ES2320851T3

ES2320851T3 - Composicion lipidica marina para alimentar organismos acuaticos.

Info

Publication number: ES2320851T3
Application number: ES01900244T
Authority: ES
Inventors: Olafur Halldorsson; Baldur Hjaltason; Gudmundur G. Haraldson
Original assignee: Epax Norway AS
Current assignee: Epax Norway AS
Priority date: 2000-01-14
Filing date: 2001-01-15
Publication date: 2009-05-29
Anticipated expiration: 2021-01-15
Also published as: WO2001050884A1; CN100379357C; US20030124218A1; JP2003519501A; EP1250058A1; JP5096656B2; US7063855B2; CA2397216A1; NO20023375L; PT1250058E; ATE419756T1; DK1250058T3; CA2397216C; IS6464A; IS2642B; EP1250058B1; CN1400868A; DE60137308D1; AU2001223942A1; NO20023375D0

Abstract

Composición para alimentar organismos presa para su uso en acuicultura, que comprende: - el 2-75% en peso de un componente lipídico de organismo marino que comprende al menos el 25% en peso de fosfolípidos, y que comprende - un componente lipídico adicional en una cantidad que da como resultado un contenido en ADH total de al menos el 30% en peso, proporcionando la composición un contenido en ADH de al menos el 30% en peso, un contenido en AEP en el intervalo del 2-15% y un contenido de AGAI n-3, distinto de ADH y AEP, que incluyen ácidos grasos 18:3, 18:4 y 20:4, en el intervalo del 2-25% en peso, teniendo la composición menos del 10% de ácidos grasos libres y una razón de ADH con respecto a AEP que es de al menos 3.

Description

Composición lipídica marina para alimentar organismos acuáticos.

Campo de la invención

La presente invención está dentro del campo de la acuicultura, en particular se proporciona una composición lipídica para alimentar organismos presa que se usan como alimento para larvas de pescado y larvas de crustáceos y bivalvos. Más específicamente, la invención proporciona composiciones lipídicas marinas que están altamente enriquecidas en su contenido de ácidos grasos altamente insaturados (AGAI), en particular ácido docosahexaenoico (ADH), y que tienen un alto contenido de fosfolípidos ricos en ADH.

Antecedentes técnicos y Técnica anterior

El consumo de especies marinas comestibles para las que hay una alta demanda de los consumidores tales como salmón, trucha, fletán y anguila está en aumento y debido a esta alta demanda y las reservas naturales limitadas, se ha dedicado mucho esfuerzo para desarrollar métodos de acuicultura rentables para la cría de tales especies. Un problema particularmente serio es garantizar una alta tasa de supervivencia de las larvas eclosionadas de las especies que están cultivándose.

La expansión de la industria de la acuicultura requiere tratar varios problemas, siendo uno de los más significativos la dificultad para suministrar organismos presa vivos que proporcionen un alimento nutricionalmente adecuado para las larvas. Los peces en estado larvario en la naturaleza consumen una población mixta de organismos presa de fitoplancton que proporciona una nutrición equilibrada. Sin embargo, la recogida de fitoplancton en cantidades suficientes para satisfacer la demanda en la acuicultura no es factible. Como alternativa, especies seleccionadas de organismos presa, en particular rotíferos y especies de Artemia, se cultivan y se usan actualmente como alimento.

Sin embargo, generalmente tales organismos presa cultivados artificialmente, aunque proporcionan cantidades adecuadas de proteína y energía, tienen una composición de lípidos que no es adecuada para cubrir los requisitos de ciertos AGAI, en particular ADH y AEP que son esenciales para la supervivencia, el crecimiento y el desarrollo óptimos de las larvas. Específicamente, se ha mostrado que se requiere un alto contenido de ADH y que la razón entre ADH y AEP en los organismos presa debe ser de al menos 1:1 y preferiblemente de al menos 2:1. Para proporcionar organismos presa que tengan una composición de este tipo con respecto a los AGAI es necesario cultivar los organismos en presencia de composiciones de enriquecimiento que tengan un alto contenido de ADH, preferiblemente al menos el 20% en peso y una razón de ADH con respecto a AEP que supere la razón pretendida en los organismos presa, tal como al menos 3:1 y preferiblemente superior.

Actualmente, está tratándose este problema cultivando los organismos presa en presencia de composiciones de enriquecimiento que permiten enriquecer los organismos con respecto a estos ácidos grasos esenciales. Sin embargo, las composiciones comerciales actualmente disponibles para este fin tales como los productos en emulsión vendidos bajo el nombre comercial Selco (TM), no cumplen los requisitos anteriores porque el contenido en ADH es relativamente bajo y/o la razón ADH:AEP no es suficientemente alta. Usando Artemia enriquecida con estas composiciones comerciales se han notificado tasas de supervivencia de larvas de peces en el intervalo del 12 al 15% (McEvoy et al. Aquaculture 163 (1998) 237-250; Navarro et al. J. Fish Biol. 43 (1993) 503-515). En este contexto, las tasas de supervivencia se definen como el porcentaje de supervivencia desde la primera alimentación hasta la metamorfosis. Para una producción de acuicultura rentable debe obtenerse una tasa de supervivencia larvaria del 50% y preferiblemente superior.

Otras composiciones disponibles comercialmente para el enriquecimiento de organismos presa son los productos vendidos bajo el nombre comercial Algamac (TM) que contienen hasta el 14% en peso de ADH, y el aceite orbital de atún (TOO, tuna orbital oil) que contiene hasta el 30% en peso de ADH.

