ES2228066T3

ES2228066T3 - Derivados de urea para el tratamiento del dolor.

Info

Publication number: ES2228066T3
Application number: ES99931710T
Authority: ES
Inventors: Daniel MethylGene Inc. DELORME; Vlad Gregor; Edward Roberts; Eric Alanex Corp. Sun
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1998-06-22
Filing date: 1999-06-16
Publication date: 2005-04-01
Anticipated expiration: 2019-06-16
Also published as: WO1999067204A1; AU4814699A; US20050032789A1; DE69920224D1; EP1089965A1; EP1089965B1; ATE276234T1; DE69920224T2; US6777561B1; AR029302A1; PT1089965E; CA2335528A1; SE9802209D0

Abstract

Un compuesto de fórmula I en la que: m = n = 1 R1 se selecciona de (i) un alquilo C1-C6 lineal o ramificado; e (ii)hidrógeno; R2 se selecciona de (i) metilo; o (ii)fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y es como se define más abajo; R3 se selecciona de (i) -CH2-fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y es como se define más abajo; (ii)-CH2-ciclohexilo; R4 se selecciona de (i) hidrógeno; o (ii)metilo; R5 se selecciona de (i) hidrógeno; (ii)metilo; o (iii) o R4 y R5 forman juntos un anillo heterocíclico, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y se selecciona individual e independientemente de cualquiera de hidrógeno, CH3, -(CH2)p1CF3, halógeno, alcoxi C1-C3, hidroxi, -NO2, -OCF3, -CONRaRb, -COORa, - CORa, -(CH2)p2NRaRb, -(CH2)p3CH3, -(CH2)p5SO2Ra, (alquilcicloalquilo) C4-C8 en el que alquilo tiene C1-C2 y el cicloalquilo es cicloalquilo C3-C6; y en los que Ra y Rb se seleccionan individual e independientemente de hidrógeno, un alquilo C1-C6 ramificado o lineal, alquenilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, y en los que p1, p2, p3, p4, p5 y p6 es cada uno e independientemente 0, 1 ó 2, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

Derivados de urea para el tratamiento del dolor.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos, a un procedimiento para su preparación, a su uso y a composiciones farmacéuticas que comprenden los nuevos compuestos. Los nuevos compuestos son útiles en terapia, y en particular para el tratamiento del dolor.

Antecedentes y técnica anterior

Se ha identificado al receptor \delta por tener un papel en muchas funciones corporales tales como los sistemas circulatorio y del dolor. Por lo tanto, los ligandos para el receptor \delta pueden encontrar un uso potencial como analgésicos y/o como agentes antihipertensivos. Los ligandos para el receptor \delta también han demostrado que poseen actividades inmunomoduladoras.

La identificación de al menos tres poblaciones diferentes de receptores opioides (\mu, \delta y \kappa) ahora está bien reconocida, y las tres aparecen en los sistemas nerviosos central y periférico de muchas especies, incluyendo el hombre. Se ha observado analgesia en diversos modelos animales cuando se ha activado uno o más de estos receptores.

Con unas pocas excepciones, los ligandos \delta opioides selectivos, actualmente disponibles, tienen naturaleza peptídica y son inadecuados para la administración mediante vías sistémicas. Durante cierto tiempo han estado disponibles algunos antagonistas \delta no peptídicos (véase Takemori y Portoghese, 1992, Ann. Rev. Pharmacol. Tox., 32: 239-269, para un repaso). Estos compuestos, por ejemplo naltrindol, tienen una selectividad más bien mala (es decir, < 10 veces) por la unión al receptor \delta frente al receptor \mu, y no muestran actividad analgésica, un hecho que acentúa la necesidad del desarrollo de ligandos \delta no peptídicos altamente selectivos.

De este modo, el problema que subyace en la presente invención fue encontrar nuevos analgésicos que tuvieran efectos analgésicos mejorados, pero que también tuvieran un perfil mejorado de efectos secundarios con respecto a los agonistas \mu actuales, y una eficacia oral potencial.

Los analgésicos que se han identificado y que existen en la técnica anterior tienen muchas desventajas por cuanto sufren de una mala farmacocinética, y no son analgésicos cuando se administran mediante vías sistémicas. También, se ha documentado que los compuestos preferidos, descritos en la técnica anterior, muestran efectos convulsivos significativos cuando se administran sistémicamente.

El problema mencionado anteriormente se ha resuelto ahora desarrollando nuevos compuestos fenílicos 1,4-sustituidos, como se describirán a continuación.

Los nuevos compuestos según la presente invención se definen mediante la fórmula general I

1

en la que:

m = n = 1

R^{1} se selecciona de

(i): un alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado; e

(ii): hidrógeno;

R^{2} se selecciona de

(i): metilo; y

(ii): fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y es como se define más abajo;

R^{3} se selecciona de

(i): -CH_{2}-fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y es como se define más abajo; y

(ii): -CH_{2}-ciclohexilo;

R^{4} se selecciona de

(i): hidrógeno; y

(ii): metilo;

R^{5} se selecciona de

(i): hidrógeno;

(ii): metilo; y

(iii)

2

o

R^{4} y R^{5} forman juntos un anillo heterocíclico, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, e Y se selecciona individual e independientemente de cualquiera de hidrógeno, CH_{3}, -(CH_{2})_{p1}CF_{3}, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{3}, hidroxi,
-NO_{2}, -OCF_{3}, -CONR^{a}R^{b}, -COOR^{a}, -COR^{a}, -(CH_{2})_{p2}NR^{a}R^{b}, -(CH_{2})_{p3}CH_{3}, -(CH_{2})_{p5}SO_{2}R^{a}, (alquilcicloalquilo) C_{4}-C_{8} en el que alquilo tiene C_{1}-C_{2} y el cicloalquilo es cicloalquilo C_{3}-C_{6};

R^{a} y R^{b} se seleccionan individual e independientemente de hidrógeno, un alquilo C_{1}-C_{6} ramificado o lineal, alquenilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y en los que

p^{1}, p^{2}, p^{3}, p^{4}, p^{5} y p^{6} es cada uno e independientemente 0, 1 ó 2, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

Por "halógeno" se quiere decir cloro, fluoro, bromo y yodo.

