ES2276936T3

ES2276936T3 - (oxo-pirazolo(1,5a)pirimidin-2-il)alquilcarboxamidas.

Info

Publication number: ES2276936T3
Application number: ES02728576T
Authority: ES
Inventors: Guiying Li; John M. Peterson; Pamela Albaugh
Original assignee: Neurogen Corp
Current assignee: Neurogen Corp
Priority date: 2001-03-27
Filing date: 2002-03-27
Publication date: 2007-07-01
Anticipated expiration: 2022-03-27
Also published as: US20040176397A1; US20030109536A1; EP1392692B1; DE60216083T2; WO2002076987A1; US7008947B2; US6703393B2; BR0208241A; JP2004525937A; EP1392692A1; DE60216083D1; CA2441926A1; ATE345344T1; MXPA03008681A

Abstract

Compuesto de fórmula o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que n es 1, 2 ó 3; R1 y R2 se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C1-C6, haloalquilo C1-C6, haloalcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y alcoxilo C1-C6; o R1 y R2 junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en el que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C1-C6, haloalquilo C1-C6, haloalcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y alcoxilo C1-C6; R3, R4 y R5 se eligen independientemente de hidrógeno; acilo C1-C6 y alquilo C1-C6, en el que cada acilo C1-C6 y alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C1-C2), haloalcoxilo (C1-C2), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C3-C7, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, hidroxilo y amino; R6 y R6'' se eligen independientemente en cada caso de hidrógeno y alquilo C1-C6; W es fenilo, sustituido opcionalmente con hasta 5 grupos seleccionados independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono o dialquilamino C1-C6, haloalquilo C1-C6, haloalcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y alcoxilo C1-C6.

Description

(Oxo-pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il)alquilcarboxamidas.

Antecedentes de la invención

Esta solicitud reivindica prioridad de la solicitud provisional de los EE.UU. número de serie 60/279.147, presentada el 27 de marzo de 2001, la descripción de la cual se incorpora por referencia en su totalidad en el presente documento.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a (oxo-pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il)alquilcarboxamidas, y más específicamente a componentes de este tipo, que se unen al sitio de benzodiacepina de los receptores GABA_{A}. Esta invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de este tipo y al uso de tales compuestos en el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central (SNC).

Descripción de la técnica relacionada

La superfamilia del receptor GABA_{A} representa una de las clases de receptores a través de la que actúa el principal neurotransmisor inhibidor, el ácido \gamma-aminobutírico, o GABA. El GABA ampliamente distribuido, aunque de manera desigual, por todo el cerebro de mamífero, logra muchas de sus acciones a través de un complejo de proteínas denominado el receptor GABA_{A}, que provoca alteración en la conductancia de cloruro y en la polarización de membrana. Además de ser el sitio de acción del neurotransmisor, a este receptor se unen varios fármacos, incluyendo las benzodiacepinas ansiolíticas y sedantes. El receptor GABA_{A} comprende un canal de cloruro que generalmente, pero no siempre, se abre como respuesta al GABA, permitiendo que el cloruro entre en la célula. Esto, a su vez, efectúa una ralentización de la actividad neuronal a través de hiperpolarización del potencial de membrana celular.

Los receptores GABA_{A} se componen de 5 subunidades de proteína. Se han clonado varios ADNc para estas subunidades del receptor GABA_{A} y se han determinado sus estructuras primarias. Aunque estas subunidades comparten un motivo básico de 4 hélices transmembranales, hay suficiente diversidad de secuencia para clasificarlas en varios grupos. Hasta la fecha se han identificado al menos subunidades 6\alpha, 3\beta, 3\gamma, 1\varepsilon, 1\delta y 2\rho. Los receptores GABA_{A} nativos se componen normalmente de subunidades 2\alpha, 2\beta, y 1\gamma (Pritchett & Seeburg Science 1989; 245:1389-1392, y Knight et. al., Recept. Channels 1998; 6:1-18). Diversas líneas de evidencia (tales como distribución de mensajes, localización genómica y resultados de estudios bioquímicos) sugieren que las principales combinaciones de receptor que ocurren naturalmente son \alpha_{1}\beta_{2}\gamma_{2}, \alpha_{2}\beta_{3}\gamma_{2}, \alpha_{3}\beta_{3}\gamma_{2}, y \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2} (Mohler et al. Neuroch. Res. 1995; 20 (5): 631-36).

Los sitios de unión del receptor GABA_{A} para GABA (2 por complejo receptor) están formados por aminoácidos de las subunidades \alpha y \beta. Los aminoácidos de las subunidades \alpha y \gamma forman conjuntamente un sitio de benzodiacepina por receptor. Las benzodiacepinas ejercen sus acciones farmacológicas interactuando con los sitios de unión de benzodiacepina asociados al receptor GABA_{A}. Además del sitio de benzodiacepina (algunas veces denominado como el receptor benzodiacepina o BDZ), el receptor GABA_{A} contiene sitios de interacción para otras varias clases de fármacos. Éstos incluyen un sitio de unión de esteroide, un sitio de picrotoxina, y un sitio de barbiturato. El sitio de benzodiacepina del receptor GABA_{A} es un sitio específico en el complejo receptor que no se superpone con el sitio de interacción para otras clases de fármacos que se unen al receptor o para GABA (véase, por ejemplo, Cooper, et al., The
Biochemical Basis of Neuropharmacology, 6ª edición, 1991, páginas 145-148, Oxford University Press, Nueva York).

En un mecanismo alostérico clásico, la unión de un fármaco al sitio de benzodiacepina aumenta la afinidad del receptor de GABA por GABA. Las benzodiacepinas y fármacos relacionados que aumentan la capacidad de GABA para abrir los canales del receptor GABA_{A} se conocen como agonistas o agonistas parciales dependiendo del nivel de aumento de GABA. Otras clases de fármacos, tales como derivados de \beta-carbolina, que ocupan el mismo sitio y modulan negativamente la acción de GABA, se denominan agonistas inversos. Existe una tercera clase de compuestos que ocupan el mismo sitio que tanto los agonistas como los agonistas inversos y todavía tienen un efecto pequeño o ninguno sobre la actividad de GABA. Sin embargo, estos compuestos bloquearán la acción de los agonistas o agonistas inversos y se denominan, por tanto, antagonistas del receptor GABA_{A}.

Los importantes efectos moduladores alostéricos de fármacos que actúan en el sitio de benzodiacepina se reconocieron temprano, y la distribución de actividades en los receptores de subtipo diferente ha sido un área de descubrimiento farmacológico intenso. Se conoce que los agonistas que actúan en el sitio de benzodiacepina presentan efectos ansiolíticos, sedantes e hipnóticos, mientras que los compuestos que actúan como agonistas inversos en este sitio presentan efectos ansiogénicos, de aumento de la cognición y proconvulsionantes. Mientras que las benzodiacepinas han gozado de un amplio uso farmacéutico como ansiolíticos, se sabe que estos compuestos presentan varios efectos secundarios no deseados. Éstos pueden incluir deterioro cognitivo, sedación, ataxia, potenciación de los efectos de etanol y una tendencia a la tolerancia y dependencia a los fármacos.

Los ligandos selectivos de GABA_{A} pueden también actuar para potenciar los efectos de otros determinados compuestos activos del SNC. Por ejemplo, hay evidencia de que los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) pueden mostrar una actividad antidepresiva mayor cuando se usan en combinación con los ligandos selectivos de GABA_{A} que cuando se usan solos.

Sumario de la invención

La invención proporciona (oxo-pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il)alquilcarboxamidas y específicamente compuestos de este tipo que interactúan con el sitio de benzodiacepina de los receptores GABA_{A}, incluyendo los receptores GABA_{A} humanos. Los compuestos preferidos de la invención interactúan con alta selectividad y/o alta afinidad hacia los receptores GABA_{A} y actúan como agonistas, antagonistas o agonistas inversos de tales receptores. Como tal, son útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos del SNC.

En un aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula I:

1

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el que: n es 1, 2, ó 3;

2

en la que R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; o R_{1} y R_{2} junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en el que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6};

R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de (i) hidrógeno; y (ii) acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino;

R_{6} y R_{6}’ se seleccionan independientemente en cada caso de hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};

W es fenilo, opcionalmente sustituido con hasta 5 grupos seleccionados independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

En otro aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula Ia:

3

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que: n es 1, 2 ó 3;

R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6};

o

R_{1} y R_{2} junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en el que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6};

R_{6} y R_{6}’ se seleccionan independientemente en cada caso de hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6}; y

R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

En un aspecto adicional, la invención proporciona compuestos de fórmula Ib:

4

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que: n es 1,2 ó 3;

o

R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de (i) hidrógeno; y (ii) acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos elegidos independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino;

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto o una sal aceptable farmacéuticamente de fórmulas I, Ia, o Ib, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable, o excipiente.

La invención también proporciona una composición envasada que comprende una composición farmacéutica en un envase e instrucciones para usar la composición para tratar a un paciente que sufre de ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer.

La invención proporciona además el uso de los compuestos de fórmula I, Ia, o Ib para la preparación de un medicamento para potenciar un efecto terapéutico de un agente del SNC.

La invención proporciona además métodos in vitro para determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en una muestra, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra con un compuesto de una cualquiera de la fórmula I, Ia, o Ib en condiciones que permiten la unión del compuesto con el receptor GABA_{A}; y

(b) detectar un nivel de compuesto unido al receptor GABA_{A}, y de ahí determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en la muestra.

Los métodos para elaborar los compuestos de fórmula I se describen junto con los compuestos intermedios para su uso en los métodos para preparar los compuestos de fórmula I.

La invención proporciona además métodos para alterar in vitro la actividad transducción de señales de al menos un receptor GABA_{A}, que comprende poner en contacto una célula que expresa el (los) receptor(es) GABA_{A} con un compuesto de fórmula I en una cantidad suficiente para alterar de manera perceptible la electrofisiología de la célula y así alterar la actividad de transducción de señales del receptor GABA_{A}.

Descripción detallada de la invención Definiciones

Antes de exponer la invención en detalle, podría ser útil proporcionar las definiciones de determinados términos que van a usarse en el presente documento. Los compuestos de la presente invención se describen generalmente usando la nomenclatura convencional. Para compuestos que tienen centros asimétricos, debe entenderse que se abarcan todos los isómeros ópticos y mezclas de los mismos. Además, los compuestos con dobles enlaces carbono-carbono podrían darse en sus formas Z y E, estando incluidas en la presente invención todas las formas isoméricas de los compuestos. Si el compuesto existe en diversas formas tautoméricas, la invención no se limita a uno cualquiera de los tautómeros específicos sino que incluye todas las formas tautoméricas.

Determinados compuestos se describen en el presente documento usando una fórmula general que incluye variables. A menos que se especifique lo contrario, cada variable dentro de dicha fórmula se define independientemente de otra variable, y cualquier variable que se produce más de una vez dentro de una fórmula se define en cada caso de manera independiente. Así, por ejemplo, si un grupo se describe como que está sustituido con 0-2 R*, entonces el grupo puede estar no sustituido o sustituido con hasta dos grupos R* y en cada caso R* se selecciona independientemente de la definición de R*. Además, será obvio que las combinaciones de sustituyentes y/o variables son admisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables.

