ES2209952T3

ES2209952T3 - Metodo para el control de hongos empleando derivados de fenilhidrazina.

Info

Publication number: ES2209952T3
Application number: ES00955549T
Authority: ES
Inventors: Mark Achiel Dekeyser; Kenneth Wesley Seebold, Jr.; Gaik-Lean Chee
Original assignee: Crompton Co; Uniroyal Chemical Co Inc
Current assignee: Lanxess Canada Co; Uniroyal Chemical Co Inc
Priority date: 1999-09-07
Filing date: 2000-08-14
Publication date: 2004-07-01
Anticipated expiration: 2020-08-14
Also published as: EP1209977A1; CA2382135C; DE60006256D1; WO2001017355A1; US6297275B1; JP3726060B2; CO5221098A1; AR025575A1; AU6773800A; JP2003508465A; DE60006256T2; EP1209977B1; CA2382135A1; ATE252834T1; PT1209977E; DK1209977T3

Abstract

Método de control de hongos que comprende poner en contacto los hongos con una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina de fórmula: en donde: X es: a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno; Y es H; y R es alcoxi C1-C6.

Description

Método para el control de hongos empleando derivados de fenilhidrazina.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a un método para el control de hongos empleando ciertos derivados de fenilhidrazina. Más particularmente, esta invención se refiere a un método para el control de hongos poniendo en contacto los hongos con una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina, o bien aplicando el compuesto derivado de fenilhidrazina al follaje de las plantas o a las semillas de las plantas susceptibles al ataque por dichos hongos, o bien a un medio de crecimiento de las plantas que han de ser protegidas.

Antecedentes de la invención

La Patente US No. 5.367.093 describe compuestos derivados de fenilhidrazina útiles como insecticidas, acaricidas y nematicidas. La Patente Japonesa JP02300157 1990 (CA 115:226148) describe carbazatos de bencilo útiles como microbiocidas agroquímicos. La Patente Japonesa JP02295962 1990 (CA 114:138036) describe la preparación de carbazatos de fenilo útiles como fungicidas agroquímicos. La Patente Japonesa JP60161959 1985 (CA 104:33894) describe carboxilatos de hidrazina útiles como fungicidas. La Patente Alemana DE2223936 1973 (CA 80:70557) describe derivados de arilhidrazina fungicidas.

En GB 2 093 448 y US 2 920 994 se describen carboxilatos de fenilhidrazina y su uso como fungicidas.

La US 5 874 465 describe derivados de fenilhidrazina que son utilizados como insecticidas y miticidas.

En Journal of Agricultural and Food Chemistry, Vol. 43, no. 6, 1 Junio 1995, páginas 1705 a 1707 se describen carboxilatos de o-bifenildiazeno y su uso como miticidas.

Un objeto de esta invención consiste en proporcionar un nuevo método para el control de hongos empleando compuestos derivados de fenilhidrazina y composiciones de tales compuestos.

Resumen de la invención

Esta invención se refiere a un método para el control de hongos, en particular de hongos fitopatógenos, que comprende poner en contacto los hongos con una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina de fórmula:

1

en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{6}.

Esta invención se refiere también a un método para el control de hongos en una planta o en una semilla de la planta, que comprende aplicar a la planta o a la semilla de la planta, o bien a un medio de crecimiento o al agua en donde crece o ha de crecer la planta o la semilla de la planta, una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina de fórmula:

2

en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{6}.

Descripción detallada de la invención

Para los fines de esta invención, el término "control de hongos" significa la inhibición tanto de la infestación futura como del crecimiento continuado de infestaciones ya existentes.

En los compuestos útiles en el método de esta invención, X es preferentemente a) fenilo o fenoxi; o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno; y

R es preferentemente alcoxi C_{1}-C_{4}.

Más preferentemente, X es fenoxi o fenilo y halógeno, más particularmente fenoxi; y R es más preferentemente alcoxi C_{1}-C_{4}.

