ES2324533T3 - Procedimiento para la obtencion de una mezcla natural de estrogenos equinos conjugados, empobrecida en compuestos lipofilos no conjugados. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la obtención de una mezcla natural de estrógenos equinos conjugados, caracterizado porque la mezcla obtenida está empobrecida en compuestos lipófilos no conjugados del grupo que abarca flavonoides no conjugados, isoflavonoides no conjugados, norisoprenoides no conjugados, esteroides no conjugados, en particular esteroides de androstano y pregnano, y compuestos no conjugados equiparables, y porque el procedimiento se distingue porque a) una fase acuosa de partida, elegida del grupo que comprende (i) una solución acuosa de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, (ii) un concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, (iii) un concentrado de un líquido de la orina obtenido por concentración, y (iv) un concentrado de orina liberado de sustancias sólidas y mucilaginosas (v) un concentrado de orina liberado de sustancias sólidas y mucilaginosas, el cual fue prepurificado mediante procedimientos de separación, seleccionados del grupo que comprende decantación, separación, filtración y combinaciones de los procedimientos antes mencionados, o un material retenido de orina concentrado, obtenido mediante filtración, se somete a una extracción líquido-líquido con una cantidad suficiente de un agente de extracción y, a continuación, se separa la fase acuosa, representando el agente de extracción un disolvente orgánico, adecuado para la extracción de compuestos no conjugados del grupo antes indicado, no miscible o apenas miscible con agua y seleccionado del grupo consistente en alcoholes C 4-C 10 de cadena lineal, ramificados o cíclicos, ácidos C2-C10 esterificados, aldehídos C3-C10, cetonas C4-C10, éteres C2-C10, nitrilos C3-C6 y halogenoalcanos C1-C3, y mezclas de los disolventes antes mencionados, y b) eventualmente, con la fase acuosa obtenida se repite la etapa a) del procedimiento y c) se obtiene una fase acuosa que contiene la mezcla natural de estrógenos conjugados y, eventualmente, esta fase se concentra.
Description
Procedimiento para la obtención de una mezcla
natural de estrógenos equinos conjugados, empobrecida en compuestos
lipófilos no conjugados.
La presente invención se refiere a la obtención
de una mezcla natural de estrógenos equinos conjugados que está
empobrecida en compuestos lipófilos no conjugados del grupo que
abarca flavonoides no conjugados, isoflavonoides no conjugados,
norisoprenoides no conjugados, esteroides no conjugados, en
particular esteroides de androstano y pregnano, y compuestos no
conjugados equiparables.
Los estrógenos se emplean en medicina para la
terapia de sustitución de hormonas. En particular, mezclas de
estrógenos se emplean para el tratamiento y la profilaxia de
trastornos del climaterio que se manifiestan en la mujer después de
la menopausia natural o artificial. En este caso, se han manifestado
como particularmente activas y bien compatibles mezclas naturales
de estrógenos conjugados, tales como se presentan en la orina de
yeguas preñadas, designadas en lo que sigue como mezclas naturales
de estrógenos equinos conjugados.
El contenido en sólidos disuelto en la orina de
yeguas preñadas (= pregnant mares urine, abreviado en lo que sigue
como "PMU") puede oscilar, por naturaleza, dentro de amplios
intervalos y, por lo general, puede encontrarse en un intervalo de
40 a 90 g de sustancia seca por litro. Junto a la urea y demás
sustancias constitutivas de la urea habituales, en el contenido en
sólidos de la PMU se encuentran componentes fenólicos en cantidades
de aproximadamente 2 a 5% en peso referido a la sustancia seca.
Entre estos componentes fenólicos se encuentran cresoles y la
dihidro-3,4-bis[(3-hidroxifenil)metil]-2(3H)-furanona
conocida como HPMF. Estos pueden presentarse en forma libre o
conjugada. En la PMU está contenida una mezcla natural de estrógenos
la cual se presenta ampliamente en forma conjugada, por ejemplo en
forma de sal sódica del hemiéster del ácido sulfúrico (abreviada en
lo que sigue como "sal sulfato"). El contenido en estrógenos
conjugados (calculado como sal sulfato de estrógeno) puede oscilar
entre 0,1 y 1% en peso, referido a la sustancia seca.
