HRP970416A2 - Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide - Google Patents
Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptideInfo
- Publication number
- HRP970416A2 HRP970416A2 HR60/023,322A HRP970416A HRP970416A2 HR P970416 A2 HRP970416 A2 HR P970416A2 HR P970416 A HRP970416 A HR P970416A HR P970416 A2 HRP970416 A2 HR P970416A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- leu
- absent
- arg
- ala
- fragment
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 62
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 title claims description 45
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 title claims description 33
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 title claims description 32
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 title claims description 31
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims description 30
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 title claims description 29
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 28
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 title claims description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 94
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 74
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 66
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 59
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 59
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 55
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 49
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 22
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 13
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 13
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 12
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 4
- WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N His-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CJINPXGSKSZQNE-KBIXCLLPSA-N Ser-Ile-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CJINPXGSKSZQNE-KBIXCLLPSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims description 2
- VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N Val-Ser-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 2
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 claims 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 claims 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 claims 1
- 101150071808 PTHLH gene Proteins 0.000 claims 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 53
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 49
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- -1 t-butoxycarbonyl Chemical group 0.000 description 22
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 19
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 19
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 18
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 11
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 11
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 11
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 7
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 7
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 7
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 7
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical compound N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 4
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101800001442 Peptide pr Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-4-hydroxybutanamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCO WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZOWOHMFPXMYFKJ-WBTWNKCNSA-N (4S)-4-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]acetyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 ZOWOHMFPXMYFKJ-WBTWNKCNSA-N 0.000 description 2
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXAVCFDWHMZCJH-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)-3-methoxyphenoxy]butanoic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)OC1=CC=C(CO)C(OC)=C1 LXAVCFDWHMZCJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N Ala-Phe-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 2
- MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N Asp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MYLZFUMPZCPJCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 2
- 206010031264 Osteonecrosis Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 201000000916 idiopathic juvenile osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 2
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- LZOLWEQBVPVDPR-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NC(C(OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQNWHZXMPZOTOJ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)-3-methoxyphenoxy]butanoic acid;(4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1.CCC(C(O)=O)OC1=CC=C(CO)C(OC)=C1 VQNWHZXMPZOTOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006282 2-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- JWUBBDSIWDLEOM-UHFFFAOYSA-N 25-Hydroxycholecalciferol Natural products C1CCC2(C)C(C(CCCC(C)(C)O)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C JWUBBDSIWDLEOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000000103 Anorexia Nervosa Diseases 0.000 description 1
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 1
- JXUBNIITMZPMNQ-UHFFFAOYSA-N C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[SiH2][Si] Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[SiH2][Si] JXUBNIITMZPMNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021318 Calcifediol Nutrition 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- XFAUJGNLHIGXET-AVGNSLFASA-N Gln-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XFAUJGNLHIGXET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 206010020584 Hypercalcaemia of malignancy Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000030136 Marchiafava-Bignami Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 206010039984 Senile osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000008416 bone turnover Effects 0.000 description 1
- 108700027323 bovine parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 108700003690 bovine parathyroid hormone (1-34) Proteins 0.000 description 1
- IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N bromo(trimethyl)silane Chemical compound C[Si](C)(C)Br IYYIVELXUANFED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWUBBDSIWDLEOM-DTOXIADCSA-N calcidiol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C JWUBBDSIWDLEOM-DTOXIADCSA-N 0.000 description 1
- 229960004361 calcifediol Drugs 0.000 description 1
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 1
- 235000020964 calcitriol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011612 calcitriol Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000021863 corticosteroid-induced osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 208000020089 femoral neck fracture Diseases 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 231100000451 gonadotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003605 gonadotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000008750 humoral hypercalcemia of malignancy Diseases 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 208000031424 hyperprolactinemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N mesitylene Substances CC1=CC(C)=CC(C)=C1 AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004187 tetrahydropyran-2-yl group Chemical group [H]C1([H])OC([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000010245 tubular reabsorption Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
- A61P5/12—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the posterior pituitary hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
- C07K1/026—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution by fragment condensation in solution
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Izum se odnosi na metodu sinteze određenih novih analoga paratiroidnog hormona i peptida srodnog paratiroidnom hormonu koji se može upotrijebiti za liječenje osteoporoze.
Osteoporoza je najčešći oblik metaboličke bolesti kostiju i može se smatrati simptomatičkim, lomljivim stupnjem gubitka kosti (osteopenija). Iako osteoporozu mogu sekundarno uzrokovati brojne osnovne bolesti, čini se da su 90% od svih slučajeva idiopatski. Žene nakon menopauze su posebno izložene riziku idiopatske osteoporoze (osteoporoza nakon menopauze ili tip I osteoporoze). Drugu skupinu visokog rizika za idiopatsku osteoporozu predstavljaju starije osobe oba spola (senilni ili tip II osteoporoze). Osteoporoza je također bila povezana s upotrebom kortikostereoida, imobilizacijom ili duljim ležanjem u krevetu, alkoholizmom, dijabetesom, gonadotoksičnom kemoterapijom, hiperprolaktinemijom, neurotičnom anoreksijom, primarnom i sekundarnom amenoreom i ooforektomijom.
U raznim oblicima osteoporoze, često dolazi do fraktura kostiju, koje su posljedica gubitka kosti, koji je dosegao točku mehaničke slabosti. Osteoporozu nakon menopauze karakteriziraju frakture zglobova i kičme, dok se čini da su femoralne frakture vrata pretežni oblik senilne osteoporoze.
Vjeruje se da mehanizam gubljenja kosti u osteoporozi uključuje neravnotežu u procesu samo-obnavaljanja kostura. Taj proces je nazvan remodeliranje kostiju. Do njega dolazi u nizu diskretnih džepova aktivnosti. Ti džepovi izgledaju sponatani unutar koštane matrice na datoj površini kosti kao strana koštane resorpcije. Osteoklasti (stanice koje otapaju ili resorbiraju koštanu masu) su odgovorni za resorpciju dijela kosti općenito konstantne dimenzije. Taj proces resorpcije prati pojava osteoblasta (stanice koje oblikuju kost), koji zatim gnijezdo, koje su napustili osteoklasti, ponovno pune s novom koštanom masom.
U zdrave odrasle osobe, brzina kojom se oblikuju osteoklasti i osteoblasti je takova da je formiranje kosti u ravnoteži i resorpcijom kosti. Međutim, kod osoba koje boluju od osteoporoze razvija se neravnoteža u procesu remodeliranja kosti, koja ima za posljedicu to da se kost gubi brže nego što se ona stvara. Iako do te neravnoteže dolazi u nekoj mjeri u većine ljudi s njihovim starenjem, ona je mnogo češća i pojavljuje se u mlađih osoba koje boluju od osteoporoze nakon menopauze ili nakon ooforektomije.
Adachi, et al., u Seminars in Arthritis and Rheumatism, 22:6, 375-84 (lipanj 1993) obznanjuju da unatoč mnogim proturječjima podataka koji se odnose na patofiziologiju osteoporoze inducirane kortikostereoidima, općenito se priznaje da tu postoji relativno smanjenje oblikovanja kosti i relativno povećanje koštane resorpcije. Gubitak kosti, s posljedicom frakture i osteonekrozom, često je posljedica terapije s kortikostereoidima. Postoji dokaz da do brzog gubitka kosti dolazi tijekom prvih 6 do 12 mjeseci terapije s kortikostereoidima; također se čini da tu postoji uska povezanost između brzine gubika kosti i doze kortikostereoida. Muškarci su često osjetljivi na učinke kortikostereoida. Utvrđeni slučajevi fraktura i osteonekroze kreću se od 30 do 50%.
Uloženo je mnogo napora za liječenje osteoporoze sa ciljem usporavanja daljnjeg gubitka kosti ili, poželjnije, produkcijoa neto povećanja koštane mase. Čini se da određena sredstva, kao estrogen i bisfosfonati, usporavaju daljnji gubitak kosti u osoba koje pate od osteoporoze. Zbog različitog trajanja procesa koštane resorpcije i procesa formiranja kosti, može izgledati da sredstva koja usporavaju gubitak kosti, dovode i do povećanja koštane mase (reda veličine od 3 na 7%). Međutim, taj jasan porast je vremenski ograničen, ne napreduje, i on je posljedica smanjenja “remodelirajućeg prostora”. K tome, zbog tijesne povezanosti resorpcije i formiranja kosti, liječenja koja ometaju koštanu resorpciji također bezuvjetno ometaju i oblikovanje kosti.
Ukazano je da bi liječenje s paratiroidnim hormonom (PHT) dovelo do povećanja koštanog obnavljanja i do pozitivne ravnoteže kalcija. Međutim, klinički pokusi na dobrovoljcima su pokazali da se svako povećanje u trabekularnoj kosti izjednačuje sa smanjenjem kortikalne kosti, tako da nema neto povećanja ukupne koštane mase.
Hefti et al. u Clinical Science 62, 389-396 (1982) izvijestili su da je dnevna subkutana doza bPTH(1-84) ili hPTH(1-34) povećala ukupni tjelesni kalcij i težinu pepela pojedinačnih kostiju u obadva slučaja, kod normalnih i odraslih ženki štakora s osteoporozom.
