, después de purificación mediante cromatografía rápida (elución con hexanos/acetona 3:2), el compuesto del título (85 mg).
C. Acido N-Metil-N-Cbz-L-leucina-L-leucina borónico
Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1D, se desprotegió el producto del Ejemplo 5B (85 mg, 0,16 mmoles) mediante tratamiento con NaIO_{4} (104 mg, 0,485 mmoles) y solución acuosa de NH_{4}OAc (0,1 N, 5 mL, 0,5 mmoles) en 10 mL de acetona, para proporcionar, después de purificación mediante cromatografía rápida (elución con hexanos/acetona/MeOH 4:4:2), el compuesto del título (21 mg).
Ejemplo 6 Acido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(6-quinoleinil)-D,L-alanina-L-leucina borónico [MG-292] A.\beta-(6-Quinoleinil)-D,L-alanina
Se calentó a reflujo N-acetil-\beta-(6-quinoleinil)-D,L-alanina-etil-éster (728 mg, 2,55 mmoles) en HCl 6M (20 mL). Al cabo de 20 h, la mezcla de reacción se concentró a sequedad y el residuo se secó bajo vacío para proporcionar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente reacción.
B. N-Boc-\beta-(6-Quinoleinil)-D,L-alanina
Al producto crudo del Ejemplo 6A en una mezcla agitada de 1,4-dioxano (10 mL), agua (10 mL) y NaOH 2N (5 mL) a 0ºC, se añadió pirocarbonato de di-terc-butilo (556 mg, 2,55 mmoles). Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Al cabo de 23 h, la mezcla de reacción se acidificó a pH 4 y se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL) y n-BuOH (3 x 50 mL). Los extractos reunidos se concentraron para proporcionar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente reacción.
C. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-\beta-6-(quinoleinil)-D,L-alanina-L-leucina boronato
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 2A, el producto del Ejemplo 6B se acopló con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (943 mg, 2,5 mmoles) en presencia de reactivo BOP (1,33 g, 3 mmoles) y trietilamina (0,37 mL, 2,62 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (343 mg).
D. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol \beta-(6-quinoleinil)-D,L-alanina-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 6C (343 mg, 0,61 mmoles) fue tratado con ácido trifluoroacético (7 mL) y tioanisol (1 mL) en CH_{2}Cl_{2} (15 mL) a 0ºC, como se describe en el Ejemplo 1B, para proporcionar el compuesto del título.
E. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(6-quinoleinil)-D,L-alanina-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 6D fue acoplado con cloruro de 4-morfolinacarbonilo (0,14 mL, 1,22 mmoles) mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1C, paraproducir el compuesto del título (112 mg).
F. N-(4-Morfolina)carbonil-\beta-(6-quinoleinil)-D,L-alanina-L-leucina boronato
La desprotección del producto del Ejemplo 6E (153 mg, 0,27 mmoles) se realizó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (elución con hexanos/acetona/metanol 50:50:10) proporcionó el compuesto del título (87 mg). El producto se siguió purificando mediante HPLC en fase inversa; se recuperaron 5 mg del compuesto del título.
Ejemplo 7 Acido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina metilborónico [MG-317]; y N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina dimetilborano [MG-318]
A una suspensión de MG-273 (preparado como se describió en el Ejemplo 1, 101,5 mg, 0,23 mmoles) en 3 mL de una mezcla 2:1 de Et_{2}O/CH_{2}Cl_{2}, se añadió 1,3-propanodiol (20,0 mL, 0,28 mmoles). La solución clara resultante se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, y después se añadió MgSO_{4} anhidro. La agitación continuó durante 30 minutos más, y después la mezcla se filtró a través de un tapón de algodón y después a través de un filtro de PTFE de 0,2 mm. La solución se concentró, se añadió tolueno (2 mL) y la mezcla se concentró de nuevo para producir un sólido blanco. Se añadió THF anhidro (3 mL) y la solución resultante se enfrió a 0ºC. Se añadió MeLi (0,8 mL, 1,12 mmoles). Al cabo de 10 minutos, la mezcla se calentó a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, la solución de color rojo claro se enfrió a 0ºC, se apagó con una pocas gotas de agua y después se diluyó con 10 mL de HCl 1N. La solución incolora se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 10 mL) y el extracto reunido se concentró para dar un sólido blanco. La purificación mediante cromatografía rápida (elución con 2-4% de MeOH/ CHCl_{3}, y a continuación 10% de MeOH/CHCl_{3}) dio MG-317 (17,7 mg) y MG-318 (72-1 mg).
Ejemplo 8 N-Bencil-(3R)-3-dioxiboril-5-metilhexamida [MG-342]^{*} A. (3R)-3-[(1S,2S,3R,5S)-(Pinanodiildioxi)boril]-5-metilhexanoato de terc-butilo
Un matraz de fondo redondo de 200 mL se cargó con THF anhidro (50 mL) y acetato de terc-butilo (0,48 mL, 3,56 mmoles). La solución se enfrió a -78ºC bajo nitrógeno, y se añadió LDA (solución 1,5 M en ciclohexano, 2,2 mL, 3,3 mmoles) mediante jeringuilla a lo largo de 8 minutos. La solución resultante se agitó durante 10 minutos y después se añadió una solución de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol-1-bromo-3-metilbutilboronato (Organometallics 9: 3171 (1990)) (1,04 g, 3,15 mmoles) en THF anhidro (15 mL) mediante una cánula a lo largo de 8 minutos. Se dejó calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La solución de color rosa pálido se concentró y el residuo se disolvió en 200 mL de éter. La solución se lavó con solución acuosa saturada de NH_{4}Cl y solución acuosa saturada de NaCl. Al concentrar, la solución dio un aceite de color naranja claro, que se purificó mediante cromatografía rápida (elución con 2-3% de EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (584 mg).
B. Acido (3R)-3-[(1S,2S,3R,5S)-(pinanodiildioxi)boril]-5-metilhexanoico
A una solución del producto del Ejemplo 8A (323 mg, 0,89 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (8 mL) se añadió ácido trifluoroacético (2,0 mL, 26 mmoles). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró y se secó durante la noche en alto vacío para producir un aceite marrón oscuro (309,3 mg).
C. N-Bencil-(3R)-3-[(1S,2S,3R,5S)-(pinanodiildioxi) boril]-5-metilhexanamida
A una solución del producto del Ejemplo 8B (300 mg, 0,9 mmoles) y TBTU (410 mg, 1,08 mmoles) en acetonitrilo anhidro (5 mL), se añadió bencilamina (0,12 mL, 1,10 mmoles) seguida por diisopropiletilamina (0,50 mL, 2,9 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, y después se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y solución acuosa saturada de NaCl. La concentración dio un aceite marrón oscuro, que se purificó mediante cromatografía rápida (elución con 20% de EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (232 mg) en forma de un aceite incoloro claro.
D. N-Bencil-(3R)-3-dioxiboril-5-metilhexanamida
El producto del Ejemplo 8C (223 mg, 0,56 mmoles) fue desprotegido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B. La purificación mediante cromatografía rápida (elución con 5% de MeOH/CHCl_{3}) proporcionó un aceite de color amarillo pálido, que se disolvió en acetonitrilo/MeOH. Se añadió agua y la mezcla se liofilizó durante la noche para producir el compuesto del título (108 mg) en forma de un sólido blanco algodonoso.