Por "arilo" se quiere decir un anillo aromático que tiene 6 ó 10 átomos de carbono, tal como fenilo y naftilo.

Por "heteroarilo" se quiere decir un anillo aromático en el que uno o más de los 5-10 átomos en el anillo son elementos distintos del carbono, tales como N, S y O.

Por "isómeros" se quiere decir compuestos de la fórmula (I) que difieren en la posición de su grupo funcional y/u orientación. Por "orientación" se quiere decir estereoisómeros, diastereoisómeros, regioisómeros y enantiómeros.

Por "isoformas" se quiere decir compuestos de la fórmula (I) que difieren en la disposición física relativa de las moléculas en la red cristalina, de forma que las isoformas se refieren a diversos compuestos cristalinos y compuestos amorfos.

Por "profármaco" se quiere decir derivados farmacológicamente aceptables, por ejemplo ésteres y amidas, de forma que el producto resultante de la biotransformación del derivado es una forma activa del fármaco. Se incorpora aquí como referencia Goodman y Gilmans, The Pharmacological basis of Therapeutics, 8ª ed., MacGraw-Hill, Ed. Int. 1992, "Biotransformation of Drugs", p.13-15, que describe profármacos de una forma general.

Los nuevos compuestos de la presente invención son útiles en terapia, especialmente para el tratamiento de diversos estados de dolor, tales como dolor crónico, dolor agudo, dolor por cáncer, dolor provocado por artritis reumatoide, migraña, dolor visceral, etc. Sin embargo, esta lista no se debe interpretar como exhaustiva.

Los compuestos de la invención son útiles como inmunomoduladores, especialmente para enfermedades autoinmunitarias, tales como artritis, para injertos de piel, transplantes de órganos y necesidades quirúrgicas similares, para enfermedades de colágeno, diversas alergias, para uso como agentes antitumorales y agentes antivíricos.

Los compuestos de la invención son útiles en estados mórbidos en los que está presente o implicada la degeneración o disfunción de los receptores opioides. Esto puede implicar el uso de versiones marcadas isotópicamente de los compuestos de la invención en técnicas de diagnóstico y aplicaciones de formación de imágenes tales como tomografía de emisión positrónica (PET).

Los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de diarrea, depresión, incontinencia urinaria, diversas enfermedades mentales, tos, edema pulmonar, diversos trastornos gastrointestinales, lesión de la médula espinal y adicción a drogas, incluyendo el tratamiento del abuso de alcohol, de nicotina, de opioides y de otros fármacos, y para trastornos del sistema nervioso simpático, por ejemplo hipertensión.

Los compuestos de la invención son útiles como un agente analgésico para uso durante anestesia general y cuidado monitorizado de la anestesia. A menudo se usan combinaciones de agentes con diferentes propiedades para lograr un equilibrio de efectos necesarios para mantener el estado anestésico (por ejemplo amnesia, analgesia, relajación muscular y sedación). Dentro de esta combinación están los anestésicos inhalados, hipnóticos, ansiolíticos, bloqueantes neuromusculares y opioides.

Los compuestos de la presente invención en forma isotópicamente marcada son útiles como un agente de diagnóstico.

También está dentro del alcance de la invención el uso de cualquiera de los compuestos según la fórmula (I) anterior, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de las afecciones expuestas anteriormente.

Un aspecto adicional de la invención es un método para el tratamiento de un paciente que sufre cualquiera de las afecciones expuestas anteriormente, con lo que se administra una cantidad eficaz de un compuesto según la fórmula (I) anterior a un paciente que necesite de tal tratamiento.

El mejor modo de llevar a cabo la invención conocido en el presente es usar los compuestos según el Ejemplo 1 (compuesto 12) y Ejemplo 2 (compuesto 13). La numeración de los compuestos se realiza de acuerdo con la numeración en los Esquemas presentados a continuación.

Métodos de preparación

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar como se describe en el Esquema I más abajo.

Procedimiento general para la preparación de 1,4 ó 1,3-guanidinometil-aminometil-xilileno

Esquema 1

3

Como se muestra en el Esquema 1 anterior, los compuestos de la fórmula VI se pueden obtener a partir de bis-aminoxilileno comercialmente disponible (compuesto 1).

El compuesto 1 se convierte en el derivado mono-(diBoc)-guanidinometílico 2 usando un reactivo guanilante protegido, tal como 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(terc-butoxicarbonil)carboxamidina, en un disolvente orgánico tal como THF.

La amina secundaria de la fórmula III se puede generar usando una etapa de aminación reductora, en la que el compuesto 2 se hace reaccionar con un aldehído II en presencia de un ácido, tal como ácido acético, o de un ácido de Lewis, tal como ZnCl_{2}, en un disolvente prótico, tal como metanol o etanol, en presencia de un agente reductor tal como cianoborohidruro de sodio.

Los compuestos de la fórmula V se pueden obtener llevando a cabo la formación de una urea, usando el compuesto III con un cloroformiato de la fórmula IV, en un disolvente, tal como cloruro de metileno, y en presencia de una amina terciaria como base, tal como trietilamina.

Finalmente, el compuesto de la fórmula VI se puede obtener mediante ruptura del grupo protector Boc con un ácido, tal como ácido clorhídrico acuoso, o usando ácido orgánico, tal como ácido trifluoroacético, en un disolvente tal como cloruro de metileno.

La invención se describirá ahora con más detalle por medio de los siguientes Ejemplos, que no se deben interpretar como limitantes en ningún modo de la invención.

Etapa 1 (a)

Preparación de 1-(diBoc)-guanidinometil-4-aminometilbenceno (compuesto 2)

Parte A

La 1-H-pirazol-1-carboxamidina se preparó según Bematowicz et al., J. Org. Chem. 1992. 57, p. 2497-2502, y se protegió con dicarbonato de di-terc-butilo para dar 1-H-pirazol-1-N,N-bis(terc-butoxicarbonil)carboxamidina (compuesto 1) según Drake et al., Synth., 1994, p. 579-582.