Liu et al. u J. Bone Miner. Res. 6, 10, 1071-1080 (1991) su zabilježili da ovarijektomija odraslih ženki štakora inducira 47% gubitka trabekularne kosti u proksimalnoj tibijalnoj metafizi, popraćenu sa značajnim povećanjem broja osteoblasta i trabekularnih osteoklasta. Dnevne subkutane injekcije hPTH(1-34) potpuno poništavaju gubitak trabekularne kosti i rezultiraju količinama trabekularne kosti koje su iznad količina utvrđenih u kontrolnoj skupini lažno operiranih. Broj osteoblasta se je povećao, a broj osteoklasta se je smanjio.
Hock et al. u J. Bone Min. Res. 1, 1, 65-71 (1992) su izvijestili da su dnevne subkutane injekcije hPTH(1-34) zdravim odraslim mužjacima štakora za 12 dana povećale trabekularni i kortikalni koštani kalcij i suhu težinu. Ukupna koštana masa, volumen trabekularne kosti, trabekularna debljina, te broj i površine osteoblasta bile su povećane.
Paratiroidni hormoni sisavaca, npr. humani (hPTH), goveđi (bTPH), i svinjski (pPTH), su jednostruki polipeptidni lanci koji imaju 84 aminokiselinska ostatka, s molekulnom masom od pribl. 9500. Biološka aktivnost je povezana s N-terminalnim dijelom, s očigledno minimalno potrebnim ostacima (1-34).
N-terminalni segment humnaog PHT razlikuje se od N-terminalnog goveđeg segmenta i hormona svinje samo u tri aminokiselinska ostatka, odnosno:
[image]
[image]
Primarnom funkcijom PHT privlači prilagodljive izmjene koje služe za održavanje konstantne koncentracije Ca2+ u ekstracelularnoj tekućini. PHT djeluje tako da povećava tubularnu reapsorpciju Ca2+ iz urina, kao i stimulaciju pretvorbe kalcifediola u kalcitriol, koji je odgovoran za apsorpciju Ca2+ iz crijeva. Važan je efekt da on uzrokuje mobilizaciju Ca2+ iz kosti. PHT djeluje na kost tako da povećava brzinu resorpcije Ca2+ i fosfata. PHT stimulira brzinu koštane resorpcije pomoću osteoklasta, povećava brzinu diferencijacije mezenhimalnih stanica prema osteoklastima, i produljuje vijek trajanja ovih potonjih stanica. S produljenim djelovanjem PHT također se povećava i broj osteoblasta koji oblikuju kost; tako se poboljašava brzina obnavljanja i ponovnog modeliranja. Međutim, čini se da su pojedinačni osteoblasti manje aktivni od normalnih.
Rosebblatt et al. su u U. S. patentima br. 4,423,037, 4,968,669 i 5,001,223 obznanili PHT antagoniste dobivene delecijom N-terminalnih (1-6) amino kiselina i selektivnim premještanjem Phe7, Met8,18 i Gly12. Tyr34-NH2 posredno povisuje aktivnost i postojanost tih spojeva.
Paratiroidnom hormonu srodan peptid (PTHrP), 140+ aminokiselinski protein, i njegovi fragmenti, reproduciraju glavninu biokoških aktivnosti hormona PTH. PTHrP je elaboriran u brojnim humanim i animalnim tumorima i u drugim tkivima i može imati ulogu u hiperkalcemiji malignacije. Sekvenca hPTHrP (1-34) je slijedeća:
[image]
Sekvenca homologije između hPTH i hPTHrP uvelike je ograničena na 13 N-terminalnih ostataka, od kojih je 8 identičnih; samo 1 od 10 amino kiselina u (25-34) receptorskog veznog područja iz hPTH je konzervirana u hPTHrP. Konformacijska sličnost može biti osnova jednake aktivnosti. Cohen et al. su u J. Biol. Chem. 266, 3, 1997-2004 (1991) ukazali da više sekvenci PTH-(1-34) i PTHrp(1-34), u posebnim regijama (5-18) i (21-34), poprimaju konfiguraciju uzvojnice, dok ništa ne govore o tome da li ta konfiguracija prevladava za karboksilni završetak pod fiziološkim uvjetima. Takova sekundarna struktura može biti važna za lipidne interakcije, receptorske interakcije i/ili stabilizaciju strukture.
Analozi hormona PTH i PTHrP s poboljšanim terapeutskim svojstvima za obnavljanja koštane mase u sisavaca, uključiv i oboljele od osteporoze, bili su već obznanjeni u međunarodnoj patentnoj publikaciji br. WO 94/01460.
Cilj predloženog izuma je dati poboljšanu metodu za sintezu sintetičkog polipeptidnog analoga paratiroidnog hormona (PTH) ili paratiroidnom hormonu srodnog peptida (PTHrP), ili njegove soli, u kojoj aminokiselinski ostaci (22-31) oblikuju amfipatsku α-uvojnicu, pri čemu su spomenuti ostaci (22-31) odabrani između (SEQ ID NO: 85, 86, 26, 27, 28, 29 i 30), koja metoda uključuje
a) neovisnu sintezu prekurzora peptidnih fragmenata polipeptida, postupkom u otopini ili na krutoj fazi;
b) međusobnu kondenzaciju spomenutih fragmenata, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod; i
c) uklanjanje aminokiselinskih zaštitnih skupina.
U jednoj izvedbi ovaj izum daje takovu poboljšanu metodu koja uključuje
a) neovisnu sintezu prekurzora peptidnih fragmenata polipeptida na smolnim podlogama;
b) odcjepljivanje fragmenata polipeptida s njihovih dotičnih smolnih podloga;
c) uzastopno kodenziranje spomenutih fragmenata, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod; i
d) uklanjanje svih aminokiselinskih zaštitnih skupina.
U prednosnoj izvedbi s njihovih dotičnih smolnih podloga odcjepljuju se svi osim C-terminalnog fragmenta polipeptida; c) spomenuti fragmenti se sekvencno kondenziraju sa smolom povezanim C-termanalnim fragmentom, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod, d) aminokiselinske zaštitne skupine se odcjepljuju od smolne podloge.
U prednosnoj izvedbi postupka radi se s tri prekurzorska peptidna fragmenta: N-terminalnim fragmentom, srednjim fragmentom i C-terminalnim fragmentom. U izvedbi kojoj se daje veću prednost, kad se povezuju sa sekvencom željenog krajnjeg polipeptida, na svom C-završetku fragmenti imaju imaju ostatak glutaminske kiseline, glicina ili leucina. U izvedbi kojoj se daje još veću prednost, polipeptidni proizvod pripravljen je od tri prekurzorska peptidna fragmenta: N-terminalnog, srednjeg i C-terminalnog, pri čemu N-terminalni fragment ima Gly kao svoj C-završetak, srednji peptidni fragment ima Leu kao svoj C-završetak, a C-terminalni fragment ima Leu kao svoj N-završetak. U alternativnoj izvedbi, srednji peptidni fragment ima C-terminalni Glu, a C-terminalni fragment ima N-terminalni Leu.
Cilj predloženog izuma je nadalje osigurati postupak za pripravljanje farmaceutskog sastava, naznačen time, da se provodi postupak, kako je gore opisano, za pripravljanje PTH ili PTHrP analoga, i dobiveni PTH ili PTHrP analog se miješa s jednim ili više farmaceutski prihvatljivih dodataka, posebno takav postupak za pripravljanje farmaceutskih sastava za liječenje osteoporoze, posebno liječenje frakture.
Jednoslovne i troslovne kratice za razne opće nukleotidne baze i amino kiseline preporučene su u Pure Appl. Chem. 31, 639-645 (1972) i 40, 277-290 (1974) i IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commision i u skladu su s 37 CFR paragraf 1.822 (55 FR 18245, 1. svibanj 1990.). Jednoslovne i troslovne kratice su slijedeće:
[image]
Ako nije označeno drugačije, kratice predstavljaju L-amino kiseline. Neke amino kiseline, prirodne i sintetičke, su akiralne, npr. glicin. Sve peptidne sekvence su prikazane s N-terminalnom amino kiselinom na lijevoj i C-terminalnom amino kiselinom na desnoj strani.
Ostale kratice za druge amino kiseline i spojeve, koje se ovdje upotrebljavaju, jesu:
hSer homoserin
hSerlac homoserin lakton
Nle norleucin
“Fiziološki aktivan podrezan analog PTH ili PTHrP” odnosi se na polipeptid koji ima sekvencu koja sadrži manje od potpunog komplementa amino kiselina nađenih u PTH ili PTHrP, koji, međutim, izaziva sličan fziološki odgovor. Za izazivanje sličnog fiziološkog odgovora, podrezani PTH ili PTHrP ne treba biti potpuno homologan s PTH ili PTHrP. Prednost imaju PTH(1-34) i PTHrp(1-34), ali oni nisu i isključivi predstavnici te skupine.