Los compuestos útiles en el método de esta invención, que tienen la estructura de fórmula I, se pueden preparar haciendo reaccionar una fenilhidrazina sustituida de fórmula:

3

con un reactivo acilante de fórmula:

4

en donde Z es halo o

5

y un equivalente de un aceptor de HCl tal como piridina, en un disolvente tal como tolueno. El producto de esta reacción puede ser además acilado o convertido por oxidación con un agente oxidante tal como Pd/aire, para formar compuestos de la estructura de fórmula II.

Las composiciones útiles en el método de esta invención comprenden (a) una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto que tiene la estructura de fórmula (I) o (II) y (b) un vehículo adecuado. Tales vehículos adecuados pueden ser de naturaleza sólida o líquida.

Los vehículos líquidos adecuados pueden comprender agua, alcoholes, cetonas, fenoles, tolueno y xilenos. En dichas formulaciones, se pueden emplear los aditivos tradicionalmente usados en la técnica tales como, por ejemplo, uno o más agentes de superficie activa y/o diluyentes inertes, para facilitar la manipulación y aplicación de la composición pesticida resultante.

Las composiciones útiles en el método de esta invención pueden comprender alternativamente vehículos sólidos que tienen la forma de polvos, gránulos, polvos humectables, pastas, aerosoles, emulsiones, concentrados emulsionables y sólidos solubles en agua.

Por ejemplo, los compuestos útiles en el método de esta invención se pueden aplicar como polvos cuando se mezclan o se absorben en vehículos sólidos en polvo, tales como silicatos minerales, por ejemplo, mica, talco, pirofilita y arcillas, junto con un agente dispersante de superficie activa, de manera que se obtiene un polvo humectable el cual puede ser entonces aplicado directamente al punto o puntos a tratar. Alternativamente, el vehículo sólido en polvo que contiene el compuesto mezclado con el mismo, puede ser dispersado en agua para formar una suspensión que se aplicará en dicha forma.

Las formulaciones granuladas de los compuestos, adecuadas para aplicarse mediante esparcido, revestimiento de semillas, incorporación en el suelo o tratamiento de semillas, se preparan adecuadamente empleando una forma granulada o pelletizada del vehículo tal como arcillas granuladas, vermiculita, carbón vegetal o carozos de maíz.

Alternativamente, los compuestos útiles en el método de esta invención se pueden aplicar en forma líquida o como pulverizaciones cuando se emplean en un vehículo líquido, tal como en una solución que comprende un disolvente compatible tal como acetona, benceno, tolueno o queroseno, o bien en forma dispersa en un medio no disolvente adecuado, por ejemplo, agua.

Otro método de aplicación al punto que ha de ser tratado consiste en el tratamiento con aerosoles, para lo cual el compuesto se puede disolver en un vehículo de aerosol que es un líquido a presión pero que es un gas a temperatura ordinaria (por ejemplo, 20ºC) y presión atmosférica. Las formulaciones en forma de aerosoles se pueden preparar también disolviendo primeramente el compuesto en un disolvente menos volátil y mezclando entonces la solución resultante con un vehículo de aerosol líquido altamente volátil.

Para el tratamiento de las plantas (incluyendo dicho término partes de dichas plantas), los compuestos útiles en el método de esta invención se aplican preferentemente en emulsiones acuosas que contiene un agente dispersante de superficie activa que puede ser no iónico, catiónico o aniónico. Los agentes de superficie activa adecuados incluyen aquellos conocidos en la técnica, tales como los descritos en la Patente US 2.547.724 (columnas 3 y 4). Los compuestos de la invención se pueden mezclar con dichos agentes dispersantes de superficie activa, con o sin un disolvente orgánico, como concentrados para la posterior adición de agua para producir suspensiones acuosas de los compuestos en los niveles de concentración deseados.

Además, los compuestos se pueden emplear con vehículos que son pesticidamente activos, tales como insecticidas, acaricidas, fungicidas o bactericidas.