El documento WO 99/37166 da a conocer un método para el enriquecimiento de organismos presa vivos con nutrientes esenciales para las larvas de peces basándose en el uso de polvos de jabón de ácido graso secos de AGAI obtenidos a partir del flujo residual de la extracción de aceite de algas marinas. El material de partida para proporcionar estos polvos tiene un contenido de fosfolípidos y aproximadamente el 28% en peso de ácidos grasos libres y contiene aproximadamente el 23% en peso de ADH pero aparentemente ningún otro ácido graso n-3. Se dan a conocer niveles de enriquecimiento de Artemia de aproximadamente el 2,7% de ADH en peso seco.

Otro material concebido para su uso en acuicultura se describe en el documento WO 99/06585. Los ejemplos dan a conocer un contenido en ADH del 24% en peso, pero no se da a conocer el contenido en fosfolípidos. Sin embargo, el material contiene una alta proporción de ácidos grasos libres (aproximadamente el 32-37% en peso) y un alto contenido de material no lipídico (aproximadamente el 39-44% en peso), lo que puede reducir la eficacia de captación de lípidos de los animales presa. Un alto contenido de ácidos grasos libres se considera generalmente perjudicial para las larvas y los juveniles de peces.

Ninguno de los dos últimos materiales mencionados es a base de pescado y pueden carecer de muchos AGAI que se encuentran en los peces, tales como AEP y otros ácidos grasos n-3.

El documento WO 96/17526 da a conocer una dieta de enriquecimiento para Artemia que comprende un 10-30% de triglicéridos ricos en AEP y ADH, y un 4-10% de fosfolípidos.

El documento JP 09 194362 A (Bizen Kasei KK) da a conocer composiciones para prevenir o mejorar trastornos hepáticos, que comprenden ADH y fosfolípidos. Como ejemplo se describe un extracto etanólico a partir de piel de sepia seca.

Tocher D.R. et al. (Aquaculture, vol. 148, nº 2, 3, enero de 1997, págs. 213-231) dan a conocer el uso de ensilados ricos en fosfolípidos preparados a partir de tejidos neurales de pescado como productos de enriquecimiento para rotíferos y Artemia. Un ensilado de cerebro/ojo de bacalao mostrado a modo de ejemplo tiene un contenido en lípidos del 18,2% basado en el peso seco total y un contenido en ADH del 23,1% como porcentaje con respecto a los lípidos totales.

Mourente, G. et al. (Comp. Biochem. Physiol. A, Vol. 104A, nº 3, 1993, págs. 605-611) tratan el destete de postlarvas de pargo desde una dieta de Artemia enriquecida hasta una dieta de gránulos secos.

El documento JP 05 316958 A (Riken Vitamin Co.) da a conocer el uso de huevas de tiburón para alimentar "crías de peces" (no larvas de peces). Sin embargo, las huevas de tiburón tienen un tamaño de partícula demasiado grande para alimentar larvas de peces.

En una revisión reciente de Sargent et al. (Aquaculture 179 (1999) 217-229) se enfatiza que además del requisito con respecto a los AGAI, las larvas de peces tienen un requisito dietético con respecto a los fosfolípidos y se destaca que la dieta ideal para las larvas de peces es una dieta que tiene una composición similar a la yema de los huevos. Según estos autores la yema de huevo de pescado contiene aproximadamente el 10% en peso (en una base de materia seca) de fosfolípidos que contienen aproximadamente el 17% en peso de ADH y aproximadamente el 9% en peso de AEP. Estos autores concluyen en su revisión que sigue habiendo un problema con respecto a cómo construir una dieta de este tipo a escala comercial a partir de los materiales disponibles actualmente.

Que sepamos, no ha sido posible, con el uso de las composiciones de alimentación comerciales mencionadas anteriormente, u otras composiciones experimentales de la técnica anterior, obtener niveles de enriquecimiento de ADH en Artemia que se aproximen a una dieta ideal, similar a la yema de huevo.

Se ha encontrado ahora que es posible proporcionar una composición lipídica para enriquecer organismos presa de acuicultura basándose en el uso de fosfolípidos ricos en ADH aislados a partir de materiales de organismo marino disponibles en abundancia tales como harina de pescado. Usando este material de partida ha resultado posible proporcionar composiciones de enriquecimiento a escala comercial, lo que hace posible proporcionar organismos presa que tienen, con respecto a los AGAI y fosfolípidos, una composición que es muy cercana a la de una yema de huevo de pescado y que por tanto son altamente apropiadas para garantizar una supervivencia, crecimiento, pigmentación y morfogénesis óptimos de larvas de pescado tales como larvas de fletán.

Sumario de la invención

Por consiguiente, en un primer aspecto la presente invención se refiere a una composición lipídica tal como se define en la reivindicación 1. En realizaciones útiles, la fuente de un componente lipídico rico en fosfolípidos en dicha composición son materiales de organismo marino disponibles en abundancia tales como harina de pescado. Esta composición según la invención es particularmente útil para proporcionar rotíferos y especies de Artemia que tienen una composición de lípidos apropiada para larvas de peces.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una emulsión que comprende como fase lipídica la composición anterior.