Ejemplo 9 Acido N-acetil-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarbonil-L-leucina borónico [MG-310]^{*} A. Acido N-Boc-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleinacarboxílico
Una solución de ácido 1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleinacarboxílico (855 mg, 4,83 mmoles), (Boc)_{2}O (1,37 g, 6,28 mmoles) y NaOH 1N (6 mL) en una mezcla de t-BuOH (12 mL) y agua (12 mL), se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (30 mL) y se lavó con éter-hexanos (1:1; 2 x 25 mL). La capa orgánica se re-extrajo con NaHCO_{3} al 10%. Las capas acuosas reunidas se acidificaron cuidadosamente a pH 2-3 y se extrajeron con EtOAc (3 x 30 mL). Los extractos organicos reunidos se lavaron con agua y solución acuosa saturada de NaCl, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (1,27 g) en forma de un sólido blanco.
B. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarbonil-L-leucina boronato
A una mezcla de sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol-L-leucina boronato (1,14 g, 3,03 mmoles), ácido N-Boc-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarboxílico (762 mg, 2,75 mmoles) y reactivo BOP (1,34 g, 3,03 mmoles) en DMF (20mL), se añadió, a lo largo de un periodo de 2 h, DIEA (1,44 mL, 8,25 mmoles). La solución resultante se agitó durante una hora después de terminarse la adición. La mezcla de reacción se vertió en agua (300 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 75 mL). Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con solución acuosa diluida de HCl, solución acuosa semisaturada de NaHCO_{3}, agua y solución acuosa saturada de NaCl, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía rápida (elución con 20% de EtOAc-hexanos) para proporcionar el compuesto del título (1,04 g) en forma de un sólido blanco espumoso.
C. Sal hidrocloruro de (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol 1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarbonil-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 9B (755 mg) fue disuelto en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) y enfriado a 0ºC. Se añadió una solución de HCl 4N en dioxano (8 mL, 0,03 moles) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. La concentración y la trituración con éter-hexanos proporcionaron el compuesto del título (565 mg) en forma de un sólido blanquecino.
D. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol n-acetil-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarbonil-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 9C (262 mg, 0,59 mmoles) se trató a temperatura ambiente con Ac_{2}O (0,085 mL, 0,89 mmoles) y DIEA (0,18 mL, 1,36 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (5 mL). Al cabo de 24 h, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (20 mL), se lavó con HCl 1N, solución acuosa semisaturada de NaHCO_{3} y agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. La purificación mediante cromatografía rápida (elución con EtOAc-hexanos) proporcionó el compuesto del título (271 mg) en forma de un sólido blanco espumoso.
E. Acido N-acetil-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinoleínacarbonil-L-leucina borónico
Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3B, se desprotegió el producto del Ejemplo 9D (226 mg, 0,49 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (131 mg) en forma de un sólido oleoso espumoso.
Ejemplo 10 Acido N-(4-Morfolina)carbonil)-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina-L-leucina borónico [MG-315] A. (2-Quinoleilmetil)acetamidomalonato de dietilo
A una solución de monohidrocloruro de 2-(clorometil)quinoleína (5,0 g, 23,4 mmoles) y acetamidomalonato de dietilo (10,1 g, 46,7 mmoles) en EtOH (60 mL) se añadió metóxido sódico (3,78 g, 70 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 6 h. La mezcla de reacción se enfrió, se filtró y se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc (400 mL) y se extrajo con HCl 4 N frío (3 x 150 mL). La capa acuosa se neutralizó con NaOH 10N y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). El extracto orgánico reunido se lavó con agua, se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró para dar el compuesto del título (8,3 g).
B. Ester etílico de N-acetil-\beta-(2-quinoleil)-D,L-alanina
A una solución del producto del Ejemplo 10A (8 g, 22,3 mmoles) en EtOH (180 mL) se añadió NaOH 6,1N (6,5 mL, 40 mmoles). Al cabo de 2 h, se añadió HCl 11,1 N (3,6 mL, 40 mmoles) y la mezcla de reacción se concentró a sequedad. El residuo se suspendió en 1,4-dioxano (200 mL) y la mezcla se calentó a reflujo durante 90 minutos. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 30-50% de acetona-hexanos) para proporcionar el compuesto del título (4,3 g).
C. N-Acetil-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina
El producto del Ejemplo 10B (4,3 g, 15 mmoles) fue tratado con Subtilisina Carlsberg (Sigma, 11,9 unidades/mg, 30 mg, 357 unidades) a temperatura ambiente, en solución acuosa de NaHCO_{3} (0,2 M, 120 mL). Al cabo de 2 h, la mezcla de reacción se extrajo con CHCl_{3} (6 x 100 mL). La capa acuosa se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título (3,5 g), que contenía sales.
D. N-Boc-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina
Una solución del producto del Ejemplo 10C (3,5 g, apr. 7,4 mmoles) en HCl 6N (40 mL) se calentó a reflujo durante 16 h. El disolvente se eliminó y el residuo se secó bajo vacío.
A este residuo se añadieron 1,4-dioxano (20 mL), agua (20 mL) y NaOH 2N (10 mL, 20 mmoles). La solución se enfrió a 0ºC y se añadió pirocarbonato de di-t-butilo (1,6 g, 7,5 mmoles). Al cabo de 1 h a 0ºC, la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y la agitación prosiguió durante 17 h. La mezcla de reacción se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (100 mL) y n-BuOH (4 x 100 mL). La capa acuosa se acidificó y se extrajo de nuevo con n-BuOH. Los extractos orgánicos se reunieron y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (1,6 g).
E. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina-L-leucina boronato
Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 2A, el producto del Ejemplo 10D (0,6 g, 1,9 mmoles) fue acoplado con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (716 mg, 1,9 mmoles) en presencia de reactivo BOP (0,84 g, 1,9 mmoles) y trietilamina (0,27 mL, 1,9 mmoles). La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 10-30% de acetona-hexanos) proporcionó el compuesto del título (194 mg).
F. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 10E (194 mg) fue tratado con ácido trifluoroacético (7 mL) y tioanisol (1 mL) como se describe en el Ejemplo 1B. El producto resultante se condensó con cloruro de 4-morfolinacarbonilo (568 mg, 3,8 mmoles) como se describe en el Ejemplo 2C. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 20-50% de acetona-hexanos) proporcionó el compuesto del título (367 mg).
G. Acido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(2-quinoleil)-L-alanina-L-leucina borónico
El producto del Ejemplo 10F (367 mg, 0,64 mmoles) fue desprotegido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B para proporcionar el compuesto del título (222 mg).
Ejemplo 11 Acido N-Boc-1,2,3,4-tetrahidro-1-isoquinoleínacarboxílico [precursor para la síntesis de MG-310^{*}] A. Acido 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinoleínacarboxílico
Una solución de ácido 1-isoquinoleínacarboxílico (1,67 g) en ácido acético glacial (25 mL) fue hidrogenada a 414 kN/m^{2} sobre PtO_{2} (270 mg). Cuando la reacción fue completa, la mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite), lavando la almohadilla sólida con MeOH, y el filtrado se concentró a sequedad. El sólido blanco resultante se trituró con agua fría y se filtró para proporcionar el compuesto del título (775 mg).
B. Acido N-Boc-1,2,3,4-tetrahidro-1-isoquinoleínacarboxílico
El producto del Ejemplo 11B (762 mg, 4,3 mmoles) se trató con pirocarbonato de di-terc-butilo (1,13 g, 5,17 mmoles) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 6B, para dar el compuesto del título (886 mg) en forma de un sólido blanco espumoso.
