ES2227639T3 - Sintesis de analogos de pth y ptrp. - Google Patents

Sintesis de analogos de pth y ptrp.

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ES2227639T3 ES97112595T ES97112595T ES2227639T3 ES 2227639 T3 ES2227639 T3 ES 2227639T3 ES 97112595 T ES97112595 T ES 97112595T ES 97112595 T ES97112595 T ES 97112595T ES 2227639 T3 ES2227639 T3 ES 2227639T3
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Abstract

SE DESCRIBE UN PROCEDIMIENTO DE CONDENSACION DE FRAGMENTOS PARA LA SINTESIS DE ANALOGOS DE LA HORMONA PARATIROIDEA (PTH) Y DE PEPTIDO RELACIONADO CON LA HORMONA PARATIROIDEA (PTHRP), EN EL CUAL LOS RESTOS AMINOACIDOS (22 HELICE ANFIPATICA SINTETICA.

Description

Síntesis de análogos de PTH y PTrP.
Esta invención se refiere un método para la síntesis de ciertos nuevos análogos de la hormona paratiroidea y del péptido relacionado con la hormona paratiroidea útiles para el tratamiento de la osteoporosis.
La osteoporosis es la forma más común de enfermedad metabólica ósea, y puede considerarse la etapa sintomática, de fractura, de la pérdida ósea (osteopenia). Aunque la osteoporosis puede producirse de forma secundaria a diversas enfermedades subyacentes, el 90% de todos los casos parecen ser idiopáticos. Las mujeres postmenopáusicas presentan un riesgo particular de osteoporosis idiopática (osteoporosis postmenopáusica o de tipo I). Otro grupo de elevado riesgo para la osteoporosis idiopática son los ancianos de ambos sexos (osteoporosis senil o de tipo II). La osteoporosis se ha relacionado también con el uso de corticosteroides, con la inmovilización o el reposo prolongado en cama, alcoholismo, diabetes, quimioterapia gonadotóxica, hiperprolactinemia, anorexia nerviosa, amenorrea primaria y secundaria, y ovariectomía.
En las diversas formas de la osteoporosis se producen frecuentemente fracturas óseas, que son el resultado de la pérdida ósea que ha alcanzado el punto de fractura mecánica. La osteoporosis postmenopáusica se caracteriza por fracturas de la muñeca y de la columna, mientras que las fracturas del cuello femoral parecen ser la característica dominante de la osteoporosis senil.
El mecanismo mediante el cual se pierde hueso en los pacientes osteoporóticos se cree que implica un desequilibrio en el proceso mediante el cual el esqueleto se renueva a si mismo. Este proceso ha sido denominado remodelación ósea. Tiene lugar en una serie de bolsas de actividad discretas. Estas bolsas aparecen espontáneamente dentro de la matriz ósea sobre una superficie ósea dada como un sitio de resorción ósea. Los osteoclastos (células de disolución o resorción de hueso) son responsables de la resorción de una porción de hueso, generalmente de una dimensión constante. Este proceso de resorción se sigue de la aparición de osteoblastos (células de formación de hueso) que seguidamente rellenan con nuevo hueso la cavidad dejada por los osteoclastos.
En un sujeto adulto sano, la velocidad a la cual los osteoclastos y los osteoblastos se forman es tal que la formación de hueso está en equilibrio con la resorción de hueso. Sin embargo, en los osteoporóticos, se produce un desequilibrio en el proceso de remodelación ósea, lo que tiene como resultado una pérdida de hueso a una velocidad superior a la de formación de hueso. Aunque este desequilibrio se produce hasta cierto punto en la mayoría de individuos a medida que envejecen, es mucho más grave y se produce a una edad menor en mujeres osteoporóticas postmenopáusicas o tras la ovariectomía.
Adachi y col., en Seminars in Arthritis and Rheumatism, 22:6, 375-84 (Junio 1993), informan que a pesar de los datos contradictorios en relación con la patofisiología de la osteoporosis inducida por corticosteroides, se está de acuerdo en general en que se produce un descenso relativo en la formación de hueso y un aumento relativo en la resorción de hueso. La pérdida de hueso, con la osteonecrosis y fracturas resultantes, es una consecuencia frecuente de la terapia con corticosteroides. Existen evidencias de que se produce pérdida ósea rápidamente dentro de los 6 a 12 primeros meses de terapia con corticosteroides. Parece haber asimismo una estrecha relación entre la velocidad de pérdida ósea y la dosis de corticosteroides. Los hombres son igualmente susceptibles a los efectos de los corticosteroides. La incidencia estimada de fracturas y de osteonecrosis se encuentra en el intervalo del 30 al
50%.
Se han producido numerosos intentos de tratar la osteoporosis con el objetivo de o bien ralentizar aún más la pérdida ósea o, lo cual sería más deseable, producir una ganancia neta en masa ósea. Ciertos fármacos, como estrógenos y los bifosfonatos, parecen ralentizar más la pérdida ósea en los osteoporóticos. Los fármacos que ralentizan la pérdida ósea, debido a la duración diferente de la resorción y formación de hueso, parecen incrementar la masa ósea (del orden del 3 a 7%). Sin embargo, este aparente aumento está limitado en el tiempo, no es progresivo, y se debe a una reducción del "espacio de remodelación". Adicionalmente, debido al estrecho acoplamiento entre resorción y formación, los tratamientos que impiden la resorción ósea también perjudican en último término a la formación de
hueso.
Se ha sugerido que el tratamiento con hormona paratiroidea (PTH) produciría tanto un recambio de hueso aumentado como un balance de calcio positivo. Sin embargo, los ensayos clínicos humanos han demostrado que cualquier aumento en el hueso trabecular viene contrarrestado por un descenso en el hueso cortical, de modo que no se produce un aumento neto en hueso total.
Hefti y col., en Clinical Science 62, 389-396 (1982), han informado que dosis diarias subcutáneas de o bien bPTH (1-84) o hPTH (1-34) aumentaban el calcio total corporal y el peso en ceniza de huesos individuales de ratas hembra adultas tanto normales como osteoporóticas.
Liu y col., en J. Bone Miner. Res. 6, 10, 1071-1080 (1991), han observado que la ovariectomía de ratas hembra adultas inducía una pérdida del 47% en el porcentaje de hueso trabecular en la metáfisis tibial proximal, acompañada de un aumento significativo en el número de osteoblastos y de osteoclastos trabeculares. Inyecciones subcutáneas diarias de hPTH (1-34) revertían completamente la pérdida de hueso trabecular y resultaban en cantidades de hueso trabecular que superaban la de controles operados no tratados. El número de osteoblastos aumentaba y el número de osteoclastos disminuía.
Hock y col., en J. Bone Min. Res. 7, 1, 65-71 (1992), han informado que inyecciones subcutáneas diarias de hPTH (1-34) a ratas macho adultas sanas durante 12 días aumentaban el calcio y el peso seco de hueso cortical y trabecular. La masa ósea total, el volumen del hueso trabecular, el número y grosor de las trabéculas y las superficies osteoblásticas estaban aumentados.
Las hormonas paratiroideas de mamíferos, por ejemplo humana (hPTH), bovina (bPTH), y porcina (pPTH), son cadenas polipeptídicas únicas de 84 residuos aminoacídicos, con pesos moleculares de aproximadamente 9500. La actividad biológica está asociada con la porción N-terminal, constituyendo los residuos (1-34) el mínimo aparentemente requerido.
El segmento N-terminal de la PTH humana difiere del segmento N-terminal de las hormonas bovina y porcina en únicamente tres y dos residuos aminoacídicos, respectivamente:
hPTH (1-34):
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\;
(SEQ ID NO:1); 
\vskip1.000000\baselineskip
bPTH (1-34):
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\;
(SEQ ID NO:2); 
\vskip1.000000\baselineskip
pPTH (1-34):
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\;
(SEQ ID NO:3); 
\vskip1.000000\baselineskip
La principal función de la PTH es producir los cambios adaptativos que sirven para mantener una concentración constante de Ca^{2+} en el medio extracelular. La PTH actúa sobre los riñones para aumentar la reabsorción tubular de Ca^{2+} de la orina, así como para estimular la conversión de calcifediol en calcitriol, el cual es responsable de la absorción de Ca^{2+} de los intestinos. Un efecto fundamental es promover la movilización de Ca^{2+} del hueso. La PTH actúa sobre el hueso para aumentar la resorción de Ca^{2+} y fosfato. La PTH estimula la velocidad de resorción ósea por los osteoclastos, aumenta la velocidad de diferenciación de las células mesenquimales a osteoclastos, y prolonga la vida media de este último tipo de células. Con la acción prolongada de la PTH, el número de osteoblastos formadores de células también aumenta; de este modo, la velocidad de recambio óseo y de remodelación está aumentada. Sin embargo, los osteoblastos individuales parecen ser menos activos de lo normal.
Rosenblatt, y col., en las Patentes Estadounidenses números 4.423.037, 4.968.669 y 5.001.223, han descubierto antagonistas de la PTH obtenidos mediante deleción de los aminoácidos N-terminales (1-6) y mediante el reemplazamiento selectivo de Phe^{7}, Met^{8,18}, y Gly^{12}. Tyr^{34}-NH_{2} aumenta de forma destacable la actividad y estabilidad de estos compuestos.
El péptido relacionado con la hormona paratiroidea (PTHrp), una proteína de 140+ aminoácidos, y sus fragmentos, reproducen las principales acciones biológicas de la PTH. El PTHrp es elaborado por diversos tumores humanos y de animales, así como por otros tejidos, y puede jugar un papel importante en la hipercalcemia de la malignidad. La secuencia de hPTHrp (1-34) es la siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His}
\sac{Leu Ile Ala Glu Ile His Thr Ala}
\;
(SEQ ID NO:4). 
