ES2202501T3 - Monitor de fluorescencia de glucosa y metodo. - Google Patents

Abstract

SE PRESENTA UN MONITOR DE GLUCOSA, Y UN METODO RELACIONADO, QUE DETERMINAN LA CONCENTRACION DE GLUCOSA EN UNA MUESTRA MONITORIZANDO LA LUZ FLUORESCENTE PRODUCIDA DIRECTAMENTE POR CUALQUIER GLUCOSA PRESENTE EN LA MUESTRA. EL MONITOR DE GLUCOSA ILUMINA LA MUESTRA CON LUZ DE EXCITACION ULTRAVIOLETA QUE INDUCE QUE CUALQUIER GLUCOSA PRESENTE EN LA MUESTRA SE VUELVA FLUORESCENTE, SIENDO LA LUZ FLUORESCENTE MONITORIZADA Y PROCESADA PARA DETERMINAR LA CONCENTRACION DE GLUCOSA EN LA MUESTRA. UN SENSOR MONITORIZA LA LUZ DEVUELTA, QUE INCLUYE LUZ FLUORESCENTE PRODUCIDA POR CUALQUIER GLUCOSA EN LA MUESTRA, Y GENERA UNA PRIMERA Y UNA SEGUNDA SEÑAL ELECTRICA INDICATIVAS DE LA INTENSIDAD DE LA LUZ EN DOS LONGITUDES DE BANDA. UNA LONGITUD DE BANDA INCLUYE UN PICO ESPECTRAL CARACTERISTICO DE FLUORESCENCIA DE LA GLUCOSA, Y LA OTRA LONGITUD DE BANDA ES UNA BANDA DE REFERENCIA QUE TIENE CARACTERISTICAS ESPECTRALES CONOCIDAS. UN PROCESADOR PROCESA ENTONCES LA PRIMERA Y LA SEGUNDA SEÑAL ELECTRICA PARA DETERMINARLA CONCENTRACION DE GLUCOSA EN LA MUESTRA. SE UTILIZA UNA GUIA DE ONDAS DE FIBRA OPTICA PARA GUIAR LA LUZ DE EXCITACION DESDE LA FUENTE DE LUZ LASER HACIA LA MUESTRA Y LA LUZ DE RETORNO DESDE LA MUESTRA HASTA EL SENSOR. LA GUIA DE ONDAS DE FIBRA OPTICA ESTA ALOJADO EN UN CATETER O SONDA QUE ESTA ADAPTADO PARA MONITORIZAR LA CONCENTRACION DE LA GLUCOSA PERCUTANEAMENTE EN LOS TEJIDOS DE LA CAVIDAD ORAL DE LA BOCA DE UNA PERSONA TALES COMO LAS ENCIAS.

Description

Monitor de fluorescencia de glucosa y método.

Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere generalmente a monitores de glucosa y, más particularmente, a monitores de glucosa que determinan la concentración de glucosa en una muestra monitorizando la luz fluorescente producida directamente por la glucosa.

La glucosa es un compuesto orgánico básico que se encuentra en organismos vivos, alimentos y productos químicos y, a menudo, es ventajoso determinar con exactitud la concentración de glucosa en una muestra. Por ejemplo, una persona que tiene diabetes ha perdido la capacidad para producir la insulina que regula el nivel de glucosa en su sangre. Las personas afectadas deben recibir continuamente inyecciones de insulina y deben monitorizar regularmente el nivel de glucosa en su sangre, para regular el momento adecuado de las inyecciones de insulina. La monitorización de la glucosa en sangre requiere habitualmente que se extraiga una pequeña cantidad de sangre del organismo. Cada vez que se penetra la piel del organismo para extraer la sangre, existe un riesgo de infección además de un aumento asociado de tejido con cicatrices. Además, se gasta un tiempo considerable en la extracción, tratamiento y análisis de la sangre.

Métodos típicos de determinación de la concentración de glucosa en una muestra, tal como sangre, caen dentro de las categorías de métodos con amina aromática, métodos enzimáticos, métodos de oxidación, y más recientemente, espectroscopía infrarroja de reflexión y de absorción. La espectroscopía infrarroja de reflexión y de absorción en sangre requiere generalmente instrumentación relativamente complicada y cara y tiene una resolución limitada.