Ejemplo 12 Dietanolamina N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato [MG-286]
A una solución de ácido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico (preparado como se describe en el Ejemplo 1, 97,4 mg, 0,22 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} 4mL) se añadió una solución de dietanolamina (25,5 mg, 0,24 mmoles) en EtOAc (1 mL). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h. Se añadió Na_{2}SO_{4} anhidro (1,5 g) y se siguió agitando durante 0,5 h más. La mezcla de reacción se filtró y se concentró, y el producto crudo se purificó agitando en EtOAc caliente (2 mL) y precipitando con hexanos (1 mL). El sólido se recogió, se lavó con hexanos y se secó para proporcionar el compuesto del título (106 mg).
Ejemplo 13 Acido N-[3-(4-morfolina)carbonil-2(R)-(1-naftil)metil]propionil-L-leucina borónico [MG-324] A. 1-Naftalenocarboxaldehído
A una solución fría (-78ºC) de cloruro de oxalilo (6,9 mL, 0,079 moles) en CH_{2}Cl_{2} seco (200 mL) se añadió gota a gota DMSO seco (11,2 mL, 0,158 mmoles). La mezcla se agitó durante 10 minutos y después se añadió una solución de 1-naftalenometanol (10,0 g, 0,063 moles) en CH_{2}Cl_{2} seco (40 mL) a lo largo de 15 minutos. La mezcla se agitó durante 10 minutos y después se añadió lentamente Et_{3}N (44 mL, 0,316 moles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Al cabo de 3,5 h, a la mezcla heterogénea de color amarillo pálido se añadió solución acuosa al 10% de ácido cítrico (30 mL) y agua (100 mL). La fase orgánica se lavó con agua (100 mL) y solución acuosa saturada de NaCl (100 mL), se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. Se añadió éter-hexano (1:1) y se filtró la mezcla. La concentración proporcionó un aceite de color naranja pálido (9,7 g).
B. 3-(1-Naftil)propenoato de etilo
A una solución del producto del Ejemplo 12A (9,7 g, 62 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) se añadió a temperatura ambiente (carbetoximetileno)trifenilfosforano (25 g, 71 mmoles). La mezcla resultante se agitó durante 1,5 h y la solución amarilla homogénea se concentró después a sequedad. Se añadió éter-hexano (1:1) se filtró la mezcla, y el filtrado se concentró a sequedad para proporcionar un aceite de color naranja pálido (15,3 g).
C. 3-(1-Naftil)propionato de etilo
El producto del Ejemplo 12B (15,3 g, 68 mmoles) se disolvió en una mezcla de EtOAc (100 mL) y MeOH (10 mL) y se hidrogenó a 1 at sobre Pd/C al 10% (5 g). La reacción continuó durante 4 días, reemplazando el catalizador con catalizador fresco varias veces. La mezcla de reacción se filtró y se concentró para proporcionar 13 g de un aceite crudo.
D. Acido 3-(1-naftil)propiónico
A una solución del producto del Ejemplo 12C (13 g) en una mezcla de THF (100 mL) y agua (25 mL), se añadió NaOH 1N (75 mL, 75 mmoles). La mezcla de reacción de color marrón se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El THF se eliminó y la capa acuosa se lavó con éter (2 x 50 mL). La capa acuosa se acidificó a pH 2 con HCl 6N y el sólido precipitado se recogió, se lavó con agua (100 mL) y se liofilizó para dar 9,3 g de un sólido de color amarillo pálido.
E. Cloruro de 3-(1-naftil)propionilo
A una suspensión del producto del Ejemplo 12D (4,0 g, 20 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (25 mL) a 0ºC, se añadió cloruro de oxalilo (1,9 mL, 22 mmoles) y DMF (0,1 mL). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y después se calentó con una pistola de aire caliente. Se añadió más cloruro de oxalilo (0,5 mL) y el calentamiento continuó para producir una mezcla homogénea oscura. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se redisolvió en CH_{2}Cl_{2}-hexano, y la solución resultante se filtró. La concentración proporcionó 4,9 g de un líquido verde.
F. 4(S)-Isopropil-3-[3-(1-naftil)-1-oxopropil]-2-oxazolidininona
A una solución de 4(S)-(-)-4-isopropil-2-oxazolidininona (2,32 g, 18 mmoles) en THF seco (50 mL) a -78ºC, se añadió gota a gota n}-BuLi (2,5 M en hexanos, 8 mL, 20 mmoles). La mezcla blanca heterogénea se agitó a -78ºC durante 30 minutos, y después se añadió una solución del producto del Ejemplo 12E (4,9 g, 20 mmoles) en THF seco (25 mL), gota a gota a lo largo de 15-20 minutos. Después de 1,5 h, la reacción se apagó mediante la adición de HCl 1N (25 mL) y solución acuosa saturada de NaCl (25 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y después se eliminó el THF mediante evaporación rotatoria. La capa acuosa se extrajo con EtOAc, y el extracto orgánico reunido se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. El residuo se filtró a través de un lecho de gel de sílice (elución con 20% de EtOAc-hexanos) para proporcionar 2,8 g de un sólido de color rosa pálido.
G. 3-[3-Benciloxicarbonil-2(R)-[(1-naftil)metil-1-oxopropil]-4(S)- isopropil-2-oxazolidininona
A una solución de 1,1,1,3,3,3-hexametildisilazano (0,75 mL, 3,5 mmoles) en THF seco (10 mL) a 0ºC, se añadió n-BuLi (2,5 M en hexanos, 1,45 mL, 3,6 mmoles). Al cabo de 10 minutos, la mezcla se enfrió a -78ºC y se añadió gota a gota una solución del producto del Ejemplo 12F (1,0 g, 3,2 mmoles) en THF seco (8 mL). Al cabo de 30-40 minutos, se añadió bromoacetato de bencilo (0,75 mL, 4,8 mmoles). La mezcla se agitó a -78ºC durante 1 h, y a 0ºC durante 5-10 minutos. La reacción se apagó mediante la adición de HCl 1N (10 mL), y la solución se extrajo con éter. El extracto orgánico reunido se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. El sólido húmedo se trituró con hexano-éter (1:1), se filtró y se secó para dar el compuesto del título (0,6 g) en forma de un sólido blanco.
H. Acido 3-[2(R)-(1-naftil)metil]-3-[4(S)-isopropil-2-oxazolidinoil] propanoico
Al producto del Ejemplo 12G (600 mg, 1,3 mmoles) se añadió MeOH (15 mL), EtOH (15 mL), EtOAC (5 mL) y CH_{2}Cl_{2} (5 mL), seguido por Pd/C al 10% (100 mg). La mezcla de reacción se hidrogenó bajo 1 at de H_{2}. La mezcla de reacción se filtró y se concentró. El residuo se trituró con éter-hexanos, los disolventes se eliminaron, y el sólido blanco resultante se secó bajo vacío para dar 480 mg del compuesto del título.
I. [4(S)-Isopropil-3-[4-morfolino-2(R)-(1-naftil)metil]-1,4-dioxobutil]- 2-oxazolidinona
A una solución del producto del Ejemplo 12H (473 mg, 1,28 mmoles) en THF seco (26 mL) a 0ºC, se añadió gota a gota, bajo nitrógeno, morfolina (130 mL, 1,47 mmoles), pirocarbonato de dietilo (240 mL, 1,47 mmoles) y trietilamina (220 mL, 1,6 mmoles). Al cabo de 2 h, el disolvente se eliminó bajo vacío y el residuo se lavó con agua y se extrajo con éter-EtOAc (1:1). El extracto orgánico reunido se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. El residuo se trituró con EtOAc-hexanos para proporcionar el compuesto del título (410 mg).