\vskip1.000000\baselineskip
La homología de secuencia entre hPTH y hPTHrp está limitada sobre todo a los 13 residuos N-terminales, 8 de los cuales son idénticos; únicamente 1 de los 10 aminoácidos en la región de unión a receptor (25-34) de la hPTH está conservado en la hPTHrp. La similitud conformacional puede ser la razón subyacente de la actividad común. Cohen y col., en J. Biol. Chem., 266, 3, 1997-2004 (1991) han sugerido que la mayoría de la secuencia de PTH (1-34) y de PTHrp (1-34), en particular las regiones (5-18) y (21-34), asume una configuración en hélice \alpha, haciendo notar al mismo tiempo que existen algunas dudas sobre si esta configuración prevalece en el extremo carboxilo terminal en condiciones fisiológicas. Tal estructura secundaria podría ser importante para la interacción con lípidos, interacción con el receptor, y/o estabilización estructural.
Se han descubierto análogos de la PTH y del PTHrp con propiedades terapéuticas mejoradas en relación con la restauración de la masa ósea en sujetos mamíferos, incluyendo aquellos afectados por osteoporosis, en las Publicaciones de Solicitud de Patente Internacional números WO 94/01460.
Es un objeto de la presente invención el proporcionar un método mejorado para la síntesis de un polipéptido sintético análogo a la hormona paratiroidea (PTH) o al péptido relacionado con la hormona paratiroidea (PTHrp), o una sal del mismo, en el cual los residuos aminoacídicos (22-31) forman una hélice \alpha anfipática, seleccionándose dichos residuos (22-31) de las SEQ ID NOS: 85, 86, 26, 27, 28, 29 y 30, comprendiendo este método: a) la síntesis independiente de fragmentos peptídicos precursores del polipéptido, mediante técnicas en solución o en fase sólida, b) la condensación de dichos fragmentos unos con otros para formar el producto polipeptídico deseado, y c) la eliminación de los grupos protectores de aminoácidos, en donde este método comprende: a) la síntesis independiente de fragmentos peptídicos precursores del polipéptido en soportes de resina, b) la escisión de los fragmentos del polipéptido de sus soportes de resina respectivos, c) la condensación secuencial de dichos fragmentos para formar el producto polipeptídico deseado, y d) la eliminación de los grupos protectores de aminoácidos, en donde todos excepto el fragmento C-terminal del polipéptido, c) dichos fragmentos se condensan secuencialmente con el fragmento C-terminal unido a la resina para formar el producto polipeptídico deseado, d) se eliminan los grupos protectores de aminoácidos y el producto polipeptídico se escinde del soporte de resina, en donde el producto polipeptídico se prepara a partir de tres fragmentos peptídicos precursores, N-terminal, medio y C-terminal, en los que el fragmento N-terminal posee una Gly en su extremo C-terminal, el fragmento peptídico medio posee una Leu en su extremo C-terminal, y el fragmento C-terminal posee una Leu en su extremo N-terminal. En un aspecto alternativo, el fragmento peptídico medio posee un Glu C-terminal y el fragmento C-terminal posee una Leu
N-terminal.
Adicionalmente, es un objeto de la presente invención el proporcionar un proceso para la preparación de una composición farmacéutica caracterizada en que se emplea un proceso como el descrito anteriormente para la preparación de un análogo de PTH o de PTHrp, y el análogo de PTH o de PTHrp obtenido se mezcla con uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables, siendo específico este proceso para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la osteoporosis, en especial para la curación de las fracturas.
Las abreviaturas de una letra y de tres letras para las bases nucleotídicas y para los aminoácidos comunes son las recomendadas en Pure Appl. Chem., 31, 639-645 (1972) y 40, 277-290 (1974), y por la Comisión de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB, y cumplen con 37 CFR \NAK 1.822 (55 FR 18245, 1 de Mayo, 1990). Las abreviaturas de una y de tres letras son las siguientes:
\newpage
Aminoácido Símbolo de tres letras Símbolo de una letra
Alanina Ala A
Arginina Arg R
Asparagina Asn N
Ácido aspártico Asp D
Asn + Asp Asx B
Cisteína Cys C
Glutamina Gln Q
Ácido glutámico Glu E
Gln + Glu Glx Z
Glicina Gly G
Histidina His H
Isoleucina Ile I
Leucina Leu L
Lisina Lys K
Metionina Met M
Fenilalanina Phe F
Prolina Pro P
Serina Ser S
Treonina Thr T
Triptófano Trp W
Tirosina Tyr Y
Valina Val V
Otros aminoácidos Xaa X
Estas abreviaturas representan L-aminoácidos, a menos que se indique lo contrario mediante la indicación D- ó D, L-. Ciertos aminoácidos, tanto naturales como no naturales, son aquirales, por ejemplo glicina. Todas las secuencias peptídicas se representan con el aminoácido N-terminal a la izquierda y el aminoácido C-terminal a la derecha.
Otras abreviaturas para otros aminoácidos y compuestos utilizados aquí son:
hSer homoserina
hSerlac homoserina lactona
Nle norleucina
"Análogo truncado fisiológicamente activo de PTH o de PTHrp" se refiere a un polipéptido que posee la secuencia que comprende menos del complemento completo de aminoácidos que se encuentra en PTH o en PTHrp y que, no obstante, produce una respuesta fisiológica similar. El PTH o PTHrp truncado no es necesario que sea completamente homólogo con el PTH o PTHrp para producir una respuesta fisiológica similar. PTH (1-34) y PTHrp (1-34) son representantes preferidos, pero no exclusivos, de este grupo.
"Hélice \alpha anfipática" se refiere a la estructura secundaria exhibida por ciertos polipéptidos en los que los aminoácidos asumen una configuración en hélice \alpha que presenta una cara no polar opuesta a una cara polar, orientadas ambas a lo largo del eje longitudinal de la hélice. La posibilidad de una estructura en hélice \alpha en el polipéptido de interés puede ser explorada hasta cierto punto mediante la construcción de una "rueda de Schiffer-Edmundson" (M. Schiffer y A. B. Edmundson, Biophys. J., 7, 121 (1967)), del paso de rosca adecuado, y comprobando la segregación de los residuos hidrofílicos y lipofílicos en las caras opuestas del cilindro que circunscribe la hélice. Alternativamente, las evidencias empíricas, tales como los datos de dicroísmo circular o de difracción por rayos X, pueden estar disponibles, e indicar la presencia de una región con hélice \alpha en un polipéptido dado. Una hélice \alpha ideal posee 3,6 residuos aminoácidos por vuelta, con cadenas laterales adyacentes separadas por 100º de arco. Eisenberg y col., en Nature 299, 371-374 (1982) y Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 81, 140-144 (1984) han combinado una escala de hidrofobicidad con la rueda en hélice para cuantificar el concepto de hélices anfipáticas. El momento hidrofóbico medio se define como la suma vectorial de las hidrofobicidades de los aminoácidos componentes que constituyen la hélice. Las siguientes hidrofobicidades para los aminoácidos son las descritas por Eisenberg (1984) como la escala "consenso":
Ile 0,73; Phe 0,61; Val 0,54; Leu 0,53; Trp 0,37; Met 0,26; Ala 0,25; Gly 0,16; Cys 0,04; Tyr 0,02; Pro -0,07; Thr -0,18; Ser -0,26; His -0,40; Glu -0,62; Asn -0,64; Gln -0,69; Asp -0,72; Lys -1,10; Arg -1,76.
El momento hidrofóbico, \mu_{H}, para una hélice \alpha ideal que posee 3,6 residuos por vuelta (o un arco de 100º
(= 360º/3,6) entre cadenas laterales), puede ser calculado a partir de:
\mu_{H} = [(\Sigma H_{N}sin\partial (N-1))^{2} + (\Sigma H_{N}cos\partial(N-1))^{2}] _,
donde H_{N} es el valor de hidrofobicidad del aminoácido enésimo (Nº), y las sumas se toman sobre los N aminoácidos de la secuencia con periodicidad \partial = 100º. El momento hidrofóbico puede expresarse como el momento hidrofóbico medio por residuo dividiendo \mu_{H} por N para obtener <\mu_{H}>. Un valor de <\mu_{H}> a 100º \pm 20º de aproximadamente 0,20 o superior sugiere la formación de una hélice anfipática. Los valores de <\mu_{H}> a 100º para hPTHrp (22-31) y hPTH (22-31) son de 0,19 y 0,37, respectivamente.
Cornett y col., en J. Mol. Biol., 195, 659-685 (1987) han extendido todavía más el estudio de las hélices \alpha anfipáticas introduciendo el "índice de anfipaticidad" como un predictor de la anfipaticidad. Estos autores han concluido que aproximadamente la mitad de todas las hélices \alpha conocidas son anfipáticas, y que la frecuencia dominante es 97,5º en lugar de 100º, con el número de residuos por vuelta más cercano a 3,7 que a 3,6. Mientras que tales refinamientos son interesantes desde el punto de vista científico, la aproximación básica de Eisenberg y col. es suficiente para clasificar una secuencia dada como anfipática, en particular cuando se pretende diseñar una secuencia de aminoácidos ab initio para que forme una hélice \alpha.
Una secuencia aminoacídica formadora de hélice \alpha anfipática de substitución puede carecer de homología con la secuencia de un segmento dado de un polipéptido natural, pero puede presentar una estructura secundaria similar, es decir, una hélice \alpha que posee caras polares y no polares opuestas, en el ambiente fisiológico. El reemplazamiento de la secuencia de aminoácidos natural con una secuencia alternativa puede afectar de forma beneficiosa la actividad fisiológica, la estabilidad u otras propiedades del polipéptido parental alterado. Una guía para el diseño y selección de estas secuencias la proporcionan J.L. Krstenansky y col., FEBS Letters, 242, 2, 409-413 (1989), y J.P. Segrest y col., Proteins: Structure, Function and Genetics, 8, 103-117 (1990), entre otros.
