ES2209942T3 - Antibioticos caprazamicinas y procedimiento para la produccion de los mismos. - Google Patents

Antibioticos caprazamicinas y procedimiento para la produccion de los mismos.

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ES2209942T3 ES00951962T ES00951962T ES2209942T3 ES 2209942 T3 ES2209942 T3 ES 2209942T3 ES 00951962 T ES00951962 T ES 00951962T ES 00951962 T ES00951962 T ES 00951962T ES 2209942 T3 ES2209942 T3 ES 2209942T3
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caprazamycin
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Masayuki Igarashi
Hiroshi Naganawa
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Microbial Chemistry Research Foundation
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Abstract

Un antibiótico, caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E o caprazamicina F, que es un compuesto representado por la siguiente **fórmula** en la que R es un grupo tridecilo para la caprazamicina A; un grupo 11-metil-dodecilo para la caprazamicina B; un grupo dodecilo para la caprazamicina C; un grupo undecilo para la caprazamicina E; y un grupo 9-metil-decilo para la caprazamicina F, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

Description

Antibióticos caprazamicinas y procedimiento para la producción de los mismos.
Campo técnico
Esta invención trata de nuevos antibióticos, concretamente caprazamicinas A, B, C, E y F o las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, que poseen una excelente actividad antibacteriana. Esta invención trata también de un procedimiento para la producción de una caprazamicina. Además, esta invención trata de una composición farmacéutica, especialmente una composición antibacteriana, que comprende una caprazamicina o una sal de la misma como principio activo. Más aún, esta invención trata de Streptomyces sp. MK730- 62F2, como un nuevo microorganismo que posee como naturaleza característica la capacidad de producir una caprazamicina.
Antecedentes en la materia
En la quimioterapia de las infecciones bacterianas, especialmente la quimioterapia de las infecciones por bacterias ácido-alcohol resistentes, se han empleado hasta ahora rifampicina, kanamicina, estreptomicina, viomicina, capreomicina, cicloserina y similares, como fármacos antibacterianos.
Un problema serio para la quimioterapia de las infecciones bacterianas radica en que las bacterias causantes de la infección bacteriana desarrollan una resistencia a los fármacos. En concreto, la aparición de bacterias ácido-alcohol resistentes que son resistentes a rifampicina, kanamicina, estreptomicina, viomicina, capreomicina, cicloserina y similares ha hecho surgir un problema social con respecto a la quimioterapia de estas infecciones bacterianas. De esta forma, existe ahora una gran necesidad de un nuevo agente terapéutico que sea eficaz frente a las infecciones bacterianas como las que ocasionan las bacterias ácido-alcohol resistentes que presentan resistencias a los fármacos antibacterianos. También existe una gran necesidad de un nuevo fármaco quimioterápico eficaz frente a las infecciones bacterianas ocasionadas por bacterias ácido-alcohol resistentes atípicas y para las cuales no se ha establecido aún ningún tratamiento quimioterápico. Con objeto de cubrir estas necesidades existe, por lo tanto, una fuerte demanda para que se encuentren o creen nuevos compuestos con una estructura química nueva y que puedan mostrar buenas propiedades tales como una excelente actividad antibacteriana, de forma diferente a la de los antibióticos conocidos y empleados hasta ahora. El objeto de esta invención es por lo tanto proporcionar nuevos antibióticos con una excelente actividad antibacteriana y que son capaces de cubrir las necesidades mencionadas arriba.
Descripción de la invención
Nosotros, los inventores de esta invención, hemos llevado a cabo nuestras investigaciones con la intención de descubrir antibióticos útiles. Como resultado de ello, hemos encontrado que una nueva cepa microbiana que pertenece al género Streptomyces, y que hemos aislado, puede producir una pluralidad de antibióticos con una nueva estructura. Hemos denominado una clase de esta pluralidad de antibióticos, de forma colectiva, como caprazamicina. Hemos encontrado además que una caprazamicina muestra una fuerte actividad antibacteriana frente a varias bacterias ácido-alcohol resistentes y bacterias gram positivas así como frente a sus cepas resistentes a fármacos. Hemos desarrollados nuestros estudios y hemos encontrado ahora a partir del análisis de las caprazamicinas, que las caprazamicinas que obtenemos incluyen cinco compuestos. Hemos denominado estos cinco compuestos como caprazamicinas A, B, C, E y F, respectivamente, y hemos resuelto sus estructuras químicas. Además, hemos encontrado y confirmado que las caprazamicinas A, B, C, E y F son compuestos nuevos y que están representados colectivamente por una fórmula general (I) que se da a continuación. Además, estas caprazamicinas tienen una estructura básica común tal como se muestra en la fórmula general (I), en la que el grupo R de la cadena lateral es un grupo alquilo con una cadena lineal o ramificada de 11 a 13 átomos de carbono, diferentes unos de otros.
De acuerdo con un primer aspecto de esta invención, por lo tanto, se proporciona un antibiótico, caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E o caprazamicina F, que es un compuesto representado por la siguiente fórmula general (I)
1
en la que R es un grupo tridecilo para la caprazamicina A; un grupo 11-metil-dodecilo para la caprazamicina B; un grupo dodecilo para la caprazamicina C; un grupo undecilo para la caprazamicina E; y un grupo 9-metil-decilo para la caprazamicina F, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.
El nuevo antibiótico, una caprazamicina proporcionada de acuerdo con el primer aspecto de esta invención incluye caprazamicina A de fórmula (Ia), caprazamicina B de fórmula (Ib), caprazamicina C de fórmula (Ic), caprazamicina E de fórmula (Ie) y caprazamicina F de fórmula (If), tal como se muestran más abajo.
(1) Caprazamicina A con la siguiente fórmula (Ia)
2
[Compuesto de fórmula general (I) en la que R es un grupo tridecilo -(CH_{2})_{12}-CH_{3}]
\newpage
(2) Caprazamicina B con la siguiente fórmula (Ib)
3
es decir, un compuesto de fórmula general (I) en la que R es un grupo 11-metil-dodecilo
4
(3) Caprazamicina C con la siguiente fórmula (Ic)
5
[Compuesto de fórmula general (I) en la que R es un grupo dodecilo -(CH_{2})_{11}-CH_{3}].
\newpage
(4) Caprazamicina E con la siguiente fórmula (Ie)
6 
\vskip1.000000\baselineskip
[Compuesto de fórmula general (I) en la que R es un grupo undecilo -(CH_{2})_{10}-CH_{3}], y
(5) Caprazamicina F con la siguiente fórmula (If)
\vskip1.000000\baselineskip
7 
\vskip1.000000\baselineskip
es decir, un compuesto de fórmula general (I) en la que R es un grupo 9-metil-decilo.