J. Acido 3-(4-morfolina)carbonil-2(R)-(1-naftil)metil-propiónico
A una solución del producto del Ejemplo 121 (400 mg, 0,913 mmoles) en una mezcla de THF (8 mL) y agua (2 mL) a 0ºC, se añadió LiOH (80 mg, 1,9 mmoles). La mezcla de reacción se almacenó a 0ºC durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para eliminar el THF, se añadió NaOH 1N (20 mL), y la mezcla se lavó con CH_{2}Cl_{2} (15 mL). La capa acuosa se acidificó a pH 2 con HCl 1N y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. El extracto orgánico reunido se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. El residuo se trituró con éter-hexanos y los disolventes se eliminaron bajo vacío para proporcionar el producto crudo (240 mg) en forma de una espuma blanca.
K. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-[3-(4-morfolina)carbonil-2(R)-(1-naftil)metil]propionil-L-leucina boronato
A una solución del producto del Ejemplo 12J (230 mg, 0,7 mmoles) en DMF (8 mL) a 0ºC, se añadió sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (293 mg, 0,77 moles) y TBTU (293 mg, (0,77 mmoles). A la mezcla resultante se añadió lentamente, a lo largo de 1,5 h, diisopropiletilamina (365 mL, 2,1 mmoles). Una vez completa la adición, la mezcla de reacción se agitó durante 30 min. Se añadió agua (100 mL) y el sólido precipitado se recogió, se lavó con agua (50 mL) y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título (300 mg).
L. Acido N-[3-(4-morfolina)carbonil-2(R)-(1-naftil)metil]propionil-L- leucina borónico
Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3B, se desprotegió el producto del Ejemplo 12K (300 mg, 0,522 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (150 mg).
Ejemplo 14 Acido trans-4-fenoxi-L-prolina-L-leucina borónico [MG-349]_{*} A. N-Carbobenciloxi-trans-4-hidroxi-L-prolina
De acuerdo con el procedimiento de la bibliografía (J. Am. Chem. Soc. 189 (1957)), se trató trans-4-hidroxi-L-prolina (5,12 g, 0,039 moles) con cloroformiato de bencilo (8,5 mL, 0,06 moles) para proporcionar el compuesto del título (6,0 g) en forma de un sólido blanco.
B. Ester metílico de N-carbobenciloxi-trans-4-hidroxi-L-prolina
A una solución del producto del Ejemplo 13A (1,08 g, 3,75 mmoles) en acetonitrilo (4 mL) a 0ºC, se añadió gota a gota DBU (0,62 mL, 4,12 mmoles). Al cabo de 5 minutos se añadió MeI (0,28 mL, 4,5 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se eliminó el disolvente, se disolvió el residuo en éter-EtOAc (1:1, 30 mL), y la solución resultante se lavó con HCl 1N, solución acuosa diluida de NaHCO_{3}, agua y solución acuosa saturada de NaCl. La capa orgánica se secó (MgSO_{4} anhidro) y se concentró para proporcionar el compuesto del título (822 mg) en forma de un aceite amarillo claro.
C. Ester metílico de N-carbobenciloxi-trans-4-fenoxi-L-prolina
A una mezcla del producto del Ejemplo 13B (495 mg, 1,71 mmoles, fenol (193 mg, 2,05 mmoles) y trifenilfosfina (537 mg, 2,05 mmoles) en THF (7 mL) a 0ºC, se añadió a lo largo de 1 h azodicarboxilato de dietilo (0,32 mL, 2,05 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y el residuo se disolvió en éter (8 mL) y se dejó reposar a 0ºC durante la noche. La solución se decantó y los sólidos se lavaron con éter frío. La solución etérea se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (elución con 10-30% de EtOAc-hexanos) para proporcionar el compuesto del título (295 mg).
D. N-Carbobenciloxi-trans-4-fenoxi-L-prolina
El producto del Ejemplo 13C (185 mg, 0,79 mmoles) se disolvió en una mezcla de solución acuosa de LiOH 0,5N (20 mL) y MeOH (10 mL) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El MeOH se eliminó bajo vacío y la capa acuosa se lavó con éter (2 x 20 mL). La capa acuosa se enfrió, se acidificó con HCl 3N y se extrajo con EtOAc (3 x 20 mL). El extracto orgánico reunido se lavó con agua y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró para proporcionar el compuesto del título (251 mg) en forma de un sólido amarillo claro.
E. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-carbobenciloxi-trans-4-fenoxi-L-prolina-L-leucina boronato
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 12K, el producto del Ejemplo 13D (250 mg, 0,72 mmoles) fue acoplado con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (300 mg, 0,79 mmoles) en presencia de TBTU (302 mg, 0,79 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (355 mg) en forma de un sólido blanco.
F. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol trans-4-fenoxi-L-prolina-L-leucina boronato
El producto del Ejemplo 13E (343 mg) fue hidrogenado durante 20 h a 1 at, sobre Pd/C al 10% (45 mg) en EtOH (3 mL). La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se concentró para proporcionar el compuesto del título (272 mg).
G. Acido trans-4-fenoxi-L-prolina-L-leucina borónico
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 3B, el producto del Ejemplo 13F (270 mg, 0,6 mmoles) fue desprotegido para proporcionar el compuesto del título (130 mg) en forma de un sólido blanco.
Ejemplo 15 Acido [(3S,5R)-4-[(8-quinoleínasulfonil)amino]-3-hidroxi-5-(1-naftil) pentanoil]-L-leucina borónico A. (4S,5S)-1-Boc-4-hidroxi-5-(1-naftil)-pirrolidin-2-ona
A una solución de N-Boc-\beta-(1-naftil)-L-alanina (1,4 g, 4,44 mmoles), 2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (704 mg, 4,88 mmoles) y 4-DMAP (1,25 g, 10,21 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (40 mL) a 0ºC, se añadió cloroformiato de isopropenilo (0,53 mL, 4,8 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante una h a 0ºC y durante 2 h a temperatura ambiente. La reacción se apagó mediante la adición de solución acuosa de KHSO_{4}. La capa orgánica se lavó con agua, se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. El residuo se suspendió en EtOAc (30 mL) y se calentó a reflujo durante 2 h. El disolvente se eliminó bajo vacío.
El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2}-HOAc (10:1, 30 mL) y se añadió borohidruro sódico (310 mg, 8,21 mmoles) a 0ºC. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC y durante 15 h a temperatura ambiente. Se añadió agua y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro), se filtró y se concentró. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 20-30% de acetona-hexanos) proporcionó el compuesto del título (1,24 g).
B. Acido (3S,5R)-4-(terc-butiloxicarbonil)amino-3-hidroxi-5-(1- naftil)pentanoico
El producto del Ejemplo 14B (1,24 g, 3,64 mmoles) se disolvió en acetona (15 mL) y se añadió solución acuosa de NaOH (1M, 4 mL, 4 mmoles). la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se acidificó con HCl al 10% y se extrajo con EtOAc (3 x 60 mL). El extracto orgánico reunido se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 30-50% de acetona-hexanos y hexano:acetona:metanol 70:30:10) para dar el compuesto del título (0,61 g).
C. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol [(3S,5R)-4-(terc-butiloxicarbonil)amino-3-hidroxi-5-(1-naftil)-pentanoil]-L- leucina boronato
Mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 2, el producto del Ejemplo 14B (395 mg, 1,1 mmoles) fue acoplado con sal trifluoracetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (415 mg, 1,1 mmoles) en presencia de reactivo BOP (487 mg, 1,1 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (261 mg).
D. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol [(3S,5R)-4-(8-quinoleínasulfonil)amino-3-hidroxi-5-(1-naftil)-pentanoil]-L- leucina boronato
El producto del Ejemplo 14C (261 mg, 0,43 mmoles) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) y se trató a 0ºC con ácido trifluoroacético (5 mL) y tioanisol (1 mL). Al cabo de 2 h se evaporaron los disolventes.
El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) y se enfrió a 0ºC. Se añadió cloruro de 8-quinoleínasulfonilo (98 mg, 0,43 mmoles) y trietilamina (0,12 mL, 0,86 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h y a temperatura ambiente durante 15 h. Los disolventes se eliminaron, se añadió agua y el producto se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL). El extracto orgánico reunido se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro) y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (elución con 20-50% de EtOAc-hexanos) para proporcionar el compuesto del título (152 mg).
E. Acido [(3S,5R)-4-(8-quinoleínasulfonil)amino-3-hidroxi-5-(1-naftil)- pentanoil]-L-leucina borónico
El producto del Ejemplo 14D (152 mg, 0,22 mmoles) fue desprotegido de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B para proporcionar el compuesto del título (12,7 mg).
Ejemplo 16 Sal hidrocloruro del ácido cis-3-fenil-D,L-prolina-L-leucina borónico [Mg-359]^{*} A. 1-Acetil-4-fenil-2-pirrolidinol-5,5-dicarboxilato de dietilo
Se añadieron bolas de sodio (lavadas 3x con hexanos y secadas bajo vacío; 0,13 g, 5,7 mmoles) a una solución de acetimidomalonato de dietilo (12,2 g, 56,1 mmoles) en EtOH absoluto, bajo nitrógeno. Una vez disuelto el sodio, la solución se enfrió en un baño de hielo y se añadió gota a gota cinamaldehído (7,8 mL, 61,7 mmoles). El baño se retiró y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La solución se ajustó a pH 4 con ácido acético (aprox. 3 mL). Los disolventes se evaporaron y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (elución con EtOAc) para dar un sólido amarillo que fue recristalizado (benceno-hexano) para proporcionar el compuesto del título (14,1 g) en forma de un sólido blanco.
B. 1-Acetil-3-fenilpirrolidina-2,2-dicarboxilato de dietilo
Se añadió ácido trifluoroacético (15,4 mL) lentamente a lo largo de 15 minutos a una solución del producto del Ejemplo 15A (7,0 g, 20,1 mmoles) y trietilsilano (4,9 mL, 30,8 mmoles) en CHCl_{3} (40 mL). Al cabo de 3 h, los disolventes se evaporaron y el residuo se disolvió en EtOAc (150 mL), se lavó con agua, solución acuosa de NaHCO_{3} al 5% y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro) y se concentró para dar 5,9 g de un aceite incoloro.
C. Ester etílico de N-acetil-3-fenilprolina
El producto del Ejemplo 15B (5,9 g) se disolvió en NaOH 0,5N (200 mL) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 21 h. La solución se lavó con EtOAc (75 mL) y después se acidificó a pH 2 con HCl 3N. Los sólidos procipitados se extrajeron con CHCl_{3}. La capa orgánica se concentró para dar un residuo gomoso, que se disolvió en tolueno (70 mL) y se calentó a 75ºC durante 1 h. El disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título (4,2 g) en forma de un aceite amarillo claro.
D. Ester etílico de N-Acetil-trans-3-fenil-D,L-prolina y N-acetil-cis-3-fenil-D,L-prolina
El producto del Ejemplo 15C (4,2 g, 16 mmoles) se disolvió en NaOEt 1M en EtOH (100 mL) que contenía 2 mL de trifluoroacetato de etilo como eliminador de agua, y la solución resultante se calentó a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se añadió agua (65 mL) y la solución se calentó durante 2,5 h. La mayor parte del EtOH se eliminó mediante evaporación rotatoria y la solución acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. La capa acuosa se acidificó con HCl 3N y se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro), y se concentró. El sólido gomoso de color naranja se trituró con éter para proporcionar un sólido amarillo, que se recristalizó (EtOAc-MeOH) para proporcionar el ácido (1,91 g) en forma de cristales de color amarillo claro. La concentración de los extractos en CH_{2}Cl_{2} proporcionó el éster (396 mg) en forma de un aceite de color naranja.
E. Sal hidrocloruro de cis-3-fenil-D,L-prolina
El éster obtenido en el Ejemplo 15D (375 mg) se hidrolizó calentando a reflujo en HCl 6N (5 mL) durante 17 h. La mezcla de reacción enfriada se lavó con EtOAc y la capa acuosa se concentró a sequedad. La recristalización (MeOH-éter) proporcionó el compuesto del título (201 mg).
F. N-Boc-cis-3-fenil-D,L-prolina
El producto del Ejemplo 15E (189 mg, 0,84 mmoles) se disolvió en una mezcla de NaOH 2N (3 mL) y 1,4-dioxano (3 mL). Se añadió pirocarbonato de terc-butilo (218 mg, 1,0 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se eliminó el dioxano mediante evaporación rotatoria, se añadió agua (30 mL) y la mezcla se lavó con EtOAc. La fase acuosa se enfrió a 0ºC, se acidificó con HCl 3N y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua y solución acuosa saturada de NaCl, se secó (MgSO_{4} anhidro) y se concentró para dar el compuesto del título (199 mg).
G. (1S,2S,3R,5S)-Pinanodiol N-Boc-cis-3-fenil-D,L-prolina-L-leucina boronato
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 4B, el producto del Ejemplo 15F (192 mg, 0,66 mmoles) fue acoplado con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R,5S)-pinanodiol leucina boronato (274 mg, 0,73 mmoles) en presencia de TBTU (277 mg, 0,73 mmoles) para proporcionar el compuesto del título (286 mg).
H. Sal hidrocloruro del ácido cis-3-fenil-D,L-prolina-L-leucina borónico
El producto del Ejemplo 15G (262 mg) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) y se trató a 0ºC con HCl-dioxano 4N. Al cabo de 2 h, la mezcla de reacción se concentró a sequedad y el residuo se trató con ácido isobutilborónico (66 mg, 0,64 mmoles) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 3B para proporcionar el compuesto del título (71 mg) en forma de un sólido blanco.
Ejemplo 17 Sal hidrocloruro del ácido trans-3-fenil-D,L-prolina-L-leucina borónico [Mg-363]^{*} A. N-Boc-trans-3-fenil-L-prolina
Por un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 1A, se acopló N-acetil-trans-3-fenil-D,L-prolina (preparado como se describió en el Ejemplo 15D; 1,5 g, 6,44 mmoles) con (S)-a-metilbencilamina (0,92 mL, 7,08 mmoles) en presencia de EDC (1,26 g, 7,08 mmoles) y HOBT (956 mg, 7,08 mmoles). Los productos diaestereómeros fueron separados mediante cromatografía rápida (elución con 1,5-2,5% de HOAc-EtOAc). Las fracciones correspondientes a la banda de elución más lenta se concentraron para proporcionar un aceite claro incoloro (913 mg).