Un método conveniente para determinar si una secuencia es suficientemente anfipática para ser una secuencia de esta invención es calcular el momento hidrofóbico medio, como se define anteriormente. Si el momento medio pico por residuo a 100º \pm 20º supera aproximadamente 0,20, entonces la secuencia formará una hélice anfipática y es una secuencia de esta invención.
Por ejemplo, el momento hidrofóbico medio por residuo a 100º para (SEQ ID NO: 26), Xaa = Glu, se calcula como sigue:
1
\mu_{H} = [(0,81)^{2} + (-4,43)^{2}] _ = 4,50
<\mu_{H}> = 4,50/10 = 0,45
Para esta secuencia, el momento hidrofóbico pico aparece a 92º y tiene un valor de 0,48.
En un aspecto, esta invención proporciona procedimientos para la síntesis de PTH, PTHrp, y los análogos fisiológicamente activos de PTH y PTHrp, o sales de los mismos, en los que los residuos aminoácidos (22-31) forman una hélice \alpha anfipática, seleccionándose la secuencia de dichos residuos (22-31) de:
Xaa^{1} Xaa^{2} Leu Xaa^{4} Xaa^{5} Leu Xaa^{7} Xaa^{8} Xaa^{9} Xaa^{10} donde
Xaa^{1} y Xaa^{4} son independientemente Glu, Glu(OCH_{3}), His o Phe;
Xaa^{2} es Leu o Phe;
Xaa^{5} es Lys o His;
Xaa^{7} y Xaa^{10} son independientemente Leu o Ile;
Xaa^{8} es Ala, Arg, o Glu; y
Xaa^{9} es Lys o Glu (SEQ ID NO: 85);
preferentemente Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu
donde Xaa es Glu o Arg (SEQ ID NO: 26);
Xaa^{1} Xaa^{2} Leu Xaa^{4} Arg Leu Leu Xaa^{8} Arg Leu donde
Xaa^{1} y Xaa^{4} son independientemente Glu, Glu(OCH_{3}), His o Phe;
Xaa^{2} es Leu o Phe;
Xaa^{8} es Glu o Lys (SEQ ID NO: 86);
preferentemente Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu
donde
Xaa es Glu o Lys (SEQ ID NO: 27);
Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (SEQ ID NO: 28);
Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (SEQ ID NO: 29);
Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (SEQ ID NO: 30).
En otro aspecto, esta invención proporciona procesos para la síntesis de PTH, PTHrp, y los análogos fisiológicamente activos de PTH y PTHrp, o sales de los mismos, de fórmula:
Xaa^{1} Xaa^{2} Xaa^{3}Xaa^{4} Xaa^{5} Xaa^{6} Xaa^{7} Leu His Asp Xaa^{11} Gly Xaa^{13} Ser Ile Gln Asp Leu Xaa^{19} Xaa^{20} Xaa^{21} Xaa^{22-31} Xaa^{32} Xaa^{33} Xaa^{34} Xaa^{35} Xaa^{36} Xaa^{37} Xaa^{38} Term, donde:
Xaa^{1} está ausente o es Ala;
Xaa^{2} está ausente o es Val;
Xaa^{3} está ausente o es Ser;
Xaa^{4} está ausente o es Glu o Glu(OCH_{3});
Xaa^{5} está ausente o es His o Ala;
Xaa^{6} está ausente o es Gln;
Xaa^{7} está ausente o es Leu;
Xaa^{11} es Lys, Arg, o Leu;
Xaa^{13} es Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys(CH_{2}CONH-(CH_{2})_{2}NH(biotinil)), Lys(7-dimetilamino-2-oxo-2H-1-benxopiran-4-acetil), o Lys(dihidrocinnamoil);
Xaa^{20} es Arg o Leu;
Xaa^{19} y Xaa^{21} son independientemente Lys, Ala o Arg;
Xaa^{22-31} se selecciona de (SEQ ID NOS: 26, 27, 28, 29 o 30);
Xaa^{32} es His, Pro o Lys;
Xaa^{33} está ausente o es Pro, Thr, Glu o Ala;
Xaa^{34} está ausente o es Pro, Arg, Met, Ala, hSer, hSer lactona, Tyr o Leu;
Xaa^{35} está ausente o es Pro, Glu, Ser, Ala o Gly;
Xaa^{36} está ausente o es Ala, Arg o Ile;
Xaa^{37} está ausente o es Arg, Trp, o 3-(2-naftil)-L-alanina;
Xaa^{38} está ausente o es Ala o hSer o Xaa^{38-42} es Thr Arg Ser Ala Trp;
y Term es OR o NR_{2} donde cada R es independientemente H, (C_{1}-C_{4})alquilo o fenil(C_{1}-C_{4})alquilo; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En todavía otro aspecto, esta invención incluye procesos para la síntesis de análogos polipeptídicos del homólogo truncado fisiológicamente activo hPTHrp (1-34), como se muestra en la Fórmula (I):
Ala Val Ser Glu Xaa^{5} Gln Leu Leu His Asp Xaa^{11} Gly Xaa^{13} Ser Ile Gln Asp Leu Xaa^{19} Arg Xaa^{21} Xaa^{22-31} Xaa^{32} Xaa^{33} Xaa^{34} Term, donde:
Xaa^{5} es His o Ala;
Xaa^{11} y Xaa^{13} son independientemente Lys, Arg o Leu;
Xaa^{19} y Xaa^{21} son independientemente Ala o Arg;
Xaa^{22-31} se selecciona de:
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu donde
Xaa es Glu o Arg (SEQ ID NO: 26);
Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu donde
Xaa es Glu o Lys (SEQ ID NO: 27);
Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (SEQ ID NO: 28);
Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (SEQ ID NO: 29);
Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (SEQ ID NO: 30);
Xaa^{32} es His o Lys;
Xaa^{33} es Thr, Glu o Ala;
Xaa^{34} es Ala, hSer, Tyr o Leu;
y Term es Gly Arg Arg, lactona, OH o NR_{2}, donde cada R es H o (C_{1}-C_{4}) alquilo; y sus sales farmacéuticamente aceptables. (Fórmula I)
Un aspecto más específico de la invención incluye la síntesis de aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 26), para los cuales <\mu_{H}> a 100º es mayor de 0,45. Un aspecto todavía más específico de la invención incluye aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 26); Xaa^{11} y Xaa^{13} son ambos Lys; y Xaa^{19} y Xaa^{21} son ambos Arg. Los polipéptidos representativos que pueden ser preparados mediante los procedimientos descubiertos aquí incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Arg Lys Leu His Thr Ala OH (SEQ ID NO: 5);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala OH (SEQ ID NO: 6);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 7);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSer NH2 (SEQ ID NO: 8);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSerlac (SEQ ID NO: 9);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (SEQ ID NO: 10); y
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu Lys Glu Leu NH_{2} (SEQ ID NO: 11).
Otro aspecto de esta invención incluye la síntesis de aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 26); Xaa^{11} y Xaa^{13} son ambos Lys; y uno de Xaa^{19} y Xaa^{21} es Arg y el otro es Ala. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procedimientos descubiertos aquí incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 12) y
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 13).
En otro aspecto esta invención incluye la síntesis de aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 26); uno de Xaa^{11} y Xaa^{13} es Leu y el otro es Lys; y Xaa^{19} y Xaa^{21} son ambos Arg. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu Ala Gln Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Ala Leu OH (SEQ ID NO: 14).
En otro aspecto esta invención incluye la síntesis de aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 27), para los que <\mu_{H}> a 100º es superior a 0,50. Un aspecto adicional de esta invención incluye la síntesis de aquellos polipéptidos de Fórmula (I) en los que Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 27); Xaa^{11} y Xaa^{13} son ambos Lys o ambos Arg; y Xaa^{19} y Xaa^{21} son ambos Arg. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEQ ID NO: 15);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala OH (SEQ ID NO: 16);
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Lys Arg Leu His Thr Ala OH (SEQ ID NO: 17);
En otro aspecto esta invención incluye la síntesis de polipéptidos de Fórmula (I) en los que
Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 28), para los que <\mu_{H}> a 100º es aproximadamente 0,25. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 20).
En otro aspecto esta invención incluye la síntesis de polipéptidos de Fórmula (I) en los que
Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 29), para los que <\mu_{H}> a 100º es aproximadamente 0,28. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
\newpage
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 21).
En otro aspecto esta invención incluye la síntesis de polipéptidos de Fórmula (I) en los que
Xaa^{22-31} es (SEQ ID NO: 30), para los que <\mu_{H}> a 100º es aproximadamente 0,29. Polipéptidos representativos de este subgénero que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu His Thr Ala NH_{2} (SEQ ID NO: 22).
Todavía otro aspecto de esta invención incluye la síntesis de análogos polipeptídicos de los homólogos fisiológicamente activos de bPTH (1-34), como se muestra en la fórmula (II):
Xaa^{1} Val Ser Glu Ile Gln Xaa^{7} Xaa^{8} His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa^{16} Ser Xaa^{18} Xaa^{19} Arg Xaa^{21} Xaa^{22-31} His Asn Xaa^{34} Term, donde:
Xaa^{1} es Ser o Ala;
Xaa^{7} es Leu o Phe;
Xaa^{8} es Met o Nle;
Xaa^{16} es Asn o Ser;
Xaa^{18} es Leu, Met o Nle;
Xaa^{19} es Glu o Arg;
Xaa^{21} es Val o Arg;
Xaa^{22-31} se selecciona de (SEQ ID NO: 26, 27, 28, 29 y 30);
Xaa^{34} es Phe o Tyr;
Term es OH o NR_{2}, donde cada R es H o (C_{1}-C_{4})alquilo; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Polipéptidos representativos que pueden ser sintetizados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser Ser Nle Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Tyr NH_{2} (SEQ ID NO: 23) y
Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Tyr NH_{2} (SEQ ID NO: 24).