Las propiedades fisicoquímicas de la caprazamicina A de fórmula (Ia) de acuerdo con el primer aspecto de esta invención son las siguientes.
(1) Apariencia
Polvo incoloro
(2) Fórmula molecular
C_{53}H_{87}N_{5}O_{22}
(3) Espectrometría de masas de alta resolución (HRFABMS. Modo catión)
Encontrado 1146,5933 (M+H)^{+}
Calculado 1146,5921
(4) Rotación específica
[\alpha]_{D}^{23} -1,4º (c 0,83, DMSO)
(5) Espectro de absorción ultravioleta (en metanol)
\lambda_{max} nm (\varepsilon) : 261 (7,400)
El espectro UV se muestra en la Figura 1 de las figuras adjuntas.
(6) Espectro de absorción infrarrojo
Tal como se muestra en la Figura 2 de las figuras adjuntas.
(7) Espectro de la resonancia magnética nuclear de protón
El espectro de la RMN de protón medido en DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 3 de las figuras adjuntas.
(8) Espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C
El espectro de la RMN-^{13}C medido en DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 4 de las figuras adjuntas.
(9) Solubilidad
Soluble en metanol, dimetilsulfóxido (DMSO) y agua, pero insoluble en acetona y acetato de etilo.
(10) TLC
Cuando se somete a una cromatografía en capa fina sobre gel de sílice 60F_{254} (un producto de Merck & Co) y se revela con un disolvente que consiste en butanol-metanol-agua (4.1.2), el valor R_{f} es de 0,44.
La caprazamicina A de acuerdo con el primer aspecto de esta invención es una sustancia anfotérica, y se pueden dar ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de la misma tales como sus sales con bases orgánicas como sales de amonio cuaternarias, sus sales con varios metales, como por ejemplo, sus sales con metales alcalinos como la sal de sodio, o sus sales ácidas con ácidos orgánicos como el ácido acético o con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico.
Las propiedades fisicoquímicas de la caprazamicina B de fórmula (Ib) de acuerdo con el primer aspecto de esta invención son las siguientes.
(1) Apariencia
Polvo incoloro
(2) Fórmula molecular
C_{53}H_{87}N_{5}O_{22}
(3) Espectrometría de masas de alta resolución (HRFABMS. Modo anión)
Encontrado 1144,5750 (M-H)^{-}
Calculado 1144,5764
(4) Rotación específica
[\alpha]_{D}^{23} -2,6º (c 0,91, DMSO)
(5) Espectro de absorción ultravioleta (en metanol)
\lambda_{max} nm (\varepsilon) : 261 (8,000)
El espectro UV se muestra en la Figura 5 de las figuras adjuntas.
(6) Espectro de absorción infrarrojo
Tal como se muestra en la Figura 6 de las figuras adjuntas.
(7) Espectro de la resonancia magnética nuclear de protón
El espectro de la RMN de protón medido en una mezcla de disolvente formada por DMSO-d_{6}-D_{2}O (10:1) a 500 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 7 de las figuras adjuntas.
(8) Espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C
\newpage
El espectro de la RMN-^{13}C medido en una mezcla de disolvente formada por DMSO-d_{6}-D_{2}O (10:1) a 125 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 8 de las figuras adjuntas.
(9) Solubilidad
Soluble en metanol, DMSO y agua, pero insoluble en acetona y acetato de etilo.
(10) TLC
Cuando se somete a una cromatografía en capa fina sobre gel de sílice 60F_{254} (un producto de Merck & Co) y se revela con un disolvente que consiste en butanol-metanol-agua (4.1.2), el valor R_{f} es de 0,44.
La caprazamicina B de acuerdo con el primer aspecto de esta invención es una sustancia anfotérica, y se pueden dar ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de la misma tales como sus sales con bases orgánicas como sales de amonio cuaternarias, sus sales con varios metales, como por ejemplo, sus sales con metales alcalinos como la sal de sodio, o sus sales ácidas con ácidos orgánicos como el ácido acético o con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico.
Las propiedades fisicoquímicas de la caprazamicina C de fórmula (Ic) de acuerdo con el primer aspecto de esta invención son las siguientes.
(1) Apariencia
Polvo incoloro
(2) Fórmula molecular
C_{52}H_{85}N_{5}O_{22}
(3) Espectrometría de masas de alta resolución (HRFABMS. Modo catión)
Encontrado 1132,5747 (M+H)^{+}
Calculado 1132,5764
(4) Rotación específica
[\alpha]_{D}^{25} -1,1º (c 1,33, DMSO)
(5) Espectro de absorción ultravioleta (en metanol)
\lambda_{max} nm (\varepsilon) : 261 (8,300)
El espectro UV se muestra en la Figura 9 de las figuras adjuntas.
(6) Espectro de absorción infrarrojo
Tal como se muestra en la Figura 10 de las figuras adjuntas.
(7) Espectro de la resonancia magnética nuclear de protón
El espectro de la RMN de protón medido en DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 11 de las figuras adjuntas.
(8) Espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C
El espectro de la RMN-^{13}C medido en DMSO-d_{6}- a 125 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 12 de las figuras adjuntas.
(9) Solubilidad
Soluble en metanol, DMSO y agua, pero insoluble en acetona y acetato de etilo.
(10) TLC
Cuando se somete a una cromatografía en capa fina sobre gel de sílice 60F_{254} (un producto de Merck & Co) y se revela con un disolvente que consiste en butanol-metanol-agua (4.1.2), el valor R_{f} es de 0,44.
La caprazamicina C de acuerdo con el primer aspecto de esta invención es una sustancia anfotérica, y se pueden dar ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de la misma tales como sus sales con bases orgánicas como sales de amonio cuaternarias, sus sales con varios metales, como por ejemplo, sus sales con metales alcalinos como la sal de sodio, o sus sales ácidas con ácidos orgánicos como el ácido acético o con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico.
Las propiedades fisicoquímicas de la caprazamicina E de fórmula (Ie) de acuerdo con el primer aspecto de esta invención son las siguientes.
(1) Apariencia
Polvo incoloro
(2) Fórmula molecular
C_{51}H_{83}N_{5}O_{22}
(3) Espectrometría de masas de alta resolución (HRFABMS. Modo catión)
Encontrado 1118,5613 (M+H)^{+}
Calculado 1118,5608
(4) Rotación específica
[\alpha]_{D}^{25} -5,1º (c 0,83, DMSO)
(5) Espectro de absorción ultravioleta (en metanol)
\lambda_{max} nm (\varepsilon) : 262 (7,700)
El espectro UV se muestra en la Figura 13 de las figuras adjuntas.