En un aspecto todavía adicional, la invención se refiere a un método de fabricación de una composición tal como se definió anteriormente, que comprende las etapas de separar de un material de organismo marino un componente lipídico crudo que comprende triglicéridos y fosfolípidos, seguido de una etapa de enriquecimiento en fosfolípidos que comprende añadir, a una temperatura a la que no precipitan los triglicéridos, un disolvente al componente lipídico crudo y enfriar la mezcla para precipitar los triglicéridos para obtener una fracción lipídica que comprende al menos el 25% en peso de fosfolípidos.

Descripción detallada de la invención

La composición según la invención, para alimentar organismos presa, comprende como su componente principal un componente rico en fosfolípidos.

En el presente contexto, la expresión "organismos presa" se refiere a cualquier organismo marino que puede usarse como alimento vivo para las larvas de especies marinas que se producen en instalaciones de acuicultura. Una revisión general de tales organismos presa puede encontrarse en Lavens & Sorgeloos (eds.) "Manual on the production and use of live food for aquaculture" publicado por la FAO (1995). Por consiguiente, los organismos presa usados más comúnmente incluyen diversas clases y géneros de microalgas, rotíferos, Artemia, zooplancton incluyendo, copépodos, cladóceros, nematodos y larvas trocóforas.

Tal como se usa en el presente documento, el término "acuicultura" debe entenderse en su sentido más amplio e incluye cualquier producción de cualquier especie acuática producida en condiciones de acuicultura, tal como especies de pescado, incluyendo como ejemplos salmón, trucha, carpa, lubina, brema, rodaballo, lenguado, sabalote, mújol, mero, brema, fletán; crustáceos tales como gamba, langosta, cangrejo de río y cangrejos; moluscos tales como bivalvos.

Una característica común de estas especies acuáticas es que el ciclo de vida incluye una o más fases larvarias que pueden tener requisitos nutricionales muy específicos y por consiguiente proporcionar organismos presa vivos que cumplan este requisito es un factor esencial para una producción de acuicultura satisfactoria. Tal como se mencionó anteriormente, un requisito específico de este tipo es un alto contenido del ácido graso esencial ADH, implicando el término "esencial" que los organismos presa no pueden realizar una síntesis de novo de tales compuestos. La composición de la presente invención tiene un contenido en ADH de al menos el 30% en peso, tal como en el intervalo de aproximadamente el 30 al 35% en peso, o el intervalo de aproximadamente el 35-40% en peso, preferiblemente al menos el 40% en peso, tal como al menos el 50% en peso, incluyendo al menos el 60% en peso.

Al menos se incorpora un componente lipídico adicional que proporciona una cantidad adecuada de ADH. Un componente lipídico adicional de este tipo contiene al menos el 30% en peso de ADH, más preferiblemente al menos el 40% en peso de ADH, por ejemplo al menos el 50% en peso de ADH. En realizaciones preferidas, el componente lipídico adicional incluye al menos el 60% en peso de ADH, tal como al menos el 70% en peso de ADH, incluyendo al menos el 90% en peso de ADH.

El componente lipídico rico en ADH adicional se incorpora a la composición de la invención en una cantidad que da como resultado al menos un contenido en ADH total de la composición que es de al menos el 30% en peso. Dependiendo del contenido en ADH del componente rico en fosfolípidos, la cantidad del componente lipídico adicional requerida puede estar en el intervalo del 5-99% en peso. En ciertas realizaciones de la invención, la cantidad del componente lipídico adicional está en el intervalo del 50-95% en peso, tal como un intervalo de aproximadamente el 60-80% en peso, tal como por ejemplo el 70-75% en peso.

La fuente del componente lipídico adicional puede ser cualquier lípido que se produce de manera natural (preferiblemente que comprende glicéridos, tales como triglicéridos o diglicéridos) que contiene al menos el 20% en peso de ADH y cualquiera de tales lípidos sintetizado química o enzimáticamente. Ejemplos de lípidos ricos en ADH que se producen de manera natural son el aceite orbital de atún (TOO) y los lípidos aislados a partir de células microbianas que tienen un alto contenido de ADH, tales como algas incluyendo especies de Chlorella y Crypthecodinium, ciertas especies de levadura tales como Saccharomyces, Morteriella, Schizochytrium y Thraustochytrium. Como alternativa al uso de lípidos ricos en ADH que se producen de manera natural, tales lípidos pueden sintetizarse química o enzimáticamente. En una realización útil de la invención, se proporciona un lípido de este tipo como glicérido poniendo en contacto ADH como ácido graso libre y glicerol en presencia de catalizadores químicos o una enzima que puede formar glicéridos a partir de los reactivos, tal como una lipasa incluyendo una lipasa aislada a partir de Candida antarctica.

Se ha encontrado que es particularmente útil usar materiales a base de pescado como fuentes de lípidos para la composición según la invención (por ejemplo, como fuentes para el componente que contiene fosfolípidos, o del componente rico en ADH adicional, o ambos). Además del ADH, tales materiales proporcionan también otros AGAI valiosos (particularmente AGAI n-3) que son característicos de los peces (tales como los ácidos grasos 20:5 (AEP), 18:3, 18:4 y 20:4), y que se encuentran en la dieta natural de las larvas de peces y en la yema de huevo de pescado, y que se consideran beneficiosos para un enriquecimiento satisfactorio de organismos presa para la cría de peces. En una realización ventajosa, la composición de enriquecimiento tiene un contenido total de AGAI de al menos el 40% en peso, preferiblemente al menos el 50% en peso, tal como al menos el 60% en peso. En tales composiciones, AEP está en el intervalo del 2-15% en peso, tal como en el intervalo del 5-10% en peso, y otros AGAI n-3 distintos de ADH y AEP están en el intervalo del 2-25% en peso, preferiblemente en el intervalo de aproximadamente el 5-15% en peso, tal como por ejemplo aproximadamente el 10% en peso. En realizaciones ventajosas adicionales, el contenido total de AGAI n-3 es de al menos el 50% en peso, tal como al menos el 60% en peso.