Parte B

A una disolución de p-xililendiamina (compuesto 1) (30,8 g, 0,226 moles) en THF (300 ml) se añadió una disolución de 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(terc-butoxicarbonil)-carboxamidina (35,0 g, 0,113 moles) en THF (100 ml). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua al residuo, y la mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto (compuesto 2) se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, usando como eluyente una mezcla de cloruro de metileno:metanol, para dar 24,3 g (rendimiento 57%) de 1-(diBoc)-guanidinometil-4-aminometilbenceno (compuesto 2 en el que NH_{2} está en la posición 4).

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,5 (s ancho, 1H), 7,32 (s, 4H), 4,65 (d, 2H), 3,89 (s, 2H), 1,5 (s, 9H), 1,48 (s, 9H).

Etapa 1 (b)

Preparación de 1-(diBoc)-guanidinometil-3-aminometilbenceno

El 1-(diBoc)-guanidinometil-3-aminometilbenceno se preparó de manera similar a partir de m-xililendiamina y de 1-H-pirazol-1-N,N-bis(terc-butoxicarbonil)carboxamidina.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,52 (s ancho, 1H), 7,28-7,08 (m, 4H), 4,56 (d, 2H), 3,81 (s, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,39 (s, 9H).

Etapa 2

Aminación reductora: Preparación de 1-(diBoc)-guanidinometil-4-[N-(ciclohexilmetil)]benceno (compuesto 2 en el que NH_{2} está en la posición 3)

Se añadió cloruro de cinc (122,79 mg, 0,90 mmoles) y cianoborohidruro de sodio (67,93 mg, 1,08 mmoles) a una disolución metanólica (15 ml) de compuesto 2 (en el que el grupo amino está en la posición 4) (341 mg, 0,90 mmoles) y ciclohexanocarboxaldehído (111,17 mg, 0,99 mmoles). La mezcla se agitó toda la noche en nitrógeno, después la mezcla se diluyó con bicarbonato sódico acuoso saturado, y se extrajo con cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. Este producto bruto se purificó adicionalmente mediante cromatografía en gel de sílice, usando como disolvente CH_{2}Cl_{2}/MeOH (95:5), para dar 164 mg del producto deseado puro (compuesto 2 en el que NH_{2} está en la posición 3).

1H NMR (CDCl_{3}) \delta (ppm) 0,83 (2H, m, anillo de ciclohexano), 1,10 (3H, m, anillo de ciclohexano), 1,42 (9H, s, boc), 1,46 (9H, s, boc), 1,65 (6H, m, anillo de ciclohexano), 2,41 (2H, d, J = 6,8 Hz, C_{6}H_{11}-CH_{2}), 3,72 (2H, s, C_{6}H_{4}-CH_{2}), 4,54 (2H, d, J = 5,6 Hz, NNCNH-CH_{2}-C_{6}H_{4}), 7,18-7,25 (4H, m, Ar), 8,50 (1H, br, NH-CNN) ppm.

En la Tabla 1, a continuación, se proporcionan ejemplos específicos que ilustran la preparación de aminas secundarias, es decir, intermedios de la fórmula (III).

TABLA 1

4

TABLA 1 (continuación)

5

TABLA 1 (continuación)

6

TABLA 1 (continuación)

7

TABLA 1 (continuación)

8

\newpage

Esquema 2

9

Como alternativa, según se muestra en el Esquema 2, los compuestos de la fórmula (XI) se pueden obtener usando compuestos de la fórmula (VIII), en la que X = CN e Y = CHO, como material de partida.

Una aminación reductora, que usa una amina primaria con el compuesto (VIII), en presencia de un ácido tal como ácido acético, y en presencia de un agente reductor tal como cianoborohidruro de sodio, en un disolvente tal como metanol o etanol, proporciona un compuesto de la fórmula (IX).

Los compuestos de la fórmula (X) se pueden obtener llevando a cabo una reacción de urea usando compuestos de la fórmula (IX) con un cloroformiato de la fórmula (V), en un disolvente tal como cloruro de metileno y en presencia de una amina terciaria como base, tal como trietilamina.

Los compuestos de la fórmula (XI) se pueden preparar mediante una reducción de la función nitrilo en la fórmula (X), usando un agente de reducción tal como el complejo de borano con THF. en un disolvente tal como THF.

Los compuestos de la fórmula (XV) se pueden preparar haciendo reaccionar compuestos de la fórmula (VIII), en la que X = CH_{2}Br e Y = CN, con una amina, en un disolvente tal como acetonitrilo, proporcionando un compuesto de la fórmula (XII). Una reducción de la función nitrilo, usando un agente reductor tal como el complejo de borano con THF, en un disolvente tal como THF, proporciona la amina primaria de la fórmula (XIII).

Una etapa de aminación reductora de (XIII), como se describe anteriormente, proporciona un compuesto de la fórmula (XIV). Finalmente, la formación de urea de la amina secundaria (XIV), como se describe anteriormente, proporciona un compuesto de la fórmula (XV).

Como alternativa, los compuestos de la fórmula (XV) se pueden preparar usando un dialdehído monoprotegido, tal como un compuesto de la fórmula (VIII) en la que X = CH(OEt)_{2} e Y = CHO, y una aminación reductora, en presencia de un agente reductor, tal como cianoborohidruro de sodio, en un disolvente tal como metanol o etanol. La formación de urea, como se describe anteriormente, proporciona un compuesto de la fórmula (XVII). La hidrólisis de la función de acetal dietílico en el compuesto (XVII), usando un ácido tal como TFA, en un disolvente tal como cloruro de metileno, proporciona el aldehído correspondiente (XVIII).

Finalmente, una aminación reductora como se describe anteriormente proporciona compuestos de la fórmula (XV).

La invención se describirá ahora con más detalle mediante los siguientes Ejemplos, que no se deben interpretar como limitantes de la invención.

Ejemplo 1 Preparación de 1-N-(ciclohexilmetil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)-aminometil-4-guanidinometilbenceno (compuesto 12)

El compuesto 12 del presente Ejemplo se preparó mediante la siguiente ruta sintética descrita en el Esquema 2 a continuación.