(6) Espectro de absorción infrarrojo
Tal como se muestra en la Figura 14 de las figuras adjuntas.
(7) Espectro de la resonancia magnética nuclear de protón
El espectro de la RMN de protón medido en DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 15 de las figuras adjuntas.
(8) Espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C
El espectro de la RMN-^{13}C medido en DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 16 de las figuras adjuntas.
(9) Solubilidad
Soluble en metanol, DMSO y agua, pero insoluble en acetona y acetato de etilo.
(10) TLC
Cuando se somete a una cromatografía en capa fina sobre gel de sílice 60F_{254} (un producto de Merck & Co) y se revela con un disolvente que consiste en butanol-metanol-agua (4.1.2), el valor R_{f} es de 0,44.
La caprazamicina E de acuerdo con el primer aspecto de esta invención es una sustancia anfotérica, y se pueden dar ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de la misma tales como sus sales con bases orgánicas como sales de amonio cuaternarias, sus sales con varios metales, como por ejemplo, sus sales con metales alcalinos como la sal de sodio, o sus sales ácidas con ácidos orgánicos como el ácido acético o con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico.
Las propiedades fisicoquímicas de la caprazamicina F de fórmula (If) de acuerdo con el primer aspecto de esta invención son las siguientes.
(1) Apariencia
Polvo incoloro
(2) Fórmula molecular
C_{51}H_{83}N_{5}O_{22}
(3) Espectrometría de masas de alta resolución (HRFABMS. Modo catión)
Encontrado 1118,5615 (M+H)^{-}
Calculado 1118,5608
(4) Rotación específica
[\alpha]_{D}^{25} -4,7º (c 0,90, DMSO)
(5) Espectro de absorción ultravioleta (en metanol)
\lambda_{max} nm (\varepsilon) : 262 (7,600)
El espectro UV se muestra en la Figura 17 de las figuras adjuntas.
(6) Espectro de absorción infrarrojo
Tal como se muestra en la Figura 18 de las figuras adjuntas.
(7) Espectro de la resonancia magnética nuclear de protón
El espectro de la RMN de protón medido en DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 19 de las figuras adjuntas.
(8) Espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C
El espectro de la RMN-^{13}C medido en DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente se muestra en la Figura 20 de las figuras adjuntas.
(9) Solubilidad
Soluble en metanol, DMSO y agua, pero insoluble en acetona y acetato de etilo.
(10) TLC
Cuando se somete a una cromatografía en capa fina sobre gel de sílice 60F_{254} (un producto de Merck & Co) y se revela con un disolvente que consiste en butanol-metanol-agua (4.1.2), el valor R_{f} es de 0,44.
La caprazamicina F de acuerdo con el primer aspecto de esta invención es una sustancia anfotérica, y se pueden dar ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de la misma tales como sus sales con bases orgánicas como sales de amonio cuaternarias, sus sales con varios metales, como por ejemplo, sus sales con metales alcalinos como la sal de sodio, o sus sales ácidas con ácidos orgánicos como el ácido acético o con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico.
Por cierto, la expresión "una caprazamicina" expresada así, simplemente, en esta descripción puede querer decir, a veces, cualquiera de las siguientes caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y caprazamicina F, una mezcla de dos o más de ellas o bien una mezcla de todas ellas.
Las caprazamicinas que presentan la anterior fórmula general (I) de acuerdo con esta invención, poseen unas propiedades biológicas que se dan a continuación.
Así, la caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y caprazamicina F muestran, cada una, una actividad antibacteriana frente a bacterias que abarcan las bacterias ácido-alcohol resistentes, incluidas sus cepas resistentes a fármacos, así como las bacterias gram positivas, incluidas sus cepas resistentes a fármacos (cepas meticilin-resistentes, y otras). Mediante los siguientes procedimientos se estudia la actividad antibacteriana de una caprazamicina frente a estas bacterias.
Ejemplo de ensayo 1
El espectro antibacteriano de la caprazamicina A frente a varios microorganismos se determinó en un medio agar nutritivo complementado con un 1% de glicerina, mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 1.
TABLA 1
8
Ejemplo de ensayo 2
El espectro antibacteriano de la caprazamicina B frente a varios microorganismos se determinó en un medio agar nutritivo complementado con un 1% de glicerina, mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la tabla 2.
TABLA 2
9
Ejemplo de ensayo 3
El espectro antibacteriano de la caprazamicina B frente a varios microorganismos, distintos a los microorganismos especificados en la Tabla 2, se determinó en un medio agar Müller-Hinton mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 3.
TABLA 3
10
Ejemplo de ensayo 4
El espectro antibacteriano de la caprazamicina C frente a varios microorganismos se determinó en un medio agar nutritivo complementado con un 1% de glicerina, mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 4.
TABLA 4
11
Ejemplo de ensayo 5
El espectro antibacteriano de la caprazamicina E frente a varios microorganismos se determinó en un medio agar nutritivo complementado con un 1% de glicerina, mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 5.
TABLA 5
12
Ejemplo de ensayo 6
El espectro antibacteriano de la caprazamicina B frente a varios microorganismos se determinó en un medio agar nutritivo complementado con un 1% de glicerina, mediante un procedimiento de diluciones seriadas de acuerdo con el procedimiento estándar proporcionado por la Japanese Society of Chemotherapy. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 6.
TABLA 6
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Ejemplo de ensayo 7
El espectro antibacteriano de cada una de las caprazamicinas A, B, C, E y F frente a Mycobacterium tuberculosis, y frente a bacterias ácido-alcohol resistentes atípicas, Mycobacterium avium y Mycobacterium intracellulare, se determinó en un medio líquido Middlebrook 7H9 mediante un procedimiento de diluciones seriadas. Al mismo tiempo, se determinaron los espectros antibacterianos de la rifampicina (RMP) y la isoniacida (INH) (como fármacos de comparación) frente a las bacterias ácido-alcohol resistentes mencionadas anteriormente, mediante el mismo procedimiento de diluciones seriadas. Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 7 a continuación.
TABLA 7
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Además, de acuerdo con un segundo aspecto de esta invención, se proporciona un procedimiento para la producción de antibióticos, caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y/o caprazamicina F de fórmula general (I) dada más arriba, caracterizado porque el procedimiento comprende el cultivo de una cepa microbiana que pertenece al género Streptomyces y que es capaz de producir al menos una de las siguientes: caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y caprazamicina F, y la recuperación de al menos una de las caprazamicinas A, B, C, E y F del cultivo resultante.