“Amfipatska α-uzvojnica” odnosi se na sekundarnu strukturu koja se pokazuje kod određenih polipeptida u kojima amino kiseline imaju konfiguraciju α-uzvojnice koja ima obje strane, stranu suprotne polarnosti i nepolarnu stranu, usmjerene uzduž osi uzvojnice. Mogućnost strukture α-uzvojnice u zanimljivom polipeptidu može se istražiti do neke mjere pomoću konstrukcije “Schiffer-Edmundsonovog kotača” [M Schiffer i A.B. Edmundson, Biophys. J. 7, 121 (1967)], za odgovarajući navoj i bez segregacije hidrofilnih i lipofilnih ostataka na suprotnim stranama cilindra koji omeđuje uzvojnicu. Alternativno, empirijski dokaz, kao što je dihroizam ili difrakcija x-zraka, može biti valjana indikacija prisutnosti α-heliksnog područja u datom polipeptidu. Idealna α-uzvojnica ima 3,6 aminokiselinska ostatka po navoju s lancima susjedne strane odvojenim za 100 lučnih stupnjeva. Eisenberg et al. u Nature 299, 371-374 (1982) i Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81, 140-144 (1984) kombinirali su ljestvicu hidrofobičnosti s kotačem uzvojnice za kvantifikaciju koncepta amfipatskih uzvojnica. Prosječni hidrofobni moment definiran je kao vektor zbroja hidrofobičnosti komponente amino kiselina koje grade uzvojnicu. Hidrofobičnosti amino kiselina koje je obznanio Eisenberg (1984) kao ljestvicu “suglasnosti” jesu slijedeće:
[image]
Moment hidrofobičnosti, μH, za idealnu uzvojnicu koja ima 3,6 ostatka po navoju (ili 100 lučnih stupnjeva (= 360o/3.6) između bočnih lanaca), može se izračunati iz:
μH = [(Σ μH sin∂ (N-1))2 + (ΣμH cos∂(N-1))2],
gdje μH predstavlja vrijednosti hidrofobičnosti N-te amino kiseline i zbroj se uzima preko N amino kiselina u sekvenci s periodičnošću ∂ = 100o. Moment hidrofobičnosti može biti izražen kao srednji moment hidrofobičnosti po ostatku dijeljenjem μH sa N, tako da se dobije <μH>. Vrijednost <μH> pri 100o±20o od pribl. 0,20 ili veća ukazuje na formaciju uzvojnice. Vrijednosti <μH> pri 100o za hPTHrP (22-31) i hPTH (22-31) jesu 0,19, odnosno 0,37.
Cornett et al., u J. Mol. Biol. 195, 659-685 (1987) su dalje proširili studiju amfifatskih α-uzvojnica uvođenjem “amfipatskog indeksa” kao prediktora amfipatskih svojstava. Oni zaključuju da je približno pola od svih poznatih a-uzvojnica amfipatsko, i da je dominantna frekvencija je 97,5o češća nego 100o, s brojem ostataka po navoju koji je bliži 3,7 nego 3,6. Dok su takove pojedinosti znanstveno zanimljive, osnovni pristup Eisenberga i sur. je dovoljan za klasifikaciju date sekvence kao amfipatske, posebno ako je ona ab initio konstruirana za tvorbu amfipatske α-uzvojnice.
Supstitut sekvence amino kiselina s amfipatskom α-uzvojnicom ne mora biti homologan sa sekvencom datog segmenta prirodno nastalog polipeptida, ali uzrokuje istu sekundarnu strukturu, tj. α-uzvojnicu koja u fiziološkom okruženju ima suprotne polarne i nepolarne strane. Zamjena sekvence prirodno nastalih amino kiselina s alternativnom sekvencom može povoljno djelovati na fiziološko djelovanje, postojanost ili na druga svojstva polipeptida drugačijeg podrijetla. Vodič za konstrukciju i selekciju takovih sekvenci dat je, između ostalog, u J.L. Krstenansky et al., FEBS Letters 242, 2, 409-413 (1989), i J. P. Segrest et al., Proteins: Structure, Function and Genetics 8, 103-117, (1990).
Po metodi prikladnoj za određivanje je li sekvenca dovoljno amfipatska da bude sekvenca ovog izuma, izračuna se prosječni hidrofobni moment kako je gore definiran. Ako vršna vrijednost prosječnog momenta po ostatku pri 100o±20o prelazi pribl. 0,20, tada će sekvenca oblikovati amfipatsku uzvojnicu i ona je sekvenca u skladu s izumom.
Na primjer, prosječni moment hidrofobičnosti po ostatku pri 100o za (SEQ ID br. 26), Xaa = Glu, izračunat je kako slijedi:
[image]
Za tu sekvencu, prosječna vršna vrijednost hidrofočnog momenta nastaje pri 92o i ima vrijednost 0,48.
U jednom obliku izvedbe ovaj izum osigurava postupak za sintezu PTH, PTHrP i fiziološki aktivnih analoga PTH i PTHrP ili njihove soli, u kojima aminokiselinski ostaci (22-31) oblikuju amfipatsku α-uzvojnicu, pri čemu je sekvenca spomenutih ostataka (22-31) odabrana između:
a) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10,
gdje
Xaa1 i Xaa4 su neovisno Glu, Glu(OCH3), His ili Phe;
Xaa2 je Leu ili Phe;
Xaa5 je Lys ili His;
Xaa7 i Xaa10 su neovisno Leu ili Ile;
Xaa8 je Ala, Arg ili Glu; i
Xaa9 je Lys ili Glu (SEQ ID NO: 85);
ponajprije Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, gdje
Xaa je Glu ili Arg (SEQ ID NO:26);
b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu, gdje
Xaa1 i Xaa4 su neovisno Glu, Glu(OCH3), His ili Phe;
Xaa2 je Leu ili Phe;
Xaa8 je Glu ili Lys (SEQ ID NO: 86);
ponajprije Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, gdje
Xaa je Glu ili Lys (SEQ ID NO: 27);
c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (SEQ ID NO: 28);
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (SEQ ID NO: 29);
e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (SEQ ID NO: 30).
U drugom obliku izvedbe ovaj izum daje postupak za sintezu PTH, PTHrP, i fiziološki aktivnih analoga PTH i PTHrP, ili njihovih soli,formule
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser Ile Gln Asp Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 završetak
u kojoj
Xaa1 je odsutan ili je Ala;
Xaa2 je odsutan ili je Val;
Xaa3 je odsutan ili je Ser;
Xaa4 je odsutan ili je Glu ili Glu(OCH3);
Xaa5 je odsutan ili je His ili Ala;
Xaa6 je odsutan ili je Gln;
Xaa7 je odsutan ili je Leu;
Xaa11 je Lys, Arg ili Leu;
Xaa13 je Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu,
Cys(CH2CONH(CH2)2NH(biotinil), Lys(7-dimetilamino-2-okso-2H-1-benksopiran-4-acetil), ili Lys(dihidrocinamoil);
Xaa20 je Arg ili Leu;
Xaa19 i Xaa21 su neovisno Lys, Ala ili Arg;
Xaa22-31 je odabran između (SEQ ID NO: 85, 86, 26, 27, 28, 29 ili 30);
Xaa32 je His, Pro ili Lys;
Xaa33 je odsutan ili je Pro, Thr, Glu ili Ala;
Xaa34 je odsutan ili je Pro, Arg, Met, Ala, hSer,
hSer lakton, Tyr ili Leu;
Xaa35 je odsutan ili je Pro, Glu, Ser, Ala ili Gly;
Xaa36 je odsutan ili je Ala, Arg ili Ile;
Xaa37 je odsutan ili je Arg, Trp, ili
3-(2-naftil)-L-alanin;
Xaa38 je odsutan ili je Ala ili hSer ili
Xaa38-42 je Thr Arg Ser Ala Trp;
a završetak je OR ili NR2, pri čemu svaki R neovisno predstavlja vodik, (C1-C4)alkil ili fenil(C1-C4)alkil;
i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum također uključuje postupke za sintezu polipeptidnih analoga fiziološki aktivnih podrezanih homologa hPTHrp(1-34) prikazanih formulom (I):
Ala Val Ser Glu Xaa5 Gln Leu Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser Ile Gln Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 završetak
u kojoj
Xaa5 je His ili Ala;
Xaa11 i Xaa13 su neovisno Lys, Arg ili Leu;
Xaa19 i Xaa21 su neovisno Ala ili Arg;
Xaa22-31 je dabran između:
a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu, gdje
Xaa je Glu ili Arg (SEQ ID NO: 26);
b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu, gdje
Xaa je Glu ili Lys (SEQ ID NO: 27);
c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (SEQ ID NO: 28);
d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (SEQ ID NO: 29);
e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (SEQ ID NO: 30);
Xaa32 je His ili Lys;
Xaa33 je Thr, Glu ili Ala;
Xaa34 je Ala, hSer, Tyr ili Leu;
a završetak je Gly Arg Arg, lakton, OH ili NR2, pri čemu svaki R predstavlja vodik ili (C1-C4)alkil; i njihove farmaceutski prihvatljive soli. (Formula I).