Tal como se mencionó anteriormente, la composición de la invención comprende como componente principal un componente rico en fosfolípidos que comprende al menos el 25% en peso de fosfolípidos. En el presente contexto, el término "fosfolípidos" se usa para describir una clase de lípidos que contiene ácido fosfórico como mono o diéster. Por tanto, los fosfolípidos incluyen fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE), fosfatidilinositol (FI), fosfatidilglicerol (FG), fosfatidilserina (FS) y ácido fosfatídico (AF). El término "lecitina" se usa también comúnmente para mezclas de los fosfolípidos anteriores. Los presentes inventores han encontrado que la distribución de los miembros de la clase de los fosfolípidos puede tener un impacto significativo sobre la capacidad de la composición de la invención para garantizar unas tasas de supervivencia alta y de buena pigmentación de las larvas de peces. En particular, se ha encontrado que la composición de los fosfolípidos en la harina de arenque es tal que se consigue una tasa particularmente alta de pigmentación correcta de las larvas de peces.

Según la invención, los fosfolípidos se aíslan a partir de materiales de organismo marino, incluyendo materiales frescos y materiales secos. Los materiales frescos incluyen por ejemplo vísceras de peces y otros animales marinos, carne de pescado, huevos de pescado, calamares, moluscos y una biomasa planctónica. Los materiales secos incluyen, en particular, harinas de pescado tales como harinas de arenque, capelán, caballa, lacha, sardina, boquerón, jurel y bacaladilla y harinas de organismos planctónicos. Tales materiales de fuente marina de fuentes de pescado proporcionan tal como se mencionó anteriormente, no sólo un alto contenido de ADH, sino también de AEP y otros AGPI n-3, característicos de los peces, y son en cierta medida similares a la dieta natural de las larvas de peces.

Se sabe bien que la calidad de las harinas de pescado comerciales puede variar considerablemente. En particular, las harinas de pescado de poca calidad han experimentado un deterioro de los lípidos más o menos avanzado incluyendo oxidación e hidrólisis. Para los fines de la presente invención, se prefiere particularmente usar harinas de pescado comerciales de alta calidad como fuente del componente que contiene fosfolípidos. Una harina de pescado de alta calidad se define, en este contexto, con los siguientes parámetros relativos a la calidad y la frescura: el "nitrógeno volátil total" (NVT) debe ser inferior a 50 mg/100 g medido tal como se describe en Antonacopoulus, N. Handbuch der Lebensmittelchemie, vol. III/2, Springer Verlag, Berlín (1968); y la capacidad de digestión mínima de la proteína debe ser de al menos el 90%.

En una realización preferida, el componente que contiene fosfolípidos tiene un contenido de fosfolípidos de al menos el 30% en peso, preferiblemente al menos el 40% en peso, tal como al menos el 50% en peso, por ejemplo al menos el 60% en peso, incluyendo al menos el 70% en peso de fosfolípidos o incluso más. La proporción de la composición que contiene fosfolípidos está en el intervalo del 2-75% en peso incluyendo el intervalo del 5-50% en peso, tal como en el intervalo del 5-25% en peso, incluyendo aproximadamente el 5% en peso, aproximadamente el 10% en peso y aproximadamente el 15% en peso, o en el intervalo de aproximadamente el 25-50% en peso.

Tal como se mencionó anteriormente, se ha mostrado que no sólo se requiere un alto contenido de ADH en el alimento para las larvas de peces, sino que la razón entre ADH y AEP en los organismos presa es importante para la supervivencia y el desarrollo de las larvas de las especies cultivadas. En general se reconoce que la razón ADH:AEP en los organismos presa debe ser de al menos 1:1 y preferiblemente de al menos 2:1. Sin embargo, se ha encontrado que con el fin de conseguir esta razón deseada en los organismos presa, puede requerirse una razón significativamente mayor en la composición de enriquecimiento para el organismo presa. Por consiguiente, la composición de enriquecimiento de la invención tiene una razón en peso ADH:AEP en el intervalo de 3:1 a 10:1, tal como 8:1, incluyendo el intervalo de 4:1 a 6:1.

Tal como establecieron Sargent et al., citado anteriormente, otros AGAI puede ser importantes, tal como por ejemplo el ácido araquidónico. Por consiguiente, se contempla una composición de enriquecimiento según la invención que incluye una cantidad suficiente de ácido araquidónico. Si se requiere, el contenido de ácido araquidónico en la composición puede estar en el intervalo del 1-20% en peso de los ácidos grasos totales, tal como por ejemplo el 2-10% en peso.

En general se conoce en el estado de la técnica, que un alto contenido de ácidos grasos libres puede ser perjudicial para los juveniles de peces. Las realizaciones preferidas de la composición de la presente invención tienen un bajo contenido de ácidos grasos libres, tal como un contenido total inferior a aproximadamente el 10% en peso, incluyendo inferior a aproximadamente el 5% en peso, más preferiblemente inferior a aproximadamente el 3% en peso, tal como inferior a aproximadamente el 1% en peso.