En todavía otro aspecto de esta invención, se proporcionan procesos para la síntesis de análogos de PTH y de PTHrp de menos de 34 aminoácidos. Estos compuestos tienen como fórmula general:
Ala Val Ser Glu Xaa^{5} Gln Leu Leu His Asp Xaa^{11} Gly Xaa^{13} Ser Ile Gln Asp Leu Xaa^{19} Arg Xaa^{21} Xaa^{22-31} Xaa^{32} Xaa^{33} Xaa^{34} Term.
Polipéptidos representativos que pueden ser preparados mediante los procesos de esta invención incluyen, pero no están limitados a:
Compuesto 41: 
\,
AVSEHQLLHD 
\,
KGKSIQDLRR 
\,
RELLEKLLEK 
\,
LHP-NH_{2} 
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Pro NH_{2}}
\;
(SEQ ID NO:55).
Compuesto 42: 
\,
AVSEHQLLHD 
\,
KGKSIQDLRR RELLEKLLEK 
\,
LP-NH_{2} 
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu Pro NH_{2}}
\;
(SEQ ID NO:55).
El artesano experimentado apreciará que pueden sintetizarse numerosas permutaciones de los análogos polipeptídicos que poseerán los atributos deseables de los descritos aquí, siempre que una secuencia aminoacídica que posea un momento hidrofóbico medio por residuo a 100º \pm 20º mayor de aproximadamente 0,20 esté insertada en las posiciones (22-31).
Los fragmentos polipeptídicos de la presente invención pueden ser sintetizados mediante métodos tales como los descritos por G. Barany, R.B. Merrifield en The Peptides, E. Gross y J. Meienhofer eds., Academic Press, New York (1979), vol. 2, págs. 1-284; J.M. Stewart y J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2ª ed., Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois (1984) y J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, vol. 2, Academic Press, New York (1973) para la síntesis en fase sólida, y E. Schroder y K. Lubke, The Peptides, vol. 1, Academic Press, New York (1965) para la síntesis en solución. En general, estos métodos implican la adición secuencial de aminoácidos protegidos a una cadena peptídica en crecimiento. Normalmente, o bien el grupo carboxilo o el grupo amino del primer aminoácido y cualquier grupo reactivo de la cadena lateral están protegidos. Este aminoácido protegido o bien se une a un soporte inerte sólido o bien se utiliza en solución, y el siguiente aminoácido en la secuencia, también protegido de forma adecuada, se añade en condiciones adecuadas para la formación del enlace amida. Una vez todos los aminoácidos deseados se han unido en la secuencia adecuada, se eliminan los grupos de protección y cualquier soporte sólido para rendir el polipéptido sin purificar. El polipéptido se desala y se purifica, preferentemente mediante cromatografía, para rendir el producto final.
En la puesta en práctica de esta invención, los fragmentos peptídicos precursores pueden ser preparados bien por técnicas en solución o en fase sólida, o mediante una combinación de las mismas. Por ejemplo, algunos de los fragmentos pueden ser preparados en solución, y seguidamente pueden condensarse con un fragmento C-terminal unido a una resina, o bien los fragmentos pueden prepararse por separado mediante un método en fase sólida, escindirse de la resina y condensarse en solución, o bien puede emplearse un protocolo mixto de síntesis en solución y en fase sólida.
Un método preferido para la preparación de los análogos de PTH y PTHrp de esta invención, que posean menos de aproximadamente cuarenta aminoácidos, implica la síntesis peptídica por condensación de fragmentos en fase sólida. En este método, el producto último resulta de la condensación de varios fragmentos peptídicos precursores. Dependiendo de la preferencia del trabajador experimentado, puede emplearse cualquier combinación de fragmentos. Por ejemplo, puede prepararse un producto de 34 aminoácidos a partir de dos fragmentos peptídicos precursores de 17 aminoácidos, tres fragmentos peptídicos precursores, de longitudes variables, cuatro fragmentos precursores, etc. Véase P. Lloyd-Williams y col., "Convergent Solid Phase Peptide Synthesis", en Tetrahedron, 49, 11065-11133, (1993) para una discusión ilustrativa.
En general, las funciones \alpha-amino (N^{\alpha}) y cualquier cadena lateral reactiva están protegidas mediante grupos sensibles a ácidos o a bases. El grupo protector debe ser estable en las condiciones de formación del enlace peptídico, siendo al mismo tiempo fácilmente removible sin afectar a la cadena polipeptídica naciente. Los grupos protectores en \alpha-amino adecuados incluyen, pero no están limitados a: t-butoxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (Cbz), o-clorobenciloxicarbonilo, bifenilisopropiloxicarbonilo, t-amiloxicarbonilo (Amoc), isoborniloxicarbonilo, \alpha,\alpha-dimetil-3,5-dimetoxibenciloxicarbonilo, o-nitrofenilsulfenilo, 2-ciano-t-butoxicarbonilo, preferentemente 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc). Los grupos protectores de las cadenas laterales incluyen, pero no están limitados a: acetilo, bencilo (Bzl), benciloximetilo (Bom), t-butilo, ciclohexilo, o-bromobenciloxicarbonilo, t-butildimetilsililo, 2-clorobencilo (Cl-z), 2,6-diclorobencilo, 2,4-dinitrofenilo, ciclopentilo, isopropilo, pivalilo, tetrahidropiran-2-ilo, tosilo (Tos), trimetilsililo, metiltritilo, mesitileno sulfonilo (Mts), 4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfonilo (Mtr), 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo (Pbf), 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo (Pmc), y tritilo (Trt).
En la síntesis en fase sólida, el aminoácido C-terminal se une en primer lugar a un soporte de resina adecuado. Los soportes de resina adecuados son aquellos materiales que son inertes a los reactivos y a las condiciones de reacción de las reacciones de condensación y desprotección secuenciales, y que son al mismo tiempo insolubles en el medio utilizado. Los ejemplos de resinas disponibles comercialmente incluyen resinas de estireno/divinilbenceno modificadas con un grupo reactivo, por ejemplo resinas de co-poli(estiren-divinilbenceno)clorometilado, co-poli(estiren-divinilbenceno)hidroximetilado, y resinas de fenilacetamidometil (PAM) benciladas e hidroximetiladas. Para preparar péptidos con ácido terminal, pueden utilizarse las resinas de Wang. Una resina preferida es resina de p-metilbenzhidrilamino-co-poli(estireno-divinilbenceno) (MBHA).
En el aspecto preferido, todos los fragmentos excepto el fragmento C-terminal se preparan en una resina sensible a ácido, tal como Sasrin (2-metoxi-4-alcoxibencilalcohol) o ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico 4-metilbenzhidrilamina (HMPB-MBHA). Las resinas HMPA-MBHA, HMPB-BHA y HMPA-BHA son también adecuadas para los péptidos con terminación carboxilo. El fragmento C-terminal se prepara empleando una resina Knorr espaciador-MBHA. Las resinas Sieber amida, las resinas Rink engarce-MBHA o BHA, y las resinas Ramage engarce-MBHA o BHA son todas adecuadas para los péptidos terminados en amida. Estas resinas están disponibles comercialmente con el primer aminoácido ya unido, o bien el primer aminoácido puede unirse al engarce. Las resinas HMPB-MBHA y Knorr con espaciador pueden prepararse como se describe en los Ejemplos 1, 2, y 3 a continuación para la resina MBHA. El acoplamiento sucesivo del resto de aminoácidos protegidos puede llevarse a cabo mediante métodos bien conocidos en el campo. Cada aminoácido protegido se introduce preferentemente en un exceso molar de aproximadamente 1,5 a 2,5 veces, y el acoplamiento se realiza en un solvente polar no acuoso inerte, como por ejemplo N-metil pirrolidinona (NMP), diclorometano, dimetilformamida (DMF), dimetil sulfóxido (DMSO), o mezclas de los mismos, preferentemente a temperatura ambiente. Agentes acoplantes representativos son N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC), u otras carbodiimidas, bien sea solas o en presencia de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), O-acil ureas, benzotriazol-1-il-oxitris(pirrolidino)fosfonio hexafluorofosfato (PyBop), N-hidroxisuccinimida, otras N-hidroxiimidas, u oximas. Alternativamente, pueden emplearse ésteres activos de aminoácidos protegidos (por ejemplo, p-nitrofenilo, pentafluorofenilo y similares) o bien pueden utilizarse anhídridos simétricos.
El acoplamiento sucesivo de aminoácidos protegidos con Fmoc se lleva a cabo empleando una solución de una amina secundaria, tal como piridina, para eliminar el grupo Fmoc. La resina peptidica puede ser controlada para un acoplamiento completo mediante el ensayo de Kaiser tras cada etapa de acoplamiento.
Al final de la síntesis de fase sólida, el péptido completamente protegido se separa de la resina empleando condiciones que no inducen una desprotección prematura de los grupos protectores de las cadenas laterales. Los péptidos pueden ser escindidos mediante saponificación o transesterificación o mediante un tratamiento de desprotección acídico suave, empleando por ejemplo ácido trifluoroacético (TFA) al 1%. El péptido protegido puede purificarse mediante cromatografía en gel de sílice.