U još određenijem aspektu izum uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa31 je (SEQ ID NO: 26), za koju <μH> pri 100o prelazi 0,45. Potanje, izum uključuje one polipeptide formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 26); obadva, Xaa11 i Xaa13 predstavljaju Lys; a obadva, Xaa19 i Xaa21 predstavljaju Arg. Tipični polipeptidi koji se mogu pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nisu ograničeni samo na njih, jesu:
[image]
[image]
U obliku izvedbe ovaj izum uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 26); obadva, Xaa11 i Xaa13 predstavljaju Lys; a jedan od Xaa19 i Xaa21 je Arg, dok je drugi Ala. Tipični polipeptidi koji se mogu pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nisu ograničeni samo na njih, jesu:
[image]
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 26); jedan od Xaa11 i Xaa13 je Leu, a drugi je Lys; a obadva, Xaa19 i Xaa21 predstavljaju Arg. Tipični polipeptid ove podvrste, koji se može pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuju, ali nije ograničen samo na njega, je:
[image]
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum također uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 27), za koju <μH> pri 100oC prelazi 0,50. Daljnji aspekt ovog izuma uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 27); Xaa11 i Xaa13, obadva su Lys ili su obadva Arg; a Xaa19 i Xaa21, obadva predstavljaju Arg. Tipični polipeptidi ove podvrste koji se mogu pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nisu ograničeni samo na njih, jesu:
[image]
[image]
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum također uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 28), za koju <μH> pri 100oC je pribl. 0,25. Tipični polipeptid ove podvrste koji se može pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nije ograničen samo na njega, je:
[image]
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum također uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 29), za koju <μH> pri 100oC je pribl. 0,28. Tipični polipeptid ove podvrste koji se može pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nije ograničen samo na njega, je:
[image]
U drugom izvedbenom obliku ovaj izum također uključuje sintezu onih polipeptida formule (I) u kojoj Xaa22-31 je (SEQ ID NO: 30), za koju <μH> pri 100oC je pribl. 0,29. Tipični polipeptid ove podvrste koji se može pripraviti ovdje obznanjenim postupcima uključuje, ali nije ograničen samo na njega, je:
[image]
Također, u drugom izvedbenom obliku ovaj izum uključuje i sintezu onih polipeptidnih analoga fiziološki aktivnih homologa bPTH(1-34), prikazanih formulom (II):
Xaa1 Val Ser Glu Ile Gln Xaa7 Xaa8 His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Agr Xaa21 Xaa22-31 His Asn Xaa34 završetak
u kojoj
Xaa1 je Ser ili Ala;
Xaa7 je Leu ili Phe;
Xaa8 je Met ili Nle;
Xaa16 je Asn ili Ser;
Xaa18 je Leu, Met ili Nle;
Xaa19 je Glu ili Arg;
Xaa21 je Val ili Arg;
Xaa22-31 je dabran između (SEQ ID NO: 26, 27, 28, 29 i 30);
Xaa34 je Phe ili Tyr;
završetak je OH ili NR2, pri čemu svaki R predstavlja H ili (C1-C4)alkil;
i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
Tipični polipeptidi koji se mogu sintetizirati postupkom prema izumu uključuju, ali se ne ograničavaju na njih, slijedeće:
[image]
[image]
Prema ovom obliku izvedbe izuma također je dat postupak za sintezu analoga PTH ili PTHrP koji imaju manje od 34 amino kiseline. To su spojevi opće formule:
[image]
Tipični polipeptidi koji se mogu sintetizirati postupkom prema izumu uključuju, ali se ne ograničavaju na njih, jesu:
[image]
Iskusan stručnjak će procijeniti da se mogu sintetizirati brojne permutacije polipeptidnih analoga koji imaju željene značajke ovih ovdje opisanih, pod uvjetom da je aminokiselinska sekvenca, koja ima prosječni hidrofobni moment po ostatku pri 100o±20o veći od 0,20, umetnuta na položaje (22-31).
Polipeptidni fragmenti ovog izuma mogu se sintetizirati metodama kao što su one koje su prikazali G. Barany, R.B. Merrifield u The Peptides, E. Gross i J. Meienhofer eds., Academic Press, New York (1979), Vol. 2, str. 1-284; J.M. Stewart i J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. izd., Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois (1984) i J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2, Academic Pres, New York, (1973), za sintezu u krutoj fazi i E. Schroder i K. Lubke, The Peptides, Vol. 1, Academic Pres, New York, (1965) za sintezu u otopini. Te metode općenito uključuju sekvencno dodavanje zaštićenih amino kiselina rastućem peptidnom lancu. Naravno, amino ili karboksilna skupina prve amino kiseline i bilo koje reaktivne skupine bočnog lanca su zsštićene. Ta zaštićena amino kiselina se zatim povezuje na inertnu krutu podlogu ili se upotrebljava u otopini, a slijedeća amino kiselina u sekvenci, također prikladno zaštićena, se dodaje pod uvjetima koji se mogu primijeniti za stvaranje amidne veze. Nakon svega, željene amino kiseline se povezuju u pravilnu sekvencu, a zaštitne skupine i kruta podloga se odstranjuju, čime se dobije sirov polipeptid. Da se dobije krajnji proizvod, polipeptid se odsoljuje i čisti, ponajprije kromatografski.
U provedbi ovog izuma fragmenti prekurzoskih peptida mogu se pripraviti postupkom u otopine ili postupkom u krutoj fazi, ili njihovom kombinacijom. Na primjer, neki se fragmenti mogu pripraviti u otopini i zatim kondenzirati sa C-terminalnim fragmentom vezanim na smolu, ili se svaki od fragmenata može pripraviti metodom u krutoj fazi, odcijepiti od smole i kondenzirati u otopini, ili se može primijeniti kombinirani postupak sinteze u otopini i sinteze u krutoj fazi.
Prednosna metoda pripravljanja analoga PTH i PTHrP ovog izuma, koji imaju manje od 40 amino kiselina, uključuje sintezu peptida kondenzacijom fragmenata u krutoj fazi. Po toj metodi kranji proizvod se dobije kondenzacijom nekoliko peptidnih prekurzorskih fragmenata. Ovisno o tome čemu će stručnjak dati prednost, može se primijeniti bilo koja kombinacija fragmenata. Na primjer, proizvod koji sadrži 34 amino kiseline može se proizvesti od dva fragmenta peptidnog prekurzora koji imaju po 17 amino kiselina, tri peptidna prekurzorska fragmenta različitih duljina, četiri prekurzorska fragmenta, itd. Za ilustraciju vidi raspravu u P. LLoyd-Williams et al., “Convergent Solid Phase Peptide Synthesis”, u Tetrahedron, 49, 11065-11133, (1993).
Općenito, α-amino (Nα) funkcionalne skupine i svaki reaktivni bočni lanac zaštićeni su s kiselo ili bazičo osjetljivim skupinama.
Zaštitna skupina mora biti postojana pod uvjetima stvaranja peptidne veze, a mora se moći lako odstraniti bez utjecaja na postojeći polipeptidni lanac. Prikladne α-amino zaštitne skupine uključuju, ali nisu ograničene samo na slijedeće: t-butoksikarbonil (Boc), benziloksikarbonil (Cbz), o-klorbenziloksikarbonil, bifenilizopropiloksikarbonil, t-amiloksikarbonil (Amoc), izoborniloksikarbonil, α,α-dimetil-3,5-dimetoksibenziloksi-karbonil, o-nitrofenilsulfonil, 2-cijano-t-butoksikarbonil, ponajprije 9-fluorenilmetoksikarbonil (Fmoc). Prikladne zaštitne skupine za bočni lanac uključuju, ali nisu ograničene na slijedeće: acetil, benzil (Bzl), benziloksimetil (Bom), t-butil, cikloheksil, o-brom benzil-oksikarbonil, t-butildimetilsilil, 2-klorbenzil (Cl-z), 2,6-diklorbenzil, 2,4-dinitrofenil, ciklopentil, izopropil, pivaloil, tetrahidropiran-2-il, tosil (Tos), trimetilsilil, metiltritil, mezitilen sulfonil (Mts), 4-metoksi-2,3,6-trimetil benzensulfonil (Mtr), 2,2,4,6,7-pentametildihidro-benzofuran-5-sulfonil (Pbf), 2,2,5,7,8-pentametilkroman-6-sulfonil (Pmc) i tritil (Trt).
Kod sinteze u krutoj fazi C-terminalna amino kiselina se najprije povezuje na prikladnu smolnu podlogu. Prikladne smolne podloge su oni materijali koji su inertni prema reagensima i reakcijskim uvjetima stupnjevite kondenzacije i reakcija deprotekcije, kao i oni koji su netopivi u upotrijebljenom mediju. Primjeri komercijalno dostupnih smola uključuju stiren/divinilbezenske smole modificirane s reaktivnim skupinama, jesu npr. klormetilirane ko-poli(stiren-divinilbenzen), hidroksimetilirane ko-poli-(stiren-divinilbenzen), i benzaldehidne, hidroksimetilirane fenil-acetamidometilne (PAM) smole. Za pripravljanje peptida s kiselim završetkom može se upotrijebiti Wangova smola. Prednosna smola je p-metilbenzenhidrilamino-ko-poli(stiren-divinilbenzenska) smola (MBHA).
U prednosnoj izvedbi svi fragmenti osim C-terminalnog fragmenta proizvedeni su na kiselo osjetljivoj smoli, kao što je Sasrin (2-metoksi-4-alkoksibenzilalkohol) ili 4-hidroksimetil-3-metoksifenoksimaslačna kiselina 4-metil-benzhidrilamin (HMPB-MBHA). HMPA-MBHA, HMPB-BHA i HMPA-BHA smole su također prikladne za peptidne koji završavaju s karboksi. C-terminalni fragment proizveden je upotrebom Knorrove komercijalne MBHA smole. Sieberove amidne smole, Rinkov linker-MBHA ili BHA smole i Ramageov linker-MBHA ili BHA smole, sve su prikladne za peptide koji završavaju amidom. Te su smole komercijalno dostupne s već povezanom prvom amino kiselinom ili se prva amino kiselina može povezati na linker. HMPB-MBHA i Knorrova komercijalna smola mogu se proizvesti kako je opisano u primjerima 1, 2 i 3 u nastavku iz MBHA smole. Uzastopno povezivanje preostalih zaštićenih amino kiselina može se provesti metodama koje su dobro poznate u struci. Svaka zaštićena amino kiselina uvodi se ponajprije u približno 1,5- do 2,5-strukom molarnom suvišku i povezivanje se provodi u inertnom, nevodenom, polarnom otapalu, kao što su N-metil pirolidon (NMP), diklormetan, dimetilformamid (DMF), dimetil sulfoksid (DMSO) ili u njihovim mješavinama, ponajprije pri sobnoj temperaturi. Tipična sredstva za povezivanje jesu N,N’-dicikloheksilkarbodiimid (DCC), N,N’-diizopropil-karbodiimid (DIC) ili drugi karbodiimidi, sami ili u prisutnosti 1-hidroksibenzotriazola (HOBt), O-acil ureea, benzotriazol-1-il-oksitris(pirolidino)fosfonijevog heksafluorfosfata (PyBop), N-hidroksisukcinimida, drugih N-hidroksiimida ili oksima. Alternativno se mogu upotrijebiti zaštićeni amino kiselinski aktivni esteri (npr. p-nitrofenil, pentafluorfenil i slično) ili simetrični anhidridi.