Tal como se usa en el presente documento, "alquilo" se refiere a grupos de hidrocarburos de cadena lineal o ramificada. Los grupos alquilo preferidos son alquilo C_{1}-C_{6} (es decir, grupos alquilo que tienen desde 1 hasta 6 átomos de carbono). Los grupos alquilo de 2 o más átomos de carbono pueden contener dobles o triples enlaces, que pueden producirse en cualquier punto estable a lo largo de la cadena (por ejemplo, etinilo y propargilo). Un "punto estable" es el enlace que, cuando es insaturado, da como resultado un compuesto químicamente estable (es decir, un compuesto que puede aislarse, caracterizarse y someterse a prueba para determinar su actividad biológica). Ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo y s-pentilo. Un grupo alquilo puede estar unido a un átomo dentro de una molécula de interés mediante cualquier parte químicamente adecuada del grupo alquilo.

Tal como se usa en el presente documento, "alcoxilo" representa un grupo alquilo tal como se definió anteriormente, unido mediante un puente de oxígeno. Ejemplos de alcoxilo incluyen, pero no se limitan a, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, i-propoxilo, n-butoxilo, 2-butoxilo, t-butoxilo, n-pentoxilo, 2-pentoxilo, 3-pentoxilo, isopentoxilo, neopentoxilo, n-hexoxilo, 2-hexoxilo, 3-hexoxilo y 3-metilpentoxilo. Un "alcoxilo C_{1}-C_{6}" indica grupos alcoxilo que tienen desde 1 hasta 6 átomos de carbono.

El término "arilo" se usa para indicar grupos aromáticos que solamente contienen átomos de carbono en la estructura del anillo. Axial, el término "arilo" se refiere a un sistema de anillos de hidrocarburo aromático, que contiene al menos un anillo aromático. El anillo aromático puede estar condensado opcionalmente o unido de otra manera a otros anillos de hidrocarburo aromático o anillos de hidrocarburo no aromático. Ejemplos de grupos arilo son, por ejemplo, fenilo, naftilo, 1,2,3,4-tetrahidronaftaleno, indanilo, y bifenilo. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo, naftilo, incluyendo 1-naftilo y 2-naftilo, y acenaftilo. Grupos de arilo más preferidos incluyen fenilo y naftilo. Los grupos arilo en el presente documento están no sustituidos o, tal como se especifica, sustituidos en una o más posiciones sustituibles con diversos grupos. Por tanto, tales grupos arilo pueden estar sustituidos opcionalmente con, por ejemplo, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, halógeno, hidroxilo, ciano, nitro, amino, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, aminoalquilo C_{1}-C_{6}, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}.

El término "halógeno" incluye a flúor, cloro, bromo y yodo.

Tal como se usa en el presente documento, "haloalquilo" se refiere a grupos alquilo (preferentemente grupos de hidrocarburo alifático saturado) que están sustituidos con 1 o más halógenos (por ejemplo -C_{v}F_{w} en el que v es un número entero de 1 a 3 y w es un número entero de desde 1 hasta (2v+1). Ejemplos de grupos haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, mono, di o trifluorometilo; mono, di o triclorometilo; mono, di, tri, tetra o pentafluoroetilo; y mono, di, tri, tetra o pentacloroetilo. Los grupos "haloalquilo (C_{1}-C_{6})" tienen de 1 a 6 átomos de carbono.

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El término "haloalcoxilo" se refiere a un grupo haloalquilo tal como se definió anteriormente unido mediante un puente de oxígeno. Los grupos "haloalcoxilo (C_{1}-C_{6})" tienen de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de grupos haloalcoxilo incluyen, pero no se limitan a, trifluorometoxilo y triclorometoxilo.

En el presente documento, por "acilo C_{1}-C_{6}" se entiende grupos de fórmula R_{C}C(0)- en los que R_{C} es un alquilo de 1-5 átomos de carbono.

Un "anillo carbocíclico" es un anillo formado completamente por enlaces carbono-carbono. Al menos que se especifique lo contrario, tal anillo puede ser aromático o no aromático (insaturado, parcialmente saturado o saturado), y está opcionalmente sustituido. Normalmente, cada anillo contiene de desde 3 hasta 8 (preferiblemente desde 5 hasta 7) miembros del anillo. Si un anillo contiene una o más sustituciones, cada sustitución se selecciona independientemente de cualquier otra sustitución. Si R_{1} y R_{2} (junto con los átomos a los están unidos) forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 4 hasta 8 átomos de carbono, se entiende que los anillos carbocíclicos contienen al menos un doble enlace o contienen suficientes dobles enlaces para formar un anillo aromático carbocíclico. Ejemplos representativos de sistemas de anillos que resultan de R_{1} y R_{2} que forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de este tipo (que está condensado con el grupo de pirazolopirimidina) incluyen, pero no se limitan a, las siguientes estructuras:

5

6

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Tal como se usa en el presente documento, un "sustituyente" se refiere a un resto molecular que está unido covalentemente a un átomo dentro de una molécula de interés. Por ejemplo, un "sustituyente de anillo" podría ser un resto tal como un halógeno, un grupo alquilo, un grupo alcoxilo, un grupo haloalquilo u otro grupo tal como se discute en el presente documento que está unido covalentemente a un átomo (preferiblemente a un átomo de carbono o nitrógeno) que es un miembro del anillo. El término "sustitución" se refiere a reemplazar un átomo de hidrógeno en una estructura molecular con un sustituyente tal como se describió anteriormente, de modo que la valencia en el átomo designado no se exceda y de modo que de la sustitución resulte un compuesto químicamente estable (es decir, un compuesto que puede aislarse, caracterizarse y someterse a prueba para determinar su actividad biológica).

Un guión ("-") que no está entre dos letras o símbolos se usa para indicar un punto de unión para un sustituyente. Por ejemplo, -CONH_{2} está unido a través del átomo de carbono.

El término "receptor GABA_{A}" se refiere a un complejo proteico que de manera detectable se une a GABA y media una alteración dependiente de la dosis en la conductancia de cloruro y la polarización de membrana. Se prefieren generalmente los receptores que comprenden subunidades del receptor GABA_{A} de mamífero (especialmente ser humano o rata) que se producen naturalmente, aunque las subunidades pueden modificarse siempre que cualquier modificación no inhiba sustancialmente la capacidad del receptor para unirse a GABA (es decir, al menos se retiene el 50% de la afinidad de unión del receptor por GABA). La afinidad de unión de un receptor GABA_{A} candidato por GABA puede evaluarse usando un ensayo convencional de unión de ligando tal como se proporciona en el presente documento. Será evidente que hay una variedad de subtipos del receptor GABA_{A} que están dentro del alcance del término "receptor GABA_{A}". Estos subtipos incluyen, pero no se limitan a, los subtipos del receptor \alpha_{2}\beta_{3}\gamma_{2}, \alpha_{3}\beta_{3}\gamma_{2}, \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2} y \alpha_{1}\beta_{2}\gamma_{2}. Los receptores GABA_{A} pueden obtenerse de una variedad de fuentes, tales como de preparaciones de corteza de rata o de células que expresan receptores GABA_{A} humanos clonados.

Un "profármaco" es un compuesto que no satisface por completo los requisitos estructurales de los compuestos proporcionados en el presente documento, pero se modifica in vivo, después de su administración a un paciente, para producir un compuesto activo de la presente invención. Por ejemplo, un profármaco puede ser un éster o un derivado acilado de un compuesto tal como se proporciona en el presente documento. Los profármacos incluyen compuestos en los que los grupos hidroxilo, amino o sulfhidrilo están unidos a cualquier grupo que, cuando se administra a un sujeto mamífero, se separa para formar un grupo libre de hidroxilo, amino, o sulfhidrilo, respectivamente. Ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, derivados de benzoato, formiato y acetato de grupos funcionales alcohol y amino dentro de los compuestos proporcionados en el presente documento.

Un "paciente" es cualquier individuo tratado con un compuesto proporcionado en el presente documento. Los pacientes incluyen seres humanos, así como otros animales tales como animales de compañía y ganado. Los pacientes pueden estar afectados con un trastorno del SNC, o pueden estar libres de tal estado (es decir, el tratamiento puede ser preventivo).

Un "trastorno del SNC" es una enfermedad o estado del sistema nervioso central que responde a la modulación del receptor GABA_{A} en el paciente. Dichos trastornos incluyen trastornos por ansiedad (por ejemplo, trastorno de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, agorafobia, fobia social, fobia específica, distimia, trastornos de adaptación, ansiedad por separación, ciclotimia, y trastorno por ansiedad generalizada), trastornos por estrés (por ejemplo, trastorno por estrés postraumático, trastorno por estrés agudo de ansiedad anticipatoria y trastorno por estrés agudo), trastornos depresivos (por ejemplo, depresión, depresión atípica, trastorno bipolar y fase de depresión del trastorno bipolar), trastornos del sueño (por ejemplo, insomnio primario, trastorno del ritmo circadiano del sueño, disomnia no especificada (NOS), parasomnias que incluyen el trastorno por pesadillas, trastorno del terror nocturno, trastornos del sueño secundarios a la depresión, ansiedad y/u otros trastornos mentales y trastorno del sueño inducido por fármacos), trastornos cognitivos (por ejemplo, deterioro de la cognición, deterioro cognitivo leve (MCI), deterioro cognitivo relacionado con la edad (ARCD), lesión traumática cerebral, síndrome de Down, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, e accidente cerebrovascular), demencia asociada al SIDA, demencia asociada a la depresión, ansiedad o psicosis, trastornos por déficit de atención (por ejemplo, el trastorno por déficit de atención y el trastorno por déficit de atención con hiperactividad), trastornos convulsivos (por ejemplo, la epilepsia), sobredosis de benzodiacepina y la adicción a fármacos y alcohol.

Un "agente del SNC" es cualquier fármaco usado para tratar o prevenir un trastorno del SNC. Agentes del SNC incluyen, por ejemplo: agonistas y antagonistas de receptor de serotonina (por ejemplo, 5-HT_{1A}) e inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS); antagonistas del receptor de neuroquinina; antagonistas del receptor del factor de liberación de corticotropina (CRF_{1}); agonistas del receptor de melatonina; agonistas nicotínicos; agentes muscarínicos; inhibidores de la acetilcolinesterasa y agonistas del receptor de dopamina.

Se dice que un compuesto tiene "alta afinidad" si la K_{i} en un receptor GABA_{A} es inferior a 1 micromolar, preferiblemente inferior a 100 nanomolar o inferior a 10 nanomolar. Un ensayo representativo para determinar la K_{i} en el receptor GABA_{A} se proporciona en el ejemplo 5, en el presente documento. Será evidente que la K_{i} puede depender del subtipo de receptor que se usa en el ensayo. En otras palabras, un compuesto de alta afinidad puede ser "específico del subtipo" (es decir, la K_{i} es al menos 10 veces mayor para un subtipo que para otro subtipo). Se dice que dichos compuestos tienen una alta afinidad por el receptor GABA_{A} si la K_{i} para al menos un subtipo de receptor GABA_{A} cumple con los criterios anteriores.

Se dice que un compuesto tiene "alta selectividad" si se une al receptor GABA_{A} con una K_{i} que es al menos 10 veces inferior, preferiblemente al menos 100 veces inferior, que la K_{i} para unirse a otros receptores unidos a la membrana. En particular, el compuesto debería tener una K_{i} que es al menos 10 veces mayor en los receptores siguientes que en el receptor GABA_{A}: serotonina, dopamina, galanina, VR1, C5a, MCH, NPY, CRF, bradiquinina, NK-1, NK-3 y taquiquinina. Los ensayos para determinar la K_{i} en otros receptores pueden llevarse a cabo usando protocolos convencionales de ensayos de unión.