En realizaciones útiles, la composición de enriquecimiento de la invención comprende componentes adicionales que incluyen emulsionantes, inmunoestimulantes tales como por ejemplo glucanos o alcoxigliceroles, vitaminas, antioxidantes, minerales y ácido araquidónico. Los emulsionantes adecuados incluyen Chremophore A25 (TM) disponible de BASF, VOLPO (TM) de Croda, lecitina de soja, fosfolípidos, glicéridos y ácidos grasos incluyendo jabones.

Las vitaminas que pueden incorporarse en la composición incluyen cualquier vitamina soluble en agua tal como vitamina B y vitamina C, y cualquier vitamina A, vitamina D y vitamina E insoluble en agua. Se ha encontrado que un alto contenido de vitamina C puede tener un impacto significativo sobre el rendimiento de la composición de enriquecimiento con respecto a la supervivencia y el desarrollo de los predadores larvarios (Merchie, G.; Lavens, P.; Sorgeloos, P. Effects of dietary vitamin C on fish and crustacean larvae, Proceedings Larvi'95, Ghent (1995); Merchie, G. Nutritional effect of vitamin C on the growth and physiological condition of the larvae de aquaculture organisms, tesis, 1995, Universidad de Gante; Merchie, G., et al. Aquaculture, 134 (1995) 325-337.) Por consiguiente, en realizaciones útiles, el contenido de vitamina C puede estar en el intervalo del 1-15% en peso, tal como por ejemplo el 5-10% en peso. Los antioxidantes útiles incluyen TBHQ, etoxiquina, BHT, BHA, vitamina E y vitamina C.

El experto apreciará que la composición de enriquecimiento de la invención puede usarse como un vehículo conveniente para sustancias farmacéuticamente activas tales como, por ejemplo, agentes antimicrobianos y sustancias inmunológicamente activas incluyendo vacunas contra infecciones bacterianas o virales, y cualquier combinación de las mismas.

La composición según la invención puede proporcionarse como un líquido, una emulsión que puede verterse o en forma de una pasta, o en forma seca, por ejemplo como un producto granulado, un polvo o como copos. Cuando la composición se proporciona como una emulsión, preferiblemente una emulsión de lípido en agua, se prefiere que esté es una forma relativamente concentrada. Una forma de emulsión concentrada de este tipo puede denominarse también preemulsión ya que puede diluirse en una o más etapas con un medio acuoso para proporcionar el medio de enriquecimiento final para los organismos presa. En realizaciones preferidas, una preemulsión de este tipo comprende como fase lipídica al menos el 50% en peso de la composición de enriquecimiento según la invención.

Tal como resulta de lo anterior, la composición de enriquecimiento puede usarse para enriquecer organismos presa de acuicultura con respecto a fosfolípidos y AGAI esenciales.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un método de fabricación de una composición de enriquecimiento tal como se describió anteriormente. El método comprende en una primera etapa la separación de un componente lipídico crudo de un material de organismo marino tal como se definió anteriormente. La separación puede realizarse mediante cualquier método convencional para separar lípidos de material orgánico, tal como una extracción usando cualquier disolvente adecuado, incluyendo disolventes orgánicos tales como alcoholes incluyendo etanol y propanoles; disolventes hidrocarbonados por ejemplo alcanos tales como un pentano, hexano, o una mezcla de alcanos o disolventes hidrocarbonados cíclicos o aromáticos; éteres; ésteres, o una mezcla de éstos u otros disolventes que se encuentre que son adecuados. También se contempla el uso de extracción supercrítica. Otros medios de separación de fosfolípidos de los materiales fuente pueden incluir cromatografía, centrifugación, compresión, tratamiento térmico o cualquier combinación de los mismos. En una segunda etapa, la fracción de fosfolípidos del componente lipídico crudo se enriquece sometiendo el componente lipídico a un tratamiento que da como resultado una solidificación o precipitación al menos parcial de la fracción de triglicéridos, que puede retirarse posteriormente. El tratamiento comprende ventajosamente la adición de un disolvente adecuado, tal como uno de los mencionados anteriormente al componente lipídico crudo, a una temperatura a la que no precipitan los triglicéridos seguido de enfriar la mezcla de lípido/disolvente a una temperatura a la que precipita una parte significativa de los triglicéridos. Entonces se retira el precipitado y se evapora la fase de disolvente para obtener un componente rico en fosfolípidos. Este tratamiento puede repetirse una o más veces y pueden combinarse las alícuotas resultantes de componentes enriquecidos en fosfolípidos. Los materiales de partida adecuados para proporcionar el componente rico en fosfolípidos incluyen los materiales de organismo marino descritos anteriormente.

El método de la invención incluye la realización en la que el componente de fosfolípido se combina con un componente rico en ADH de este tipo tal como se describió anteriormente.

La composición lipídica marina según la invención puede proporcionarse en cualquier forma adecuada incluyendo las formas descritas anteriormente para la composición de enriquecimiento.

Ejemplo 1 Aislamiento a escala de laboratorio de un componente lipídico rico en fosfolípidos a partir de harina de pescado de capelán

A 100 g de harina de pescado de capelán se añadieron 400 ml de etanol (aproximadamente el 99% v/v) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h. Se separó el residuo de harina mediante filtración y se destiló a vacío el filtrado etanólico en un evaporador rotatorio para obtener 10-11 g de una fracción de lípido crudo que contenía aproximadamente el 80% en peso de lípido de la siguiente composición: el 54% en peso de fosfolípidos (FL), el 4% en peso de ácidos grasos libres (AGL) y el 42% en peso de triglicéridos (TG). Se repitió el procedimiento de extracción con el residuo de harina separado que produjo 1,5 g más de lípido crudo.