El aceite (900 mg, 2,68 mmoles) se disolvió en una mezcla de HOAc (7 mL) y HCl 8N, y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 h. La mezcla se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en agua (30 mL), se lavó con EtOAc y se concentró de nuevo a sequedad.
El residuo se redisolvió en agua-1,4-dioxano 1:1 (15 mL) y se trató con pirocarbonato de terc-butilo (1,13 g, 5,20 mmoles) mediante un procedimiento análogo al descrito en el Ejemplo 15F, para proporcionar el compuesto del título (574 mg) en forma de un sólido blanco.
B. Sal hidrocloruro de ácido trans-3-fenil-L-prolina-L-leucina borónico
Por procedimientos análogos a los descritos en los Ejemplos 15G-H, el producto del Ejemplo 16A (332 mg, 1,14 mmoles) fue acoplado con sal trifluoroacetato de (1S,2S,3R, 5S)-pinanodiol leucina boronato (452 mg, 120 mmoles) y desprotegido para proporcionar el compuesto del título (101 mg) en forma de un sólido blanco.
Ejemplo 18 Experimentos cinéticos
La Tabla II resume los resultados de experimentos cinéticos que midieron la inhibición del proteasoma 20S por compuestos que tienen la fórmula del compuesto (1) o (2). P, AA^{1}, AA^{2}, AA^{3}, y Z^{1} y Z^{2} representan las estructuras presentes en la fórmula (1) o (2). El protocolo para el ensayo cinético descrito en las tablas II-V es como se describe en Rock et al., Cell 78}: 761-771 (1994). En estas tablas, se exponen los valores de K_{i}, que son constantes de disociación para el equilibrio que se establece cuando la enzima y el inhibidor interaccionan para formar el complejo enzima:inhibidor. Las reacciones se llevaron a cabo usando proteasoma 20S de músculo de conejo, activado con SDS. El sustrato usado fue Suc-LLVY-AMC.
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En la Tabla III, P, AA^{1}, AA^{2}, AA^{3}, y X son sustituyentes de la fórmula general: P-AA^{1}-AA^{2}-AA^{3}-X.
La Tabla III demuestra que los ácidos dipéptido borónicos tienen valores de K_{i} más bajos que los correspondientes dipéptido aldehídos.
TABLA III Comparación de ácidos dipéptido borónicos con dipéptido aldehídos 
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|l|l|l|l|l|l|l|}\hline
 Comp.  \+ P  \+ AA ^{1}   \+ AA ^{2}   \+ AA ^{3}   \+ X  \+ 20S
K _{i}  (nM) \\\hline  MG-105 ^{*}   \+ Z  \+ -  \+
L-Leu  \+ L-Leu  \+ CHO  \+ 15.000
\\  MG-274 ^{*}   \+ Z  \+ -  \+
L-Leu  \+ L-Leu  \+
B(OH) _{2}   \+ 3,0
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
En la Tabla IV, P, AA^{1}, AA^{2}, AA^{3}, y X son sustituyentes de la fórmula general: P-AA^{1}-AA^{2}-AA^{3}-X.
La Tabla IV demuestra la selectividad notablemente superior para el proteasoma 20S sobre otras proteasas, p. ej. catepsina B, mostrada por los ésteres/ácidos borónicos en comparación con los péptido aldehídos.
(TABLA IV pasa a página siguiente)
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\newpage
La selectividad de los inhibidores de ácido borónico del proteasoma se demuestra también en la Tabla V.
TABLA V Selectividad de los inhibidores de éster y ácido borónico del proteasoma 20S 
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|l|c|c|c|c|}\hline
 Comp.  \+ 20S K _{i}  (nM)  \+ Elastasa leucocitaria  \+ Catepsina
G  \+  Quimotripsina pancreática \\   \+ humana K _{i}  (nM)  \+
K _{i}  (nM)  \+ humana K _{i}  (nM) \+ \\\hline 
MG-262 ^{*}   \+ 0,03  \+ 15  \+ 55  \+ 7 \\ 
MG-267 ^{*}   \+ 0,1  \+ 150  \+ 33.000  \+ 2.300 \\
 MG-296  \+ 1,7  \+ 36  \+ 9.200  \+ 75 \\ 
MG-309  \+ 0,82  \+ 7.000  \+ 4.800  \+ 465 \\ 
MG-341  \+ 0,6  \+ 2.300  \+ 628  \+ 322
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Ejemplo 19 Inhibición de la degradación de proteínas en células C2C12
Se marcaron células C2C12 (un línea de mioblastos de ratón) durante 48 horas con ^{35}S-metionina. Después se lavaron las células y se preincubaron durante 2 h en el mismo medio suplementado con metionina no marcada 2 mM. El medio se eliminó y se reemplazó con una parte alícuota fresca del medio de preincubación que contiene 50% de suero, y una concentración del compuesto a ensayar. El medio fue después retirado, se preparó a TCA al 10% y se centrifugó. Se contó la radiactividad soluble en TCA. La inhibición de la proteolisis se calculó como el porcentaje de disminución de la radiactividad soluble en TCA. A partir de estos datos se calculó el valor de la EC_{50} para cada compuesto.
Los datos para los compuestos de fórmula (1) o (2) se presentan en la Tabla VI.
(TABLA VI pasa a página siguiente)
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Ejemplo 20 MG-273 inhibe la caquexia inducida por corticosterona en ratas
Se estabilizaron ratas en una dieta libre de 3-metilhistidina y después se pusieron en jaulas metabólicas para la recogida de muestras de la orina de 24 horas. Después de dos días de recogida de orina para determinar la producción de 3-metilhistidina basal, las ratas fueron tratadas con inyecciones subcutáneas diarias de corticosterona (100 mg/kg). A partir del segundo día de tratamiento con corticosterona, algunas de las ratas fueron también tratadas con MG-273, administrado a través de una bomba osmótica subcutánea a una dosis de aproximadamente 120 \mug/kg de peso corporal/día. Las ratas testigo recibieron solamente vehículo (25% de DMSO/75% de PEG (200)), administrado de manera similar. La figura 1 muestra que el tratamiento con MG-273 reduce la producción urinaria de 3-metilhistidina, que fue inducida en respuesta al tratamiento con corticosterona.
Ejemplo 21 MG-273 inhibe la activación del NF-\kappaB
Este ensayo se realizó como se ha descrito con anterioridad (Palombella et al., Cell, 78}: 773-785 (1994)). Células de osteosarcoma MG63 fueron estimuladas mediantetratamiento con TNF- \alpha durante los tiempos que se indican. Se prepararon extractos de células completas y se analizaron mediante el ensayo de desplazamiento de la movilidad electroforética usando la sonda PRDII procedente del promotor del gen de IFN-\beta humano. La Figura 2 muestra que la actividad de unión de NF-\kappaB fue inhibida mediante el pretratamiento durante 1 hora con MG-273. Un inhibidor de aldehído del proteasoma, MG-132 (Cbz-L-Leu-L-Leu-L-Leu-H) también inhibió la actividad de unión del NF-\kappaB, mientras que (Ac-L-Leu-L-Leu-L-Met-H), que es inactivo frente al proteasoma 20S, no inhibió la actividad de unión del NF-\kappaB.