Ha de entenderse que la cantidad del compuesto en una formulación dada útil en el método de esta invención dependerá del hongo específico a combatir, así como de la composición química específica y de la formulación del compuesto que ha de utilizarse, del método de aplicación del compuesto/formulación y del punto de tratamiento, de manera que la cantidad fungicidamente activa del compuesto puede variar ampliamente. Sin embargo, en general, las concentraciones del compuesto como el ingrediente activo en formulaciones fungicidamente eficaces en el método de esta invención, pueden oscilar entre 0,1 y 95% en peso aproximadamente. Las diluciones para pulverización pueden ser tan bajas como de unas cuantas partes por millón, mientras que en el extremo opuesto, los concentrados de concentración plena del compuesto se pueden aplicar útilmente mediante técnicas de volumen ultra-bajo. La concentración por unidad de superficie, cuando las plantas constituyen el punto de tratamiento, puede oscilar entre 0,01 y 50 libras por acre aproximadamente, empleándose preferentemente las concentraciones comprendidas entre 0,1 y 10 libras por acre aproximadamente para cultivos tales como maíz, tabaco, arroz y similares.

Para el control de hongos, las pulverizaciones de los compuestos se pueden aplicar a los hongos directamente y/o a las plantas o a las semillas de las plantas, de las cuales se alimentan dichos hongos o utilizar para anidar. Las formulaciones fungicidamente activas útiles en el método de esta invención se pueden aplicar también a la tierra, agua u otro medio de crecimiento en el cual estén presentes las plagas.

Los métodos específicos de aplicación, así como la selección y concentración de los compuestos útiles en el método de esta invención variarán, como es lógico, en función de circunstancias tales como zona geográfica, clima, topografía, tolerancia por partes de las plantas, etc. Para circunstancias específicas, el experto en la materia puede determinar fácilmente el compuesto, la concentración y método de aplicación que resulten más adecuados, llevando a cabo una experimentación rutinaria.

Ejemplos de hongos fitopatógenos que pueden ser controlados por el método de esta invención incluyen, por ejemplo, los siguientes:

Erysiphe graminis f.sp. hordei Erysiphe cichoracearum Erysiphe polygoni Pyricularia grísea Helminthosporium sativum Uromyces appendiculatus Bofrytis cinérea Colletotrichum gossypii Cercosporidium personatum Fusarium nivale Phytopthora infestans Pythium ultimum Rhizoctonia solani Sclerotinia minar Septoria nodurum Ejemplos

Se ofrecen los siguientes ejemplos para ilustrar adicionalmente la invención.

Ejemplo 1

(Ejemplo comparativo)

Preparación de carboxilato de 2,2,2-tricloroetil-2-(4-fenilmetoxi)fenilhidrazina (Compuesto 1)

A 2,72 g de 4-(fenilmetoxi)fenilhidrazina se añadieron 100 ml de acetato de etilo y 2,5 ml de piridina y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 60 minutos. A la solución resultante se añadieron entonces gota a gota 2,3 ml de cloroformato de 2,2,2-tricloroetilo y luego se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución se lavó entonces dos veces, cada vez con 100 ml de agua. Después de cada lavado, se separó la fracción acuosa de la fracción orgánica (acetato de etilo). La fracción de acetato de etilo resultante se secó entonces sobre sulfato sódico anhidro, se evaporó bajo presión reducida y luego se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, para producir 0,5 g de carboxilato de 2,2,2-tricloroetil-2-(4-fenilmetoxi)fenilhidrazina como un aceite.

Ejemplo 2

(Ejemplo comparativo)

Preparación de carboxilato de 2,2,2-tricloroetil-2-(4-fenilmetoxi)-2-(trifluoracetil)fenilhidrazina (Compuesto 2)

A 0,5 g del producto del ejemplo 1 se añadieron 25 ml de diclorometano y 0,5 ml de anhídrido trifluoracético. La mezcla de reacción resultante se agitó entonces a temperatura ambiente durante 4 horas y se concentró bajo presión reducida y se aisló el concentrado, para producir 0,6 g de carboxilato de 2,2,2-tricloroetil-2-(4-fenilmetoxi)-2-(trifluoracetil)fenilhidrazina como un sólido.