El microorganismo o la cepa microbiana, que es capaz de producir el antibiótico, una caprazamicina, y que se puede emplear en el procedimiento de acuerdo con el segundo aspecto de esta invención, puede ser cualquier cepa de microorganismos que posea la capacidad de producir dichos antibióticos que presenten las propiedades fisicoquímicas y propiedades biológicas mencionadas arriba, y se puede seleccionar de entre una amplia variedad de microorganismos. Entre tales microorganismos que se pueden emplear, se puede citar una cepa de actinomicetos, a la que se ha asignado un número de cepa MK730-62F2 y que se aisló a partir de una muestra de tierra de la isla de Oafu, Hawaii, en nuestro Institute of Microbial Chemistry en marzo de 1997, como un ejemplo concreto y preferido de microorganismo capaz de producir los antibióticos, las caprazamicinas.
Las propiedades microbiológicas de la cepa MK730-62F2 se describen a continuación.
1. Morfología
La cepa MK730-62F2 tiene micelios ramificados, a partir de los cuales se extienden largas hifas aéreas con la formación de espirales con 5 a 10 vueltas en los extremos de las hifas aéreas. La cadena de esporas maduras se encuentra en forma de una cadena que comprende de 10 a 50 esporas ovales, y las dimensiones de las esporas son aproximadamente de 0,5 a 0,6 x 0,8 a 1,0 micras. La superficie de las esporas es lisa. No se observan giros, conidióforos, esporangios ni esporas con motilidad.
2. Características de crecimiento en varios medios de cultivo
Los patrones de color que se dan entre corchetes [ ] para las descripciones de los colores están de acuerdo con el "Color Harmony Manual" de la Container Corporation of America.
(1) Medio agar sacarosa-nitrato (cultivado a 27ºC)
Formación de hifas aéreas de color blanco, en una capa fina, sobre colonias amarillo pálido [2 ea, Lt Wheat]. No se observan pigmentos solubles.
(2) Medio agar glicerol-asparagina (medio ISP-5, cultivado a 27ºC)
Formación de hifas aéreas desde blanco grisáceo [3 dc, Natural] hasta gris claro [d] sobre colonias desde amarillo pálido [2 ea, Lt Wheat] hasta marrón amarillento pálido [2 ng, Dull Gold]. No se observan pigmentos solubles.
(3) Medio agar sal inorgánica de almidón (medio ISP-4, cultivado a 27ºC)
Formación de hifas aéreas desde blanco hasta gris claro [d] sobre colonias desde amarillo pálido [2 ea, Lt Wheat] hasta marrón amarillento pálido [2 lg, Mustard Tan]. No se observan pigmentos solubles.
(4) Medio agar tirosina (medio ISP-7, cultivado a 27ºC)
Formación de hifas aéreas blanco grisáceo [b, Oyster White hasta 3 dc, Natural] sobre colonias de color marrón amarillento pálido [2 le, Mustard hasta 2 ng, Dull Gold], con la formación de un pigmento soluble marrón oscuro.
(5) Medio agar con extracto de levadura y extracto de malta (medio ISP-2, cultivado a 27ºC)
Formación de hifas aéreas desde blanco grisáceo [b, Oyster White] hasta gris claro [d] sobre colonias de color marrón amarillento pálido [2 ie, Lt Mustard Tan hasta 3 ic, Lt Amber]. No se observan pigmentos solubles.
(6) Medio agar harina de avena (medio ISP 3, cultivado a 27ºC)
Se forman hifas aéreas desde blanco grisáceo [3 dc, Natural] hasta gris claro [d] sobre colonias amarillo pálido [2 ie, Lt Mustard Tan hasta 3 ic, Lt Amber]. No se observan pigmentos solubles.
3. Propiedades fisiológicas (1) Intervalo de temperatura de crecimiento
Esta cepa MK730-62F2 se incubó en un medio agar glucosa-asparagina (con un 1% de glucosa, 0,05% de asparagina, 0,05% de di-potasio hidrógeno fosfato y 2,5% de agar, a pH 7,0) a distintas temperaturas 10ºC, 20ºC, 24ºC, 27ºC, 30ºC, 37ºC, 45ºC y 50ºC. Los resultados mostraron que esta cepa podía crecer dentro del intervalo de temperatura de 20ºC a 37ºC, excluyendo 10ºC, 45ºC y 50ºC. La temperatura óptima para el crecimiento está cercana a entre 30ºC y 37ºC.
(2) Hidrólisis de almidón (en medio agar con sales inorgánicas de almidón, medio ISP-4, cultivado a 27ºC)
La hidrólisis del almidón se observó aproximadamente a partir del tercer día tras el comienzo del cultivo, y el grado de actividad hidrolítica es moderado.
(3) Formación de pigmento melanoide (en caldo de Triptona y extracto de levadura, medio ISP-1; medio agar peptona-extracto de levadura hierro, medio ISP-6; medio agar tirosina, medio ISP-7; cultivado a 27ºC en cada medio)
Positiva en todos los medios empleados.
(4) Uso de fuentes de carbono (en medio agar Pridham-Gottlieb, medio ISP-9, cultivado a 27ºC)
Son utilizables para el crecimiento D-glucosa, L-arabinosa, D-fructosa, sacarosa, inositol, ramnosa, rafinosa y D-manitol. Probablemente sea utilizable la D-xilosa.
(5) Reducción de nitrato (en una solución de peptona acuosa con un 1% de nitrato de potasio, medio ISP-8, cultivado a 27ºC)
Negativa.
(6) Licuefacción de la gelatina (en medio con gelatina, cultivado a 20ºC, y en medio con glucosa-peptona-gelatina, cultivado a 27ºC)
En el medio con gelatina, no se observó licuefacción tras 40 días de cultivo; pero en el medio con glucosa-peptona-gelatina, se observó una licuefacción débil al cabo de aproximadamente 40 días tras el comienzo del cultivo.
(7) Coagulación y peptonización de la leche desnatada (en 10% de leche desnatada, cultivada a 37ºC)
No se observó coagulación. Al cabo de aproximadamente 7 días tras el comienzo del cultivo, se observó el comienzo de la peptonización y la peptonización se completó en el día 14 a partir del comienzo del cultivo.