Esquema 2

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10

11

A una disolución de compuesto 3 (164 mg, 0,35 mmoles) en cloruro de metileno (10 ml) se añadió cloruro de N-metil-N-fenilcarbamoílo (120,78 mg, 0,71 mmoles) y trietilamina (71,90 mg, 0,71 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, se lavó con una disolución acuosa saturada de NH_{4}Cl y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto bruto (compuesto 11). Este producto bruto se usó directamente sin purificación para la preparación del compuesto 12. Se disolvió en cloruro de metileno seco (3 ml), se añadieron 1,5 ml de TFA, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se evaporó el exceso de disolvente y de TFA, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa de fase inversa para dar el producto deseado puro (100 mg, 71% en 2 etapas).

1H NMR (CDCl_{3}) \delta (ppm) 0,70 (2H, m, anillo de ciclohexano), 1,10 (3H, m, anillo de ciclohexano), 1,41 (3H, m, anillo de ciclohexano), 1,53 (3H, m, anillo de ciclohexano), 2,72 (2H, d, J = 6,4 Hz, C_{6}H_{7}-CH_{2}), 3,00 (3H, s, N-CH_{3}), 4,13 (2H, s, C_{6}H_{4}-CH_{2}), 4,24 (2H, d, J = 4,8 Hz, NH-CH_{2}-Ph), 6,93-7,25 (9H, m, Ar), 8,13 (1H, br, NH-C=N).

MS observado (CI): 408,45 (MH+).

Los siguientes compuestos específicos se prepararon siguiendo la descripción sintética descrita anteriormente.

Ejemplos 2-7

Los siguientes compuestos se prepararon usando el mismo procedimiento como se describe en el Ejemplo 1, pero usando el intermedio y el cloruro de ácido indicado en la Tabla 2 a continuación.

TABLA 2

12

TABLA 2 (continuación)

13

TABLA 2 (continuación)

14

TABLA 2 (continuación)

15

TABLA 2 (continuación)

17

Ejemplo 10 Preparación de 1-N-[(2,4-diclorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-guanidinometilbenceno (compuesto 21)

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Siguiendo el mismo procedimiento como se describe en el Ejemplo 1, etapa 2, pero sustituyendo el ciclohexanocarboxaldehído por 2,4-diclorobenzaldehído, se obtuvo el compuesto del título 21.

1H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 8,2 (ancho, 1H), 7,5-7,1 (m, 12H), 4,5 (d, 2H), 4,2 (s, 4H), 3,1 (s, 3H).

MS(APCI): 469,95 (M+H).

Ejemplo 11 Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-aminometil-benceno (compuesto 25)

El compuesto 25 del presente Ejemplo se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 3 a continuación.

Esquema 3

19

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20

Etapa 1

Preparación de N-(4-clorobencil)-4-cianobencilamina (compuesto 22)

A una disolución metanólica (20 ml) de 4-clorobencilamina (1,02 g, 7,2 mmoles) se añadieron sucesivamente ZnCl_{2} (0,981 g, 7,2 mmoles), 4-cianobenzaldehído (1,007 g, 7,3 mmoles) y NaCNBH_{3} (0,452 g, 7,2 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (r.t.) durante 2 días. Se diluyó con bicarbonato sódico acuoso, y la mezcla de reacción se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron. El producto (compuesto 22) se purificó mediante cromatografía en gel de sílice: 1,43 g (77%).

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,45 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,10 (s, 4H), 3,68 (s, 2H), 3,58 (s, 2H).

Etapa 2

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-cianobenceno (compuesto 24)

Se añadieron cloruro de N-metil-N-fenilcarbamoílo (compuesto 23) (1,039 g, 6,12 mmoles) y trietilamina (0,853 ml, 6,12 mmoles) a una disolución de N-(4-clorobencil)-4-cianobencilamina (compuesto 22) (1,43 g, 5,57 mmoles) en dioxano (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a r.t. durante 1 día, después se diluyó con acetato de etilo y se lavó con HCl al 10%, con bicarbonato sódico saturado, con agua, con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el compuesto 24: 1,95 g (89%).

Etapa 3

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-aminometil-benceno (compuesto 25)

A una disolución en THF (6 ml) de 1-N-[(4-clorobencil)-N'N'-(metilfenil)carbamoil]-aminometil-4-cianobenceno (compuesto 24) (0,39 g, 1 mmoles) se añadió un complejo 1 M de BH_{3}.THF (2,2 ml). La mezcla se calentó a 90ºC toda la noche. Después se añadió HCl 2,55 M en metanol (3 ml), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto (compuesto 25) se purificó mediante TLC preparativa usando como eluyente metanol/cloruro de metileno/hidróxido amónico.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,20-6,84 (m, 13H), 4,00 (s, 4H), 3,70 (s, 2H), 3,05 (s, 3H), 2,05 (s ancho, 2H). MS: 394 (M+H).

Ejemplo 12 Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(N-pirrolidinometil)benceno (compuesto 32)

El compuesto 32 del Ejemplo 11 se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 4 a continuación.

Esquema 4

21

22

Etapa 1

Preparación de 4-ciano-1-N-pirrolinometilbenceno (compuesto 28)

Se disolvió bromuro de 4-cianobencilo (compuesto 26) (20,0 g, 0,102 moles) en acetonitrilo (100 ml), y se añadió a una disolución enfriada (0ºC) de pirrolidina (compuesto 27) (8,5 g, 0,12 moles) en acetonitrilo. La mezcla se agitó a RT (temperatura ambiente) durante 3 días. La mezcla de reacción se acidificó con HCl 4 N, y se lavó con acetato de etilo. La capa acuosa se basificó con hidróxido sódico al 20% y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se concentró para dar el producto (compuesto 28) (11,0 g, 58%) que se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,6 (d, 2H), 8,4 (d, 2H), 3,55 (s, 2H), 2,55 (t, 2H), 1,7 (t, 2H). MS: 187 (M+H).