Ejemplo 3

(Según la presente invención)

Preparación de carboxilato de 1-metilpropil-2-(3-fenoxifenil)hidrazina (Compuesto 3)

A 3 g de 3-fenoxifenilhidrazina, se añadieron 100 ml de acetato de etilo y 2,5 ml de piridina y la solución resultante se agitó entonces a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la solución se añadieron entonces gota a gota 2,5 ml de cloroformato de sec-butilo y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución se lavó entonces dos veces, cada vez con 100 ml de agua. Después de cada lavado, la fracción acuosa se separó de la fracción orgánica (acetato de etilo). La fracción de acetato de etilo resultante se secó entonces sobre sulfato sódico anhidro, se evaporó bajo presión reducida y luego se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para producir 1,5 g de carboxilato de 1-metilpropil-2-(3-fenoxifenil)hidrazina como un aceite.

Los restantes compuestos indicados en la tabla 1A (es decir, compuestos 4-6) se prepararon utilizando los mismos procedimientos que los indicados en los ejemplos 1-3 anteriores, usando la correspondiente fenilhidrazina sustituida. Cada uno de los compuestos se caracteriza por sus características NMR. El Compuesto 4 es un compuesto según la presente invención; los Compuestos 5 y 6 se preparan para estudios comparativos.

TABLA 1A

6

7

Ejemplo 4

(Según la presente invención)

Preparación de carboxilato de 1-metilpropil-(3-fenoxifenil)diazeno (Compuesto 7)

A 1,5 g del producto del ejemplo 3 se añadieron 100 ml de tolueno y 0,4 g de 10% de paladio sobre carbón vegetal. La mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se filtró y el tolueno se evaporó bajo presión reducida, para producir 1,3 g de carboxilato de 1-metilpropil-(3-fenoxifenil)diazeno como un aceite de color rojo.

TABLA 1B

8

Compuesto	X	R	DATOS NMR (CDC1_{3})
			t(3) 1,0;
7	3-OC_{6}H_{5}	OCH(CH_{3}C_{2}H_{5}	m(2) 1,5;
			m(1) 5,0;
			m(9) 7,0-7,5

Preparación de composiciones fungicidas

Los compuestos indicados a continuación en las tablas 1A y 1B fueron disueltos cada uno de ellos en acetona o en otro disolvente adecuado (0,3 g de cada compuesto en 10 ml de acetona u otro disolvente adecuado). Se añadieron a agua de una a dos gotas de Tween 20®, un éster de polioxietilensorbitan usado como agente emulsionante, seguido por la solución en acetona que contiene uno de los compuestos indicados en las tablas 1A y 1B. La cantidad de agua añadida a la solución final varió de acuerdo con la concentración deseada, indicada en partes por millón (ppm).

Control de mildeu pulverulento por aplicación foliar

Se sembró la variedad de cultivo de cebada "Rodeo" en tiestos de 4 pulgadas de diámetro que contienen un medio adecuado para el crecimiento de plantas y se dejó crecer durante 6 días. Cada tratamiento, o cada compuesto químico, que se indican en las tablas 1A y 1B se repitió por dos veces y cada tiesto contenía ocho plantas. En cada ensayo, se dejaron sin tratar dos tiestos de cebada para que sirvieran como controles.

Cada uno de los compuestos ensayados se formuló en la forma anteriormente descrita a una concentración de 1.000 mg de compuesto por litro de agua (1.000 ppm) o de 300 mg de compuesto por litro de agua (300 ppm) en el caso del Compuesto 2 y del Compuesto 5. La emulsión resultante se aplicó al follaje de la cebada empleando un atomizador con una presión de 25-30 libras por pulgada cuadrada. Las plantas tratadas, junto con los controles sin tratar, se colocaron en un invernadero y se mantuvieron a 21-25ºC. Un día después del tratamiento, todas las plantas fueron inoculadas con conidius de Erysiphe graminis f. sp. hordei cepillando las hojas de plantas de cebada infectadas con mildeu sobre las hojas de las plantas tratadas. Una semana después del tratamiento, las plantas fueron evaluadas respecto a los síntomas de mildeu pulverulento empleando una escala de 0-6 en donde 0 representa la ausencia de enfermedad y 6 representa la presencia de severos síntomas de mildeu. El porcentaje de control se calculó comparando las clasificaciones de la enfermedad de las plantas tratadas con respecto a las de las plantas sin tratar. Los resultados de estos ensayos se ofrecen en la tabla 4A bajo el encabezamiento "MP Cebada".