Postupno povezivanje Fmoc-zaštićenih amino kiselina vrši se upotrebom otopine sekundarnog amina kao što je piridin, za odstranjivanje Fmoc skupine. Peptidna smola se može ispitati što se tiče potpunog povezivanja Kaiserovim pokusom nakon svakog stupnja povezivanja.
Na kraju sinteze u krutoj fazi potpuno zastićen peptid se odstranjuje sa smole primjenom uvjeta koji ne izazivaju prijevremenu deprotekciju zaštitnih skupina na bočnom lancu. Peptidi se mogu odcijepiti saponifikacijom ili transesterifikacijom ili pod blagim režimom kisele deprotekcije, upotrebom, na primjer, 1%-tne trifluoroctene kiseline (TFA). Zaštićen peptid može se očistiti kromatografijom na silika gelu.
Otopinu se može odsoliti (npr. sa smolom za anionsku izmjenu BioRad Ag-3®) i peptid se može očistiti sekvencom stupnja kromatografije, primjenom bilo kojeg ili svih slijedećih vrsta kromatografije: hidrofobna apsorpcijska kromatografija na nederivatiziranom ko-poli(stiren-divinil-benzenu), npr. Amberlite® XAD; apsrocijska kromatografija na silika gelu; kromatografija s kationskom izmjenom na karboksimetilcelulozi; razdjelna kromatografija, npr. na Sephadexu® G-25; protustrujna razdioba; ili visokoučinska tekućinska kromatografija reverznih faza (HPLC), naročito kationska izmjena i HPLC reverznih faza na pakiranju faza u koloni povezanih na oktil- ili oktadecilsililsiliciju (ODS).
U jednoj izvedbi multi-fragmentne sinteze, srednji i N-terminalni fragmenti se izoliraju i uzastopno kondenziraju na C-terminalni fragment. Polipeptidni proizvod se deprotektira i ocjepljuje sa smole i zatim očisti. Faza čišćenja je općenito opsežan niz kromatografskih rastavljanja. Sekvencu čišćenja i izbor načina čiššćenja određuje se HPLC analiza. Tipična sekvenca čišćenja uključuje kationsku izmjenu, HPLC reverznih faza i kolonu za zgušnjavanje reverznih faza. Krajnja otopina se podvrgava liofilizaciji i proizvod, lijek, se pohranjuje u jantarne boce. Zaštićene amino kiseline su dobivene od Genzyme (Cambridge, Ma, SAD), od Propeptida (Princeton, NJ, SAD) ili Syntheteca (Albany, OR, SAD).
Primjeri
Polipeptid SEQ ID NO:7, peptid koji ima 34 amino kiseline,
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-NH2,
proizveden je primjenom postupka kondenzacije triju fragmenata. N-terminalni fragment sastoji se od amino kiselina 1 do 12, srednji fragment sadrži amino kiseline 12 do 23 i C-terminalni fragment sadrži amino kiseline 24 do 34. Svaki fragment je proizveden metodom u krutoj fazi na automatiziranom sintetizeru peptida Vega 296. Automatizirani način primijenjen je i za odcjepljivanje Nα-zaštitnih skupina i za ispiranje nakon povezivanja. Reagensi za povezivanje i otapala dodani su ručno u reakcijsku posudu u stupnju povezivanja. Srednji i N-terminalni fragmenti očišćeni su pomoću HPLC i zatim kondenzirani na C-terminalni fragment. Krajnji peptid je derotektiran, odcijepljen sa smole i očišćen.
Primjer 1
Pripravljanje N-terminalnog fragmenta
N-terminalni fragment koji sadrži amino kiseline 1 do 12, AVSEHQLLHDKG, pripravljen je na 250 mmolnoj ljestvici na kiselo osjetljivoj smoli, 4-hidroksimetil-3-metoksi-fenoksi-maslačna kiselina 4-metilbenzenhidrilaminu (HMPB-MBHA). Ta smola pripravljena je od MBHA smole (Novabiochem) kako slijedi:
[image]
Nakon posljednjeg ispiranja u DMF/CH2Cl2, povezivanje prve amino kiseline (12Gly) izvršeno je upotrebom Fmoc-GlyOH (1,5-2,2 ekv.), DIC (1,5-2,2 ekv.) i DMAP (0,05 ekv.) tijekom pribl. 15 sati pri sobnoj temperaturi u DMF/CH2Cl2 (1/1), primjenom slijedećeg protokola:
[image]
Zatim je smola isprana ponavljanjem stupnjeva 3 do 8, i pokrivena primjenom slijedećeg protokola:
[image]
Preostale amino kiseline povezane su na smolu u ciklusima uzastopnog povezivanja u reverznoj sekvenci primjenom slijedećeg protokola amino kiselina:
aa11 Nα-Fmoc-Nε-t-butiloksikarbonil-L-lizin,
aa10 Nα-Fmoc-L-aspartinska kiselina-β-t-butil ester,
aa9 Nα-Fmoc-Nim-tritil-L-histidin,
aa8 Nα-Fmoc-L-leucin,
aa7 Nα-Fmoc-N-leucin,
aa6 Nα-Fmoc-Ng-tritil-L-glutamin,
aa5 Nα-Fmoc-Nim-tritil-L-histidin,
aa4 Nα-Fmoc-L-glutaminska kiselina-t-butil ester,
aa3 Nα-Fmoc-O-t-butil-L-serin,
aa2 Nα-Fmoc-L-valin,
aa1 Nα-t-butiloksikaronil-L-alanin.
Povezivanje je provedeno pri sobnoj temperaturi u NMP upotrebom 1,5 do 2,2 ekvivalenta amino kiseline (0,1 - 0,25 M), HOBt i DIC. Nakon 1,5 - 3 sata, dodan je DMSO i povezivanje je nastavljeno 1,5 - 3 sata. Svako povezivanje uključuje slijedeće stupnjeve:
[image]
Završetak povezivanja potvrđen je Kaiserovim testom; ako je prvi test pozitivan, ponavljaju se stupnjevi 8 do 14, po potrebi upotrebom PyBOP kao sredstva za povezivanje.
Za odcjepljivanje zaštićenog peptida sa smole suspenziju smole se miješa u 1%-tnom TFA u CH2Cl2 (4 mL/gm smole) pri 0oC ili pri sobnoj temperaturi do 15 minuta. Otopinu se filtrira i ekstrahira s 5%-tnim NaHCO3. Obrada smole s TFA ponavlja se tri puta. Organske faze se sjedine, isperu s vodom, 5%-tnim NaHSO4, i ponovno s vodom. Organske faze se osuše preko natrijevog sulfata i ispare. Ostatak se očisti pomoću HPLC kako slijedi:
kolona: Zorbax Pro-10/150 C8, 6” x 40 cm;
temperatura kolone: sobna;
brzina protoka: 2,2-3,0 ml/min·cm2,
valna duljina detektora: 250 nm,
mobilna faza: 0,1% HOAc, pH 6-6,2 s trietilaminom,
CH3CN.
Zaštićen peptid se stavi na kolonu u 65-70%-tni CH3CN. Gradijent omjera CH3CN u protoku povećava se do 85%. Frakcije se sjedine, zgusnu i proizvod se izolira ekstrakcijom sa CH2Cl2. Organska faza se ispere s razrijeđenom otopinom natrijevog bikarbonata ili s vodom, osuši preko natrijevog sulfata, filtrira i ispari.
Primjer 2
Pripravljanje srednjeg fragmenta
Srednji fragment, koji sadrži amino kiseline 13 do 23, KSIQDLRRREL, pripravljen je na ljestvici 230 mmola na kiselo osjetljivoj smoli, 4-hidroksimetil-3-metoksifenoksi-maslačna kiselina 4-metilbenzenhidrilaminu (HMPB-MBHA). Ta smola je pripravljena iz MBHA smole kako je opisano gore u primjeru 1. Prva amino kiselina (aa24) ugrađena je kako je prikazano upotrebom Fmoc-L-leucina. Preostale amino kiseline su povezane na smolu u uzastopnim ciklusima povezivanja primjenom postupka opisanog u primjeru 1:
aa23 Nα-Fmoc-L-glutaminska kiselina-t-butil ester,
aa22 Nα-Fmoc-Ng-4-metoksi-2,3,6,-trimetilbenzil-sulfonil-L-arginin,
aa21 Nα-Fmoc-Ng-4-metoksi-2,3,6,-trimetilbenzil-sulfonil-L-arginin,
aa20 Nα-Fmoc-Ng-4-metoksi-2,3,6,-trimetilbenzil-sulfonil-L-arginin,
aa19 Nα-Fmoc-L-leucin,
aa18 Nα-Fmoc-L-aspartiska kiselina-β-t-butil ester,
aa17 Nα-Fmoc-Ng-tritil-L-glutamin,
aa16 Nα-Fmoc-L-izoleucin,
aa15 Nα-Fmoc-O-t-butil-L-serin,
aa14 Nα-Fmoc-Nε-t-butiloksikarbonil-L-lizin.