Ejemplo 22 MG-273 inhibe la expresión de moléculas de adhesión celular en células HUVE
Se expusieron HUVECs en placas de microtítulo a las concentraciones indicadas de inhibidor durante 1 hora, antes de añadir 100 U/mL de TNF-\alpha. Se realizaron ensayos de unión a la superficie de las células a 4ºC, usando concentraciones de saturación de anticuerpos monoclonales específicos para las moléculas de adhesión celular (Becton Dickenson) e IgG anti-murina de cabra F(ab')_{2} conjugada con fluorescente (Caltag Labs, San Francisco, CA). Los inmunoensayos de fluorescencia para E-selectina y I-CAM se realizaron a las 4 horas, y para V-CAM a las 16 horas. La Figura 3 muestra que la expresión de I-CAM, V-CAM y E-selectina en la superficie de la célula en HUVECs estimuladas con TNF-\alpha se inhibe de forma significativa por MG-273 a concentraciones de 0,5 \muM o superiores.
Ejemplo 23 Los compuestos de ácido borónico bloquean la respuesta DTH en ratones
Se sensibilizaron ratones no tratados con anterioridad, mediante la aplicación de 20 \muL de una solución al 0,5%(v/v) de 2,4-dinitrofluorobenceno en acetona/aceite de oliva 4:1 a las dos plantas de los miembros traseros. Este procedimiento se lleva a cabo en dos días consecutivos, que se denominan días 0 y 1.
La fase referente de la respuesta de sensibilidad al contacto se desencadenó el día 5 por aplicación de 10 \muL de una solución al 0,2% (v/v) de 2,4-dinitrofluorobenceno en acetona/aceite de oliva 4:1 en ambos lados de la oreja izquierda. La oreja testigo contralateral fue tratada en ambos lados con 10 \muL de vehículo solamente. Los ratones fueron ligeramente anestesiados para este procedimiento mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de una mezcla de cetamina (80 mg/kg, Henry Schein) y xilazina (16 mg/kg, Henry Schein).
Los compuestos de ensayo se administraron oralmente en forma de suspensión en metilcelulosa al 0,5% (4000 centipoises, Fisher Scientific) 30 minutos antes de la aplicación de la dosis de sensibilización de 2,4-dinitrofluorobenceno a las orejas. La dosis se suministró en un volumen final de 0,5 mL usando una aguja de alimentación maleable de 2,5 cm de calibre 24 con una punta de bola de 1,25 mm (Roboz Surgical).
Aproximadamente 18 horas después de la sensibilización, se determinó la hinchazón de la oreja midiendo la oreja testigo y la de experimentación usando un micrómetro Mitutoyo Digital. La diferencia absoluta en espesor de las orejas de experimentación (izquierdas) frente a las testigo (derechas) se determinó para cada grupo de tratamiento. La eficacia se determinó comparando esta diferencia de espesor con la diferencia calculada para el grupo testigo tratado con vehículo. Los resultados de la prueba se exponen en la Tabla VII.
TABLA VII Inhibición de la respuesta de DTH en ratones 
\catcode`\#=12\nobreak\centering\begin{tabular}{|c|c|c|}\hline 
Compuesto  \+ Dosis (mg/kg)  \+ % de inhibición \\\hline 
MG-296  \+ 50  \+ 60 \\  MG-309  \+
3  \+ 40 \\  MG-341  \+ 3  \+ 90
\\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Aunque la invención precedente ha sido descrita con cierto detalle con fines de claridad y comprensión, un experto en la técnica apreciará por la lectura de esta descripción que pueden hacerse varios cambios en forma y detalle sin apartarse del auténtico alcance de la invención y de las reivindicaciones anexas.

Claims (27)

1. Un compuesto que tiene la fórmula:
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o una sal aceptable farmacéticamente del mismo;
en la que
P es R^{7}-(CO)-, R^{7}-NH-(CO)-, R^{7}-O-(CO)- ó R^{7}-SO_{2}-, en donde R^{7} es heteroarilo o heteroarilalquilo; o, cuando P es R^{7}-(CO)-, R^{7} puede también ser N-morfolinilo;
B^{1}, en cada aparición, es independientemente N de los grupos ó CH;
X^{1}, en cada aparición, es independientemente uno de los grupos -C(O)-NH-, -CH_{2}-NH-, -CH(OH)-CH_{2}-, -CH(OH)-CH(OH)-, -CH(OH)-CH_{2}-NH-, -CH=CH-, -C(O)-CH_{2}, -SO_{2}-NH-, -SO_{2}-CH_{2}- ó -CH(OH)-CH_{2}-C(O)-NH-, con la condición de que cuando B^{1} es N, entonces el grupo X^{1} unido a dicho B^{1} es -C(O)-NH-;
X^{2} es uno entre los grupos -C(O)-NH-, -CH(OH)-CH_{2}-, -CH(OH)-CH(OH)-, -C(O)-CH_{2}, -SO_{2}-NH-, -SO_{2}-CH_{2}- ó -CH(OH)-CH_{2}-C(O)-NH-;
R es hidrógeno o alquilo, o R forma, junto con el grupo R^{1} adyacente, o cuando A es cero, junto con el grupo R^{2} adyacente, un sistema de anillo nitrogenado saturado o parcialmente saturado, mono-, bi- o tri-cíclico, que tiene de 4 a 14 miembros en anillo, que puede estar opcionalmente sustituido con uno o dos entre los grupos ceto, hidroxi, alquilo, arilo, aralquilo, alcoxi o ariloxi;
R^{1}, en cada aparición, es independientemente uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{2} es uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{3} es uno entre los grupos hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -CH_{2}-R^{5}, en donde la porción en anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
R^{5}, en cada caso, es uno entre los grupos arilo, aralquilo, alcarilo, cicloalquilo, un heterociclo de 5 a 10 miembros, saturado, parcialmente insaturado o aromático, o -W-R^{6}, en donde W es un chalcógeno y R^{6} es alquilo, en donde la porción en anillo de dicho arilo, aralquilo, alcarilo o heterociclo, puede estar opcionalmente sustituida;
Z^{1} y Z^{2} son indpendientemente uno entre los grupos alquilo, hidroxi, alcoxi o ariloxi, o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi que tiene al menos dos grupos hidroxi separados por al menos dos átomos de conexión en una cadena o anillo, comprendiendo dichos cadena o anillo átomos de carbono y, opcionalmente, un heteroátomo o heteroátomos que pueden ser N, S u O; y
A es 0, 1 ó 2.
2. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que el grupo heteroarilo R^{7} se elige entre el grupo formado por tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3b]tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, benzoxazolilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatiinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinoleílo, quinoleílo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, 4aH-carbazolilo, carbazolilo, \beta-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, isoxazolilo, furazanilo y fenoxazinilo.
3. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que P es uno entre los grupos quinoleinacarbonilo, piridinacarbonilo, quinoleinasulfonilo, quinoxalinacarbonilo, quinoxalinasulfonilo, pirazinacarbonilo, pirazinasulfonilo, furanocarbonilo, furanosulfonilo o N-morfolinilcarbonilo.
\newpage
4. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que P es uno entre los grupos 8-quinoleinacarbonilo, 8-quinoleinasulfonilo, 2-quinoxalinacarbonilo, 2-quinoxalina-sulfonilo, 2-pirazinacarbonilo, 2-pirazinasulfonilo, 3-furanocarbonilo, 3-furanosulfonilo o N-morfolinacarbonilo.
5. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que A es 0.
6. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que B^{1}, en cada aparición, es CH.
7. El compuesto según la reivindicación 6ª, en el que X^{1}, en cada aparición, es -C(O)-NH-.
8. El compuesto según la reivindicación 7ª, en el que X^{2} es -C(O)-NH-.
9. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{4}).