Etapa 2

Preparación de 4-N-aminometil-1-N-pirrolinometilbenceno (compuesto 29)

Se disolvió 4-cianometil-1-N-pirrolinometilbenceno (compuesto 28) (11 g, 59 mmoles) en THF seco (20 ml). A esta disolución se añadió una disolución 1 M de complejo de borano/THF (180 ml). La mezcla se puso a reflujo toda la noche. La disolución se enfrió después hasta r.t., y se añadió gota a gota una disolución de HCl 3 N en metanol (120 ml). La mezcla se puso a reflujo nuevamente toda la noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, el producto (compuesto 29) cayó de la disolución como un precipitado blanco, y se recogió y se lavó con THF: 11,6 g.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 8,8 (ancho, 1H), 7,6 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 4,4 (s, 2H), 4,0 (s, 2H), 3,3 (t, 2H), 3,0 (t, 21H), 2,0 (t, 4H).

MS: 191 (M+H).

Etapa 3

Preparación de N-(4-clorobencil)-1-(1-N-pirrolidinometil)-bencilamina (compuesto 31)

El compuesto del título se obtuvo siguiendo el mismo procedimiento como se describe para el Ejemplo 10, etapa 1, pero sustituyendo 4-clorobencilamina por el compuesto 29, y sustituyendo 4-cianobenzaldehído por 4-clorobenzaldehído.

MS: 357 (M+H).

Etapa 4

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(1-N-pirrolidinometil)benceno (compuesto 32)

El compuesto del título se obtuvo siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 10, etapa 2, pero sustituyendo el compuesto 22 por el compuesto 31.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,55 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,2 (d, 2H), 7,0 (d, 2H), 6,95 (d, 2H), 4,3 (d, 4H), 4,1 (s, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,1 (t, 4H), 2,05 (t, 4H).

MS: 448 (M+H).

Ejemplo 13 Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(N,N-dimetil)aminometil-ben-ceno (compuesto 35)

El compuesto 35 del Ejemplo 12 se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 5 a continuación.

Esquema 5

23

Etapa 1

Preparación de 1-N-(4-clorobencil)-4-(N,N-dimetil)-aminometilbencilamina (compuesto 34)

Se cargó un matraz de fondo redondo con hidrocloruro de 1-N-aminometil-4-N,N-dimetilaminometilbenceno (compuesto 33) (2,36 g, 10 mmoles), 4-clorobenzaldehído (compuesto 30) (1,51 g, 11 mmoles, 97% de pureza), y metanol (40 ml). La mezcla se agitó a r.t. durante 20 minutos, después se añadió NaCNBH_{3} sólido, y la mezcla de reacción se agitó a r.t. toda la noche. Se diluyó con bicarbonato sódico acuoso, y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron, para dar 1,29 g de (compuesto 34) como un residuo oleoso.

Etapa 2

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(N,N-dimetil)aminometil-benceno (compuesto 35)

A una disolución de 1-N-(4-clorobencil)-4-(N,N-dimetil)aminometilbencilamina (compuesto 34) (0,562 g, 1,95 mmoles) en dioxano (8 ml) se añadió trietilamina (0,326 ml, 2,34 mmoles) y cloruro de N-metil-N-fenilcarbamoílo (compuesto 23) (0,395 g, 2,34 mmoles). La mezcla se agitó a r.t. toda la noche, después se diluyó con bicarbonato sódico acuoso y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta un aceite incoloro. El producto (compuesto 35) se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, usando como eluyente metanol/acetato de etilo/hidróxido amónico.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,40-6,95 (m, 13H), 4,20 (s, 4H), 3,42 (s, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,32 (s, 6H).

MS: 422 (M+H).

Ejemplo 14 Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(N-metil)aminometil-benceno (compuesto 40)

El compuesto 40 del Ejemplo 13 se preparó siguiendo el procedimiento descrito en el Esquema 6 a continuación.

Esquema 6

24

Etapa 1

Preparación de 1-acetal dietílico-4-N-(4-clorobencil)bencilamina (compuesto 37)

Se añadió NaCNBH_{3} sólido a una disolución de mono-(acetal dietílico) de tereftalaldehído (compuesto 36) (0,416 g, 2 mmoles) y 4-clorobencilamina (compuesto 21) (0,283 g, 2 mmoles) en metanol (5 ml, que contiene 1% de ácido acético glacial v/v). La mezcla de reacción se agitó a r.t. toda la noche. Se diluyó con bicarbonato sódico acuoso y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta un aceite (compuesto 37): 61 g (91%). MS: 334,02 (M+H).

Etapa 2

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-carboxaldehído (compuesto 39)

A una disolución de 1-acetal dietílico-4-N-(4-clorobencil)bencilamina (compuesto 37) (0,60 g, 1,8 mmoles) en dioxano (5 ml) se añadió trietilamina (0,279 ml, 2 mmoles) y cloruro de N-metil-N-fenilcarbamoílo (compuesto 23) (0,336 g, 1,98 mmoles). La mezcla se agitó a r.t. toda la noche, después se diluyó con bicarbonato sódico acuoso y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para dar el (compuesto 38): 0,69 g.

El acetal (compuesto 38) (0,67 g, 1,42 mmoles) se disolvió en ácido trifluoroacético al 50% en cloruro de metileno (5 ml), y se agitó a r.t. durante 3,5 h. La mezcla se concentró hasta un residuo oleoso que se redisolvió en CH_{2}Cl_{2} y se lavó con bicarbonato sódico, con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta un aceite, (compuesto 39): 0,504 g.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 9,80 (s, 1H), 7,72-6,68 (m, 13H), 4,10 (s, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,10 (s, 3H).

Etapa 3

Preparación de 1-N-[(4-clorobencil)-N-(N-metil-N-fenilcarbamoil)]-aminometil-4-(N-metil)aminometil-benceno (compuesto 40)

A una disolución metanólica (5 ml) de compuesto 39 (0,50 g, 1,28 mmoles) se añadió una disolución de metilamina 2 M en metanol (0,7 ml, 1,40 mmoles) y ácido acético glacial (0,05 ml). Después se añadió NaCNBH_{3} sólido (0,08 g, 1,28 mmoles), y la mezcla se agitó a r.t. toda la noche. Se diluyó con bicarbonato sódico acuoso, y se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. El producto (compuesto 40) se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, usando como eluyente una mezcla de metanol/cloruro de metileno/hidróxido amónico.