A partir de lo anterior, debe ser evidente que existe una necesidad de un monitor de glucosa que sea relativamente no agresivo, que sea sencillo y rápido de usar y que proporcione una buena resolución. La presente invención satisface estas necesidades.

Sumario de la invención

La presente invención se realiza como un monitor de glucosa según la reivindicación 1 y el método relacionado según la reivindicación 2 que determina la concentración de glucosa en una muestra monitorizando la luz fluorescente producida directamente por cualquier cantidad de glucosa presente en la muestra. El monitor de glucosa ilumina la muestra con luz de excitación que induce a cualquier cantidad de glucosa en la muestra a fluorescer, siendo detectada la luz de fluorescencia y tratada para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

El monitor de glucosa según la reivindicación 1 incluye una fuente luminosa, un sensor y un procesador. La fuente luminosa emite luz de excitación que se dirige a la muestra para inducir a cualquier cantidad de glucosa en la muestra a fluorescer. La luz de excitación hace que la muestra produzca luz de respuesta, que incluye luz fluorescente producida por cualquier cantidad de glucosa en la muestra. El sensor monitoriza la luz de respuesta y genera dos señales que representan la intensidad de luz dentro de dos bandas de longitud de onda espectral. La primera señal es indicativa de la intensidad de luz de respuesta que tiene una longitud de onda dentro de una primera banda de longitud de onda. La segunda señal es indicativa de la intensidad de luz dentro de una segunda banda de longitud de onda. El procesador trata las dos señales eléctricas para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

En una característica más detallada de la invención, la fuente luminosa emite luz de banda estrecha que tiene una longitud de onda entre aproximadamente 250 nanómetros y aproximadamente 350 nanómetros. Una fuente de luz ultravioleta de banda estrecha típica es un láser excímero que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros. La primera banda de longitud de onda incluye un pico espectral característico de la fluorescencia de la glucosa. El pico tiene una longitud de onda que es aproximadamente 30 a 50 nanómetros más larga que la longitud de onda de la luz de excitación. Utilizando un láser excímero, la longitud de onda del pico espectral característico de la fluorescencia de la glucosa oscila entre 335 y 355 nanómetros. La segunda banda de longitud de onda es una banda de referencia y se elige del intervalo de aproximadamente 380 a 420 nanómetros.

El sensor monitoriza la luz de respuesta a partir de la muestra. En otra característica más detallada de la invención, el sensor tiene más de un detector que monitorizan simultáneamente la luz de respuesta dentro de la primera y segunda bandas de longitud de onda. En un sensor que tiene dos detectores, un detector determina la intensidad de luz dentro de la primera banda de longitud de onda y el otro detector determina la intensidad de luz dentro de la segunda banda de longitud de onda. Cada detector proporciona una señal indicativa de la intensidad de luz dentro de la correspondiente banda de longitud de onda.

El procesador determina la razón de las intensidades de luz para las dos bandas de longitud de onda a partir de las señales. La concentración de glucosa en la muestra se determina a partir de la razón de las intensidades de luz.

La muestra puede consistir en una variedad de composiciones y puede ser de forma sólida o líquida. Monitorizando los niveles de glucosa en la boca de una persona, la muestra son los tejidos de la cavidad bucal, tales como las encías o la base de la lengua.

En otra característica más detallada de la invención, el sensor incluye un filtro dicroico utilizado para separar la luz de excitación de la luz de respuesta, un diafragma que tiene una rendija y un prisma utilizado para separar la luz de respuesta en sus longitudes de onda espectrales. El sensor puede incluir un espectrógrafo que tiene una serie de detectores que está conectada a un analizador óptico.

En otra característica más detallada de la invención, se utiliza una guía de ondas para guiar la luz de excitación desde la fuente luminosa hasta la muestra. Se utiliza la misma guía de ondas u otra guía de ondas para guiar la luz de respuesta procedente de la muestra hasta el sensor. Si se utilizan guías de ondas de fibra óptica, se pueden mantener unidas entre sí en un haz, para la facilidad de uso.

En otra característica más detallada de la invención, las guías de ondas se alojan en una sonda. La sonda puede tomar muchas formas dependiendo de la aplicación. La sonda puede ser un catéter para la monitorización de la concentración de glucosa en un flujo sanguíneo extracorporal. La sonda también se puede adaptar para monitorizar de forma percutánea la concentración de glucosa en el organismo de una persona a través de la piel, tal como en los tejidos de la cavidad bucal de la boca.