Compuestos preferidos de fórmula I son aquellos en los que

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8

En tales compuestos preferidos, W es preferiblemente heteroarilo sustituido opcionalmente con hasta 5 grupos seleccionados independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

En otros compuestos preferidos de este tipo, W es preferiblemente fenilo opcionalmente sustituido con hasta 5 grupos seleccionados independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

Compuestos particularmente preferidos son aquellos en los que W es fenilo, opcionalmente sustituido con 4, o más preferiblemente 3 grupos seleccionados independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, monoalquilamino C_{1}-C_{6}, dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo, alquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

Todavía compuestos aún más preferidos de fórmula I son aquellos en los que:

R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, trifluorometilo, trifluorometoxilo, metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino.

Compuestos más preferidos de fórmula I son aquellos en los que:

y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{1}-C_{6}.

Compuestos más preferidos de fórmula I son aquellos en los que:

R_{1} y R_{2} junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en los que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6}.

Compuestos aún más preferidos de fórmula I son aquellos en los que:

R_{1} y R_{2} junto con los átomos con los que están unidos forman un ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, cicloheptatrienilo, cicloheptadienilo, fenilo, ciclooctadienilo, y ciclooctenilo, en los que cada anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{1}-C_{4}.

Compuestos particularmente preferidos de fórmula I son aquellos en los que R_{1} y R_{2} son independientemente hidrógeno o metilo, R_{4} y R_{5} son etilo o propilo, preferiblemente n-propilo, y R_{10}, R_{11}, X, Y y Z son independientemente hidrógeno, metilo, o halógeno. Preferiblemente, el grupo fenilo que lleva R_{10}, R_{11}, X, Y y Z es fenilo sustituido independientemente en las posiciones 2 y 5 con metilo, etilo, o halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con metilo, etilo o halógeno. Más preferiblemente, el grupo fenilo está sustituido en las posiciones 2 y 5 con halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con hidrógeno. En los que el fenilo está disustituido con halógeno, los halógenos son preferiblemente el mismo.

Otros compuestos preferidos de la invención incluyen los de fórmulas II o III, en los que las variables son tal como se definió anteriormente para la fórmula I:

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Compuestos más preferidos de fórmulas II y III incluyen los de fórmulas IV, V, y VI:

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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los que:

n, R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{6}’ son tal como se describieron anteriormente;

m es 1, 2 ó 3;

R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R representa hasta 5 grupos elegidos independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6}, y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

En las fórmulas IV-VI, n y m son cada uno independientemente 1, 2 ó 3; preferiblemente n es 1. R_{1} y R_{2} son (i) son elegidos independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} (preferiblemente alquilo C_{1}-C_{3}, más preferiblemente metilo), y alcoxilo C_{1}-C_{6} o (ii) junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en el que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta tres sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}. Grupos R_{1} y R_{2} preferidos incluyen hidrógeno, metilo, y grupos que juntos forman un anillo de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido.

Para las fórmulas IV, V, y VI, R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de (i) hidrógeno; y (ii) acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, opcionalmente sustituidos con hasta tres sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en los que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino. Grupos R_{3} preferidos son hidrógeno, metilo y etilo; grupos R_{4} y R_{5} preferidos son alquilo C_{2}-C_{6} y bencilo.

Para las fórmulas IV, V, y VI, R_{6} y R_{6}’ se seleccionan independientemente en cada caso de hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6}, siendo preferido hidrógeno para determinadas realizaciones.

Para las fórmulas IV, V, y VI, R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}, siendo preferidos hidrógeno, halógeno, metilo y metoxilo.

R, en la fórmula VI, representa preferiblemente (i) hasta cuatro, más preferiblemente tres, sustituyentes de anillo cuando es 2, (ii) hasta tres, más preferiblemente 2, sustituyentes de anillo cuando es 1, y (iii) hasta cinco sustituyentes cuando es 3, en el que los sustituyentes se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

Compuestos preferidos de la fórmula IV incluyen aquellos en los que R_{1}, R_{2} y R_{3} se eligen independientemente de hidrógeno, metilo, y etilo; R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de alquilo C_{2}-C_{6} y bencilo; R_{6} y R_{6}’ son ambos hidrógeno; y R_{10}, R_{11}, X, Y y Z son elegidos independientemente de hidrógeno, halógeno y metilo.

Compuestos más preferidos de fórmula IV son aquellos en los que R_{1} y R_{2} son independientemente hidrógeno o metilo, R_{3} es metilo, R_{4} y R_{5} son etilo o propilo, preferiblemente n-propilo, y R_{10}, R_{11}, X, Y y Z son independientemente hidrógeno, metilo, o halógeno. Preferiblemente, el grupo fenilo que lleva R_{10}, R_{11}, X, Y y Z es fenilo, sustituido independientemente en las posiciones 2 y 5 con metilo, etilo, o halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con metilo, etilo o halógeno. Más preferiblemente, el grupo fenilo está sustituido en las posiciones 2 y 5 con halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con hidrógeno. En los que el fenilo está disustituido con halógeno, los halógenos son preferiblemente el mismo.

Compuestos preferidos de fórmula V incluyen aquellos en los que R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, metilo y etilo; R_{3} es metilo o etilo; R_{6} y R_{6}’ son ambos hidrógeno; y S, T, X, W, Y y Z se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, metilo y metoxilo.

Compuestos preferidos de Fórmula VI incluyen aquellos en los que m es 1, y R, R_{6} y R_{6}’ son hidrógeno. Otros compuestos preferidos de fórmula VI incluyen compuestos en los que m es 1; R, R_{6} y R_{6}’ son hidrógeno; R_{3} se elige de hidrógeno, metilo y etilo; R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de alquilo C_{2}-C_{6}; y R_{10}, R_{11}, X, W, Y y Z se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno y metilo. Aún otros compuestos preferidos de fórmula VI incluyen aquellos en los que R_{1}, R_{2} y R_{3} se eligen independientemente de hidrógeno, metilo, y etilo; R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de alquilo C_{2}-C_{6} y bencilo; R_{6} y R_{6}’ son ambos hidrógeno; y R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno y metilo. Compuestos más preferidos de fórmula VI son aquellos en los que R_{1} y R_{2} son independientemente hidrógeno o metilo, R_{3} es metilo, R_{4} y R_{5} son etilo o propilo, preferiblemente n-propilo, y R_{10}, R_{11}, X, Y y Z son independientemente hidrógeno, metilo, o halógeno. Preferiblemente, el grupo fenilo que lleva a R_{10}, R_{11}, X, Y y Z es fenilo sustituido independientemente en las posiciones 2 y 5 con metilo, etilo, o halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con metilo, etilo o halógeno. Más preferiblemente, el grupo fenilo está sustituido en las posiciones 2 y 5 con halógeno, preferiblemente cloro o flúor, o en la posición 3 con hidrógeno. En los que el fenilo está disustituido con halógeno, los halógenos son preferiblemente el mismo.

El siguiente sistema de numeración se usa para identificar las posiciones en el sistema de anillos de pirazolopirimidina de los compuestos de la invención:

13

Compuestos representativos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, los compuestos que se exponen a continuación en las tablas A y I-III, así como el ácido farmacéuticamente aceptable y sales de adición de base del mismo.

TABLA A

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Los siguientes compuestos representativos se enumeran para proporcionar al lector un entendimiento de los compuestos abarcados en la presente invención.

N-[(5-metil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(5-metil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4,5-dimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil) (3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4-etil-5-metil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-5,6-dimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4,5,6-trimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(etilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-bencil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-propil-N-[(4,5,6-trimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-5-metil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4,5-dimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(metilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(etilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-bencil(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-clorofenil)carboxamida;

N-propil-N-[(4,5,6-trimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](3-clorofenil)carboxamida;

N-[(5-metil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-etil-N-[(3-etil-5-metil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4,5-dimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(etilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-bencil(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-propil-N-[(4,5,6-trimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil(pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(8-oxo-3-propil(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4-metil-8-oxo-3-propil(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta [2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida; y

sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Será evidente que los compuestos específicos enumerados anteriormente son ejemplos ilustrativos de compuestos proporcionados en el presente documento, y no están destinados a limitar el alcance de la presente invención. Tal como se mencionó anteriormente, todos los compuestos de la presente invención pueden estar presentes como una base libre o como una sal de adición de ácido fisiológicamente aceptable. Además, ambos compuestos quirales y mezclas racémicas se abarcan en la presente invención.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto tal como se describió anteriormente en combinación con un vehículo o excipiente fisiológicamente aceptable. La composición farmacéutica se formula como un fluido inyectable, un aerosol, una crema, un gel, una píldora, un comprimido, una cápsula, un jarabe, o un parche transdérmico. Se proporcionan también composiciones farmacéuticas envasadas, que comprenden tal composición farmacéutica en un envase e instrucciones para usar la composición para tratar a pacientes que padecen de ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, un trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer.

Se proporcionan métodos para el tratamiento de la ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer, que comprenden la administrar a un paciente que necesite de tal tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se describió anteriormente. El paciente puede ser un ser humano u otro mamífero. Se abarca en la presente invención el tratamiento de seres humanos, animales de compañía domesticados (mascotas), o animales de ganado que padezcan de determinados trastornos del SNC con una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención.

La presente invención también proporciona métodos para potenciar un efecto terapéutico de un agente del SNC, que comprende administrar a un paciente un agente del SNC y un compuesto tal como se describió anteriormente.

Además se proporcionan métodos para determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en una muestra, que comprenden: (a) poner en contacto una muestra con un compuesto tal como se describió anteriormente en condiciones que permitan la unión del compuesto al receptor GABA_{A}; y (b) detectar un nivel del compuesto unido al receptor GABA_{A}. Además, los compuestos tal como se describieron anteriormente pueden estar radiomarcardos, en los que el paso de detección comprende: (i) separar el compuesto unido del compuesto no unido; y (ii) detectar la presencia o ausencia del compuesto unido en la muestra. Cuando se usan compuestos radiomarcados, la presencia o ausencia del compuesto unido se detecta usando autorradiografía.

La presente invención proporciona adicionalmente un método para alterar la actividad de transducción de señales del receptor GABA_{A}, que comprende poner en contacto una célula que expresa el receptor GABA_{A} con un compuesto tal como se describió anteriormente en una cantidad suficiente para alterar la electrofisiología de la célula de manera detectable.

Más preferiblemente, la célula expresa de manera recombinante un receptor GABA_{A} heterólogo, en el que la alteración de la electrofisiología de la célula se detecta por registro intracelular o registro electrofisiológico de fijación de voltaje ("patch-clamp").

Más preferiblemente, la célula es una célula neuronal que se pone en contacto in vivo en un animal, la disolución es un fluido corporal, y la alteración en la electrofisiología de la célula se detecta como un cambio en el comportamiento del animal. Aún más preferiblemente el animal es un ser humano, la célula es una célula del cerebro y el fluido es un fluido cerebroespinal.

Tal como se mencionó anteriormente, la invención proporciona (oxo-pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il)alquilcarboxamidas, que se unen preferiblemente con alta afinidad y/o alta selectividad al sitio de benzodiacepina de los receptores GABA_{A}, incluyendo los receptores GABA_{A} humanos. Preferiblemente, en un ensayo de unión al receptor GABA_{A}, los compuestos anteriores presentan una K_{i} de 1 micromolar o inferior. Más preferiblemente, en un ensayo de unión al receptor GABA_{A}, el compuesto presenta una K_{i} de 100 nanomolar o inferior. Aún más preferiblemente, en un ensayo de unión al receptor GABA_{A}, el compuesto presenta una K_{i} de 10 nanomolar o inferior.