1H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,40-6,95 (m, 13H), 4,19 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 3,82 (s, 2H), 3,19 (s, 3H), 2,46 (s, 3H).

MS: 408,03 (M+H).

Composiciones Farmacéuticas

Los nuevos compuestos según la presente invención se pueden administrar oralmente, intramuscularmente, subcutáneamente, tópicamente, intranasalmente, intraperitonealmente, intratorácicamente, intravenosamente, epiduralmente, intratecalmente, intracerebroventricularmente y mediante inyección en las articulaciones.

Una vía preferida de administración es la oral, intravenosa o intramuscular.

La dosis dependerá de la vía de administración, de la gravedad de la enfermedad, de la edad y del peso del paciente, y de otros factores normalmente considerados por el médico cuando se determina el régimen individual y la cantidad de dosificación más apropiada para un paciente particular.

Para preparar las composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos de esta invención, los vehículos inertes, farmacéuticamente aceptables, pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, gránulos dispersables, cápsulas, sellos, y supositorios.

Un vehículo sólido puede ser una o más sustancias que también pueden actuar como diluyentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, o agentes disgregantes del comprimido; también puede ser un material encapsulante.

En polvos, el vehículo es un sólido finamente dividido que está en una mezcla con el componente activo finamente dividido. En comprimidos, el componente activo se mezcla en las proporciones adecuadas con el vehículo, que tiene las propiedades aglutinantes necesarias, y se compacta en la forma y tamaño deseados.

Para preparar composiciones en forma de supositorios, primeramente se funde una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos y manteca de cacao, y el ingrediente activo se dispersa en ella, por ejemplo, mediante agitación. La mezcla homogénea fundida se vierte entonces en moldes de tamaños convenientes, y se deja enfriar y solidificar.

Los vehículos adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, lactosa, azúcar, pectina, dextrina, almidón, goma de tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, y similar.

Las sales farmacéuticamente aceptables son acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, acetato cálcico, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, glucaptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, resorcinato de hexilo, hidrabamina, hidrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, bromuro de metilo, nitrato de metilo, sulfato de metilo, mucato, napsilato, nitrato, pamoato (embonato), pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tannato, tartrato, teoclato, trietyoduro, benzatina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina, procaína, aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc.

Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas son hidrocloruros, trifluoroacetatos y bitrartratos.

El término composición pretende incluir la formulación del componente activo con material encapsulante como vehículo que proporciona una cápsula en la que el componente activo (con o sin otros vehículos) está rodeado por un vehículo que de este modo está en asociación con el mismo. De forma similar, se incluyen sellos.

Como formas de dosificación sólidas, adecuadas para la administración oral, se pueden usar comprimidos, polvos, sellos y cápsulas.

Las composiciones en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo de preparaciones líquidas, adecuadas para la administración parenteral, se pueden mencionar disoluciones de agua estéril, o de agua con propilenglicol, de los compuestos activos. Las composiciones líquidas también se pueden formular en disolución en una disolución acuosa de polietilenglicol.

Las disoluciones acuosas para la administración oral se pueden preparar disolviendo el componente activo en agua, y añadiendo colorantes, agentes aromatizantes, estabilizantes, y agentes espesantes adecuados, según se desee. Las suspensiones acuosas para uso oral se pueden obtener dispersando en agua el componente activo, finamente dividido, junto con un material viscoso, tal como gomas naturales y sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y otros agentes de suspensión conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica.

Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas están en forma de dosificación unitaria. En tal forma, la composición se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de las preparaciones, por ejemplo, comprimidos envasados, cápsulas, y polvos en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una cápsula, sello, o comprimido propiamente, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estas formas envasadas.

Evaluación biológica A) Modelo in vitro Cultivo Celular

Las células 293S humanas, que expresan receptores \mu, \delta y \kappa humanos clonados y resistencia a neomicina, se hicieron crecer en suspensión a 37ºC y 5% de CO_{2} en matraces de agitador que contienen DMEM libre de calcio, 10% de FBS, 5% de BCS, 0,1% de Pluronic F-68, y 600 \mug/ml de geneticina.

Preparación de las Membranas

Las células se peletizaron y se resuspendieron en tampón de lisis (50 mM de Tris, pH 7,0, 2,5 mM de EDTA, con PMSF añadido justo antes del uso hasta 0,1 mM a partir de una disolución madre 0,1 M en etanol), se incubaron en hielo durante 15 minutos, y después se homogeneizaron con un Polytron durante 30 segundos. La suspensión se hizo girar a 1000 g (máx) durante 10 minutos a 4ºC. El sobrenadante se conservó en hielo, y los peletes se resuspendieron y se hicieron girar como antes. Los sobrenadantes procedentes de ambas centrifugaciones se combinaron y se hicieron girar a 46.000 g (máx) durante 30 minutos. Los peletes se resuspendieron en tampón frío de Tris (50 mM de Tris/Cl, pH 7,0), y se hicieron girar nuevamente. Los peletes finales se resuspendieron en tampón de membrana (50 mM de Tris, 0,32 M de sacarosa, pH 7,0). Se congelaron en hielo seco/etanol partes alícuotas (1 ml) en tubos de polipropileno, y se almacenaron a -70ºC hasta el uso. Las concentraciones de proteínas se determinaron mediante un ensayo de Lowry modificado con SDS.