Otras características y ventajas de la presente invención deben hacerse evidentes a partir de la siguiente descripción de la realización preferida, tomada junto con los dibujos adjuntos que ilustran, a título de ejemplo, los principios de la invención.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es un diagrama de bloques del sistema de monitorización de glucosa que realiza la invención.

La figura 2 es un gráfico de la intensidad de fluorescencia de la glucosa frente a la longitud de onda, cuando se ilumina una muestra de glucosa con luz láser que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros.

La figura 3 es un gráfico de la intensidad de fluorescencia del plasma frente a la longitud de onda, cuando se ilumina una muestra de plasma humano con luz láser que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros.

La figura 4 es un gráfico de la concentración de glucosa frente a la razón de la intensidad de luz en una banda de longitud de onda característica de la fluorescencia de la glucosa con respecto a la intensidad de luz en una banda de longitud de onda de referencia.

La figura 5 es un diagrama de bloques de una primera realización de un sistema de monitorización de glucosa que utiliza guías de ondas de fibra óptica.

La figura 6 es un diagrama de bloques de una segunda realización de un sistema de monitorización de glucosa que utiliza una guía de ondas de fibra óptica, que porta simultáneamente la luz de excitación hasta la muestra y la luz de respuesta procedente de la muestra.

La figura 7 ilustra un catéter de fibra óptica para su uso en la monitorización de la concentración de glucosa en un flujo sanguíneo.

La figura 8 ilustra una sonda de fibra óptica para su uso en la monitorización de la concentración de glucosa en una persona de forma percutánea.

La figura 9 ilustra una sonda de fibra óptica para su uso en la monitorización de la concentración de glucosa de forma percutánea en los tejidos de la cavidad bucal de la boca de una persona, tales como las encías.

Descripción de las realizaciones preferidas

Tal como se muestra en los dibujos a título de ejemplo, la presente invención se realiza como un sistema 10 de monitorización de glucosa para determinar la concentración de glucosa en una muestra 12 monitorizando la fluorescencia de la glucosa directamente, sin el uso de tintes fluorescentes ni el uso de otros métodos indirectos. Además, el sistema de monitorización de fluorescencia de glucosa utiliza instrumentación relativamente barata y proporciona mejor resolución que los métodos anteriores de espectroscopía óptica. El sistema de monitorización de fluorescencia de glucosa es relativamente no agresivo, facilita resultados inmediatos y se adapta fácilmente a la mayoría de las unidades clínicas y de laboratorio. El sistema de monitorización no requiere extraer sangre del organismo puesto que puede monitorizar la concentración de glucosa de forma percutánea, eliminando así las técnicas de tratamiento de sangre relacionadas, tales como centrifugación, almacenamiento y otras pruebas que llevan tiempo.

En el sistema 10 de monitorización de glucosa mostrado en la figura 1, una fuente 14 luminosa dirige la luz 16 de excitación ultravioleta a la muestra 12, para inducir a cualquier cantidad de glucosa dentro de la muestra a fluorescer. Un sensor 18 monitoriza la luz 20 de respuesta procedente de la muestra, incluyendo tal luz de respuesta la fluorescencia de la glucosa, y genera dos señales eléctricas correspondientes a la intensidad de luz de respuesta dentro de dos bandas de longitud de onda predeterminadas. La primera señal eléctrica representa la intensidad de luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda que incluye un pico espectral característico de la fluorescencia de la glucosa. La segunda señal eléctrica representa la intensidad de luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda de referencia. Las señales eléctricas primera y segunda se comunican desde el sensor hasta un procesador 22 sobre las líneas 24 y 26, respectivamente. Entonces, el procesador trata las dos señales eléctricas para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

La fuente 14 luminosa también se denomina fuente de excitación. La luz 16 de excitación procedente de la fuente luminosa puede tener una longitud de onda desde 250 nm hasta 350 nm. La luz de excitación se puede producir a partir de cualquier tipo de fuente luminosa ultravioleta de banda estrecha. En la realización preferida, la fuente luminosa es un láser excímero de luz ultravioleta que tiene una longitud de onda de 308 nm y una densidad de energía de 12 milijulios por milímetro cuadrado. Alternativamente, se pueden utilizar un láser de nitrógeno, un láser de helio-cadmio interrumpido ópticamente, un láser diódico de frecuencia multiplicada o un láser de estado sólido. La intensidad o densidad de energía de la luz de excitación debe exceder de un milijulio por milímetro cuadrado pero no debe exceder de 15 milijulios por milímetro cuadrado. Si la densidad de energía es demasiado elevada, puede producirse ablación de la muestra, mientras que si la densidad de energía es demasiado baja, puede ser difícil obtener una señal eléctrica suficiente.