Los compuestos anteriores son también útiles para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, un trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer.

Sin querer unirse a cualquier teoría en particular, se cree que la interacción de los compuestos que proporcionados en el presente documento con el sitio de benzodiacepina da como resultado la utilidad farmacéutica de estos compuestos. Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden usarse en una variedad de contextos in vivo e in vitro, tal como se discute en más detalle a continuación.

Los compuestos que se proporcionan en el presente documento alteran de manera detectable (modulan) la unión del ligando al receptor GABA_{A}, tal como se determina usando ensayos convencionales de unión al receptor in vitro. Las referencias en el presente documento a "ensayos de unión del ligando al receptor GABA_{A}" tienen la intención de referirse al ensayo convencional de unión al receptor in vitro proporcionado en el ejemplo 5. Brevemente, puede realizarse un ensayo de competición en el que una preparación de receptor GABA_{A} se incuba con ligando marcado (por ejemplo, ^{3}H), tal como flumazenilo, y compuesto de prueba no marcado. La incubación con un compuesto que modula de manera detectable la unión del ligando al receptor GABA_{A} dará como resultado un aumento o disminución en la cantidad de marcador unido a la preparación del receptor GABA_{A}, en relación a la cantidad de marcador unido en ausencia del compuesto. Preferiblemente, tal compuesto presentará una K_{i} en el receptor GABA_{A} inferior a 1 micromolar, más preferiblemente inferior a 500 nM, 100 nM, 20 nM o 10 nM. El receptor GABA_{A} usado para determinar la unión in vitro puede obtenerse de una variedad de fuentes, por ejemplo de preparaciones de corteza de rata o de células que expresan receptores GABA_{A} humanos clonados.

Si se desea, pueden evaluarse las propiedades farmacológicas de los compuestos que se proporcionan en el presente documento, incluyendo, pero no limitándose a, solubilidad, biodisponibilidad oral, toxicidad, unión a proteínas séricas, falta de un efecto ECG clínicamente importante y de semivida in vitro e in vivo. Ensayos rutinarios que se conocen bien en la técnica pueden usarse para evaluar estas propiedades e identificar los compuestos superiores para un uso particular. Por ejemplo, la solubilidad en disoluciones acuosas es preferiblemente al menos 500 ng/ml. Ensayos usados para predecir la biodisponibilidad incluyen el transporte a través de monocapas de células intestinales humanas, incluyendo monocapas de células Caco-2. La toxicidad puede evaluarse usando cualquier método convencional, tal como el ensayo que detecta un efecto en la producción de ATP celular proporcionado en el ejemplo 7, o la toxicidad hacia hepatocitos cultivados. Puede predecirse la penetración de la barrera hematoencefálica de un compuesto en seres humanos a partir de los niveles del compuesto en el cerebro de animales de laboratorio a los que se les administró el compuesto por vía intravenosa. Puede predecirse la unión a proteínas séricas a partir de ensayos de unión a la albúmina. Tales ensayos se describen en una publicación de Oravcová, et al. (Journal of Chromatography B (1996) volumen 677, páginas 1-27). La semivida del compuesto es inversamente proporcional a la frecuencia de dosificación de un compuesto. Pueden predecirse las semividas de compuestos in vitro a partir ensayos de semivida microsómica, tal como se describen en Kuhnz y Gieschen (Drug Metabolism and Disposition, (1998) volumen 26, páginas 1120-1127).

Con fines de detección, tal como se discute en más detalle a continuación, los compuestos proporcionados en el presente documento pueden estar marcados isotópicamente o radiomarcados. Tales compuestos son idénticos a los descritos anteriormente, menos por el hecho de que se reemplazan uno o más átomos por un átomo que tiene una masa atómica o un número másico diferente de la masa atómica o número másico encontrado normalmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos proporcionados en el presente documento incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como ^{2}H, ^{3}H, ^{11}C, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{18}O, ^{17}O, ^{31}P, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{36}Cl. Además, la sustitución con isótopos pesados tales como deuterio (es decir, ^{2}H) puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semivida in vivo o necesidades de dosificación reducida y, por tanto, pueden preferirse en algunas circunstancias.

Preparación de compuestos

Los compuestos proporcionados en el presente documento pueden prepararse en general usando métodos sintéticos convencionales. Las materiales de partida están generalmente fácilmente disponibles en fuentes comerciales, tales como Sigma-Aldrich Corp. (St. Louis, MO). Una ruta representativa adecuada para preparar compuestos de la invención se muestra en el esquema I. Además pueden usarse otras rutas sintéticas similares a las mostradas en el esquema I. En el esquema I, los sustituyentes R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{10}, R_{11}, X, Y y Z tienen las definiciones expuestas anteriormente.

Esquema I

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Será evidente que los materiales de partida pueden variarse y que pueden emplearse etapas adicionales para producir los compuestos variados abarcados por la presente invención. En algunos casos, puede ser necesaria la protección de funcionalidades reactivas para lograr algunas de las transformaciones anteriores. En general, tal necesidad de proteger grupos, así como las condiciones necesarias para unir y eliminar tales grupos, será evidente para los expertos en la técnica de síntesis orgánica.

En determinadas situaciones, los compuestos proporcionados en el presente documento pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos, de modo que los compuestos pueden existir en formas estereoisoméricas diferentes. Estos compuestos pueden ser, por ejemplo, racematos o formas ópticamente activas. Tal como se mencionó anteriormente, en la presente invención se abarcan todos los estereoisómeros. Sin embargo, puede ser deseable obtener enantiómeros individuales (es decir, formas ópticamente activas). Métodos convencionales para preparar enantiómeros individuales incluyen la síntesis asimétrica y la resolución de los racematos. La resolución de los racematos puede conseguirse, por ejemplo, por métodos convencionales tales como cristalización en presencia de un agente de resolución, o por cromatografía usando, por ejemplo, una columna de HPLC quiral.

Tal como se mencionó anteriormente, la presente invención abarca sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento. Como se usa en el presente documento, una "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal de ácido o base que generalmente se considera adecuada en la técnica para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos o animales sin toxicidad excesiva, irritación, reacción alérgica, u otro problema o complicación. Tales sales incluyen sales de ácidos orgánicos y minerales de residuos básicos tales como aminas, así como sales orgánicas o alcalinas de residuos ácidos como los ácidos carboxílicos. Sales farmacéuticas específicas incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos tales como clorhídrico, fosfórico, bromhídrico, málico, glicólico, fumárico, sulfúrico, sulfámico, sulfanílico, fórmico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, 2-hidroxietilsulfónico, nítrico, benzoico, 2-acetoxibenzoico, cítrico, tartárico, láctico, esteárico, salicílico, glutámico, ascórbico, pamoico, succínico, fumárico, maleico, propiónico, hidroximaleico, yodhídrico, fenilacético, alcanoico tal como acético, HOOC-(CH_{2})_{n}-COOH en el que n es 0-4, y similares. De manera similar, cationes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sodio, potasio, calcio, aluminio, litio y amonio. Los expertos habituales en la técnica reconocerán más sales farmacéuticamente aceptables para los compuestos proporcionados en el presente documento, incluyendo las mencionadas en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, página 1418 (1985). Por consiguiente, debe interpretarse que la presente descripción incluye todas las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos enumerados específicamente.

Una amplia variedad de procedimientos sintéticos están disponibles para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. En general, una sal farmacéuticamente aceptable puede sintetizarse a partir de un compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante cualquier método químico convencional. Brevemente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas básicas o ácidas libres de estos compuestos con una cantidad estoiquiométrica del ácido o base apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo.

Los profármacos de los compuestos proporcionados en el presente documento pueden prepararse modificando los grupos funcionales presentes en los compuestos, de tal manera que las modificaciones sean fieles a los compuestos originales. Los profármacos incluyen compuestos en los que grupos hidroxilo, amino o sulfhidrilo están unidos a cualquier grupo que, cuando se administra a un sujeto mamífero, se separa para formar respectivamente un grupo sulfhidrilo, amino o hidroxilo libre. Ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a, acetato, derivados formiato y benzoato de grupos funcionales de amina y alcohol en los compuestos proporcionados en el presente documento. Profármacos preferidos incluyen derivados acilados. Los expertos habituales en la técnica reconocerán diversos métodos sintéticos que pueden utilizarse para prepara profármacos de los proporcionados en el presente documen-
to.

Los compuestos pueden radiomarcarse llevándose a cabo su síntesis usando precurores que comprenden al menos un átomo que es un radioisótopo. Tal(es) radioisótopo(s) se seleccionan preferiblemente de carbono (preferiblemente ^{14}C), hidrógeno (preferiblemente ^{3}H), azufre (preferiblemente ^{35}S), o yodo (preferiblemente ^{125}I). La síntesis de tales compuestos radiomarcados puede realizarse convenientemente mediante un proveedor de radioisótopos que se especializa en la síntesis a medida de compuestos sonda radiomarcados, tales como Amersham Corporation, Arlington Heights, IL; Cambridge Isotope Laboratories, Inc. Andover, MA; SRI International, Menlo Park, CA; Wizard Laboratories, West Sacramento, CA; ChemSyn Laboratories, Lexena, KS; American Radiolabeled Chemicals, Inc., St. Louis, MO; y Moravek Biochemicals Inc., Brea, CA. Los compuestos marcados con tritio también se preparan convenientemente de manera catalítica mediante intercambio catalizado por platino en ácido acético tritiado, intercambio catalizado por ácido en ácido trifluoroacético tritiado, o intercambio por catalizador heterogéneo con gas tritio. Tales preparaciones también se llevan a cabo de manera conveniente como un radiomarcado a medida mediante cualquiera de los proveedores enumerados anteriormente usando el compuesto como sustrato. Además, determinados precursores pueden someterse a intercambio de halógeno por tritio con gas tritio, reducción de enlaces insaturados con gas tritio, o reducción usando borotrituro de sodio, tal como sea apropiado. Los compuestos de la invención radiomarcados con ^{14}C pueden preparase usando oxalato de dietilo radiomarcado con ^{14}C (AMERICAN RADIOLABELED
CHEMICALS, St. Louis, MO, número de catálogo ARC-1127) como material de partida para la síntesis resumida en el esquema I.

Composiciones farmacéuticas

La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto proporcionado en el presente documento, junto con al menos un vehículo o excipiente fisiológicamente aceptable. Tales compuestos pueden usarse para tratar trastornos que responden a la modulación del receptor GABA_{A} (por ejemplo, tratamiento de la ansiedad, depresión, trastornos del sueño, o deterioro cognitivo mediante modulación del receptor GABA_{A}). Las composiciones farmacéuticas pueden comprender, por ejemplo, agua, tampones (por ejemplo, solución salina tamponada neutra o solución salina tamponada con fosfato), etanol, aceite mineral, aceite vegetal, dimetilsulfóxido, hidratos de carbono (por ejemplo, glucosa, manosa, sacarosa o dextranos), manitol, proteínas, adyuvantes, polipéptidos o aminoácidos tales como glicina, antioxidantes, agentes quelantes tales como el EDTA o glutatión y/o conservantes. Composiciones farmacéuticas preferidas se formulan para la administración oral a seres humanos u otros animales (por ejemplo, animales de compañía como los perros). Si se desea, se pueden incluir otros principios activos tales como agentes del SNC.