Ensayos de unión

Las membranas se descongelaron a 37ºC, se enfriaron en hielo, se hicieron pasar 3 veces a través de una aguja de calibre 25, y se diluyeron en tampón de unión (50 mM de Tris, 3 mM de MgCl_{2}, 1 mg/ml de BSA (Sigma A-7888), pH 7,4, que se almacenó a 4ºC después de la filtración a través de un filtro de 0,22 m, y al que se añadió recientemente 5 \mug/ml de aprotinina, 10 \muM de bestatina, 10 \muM de diprotina A, y nada de DTT). Se añadieron alícuotas de 100 \mul (por \mug di proteína, véase Tabla 1) a tubos de polipropileno de 12 x 75 mm, enfriados con hielo, que contienen 100 \mul del radioligando apropiado (véase Tabla 1) y 100 \mul de compuesto de ensayo a diversas concentraciones. Se determinó la unión total (TB) y la unión no específica (NS), en ausencia y en presencia de 10 \muM de naloxona, respectivamente. Los tubos se hicieron girar en espiral y se incubaron a 25ºC durante 60-75 minutos, después de lo cual los contenidos se filtraron rápidamente a vacío y se lavaron con alrededor de 12 ml/tubo de tampón de lavado (50 mM de Tris, pH 7,0, 3 mM de MgCl_{2}), enfriado con hielo, a través de filtros GF/B (Whatman) previamente empapados durante al menos 2 h en 0,1% de polietilenimina. La radioactividad (dpm) retenida en los filtros se midió con un contador beta tras empapar los filtros durante al menos 12 h en miniviales que contienen 6-7 ml de fluido para recuento por centelleo. Si el ensayo se realiza en placas de pocillos profundos de 96 pocillos, la filtración se hace sobre unifiltros empapados con PEI de 96 pocillos, que se lavaron con 3 x 1 ml de tampón de lavado, y se secaron en un horno a 55ºC durante 2 h. Las placas de filtro se contaron en un TopCount (Packard) después de añadir 50 \mul de fluido MS-20 para recuento por centelleo/pocillo.

Análisis de los datos

La unión específica (SB) se calculó como TB-NS, y la SB en presencia de diversos compuestos de ensayo se expresó como porcentaje de SB del control. Los valores de IC_{50} y del coeficiente de Hill (n_{H}) para ligandos que desplazan un radioligando específicamente unido se calcularon a partir de gráficas logit o programas de ajuste de curvas tales como Ligand, GraphPad Prism, Sigma-Plot, o ReceptorFit. Los valores de K_{i} se calcularon a partir de la ecuación de Cheng-Prussoff. Los valores de la media \pm S.E.M. de IC_{50}, K_{i} y n_{H}, se dieron para ligandos ensayados en al menos tres curvas de desplazamiento.

Experimentos de saturación del receptor

Los valores K_{\delta} del radioligando se determinaron llevando a cabo los ensayos de unión sobre membranas celulares con los radioligandos apropiados a concentraciones que oscilan de 0,2 a 5 veces la K_{\delta} estimada (hasta 10 veces si son factibles cantidades de radioligando requerido). La unión específica de radioligando se expresó como pmoles/mg de proteína membránica. Los valores de K_{\delta} y B_{max} a partir de experimentos individuales se obtuvieron de ajustes no lineales de radioligando específicamente unido (B) frente a radioligando nM libre (F) de individuos según un modelo de un sitio.

B) Modelo biológico (modelo in vivo) Adyuvante completo de Freund (FCA), y mecanoalodinia inducida por pinzamiento del nervio ciático en ratas Animales

Se usaron ratas macho Sprague-Dawley (Charles River, St-Constant, Canadá) que pesan 175-200 g en el momento de la cirugía. Se alojaron en grupos de tres en habitaciones mantenidas termostáticamente a 20ºC con un ciclo de luz/oscuridad de 12:12 h, y con acceso libre a comida y agua. Después de la llegada, se dejó que los animales se aclimataran durante al menos 2 días antes de la cirugía. Los experimentos fueron aprobados por el Comité ético apropiado para estudios de animales.

Procedimiento experimental Adyuvante completo de Freund

Las ratas se anestesiaron primeramente en una cámara de Halotano, después de lo cual se les inyectó s.c. 10 \mul de FCA en la región dorsal de la pata izquierda, entre el segundo y tercer dígito externo. Entonces se dejó que los animales se recuperaran de la anestesia bajo observación en su jaula.

Pinzamiento del nervio ciático

Los animales se prepararon según el método descrito por Mosconi y Kruger (1996). Las ratas se anestesiaron con una mezcla de Ketamina/Xilacina i.p. (2 ml/kg), y se colocaron sobre su lado derecho y se realizó una incisión sobre y a lo largo del eje de la cara externa del fémur izquierdo. Los músculos del cuádriceps superior se separaron para revelar el nervio ciático sobre el que se colocó alrededor un brazalete de plástico (tubería de PE-60, 2 mm de largo). La herida se cerró entonces en dos capas con suturas de cera y vicrilo 3-0.

Determinación de mecanoalodinia usando el ensayo de Von Frey

El ensayo se realizó entre 08:00 y 16:00 h usando el método descrito por Chaplan et al. (1994). Las ratas se colocaron en jaulas de Plexiglas encima de un fondo de malla de alambre que dejó el acceso a la pata, y se dejó que las ratas se habituaran durante 10-15 minutos. El área analizada fue la pata trasera izquierda en la parte central de la planta, evitando las almohadillas de la pata, menos sensibles. La pata se tocó con una serie de 8 cerdas de Von Frey con rigidez logarítmicamente creciente (0,41, 0,69, 1,20, 2,04, 3,63, 5,50, 8,51 y 15,14 gramos; Stoelting, Ill, USA). La cerda de Von Frey se aplicó por debajo del suelo de malla, perpendicular a la superficie de la planta, con suficiente fuerza para provocar un ligero pandeo contra la pata, y se mantuvo durante aproximadamente 6-8 segundos. Se anotó una respuesta positiva si la pata se retiraba de forma brusca. La retracción inmediatamente después de la retirada de la cerda también se consideró como una respuesta positiva. El paseo se consideró una respuesta ambigua, y en tales casos se repitió el estímulo.