Los detectores del sensor 18 pueden ser tan sencillos como diodos individuales sensibles a la luz, con filtros de paso de banda apropiados, o tan complicados como un analizador óptico multicanal que analiza un amplio espectro de luz de respuesta. Preferiblemente, se utiliza una serie de CCD (dispositivo de acoplamiento de carga) sencilla para monitorizar una variedad de longitudes de onda, según se desee, con cada célula individual monitorizando una región específica de longitudes de onda.

En su forma más sencilla, el procesador 22 recibe las señales eléctricas procedentes del sensor 18 y, casi instantáneamente, proporciona una razón de las señales. El procesador puede tratar adicionalmente la razón para determinar e indicar la presencia, ausencia o concentración de glucosa en la muestra 12.

El procedimiento de determinación de la concentración de glucosa en la muestra se comprende mejor con referencia a las figuras 2-4. El espectro mostrado en la figura 2 es el espectro de fluorescencia de la glucosa tras la excitación con un láser excímero de luz ultravioleta que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros. El espectro muestra que tiene un pico doble que es característico de todas las disoluciones de glucosa. Un pico espectral corresponde a una banda 28 ancha de fluorescencia centrada en aproximadamente 440 nanómetros y el otro pico espectral corresponde a una banda 30 estrecha de fluorescencia centrada en aproximadamente 345 nanómetros. La longitud de onda del pico de la banda estrecha de fluorescencia es aproximadamente de 30 a 50 nanómetros más larga que la longitud de onda de la luz de excitación. La banda estrecha de fluorescencia de la glucosa es la banda de longitud de onda característica de la glucosa que se monitoriza para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

Tal como se muestra en la figura 3, el espectro de fluorescencia del plasma humano, cuando se excita mediante un láser excímero de luz ultravioleta que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros, es distinto al espectro de fluorescencia de la glucosa. El espectro de fluorescencia del plasma humano tiene una banda 32 ancha de fluorescencia centrada en aproximadamente 380 nanómetros y una banda 34 estrecha de fluorescencia centrada en aproximadamente 345 nanómetros. La banda 34 estrecha de fluorescencia corresponde a la banda 30 estrecha de fluorescencia de la fluorescencia de la glucosa y está indicada por un pequeño pico que tiene una longitud de onda que es aproximadamente 30 nanómetros más corta que la longitud de onda del pico más grande de la banda 32 ancha de fluorescencia del plasma humano. La banda 34 estrecha de fluorescencia es la banda de longitud de onda característica de fluorescencia de la glucosa que se monitoriza para determinar la concentración de glucosa en la muestra. La banda de referencia se elige a partir de una banda de longitud de onda que sea distinta a la banda 34 estrecha de fluorescencia de la fluorescencia de la glucosa.

Tal como se describe en la figura 4, la concentración de glucosa Cgl en la muestra se determina a partir de la razón de intensidades de luz medidas dentro de las bandas de longitud de onda deseadas (Igl/Iref). La primera intensidad de luz Igl representa la intensidad de luz medida dentro de una primera banda de longitud de onda correspondiente a la banda 34 de longitud de onda característica de fluorescencia de la glucosa descrita en la figura 3. La segunda intensidad de luz Iref representa la intensidad de luz medida dentro de una segunda banda de longitud de onda correspondiente a la banda de longitud de onda de referencia. Cuando se utiliza un láser excímero, la primera banda de longitud de onda se extiende desde aproximadamente 335 nanómetros hasta aproximadamente 355 nanómetros y la segunda banda de longitud de onda se extiende desde aproximadamente 380 nanómetros hasta aproximadamente 420 nanómetros, o alguna parte de los mismos. La razón Igl/Iref aumenta cuando aumenta la concentración de glucosa en la muestra. La relación exacta entre la concentración de glucosa y la razón de intensidad se deriva empíricamente.