Los compuestos de las tablas 1A y 1B fueron ensayados respecto al control de mildeu pulverulento en judía, causado por Erysiphe polygoni, preparando tiestos que contienen plantas de judía pinta (Phaseolus vulgaris) de la misma manera que la descrita anteriormente en el caso de la cebada. Los métodos para la aplicación del compuesto químico, para la inoculación con el patógeno y para la clasificación de la enfermedad fueron idénticos a los descritos en el párrafo anterior. Los resultados de estos ensayos se ofrecen en la tabla 4A bajo el encabezamiento "MP Judía".

Control de mildeu pulverulento mediante absorción sistémica por las raíces

Los compuestos indicados en las tablas 1A y 1B fueron preparados como antes se ha descrito y ensayados respecto a su eficacia contra mildeu pulverulento de cebada, causado por Erysiphe graminis f. sp. hordei, y contra mildeu pulverulento de pepino, causado pro Erysiphe cichoracearum. Cada compuesto fue evaluado respecto a la prevención o control de mildeu pulverulento, aplicando dichos compuestos para empapar la tierra de manera que los compuestos en cuestión fuesen absorbidos por las raíces de cebada o pepino, para distribuirse entonces de forma sistémica hacia el follaje.

Se desarrollaron tiestos de cebada (variedad "Robust") o de pepino (variedad "Marketmore 70") de la misma manera que las plantas de cebada usadas para aplicación foliar. Los tiestos que contienen cebada tenían ocho plantas, mientras que los tiestos que contienen pepino tenían dos plantas. Aproximadamente una semana después de realizar la plantación, a los tiestos que contienen bien cebada o bien pepino se añadieron 45 ml de una composición en emulsión, formada como antes se ha descrito. Concretamente, se empaparon 45 ml de cada compuesto en la tierra de los dos tiestos que contienen cebada y de dos tiestos que contienen pepino en una proporción de 250 g de compuesto por litro de agua (250 ppm). Se ensayaron dos compuestos, Compuesto 2 y Compuesto 5, a una concentración de 300 g de compuesto por litro de agua (300 ppm). Se dejaron sin tratar dos tiestos, uno de cebada y otro de pepino, para que sirvieran como controles en el experimento. La inoculación de las plantas se realizó en la forma antes descrita y las plantas fueron clasificadas respecto a los síntomas de mildeu pulverulento una semana después del tratamiento, empleando una escala de 0-6, en donde 0 representa la ausencia de enfermedad y 6 representa la existencia de severos síntomas de mildeu pulverulento. El porcentaje de control se calculó comparando las clasificaciones de las plantas tratadas con aquellas de las plantas sin tratar. Los resultados se estos ensayos se ofrecen en la tabla 4B bajo los encabezamientos "MP Cebada" y "MP Pepino".

Control de añublo en cebada por tratamiento foliar

Se hicieron crecer cinco plantas de cebada (variedad "Rodeo") en tiestos de 4 pulgadas de diámetro, efectuando dos réplicas para cada tratamiento. Se incluyó también un control sin tratar el cual se aplicó por dos veces. Los tiestos no utilizados como control se pulverizaron con composiciones en emulsión preparadas como antes se ha descrito, siendo ensayada cada composición a una concentración de 1.000 ppm. El Compuesto 2 y el Compuesto 5 se ensayaron en una concentración de 300 ppm. La edad media de las plantas fue de 10 días. Transcurridas 24 horas desde la aplicación de las composiciones, los tiestos tratados y los tiestos no tratados fueron inoculados con el patógeno, Pyricularia grisea, a una concentración de 40.000 a 50.000 conidios ml^{-1} como una pulverización foliar. Se añadió Tween 20® (0,05% v/v) para facilitar la humectación del follaje y las plantas se pulverizaron hasta el punto de goteo con la suspensión de conidios.