Las composiciones farmacéuticas pueden formularse para cualquier manera apropiada de administración, incluyendo, por ejemplo, administración tópica, oral, nasal, rectal o parenteral. El término parenteral, tal como se usa en el presente documento incluye la inyección subcutánea, intradérmica, intravascular (por ejemplo, intravenosa), intramuscular, espinal, intracraneal, intratecal e intraperitoneal, así como cualquier técnica de inyección o infusión similar. En determinadas realizaciones, se prefieren composiciones adecuadas para uso oral. Tales formas incluyen por ejemplo, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas o aceitosas, gránulos o polvos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Todavía en otras realizaciones, las composiciones de la presente invención se pueden formular como un liofilizado.

Las composiciones destinadas para su uso oral pueden comprender también uno o más componentes tales como agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes con el fin de proporcionar preparaciones atractivas y de sabor agradable. Los comprimidos contienen el principio activo en una mezcla con excipientes fisiológicamente aceptables que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Tales excipientes incluyen, por ejemplo, diluyentes inertes (por ejemplo, carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio), agentes de granulación y de disgregación (por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico), agentes de unión (por ejemplo, almidón, gelatina o goma arábiga) y agentes de lubricación (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco). Los comprimidos pueden no recubrirse o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y absorción en el tubo digestivo y así proporcionar una acción sostenida durante un periodo mas largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo en el tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.

Las formulaciones para uso oral pueden presentarse también como cápsulas de gelatina duras en las que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte (por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín), o como cápsulas de gelatina blandas en las que el principio activo se mezcla con agua o un medio de aceite (por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva).

Las suspensiones acuosas comprenden los principios activos en una mezcla con uno o más excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes son agentes de suspensión (por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidropropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga); y agentes humectantes o de dispersión (por ejemplo, fosfátidos que se dan en la naturaleza tales como la lecitina, productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos tales como estearato de polioxietileno, productos de condensación del óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga tales como heptadecaetileoxicetanol, productos de condensación del óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como el monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación del óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol tales como monooleato de polioxietilensorbitano). Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo etilo, o p-hidroxibenzoato de n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.

Las suspensiones aceitosas pueden formularse suspendiendo los principios activos en un aceite vegetal (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco) o en un aceite mineral como la parafina líquida. La suspensión aceitosa puede contener un agente espesante tal como la cera de abeja, la parafina dura o el alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes tales como los que expusieron anteriormente, y/o agentes aromatizantes para proporcionar preparaciones orales aceptables. Tales suspensiones pueden conservarse por la adición de un antioxidante tal como el ácido ascórbico.

Los polvos o gránulos dispersables, adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante adición de agua, proporcionan el principio activo en una mezcla con un agente de dispersión o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes de dispersión o agentes humectantes y los agentes de suspensión aptos se muestran como ejemplo mediante los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, tales como agentes edulcorantes, aromatizantes o colorantes.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar también en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal (por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuete) o un aceite mineral (por ejemplo, parafina líquida) o mezclas de los mismos. Agentes de emulsionates adecuados pueden ser gomas que se dan en la naturaleza (por ejemplo, goma arábiga o goma tragacanto), fosfátidos que se dan en la naturaleza (por ejemplo, soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol), anhídridos (por ejemplo, monooleato de sorbitano) y productos de condensación de ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol con el óxido de etileno (por ejemplo, monoleato de polioxietilensorbitol). Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y/o aromatizantes.

Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, tales como glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones también pueden comprender uno o más emolientes, conservantes, agentes aromatizantes y/o agentes colorantes.

Una composición farmacéutica puede prepararse como una suspensión oleaginosa o acuosa inyectable estéril. El compuesto, dependiendo del vehículo o concentración usada, se puede o bien disolver o bien suspender en el vehículo. Una composición de este tipo se puede formular según la técnica conocida usando agentes de suspensión y/o agentes humectantes, dispersantes adecuados tales como los mencionados anteriormente. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden utilizar están agua, 1,3-butanodiol, la disolución de Ringer y la disolución isotónica de cloruro de sodio. Además, pueden emplearse aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Con este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico se usan en la preparación de composiciones inyectables, y pueden disolverse en el vehículo adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes y/o agentes de tamponamiento.

También pueden prepararse composiciones farmacéuticas en forma de supositorios (por ejemplo, para la administración rectal). Pueden preparar tales composiciones mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas ambiente comunes pero líquido a la temperatura rectal y por tanto se ablandará en el recto para liberar el fármaco. Excipientes adecuados incluyen, por ejemplo, manteca de cacao y polietilenglicoles.

Para su administración a animales no humanos, la composición también se puede añadir al agua para beber o el alimento para animales. Puede ser conveniente formular composiciones de agua para beber o alimento para animales de modo que el animal tome una cantidad apropiada de la composición junto con su dieta. También puede ser conveniente presentar la composición como una premezcla para su adición al agua para beber o el alimento.

Las composiciones farmacéuticas pueden formularse como formulaciones de liberación sostenida, (es decir, una formulación tal como una cápsula que efectúa una liberación lenta del compuesto después de la administración). Tales formulaciones pueden prepararse generalmente usando tecnología bien conocida y administrarse mediante, por ejemplo, implantación oral, rectal o subcutánea, o mediante implantación en el sitio diana deseado. Los vehículos para su uso en tales formulaciones son biocompatibles, y pueden ser también biodegradables; preferiblemente la formulación proporciona un nivel relativamente constante de liberación del compuesto activo. La cantidad de compuesto contenida en una formulación de liberación sostenida depende del sitio de implantación, la velocidad y la duración de la liberación esperada y la naturaleza del estado que ha de tratarse o prevenirse.

Los compuestos proporcionados en el presente documento están generalmente presentes en una composición farmacéutica en una cantidad terapéuticamente eficaz. Una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad que da como resultado un beneficio para el paciente perceptible, tal como una disminución de los síntomas de un trastorno del SNC. Una concentración preferida es aquella que es suficiente para inhibir la unión de ligando de receptor GABA_{A} al receptor GABA_{A} in vitro. Se prefieren composiciones que proporcionan niveles de dosificación que oscila desde aproximadamente de 0,1 mg a aproximadamente 140 mg por kilogramo de peso corporal por día (aproximadamente de 0,5 mg a aproximadamente 7 g por paciente humano por día). La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales del vehículo para producir una forma de dosificación única variarán dependiendo del huésped tratado y el modo de administración en particular. Las formas de unidad de dosificación generalmente contendrán entre desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 500 mg de un principio activo. Sin embargo, se entenderá que la dosis óptima para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; el tiempo y vía de administración; la tasa de excreción; cualquier tratamiento simultáneo, tal como una combinación de fármacos; y el tipo y la gravedad de la enfermedad particular que está bajo tratamiento. Pueden establecerse dosificaciones óptimas usando pruebas rutinarias, y procedimientos que se conocen bien en la técnica.

Pueden envasarse las composiciones farmacéuticas para tratar un trastorno del SNC tal como ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer. Las composiciones farmacéuticas envasadas incluyen un envase que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto tal como se describe en el presente documento e instrucciones (por ejemplo, etiquetado) indicando que la composición contenida ha de usarse para tratar el trastorno del SNC.

Métodos de uso

En determinados aspectos, la presente invención proporciona métodos para inhibir el desarrollo de un trastorno del SNC. En otras palabras, los métodos terapéuticos proporcionados en el presente documento pueden usarse para tratar un trastorno, o pueden usarse para prevenir o retardar la aparición de un enfermedad de este tipo en un paciente que está libre de un trastorno del SNC detectable. Los trastornos del SNC se discuten en más detalle a continuación, y pueden diagnosticarse y monitorizarse usando criterios que se han establecido en la técnica. Los pacientes pueden incluir seres humanos, animales de compañía domesticados (mascotas, tales como perros) y animales de ganado, con regímenes de tratamiento y dosificaciones tal como se describió anteriormente.

La frecuencia de dosificación puede variar dependiendo del compuesto usado y de la enfermedad en particular que ha de tratarse o prevenirse. En general, para el tratamiento de la mayoría de los trastornos, se prefiere un régimen de dosificación de 4 veces al día o menos. Para el tratamiento de los trastornos de sueño es deseable una dosis única que alcance rápidamente concentraciones eficaces. Generalmente, puede monitorizarse a los pacientes para determinar la eficacia terapéutica usando ensayos adecuados para el estado que se están tratando o previniendo, que será conocido para los expertos en la técnica.

En realizaciones preferidas, los compuestos proporcionados en el presente documento se usan para tratar pacientes que necesitan tratamiento de este tipo, en una cantidad suficiente para alterar los síntomas de un trastorno del SNC. Los compuestos que actúan como agonistas en los subtipos \alpha_{2}\beta_{3}\gamma_{2} y \alpha_{3}\beta_{3}\gamma_{2} del receptor son particularmente útiles para tratar trastornos de ansiedad tales como trastorno de pánico, trastorno obsesivo compulsivo y trastorno de ansiedad generalizada; trastornos de estrés incluyendo trastorno de estrés postraumático, y trastorno de estrés agudo. Compuestos que actúan como agonistas en los subtipos \alpha_{2}\beta_{3}\gamma_{2} y \alpha_{3}\beta_{3}\gamma_{2} del receptor también son útiles para tratar trastornos depresivos o bipolares y para tratar trastornos del sueño. Los compuestos que actúan como agonistas inversos en el subtipo \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2} del receptor o en los subtipos \alpha_{1}\beta_{2}\gamma_{2} y \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2} del receptor son particularmente útiles para tratar trastornos cognitivos incluyendo los que resultan del Síndrome de Down, enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, y demencia relacionada a accidente cerebrovascular. Los compuestos de la invención que actúan como agonistas inversos en el \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2} son particularmente útiles para tratar trastornos cognitivos a través del aumento de la memoria y particularmente memoria a corto plazo, en pacientes con memoria deteriorada. Los compuestos que actúan como agonistas en el subtipo \alpha_{1}\beta_{2}\gamma_{2} del receptor son útiles para tratar trastornos convulsivos como la epilepsia. Los compuestos que actúan como antagonistas en el sitio de benzodiacepina son útiles para invertir el efecto de una sobredosis de benzodiacepina y para tratar la adicción a fármacos y alcohol.

Los trastornos del SNC que pueden tratarse usando compuestos y composiciones proporcionados en el presente documento incluyen:

Depresión, por ejemplo, depresión, depresión atípica, trastorno bipolar y fase de depresión del trastorno bipolar.

Ansiedad, por ejemplo, trastorno de ansiedad generalizada (GAD), agorafobia, trastorno de pánico +/- agorafobia, fobia social, fobia específica, trastorno de estrés postraumático, trastorno obsesivo compulsivo (OCD), distimia, trastornos de adaptación con alteración del humor y ansiedad, trastorno de ansiedad de separación, trastorno de ansiedad anticipatoria agudo, trastornos de adaptación, ciclotimia.

Trastornos del sueño, por ejemplo, trastornos del sueño incluyendo insomnio primario, trastorno del ritmo circadiano del sueño, disomnia no especificada (NOS), parasomnias que incluyen el trastorno por pesadillas, trastorno del terror nocturno, trastornos del sueño secundarios a la depresión, ansiedad y/o otros trastornos mentales y trastorno del sueño inducido por sustancias.

Deterioro de la cognición, por ejemplo, deterioro de la cognición, enfermedad de Alzheimer, enfermedad del Parkinson, deterioro cognitivo leve (MCI), deterioro cognitivo relacionado con la edad (ARCD), accidente cerebrovascular, lesión traumática cerebral, demencia asociada al SIDA, y demencia asociada a depresión, ansiedad o psicosis.