Se purificaron las fracciones combinadas de lípido crudo mediante adición de etanol a una razón en peso:vol. de 1:5 y se dejó en reposo la suspensión resultante a 4ºC durante la noche, haciendo que precipitara una parte sustancial de los triglicéridos. Se separó la fase etanólica y se sometió a destilación usando un evaporador rotatorio para producir una fracción enriquecida en fosfolípidos como un material siruposo, denso, rojo amarillento (6,5-6,8 g; que contenía aproximadamente el 71% de lípidos de la composición mostrada a continuación. (Los números de la columna más a la izquierda se refieren al número de carbonos y dobles enlaces en los ácidos grasos de los componentes lipídicos, ADH es 22:6 y AEP, 20:5):

1

2

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2 Aislamiento a escala de laboratorio de un componente lipídico rico en fosfolípidos a partir de harina de pescado de arenque

Se usó esencialmente el mismo procedimiento descrito en el ejemplo 1 para obtener un componente rico en fosfolípidos a partir de harina de arenque con la siguiente composición de lípidos:

3

Tal como se observa en lo anterior, la harina de arenque proporciona un material altamente preferido para un componente rico en fosfolípidos según la invención, con una alta proporción de ADH-fosfolípido.

El experto en la técnica puede ampliar a escala el procedimiento de extracción etanólica de los ejemplos 1 y 2 con métodos convencionales, de manera similar a lo que se describe en el ejemplo 3 con un sistema de disolvente diferente.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 3 Aislamiento a gran escala de un componente lipídico rico en fosfolípidos a partir de mantos de calamar

Se añadió calamar picado (150 kg) a 300 l de isopropanol y se agitó la mezcla de modo bastante vigoroso durante 4-6 h y se dejó en reposo durante la noche. Posteriormente, se filtró la mezcla y se añadieron 300 l de hexano al filtrado y se mezcló. Esto dio como resultado dos fases que se permitió que se separasen. Se separó la fase superior, que consistía en gran parte en hexano e isopropanol, y se sometió a destilación en varias tandas de vacío usando un evaporador rotatorio de 50 l para producir a total de 2,2 kg de una fracción enriquecida en fosfolípidos como una cera marrón amarillenta que tenía un contenido en fosfolípidos de aproximadamente el 65% en peso y la siguiente composición de ácidos grasos totales:

\vskip1.000000\baselineskip

4

\newpage

Ejemplo 4 Preparación de una composición de enriquecimiento para organismos presa para larvas de peces

Se preparó una composición para organismos presa tales como especies de Artemia combinando y mezclando los siguientes ingredientes:

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 4.1

6

El material de TG 4010 usado como componente rico en ADH en la composición se deriva de un material a base de aceite de pescado que está enriquecido para ADH, comprende el 40% en peso de ADH, aproximadamente el 10% en peso de AEP y aproximadamente el 10% en peso de otros AGAI n-3. Los ácidos grasos están principalmente en forma de triglicéridos y el material tiene un contenido muy bajo en ácidos grasos libres. Se han sometido a prueba otros materiales como fuentes de un componente rico en ADH, tal como TG 5010 (también de Croda) que tiene un contenido en ADH de aproximadamente el 50% en peso, y triglicéridos altamente enriquecidos en ADH enzimáticamente.

\newpage

Ejemplo 5 Uso de la composición de enriquecimiento para el cultivo de Artemia

Se hicieron eclosionar quistes de Artemia en condiciones óptimas (en agua de mar, 27-29ºC, pH de aproximadamente 8, contenido en oxígeno superior a 4 mg/l). Se enjuagaron los nauplios de Artemia recién eclosionados y se pusieron en tanques de 250 l para proporcionar una densidad de 200.000/l. Se mantuvo la temperatura a 25-28ºC, el contenido en oxígeno a 5-6 mg/l y se tamponó el pH a 7,5 con bicarbonato de sodio (2 g/l). Se airearon los tanques haciendo pasar aire atmosférico a través de manguitos perforados en el fondo de los tanques. Se añadió la composición de enriquecimiento descrita en el ejemplo 4 a los tanques hasta una concentración de 0,2 g/l y se añadió la misma cantidad 10 h más tarde. 24 h tras la primera adición de la composición de enriquecimiento, Artemia tiene la siguiente composición de lípidos (31% ps (peso seco) de lípidos):

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

Artemia así obtenida tiene una concentración total altamente enriquecida de ADH según la invención y por tanto, es particularmente adecuado para alimentar larvas de peces tales como larvas de fletán.

\newpage

Ejemplo 6 Uso de la composición de enriquecimiento para el cultivo de Artemia

Se puso Artemia recién eclosionada en tanques de 250 l y en las mismas condiciones descritas en el ejemplo 5. Se alimentó Artemia con una composición lipídica en la que se mezcló un 2% en peso de emulsionante Chremophore A25. La composición lipídica contenía el 50% en peso de la composición de fosfolípidos del ejemplo 3; el 25% en peso de "ADH-80", esencialmente triglicéridos que comprenden el 80% en peso de ADH, sintetizado enzimáticamente a partir de glicerol y ácido graso ADH usando lipasa de Candida antarctica (tal como se describe en el documento US 5.604.119); y el 25% en peso de Lysi-22 (TM) (Lysi hf, Islandia), un aceite de pescado con un 22% en peso de ADH. Se añadió la composición de alimentación a los tanques hasta una concentración de 0,2 g/l y se añadió la misma cantidad 12 h más tarde. 24 h tras la primera adición de la composición de enriquecimiento, Artemia tiene la siguiente composición de lípidos (34% ps de lípidos):

9

Artemia obtenida tiene una concentración total muy altamente enriquecida de ADH (9,5% en peso) según la invención así como otros AGAI n-3 característicos de los peces, y por tanto, es particularmente adecuada para alimentar larvas de peces tales como larvas de fletán.