La figura 5 muestra una primera realización, en la que se determina la concentración de glucosa en la muestra 12 mediante la iluminación de la muestra y mediante la captura del espectro de fluorescencia resultante, utilizando guías 36 y 38 de ondas de fibra óptica. Una primera guía 36 de ondas de fibra óptica guía la luz 16 de excitación o láser desde la fuente 14 de excitación hasta la muestra. La luz de excitación se colima cuando se emite desde la fuente de excitación y se dirige hacia la fibra utilizando un espejo 40, que es enormemente reflectante de la luz ultravioleta que tiene una longitud de onda de 308 nanómetros. La luz de excitación se enfoca en la primera guía de ondas de fibra óptica utilizando una lente 42. La luz de excitación viaja a lo largo de la primera guía de ondas de fibra óptica hasta la muestra.

La luz 16 de excitación hace que la muestra 12 produzca luz 20 de respuesta dispersada que tiene un espectro que depende de la composición de la muestra. La luz de respuesta incluye cualquier luz de excitación reflejada y la luz fluorescente producida por la muestra, incluyendo la luz fluorescente producida por cualquier cantidad de glucosa presente en la muestra. La luz de respuesta se recoge mediante una segunda guía 38 de ondas de fibra óptica y se guía hasta y se emite sin enfocar hacia la entrada de un espectrógrafo 44. En la entrada del espectrógrafo hay un filtro de paso largo (no mostrado) que tiene una longitud de onda de corte de aproximadamente 335 nanómetros, que excluye de la luz de respuesta cualquier luz de excitación reflejada. Además, en la entrada del espectrógrafo hay una rendija que tiene una anchura de 100 micrómetros. La rendija está seguida por una rejilla de difracción que tiene 150 retículas por milímetro y un prisma (no mostrado) que resuelve la luz de respuesta a lo largo de un eje. Una posición a lo largo del eje corresponde a una longitud de onda de la luz de respuesta.

A lo largo del eje se sitúa un detector 46, preferiblemente una serie de dispositivos de acoplamiento de carga de 1024 elementos. Cada elemento de la serie de detectores corresponde a una longitud de onda espectral de la luz de respuesta. La serie de detectores proporciona una señal 48 analógica que se convierte en una señal digital para la determinación de la concentración de glucosa en la muestra 12. La señal digital contiene los datos que representan la intensidad de luz recibida para cada una de las longitudes de onda espectrales. Los datos también se pueden visualizar en la pantalla de un analizador 50 óptico multicanal o guardarse en un disco de datos. En la realización preferida, el detector es una serie de dispositivos de acoplamiento de carga de 1024 elementos, número de pieza EG&G 1422G.

Se calcula la concentración de glucosa en la muestra 12 a partir de la razón de la intensidad de luz recogida en dos bandas o regiones de longitud de onda espectral. Utilizando los datos procedentes de la serie de detectores, se compara la intensidad de luz dentro de la primera banda de longitud de onda con la intensidad de luz procedente de la segunda banda de longitud de onda.

En la figura 6 se muestra una realización relacionada. Esta realización utiliza una única guía 52 de ondas de fibra óptica para transmitir la luz 16 de excitación hasta la muestra 12 y para recoger la luz 20 de respuesta procedente de la muestra. Una primera lente 42' enfoca la luz de excitación en el extremo de la guía 52 de ondas de fibra óptica y también colima la luz de respuesta recogida que se emite desde la guía de ondas de fibra óptica. La luz de respuesta colimada pasa a través del espejo 40 ultravioleta y a través de un filtro 54 óptico de paso largo. El filtro óptico de paso largo tiene una longitud de onda de corte de 335 nanómetros para filtrar la luz de excitación reflejada de la luz de respuesta. La luz fluorescente se enfoca en otra guía de ondas de fibra óptica mediante una segunda lente 56. Esta segunda guía 58 de ondas de fibra óptica transmite la luz de respuesta hasta la entrada de un espectrógrafo. Tal como se trató anteriormente, el espectrógrafo resuelve la luz fluorescente en sus componentes espectrales individuales, que se analizan para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

Todavía en otra realización mostrada en la figura 7, la guía de ondas está contenida dentro de un catéter 60. El catéter puede contener una fibra de sílice fundida o un haz de muchas fibras. El catéter puede ser permanente para su uso en un sistema de monitorización en línea. También puede detectar la glucosa en un torrente sanguíneo extracorporal, tal como en una máquina corazón-pulmón o en un sistema de diálisis.