La solución puede desalarse (por ejemplo con resina de intercambio aniónico BioRad AG-3®) y el péptido puede purificarse con una secuencia de etapas cromatográficas empleando cualquiera, o todos, de los siguientes tipos: cromatografía de adsorción hidrofóbica en co-poli(estiren-divinilbenceno) no derivatizado, por ejemplo Amberlite® XAD; cromatografía de adsorción en gel de sílice; cromatografía de intercambio catiónico en carboximetilcelulosa; cromatografía de partición, por ejemplo en Sephadex® G-25; distribución a contracorriente; o cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (HPLC), especialmente HPLC de intercambio catiónico y HPLC de fase reversa en rellenos de columna con fase unida de octil- u octadecilsililsílice (ODS).
En un aspecto de la síntesis en multi-fragmento, los fragmentos medio y N-terminal se aíslan y se condensan sucesivamente con el fragmento C-terminal. El producto polipeptídico se desprotege y se escinde de la resina, purificándose seguidamente. La secuencia de purificación es en general una serie completa de separaciones cromatográficas. El análisis por HPLC determina la secuencia y la elección de la purificación. Una secuencia típica implica el intercambio catiónico, el HPLC de fase reversa, y una columna de concentración en fase reversa. La solución final se somete a liofilización y el fármaco producto se conserva en botellas ámbar. Los aminoácidos protegidos se obtuvieron de Genzyme (Cambridge, MA, EE.UU.), Propeptide (Princeton, NJ, EE.UU.) o Synthetec (Albany, OR, EE.UU.).
Ejemplos
El polipéptido de SEQ ID NO: 7, un péptido de 34 aminoácidos, AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKL
HTA-NH_{2}, se preparó empleando un procedimiento de condensación de tres fragmentos. El fragmento N-terminal consistía en los aminoácidos 1 a 12, el fragmento medio consistía en los aminoácidos 13 a 23, y el fragmento C-terminal consistía en los aminoácidos 24 a 34. Se preparó cada fragmento mediante el método en fase sólida en un sintetizador automático de péptidos Vega 296 Automated Peptide Synthesizer. Se empleó el modo automático para la escisión de los grupos protectores en N^{\alpha} y para los lavados tras el acoplamiento. Los reactivos y solventes de acoplamiento se añadieron manualmente al recipiente de reacción en la etapa de acoplamiento. Se purificaron los fragmentos medio y N-terminal por HPLC y se condensaron sucesivamente con el fragmento C-terminal. Se desprotegió el polipéptido final, se escindió de la resina y se purificó.
Ejemplo 1 Preparación del fragmento n-terminal
El fragmento N-terminal, consistente en los aminoácidos 1 a 12, AVSEHQLLHDKG, se preparó a una escala de 250 mmoles en la resina ácido sensible ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxi-butírico 4-metilbenzhidrilamina (HMPB-MBHA). Esta resina se preparó a partir de una resina MBHA (Novabiochem) del modo siguiente:
\newpage
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
1. lavado CH_{2}Cl_{2}/DMF (1/1) 60 1
2. Et_{3}N 10% en CH_{2}Cl_{2} 5 2
3. CH_{2}Cl_{2}/DMF (1/1) 5 3
4. engarce HMPB (1,15 eqs.)/ 300 @ 40ºC 1
PyBOP/DIPEA en CH_{2}Cl_{2}/DMF 500 @ TA
(1/1)
5. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
6. lavado DMF 1,5 2
7. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 1
8. lavado i-PrOH 1,5 2
9. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
Después de al menos un lavado con DMF/CH_{2}Cl_{2}, se realizó el acoplamiento del primer aminoácido (^{12}Gly) empleando Fmoc-GlyOH (1,5-2,2 eqs.), DIC (1,5-2,2 eqs.) y DMAP (0,05 eq.) durante aproximadamente 15 horas a temperatura ambiente en DMF / CH_{2}Cl_{2} (1/1), empleando el siguiente protocolo:
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
1. CH_{2}Cl_{2}/DMF (1/1) 60 1
2. Fmoc-X-OH (2 eq.) / DIC-DMAP (0,05 eq.) 900 1
en CH_{2}Cl_{2}/DMF (1/1)
3. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
4. lavado DMF 1,5 2
5. lavado i-PrOH 1,5 2
6. DMF/CH_{2}Cl_{2} (1/1) 1,5 2
7. i-PrOH 1,5 2
8. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
La resina se lavó seguidamente repitiendo las etapas 3 a 8, y se encapuchó siguiendo el siguiente protocolo:
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
9. DMF 15 1
10. PhCOCl (0,18 M) / piridina (0,36 M) en 30-180 1
DMF / CH_{2}Cl_{2}
11. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
12. lavado DMF 1,5 2
13. lavado i-PrOH 1,5 2
14. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} (1/1) 1,5 1
15. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
Los restantes aminoácidos se unieron a la resina en ciclos de acoplamiento sucesivos en secuencia reversa empleando los siguientes aminoácidos protegidos:
aa11 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{\varepsilon}-t-butiloxicarbonil-L-lisina
aa10 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-aspártico \beta-t-butil-éster
aa9 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{im}-tritil-L-histidina
aa8 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa7 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa6 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{g}-tritil-L-glutamina
aa5 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{im}-tritil-L-histidina
aa4 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-glutámico \gamma-t-butil-éster
aa3 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-O-t-butil-L-serina
aa2 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-valina
aa1 
\;
N^{\alpha}-t-butiloxicarbonil-L-alanina
Los acoplamientos se realizaron a temperatura ambiente en NMP empleando de 1,5 a 2,2 equivalentes de aminoácido (0,1 - 0,25 M), HOBt, y DIC. Tras 1,5-3 horas, se añadió DMSO y el acoplamiento continuó durante 1,5-3 horas. Cada acoplamiento implicó las siguientes etapas:
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
1. lavado DMF 2,5-30 1
2. piperidina 20% en NMP 3 1
3. piperidina 20% en NMP 14 1
4. lavado DMF 1,5 2
5. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
6. lavado i-PrOH 1,5-2,5 2-5
7. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} (1/1) 1,5 2-3
8. acoplamiento 240 1
9. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
10. lavado DMF 1,5 2
11. lavado i-PrOH 1,5 2
12. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
13. i-PrOH 1,5 1
14. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
Se confirmó la finalización del acoplamiento mediante el ensayo de Kaiser; si el ensayo era positivo, se repetían las etapas 8 a 14, empleando opcionalmente PyBOP como agente acoplante.
Para escindir el péptido protegido de la resina, se agitó una suspensión de la resina en TFA 1% en CH_{2}Cl_{2} (4 ml/g resina) a 0ºC o temperatura ambiente durante hasta 15 minutos. La solución se filtró y se extrajo con NaHCO_{3}. El tratamiento de la resina se repitió tres veces. Las fases orgánicas se reunieron y se lavaron con agua, NaHSO_{4} 5%, y agua de nuevo. La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se evaporó. El residuo se purificó por HPLC como sigue:
Columna: Zorbax Pro-10/150 C8, 6'' x 40 cm
Temperatura de columna: ambiente
Flujo: 2,2-3,0 ml/min.cm^{2}
Longitud de onda del detector: 250 nm
Fase móvil: HOAc 0,1%, pH 6-6,2 con trietilamina, CH_{3}CN
El péptido protegido se cargó en la columna en 65-70% CH_{3}CN. Se aplicó un gradiente aumentando la proporción de CH_{3}CN hasta el 85%. Se reunieron las fracciones, se concentraron y el producto se aisló por extracción en CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se lavó con una solución diluida de bicarbonato sódico o agua, se secó sobre sulfato magnésico y se evaporó.
Ejemplo 2 Preparación del fragmento medio
El fragmento medio, consistente en los aminoácidos 13 a 23, KSIQDLRRREL, se preparó a una escala de 230 mmoles en una resina sensible a ácido, ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico 4-metilbenzhidrilamina (HMPB-MBHA). Esta resina se preparó a partir de resina MBHA como se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 1. El primer aminoácido (aa24) se incorporó como se ha mostrado empleando Fmoc-L-leucina. Los restantes aminoácidos se unieron a la resina en ciclos de acoplamiento sucesivos empleando el procedimiento del Ejemplo 1:
aa23 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-glutámico \gamma-t-butil-éster
aa22 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{g}-4-metoxi-2,3,6-trimetilbencilsulfonil-L-arginina
aa21 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{g}-4-metoxi-2,3,6-trimetilbencilsulfonil-L-arginina
aa20 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{g}-4-metoxi-2,3,6-trimetilbencilsulfonil-L-arginina
aa19 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa18 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-aspártico \beta-t-butil-éster
aa17 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{g}-tritil-L-glutamina
aa16 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-isoleucina
aa15 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-O-t-butil-L-serina
aa14 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{\varepsilon}-t-butiloxicarbonil-L-lisina
El péptido se escindió de la resina en forma de ácido libre, se extrajeron los disolventes orgánicos, se secaron y se evaporaron como se ha mostrado para el Ejemplo 1. El residuo puede precipitarse disolviéndolo en diclorometano y añadiendo t-butil-metil-éter (t-BuOMe). Tras la filtración, el lavado con t-BuOMe y el secado al vacío, el producto se purificó isocráticamente con CH_{3}CN 75% por HPLC en una columna Zorbax, descrita anteriormente; la longitud de onda del detector fue de 267 nm.