Trastorno por déficit de atención, por ejemplo, trastorno por déficit de atención (ADD), y trastorno por déficit de atención con hiperactividad (ADHD).

En un aspecto separado, la presente invención proporciona métodos para potenciar la acción (o efecto terapéutico) de otro(s) agente(s) del SNC. Tales métodos comprenden administrar una cantidad eficaz de un compuesto proporcionado en el presente documento en combinación con otro agente del SNC. Tales agentes del SNC incluyen, pero no se limitan a los siguientes: para la ansiedad, agonistas y antagonistas del receptor de serotonina (por ejemplo, 5-HT_{1A}); para ansiedad y depresión, antagonistas del receptor de neuroquinina o antagonistas del receptor del factor liberador de corticotropina (CRF_{1}); para trastornos del sueño, agonistas del receptor de melatonina; y para trastornos neurodegenerativos, tales como demencia tipo Alzheimer, agonistas nicotínicos, agentes muscarínicos, inhibidores de acetilcolinesterasa y agonistas del receptor de dopamina. En las realizaciones preferidas, la presente invención proporciona un método de potenciar la actividad antidepresiva de los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) administrando una cantidad eficaz de un compuesto agonista de GABA de la invención en combinación con un ISRS. Una cantidad eficaz de compuesto es una cantidad suficiente para dar como resultado un cambio detectable en los síntomas del paciente, cuando se compara con un paciente tratado con el otro agente del SNC solo.

La administración en combinación puede llevarse a cabo de un modo análogo al descrito en Da-Rocha, et al., J. Psychopharmacology (1997) 11(3) 211-218; Smith, et al., Am. J. Psychiatry (1998) 155 (10) 1339-45; o Le, et al., Alcohol and Alcoholism (1996) 31 Supl. 127-132. Véase también la discusión del uso del ligando del receptor GABA_{A} 3-(5-metilisoxazol-3-il)-6-(1-metil-1,2,3-triazol-4-il)metiloxi-1,2,4-triazolo[3,4-a]ftalazina en combinación con agonistas nicotínicos, agonistas muscarínicos y además, el documento WO 99/37303 describe el uso de una clase de ligandos del receptor GABA_{A}, 1,2,4-triazolo[4,3-b]piridazinas, en combinación con los ISRS.

La presente invención también se refiere a métodos de inhibir la unión de compuestos de benzodiacepina, tales como Rol5-1788, o GABA, a los receptores GABA_{A}. Tales métodos implican poner en contacto un compuesto proporcionado en el presente documento con células que expresan el receptor GABA_{A}, en los que el compuesto está presente en una cantidad suficiente para inhibir la unión de benzodiacepina o GABA a receptores GABA_{A} in vitro. Este método incluye inhibir la unión de compuestos de benzodiacepina a receptores GABA_{A} in vivo (por ejemplo, en un paciente al que se le administra una cantidad de un compuesto proporcionado en el presente documento que sería suficiente para inhibir la unión de compuestos de benzodiacepina o GABA a receptores GABA_{A} in vitro). En una realización, los métodos de este tipo son útiles para tratar la sobredosis de fármaco de benzodiacepina. La cantidad de un compuesto que sería suficiente para inhibir la unión de un compuesto de benzodiacepina al receptor GABA_{A} puede determinarse fácilmente mediante un ensayo de unión al receptor GABA_{A}, tal como el ensayo descrito en el ejemplo 5.

En aspectos separados, la presente invención proporciona una variedad de usos in vitro para los compuestos proporcionados en el presente documento. Por ejemplo, pueden usarse compuestos de este tipo como sondas para la detección y localización de receptores GABA_{A}, en muestras tales como cortes de tejido, como controles positivos en ensayos para determinar la actividad del receptor, como patrones y reactivos para determinar la capacidad de un agente candidato a unirse al receptor GABA_{A}, o como radiotrazadores para la obtención de imágenes por tomografía por emisión de positrones (TEP) o por tomografía computerizada por emisión de fotones únicos (SPECT). Tales ensayos pueden usarse para caracterizar receptores GABA_{A} en sujetos vivos. Tales compuestos también son útiles como patrones y reactivos para determinar la capacidad de un posible producto farmacéutico para unirse al receptor GABA_{A}.

Dentro de los métodos para determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en una muestra, puede incubarse una muestra con un compuesto tal como se proporciona en el presente documento, en condiciones que permiten la unión del compuesto al receptor a GABA_{A}. Luego se detecta la cantidad de compuesto unida al receptor GABA_{A} en la muestra. Por ejemplo, puede marcarse un compuesto usando cualquiera de una variedad de técnicas muy conocidas (por ejemplo, radiomarcado con un radionúclido tal como tritio, tal como se describe en el presente documento), e incubarse con la muestra (que puede ser, por ejemplo, una preparación de células cultivadas, una preparación de tejido o una fracción de las mismas). Puede determinarse generalmente un tiempo de incubación adecuado sometiendo a ensayo el nivel de unión que se produce durante un periodo de tiempo. Tras la incubación, se elimina el compuesto no unido, y el compuesto unido detectado usando cualquier método para el marcador empleado (por ejemplo, autorradiografía o recuento de centelleo para compuestos radiomarcados; pueden usarse métodos espectroscópicos para detectar grupos luminiscentes y grupos fluorescentes). Como control, puede ponerse en contacto simultáneamente una muestra apareada con un compuesto radiomarcado y una cantidad mayor de un compuesto no marcado. Luego se elimina del mismo modo el compuesto no marcado y marcado no unido, y se detecta el marcador unido. Una cantidad mayor de marcador detectable en la muestra de prueba que en el control indica la presencia de capsaicina en la muestra. Los ensayos de detección, incluyendo autorradiografía del receptor (trazado de mapas receptoriales) de receptores GABA_{A} en células cultivadas o muestras de tejido, pueden realizarse tal como se describe por Kuhar en las secciones 8.1.1 a 8.1.9 de Current Protocols in Pharmacology (1998) John Wiley & Sons, Nueva York.

Los compuestos proporcionados en el presente documento también pueden usarse en una variedad de métodos de separación celular y cultivos celulares muy conocidos. Por ejemplo, los compuestos pueden unirse a la superficie interna de una placa de cultivo de tejido u otro soporte de cultivo celular, para su uso para inmovilizar las células que expresan el receptor GABA_{A} para selecciones, ensayos y crecimiento en cultivo. Puede realizarse una unión de este tipo mediante cualquier técnica adecuada, tal como los métodos descritos anteriormente, así como otras técnicas convencionales. Los compuestos también pueden usarse para facilitar la separación e identificación celular in vitro, permitiendo la selección de las células que expresan un receptor GABA_{A}. Preferiblemente, el/los compuesto(s) para su uso en métodos de este tipo están marcados tal como se describe en el presente documento. En una realización preferida, un compuesto unido a un marcador fluorescente, tal como fluoresceína, se pone en contacto con las células, que luego se analizan mediante separación de células activadas por fluorescencia (FACS).

Entre otros aspectos, se proporcionan métodos para modular la unión del ligando a un receptor GABA_{A} in vitro o in vivo, que comprenden poner en contacto un receptor GABA_{A} con una cantidad suficiente de un compuesto proporcionado en el presente documento, en condiciones adecuadas para la unión del ligando al receptor. El receptor GABA_{A} puede estar presente en disolución, en una preparación celular aislada o cultivada o dentro de un paciente. Preferiblemente, el receptor GABA_{A} está presente en el cerebro de un mamífero. En general, la cantidad de compuesto puesta en contacto con el receptor debería ser suficiente para modular la unión del ligando al receptor GABA_{A} in vitro en, por ejemplo, un ensayo de unión, tal como se describió en el ejemplo 5.

En el presente documento también se proporcionan métodos para alterar la actividad de transducción de señales del receptor GABA_{A} (particularmente la conductancia del ion cloruro), poniendo en contacto el receptor GABA_{A}, o bien in vitro o bien in vivo, con una cantidad suficiente de un compuesto tal como se describió anteriormente, en condiciones adecuadas para la unión del ligando al receptor. El receptor GABA_{A} puede estar presente en disolución, en una preparación celular aislada o cultivada, o en dentro de un paciente. En general, la cantidad de compuesto puesta en contacto con el receptor debería ser suficiente para modular la unión de ligando al receptor GABA_{A} in vitro en, por ejemplo, un ensayo de unión tal como se describe en el ejemplo 5. Puede evaluarse un efecto sobre la actividad de transducción de señales como una alteración en la electrofisiología de las células, usando técnicas convencionales. Si el receptor está presente en un animal, puede detectarse una alteración en la electrofisiología de la célula como un cambio en la conducta alimentaria del animal. Puede determinarse la cantidad de un compuesto que sería suficiente para alterar la actividad de transducción de señales de los receptores GABA_{A} mediante un ensayo de transducción de señal del receptor GABA_{A}, tal como el ensayo descrito en el ejemplo 6. Las células que expresan los receptores GABA in vivo pueden ser, pero no se limitan a, células neuronales o células cerebrales. Tales células pueden ponerse en contacto con los compuestos de la invención a través del contacto con un fluido corporal que contiene el compuesto, por ejemplo, a través del contacto con el fluido cerebroespinal. La alteración de la actividad de transducción de señales de los receptores GABA_{A} in vitro puede determinarse a partir de un cambio detectable en la electrofisiología de las células que expresan receptores GABA_{A}, cuando células de este tipo se ponen en contacto con un compuesto de la invención en presencia de GABA.

El registro intracelular o el registro electrofisiológico de fijación de voltaje ("patch-clamp") puede usarse para cuantificar los cambios en la electrofisiología de las células. Puede usarse un cambio reproducible en el comportamiento de un animal al que se le administra un compuesto de la invención para indicar que se han producido cambios en la electrofisiología de las células del animal que expresan receptores GABA_{A}.

Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de ilustración, y no a modo de limitación. A menos que se indique lo contrario, todos los reactivos y disolventes son de calidad comercial habitual y se usan sin purificación adicional.

Ejemplos Ejemplo 1 Preparación de materiales de partida y productos intermedios

Pueden obtenerse los materiales de partida y diversos productos intermedios de fuentes comerciales, preparados a partir de compuestos orgánicos comercialmente disponibles, o preparados usando métodos sintéticos muy conocidos. A continuación se exponen ejemplos representativos de métodos para preparar productos intermedios de la invención.

A. Preparación de 5-amino-4-propilpirazolo-3-carboxilato de etilo

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Se añaden 144 ml de diisopropilamida de litio 2M en heptano/tetrahidrofurano/etilbenceno a -78°C, a una disolución de 20 g de valeronitrilo en 50 ml de tetrahidrofurano.

Se agita la mezcla a -78°C durante 1 hora, y entonces se añade a una disolución de 35,2 g de oxalato de dietilo en 100 ml de tetrahidrofurano. Se agita la disolución resultante a -78°C durante 3 horas. Se para bruscamente la reacción mediante adición de disolución acuosa de NH_{4}Cl seguida de HCl 3N. Se transfiere la mezcla de reacción a un embudo de decantación y se extrae con acetato de etilo. Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora para dar un aceite marrón. Se someten a reflujo el aceite, 23,3 g de hidracina monohidratada, 43 ml de ácido acético y 430 ml de tolueno durante la noche usando una trampa Dean Stark. Se elimina el disolvente in vacuo, y se divide el residuo entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio saturado. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se filtra. Se elimina el disolvente in vacuo, y se purifica el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo : hexanos = 1 : 1 para dar 12,1 g del compuesto del título como un sólido color hueso. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 0,95 (t, 3H), 1,38 (t, 3H), 1,55 (m, 2H), 2,58 (t, 2H), 4,36 (q, 2H). LC-EM (APCI, m/z) 198 (M+1).