Todos los tiestos inoculados se colocaron en una cámara ambiental regulada para mantener una temperatura de 26ºC y una humedad relativa de >95%. Se incubaron plantas de cebada durante 24 horas en la cámara, tras lo cual fueron transferidas a un invernadero y observadas respecto al desarrollo de síntomas de añublo (6-7 días después de la inoculación). La enfermedad fue evaluada empleando una escala de clasificación de 0-6 en donde 0 representa la ausencia de lesiones de añublo y 6 representa la existencia de síntomas severos. El porcentaje de control de añublo se calculó comparando las clasificaciones de las plantas tratadas con aquellas de las plantas sin tratar. Los resultados de estos ensayos se ofrecen en la tabla 4A bajo el encabezamiento "Añublo de cebada".

Control de manchas de la cebada por tratamiento foliar

Se plantaron dos tiestos cada uno de ellos conteniendo 10 plantas de cebada (variedad "Robust"). Las plantas fueron tratadas con las composiciones antes descritas que habían sido formuladas de la misma manera que en el caso de los ejemplos anteriores. Se inocularon entonces tiestos tratados y tiestos sin tratar (control) con una suspensión acuosa de inóculo consistente en 20.000 conidios ml^{-1} de Helminthosporium sativum y se añadieron 2 gotas de Tween 20® por 100 ml de solución para mejorar la humectación. El procedimiento de inoculación y de incubación fue idéntico al usado en los ensayos del añublo de la cebada.

Las plantas inoculadas fueron colocadas entonces en un invernadero y observadas respecto al desarrollo de síntomas, normalmente 6-7 días después de la inoculación. La enfermedad fue evaluada usando una escala de clasificación de 0-6 en donde 0 representa la ausencia de lesiones de manchas y 6 representa la existencia de síntomas severos. El porcentaje de control fue determinado comparando las clasificaciones de las plantas tratadas con aquellas de las plantas de control sin tratar. Los resultados se ofrecen en la tabla 4A bajo el encabezamiento "Manchas de la cebada".

Erradicación del tizón de la judía por aplicación foliar

Se plantaron dos plantas de judía pinta (Phaseolus vulgaris) en tiestos de 4 pulgadas de diámetro y se realizaron dos réplicas. Transcurridos 10 días desde la plantación, cuando habían brotado las hojas primarias, las plantas a tratar o las plantas que se dejan sin tratar para que sirvan como controles, se inocularon con una suspensión acuosa de uredoesporas del patógeno del tizón de la judía, Uromyces appendiculatus. El inóculo se ajustó a una concentración de 20.000 uredoesporas ml^{-1} y se añadieron 2 gotas de Tween 20® por 100 ml de solución para mejorar la humectación. Las plantas inoculadas fueron colocadas entonces en una cámara ambiental regulada para mantener una temperatura de 26ºC y una humedad relativa de >95%. Transcurridas 24 horas desde la inoculación, las plantas fueron retiradas y tratadas con las composiciones fungicidas anteriormente descritas en proporciones idénticas. Se dejaron 2 tiestos sin tratar para que sirvieran como controles. Inmediatamente después del tratamiento, las plantas se colocaron en un invernadero y se observaron respecto al desarrollo de síntomas (5-7 días después de la inoculación). La enfermedad fue evaluada en una escala de clasificación de 0-6 en donde 0 representa la ausencia de síntomas y 6 representa la existencia de severos síntomas de tizón de la judía. El porcentaje de control se calculó comparando las clasificaciones de la enfermedad de las plantas tratadas con aquellas de las plantas sin tratar. Los resultados de estos experimentos se detallan en la tabla 4A bajo el encabezamiento "Tizón de la judía".