Ejemplo 3 Preparación del fragmento C-terminal
El fragmento C-terminal, que consiste en los aminoácidos 24-34, LEKLLEKLHTA, se preparó en una resina MBHA a una escala de 130 mmoles, empleando un engarce Fmoc-2,4-dimetoxi-4'-(carboximetiloxi)-benzhidrilamina del modo siguiente:
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
1. lavado CH_{2}Cl_{2} 60 1
2. DIPEA 10% en CH_{2}Cl_{2} 5 2
3. CH_{2}Cl_{2} 5 3
4. DMF 5 3
5. engarce/HOBt/DIC (1,5 eq.) en CH_{2}Cl_{2}/DMF (1/1) 300-420 1
6. CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
7. DMF 1,5 2
8. iPrOH 2,5 2
9. CH_{2}Cl_{2}/DMF 1,5 2
10. iPrOH 2,5 2
11. CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
12. DMF en DMF/CH_{2}Cl_{2} 10 1
13. Ac_{2}O, DIPEA en DMF/CH_{2}Cl_{2} 30-35 1
14. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
15. lavado DMF 1,5 2
16. lavado i-PrOH 1,5 2
17. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} 1,5 1
18. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
Los restantes aminoácidos se unieron a la resina en ciclos de acoplamiento sucesivos en secuencia reversa empleando los siguientes aminoácidos protegidos:
aa34 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-alanina
aa33 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-O-t-butil-L-treonina
aa32 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{im}-tritil-L-histidina
aa31 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa30 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{\varepsilon}-t-butiloxicarbonil-L-lisina
aa29 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-glutámico \gamma-t-butil-éster
aa28 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa27 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
aa26 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-N^{\varepsilon}-t-butiloxicarbonil-L-lisina
aa25 
\;
ácido N^{\alpha}-Fmoc-L-glutámico \gamma-t-butil-éster
aa24 
\;
N^{\alpha}-Fmoc-L-leucina
Los acoplamientos se llevaron a cabo durante de 1,5 a 3 horas a temperatura ambiente en NMP empleando de 1,5 a 2,2 equivalentes de aminoácido, HOBt y DIC para los aminoácidos 34 a 26. Se emplearon tres equivalentes de aminoácido, HOBt y DIC para los aminoácidos 24 y 25. Tras de 1,5 a 3 horas, se añadió DMSO 20% y el acoplamiento continuó durante de 1,5 a 3 horas. Cada acoplamiento implicó las siguientes etapas, incluyendo la escisión de Fmoc y los lavados tras el acoplamiento:
Etapa Paso Tiempo (mins) Repeticiones
1. lavado DMF 2,5-30 1
2. piperidina 20% en NMP 3 1
3. piperidina 20% en NMP 14 1
4. lavado DMF 1,5 3
5. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
6. lavado i-PrOH 1,5-2,5 2-6
7. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
8. acoplamiento 240 1
9. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
10. lavado DMF 1,5 2
11. lavado i-PrOH 1,5-2,5 2
12. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
13. lavado i-PrOH 2,5 2
14. lavado CH_{2}Cl_{2} ensayo Kaiser 1,5 3
15. DMF 2,5-15 1
16. Ac_{2}O/DIPEA/CH_{2}Cl_{2}/DMF 30-35 1
17. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 2
18. lavado DMF 1,5 2
19. lavado i-PrOH 1,5 2
20. lavado DMF/CH_{2}Cl_{2} 1,5 1
21. lavado CH_{2}Cl_{2} 1,5 3
Se confirmó el acoplamiento completo mediante el ensayo de Kaiser tras cada etapa de acoplamiento. Si el ensayo era positivo (\geq 1,5% no acoplado), se repetían las etapas de 8 a 14; si el ensayo era negativo, se acetilaba la resina.
Ejemplo 4 Condensación de tres fragmentos
Los tres fragmentos se prepararon como se ha descrito anteriormente en los Ejemplos 1, 2 y 3. El grupo N^{\alpha}-Fmoc restante del fragmento C-terminal se eliminó empleando las etapas 1 a 7 del último protocolo descrito para el Ejemplo 3.
El fragmento medio B (172 g, 61,8 mmoles), HOBt (59,2 mmoles), HOAt (3,7 mmoles) y DIC (61,9 mmoles) se añadieron a la resina del fragmento C-terminal (190 g, 41 mmoles) en NMP (900 ml) y CH_{2}Cl_{2}. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. Se añadió DIPEA (7 ml) y la agitación continuó durante un día más. La resina se lavó como se ha descrito en el Ejemplo 1 (etapas 9 a 13). Un ensayo de Kaiser mostró menos de un 2% remanente de material no acoplado. La resina se acetiló (Ejemplo 3, etapas 14 a 20) y los grupos Fmoc se eliminaron (Ejemplo 3, etapas 1 a 7).
El fragmento N-terminal A, en forma de la sal sódica (153 g, 62,4 mmoles), HOBt (59,2 mmoles), HOAt (3,7 mmoles), PyBOP (62,5 mmoles) y DIPEA (125,15 mmoles) se añadieron a la resina en NMP (900 ml) y CH_{2}Cl_{2}. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas, se filtró y se lavó (Ejemplo 3, etapas 9 a 13). El ensayo de Kaiser mostró menos de un 1% remanente de material no acoplado. La resina se acetiló (Ejemplo 3, etapas 14 a 20), se retiró del reactor y se secó al vacío.
Una solución de fenol (60,3 g) en tioanisol (152,6 ml) y TFA (1 l) se añadió al péptido-resina (64 g) bajo atmósfera de N_{2}. La mezcla se enfrió a -10ºC y se añadió lentamente TMSBr. La mezcla se agitó durante 0,5 horas a -10ºC en un sistema cerrado y durante 1-2 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró hasta la mitad del volumen bajo vacío a 50ºC y la resina se filtró y se lavó dos veces con TFA (250 ml) y ácido acético glacial (250 ml). Los filtrados se precipitaron por adición de una mezcla 3:1 de t-butil-metil-éter:hexano (6,5 l). El péptido crudo se filtró, se lavó con t-butil-metil-éter, tolueno y t-butil-metil-éter (2x250 ml de cada uno) y se volvió a precipitar disolviéndolo en metanol (500 ml) y añadiéndolo a t-butil-metil-éter (7 l). El producto sin refinar se filtró, se lavó con t-butil-metil-éter y se secó bajo vacío para rendir 33 g del péptido.
De forma similar, pueden prepararse los siguientes análogos de PTHrp, substituyendo los péptidos terminados en ácido por una resina adecuada:
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 6)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 15)
AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 16)
AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 17)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 5)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTAGRR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 10)
AVSEAQLLHDLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OH 
\;
(SEQ ID NO: 14)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLELLKEL-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 11)
AVSEIQFXHNLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY-NH_{2} 
\;
(X=Nle, SEQ ID NO:23)
AVSEIQFXHNLGKHLSSXRRRELLEKLLEKLHNY-NH_{2} 
\;
(X=Nle, SEQ ID NO:24)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRALAEALAEALHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 20)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 12)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRAELLEKLLEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 13)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 21)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 22)
AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 35)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL KELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 38)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 39)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 40)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 41)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 43)
AVSEHQLLHD KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 44)
AVSEHQLLHD KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 45)
AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 46)
(X=Cys(CH_{2}CONH(CH_{2})_{2}NH(biotinil)))
AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 47)
(X=Lys(7-dimetilamino-2-oxo-2H-1-benxopiran-4-acetil))
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAG-OH 
\;
(SEQ ID NO: 48)
AVSX_{1}HQLLHX_{2} KGKSIQX_{2}LRR RX_{1}LLX_{1}KLLX_{1}K LHA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 49)
(X_{1}=Glu(OCH_{3}); X_{2}=Asp(OCH_{3}))
AVSX_{1}HQLLHX_{2} KGKSIQX_{2}LRR RX_{1}LLX_{1}KLLX_{1}K LHA-OCH_{3} 
\;
(SEQ ID NO:50)
(X_{1}=Glu(OCH_{3}); X_{2}=Asp(OCH_{3}))
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 52)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 53)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 54)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 55)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 56)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 57)
AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 58)
AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 59)
AVSEHQLLHD RGXSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 60)
(X=Lys(dihidrocinamoil)
AVSEIQFXHN LGKHLSSXTR SAWLRKKLQD VHNY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 61)
(X=norleucina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 62)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 64)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 65)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 66)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 67)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 68)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 72)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAX-OH 
\;
(SEQ ID NO: 73)
(X=Nal(2)=3-(2-naftil)-L-alanina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 74)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIRA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 75)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 76)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEI-OH 
\;
(SEQ ID NO: 77)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAE-OH 
\;
(SEQ ID NO: 78)
SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 80)
LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 81)
LHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 82)
SEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO:83)
LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO:84)
Pueden preparase y purificarse [Met^{34}, Ala^{35}] (SEQ ID NO: 25), AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKL
HTMA-NH_{2}, (SEQ ID NO: 25), mediante los procedimientos descritos anteriormente. Este polipéptido puede convertirse en la homoserina lactona del modo siguiente. El péptido purificado se disuelve en ácido fórmico 44%. Esta solución se combina con una solución premezclada de bromuro de cianógeno (700 mg) y fenol (1,6 mg) en ácido fórmico 44% a 0ºC. La solución se agita a 0ºC durante 2 horas y a temperatura ambiente durante 2 horas. La formación del producto puede controlarse mediante HPLC (Vydac^{r} C-18, 300Aº, 4,6 x 250 mm, flujo de 1,2 ml/min, gradiente de acetonitrilo 25-45% en TFA 0,1% durante 10 min). La muestra se concentra y se purifica mediante HPLC-RP preparativo (Vydac^{r} C-18, gradiente de acetonitrilo 25-45% en TFA 0,1%) para rendir (SEQ ID NO: 9).
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX 
\;
(X=hSerlac, SEQ ID NO: 9)
De forma similar, puede prepararse (SEQ ID NO: 79) de conformidad con este procedimiento.