10. El compuesto según la reivindicación 1^{a}, en el que:
R^{1}, en cada aparición, y R^{2} y R^{3} son cada uno de ellos independientemente uno entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}), cicloalquilo (C_{3}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}), un grupo heteroarilo de 5, 6, 9 o 10 miembros, o -CH_{2}-R^{5};
R^{5}, en cada caso, es uno entre los grupos arilo (C_{6}-C_{10}), ar(C_{6}-C_{10})-alquilo(C_{1}-C_{6}), alc(C_{1}-C_{6})-arilo(C_{6}-C_{10}), cicloalquilo (C_{3}-C_{10}), alcoxi C_{1}-C_{8}, alquiltio C_{1}-C_{8}, o un grupo heteroarilo de 5, 6, 9 o 10 miembros,
en donde la porción en anillo de dichos grupos arilo, aralquilo, alcarilo o grupos heteroarilo de 5, 6, 9 ó 10 miembros de R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{5} pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes elegidos independientemente entre el grupo formado por alquilo C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquil (C_{1}-C_{6})-cicloalquilo (C_{3}-C_{8}), alquenilo (C_{2}-C_{8}), alquinilo (C_{2}-C_{8}), ciano, amino, alquilamino (C_{1}-C_{6}), dialquilamino (C_{1}-C_{6}), bencilamino, dibencilamino, nitro, carboxi, carboalcoxi (C_{1}-C_{6}), trifluorometilo, halógeno, alcoxi (C_{1}-C_{6}), arilo (C_{6}-C_{10}), aril (C_{6}-C_{10})-alquilo (C_{1}-C_{6}), aril (C_{6}-C_{10})-alcoxi (C_{1}-C_{6}), hidroxi, alquiltio (C_{1}-C_{6}), alquilsulfinilo (C_{1}-C_{6}), alquilsulfonilo (C_{1}-C_{6}), ariltio (C_{6}-C_{10}), arilsulfinilo (C_{6}-C_{10}), arilsulfonilo (C_{6}-C_{10}), arilo(C_{6}-C_{10}), alquil(C_{1}-C_{6})-arilo(C_{6}-C_{10}) y haloarilo(C_{6}-C_{10}).
11. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que:
A es cero;
X^{2} es -C(O)-NH-;
R es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{8}); y
R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).
12. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{12}).
13. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R^{3} es alquilo (C_{1}-C_{6}).
14. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R^{3} es alquilo C_{4}.
15. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R^{3} es isobutilo.
16. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que R^{2} es uno de los grupos isobutilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-piridilmetilo, 6-quinoleinilmetilo, 3-indolilmetilo, bencilo, 4-fluorobencilo, 4-hidroxibencilo, 4-(2'-piridilmetoxi)bencilo, 4-(benciloxi)-bencilo, bencilnaftilmetilo o fenetilo.
17. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que Z^{1} y Z^{2} son independientemente uno entre los grupos alquilo (C_{1}-C_{6}), hidroxi, alcoxi (C_{1}-C_{6}) o ariloxi (C_{6}-C_{10}).
18. El compuesto según la reivindicación 16, en el que Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi.
19. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que Z^{1} y Z^{2} juntos forman un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
20. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que:
P es uno entre los grupos quinoleínacarbonilo, piridinacarbonilo, quinoleínasulfonilo, quinoxalinacarbonilo, quinoxalinasulfonilo, pirazinacarbonilo, pirazinasulfonilo, furanocarbonilo, furanosulfonilo o N-morfolinacarbonilo;
A es cero;
X^{2} es -C(O)-NH-;
R es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{8});
R^{2} y R^{3} son independientemente uno entre hidrógeno, alquilo (C_{1}-C_{8}), cicloalquilo (C_{3}-C_{10}), arilo (C_{6}-C_{10}), ar(C_{6}-C_{10})-alquilo (C_{1}-C_{6}), piridilmetilo o quinoleinilmetilo; y
Z^{1} y Z^{2} son ambos hidroxi, alcoxi (C_{1}-C_{6}) o ariloxi (C_{6}-C_{10}), o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
21. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que:
P es uno entre los grupos 8-quinoleinacarbonilo, 8-quinoleínasulfonilo, 2-quinoxalinacarbonilo, 2-quinoxalinasulfonilo, 2-pirazinacarbonilo, 2-pirazinasulfonilo, 3-piridinacarbonilo, 3-piridinasulfonilo, 3-furanocarbonilo, 3-furanosulfonilo o N-morfolinacarbonilo;
A es cero;
X^{2} es -C(O)-NH-;
R es hidrógeno o alquilo (C_{1}-C_{8});
R^{3} es isobutilo;
R^{2} es uno entre los grupos isobutilo, 1-naftilmetilo, 2-naftilmetilo, 3-piridilmetilo, 2-piridilmetilo, 6-quinoleinilmetilo, 3-indolilmetilo, bencilo, 4-fluorobencilo, 4-hidroxibencilo, 4-(2'-piridilmetoxi)bencilo, 4-(benciloxi)-bencilo, bencilnaftilmetilo o fenetilo; y
Z^{1} y Z^{2} son independientemente uno entre los grupos hidroxi, alcoxi (C_{1}-C_{6}), ariloxi (C_{6}-C_{10}) o Z^{1} y Z^{2} juntos forman un resto derivado de un compuesto dihidroxi elegido entre el grupo formado por pinacol, perfluoropinacol, pinanodiol, etilenglicol, dietilenglicol, 1,2-ciclohexanodiol, 1,3-propanodiol, 2,3-butanodiol, glicerol o dietanolamina.
22. El compuesto según la reivindicación 1ª, en el que dicho compuesto es uno entre los grupos:
ácido N-(2-pirazina)carbonil- L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(2-quinoleína)sulfonil-L-homofenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(3-piridina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico,
ácido N-(8-quinoleina)sulfonil-\beta-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-(O-bencil)-L-tirosina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-L-tirosina-L-leucina borónico,
ácido N-(4-morfolina)carbonil-[O-(2-piridilmetil)]-L-tirosina-L-leucina borónico;
23. El compuesto según la reivindicación 22ª, en el que dicho compuesto es:
ácido N-(2-pirazina)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico, o una sal o éster boronato del mismo aceptable farmacéuticamente.
24. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, o una sal del mismo aceptable farmacéuticamente, y un vehículo o diluyente aceptable farmacéuticamente.
25. Una composición farmacéutica según la reivindicación 24ª, en la que dicho compuesto está presente en una cantidad efectiva para inhibir la función del proteasoma en un mamífero.
26. El uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1ª a 23ª para la elaboración de una composición farmacéutica para un tratamiento elegido entre:
(a) inhibir el crecimiento de una célula cancerosa:
(b) reducir la velocidad de degradación de la proteína muscular;
(c) reducir la actividad de NF-\kappaB en una célula;
(d) reducir la velocidad de rotura de la proteína intracelular;
(e) reducir la velocidad de degradación de la p53;
(f) inhibir la degradación de la ciclina en una célula;
(g) prevenir o tratar un estado inflamatorio;
(h) inhibir la presentación del antígeno en una célula;
(i) inhibir la adhesión celular inducible dependiente de NF-\kappaB; o
(j) inhibir la replicación del VIH.
27. El uso según la reivindicación 26ª, en el que un paciente ha sido diagnosticado de, o está en riesgo de desarrollar, un estado elegido entre el grupo consistente en rechazo de tejidos, rechazo de órganos, artritis, infección, dermatosis, enfermedad intestinal inflamatoria, asma, osteoporosis, osteoartritis y una enfermedad autoinmunitaria.
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