TABLA 4A Porcentaje de control de hongos fitopatógenos in vivo

Aplicación foliar

Compuesto	MP Cebada	Añublo cebada	MP Judía	Mancha cebada	Tizón judía
	1.000 ppm	1.000 ppm	1.000 ppm	1.000 ppm	1.000 ppm
1	0	0	0	0	0
3	90	70	90	100	0
4	0	65	100	100	85
6	0	0	0	0	0
7	0	35	100	70	0
	300 ppm	300 ppm	300 ppm	300 ppm	300 ppm
2	0	0	0	0	0
5	0	0	0	0	0

TABLA 4B Porcentaje de control de hongos fitopatógenos in vivo

Aplicación por empapado

Compuesto	MP Cebada	MP Pepino
	250 ppm	250 ppm
1	0	0
3	0	0
4	0	0
6	0	0
7	20	0
	300 ppm	300 ppm
2	0	0
5	0	0

Control de nueve especies de hongos in vitro

Cada uno de los compuestos indicados en las tablas 1A y 1B, a excepción del Compuesto 5, fue solubilizado en acetona para conseguir una concentración final de 500 ppm. Se sumergieron discos de papel de filtro con diámetro de 11 mm en cada una de las soluciones de ensayo y luego se dejaron secar al aire de manera que el disolvente se evaporara del disco. Se prepararon dos discos por tratamiento y se dejaron sin tratar un número igual de discos para que sirvieran como controles.

Se colocaron entonces los discos tratados y los discos sin tratar sobre placas petri de 110 x 15 mm que contienen agar de patata-dextrosa solidificado (PDA). Se preparó un número suficiente de discos tratados y de discos sin tratar para poder ensayar todas las composiciones fungicidas para el control de Botrytis cinerea (B. cinerea), Colletotrichum gossyppii (C. gossypii), Cercosporidiurn personatum (C. personatum), Fusarium nivale (F. nivale), Phytopthora infestans (P. infestans), Pythium ultimum (P. ultimum), Rhizoctonia solani (R. solani), Sclerotinia minor {S. minor} y Septoria nodurum (S. nodurum). Los discos tratados y los discos sin tratar se inocularon colocando en el centro del disco un tapón de 6 mm, cortado de una zona de un cultivo en crecimiento activo de cada uno de los hongos indicados. El tapón fue orientado sobre el disco con el fin de permitir que la capa micelar del tapón entrara en contacto con el disco tratado o con el disco sin tratar. En el caso de C. personatum, sobre la superficie de los discos sin tratar y de los discos tratados se colocaron 2 gotas de una suspensión de conidios/micelios, ajustada a una concentración de 20.000 propágulos por m^{-1}.

Los platos que contienen los discos inoculados fueron colocados entonces en una incubadora del tipo de gravedad, regulada a 25ºC, y se incubaron durante 5-7 días. La inhibición del crecimiento fue evaluada midiendo el radio de las colonias fúngicas que emanan del tapón de inóculo original sobre los discos tratados y comparando dichas mediciones con aquellas tomadas a partir de los discos sin tratar. Los resultados del ensayo in vitro se ofrecen en las tablas 5A y 5B.

En el caso del Compuesto 5, se utilizó un método diferente para comprobar la actividad fungicida contra las especies fúngicas anteriormente indicadas. Se preparó una solución madre de cada una de las composiciones fungicidas anteriormente descritas disolviendo 0,01 g del compuesto en 0,75 ml de acetona, para conseguir una concentración final de 15.000 ppm. Se añadió entonces una gota de 1 \mul de cada uno de los compuestos de ensayo a pocillos individuales de una placa de microvaloración de 96 pocillos que contiene 50 \mul de caldo de patata-dextrosa. En cada placa, se dejaron sin tratar 4 pocillos para que sirvieran como controles.