AVSEIQFX_{1}HN KGKHLSSX_{1}ER VEWLRKKLQD VHNX_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 79)
(X_{1}=L-norleucina; X_{2}=homoserina lactona)
Para preparar la amida de homoserina, el análogo crudo de hSerlactona, Compuesto 4, se concentra y se trata con 25 ml de NH_{3} saturado en metanol. La solución se agita a 0ºC durante 2 horas y a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción puede controlarse por HPLC (Vydac^{r} C-18, 300Aº, 4,6 x 250 mm, flujo de 1,2 ml/min, gradiente de acetonitrilo 20-45% en TFA 0,1%). La solución se concentra y se purifica por HPLC-RP preparativo (Vydac^{r} C-18, gradiente de acetonitrilo 25-45% en TFA 0,1%). Las fracciones de péptido de amida de homoserina se reúnen y se liofilizan para obtener (SEQ ID NO: 8).
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX-NH_{2} 
\;
(X=hSer, SEQ ID NO:8)
De forma similar, los Compuestos 22, 23 y 28 pueden prepararse siguiendo este procedimiento, empleando metionina como C-terminal.
AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 36)
(X=homoserina)
AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 37)
(X=homoserina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO:42)
(X=homoserina)
Las alquilamidas de homoserina se preparan de forma similar a partir de la homoserina lactona disolviéndola en DMF conteniendo un exceso de la correspondiente alquilamina. Tras agitar a temperatura ambiente durante varios días (la reacción puede controlarse por HPLC analítico) la mezcla se evapora a sequedad y el péptido se purifica por HPLC preparativo. Alquilamidas de homoserina representativas son los Compuestos 55 y 56.
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH_{2}CH_{3}
(SEQ ID NO: 69) (X=homoserina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{5}
(SEQ ID NO: 70) (X=homoserina)
Puede tratarse una solución acuosa del análogo de lactona de homoserina anterior con esterasa de hígado porcina (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO). La hidrólisis de la lactona a la homoserina C-terminal puede ser monitorizada por HPLC analítico. Cuando se juzga que la hidrólisis es completa, el material puede purificarse por HPLC preparativo como anteriormente.
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH
(SEQ ID NO: 51) (X=homoserina)
Si bien esta invención se ha ejemplificado mediante el descubrimiento de la síntesis de un polipéptido de 34 aminoácidos a partir de tres fragmentos, es igualmente aplicable a la síntesis de otros análogos de PTH y de PTHrp de diferentes longitudes a partir de diferentes fragmentos. En general, son extremos C-terminales deseables de los fragmentos ácido glutámico, glicina, leucina y prolina. En los Ejemplos anteriores, el acoplamiento leucina-leucina entre los fragmentos 2 y 3 produjo rendimientos inesperadamente altos. De forma similar, puede explotarse el acoplamiento leucina-leucina mediante la preparación del polipéptido de SEQ ID NO: 7 a partir de los fragmentos 1-7, 8-23, 24-27 y 28-34. En otro aspecto, cuando los aminoácidos 24-27 (LEKL) son los mismos que los aminoácidos 28-31, puede prepararse el fragmento de cuatro aminoácidos mediante técnicas bien en solución o en fase sólida, y puede condensarse consigo mismo para proporcionar el fragmento 24-31. Alternativamente, el fragmento de cuatro aminoácidos 23-26 (LLEK) puede prepararse y condensarse consigo mismo para proporcionar el fragmento 23-30. La facilidad de purificación viene aumentada por el uso de fragmentos de menor tamaño, los cuales cristalizan fácilmente. Sin embargo, un aumento en el número de fragmentos requiere más etapas de condensación de fragmentos.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE: F. HOFFMANN-LA ROCHE A.G.
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: MÉTODO PARA LA SÍNTESIS DE ANÁLOGOS DE LA HORMONA PARATIROIDEA Y DEL PÉPTIDO RELACIONADO CON LA HORMONA PARATIROIDEA
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 86
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
DESTINATARIO: F. HOFFMANN-LA ROCHE A.G.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: Grenzacherstrasse 124
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Basilea
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
ESTADO: BS
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: Suiza
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
ZIP: CH-4070
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
FORMA LEGIBLE POR COMPUTADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE SOPORTE: DISQUETE FLEXIBLE
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
COMPUTADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, Versión #1.25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Phe}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His}
\sac{Leu Ile Ala Glu Ile His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Arg Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota="Xaa34=homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa34=homoserina lactona"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu Lys Glu Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ala Gln Leu Leu His Asp Leu Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Ala Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Lys Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 29
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa29 = lisina-(OCCH_{2}(OCH_{2}CH_{2})_{2}OCH_{3})"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Xaa Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 29
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa29 = lisina-(OCCH_{2}(OCH_{2}CH_{2})_{110}OCH_{3}"
\vskip0.800000\baselineskip
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Arg Gly Arg}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Xaa Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala}
\sac{Leu Ala Glu Ala Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser}
\sac{Leu Leu Ser Ser Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys}
\sac{Val Ala Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa18 = norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Xaa His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Xaa Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa18 = norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Xaa His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Xaa Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Met Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = ácido glutámico o arginina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Región
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "la secuencia 26 está contenida en las posiciones 22 a 31 de las secuencias 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 y 14"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = ácido glutámico, lisina o lisina-(OCCH_{2}PEGX)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Región
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "la secuencia 27 está contenida en las posiciones 22 a 31 de las secuencias 15, 16, 17, 18 Y 19."
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "la secuencia 28 está contenida en las posiciones 22 a 31 de la secuencia 20"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "la secuencia 29 está contenida en las posiciones 22 a 31 de la secuencia 21"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 29:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Péptido
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1..10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "la secuencia 30 está contenida en las posiciones 22 a 31 de la secuencia 22"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 88 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGCATGGCT GTTTCTGAAC ATCAGCTGCT 
\hfill
50 
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCATGACAAA GGTAAATCGA TTCAAGATCT GAGACGTC 
\hfill
88 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 90 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGACA TAGTATGCAG CTTTTCAAGC 
\hfill
50 
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
AGTTTCTCCA GCAGCTCGCG ACGTCTCAGA TCTTGAATCG 
\hfill
90 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCTCTAGATC TCCGCGCGCT AGC 
\hfill
23 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 34:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 24 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cDNA
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 34:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC 
\hfill
24 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 35:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Leu His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 36:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Leu His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 37:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Leu His Asn Lys Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Asn Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 38:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Lys Leu Lys Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 39:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 40:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 41:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 42:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 38
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 42:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg}
\sac{Leu Leu Glu Arg Leu His Thr Ala Gly Arg Arg Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 43:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 43:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Tyr Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 44:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 44:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Tyr}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 45:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
(iii) HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 45:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Cys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 46:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es Cys(CH-2CONH(CH-2)-2NH-(biotinil))"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 46:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 47:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es Lys(7-dimetilamino-2-oxo-2H-1-benxopiran-4-acetil)"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 47:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 48:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 48:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 49:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.800000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 4
\vskip0.800000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa4 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa10 es Asp(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 17
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa17 es Asp(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa22 es Glu(OCH3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 25
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa25 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 29
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa29 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 49:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Xaa His Gln Leu Leu His Xaa Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys}
\sac{Leu Leu Xaa Lys Leu His Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 50:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa4 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa10 es Asp(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 17
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa17 es Asp(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 22
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa22 es Glu(OCH3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 25
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa25 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 29
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa29 es Glu(OCH-3)"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 50:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Xaa His Gln Leu Leu His Xaa Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys}
\sac{Leu Leu Xaa Lys Leu His Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 51:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 51:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 52:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 52:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 53:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 53:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 54:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 54:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 55:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 55:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 56:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 32 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 56:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu Pro}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 57:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 57:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 58:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE 42 SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 58:
\vskip1.000000\baselineskip
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 59:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 42 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 59:
\vskip1.000000\baselineskip
10 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 60:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 42 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 13
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa13 es Lys(dihidrocinamoil)"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 60:
\vskip1.000000\baselineskip
11 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 61:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Leu8 es norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Leu18 es norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 61:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Leu His Asn Leu Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Thr Arg Ser Ala Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 62:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 62:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Met Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 63:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 33 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 33
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es Thr-1,4-diaminobutiril lactama"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 63:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 64:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 64:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 65:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 65:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu His Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 66:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 66:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 67:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 67:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Ile Ala Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 68:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 68:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Glu Ile His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 69:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 69:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 70:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 70:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 71:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 71:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 72:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 72:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Ala Trp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 73:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 36
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es Ala-3-(2-naftil)-L-alanina"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 73:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Arg Ser Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 74:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 74:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Ser Ala Trp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 75:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 75:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 76:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 76:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile Arg}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 77:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 77:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Glu Ile}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 78:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 78:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys}
\sac{Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys}
\sac{Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Glu}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 79:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 34 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Leu8 es norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 18
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Leu18 es norleucina"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 34
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa es homoserina lactona"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 79:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Val Ser Glu Ile Gln Phe Leu His Asn Lys Gly Lys}
\sac{His Leu Ser Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys}
\sac{Lys Leu Gln Asp Val His Asn Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 80:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 32 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 80:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile}
\sac{Gln Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu}
\sac{Glu Lys Leu His Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 81:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 28 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 81:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg}
\sac{Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His}
\sac{Thr Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 82:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 27 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 82:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln Asp Leu Arg Arg}
\sac{Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr}
\sac{Ala}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 83:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 41 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 83:
\vskip1.000000\baselineskip
12 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 84:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 84:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser Ile Gln Asp Leu Arg}
\sac{Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His}
\sac{Ala Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 85:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1 y 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa1 y Xaa4 = Glu, Glu(OCH3), His o Phe"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa2 = Leu o Phe"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 5
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa5 = Lys o His"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 7 y 10
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa7 y Xaa10 = Leu o Ile"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = Ala, Arg, o Glu"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 9
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "xaa9 = Lys o Glu"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 85:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 86:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: helicoidal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICA: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 1 y 4
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa1 y Xaa4 = Glu, Glu(OCH3), His o Phe"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 2
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa2 = Leu o Phe"
\vskip0.800000\baselineskip
(ix)
CARACTERÍSTICAS:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
LOCALIZACIÓN: 8
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
OTRA INFORMACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
/nota= "Xaa8 = Glu, Lys o Lys(COCH2PEGX)"
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 86:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Xaa Xaa Leu Xaa Arg Leu Leu Xaa Arg Leu}

Claims (11)

1. Un proceso para la síntesis de un polipéptido sintético análogo a la hormona paratiroidea (PTH) o al péptido relacionado con la hormona paratiroidea (PTHrP), o una sal del mismo, en el que los residuos aminoácidos (22-31) seleccionados de entre (SEQ ID NOS: 85, 86, 26, 27, 28, 29 y 30) forman una hélice \alpha anfipática, e incluyendo dicho proceso:
a) sintetizar de forma independiente tres fragmentos peptídicos precursores: uno N-terminal, uno medio y un fragmento C-terminal,
en donde el fragmento N-terminal tiene una glicina C-terminal, el fragmento medio tiene una leucina C-terminal y el fragmento C-terminal tiene una leucina N-terminal;
b) escindir todos los fragmentos peptídicos precursores excepto el que va a ser finalmente el fragmento peptídico precursor C-terminal del polipéptido deseado de sus respectivos soportes de resina;
c) condensar secuencialmente dichos fragmentos peptídicos precursores escindidos con el fragmento peptídico C-terminal enlazado de resina para formar el producto polipeptídico deseado;
d) eliminar los grupos protectores de cadena lateral; y
e) escindir el producto polipeptídico del soporte de resina.
2. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, en el que el producto polipeptídico final comprende un análogo de PTH o de PTHrP de fórmula:
Xaa^{1} Xaa^{2} Xaa^{3}Xaa^{4} Xaa^{5} Xaa^{6} Xaa^{7} Leu His Asp Xaa^{11} Gly Xaa^{13} Ser Ile Gln Asp Leu Xaa^{19} Xaa^{20} Xaa^{21} Xaa^{22-31} Xaa^{32} Xaa^{33} Xaa^{34} Xaa^{35} Xaa^{36} Xaa^{37} Xaa^{38} Term, donde:
Xaa^{1} está ausente o es Ala;
Xaa^{2} está ausente o es Val;
Xaa^{3} está ausente o es Ser;
Xaa^{4} está ausente o es Glu o Glu(OCH_{3});
Xaa^{5} está ausente o es His o Ala;
Xaa^{6} está ausente o es Gln;
Xaa^{7} está ausente o es Leu;
Xaa^{11} es Lys, Arg, o Leu;
Xaa^{13} es Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu, Cys(CH_{2}CONH-(CH_{2})_{2}NH(biotinil)), Lys(7-dimetilamino-2-oxo-2H-1-benxopiran-4-acetil), o Lys(dihidrocinamoil);
Xaa^{20} es Arg o Leu;
Xaa^{19} y Xaa^{21} son independientemente Lys, Ala o Arg;
Xaa^{22-31} se selecciona de (SEQ ID NOS: 85, 86, 26, 27, 28, 29 ó 30);
Xaa^{32} es His, Pro o Lys;
Xaa^{33} está ausente o es Pro, Thr, Glu o Ala;
Xaa^{34} está ausente o es Pro, Arg, Met, Ala, hSer, hSer lactona, Tyr o Leu;
Xaa^{35} está ausente o es Pro, Glu, Ser, Ala o Gly;
Xaa^{36} está ausente o es Ala, Arg o Ile;
Xaa^{37} está ausente o es Arg, Trp, o 3-(2-naftil)-L-alanina;
Xaa^{38} está ausente o es Ala o hSer o Xaa^{38-42} es Thr Arg Ser Ala Trp;
y Term es OR o NR_{2} donde cada R es independientemente H, (C_{1}-C_{4})alquilo o fenil(C_{1}-C_{4})alquilo; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
3. Un proceso de conformidad con la reivindicación 1, en el que el análogo polipeptídico de PTH o a PTHrP tiene la fórmula:
Xaa^{1} Val Ser Glu Ile Gln Xaa^{7} Xaa^{8} His Asn Xaa^{11}Gly Lys His Leu Xaa^{16} Ser Xaa^{18} Xaa^{19} Arg Xaa^{21} Xaa^{22-31} His Asn Xaa^{34} Term, donde:
Xaa^{1} es Ser o Ala;
Xaa^{7} es Leu o Phe;
Xaa^{8} es Leu, Met o Nle;
Xaa^{11} es Leu o Lys;
Xaa^{16} es Asn o Ser;
Xaa^{18} es Leu, Met o Nle;
Xaa^{19} es Glu, Thr o Arg;
Xaa^{21} es Val, Ser o Arg;
Xaa^{22-31} se selecciona de (SEQ ID NOS: 26, 27, 28, 29 ó 30);
Xaa^{34} es Phe, hSer o Tyr;
Term es OR o NR_{2}, donde R es H o un (C_{1}-C_{4})alquilo; y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
4. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, en el que el análogo de PTH o de PTHrP se selecciona del grupo que consiste en:
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 7)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 6)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 15)
AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 16)
AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 17)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLHTA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 5)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTAGRR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 10)
AVSEAQLLHDLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OH 
\;
(SEQ ID NO: 14)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLELLKEL-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 11)
AVSEIQFXHNLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY-NH_{2} 
\;
(X=Nle, SEQ ID NO:23)
AVSEIQFXHNLGKHLSSXRRRELLEKLLEKLHNY-NH_{2} 
\;
(X=Nle, SEQ ID NO:24)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRALAEALAEALHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 20)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 12)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRAELLEKLLEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 13)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 21)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 22)
AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 35)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL KELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 38)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 39)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 40)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 41)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 43)
AVSEHQLLHD KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 44)
AVSEHQLLHD KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 45)
AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 46)
(X=Cys(CH_{2}CONH(CH_{2})_{2}NH(biotinil)))
AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 47)
(X=Lys(7-dimetilamino-2-oxo-2H-1-benxopiran-4-acetil))
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAG-OH 
\;
(SEQ ID NO: 48)
AVSX_{1}HQLLHX_{2} KGKSIQX_{2}LRR RX_{1}LLX_{1}KLLX_{1}K LHA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 49)
(X_{1}=Glu(OCH_{3}); X_{2}=Asp(OCH_{3}))
AVSX_{1}HQLLHX_{2} KGKSIQX_{2}LRR RX_{1}LLX_{1}KLLX_{1}K LHA-OCH_{3} (SEQ ID NO:50)
(X_{1}=Glu(OCH_{3}); X_{2}=Asp(OCH_{3}))
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 52)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-OH 
\;
(SEQ ID NO: 53)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 54)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 55)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 56)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 57)
AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 58)
AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 59)
AVSEHQLLHD RGXSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 60)
(X=Lys(dihidrocinamoil)
AVSEIQFXHN LGKHLSSXTR SAWLRKKLQD VHNY-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 61)
(X=norleucina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 62)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 64)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 65)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 66)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 67)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 68)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 72)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAX-OH 
\;
(SEQ ID NO: 73)
(X=Nal(2)=3-(2-naftil)-L-alanina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW-OH 
\;
(SEQ ID NO: 74)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIRA-OH 
\;
(SEQ ID NO: 75)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH 
\;
(SEQ ID NO: 76)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEI-OH 
\;
(SEQ ID NO: 77)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAE-OH 
\;
(SEQ ID NO: 78)
SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 80)
LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 81)
LHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 82)
SEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO:83)
LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH 
\;
(SEQ ID NO:84)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX 
\;
(X=hSerlac, SEQ ID NO: 9)
AVSEIQFX_{1}HN KGKHLSSX_{1}ER VEWLRKKLQD VHNX_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 79)
(X_{1}=L-norleucina; X_{2}=homoserina lactona)
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX-NH_{2} 
\;
(X=hSer, SEQ ID NO:8)
AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 36)
(X=homoserina)
AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO: 37)
(X=homoserina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRX-NH_{2} 
\;
(SEQ ID NO:42)
(X=homoserina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH_{2}CH_{3} 
\;
(SEQ ID NO: 69)
(X=homoserina)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH_{2}CH_{2}C_{6}H_{5} 
\;
(SEQ ID NO: 70)
(X=homoserina), y
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH 
\;
(SEQ ID NO: 51)
(X=homoserina).
5. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, en el que el análogo de PTH o de PTHrP es el polipéptido de SEQ ID NO: 7, AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-NH_{2}.
6. El proceso de la reivindicación 5 en el que dicho primer fragmento comprende AVSEHQLLHDKG, dicho segundo fragmento comprende KSIQDLRRREL, y dicho tercer fragmento comprende LEKLLEKLHTA.
7. El proceso de conformidad con la reivindicación 6, en el que dicho tercer fragmento se forma por la condensación de LEKL, LEKL y HTA.
8. Un proceso de de conformidad con la reivindicación 7, en el que dicho primer fragmento comprende
AVSEHQLLHDKG, dicho segundo fragmento comprende KSIQDLRRRE y dicho tercer fragmento comprende
LLEKLLEKLHTA.
9. Un proceso de conformidad con la reivindicación 8 en el que dicho tercer fragmento está formado por la condensación de LLEK, LLEK y LHTA.
10. Un polipéptido sintético de la secuencia elegida entre
AVSEHQLLHDKG;
KSIQDLRRREL;
LEKLLEKLHTA;
KSIQDLRRRE y
LLEKLLEKLHTA.
11. Un proceso para la preparación de una composición farmacéutica caracterizada en que se realiza un proceso tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 9 para la preparación de un análogo de PTH o PTHrP, y el análogo de PTHrP obtenido se mezcla con uno o más aditivos farmacéuticamente aceptables.
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