En las figuras 8 y 9 se muestran realizaciones alternativas del catéter 60. En la figura 8, se muestra el catéter 60' para monitorizar la glucosa de un organismo 62 humano de forma percutánea, o a través de la piel. En la figura 9, preferiblemente se utiliza el catéter 60'' de fibra óptica para monitoriza de forma percutánea la concentración de glucosa en los tejidos de la cavidad bucal de la boca de una persona, tales como las encías 64 o en la base de la lengua. Por tanto, se puede monitorizar la concentración de glucosa en el organismo humano a través de este enfoque relativamente no agresivo, que utiliza espectroscopía de fluorescencia de ultravioleta.

El sistema 10 de monitorización de fluorescencia de glucosa funciona con otros fluidos corporales así como con órganos sólidos. Es también aplicable a un amplio intervalo de necesidades de detección de glucosa en procesos alimenticios, tales como la elaboración del pan, la elaboración del vino y la fabricación de bebidas no alcohólicas. Se puede monitorizar la concentración de glucosa dentro de muchos cuerpos translúcidos o transparentes. Además, se pueden monitorizar todos los tipos de fluidos biológicos y no biológicos, incluyendo plasma, orina, soda, productos alimenticios, vino, etc.

A partir de lo anterior, se apreciará que la concentración de glucosa en un organismo humano se puede monitorizar sin que se requiera que se extraiga sangre del organismo. El monitor de glucosa monitoriza la fluorescencia de la glucosa directamente, facilitando una determinación directa de la concentración de glucosa. Las guías de onda de fibra óptica simplifican el suministro de la luz de excitación a la muestra y la recogida de la luz de respuesta procedente de la muestra. El monitor de glucosa proporciona la monitorización casi instantánea de la concentración de glucosa.

Aunque en lo anterior se describen realizaciones preferidas de la presente invención, se entiende que aquellos expertos en la técnica pueden hacer diversos cambios a las realizaciones preferidas mostradas sin separarse del alcance de la invención. La invención se define sólo mediante las siguientes reivindicaciones.

Claims (3)

1. Aparato para la determinación de la concentración de glucosa en una muestra, que comprende:

una fuente luminosa que emite luz de excitación que se dirige a una muestra para producir luz de respuesta procedente de la muestra, incluyendo tal luz de respuesta luz fluorescente producida por cualquier glucosa presente en la muestra;

un sensor que monitoriza la luz de respuesta y genera una señal de fluorescencia de glucosa indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda asociada con la fluorescencia directa de la glucosa y genera una señal de referencia indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda de referencia; y

un procesador que trata la señal de fluorescencia de glucosa y la señal de referencia para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

2. Método de determinación de la concentración de glucosa en una muestra, que comprende:

dirigir la luz de excitación a una muestra para hacer que la muestra produzca luz de respuesta, incluyendo tal luz de respuesta luz fluorescente producida por cualquier cantidad de glucosa presente en la muestra;

monitorizar la luz de respuesta y generar las señales primera y segunda, la primera señal indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una primera banda de longitud de onda y la segunda señal indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una segunda banda de longitud de onda; y

tratar las señales primera y segunda para determinar la concentración de glucosa en la muestra.

3. Método según la reivindicación 2, que comprende además:

dirigir luz de excitación a una muestra para hacer que la muestra produzca luz de respuesta, incluyendo tal luz de respuesta luz fluorescente producida por cualquier cantidad de glucosa presente en la muestra;

monitorizar la luz de respuesta y generar la señal de fluorescencia de glucosa y una señal de referencia, la señal de fluorescencia de glucosa indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda asociada con la fluorescencia directa de la glucosa y la señal de referencia indicativa de la intensidad de la luz de respuesta dentro de una banda de longitud de onda de referencia; y

tratar la señal de fluorescencia de glucosa y la señal de referencia para determinar la concentración de glucosa en la muestra.