B. Preparación de 5-metil-3-propil-7-oxo-4,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirimidina-2-carboxilato de etilo

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Se somete a reflujo una mezcla de 11,5 g de 5-amino-4-propilpirazolo-3-carboxilato de etilo, 11,3 g de acetoacetato de etilo, y 100 ml de ácido acético durante la noche. Se elimina el disolvente in vacuo, y se tritura el residuo con hexano/éter (1 : 1) para dar 14,8 g de sólido color hueso. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta: 0,97 (t, 3H), 1,40 (t, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,85 (t, 2H), 4,40 (q, 2H), 5,73 (s, 1H). LC-EM (APCI, m/z): 264 (M+1).

C. Preparación de 2-(hidroximetil)-5-metil-3-propil-4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-7-ona

18

A una disolución de 14,8 g de etil 5-metil-7-oxo-3-propil-4,7-dihidropirazolo[1,5-a]pirimidina-2-carboxilato en 600 ml de tetrahidrofurano, se añadieron 67,5 ml de hidruro de litio y aluminio 1 M en tetrahidrofurano. Se agita la mezcla de reacción durante 1 hora a 0°C, entonces se para bruscamente con carbonato de sodio decahidratado y se filtra a través de celite. Se concentra el filtrado in vacuo para dar 10,9 g de sólido amarillo. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta: 0,96 (t, 3H), 1,62 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,65 (t, 2H), 4,65 (s, 2H), 5,62 (s, 1H). LC-EM (APCI, m/z): 222 (M+1).

D. Preparación de 5-metil-3-propil-2-[(propilamino)metil]-4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-7-ona

19

Se añaden 1,4 g de cloruro de metanosulfonilo a una disolución de 1,6 g de 2-(hidroximetil)-5-metil-3-propil-4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-7-ona en 70 ml de cloroformo, 10 ml de N,N-dimetilformamida y 1,8 ml de trietilamina. Se agita la mezcla de reacción a 0°C durante 2 horas. Luego se añade la disolución a 20 ml de propilamina y se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se elimina el disolvente in vacuo, y se purifica el residuo mediante cromatografía de gel de sílice eluyendo con CHCl_{3} : MeOH : TEA = 90 : 10 : 1 para dar 0,91 g del compuesto como un sólido amarillo. ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta: 0,80 (as, 3H), 0,95 (t, 3H), 1,40 (as, 2H), 1,68 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,54 (as, 2H), 2,93 (t, 2H), 4,27 (s, 2H), 5,76 (s, 1H). LC-EM (APCI, m/z): 263 (M+1).

Ejemplo 2 Preparación de N-[(5-metil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida

20

A una disolución de 0,6 g de 5-metil-3-propil-2-[(propilamino)metil]-4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-7-ona en 10 ml de CHCl_{3} y 1 ml de TEA se añaden 0,55 g de cloruro de 3-fluorobenzoilo en 17 ml de tolueno. Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 horas. Se para bruscamente la reacción mediante la adición de agua, entonces se transfiere a un embudo de decantación. Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se filtra. Se elimina el disolvente in vacuo y se purifica el residuo mediante cromatografía de gel de sílice y se eluye con EA : MeOH : TEA = 10 : 2 : 1 para dar 0,67 g del compuesto del título como un sólido amarillo. Los datos de la ^{1}H RMN se recogen en la tabla 1. LC-EM (APCI, m/z): 385 (M+1).

Ejemplo 3 Preparación de N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida y N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(7a-hidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida

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21

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Se añaden 72,4 mg de yodometano a una disolución de 130 mg de N-[(5-metil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida y 70,4 mg de carbonato de potasio en 5 ml de N,N-dimetilformamida. Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, y se filtra. Se elimina el disolvente in vacuo y se purifica el residuo mediante TLC preparativa, eluyendo con CH_{2}Cl_{2} : MeOH = 9 : 1 para dar 60 mg de N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida como un aceite amarillo y 50 mg de N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(7a-hidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida como un sólido color hueso. Los datos de la ^{1}H RMN se recogen en las tablas I-III respectivamente. LC-EM (APCI, m/z): 399 (M+1).

Ejemplo 4

Los siguientes compuestos (tabla I, II y III) se preparan esencialmente según los procedimientos descritos anteriormente. La mayoría de los compuestos existen como mezclas de rotámeros, H y H’ indican las formas principal y secundaria respectivamente.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1

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TABLA 2

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TABLA III

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29

Ejemplo 5 Ensayo de unión del ligando

Se demuestra la afinidad de los compuestos de esta invención por el sitio de benzodiacepina del receptor GABA_{A} usando un ensayo de unión descrito esencialmente por Thomas y Tallman (J. Bio. Chem. 1981; 156: 9838-9842, y J. Neurosci. 1983; 3: 433-440).

Se disecciona un tejido cortical de rata y se homogeniza en 25 volúmenes (p/v) de tampón A (tampón tris HCl 0,05 M, pH 7,4 a 4°C). Se centrifuga el homogeneizado de tejido en frío (4°C) a 20.000 x g durante 20 minutos. Se decanta el sobrenadante, se vuelve a homogenizar en el mismo volumen de tampón, y se centrifuga de nuevo a 20.000 x g. Se decanta el sobrenadante de esta etapa de centrifugación y se almacena el gránulo a -20°C durante la noche. Luego se descongela el gránulo y se vuelve a suspender en 25 volúmenes de tampón A (peso/volumen original), se centrifuga a 20.000 x g y se decanta el sobrenadante. Se repite una vez esta etapa de lavado. Finalmente, se vuelve a suspender el gránulo en 50 volúmenes de tampón A.

Las incubaciones contenían 100 \mul de homogeneizado de tejido, 100 \mul de radioligando, (^{3}H-Rol5-1788 [^{3}H-Flumazenil 0,5 nM], actividad específica 80 Ci/mmol), y compuesto de prueba o control (véase a continuación), y se llevan a un volumen total de 500 \mul con tampón A. Se mantienen las incubaciones durante 30 min. a 4°C y luego se filtran rápidamente a través de filtros Whatman GFB para separar ligando unido y libre. Se lavan los filtros dos veces con tampón A nuevo y se cuentan en un contador de centelleo. Se determina la unión no específica (control) mediante desplazamiento de ^{3}H Rol5-1788 con 10 \muM de diazepán (Research Biochemicals International, Natick, MA). Se recogen los datos por triplicado, se promedian, se calcula para cada compuesto el porcentaje de inhibición de la unión específica total (unión específica total = no específica total).

Se genera una curva de unión competitiva con hasta 11 puntos que abarcan el intervalo de concentraciones del compuesto desde 10^{-12} M hasta 10^{-5} M obtenidas por curva mediante el método descrito anteriormente para determinar el porcentaje de inhibición. Se calculan los valores de K_{i} según la ecuación de Cheng-Prussof. Cada uno de los compuestos de los ejemplos anteriores tiene una K_{i} de < 1 \muM en este ensayo. Los compuestos preferidos de la invención muestran valores de K_{i} inferiores a 100 nM y los compuestos más preferidos de la invención muestran valores de K_{i} inferiores a 10 nM.

Ejemplo 6 Electrofisiología

Se usa el siguiente ensayo para determinar si un compuesto de la invención actúa como un agonista, un antagonista o un agonista inverso en el sitio de benzodiacepina del receptor GABA_{A}.

Los ensayos se llevan a cabo esencialmente tal como se describe en White y Gurley (NeuroReport 6: 1313-1316, 1995) y White, Gurley, Hartnett, Stirling, y Gregory (Receptors and Channels 3: 1-5, 1995) con modificaciones. Los registros electrofisiológicos se llevan a cabo usando la técnica de fijación del voltaje de dos electrodos a un potencial de sujeción de la membrana de -70 mV. Se aíslan enzimáticamente los oocitos de Xenopus Laevis y se les inyecta ARNc no poliadenilado mezclado en una razón de 4: 1: 4 para las subunidades \alpha, \beta, y \gamma respectivamente. De las nueve combinaciones de las subunidades \alpha, \beta, y \gamma en las publicaciones de White et al., las combinaciones preferidas son \alpha_{1}\beta_{2}\gamma_{2}, \alpha_{2}\beta_{3}\gamma_{2}, \alpha_{3}\beta_{3}\gamma_{2}, \alpha_{5}\beta_{3}\gamma_{2}. Preferiblemente todas las subunidades de ARNc en cada combinación son clones de ser humano o clones de rata. La secuencia de cada una de estas subunidades clonadas está disponible en GENBANK, por ejemplo, \alpha_{1} de ser humano, número de registro de GENBANK X14766, \alpha_{2} de ser humano, número de registro de GENBANK A28100; \alpha_{3} de ser humano, número de registro de GENBANK A28102; \alpha_{5} de ser humano, número de registro de GENBANK A28104; \beta_{2} de ser humano, número de registro de GENBANK M82919; \beta_{3} de ser humano, número de registro de GENBANK Z20136; \gamma_{2} de ser humano, número de registro de GENBANK X15376; \alpha_{1} de rata, número de registro de GENBANK L08490, \alpha_{2} de rata, número de registro de GENBANK L08491; \alpha_{3} de rata, número de registro de GENBANK L08492; \alpha_{5} de rata, número de registro de GENBANK L08494; \beta_{2} de rata, número de registro de GENBANK X15467; \beta_{3} de rata, número de registro de GENBANK X15468; y \gamma_{2} de rata, número de registro de GENBANK L08497. Para cada combinación de subunidades se inyecta mensaje suficiente para cada subunidad constituyente para proporcionar amplitudes de corriente de >10 nA cuando se aplica GABA 1 uM.

Se evalúan los compuestos frente a una concentración de GABA que provoca < 10% de la corriente máxima que puede provocarse por GABA (por ejemplo, l \muM-9 \muM). Se expone cada oocito a concentraciones que aumentan de un compuesto que se está evaluando (compuesto de prueba) con el fin de evaluar una relación concentración/efecto. Se calcula la eficacia del compuesto de prueba como un cambio en el porcentaje de la amplitud de corriente: 100* ((Ic/I)-1), en la que Ic es la amplitud de corriente provocada por GABA observada en presencia del compuesto de prueba e I es la amplitud de corriente provocada por GABA observada en ausencia del compuesto de prueba.

Se determina la especificidad de un compuesto de prueba para el sitio de benzodiacepina tras la finalización de una curva concentración/efecto. Tras lavar suficientemente el oocito para eliminar el compuesto de prueba aplicado previamente, se expone el oocito a GABA + 1 \muM R015-1788 + compuesto de prueba. Se calcula el cambio en el porcentaje debido a la adición del compuesto tal como se describió anteriormente. Se resta cualquier cambio en el porcentaje observado en presencia de R015-1788 de los cambios en el porcentaje de la amplitud de corriente observada en ausencia de 1 \muM R015-1788. Se usan estos valores netos para el cálculo de la eficacia promedio y los valores de EC_{50} mediante métodos convencionales. Para evaluar la eficacia promedio y los valores de EC_{50}, se promedian los datos concentración/efecto frente a las células y se ajustan a la ecuación logística.