\newpage

Ejemplo 7 Uso de la composición de enriquecimiento para el cultivo de rotíferos (Brachionus plichatilis)

Se criaron rotíferos en condiciones similares a las descritas en el ejemplo 5, se alimentaron con plancton de Isochrysis y levaduras y se enriquecieron durante 6 h a 27ºC con una composición de enriquecimiento tal como la descrita en el ejemplo 4, excepto porque se usaron triglicéridos TG 5010 (TM) de Croda en lugar de TG 4010, conteniendo TG 5010 aproximadamente el 50% en peso de ADH. Los rotíferos tenían la siguiente composición de lípidos (22% ps de lípidos):

10

Los rotíferos obtenidos tienen una concentración total muy alta de ADH, así como contienen otros AGAI n-3 y tienen un contenido en fosfolípidos muy alto, y por tanto, representan un ejemplo de la eficacia de la composición según la invención.

\newpage

Ejemplo 8 Comparación de composiciones de enriquecimiento para el cultivo de Artemia

Se hicieron eclosionar quistes de Artemia como en el ejemplo 5 y se transfirieron a tanques de cultivo en los que se mantuvieron las condiciones como en el ejemplo 3 (excepto por cierta diferencia en la temperatura, véase la tabla). Se prepararon composiciones de enriquecimiento similares a las descritas en el ejemplo 4, es decir, con los mismos aditivos añadidos de la tabla 4.1, tales como emulsionante, vitaminas y aproximadamente el 10% de componente rico en fosfolípidos procedente de mantos de calamar tal como el descrito en el ejemplo 3. El ingrediente a granel (aproximadamente el 80%) de las preparaciones fueron composiciones lipídicas comerciales como las enumeradas en la tabla 8.1. Éstas son AlgaMac 2000 (TM), ADH Selco (TM), DC ADH (TM) y aceite de hígado de bacalao de calidad para alimentos (de Lysi, Islandia). Se añadieron las preparaciones a los tanques hasta una concentración de
0,2 g/l y se añadió la misma cantidad 10 h más tarde. 24 h tras la primera adición de la composición de enriquecimiento, Artemia tiene la siguiente composición de lípidos:

TABLA 8.1

11

Artemia enriquecida con la composición preferida según la invención tiene claramente una concentración total enriquecida superior de ADH según la invención y por tanto, es particularmente adecuada para alimentar larvas de peces tales como larvas de fletán.

Ejemplo 9 Uso de Artemia enriquecida con AGAI y fosfolípidos para la cría en acuicultura de fletán

En primer lugar se alimentaron larvas de fletán a 230-250ºd. ("ºd": factor de multiplicación de temperatura (ºC) y días desde la eclosión, por ejemplo, a 5,2ºC, 250ºd corresponde a 48 días.) Se usaron tanques de cría circulares, o bien de 3,5 o bien de 7 m^{3}. Se aclimataron gradualmente las larvas hasta una temperatura de cría de 11ºC y una intensidad luminosa de 300-500 lux. Se alimentaron las larvas con Artemia dos veces al día, por la mañana y al final de la tarde. Se enriqueció Artemia con una composición de enriquecimiento según la invención 24 h antes de la alimentación matutina, luego se almacenó a 13-15ºC durante otras 7-8 h para la alimentación vespertina. Se ajustaron las raciones de alimento para permitir una buena digestión de Artemia. Se añadieron microalgas (Isocrysis sp.) al agua de cría para reducir la tensión y facilitar tasas de ingestión máximas. Se aplicó una ligera aireación en el centro de los tanques para homogeneizar la calidad del agua y las partículas de alimento. Se obtuvo una corriente circular ligera con el flujo de entrada para distribuir las larvas. Se aumentó el cambio del agua desde 1,2 veces cada 24 h al comienzo hasta 3,3 veces cada 24 h al final. Se limpiaron diariamente los tanques de cría de larvas.

Se observaron tasas de supervivencia superiores al 80% en un tanque desde el inicio de la alimentación hasta el final de la fase larvaria (del 90% excluyendo los "gapers": larvas con deformidad de las mandíbulas), y frecuentemente se han observado tasas de supervivencia de entre el 65 y el 75%. En promedio, aproximadamente el 80% de los juveniles mostraron una pigmentación correcta, pero se observó hasta el 96% de pigmentación correcta en un tanque. La pigmentación correcta se define como un color de pigmentación normal en el lado ocular y sin pigmentación en el lado ciego. Aproximadamente el 65% de los juveniles, en promedio, pero hasta el 80% en un tanque, mostraron una migración ocular correcta, que consiste en tener ambos ojos en el lado ocular. Experimentos en curso indican que pueden obtenerse tasas de supervivencia y pigmentación incluso superiores.

Los resultados muestran que los organismos presa enriquecidos con ADH según la invención son particularmente adecuados para la cría de especies acuáticas tales como fletán en cuanto a las altas tasas de supervivencia y la calidad.