Resumiendo las propiedades de la cepa MK730-62F2 arriba mencionadas, esta cepa se caracteriza porque tiene micelios ramificados, a partir de los cuales se extienden hifas aéreas con formación de espirales; porque la superficie de las esporas es lisa; porque en varios medios de cultivo, se forman hifas aéreas desde color blanco grisáceo hasta gris claro sobre colonias de color desde amarillo pálido hasta marrón amarillento pálido; porque no se observan pigmentos solubles excepto la formación de pigmento melanoide; porque la temperatura óptima para su crecimiento está cercana a entre 30ºC y 37ºC; porque la formación de pigmento melanoide es positiva; y porque la hidrólisis de almidón se produce en un grado moderado. Además, el ácido 2,6-diaminoplmélico que contienen las paredes celulares de esta cepa está en la forma LL, y la menaquinona predominante presente en las células bacterianas es MK-9(H_{8}) y MK-9(H_{6}).
A la vista de estas propiedades, se supone que la cepa MK730-62F2 pertenece al género Streptomyces. Al buscar especies conocidas análogas a esta cepa MK730-62F2 en cuanto a sus propiedades, se encontraron Streptomyces diastatochromogenes (Bibliografía: International Journal of Systematic Bacteriology, Vol.22, p.290, 1972), Streptomyces resistomycificus (Bibliografía: International Journal of Systematic Bacteriology, Vol.18, p.165, 1968), Streptomyces collinus (Bibliografía: International Journal of Systematic Bacteriology, Vol.18, p-100, 1968), y Streptomyces aurantiogriseus (Bibliografía: International Journal of Systematic Bacteriology, Vol.18, p.297, 1968). De modo que examinamos la cepa MK730-62F2 en comparación con las cuatro cepas arriba mencionadas que se conservaban en nuestro instituto. Los resultados se muestran en la Tabla 8 a continuación.
TABLA 8 
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TABLA 8 (continuación)
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TABLA 8 (continuación)
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TABLA 8 (continuación)
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Tal como queda claro en la Tabla 8 anterior, la cepa MK730-62F2 posee propiedades que se parecen mucho a las de cualquiera de las cepas con las que se compara en la Tabla 8. Sin embargo, Streptomyces resistomycificus es diferente de la cepa MK730-62F2 en que con Streptomyces resistomycificus, el color de las colonias es marrón amarillento pálido a negro marronáceo, el pigmento soluble está teñido de marrón, y no se produce peptonización de la leche desnatada. El Streptomyces collinus es diferente de la cepa MK730-62F2 en que, en la primera especie, la forma de las hifas aéreas es recta a curva y no se produce peptonización de la leche desnatada. Streptomyces aurantiogriseus se distingue de la cepa MK730-62F2 porque, en la primera especie, el pigmento soluble está teñido de marrón, la gelatina se licúa y el nitrato se reduce. Por otro lado, Streptomyces diastatochromogenes se parece mucho a la cepa MK730-62F2, salvo que la licuefacción de la gelatina es positiva en la primera especie. En este momento es, sin embargo, imposible que la cepa MK730-62F2 sea identificada como una cepa que pertenezca a Streptomyces diastatochromogenes. Por lo tanto, hemos denominado la cepa MK730-62F2 como Streptomyces sp. MK730-62F2.
La cepa MK730-62F2 ha sido depositada en un depósito japonés, el "National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology" localizado en el No. 1-3, Higashi 1-chome, Ciudad de Tsukuba, Ibaraki-ken, Japón, bajo el número de depósito "FERM P-17067", el 27 de noviembre de 1998. Esta cepa se ha depositado ahora bajo el número de depósito "FERM BP-7218" en dicho National Institute de acuerdo con el Tratado de Budapest.
De acuerdo con el segundo aspecto sobre el procedimiento de esta invención, la producción de los antibióticos, caprazamicinas, se puede llevar a cabo tal y como se describe a continuación.
Así, la producción de los antibióticos, caprazamicinas, se lleva a cabo inoculando una cepa microbiana capaz de producir al menos uno de los antibióticos caprazamicinas A, B, C, E y F (esta cepa se denominará en lo sucesivo simplemente "una cepa productora de caprazamicina") en un medio nutritivo, y cultivando dicha cepa microbiana a una temperatura adecuada para producir el antibiótico, una caprazamicina, mediante lo cual se obtiene el cultivo que contiene antibióticos caprazamicinas. Como medio nutritivo para emplear con este propósito, se puede emplear cualquier medio nutritivo que sea utilizable para el cultivo de actinomicetos. Como fuentes nutritivas, se pueden emplear fuentes de nitrógeno, como por ejemplo, harina de semillas de soja, peptona, extracto de levadura, extracto de malta, extracto soluble de maíz, sulfato de amonio y otros disponibles en el mercado. Como fuentes de carbono, se pueden emplear hidratos de carbono como pasta de tomate, glicerina, almidón, glucosa, galactosa, dextrina y otros, así como grasas y similares. Además, se pueden emplear sales inorgánicas como cloruro de sodio, carbonato cálcico y similares, como aditivos. Si es necesario, se pueden añadir otros aditivos como, por ejemplo, sales metálicas en cantidad muy pequeña. Estas sustancias aditivas pueden ser cualquiera de los materiales que puede utilizar una cepa productora de caprazamicina y que son útiles para la producción de los antibióticos caprazamicinas, y cuyo empleo es conocido por su uso en el medio de cultivo para el cultivo de actinomicetos.
Para la producción de los antibióticos caprazamicinas, se puede emplear un microorganismo que pertenezca al género Streptomyces y tenga la capacidad de producir los antibióticos caprazamicinas. Específicamente, se ha confirmado que Streptomyces sp. MK730-62F2, que hemos aislado, produce los antibióticos caprazamicinas. Es posible aislar en la naturaleza cualquier otra cepa capaz de producir dichos antibióticos empleando cualquier técnica conocida de aislamiento que se encuentre disponible para el aislamiento de las cepas productoras de antibióticos. Aún queda la posibilidad de que la capacidad de una cepa productora de caprazamicinas, incluida Streptomyces sp. MK730-62F2, para producir los antibióticos caprazamicinas sea mejorada sometiendo dicha cepa a una mutación mediante una radiación radioactiva u otros. Además, los antibióticos caprazamicinas se pueden sintetizar por técnicas de ingeniería genética.
Como cultivo de siembra para la producción de caprazamicinas, se puede emplear una colonia obtenida a partir de un cultivo en agar inclinado de la cepa MK730- 62F2.