Se preparó una suspensión que contiene 10.000 fragmentos o conidios de células ml^{-1} (dependiendo del hongo) rascando placas petri que contienen cultivos activos de cada uno de los hongos de ensayo por medio de una varilla de vidrio con punta de caucho, y homogenizando la suspensión resultante con una pulidora para vidrio. Se midió la concentración final empleando un emacitómetro y se añadieron 50 \mul de la suspensión fúngica a cada uno de los pocillos de la placa de microvaloración antes tratada. Se emplearon placas separadas para cada hongo y la concentración final del compuesto químico del ensayo fue de 150 ppm. Antes de la incubación, cada placa se colocó en un lector fotométrico de ocho canales para microplacas, regulado para medir la absorbancia a 492 nm, y se tomó una lectura inicial para establecer una línea de referencia para cada célula de la microplaca.

Las placas de microvaloración fueron incubadas entonces durante 48 horas en una cámara de incubación regulada para mantener una temperatura de 26ºC y conseguir así el crecimiento óptimo de los hongos del ensayo. Después de la incubación, las placas de microvaloración que contienen los hongos del ensayo fueron retiradas y evaluadas con el lector fotométrico de microplacas anteriormente descrito. En principio, a medida que incrementa el crecimiento fúngico, también lo hace la densidad óptica de la solución en los pocillos individuales de la microplaca y se puede medir fotométricamente. Por tanto, las lecturas tomadas después de la incubación de las microplacas que contienen los compuestos químicos y los hongos del ensayo fueron restadas de las lecturas iniciales para medir la cantidad de crecimiento durante el periodo de 48 horas. El porcentaje de inhibición de cada hongo por los compuestos químicos del ensayo fue calculado comparando los valores de absorbancia de los pocillos tratados con aquellos de los pocillos sin tratar. Los resultados de este ensayo del Compuesto 5 pueden encontrarse en las tablas 5A y 5B.

TABLA 5A Porcentaje de control de hongos fitopatógenos in vitro

Compuesto	B. cinerea	C. gossypii	C. personatum	F. nivale	P. infestans
	500 ppm	500 ppm	500 ppm	500 ppm	500 ppm
1	10	80	0	0	85
2	91	100	100	10	0
3	85	100	0	84	100
4	100	100	100	100	80
6	85	100	0	100	60
7	100	100	100	100	100
	150 ppm	150 ppm	150 ppm	150 ppm	150 ppm
5	90	10	0	70	45

TABLA 5B Porcentaje de control de hongos fitopatógenos in vitro

Compuesto	P. ultimum	R. solani	S. minor	S. nodurum
	500 ppm	500 ppm	500 ppm	500 ppm
1	100	5	0	25
2	47	0	5	-
3	100	78	100	90
4	100	70	100	75
6	45	0	100	0
7	70	75	100	100
	150 ppm	150 ppm	150 ppm	150 ppm
5	0	85	45	-

Claims

1. Método de control de hongos que comprende poner en contacto los hongos con una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina de fórmula:

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en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{6}.

2. Método según la reivindicación 1, en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{4}.

3. Método según la reivindicación 2, en donde X es fenoxi o fenilo y halógeno; Y es hidrógeno; y R es alcoxi C_{1}-C_{4}.

4. Método según la reivindicación 3, en donde X es fenoxi; Y es hidrógeno; y R es alcoxi C_{1}-C_{4}.

5. Método de control de hongos en una planta o en la semilla de una planta que comprende aplicar a la planta o a la semilla de la planta, o bien a un medio de crecimiento o al agua en donde la planta o la semilla de la planta está creciendo o ha de crecer, una cantidad fungicidamente eficaz de un compuesto derivado de fenilhidrazina de fórmula:

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en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{6}.

6. Método según la reivindicación 5, en donde:

X es a) fenilo o fenoxi o b) un sustituyente del grupo a) y halógeno;

Y es H; y

R es alcoxi C_{1}-C_{4}.

7. Método según la reivindicación 6, en donde X es fenoxi o fenilo y halógeno; Y es hidrógeno; y R es alcoxi C_{1}-C_{4}.

8. Método según la reivindicación 7, en donde X es fenoxi; Y es hidrógeno; y R es alcoxi C_{1}-C_{4}.