Peptid je odcijepljen sa smole kao slobodna kiselina, organska faza je ekstrahirana, osušena i isparena kako je pokazano u primjeru 1. Ostatak se može istaložiti otapanjem u diklormetanu i dodatkom k t-butil metil eteru (t-BuOMe). Nakon filtracije, ispiranja s t-BuOMe i sušenja u vakuumu, proizvod se očisti pomoću HPLC na gore opisanoj Zorbax koloni, ispirući izokratno sa 75%-tnim CH3CN: valna duljina detektora bila je 267 nm.
Primjer 3
Pripravljanje C-terminalnog fragmenta
C-terminalni fragment, koji sadrži amino kiseline 24-34, LEKLLEKLHTA, pripravljen je na smoli MBHA, na ljstvici 130 mm, upotrebom Fmoc-2,4-dimetoksi-4’-(karboksimetil-oksi)-benzhidrilaminskog linkera kako slijedi:
[image]
Preostale amno kiseline su povezane na smolu u uzastopnim ciklusima povezivanja obrnutim redoslijedom upotrebom slijedećih zaštićenih amino kiselina:
aa34 Nα-Fmoc-L-alanin,
aa33 Nα-Fmoc-O-t-butil-L-treonin,
aa32 Nα-Fmoc-Nim-tritil-L-histidin,
aa31 Nα-Fmoc-L-leucin,
aa30 Nα-Fmoc-Nε-t-butiloksikarbonil-L-lizin,
aa29 Nα-Fmoc-L-glutaminska kiselina-γ-t-butil ester,
aa28 Nα-Fmoc-L-leucin,
aa27 Nα-Fmoc-L-leucin,
aa26 Nα-Fmoc-Nε-t-butiloksikarbonil-L-lizin,
aa25 Nα-Fmoc-L-glutaminska kiselina-γ-t-butil ester,
aa24 Nα-Fmoc-L-leucin.
Povezivanje je provedeno tijekom 1,5 do 3 sata pri sobnoj temperaturi u NMP upotrebom 1,5 do 2,2 ekvivalenta amino kiseline, HOBt i DIC, za amino kiseline 34 do 26. Tri ekvivalenta amino kiseline, HOBt i DIC upotrijebljeni su za amino kiseline 24 i 25. Nakon 1,5 - 3 sata dodan je DMSO i povezivanje je nastavljeno još 1,5 - 3 sata. Svako povezivanje uključivalo je slijedeće stupnjeve, uključiv odcjepljivanje Fmoc i ispiranje nakon odcjepljivanja:
[image]
Kaiserov test
[image]
Završetak povezivanja potvrđen je Kaiserovim testom nakon svakog stupnja povezivanja. Ako je test pozitivan (1,5% nepovezanog), stupnjevi 8 do 14 se ponavljaju; ako je test negativan, smola se acetilira.
Primjer 4
Kondezacija triju fragmenata
Tri su fragmenta pripravljena kako je gore opisano u primjerima 1, 2 i 3. Preostala Nα-Fmoc skupina C-terminalnog fragmenta odstranjena je primjenom stupnjeva 1 do 7 protokola posljednjeg opisanog primjera 3.
Srednji fragment B (172 g, 61,8 mmolova), HOBt (59,2 mmola), HOAt (3,7 mmola) i DIC (61,9 mmolova) doda se k C-terminalnom fragmentu smole (190 g, 41 mmol) u NMP (900 ml) i CH2Cl2. Smjesu se miješa 22 sata pri sobnoj temperaturi. Doda se DIPEA (7 ml) i miješanje se nastavi još jedan dan. Smolu se ispere kako je opisano u primjeru 1 (stupnjevi 9 do 13). Kaiserovo test pokazao je manje od 2% nepovezanog ostatka. Smola se acetilira (primjer 3, stupnjevi 14 do 20) i Fmoc skupine se odstrane (primjer 3, stupnjevi 1 do 7).
N-terminalni fragment A, kao Na sol, (153 g, 62,4 mmola), HOBt (59,2 mmola), HOAt (3,7 mmola), PyBOP (62,5 mmola) i DIPEA (125,15 mmolova) dodaju se k smoli u NMP (900 ml) i CH2Cl2. Smjesu se miješa 24 sata pri sobnoj temperaturi, filtrira i ispere (primjer 3, stupnjevi 9 do 13). Kaiserov test pokazao je manje od 1% nepovezanog ostatka. Smola se acetilira (primjer 3, stupnjevi 14 do 20), izvadi se iz reaktora i osuši u vakuumu.
Otopinu fenola (60,3 g) u tioanisolu (152,6 ml) i TFA (1 l) doda se k peptidnoj smoli (64 g) u pod dušikom. Smjesu se ohladi na -10oC i polako se doda TMSBr. Smjesu se miješa 0,5 sata pri -10oC u zatvorenom sistemu i 1 - 2 sata pri sobnoj temperaturi. Smjesu se zgusne na pola volumena pod vakuumom pri 50oC i smolu se filtrira i ispere dva puta s TFA (250 ml) i ledenom octenom kiselinom (250 ml). Filtrat se istaloži dodatkom mješavine 3:1 t-butil metil etera i heksana (6,5 l). Sirov peptid se odfiltrira, ispere s t-butil metil eterom, toluenom i t-butil metil eterom (2 x 250 ml svakog) i ponovno se istaloži tako da se otopi u metanolu (500 ml) i doda k t-butil metil eteru (7 l). Sirov talog se odfiltrira, ispere s t-butil metil sterom i osuši pod vakuumom. Dobije se 33 g peptida.
Na sličan način mogu se proizvesti slijedeći analozi PTHrP zamjenom odgovarajuće smole s peptidima koji imaju kiseli završetak:
[image]
[image]
[image]
[Met34, Ala35] (SEQ ID NO:25) i
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTMA-NH2 (SEQ ID NO:25), mogu se pripraviti i očistiti sukladno gornjem postupku. Ovaj polipeptid se može pretvoriti u homoserin lakton kako slijedi. Očišćen peptid otopi se u 44%-tnoj mravljoj kiselini. Tu otopinu pomiješa se s prethodno pripravljenom otopinom cijanogenog bromida (700 mg) i fenola (1,6 mg) u 44%-tnoj mravljoj kiselini pri 0oC. Otopinu se miješa 2 sata pri 0oC i 2 sata pri sobnoj temperaturi. Stvaranje proizvoda može se pratiti pomoću HPLC (Vidac® C-18, 300 Å, 4,6 x 250 mm, protok od 1,2 ml/min, gradijent 25-45% acetonitrila u 0,1% TFA tijekom 10 minuta). Uzorak se zgusne i očisti preparativnom RP-HPLC (Vidac® C-18, gradijent 25-45% acetonitrila u 0,1% TFA). Dobije se (SEQ ID NO:9).
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX (X=hSerlac, SEQ ID NO:9)
Slično se u skladu s ovim postupkom može proizvesti (SEQ ID NO:79):
AVSEIQFX1HN KGKHLSSX1ER VEWLRKKLQD VHNX2 (SEQ ID NO:79)
(X2 = L-norleucin; X2 = homoserin lakton)
Za pripravljanje homoserin amida, analog hSerlaktona, spoj 4, se zgusne i pomiješa s 25 ml zasićenog NH3 u metanolu. Otopinu se miješa 2 sata pri 0oC i 16 sati pri sobnoj temperaturi. Reakciju se može se pratiti pomoću HPLC (Vidac® C-18, 300 Å, 4,6 x 250 mm, protok od 1,2 ml/min, gradijent 20-45% acetonitrila u 0,1% TFA). Otopinu se zgusne i očisti preparativnom RP-HPLC (Vidac® C-18, gradijent 25-45% acetonitrila u 0,1% TFA). Frakcije homoserin amidnog peptida se skupe i liofiliziraju. Dobije se (SEQ ID NO:8).
AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX-NH2 (X=hSer, SEQ ID NO:8)
Slično, spojevi 22, 23 i 28 mogu se proizvesti uskladno ovom postupku upotrebom metionina kao C-završetka.
AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (SEQ ID NO:36)
(X = homosern)
AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (SEQ ID NO:37)
(X = homosern)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRX-NH2 (SEQ ID NO:42)
(X = homosern)
Slično se mogu proizvesti homoserin alkilamidi iz homoserin laktona, tako da se on otopi u DMF-u koji sadrži suvišak odgovarajućeg alkilamina. Nakon miješanja nekoliko dana pri sobnoj temperaturi (reakciju se može pratiti pomoću analitičke HPLC) smjesu se ispari do suhog i peptid se očisti pomoću preparativne HPLC. Tipični homoserin alkilamidi su spojevi 55 i 56.
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH3 (SEQ ID NO:69)
(X = homoserin)
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX- NHCH2CH2C6H5
(X = homoserin)
Vodenu otopinu homoserin laktona pomiješa se analogno gornjem postupku s esterazom iz svinjske jetre (Sigma Chemical Company, St Louis, MO). Hidrolizu laktona u C-terminalni homoserin može se pratiti pomoću analitičke HPLC. Kad se ocijeni da je hidroliza gotova, materijal se očisti preparativnom HPLC kao gore.
AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH (SEQ ID NO:51)
(X = homoserin)
Kako je ovaj izum prikazan u primjerima, objavljivanjem sinteze triju fragmenata polipeptida od 34 amino kiseline, on se općenito može primijeniti na sintezu drugih analoga PTH i PTHrP različitih duljina od različitih fragmenata. Poželjni fragmenti C-završetka su općenito glutaminska kiselina, glicin, leucin i prolin. U prikazanim primjerima povezivanjem leucin-leucina između fragmenata 2 i 3 osiguravaju se neočekivano visoka iskorištenja. Slično tome, povezivanje leucin-leucina može se iskoristiti kod pripravljanja polipeptida SEQ ID NO:7 od fragmenata 1-7, 8-23, 24-27 i 28-34. U drugoj izvedbi ako su amino kiseline 24-27 (LEKL) iste kao 28-31, fragment od četiri amino kiseline može se proizvesti ili iz otopine ili postupkom u krutoj fazi, i kondenzirati, čime se dobije fragment 24-31. Alternativno, fragment 24-31 od četiri amino kiseline (LLEK) može se proizvesti samo-kondenzacijom čime se dobije fragment 23-30. Lakše čišćenje postiže se upotrebom manjih fragmenata koji odmah kristaliziraju; međutim, povećanje broja fragmenata zahtjeva više stupnjeva kondenzacije fragmenata.
Claims (20)
1. Postupak za sintezu sintetičkog polipeptidnog analoga paratiroidnog hormona (PTH) ili paratiroidnom hormonu srodnog peptida (PTHrP), ili njegove soli, u kojem aminokiselinski ostaci (22-31), odabrani između (SEQ IN NO: 85, 86, 26, 27, 28, 29 i 30), oblikuju amfipatsku α-uvojnicu, naznačen time, da uključuje:
a) neovisnu sintezu prekurzora peptidnih fragmenata polipeptida, postupkom u otopini ili na krutoj fazi;
b) međusobnu kondenzaciju spomenutih fragmenata, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod; i
c) uklanjanje aminokiselinskih zaštitnih skupina.
2. Postupak prema zahtjevu 1, naznačen time, da uključuje:
a) neovisnu sintezu prekurzora peptidnih fragmenata polipeptida na smolnim podlogama;
b) odcjepljivanje fragmenata polipeptida s njihovih dotičnih smolnih podloga;
c) uzastopno kodenziranje spomenutih fragmenata, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod; i
d) uklanjanje svih aminokiselinskih zaštitnih skupina.
3. Postupak prema zahtjevu 1 ili 2, naznačen time, da uključuje:
a) neovisnu sintezu prekurzora peptidnih fragmenata željenog polipeptida na smolnoj podlozi;
b) odcjepljivanje svih peptidnih fragmenata s njihovih dotičnih smolnih podloga osim određenog krajnjeg C-terminalnog prekurzora željenog polipeptida;
c) uzastopnu kondenzaciju spomenutih odcijepljenih fragmenata prekurzorskog peptida sa C-termanalnim peptidnim fragmentom povezanim sa smolom, čime se oblikuje željeni polipeptidni proizvod;
d) uklanjanje zaštitnih skupina bočnog lanca; i
e) odcjepljivanje polipeptidnog proizvoda od smolne podloge.
4. Postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 3, naznačen time, da je polipeptidni proizvod pripravljen od tri prekurzorska peptidna fragmenta: N-terminalnog, srednjeg i C-terminalnog fragmenta.
5. Postupak prema zahtjevu 4, naznačen time, da N-terminalni fragment ima C-terminalni glicin, srednji fragment ima C-terminalni leucin, a C-terminalni fragment ima N-terminalni leucin.
6. Postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 5, naznačen time, da krajnji polipeptidni proizvod uključuje PTH ili PTHrp analog formule:
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser Ile Gln Asp Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22-31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 završetak
u kojoj
Xaa1 je odsutan ili je Ala;
Xaa2 je odsutan ili je Val;
Xaa3 je odsutan ili je Ser;
Xaa4 je odsutan ili je Glu ili Glu(OCH3);
Xaa5 je odsutan ili je His ili Ala;
Xaa6 je odsutan ili je Gln;
Xaa7 je odsutan ili je Leu;
Xaa11 je Lys, Arg ili Leu;
Xaa13 je Lys, Arg, Tyr, Cys, Leu,
Cys(CH2CONH(CH2)2NH(biotinil), Lys(7-dimetilamino-2-okso-2H-1-benksopiran-4-acetil), ili Lys(dihidrocinamoil);
Xaa20 je Arg ili Leu;
Xaa19 i Xaa21 su neovisno Lys, Ala ili Arg;
Xaa22-31 je odabran između (SEQ ID NO: 85, 86, 26, 27, 28, 29 ili 30);
Xaa32 je His, Pro ili Lys;
Xaa33 je odsutan ili je Pro, Thr, Glu ili Ala;
Xaa34 je odsutan ili je Pro, Arg, Met, Ala, hSer,
hSer lakton, Tyr ili Leu;
Xaa35 je odsutan ili je Pro, Glu, Ser, Ala ili Gly;
Xaa36 je odsutan ili je Ala, Arg ili Ile;
Xaa37 je odsutan ili je Arg, Trp, ili
3-(2-naftil)-L-alanin;
Xaa38 je odsutan ili je Ala ili hSer ili
Xaa38-42 je Thr Arg Ser Ala Trp;
a završetak je OR ili NR2, pri čemu svaki R neovisno predstavlja vodik, (C1-C4)alkil ili fenil(C1-C4)alkil;
i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
7. Postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 5, naznačen time, da polipeptidni analog PTH ili PTHrP ima formulu:
Xaa1 Val Ser Glu Ile Gln Xaa7 Xaa8 His Asn Xaa11 Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Agr Xaa21 Xaa22-31 His Asn Xaa34 završetak
u kojoj
Xaa1 je Ser ili Ala;
Xaa7 je Leu ili Phe;
Xaa8 je Leu, Met ili Nle;
Xaa11 je Leu ili Lys;
Xaa16 je Asn ili Ser;
Xaa18 je Leu, Met ili Nle;
Xaa19 je Glu, Thr ili Arg;
Xaa21 je Val, Ser ili Arg;
Xaa22-31 je dabran između (SEQ ID NO: 26, 27, 28, 29 ili 30);
Xaa34 je Phe, hSer ili Tyr;
završetak je OR ili NR2, pri čemu R je H ili (C1-C4)alkil;
i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
8. Postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 5, naznačen time, da je PTH ili PTHrP analog odabran iz skupine koju čine
[image]
[image]
[image]
[image]
9. Postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 5, naznačen time, da PTH ili PTHrP analog je polipeptid iz SEQ ID NO:7,
[image]
10. Postupak prema zahtjevu 9, naznačen time, da prvi fragment uključuje AVSEHQLLHDKG, drugi fragment uključuje KSIQDLRRREL, a treći fragment uključuje LEKLLEKLHTA.
11. Postupak prema zahtjevu 10, naznačen time, da je treći fragment dobiven kodenzacijom LEKL, LEKL i HTA.
12. Sintetički polipeptid, naznačen time, da ga čini sekvenca AVSEHQLLHDKG.
13. Sintetički polipeptid, naznačen time, da ga čini sekvenca KSIQDLRRREL.
14. Sintetički polipeptid, naznačen time, da ga čini sekvenca LEKLLEKLHTA.
15. Postupak prema zahtjevu 9, naznačen time, da prvi fragment uključuje AVSEHQLLHDKG, drugi fragment uključuje KSIQDLRRRE, a treći fragment uključuje LLEKLLEKLHTA.