Al producir los antibióticos caprazamicinas, es preferible que una cepa productora de caprazamicina perteneciente al género Streptomyces sea cultivada en un medio de cultivo adecuado en condiciones aeróbicas. La recuperación de la(s) caprazamicina(s) deseada(s) a partir del caldo de cultivo resultante se puede efectuar de forma convencional. La temperatura de cultivo no se encuentra específicamente limitada, mientras se encuentre dentro del intervalo de temperaturas en el que se pueden producir los antibióticos deseados sin impedir de forma sustancial el crecimiento de la cepa productora de caprazamicina que se emplea. Se puede seleccionar la temperatura de cultivo dependiendo de la naturaleza de la cepa productora de caprazamicina que se emplea, y una temperatura de cultivo preferida está dentro del intervalo de 25 a 30ºC.
La producción de caprazamicinas por la cepa MF730-62F2 puede alcanzar, generalmente, un máximo tras 3 a 9 días de cultivo de la cepa. En general, sin embargo, se sigue cultivando la cepa hasta que se da una actividad antibacteriana suficiente en el medio de cultivo. El cambio dependiente del tiempo de la eficacia de las caprazamicinas en el caldo de cultivo resultante se puede determinar por un procedimiento de HPLC, o por un procedimiento en placa cilíndrica en el que se emplea Mycobacterium smegmatis o Mycobacterium vaccae como cepa para el ensayo.
En el segundo aspecto acerca del procedimiento de esta invención, al menos una de las caprazamicinas A, B, C, E y F se recupera del caldo de cultivo obtenido como se ha descrito arriba. Como procedimiento para la recuperación y el aislamiento de la(s) caprazamicina(s) deseada(s), se puede emplear, de forma adecuada, cualquiera de los procedimientos convencionales que se emplean para el aislamiento de los metabolito(s) que producen los microorganismos. Por ejemplo, se puede emplear un procedimiento de extracción con un disolvente orgánico no miscible con el agua, un procedimiento que utilice la diferencia en la afinidad de la adsorción de las caprazamicinas a varios adsorbentes, como una resina adsorbente sintética, gel de sílice, un procedimiento para filtrar el gel y un procedimiento cromatográfico con distribución contracorriente, etc., solo o en combinación, con objeto de recuperar la(s) caprazamicina(s) A, B, C, E y/o F, tanto aisladas como en forma de mezcla de dos cualquiera o más, a partir del sobrenadante del caldo de cultivo. Además, a partir de las células microbianas de la cepa así separadas del caldo de cultivo, también es posible recuperar la(s) caprazamicina(s) A, B, C, E y/o F, sometiendo a las células microbianas a una extracción por disolvente con un disolvente orgánico adecuado, o mediante un procedimiento que comprende la alteración de las células y la elución de la(s) caprazamicina(s) deseada(s) de las células alteradas por la extracción. Los antibióticos caprazamicina(s) A, B, C, E y/o F se pueden recoger, por separado o en combinación. El aislamiento de las caprazamicinas A, B, C, E y F unas de las otras se puede efectuar por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con un disolvente de revelado adecuado.
Además, de acuerdo con un tercer aspecto de esta invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende como principio activo al menos una de las caprazamicinas A, B, C, E y F de fórmula general (I) o una sal de las mismas, mezclada con un vehículo, o vehículos, farmacéuticamente aceptable.
La composición farmacéutica de acuerdo con el tercer aspecto de esta invención se puede encontrar en forma de una composición que comprende como principio activo un compuesto de fórmula general (I), mezclado con un vehículo sólido o líquido convencional y farmacéuticamente aceptable, como por ejemplo, etanol, agua, salino fisiológico, almidón y similares.
La(s) caprazamicina(s) de fórmula general (I) o una sal de la(s) misma(s), empleada(s) en la composición farmacéutica de acuerdo con el tercer aspecto de esta invención, se puede administrar por vía oral o parenteral intravenosa, intramuscular o intraperitoneal, etc.
Para su administración oral, la composición farmacéutica de acuerdo con el tercer aspecto de esta invención se puede formular en forma de preparaciones como polvo, comprimidos, cápsulas, suspensión, jarabe y similares, mezclando el principio activo, concretamente una caprazamicina de fórmula general (I) o una sal de la misma, con un vehículo sólido o líquido convencional y farmacéuticamente aceptable.
La proporción del compuesto de fórmula general (I) que se incorpora como principio activo a la composición farmacéutica del tercer aspecto de esta invención puede depender del tipo de preparación, pero una proporción conveniente de una caprazamicina puede estar dentro del intervalo de aproximadamente 2 a 90%, basado en el peso de la unidad de dosis de la composición.
En los casos en los que la composición del tercer aspecto de esta invención se formula en forma de inyecciones, una forma preferida de las preparaciones inyectables puede incluir una solución acuosa estéril o una preparación liofilizada estéril que contiene el compuesto de fórmula general (I) como principio activo. Como ejemplos de los vehículos líquidos que se pueden emplear con este propósito, se prefieren el agua, etanol acuoso, glicerol, propilenglicol, aceite vegetal y similares.
La dosis de una caprazamicina de fórmula general (I) o una sal de la misma como principio activo en la composición de esta invención puede depender de la naturaleza de las infecciones bacterianas a tratar, el objetivo del tratamiento terapéutico, el grado de las dolencias del paciente y así sucesivamente. Sin embargo, los expertos pueden decidir una dosis óptima de una caprazamicina mediante los tests preliminares adecuados. La caprazamicina B no mostró ninguna toxicidad en ratones (tipo ICR, de 4 semanas, macho), cuando se administró por vía intravenosa a una dosis de 75 mg/kg.
De acuerdo con un cuarto aspecto de esta invención, se proporciona además, como un nuevo microorganismo, Streptomyces sp. MK730-62F2 que posee como naturaleza característica la capacidad de producir caprazamicinas A, B, C, E y F de fórmula general (I) arriba mencionada, y que se ha depositado en el "National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology" localizado en el No. 1-3, Higashi 1-chome, Ciudad de Tsukuba, Prefectura de Ibaraki, Japón, con el número de depósito "FERM BP-7218".
Breve descripción de las figuras adjuntas
La Figura 1 es el espectro de absorción ultravioleta de la caprazamicina A en una solución de metanol.
La Figura 2 es el espectro de absorción infrarrojo de la caprazamicina A medido por el procedimiento de pastillas sólidas de KBr.
La Figura 3 es el espectro de la resonancia magnética nuclear de protón de la caprazamicina A medido en una solución de DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 4 es el espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C de la caprazamicina A medido en una solución de DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 5 es el espectro de absorción ultravioleta de la caprazamicina B en una solución de metanol.
La Figura 6 es el espectro de absorción infrarrojo de la caprazamicina B medido por el procedimiento de pastillas sólidas de KBr.