Claims

1. Composición para alimentar organismos presa para su uso en acuicultura, que comprende:

- el 2-75% en peso de un componente lipídico de organismo marino que comprende al menos el 25% en peso de fosfolípidos, y que comprende

- un componente lipídico adicional en una cantidad que da como resultado un contenido en ADH total de al menos el 30% en peso,

proporcionando la composición un contenido en ADH de al menos el 30% en peso, un contenido en AEP en el intervalo del 2-15% y un contenido de AGAI n-3, distinto de ADH y AEP, que incluyen ácidos grasos 18:3, 18:4 y 20:4, en el intervalo del 2-25% en peso, teniendo la composición menos del 10% de ácidos grasos libres y una razón de ADH con respecto a AEP que es de al menos 3.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que el componente que contiene fosfolípidos contiene al menos el 50% en peso de fosfolípidos.

3. Composición según la reivindicación 2, en la que el componente que contiene fosfolípidos contiene al menos el 70% en peso de fosfolípidos.

4. Composición según la reivindicación 1, en la que el componente lipídico adicional tiene un contenido de ADH de al menos el 30% en peso, tal como al menos el 40% en peso.

5. Composición según la reivindicación 4, en la que el componente lipídico adicional tiene un contenido de ADH de al menos el 50% en peso.

6. Composición según la reivindicación 1, en la que la cantidad del componente lipídico adicional está en el intervalo del 50-95% en peso, calculado en la composición.

7. Composición según la reivindicación 1, en la que la cantidad del componente rico en fosfolípidos está en el intervalo del 5-50% en peso.

8. Composición según la reivindicación 1, que tiene un contenido en ADH de al menos el 40% en peso.

9. Composición según la reivindicación 8, en la que el contenido total de ADH es de al menos el 50% en peso incluyendo al menos el 60% en peso.

10. Composición según la reivindicación 1, en la que el componente lipídico adicional se deriva de una fuente seleccionada de lípidos que se producen de manera natural y lípidos sintetizados química o enzimáticamente, fuente que comprende glicéridos tales como triglicéridos o diglicéridos.

11. Composición según la reivindicación 1, que comprende además un componente adicional seleccionado de un inmunoestimulante, una vitamina, un antioxidante y un mineral.

12. Composición según la reivindicación 1, en la que el material de organismo marino es una harina de pescado.

13. Composición según la reivindicación 12, en la que la harina de pescado se selecciona del grupo que consiste en harina de capelán, harina de arenque, harina de lacha, harina de caballa, harina de boquerón, harina de sardina, harina de jurel y harina de bacaladilla.

14. Composición según la reivindicación 12, en la que la harina de pescado es una harina de pescado comercial de alta calidad.

15. Composición según la reivindicación 1, en la que el material de organismo marino se selecciona del grupo que consiste en huevos de pescado, mantos de calamar y una biomasa planctónica.

16. Composición según la reivindicación 1, que está en una forma seleccionada de un grupo que consiste en un polvo, un producto granulado, una pasta y copos.

17. Emulsión que comprende como fase lipídica una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-14.

18. Emulsión según la reivindicación 17, que comprende al menos el 50% en peso de la composición según la reivindicación 1.

19. Composición según la reivindicación 1, en la que el contenido total de AGAI es de al menos el 40% en peso, tal como al menos el 50% en peso.

20. Composición según la reivindicación 1, en la que el contenido total de AGAI n-3 es de al menos el 50% en peso.

21. Composición según la reivindicación 1, en la que la cantidad de ácidos grasos libres es inferior a aproximadamente el 5% en peso.

22. Método de fabricación de una composición según la reivindicación 1, que comprende las etapas de separar de un material de organismo marino un componente lipídico crudo que comprende triglicéridos y fosfolípidos, seguido de una etapa de enriquecimiento en fosfolípidos que comprende añadir, a una temperatura a la que no precipitan los triglicéridos, un disolvente al componente lipídico crudo y enfriar la mezcla para precipitar los triglicéridos y retirar el precipitado para obtener un componente lipídico que comprende al menos el 25% en peso de fosfolípidos.

23. Método según la reivindicación 22, en el que el material de organismo marino se selecciona del grupo que consiste en una harina de pescado, huevos de pescado, mantos de calamar y biomasa planctónica.

24. Método según la reivindicación 23, en el que la harina de pescado se selecciona del grupo que consiste en harina de capelán, harina de arenque, harina de lacha, harina de caballa, harina de boquerón, harina de sardina, harina de jurel y harina de bacaladilla.

25. Método según la reivindicación 22, en el que el componente lipídico adicional se obtiene mediante un procedimiento que comprende poner en contacto glicerol y un AGAI en presencia de un catalizador o una enzima que puede combinar el glicerol y el AGAI, en condiciones que permiten que se forme un glicérido o una mezcla de glicéridos.

26. Método según la reivindicación 25, en el que la enzima es una lipasa, incluyendo una lipasa producida por Candida antarctica.

27. Método según la reivindicación 22, en la que el componente lipídico que contiene fosfolípidos tiene un contenido en fosfolípidos de al menos el 50% en peso incluyendo un contenido en fosfolípidos de al menos el 75% en peso.

28. Composición según la reivindicación 1, que comprende además una sustancia farmacéuticamente activa.

29. Composición según la reivindicación 28, en la que la sustancia farmacéuticamente activa se selecciona del grupo que consiste en un agente antimicrobiano y una sustancia inmunológicamente activa incluyendo una vacuna y una combinación de las mismas.