16. Postupak prema zahtjevu 15, naznačen time, da je treći fragment dobiven kodenzacijom LLEK, LLEK i LHTA.
17. Sintetički polipeptid, naznačen time, da ima formulu KSIQDLRRREL.
18. Sintetički polipeptid, naznačen time, da ima formulu LLEKLLEKLHTA.
19. Izum naznačen time, da je u skladu s gornjim opisom.
20. Postupak za pripravljanje farmaceutskog sastava, naznačen time, da se za pripravljanje PTH ili PTHrP analoga provodi postupak prema bilo kojem zahtjevu od 1 do 11 i 15 i 16 i dobiveni PTH ili PTHrP analog miješa se s jednim ili više farmaceutski prihvatljivih dodataka.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2332296P | 1996-07-30 | 1996-07-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP970416A2 true HRP970416A2 (en) | 1998-08-31 |
Family
ID=21814418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR60/023,322A HRP970416A2 (en) | 1996-07-30 | 1997-07-25 | Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6849710B1 (hr) |
| EP (1) | EP0822200B1 (hr) |
| JP (1) | JP4229992B2 (hr) |
| KR (1) | KR100518982B1 (hr) |
| CN (1) | CN1293096C (hr) |
| AR (2) | AR008094A1 (hr) |
| AT (1) | ATE277080T1 (hr) |
| AU (1) | AU731160B2 (hr) |
| BR (1) | BR9704138A (hr) |
| CA (1) | CA2206008C (hr) |
| CO (1) | CO4650046A1 (hr) |
| CZ (1) | CZ239697A3 (hr) |
| DE (1) | DE69730787T2 (hr) |
| DK (1) | DK0822200T3 (hr) |
| ES (1) | ES2227639T3 (hr) |
| HR (1) | HRP970416A2 (hr) |
| HU (1) | HUP9701277A3 (hr) |
| IL (1) | IL121391A0 (hr) |
| MA (1) | MA24353A1 (hr) |
| MX (1) | MX9705719A (hr) |
| NO (1) | NO973482L (hr) |
| NZ (1) | NZ328411A (hr) |
| PE (1) | PE91998A1 (hr) |
| PL (1) | PL321391A1 (hr) |
| SG (1) | SG67408A1 (hr) |
| TR (1) | TR199700714A2 (hr) |
| TW (1) | TW505654B (hr) |
| UY (1) | UY24651A1 (hr) |
| YU (1) | YU32197A (hr) |
| ZA (1) | ZA976555B (hr) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003207512B2 (en) | 2002-01-10 | 2008-06-12 | Osteotrophin Llc | Treatment of bone disorders with skeletal anabolic drugs |
| US7378495B2 (en) * | 2002-10-21 | 2008-05-27 | Pevion Biotech, Ltd. | PTH-rP related peptide cancer therapeutics |
| CN101355959B (zh) * | 2005-11-10 | 2013-02-27 | 密歇根理工大学管理委员会 | 黑熊甲状旁腺素和使用黑熊甲状旁腺素的方法 |
| ATE461208T1 (de) * | 2006-01-17 | 2010-04-15 | Organon Nv | Selektive enzymatische hydrolyse von c-terminalen tert-butyl-peptidestern |
| KR101512377B1 (ko) | 2006-10-03 | 2015-04-28 | 라디우스 헬쓰, 인코포레이티드 | 골 아나볼릭 단백질을 위한 약물 전달 방법 |
| USRE49444E1 (en) | 2006-10-03 | 2023-03-07 | Radius Health, Inc. | Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog |
| US7803770B2 (en) | 2006-10-03 | 2010-09-28 | Radius Health, Inc. | Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog |
| EP2411038B1 (en) | 2009-03-27 | 2016-12-28 | Van Andel Research Institute | Parathyroid hormone peptides and parathyroid hormone-related protein peptides and methods of use |
| EP2509996A1 (en) | 2009-12-07 | 2012-10-17 | Michigan Technological University | Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone |
| CN102731643A (zh) * | 2012-06-26 | 2012-10-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
| CN102993293B (zh) * | 2012-12-05 | 2014-05-07 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 |
| CN105189465B (zh) | 2013-03-21 | 2019-02-26 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 合成含有乙内酰脲的肽产物 |
| WO2014147129A1 (en) | 2013-03-21 | 2014-09-25 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of cyclic imide containing peptide products |
| FI3834824T3 (fi) | 2014-03-28 | 2025-12-05 | Univ Duke | Estrogeenireseptoripositiivisen rintasyövän hoito selektiivisellä estrogeenireseptorin modulaattorilla |
| CN104530198B (zh) * | 2014-12-09 | 2017-09-15 | 兰州大学 | 一种片段缩合制备醋酸去氨加压素的方法 |
| JP7019422B2 (ja) | 2015-04-29 | 2022-02-15 | ラジウス ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド | 癌を治療するための方法 |
| KR102707399B1 (ko) | 2017-01-05 | 2024-09-13 | 래디어스 파마슈티컬스, 인코포레이티드 | Rad1901-2hcl의 다형 형태 |
| US10996208B2 (en) | 2017-04-28 | 2021-05-04 | Radius Health, Inc. | Abaloparatide formulations and methods of testing, storing, modifying, and using same |
| EP3765488A1 (en) * | 2018-03-12 | 2021-01-20 | Fresenius Kabi iPSUM S.r.l. | Process for the manufacture of pthrp analogue |
| IL279853B2 (en) | 2018-07-04 | 2025-01-01 | Radius Pharmaceuticals Inc | Polymorphic forms of RAD 1901-2HCL |
| CN111057139B (zh) * | 2018-10-17 | 2023-12-22 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN113348163B (zh) | 2019-02-12 | 2024-10-08 | 雷迪厄斯制药公司 | 方法和化合物 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3886132A (en) * | 1972-12-21 | 1975-05-27 | Us Health | Human parathyroid hormone |
| FR2550204B1 (fr) * | 1983-08-05 | 1987-11-13 | Toyo Jozo Kk | Derives peptidiques de (nle8,nle1b, tyr34)-h-pth |
| CA2087190A1 (en) * | 1990-07-13 | 1992-01-14 | Fred E. Cohen | Parathyroid hormone analogues modified at positions |
| GB9020544D0 (en) * | 1990-09-20 | 1990-10-31 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US5589452A (en) * | 1992-07-14 | 1996-12-31 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
| WO1995002610A1 (en) * | 1993-07-13 | 1995-01-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis |
| CO4410206A1 (es) * | 1994-07-28 | 1997-01-09 | Sandoz Ag | DERIVADOS DE PTH o PTHrP, SU PREPARACION Y COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE LAS COMPRENDEN |
-
1997
- 1997-07-10 TW TW086109753A patent/TW505654B/zh active
- 1997-07-18 CA CA002206008A patent/CA2206008C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-21 PE PE1997000645A patent/PE91998A1/es not_active Application Discontinuation
- 1997-07-23 DE DE69730787T patent/DE69730787T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-23 DK DK97112595T patent/DK0822200T3/da active
- 1997-07-23 ZA ZA9706555A patent/ZA976555B/xx unknown
- 1997-07-23 SG SG1997002618A patent/SG67408A1/en unknown
- 1997-07-23 EP EP97112595A patent/EP0822200B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-23 ES ES97112595T patent/ES2227639T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-23 AT AT97112595T patent/ATE277080T1/de active
- 1997-07-23 HU HU9701277A patent/HUP9701277A3/hu unknown
- 1997-07-24 NZ NZ328411A patent/NZ328411A/xx unknown
- 1997-07-24 IL IL12139197A patent/IL121391A0/xx unknown
- 1997-07-24 JP JP19807297A patent/JP4229992B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 HR HR60/023,322A patent/HRP970416A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1997-07-25 YU YU32197A patent/YU32197A/sh unknown
- 1997-07-28 CO CO97042932A patent/CO4650046A1/es unknown
- 1997-07-28 CZ CZ972396A patent/CZ239697A3/cs unknown
- 1997-07-28 AR ARP970103413A patent/AR008094A1/es not_active Application Discontinuation
- 1997-07-29 KR KR1019970035861A patent/KR100518982B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-29 PL PL97321391A patent/PL321391A1/xx unknown
- 1997-07-29 AU AU32362/97A patent/AU731160B2/en not_active Ceased
- 1997-07-29 NO NO973482A patent/NO973482L/no not_active Application Discontinuation
- 1997-07-29 UY UY24651A patent/UY24651A1/es not_active Application Discontinuation
- 1997-07-29 MA MA24742A patent/MA24353A1/fr unknown
- 1997-07-29 CN CNB971154686A patent/CN1293096C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-29 MX MX9705719A patent/MX9705719A/es active IP Right Grant
- 1997-07-30 TR TR97/00714A patent/TR199700714A2/xx unknown
- 1997-07-30 US US08/903,124 patent/US6849710B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-30 BR BR9704138A patent/BR9704138A/pt active Search and Examination
-
1999
- 1999-02-16 AR ARP990100625A patent/AR016981A2/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HRP970416A2 (en) | Method for the synthesis of analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide | |
| US6472505B1 (en) | Peptide parathyroid hormone analogs | |
| AU723694B2 (en) | Exendin analogues, processes for their preparation and medicaments containing them | |
| US5229489A (en) | Parathyroid hormone antagonists | |
| JPH0532696A (ja) | 副甲状腺ホルモン誘導体 | |
| CN102171244A (zh) | 糖依赖性胰岛素释放肽的类似物 | |
| JP2001500365A (ja) | Ｐ５３とｍｄｍ２の間の相互作用の阻害剤 | |
| JP3135122B2 (ja) | ｈＰＴＨフラグメント（１―３７）とその誘導体 | |
| JP5744844B2 (ja) | 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）受容体アゴニストとしての短鎖ペプチド | |
| JPH0684400B2 (ja) | 新規な生長ホルモン遊離ペプチド | |
| EP0225020A2 (en) | Peptides comprising, in sequence, units selected from the amino-acid residues 17 to 24 of ViP | |
| JPS61210099A (ja) | 新規な成長ホルモン放出性ペプチド | |
| JP4104671B2 (ja) | 潜在型ＴＧＦ―βの活性化を促進するペプチドおよびＴＧＦ―β活性調節化合物のスクリーニング方法 | |
| JPWO1998051704A1 (ja) | 潜在型ＴＧＦ−βの活性化を促進するペプチドおよびＴＧＦ−β活性調節化合物のスクリーニング方法 | |
| HK1008533A (en) | Synthesis of analogs of pth and ptrp | |
| MXPA99010560A (en) | Detergent compositions | |
| JPH08505393A (ja) | 誘導体化カルシトニン | |
| JPWO1995008566A1 (ja) | 新規ペプチド | |
| HK1168863A (en) | Short-chain peptides as parathyroid hormone (pth) receptor agonist | |
| MXPA99010562A (en) | Peptide parathyroid hormone analogs | |
| JPH04217997A (ja) | ペプチド誘導体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| AIPI | Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application | ||
| ODBC | Application rejected |