La Figura 7 es el espectro de la resonancia magnética nuclear de protón de la caprazamicina B medido en una mezcla de disolventes de DMSO-d_{6}-D_{2}O (10:1) a 500 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 8 es el espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C de la caprazamicina B medido en una mezcla de disolventes de DMSO-d_{6}-D_{2}O (10:1) a 125 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 9 es el espectro de absorción ultravioleta de la caprazamicina C en una solución de metanol.
La Figura 10 es el espectro de absorción infrarrojo de la caprazamicina C medido por el procedimiento de pastillas sólidas de KBr.
La Figura 11 es el espectro de la resonancia magnética nuclear de protón de la caprazamicina C medido en una solución de DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 12 es el espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C de la caprazamicina C medido en una solución de DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 13 es el espectro de absorción ultravioleta de la caprazamicina E en una solución de metanol.
La Figura 14 es el espectro de absorción infrarrojo de la caprazamicina E medido por el procedimiento de pastillas sólidas de KBr.
La Figura 15 es el espectro de la resonancia magnética nuclear de protón de la caprazamicina E medido en una solución de DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 16 es el espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C de la caprazamicina E medido en una solución de DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 17 es el espectro de absorción ultravioleta de la caprazamicina F en una solución de metanol.
La Figura 18 es el espectro de absorción infrarrojo de la caprazamicina F medido por el procedimiento de pastillas sólidas de KBr.
La Figura 19 es el espectro de la resonancia magnética nuclear de protón de la caprazamicina F medido en una solución de DMSO-d_{6} a 500 MHz a temperatura ambiente.
La Figura 20 es el espectro de la resonancia magnética nuclear-^{13}C de la caprazamicina F medido en una solución de DMSO-d_{6} a 125 MHz a temperatura ambiente.
Mejor forma de llevar a cabo la invención
Esta invención se ilustra a continuación con mayor detalle, haciendo referencia a los siguientes ejemplos.
Ejemplo 1 Producción de los antibióticos caprazamicinas A, B, C, E y F
Se inoculó en un medio de cultivo Streptomyces sp. MK730-62F2 (depositado bajo el número de depósito FERM BP-7218), que había sido cultivado en medio agar inclinado. El medio de cultivo empleado aquí se preparó poniendo en frascos Erlenmeyer (con capacidad para 500 ml) fracciones de 110 ml de un medio de cultivo líquido con 2% de galactosa, 2% de dextrina, 1% de glicerina, 1% de Bacto-soyton (un producto de Difco Co.), 0,5% de extracto soluble de maíz, 0,2% de sulfato de amonio y 0,2% de carbonato cálcico (ajustado a una pH de 7,4) y esterilizando el medio de cultivo en los frascos a 120ºC durante 20 minutos de forma normal, antes de realizar la inoculación de la cepa MK730-62F2. El medio de cultivo así inoculado se cultivó en agitación con rotación a 30ºC durante 2 días, para dar de este modo el caldo de cultivo deseado para la siembra.
En un tanque de fermentación (con una capacidad de 30 L), se prepararon 15 L de medio de cultivo con 2,4% de pasta de tomate (un producto de Kagome Co.), 2,4% de dextrina, 1,2% de extracto de levadura (un producto de Oriental Co.) y 0,0006% de cloruro de cobalto (ajustado a pH 7,4), que se esterilizó a continuación para dar el medio de cultivo productivo. A este medio de cultivo productivo, se inoculó una proporción del 2% del caldo de cultivo de siembra arriba mencionado. El cultivo de la cepa MK730-62F2 se llevó a cabo en el tanque fermentador en las siguientes condiciones: el cultivo se realizó durante 6 días, a una temperatura de 27ºC, con una aeración de 15 L de aire por minuto y una agitación a 200 rpm.
El caldo de cultivo resultante se centrifugó para separar el caldo de cultivo filtrado (12 L) y las células microbianas cultivadas. A continuación, se añadió metanol (6 L) a las células microbianas así separadas, y la mezcla resultante se agitó bien para extraer las caprazamicinas de las células al metanol. El caldo de cultivo filtrado obtenido y el extracto metanólico de las células (el extracto metanol) se combinaron, y la mezcla resultante (18 L) se pasó a través de una columna con 750 ml de una resina adsorbente sintética hecha de un polímero aromático, concretamente resina "Dialon HP-20"(un producto de Mitsubishi Chemical Co., Japón), en la cual las caprazamicinas fueron adsorbidas en la resina Dialon HP-20. A través de esta columna con resina Dialon HP-20 con las caprazamicinas adsorbidas, se pasó un volumen de agua desionizada, metanol acuoso al 50% (una mezcla con 50% de metanol y 50% de agua), metanol acuoso al 80% (una mezcla con 80% de metanol y 20% de agua), acetona acuosa al 80% (una mezcla con 80% de acetona y 20% de agua) y acetona (2,25 L cada uno), en este orden. Las caprazamicinas fueron eluidas principalmente en la fracción obtenida mediante la elución con acetona acuosa al 80%. Además, la fracción de la elución con metanol acuoso al 50% y la fracción de la elución con metanol acuoso al 80% contenían también caprazamicinas. Estas dos fracciones eluidas que contenían caprazamicinas eluidas con metanol acuoso al 50% y con metanol acuoso al 80% se combinaron. Las mezcla resultante de estas fracciones eluidas se pasó de nuevo a través de una columna de resina Diaion HP-20 (750 ml), en la que las caprazamicinas quedan adsorbidas a la resina adsorbente de esta columna. Después, se pasó metanol acuoso al 80% (2,25 L) a través de la columna. A continuación, se efectuó la elución pasando acetona acuosa al 80% (2,25 L) a través de la columna. La fracción resultante eluida con acetona acuosa al 80% obtenida esta vez se combinó con la fracción eluida que se mencionó anteriormente y que se había obtenido eluyendo con acetona acuosa al 80% en la primera etapa. La mezcla resultante se concentró a presión reducida hasta secarla, y se obtuvo un producto parcialmente purificado que comprendía caprazamicinas (10,1 g).