Protocolo de ensayo

Los animales se analizaron en el día 1 tras la operación para el grupo tratado con FCA, y en día 7 tras la operación para el grupo del pinzamiento del nervio ciático. Se determinó el umbral de retirada del 50% usando el método hacia arriba y hacia abajo de Dixon (1980). El ensayo se comenzó con la cerda de 2,04 g, en la mitad de la serie. Los estímulos siempre se presentaron de forma consecutiva, tanto de forma ascendente como descendente. En ausencia de respuesta de retirada de la pata a la cerda seleccionada inicialmente, se presentó un estímulo más fuerte; en el caso de la retirada de la pata, se escogió el estímulo siguiente más débil. El cálculo óptimo del umbral mediante este método requiere 6 respuestas en la proximidad inmediata del umbral del 50%, y el recuento de estas 6 respuestas comenzó cuando ocurrió el primer cambio en la respuesta, por ejemplo se cruzó el umbral por primera vez. En los casos en los que los umbrales cayeron fuera del intervalo de los estímulos, se asignaron respectivamente los valores de 15,14 (sensibilidad normal) o 0,41 (máximamente alodínico). El patrón resultante de respuestas positivas y negativas se tabuló usando la convención: X = sin retirada; O = retirada, y el umbral de retirada del 50% se interpoló usando la fórmula:

umbral g del 50% = 10 ^{(Xf \ + \ k\delta)}/10.000

en la que Xf = valor de la última cerda de Von Frey usada (unidades logarítmicas); k = valor tabular (de Chaplan et al. (1994)) para el patrón de respuestas positiva/negativa; y \delta = diferencia media entre estímulos (unidades logarítmicas). Aquí \delta = 0,224.

Los umbrales de Von Frey se convirtieron en porcentajes de efecto máximo posible (% MPE), según Chaplan et al. 1994. Para calcular el % MPE, se usó la siguiente ecuación:

% MPE = \frac{\text{Umbral tratado con fármaco (g) - umbral de alodinia (g)}}{\text{Umbral de control (g) - umbral de alodinia (g)}} x 100

Administración de sustancia de ensayo

Las ratas fueron inyectadas (subcutáneamente, intraperitonealmente, u oralmente) con una sustancia de ensayo antes del ensayo de Von Frey, dependiendo el tiempo entre la administración del compuesto de ensayo y el ensayo de Von Frey de la naturaleza del compuesto de ensayo.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I

25

en la que:

m = n = 1

R^{1} se selecciona de

(i): un alquilo C_{1}-C_{6} lineal o ramificado; e

(ii): hidrógeno;

R^{2} se selecciona de

(i): metilo; o

R^{3} se selecciona de

(i): -CH_{2}-fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y es como se define más abajo;

(ii): -CH_{2}-ciclohexilo;

R^{4} se selecciona de

(i): hidrógeno; o

(ii): metilo;

R^{5} se selecciona de

(i): hidrógeno;

(ii): metilo; o

(iii)

26

o

R^{4} y R^{5} forman juntos un anillo heterocíclico, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes Y, en los que Y se selecciona individual e independientemente de cualquiera de hidrógeno, CH_{3}, -(CH_{2})_{p1}CF_{3}, halógeno, alcoxi C_{1}-C_{3}, hidroxi, -NO_{2}, -OCF_{3}, -CONR^{a}R^{b}, -COOR^{a}, -COR^{a}, -(CH_{2})_{p2}NR^{a}R^{b}, -(CH_{2})_{p3}CH_{3}, -(CH_{2})_{p5}SO_{2}R^{a}, (alquilcicloalquilo) C_{4}-C_{8} en el que alquilo tiene C_{1}-C_{2} y el cicloalquilo es cicloalquilo C_{3}-C_{6}; y en los que

R^{a} y R^{b} se seleccionan individual e independientemente de hidrógeno, un alquilo C_{1}-C_{6} ramificado o lineal, alquenilo C_{1}-C_{6}, cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y en los que p^{1}, p^{2}, p^{3}, p^{4}, p^{5} y p^{6} es cada uno e independientemente 0, 1 ó 2, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, compuesto el cual es uno cualquiera seleccionado de

27

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28

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29

30

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31

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32

33

34

3. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en forma de sus sales de hidrocloruro, sulfato, tartrato o citrato.

4. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 para uso en terapia.

5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que la terapia es el tratamiento del dolor.

6. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que la terapia se dirige a trastornos digestivos.

7. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que la terapia se dirige a lesiones de la médula espinal.

8. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que la terapia se dirige a trastornos del sistema nervioso simpático.

9. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de dolor.

10. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de trastornos digestivos.

11. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de lesiones de la médula espinal.

12. Un compuesto según las reivindicaciones 1-8, caracterizado adicionalmente porque está marcado isotópicamente.

13. Un agente de diagnóstico que comprende un compuesto de la reivindicación 1.

14. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1, como un ingrediente activo, junto con un vehículo farmacológica y farmacéuticamente aceptable.

15. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de la reivindicación 1, mediante el cual

A)

(i): un bis-aminoxilileno de la fórmula

35

: se convierte en mono-(diBoc)-guanidinometilo de la fórmula (II)

36

: que después se hace reaccionar con un aldehído, proporcionando una amina secundaria de la fórmula general IV

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37

: en la que R^{3} es como se define en la reivindicación 1;

(ii): el compuesto IV se somete a una formación de urea, proporcionando un compuesto de la fórmula (VI)

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38

: que finalmente se desprotege, proporcionando un compuesto de la fórmula general VII

39

: en la que

: R^{1}, R^{2} y R^{3} son como se definen en la reivindicación 1; o

B)

(i): un compuesto de la fórmula (VIII)

40

: en la que X es CN e Y es CHO, se somete a una afinación reductora usando una amina primaria R^{3}NH_{2}, en la que R^{3} es como se define en la reivindicación 1, proporcionando un compuesto de la fórmula (IX)

41

: en la que R^{3} es como se define en la reivindicación 1, que después se somete a una reacción de urea usando un cloroformiato de fórmula (V)

42

: que finalmente se reduce, proporcionando un compuesto de fórmula (XI)

43

: o

(ii): el compuesto (VIII), en el que X es CH_{2}Br e Y es CN, se hace reaccionar con una amina R^{4}R^{5}NH en la que R^{4} y R^{5} son como se definen en la reivindicación 1, proporcionando un compuesto de la fórmula (XII)

44

: que se reduce y se hace reaccionar con un aldehído R^{3}CHO, en el que R^{3} es como se define en la fórmula I de la reivindicación 1, y finalmente se somete a una reacción de urea con un cloroformiato (V), como en la etapa (i), proporcionando un compuesto de la fórmula (XV)

45

: en la que R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se definen en la reivindicación 1.