Ejemplo 7 Ensayo de citotoxicidad MDCK

Este ejemplo ilustra la evaluación de la toxicidad de un compuesto usando un ensayo de citotoxicidad de célula de riñón canino Madin Darby ((MDCK) Madin Darby canine kidney).

Se añade 1 \mul de compuesto de prueba a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de fondo transparente (PACKARD, Meriden, CT) para dar una concentración final de compuesto en el ensayo de 10 micromolar, 100 micromolar o 200 micromolar. Se añade disolvente sin compuesto de prueba a los pocillos control.

Se mantienen las células de MDCK, ATCC número CCL-34 (American Type Culture Collection, Manassas, VA), en condiciones estériles siguiendo las instrucciones de la hoja de información de producción de ATCC. Se tripsinizan las células de MDCK confluentes, se recogen y se diluyen hasta una concentración de 0,1 x 10^{6} células/ml con medio templado (37°C) (medio esencial mínimo Eagle, VITACELL, catálogo ATCC número 30-2003). Se añaden 100 \mul de células diluidas a cada pocillo, excepto a cinco pocillos control de la curva patrón que contienen 100 \mul de medio templado sin células. Luego se incuba la placa a 37°C bajo O_{2} al 95%, CO_{2} al 5% durante 2 horas con agitación constante. Tras la incubación, se añaden 50 \mul de disolución de lisis de células mamíferas por pocillo, se cubren los pocillos con pegatinas PACKARD TOPSEAL, y se agitan las placas a aproximadamente 700 rpm sobre un agitador adecuado durante 2 minutos.

Los compuestos que provocan toxicidad disminuirán la producción de ATP, en relación a las células no tratadas. El kit de detección de ATP luminiscente, PACKARD (Meriden, CT), ATP-LITE-M, número de producto 6016941, se usa generalmente según las instrucciones del fabricante para medir la producción de ATP en células de MDCK tratadas y no tratadas. Se deja que los reactivos PACKARD ATP LITE-M se equilibren hasta temperatura ambiente. Una vez equilibrados, se reconstituye la disolución de sustrato liofilizada en 5,5 ml de disolución tampón de sustrato (del kit). Se reconstituye la disolución estándar de ATP liofilizada en agua desionizada para dar una disolución madre 10 mM. Para los cinco pocillos control se añaden 10 \mul de disolución estándar PACKARD diluida consecutivamente, en cada pocillo control de la curva patrón, para dar una concentración final en cada pocillo consecutivo de 200 nM, 100 nM, 50 nM, 25 nM y 12,5 nM. Se añade la disolución de sustrato PACKARD (50 \muL) a todos los pocillos, que luego se cubren, y se agitan las placas a aproximadamente 700 rpm sobre un agitador adecuado durante 2 minutos. Se une una pegatina blanca PACKARD al fondo de cada placa y se adaptan las mezclas a la oscuridad envolviendo las placas en lámina de metal y colocándolas en la oscuridad durante 10 minutos. Luego se mide la luminiscencia a 22°C usando un contador de luminiscencia (por ejemplo, contador de luminiscencia y centelleo de microplaca PACKARD TOPCOUNT o TECAN SPECTRAFLUOR PLUS), y se calculan los niveles de ATP a partir de la curva patrón. Se comparan los niveles de ATP en las células tratadas con compuesto(s) de prueba con los niveles determinados para células no tratadas. La células tratadas con 10 \muM de un compuesto de prueba preferido muestran niveles de ATP que son al menos del 80%, preferiblemente al menos del 90%, de las células no tratadas. Cuando se usa una concentración 100 \muM del compuesto de prueba, las células tratadas con compuestos de prueba preferidos muestran niveles de ATP que son al menos del 50%, preferiblemente al menos del 80%, de los niveles de ATP detectados en células no tratadas.

Claims

1. Compuesto de fórmula

30

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que

n es 1, 2 ó 3;

31

R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; o

R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de hidrógeno; acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, en el que cada acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6} está opcionalmente sustituido con hasta 3 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino;

R_{6} y R_{6}’ se eligen independientemente en cada caso de hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};

W es fenilo, sustituido opcionalmente con hasta 5 grupos seleccionados independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono o dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

32

3. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{1}-C_{6}.

5. Compuesto según la reivindicación 1, en el que

R_{1} y R_{2} junto con los átomos a los que están unidos forman un anillo carbocíclico parcialmente saturado o insaturado de desde 3 hasta 8 átomos de carbono, en el que el anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente H o alquilo C_{1}-C_{6}.

6. Compuesto según la reivindicación 5, en el que

R_{1} y R_{2} junto con los átomos a los que están unidos forman un ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, cicloheptatrienilo, cicloheptadienilo, fenilo, ciclooctadienilo, y ciclooctenilo, en el que cada anillo está opcionalmente sustituido por hasta 5 sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, amino, mono y dialquilamino C_{1}-C_{6}, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}; y

R_{3}, R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{1}-C_{4}.

7. Compuesto de fórmula

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33

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

n es 1, 2, ó 3;

R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de (i) hidrógeno; y (ii) acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, opcionalmente sustituidos con hasta tres sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino;

8. Compuesto de fórmula

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34

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

n es 1,2, ó 3;

9. Compuesto según la reivindicación 4 de fórmula

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35

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

m es 1, 2 ó 3;

R representa hasta 5 grupos elegidos independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6};

R_{6} y R_{6}’ se eligen independientemente de hidrógeno, metilo, y etilo, y

R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

10. Compuesto según la reivindicación 9 de fórmula:

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36

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

R_{3}, R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de (i) hidrógeno; y (ii) acilo C_{1}-C_{6} y alquilo C_{1}-C_{6}, opcionalmente sustituidos con hasta tres sustituyentes elegidos independientemente de halógeno, hidroxilo, haloalquilo (C_{1}-C_{2}), haloalcoxilo (C_{1}-C_{2}), metoxilo, etoxilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, fenilo, piridilo, y pirimidilo, en el que cada uno de fenilo, piridilo, y pirimidilo está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos elegidos independientemente de halógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxilo C_{1}-C_{6}, hidroxilo y amino;

R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

11. Compuesto según la reivindicación 10, en el que:

R_{3} es hidrógeno, metilo o etilo;

R_{4} y R_{5} son independientemente alquilo C_{2}-C_{6}; y

R_{10}, R_{11}, X, W, Y y Z son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo.

12. Compuesto según la reivindicación 7, en el que:

n es 1; y

R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, amino, haloalquilo C_{1}-C_{6}, haloalcoxilo C_{1}-C_{6}, alquilo C_{1}-C_{6} y alcoxilo C_{1}-C_{6}.

13. Compuesto según la reivindicación 12, en el que:

R_{1}, R_{2} y R_{3} se eligen independientemente de hidrógeno, metilo y etilo;

R_{4} y R_{5} se eligen independientemente de alquilo C_{2}-C_{6} y bencilo;

R_{10}, R_{11}, X, Y y Z se seleccionan independientemente de hidrógeno, halógeno y metilo; y

R_{6} y R_{6}’ son ambos hidrógeno.

14. Compuesto según la reivindicación 7, en el que n es 1.

15. Compuesto según la reivindicación 14, en el que:

R_{1} y R_{2} se eligen independientemente de hidrógeno, metilo y etilo;

R_{3} es metilo o etilo;

R_{6} y R_{6}’ son ambos hidrógeno; y

R_{10}, R_{11}, X, W, Y y Z se eligen independientemente de hidrógeno, halógeno, metilo y metoxilo.

16. Compuesto según la reivindicación 1, que es:

N-[(3-etil-4,5-dimetil-7-oxo(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(4,5-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-bencil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7a-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))-metil]-N-propil-(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil-(3-clorofenil)carboxamida;

N-etil-N-[(3-etil-5-metil-7-oxo-(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](2,5-difluorofenil)carboxamida;

N-[(5,6-dimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida; o

N-propil-N[(4,5,6-trimetil-7-oxo-3-propil(4,7-dihidropirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil](2,5-difluorofenil)carboxamida.

17. Compuesto según la reivindicación 1, que es

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil-(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil-(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-fluorofenil)carboxamida.

18. Compuesto según la reivindicación 1, que es

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(7-metoxi-5-metil-3-propil(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida; o

N-[(3-etil-7-metoxi-5-metil(pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-(2-metilpropil)(2,5-difluorofenil)carboxamida.

19. Compuesto según la reivindicación 1, que es

N-[(3-etil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-fluorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-clorofenil)carboxamida; o

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(3-clorofenil)carboxamida;

N-[(3-etil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida; o

N-[(3-etil-4-metil-8-oxo-(4,5,6,7,8a-pentahidrociclopenta[2,1-d]pirazolo[1,5a]pirimidin-2-il))metil]-N-propil(2,5-difluorofenil)carboxamida.

20. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8 y 9, en combinación con un vehículo o excipiente fisiológicamente aceptable.

21. Composición farmacéutica según la reivindicación 20 en la que la composición farmacéutica se formula como un líquido inyectable, un aerosol, una crema, un gel, una píldora, una cápsula, un jarabe, o un parche transdérmico.

22. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, y 9 para la preparación de un medicamento para potenciar un efecto terapéutico de un agente del SNC.

23. Método in vitro para determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en una muestra, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra con un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, y 9 en condiciones que permiten la unión del compuesto al receptor GABA_{A}; y

(b) detectar un nivel del compuesto unido al receptor GABA_{A}, y de ahí determinar la presencia o ausencia del receptor GABA_{A} en la muestra.

24. Método según la reivindicación 23, en el que el compuesto está radiomarcado, y en el que la etapa de detección comprende:

(i) separar el compuesto no unido del compuesto unido; y

(ii) detectar la presencia o ausencia del compuesto unido en la muestra.

25. Método según la reivindicación 24 en el que se detecta la presencia o ausencia del compuesto unido usando autorradiografía.

26. Método para alterar la actividad de transducción de señales del receptor GABA_{A}, que comprende poner en contacto una célula que expresa el receptor GABA_{A} in vitro, con un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 7, 8, y 9 en una cantidad suficiente para alterar de manera detectable la electrofisiología de la célula, y por tanto alterar la actividad de transducción de señales del receptor GABA_{A}.

27. Método según la reivindicación 26 en el que la célula expresa de manera recombinante un receptor GABA_{A} heterólogo, en el que la alteración de la electrofisiología de la célula se detecta mediante el registro intracelular o el registro electrofisiológico de fijación de voltaje ("patch-clamp").

28. Método de la reivindicación 26 en el que la célula es una célula neuronal y la disolución es un fluido corporal.

29. Método de la reivindicación 28 en el que la célula es una célula de cerebro humano, y el fluido es fluido cerebroespinal.

30. Composición farmacéutica envasada que comprende la composición farmacéutica según la reivindicación 20 en un envase y las instrucciones para usar la composición para tratar a un paciente que sufre de ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer.

31. Compuesto según la reivindicación 1, 7, 8, ó 9 en el que un ensayo del receptor GABA_{A} que se une al compuesto presenta una K_{i} de 1 micromolar o inferior.

32. Compuesto según la reivindicación 1, 7, 8, ó 9 en el que en un ensayo del receptor GABA_{A} que se une al compuesto presenta una K_{i} de 100 nanomolar o inferior.

33. Compuesto según la reivindicación 1, 7, 8, ó 9 en el que un ensayo del receptor GABA_{A} que se une al compuesto presenta una K_{i} de 10 nanomolar o inferior.

34. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, 7, 8, ó 9 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de ansiedad, depresión, un trastorno del sueño, trastorno por déficit de atención, o demencia tipo Alzheimer.