Este producto parcialmente purificado que comprendía caprazamicinas (10,1 g) se disolvió a continuación en una mezcla de disolventes (50 ml) de cloroformo-metanol (=1:2), y la solución resultante se añadió a Kieselgur (Art. 10601, un producto de Merk & Co.) (50 ml) y el disolvente se evaporó a presión reducida hasta secarlo. Los sólidos Kieselgur resultantes que contenían las caprazamicinas adsorbidas en su interior se colocaron en lo alto de una columna de gel de sílice (54 mm de diámetro interno x 200 mm de alto) para ser sometidos a una cromatografía. Los disolventes de revelado empleados para esta cromatografía eran mezclas de disolventes de cloroformo-metanol-agua (= 4:1:0,1); cloroformo-metanol-agua (= 2:1:0,2); y cloroformo-metanol-agua (= 1:1:0,2), y cada vez se emplearon 1,35 L de la mezcla de disolventes. Las operaciones de revelado se llevaron a cabo en este orden, con estas mezclas de disolventes. Los eluidos de las columna de gel de sílice se recogieron cada uno en fracciones por medio de un colector de fracciones, de forma de las fracciones 1 a 53 se recogieron cada una en porciones de 20 g, y que las fracciones 54 a 117 se recogieron, cada una, en porciones de 19 g. De este modo, las fracciones activas que contenían caprazamicinas se eluyeron en las fracciones No. 66 a 83. Estas fracciones activas No. 66 a 83 se combinaron y se concentraron a presión reducida hasta secarlas, para dar así un producto parcialmente purificado que comprendía caprazamicinas (625,3 mg).
Se añadió metanol (5 ml) al producto parcialmente purificado (625,3 mg) así obtenido. La solución resultante se mantuvo a 5ºC y en la oscuridad, con lo que se obtuvo una fracción precipitada que se depositó (537,3 mg) dando lugar a un producto que comprendía caprazamicinas.
A continuación, el precipitado depositado (537,3 mg) que comprendía caprazamicinas se purificó sometiéndolo a HPLC (CAPCELL PAK C18, 20 mm de diámetro x 250 mm de alto, un producto de Shiseido Co., Japón). En esta HPLC, el revelado se llevó a cabo con acetonitrilo al 50%-agua-ácido fórmico al 0,05% como disolvente de revelado (con una tasa de flujo de 12,0 ml/min), mediante lo cual la caprazamicina A se eluyó tras 61 a 68 minutos, la caprazamicina B se eluyó tras 52 a 60 minutos, la caprazamicina C se eluyó tras 39 a 41 minutos, la caprazamicina E se eluyó tras 25 a 28 minutos y la caprazamicina F se eluyó tras 22 a 25 minutos de revelado. Estas fracciones activas se recogieron por separado para cada una de las caprazamicinas deseadas. Cada una de las fracciones activas recogidas por separado se concentró a presión reducida hasta secarla, para dar caprazamicina A (56,9 mg), caprazamicina B (90,3 mg), caprazamicina C (19,7 mg), caprazamicina E (30,3 mg) y caprazamicina F (25,5 mg), respectivamente.
Aplicabilidad industrial
Tal como se ha descrito anteriormente en la presente invención, las caprazamicinas A, B, C, E y F de fórmula general (I), que se proporcionan como nuevos antibióticos de acuerdo con esta invención, poseen cada uno una excelente actividad antibacteriana frente a varias bacterias ácido-alcohol resistentes y otras bacterias, así como frente a sus cepas resistentes a fármacos. Por lo tanto, una caprazamicina de acuerdo con esta invención es eficaz y útil en el tratamiento de infecciones bacterianas como las causadas por bacterias ácido-alcohol resistentes u otras bacterias.

Claims (11)

1. Un antibiótico, caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E o caprazamicina F, que es un compuesto representado por la siguiente fórmula general (I)
19
en la que R es un grupo tridecilo para la caprazamicina A; un grupo 11-metil-dodecilo para la caprazamicina B; un grupo dodecilo para la caprazamicina C; un grupo undecilo para la caprazamicina E; y un grupo 9-metil-decilo para la caprazamicina F, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.
2. Un antibiótico según la Reivindicación 1, que es la caprazamicina A representada por la siguiente fórmula (Ia)
20
es decir, el compuesto de fórmula general (I) mostrado en la Reivindicación I en el que R es un grupo tridecilo -(CH_{2})_{12}-
CH_{3}.
3. Un antibiótico según la Reivindicación 1, que es la caprazamicina B representada por la siguiente fórmula (Ib)
21
es decir, el compuesto de fórmula general (I) mostrado en la Reivindicación I donde R es un grupo 11-metil-dodecilo.
22
4. Un antibiótico según la Reivindicación 1, que es la caprazamicina C representada por la siguiente fórmula (Ic)
23
es decir, el compuesto de fórmula general (I) mostrado en la Reivindicación I donde R es un grupo dodecilo -(CH_{2})_{11}-CH_{3}.
5. Un antibiótico según la Reivindicación 1, que es la caprazamicina E representada por la siguiente fórmula (Ie)
24
es decir, el compuesto de fórmula general (I) mostrado en la Reivindicación I donde R es un grupo undecilo -(CH_{2})_{10}-CH_{3}.
6. Un antibiótico según la Reivindicación 1, que es la caprazamicina F representada por la siguiente fórmula (If)
25
es decir, el compuesto de fórmula general (I) mostrado en la Reivindicación I donde R es un grupo 9-metil-decilo.
26
7. Un procedimiento para la producción de un antibiótico, caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y/o caprazamicina F representado por la fórmula general (I) dada en la Reivindicación I, caracterizado porque el procedimiento comprende el cultivo de una cepa microbiana que pertenece al género Streptomyces y que es capaz de producir al menos una de las siguientes: caprazamicina A, caprazamicina B, caprazamicina C, caprazamicina E y caprazamicina F, y la recuperación de las menos una de las caprazamicinas A, B, C, E, y F a partir del cultivo resultante.
8. Un procedimiento según la Reivindicación 7, en el que como cepa microbiana capaz de producir al menos una de las caprazamicinas A, B, C, E y F, se emplea Streptomyces sp. MK730-62F2 que ha sido depositada en el National Institute of Bioscience and Human-Technology. Agency of Industrial Science and Technology, bajo el número de depósito "FERM BP-7218" de acuerdo con el Tratado de Budapest.
9. Una composición farmacéutica que comprende como principio activo al menos una de las caprazamicinas A, B, C, E y F de fórmula general (I) dada en la Reivindicación 1, o una sal de las mismas, mezclada con un vehículo o vehículos farmacéuticamente aceptable.
10. Una composición según la Reivindicación 9, que es una composición antibacteriana.
11. Como un microorganismo nuevo, Streptomyces sp. MK730-62F2 que posee como naturaleza característica la capacidad de producir caprazamicinas A, B, C, E y F de fórmula general (I) dada en la Reivindicación 1, y que ha sido depositado en el National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology, bajo el número de depósito "FERM BP-7218".
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