Adicionalmente, en el contenido en sólidos de la PMU se pueden
presentar otros compuestos lipófilos, cuyas cantidades pueden
oscilar dentro de amplios intervalos y no son previsibles. Estos
compuestos lipófilos proceden predominantemente de las plantas
ingeridas como alimento por las yeguas preñadas y abarcan, ante
todo, diferentes derivados de flavonoides, isoflavonoides,
norisoprenoides y compuestos equiparables, tales como por ejemplo
formononetina, genisteína, diadzeína, biocanina A, equol y
coumestrol. Estos compuestos lipófilos de procedencia originalmente
vegetal pueden presentarse en la orina en forma conjugada o en
forma libre (no conjugada). A los componentes lipófilos que se
presentan adicionalmente en el contenido en sólidos de la PMU
pertenecen también derivados de esteroides no conjugados,
debiéndose mencionar en este caso, en particular, los esteroides de
androstano y pregnano, pero también derivados de estrógenos no
conjugados.
Mezclas naturales de extractos con contenido en
estrógenos conjugados se obtienen habitualmente mediante un
procedimiento de extracción en fases sólidas o mediante un
procedimiento que se basa en diferentes etapas de extracción
líquido-líquido, con disolventes orgánicos no
miscibles con agua o sólo poco miscibles con ella. En general, se
cumple que la mezcla natural de estrógenos conjugados obtenida, para
poder ser utilizada como componente de principio activo para
productos farmacéuticos, debe cumplir determinadas especificaciones
farmacéuticas, por ejemplo debe corresponder a la especificación
establecida en la USP (Farmacopea de Estados Unidos) o en la
Farmacopea Europea. Así, en relación con el contenido en estrógenos
conjugados deben mantenerse determinados valores límites referidos
a la sustancia seca.
Las patentes de EE.UU. nº 2.551.205 y nº
2.429.398 describen un procedimiento para la producción de un
preparado de estrógeno soluble en agua a partir de PMU, en el que
primeramente, mediante adsorción en carbón activo u otros
materiales adsorbentes adecuados, elución con un disolvente orgánico
miscible con agua tal como, por ejemplo, piridina, y subsiguiente
eliminación del disolvente, se obtiene un concentrado acuoso que
contiene la mayor parte de los componentes de estrógeno solubles en
agua de la PMU originalmente empleada. Mientras que en la patente
de EE.UU. nº 2.429.398 el concentrado se continúa purificando
mediante extracción con benceno y/o éter, en la patente de EE.UU.
nº 2.551.205 se describe que el concentrado se acidifica hasta un
valor del pH entre 2 y 6, preferiblemente entre 4 y 5, y luego se
extrae rápidamente con un disolvente orgánico apenas miscible con
agua del grupo de los hidrocarburos alifáticos, aromáticos o
alicíclicos (por ejemplo hexano, benceno, tolueno, ciclohexano) o
de los hidrocarburos clorados (por ejemplo cloroformo, dicloruro de
etileno, tricloroetileno, tetracloruro de carbono, clorobenceno),
con el fin de separar sustancias indeseadas tales como grasas,
aceites, componentes fenólicos libres y los esteroides no conjugados
mediante transformación en la fase orgánica. A continuación, la
fase acuosa se estabiliza mediante neutralización. La patente de
EE.UU. nº 2.551.205 aconseja continuar purificando el extracto
obtenido por subsiguientes etapas de extracción y precipitaciones.
En conjunto, después de la realización del procedimiento descrito en
la patente de EE.UU. nº 2.551.205 se obtiene únicamente un
rendimiento de aproximadamente 80% de los componentes de estrógeno
del concentrado empleado.
En la patente de EE.UU. nº 2.565.115 se describe
la extracción de los estrógenos conjugados a partir de PMU con
acetona. No se hace ninguna indicación sobre la pureza de la
fracción de estrógeno obtenida.
La patente de EE.UU. nº 2.696.265 describe un
procedimiento en el que primeramente se extraen los estrógenos con
un alcohol alifático o cetona tal como hexanol, ciclohexanol o
ciclohexanona. Los estrógenos pasan a la fase orgánica y, a
continuación, se continúan purificando, entre otros, una fase acuosa
que contiene los estrógenos se ajusta con ácido clorhídrico a un
valor del pH de 4 y se extrae con dicloruro de etileno.
En la patente de EE.UU. nº 2.834.712 se da a
conocer un procedimiento para la preparación de mezclas de
estrógenos de pureza significativa y escasa toxicidad que se basa
en una pluralidad de distintas etapas de extracción con diferentes
disolventes y en el ajuste de diferentes valores del pH. En este
caso, encuentran aplicación grandes volúmenes de disolventes tales
como hexano y benceno. Así, por ejemplo, en una etapa se disuelve en
agua un concentrado ya purificado, se ajusta con ácido clorhídrico
a un valor del pH de aproximadamente 5,0 y se extrae con benceno y,
seguidamente, con éter, con el fin de separar los componentes
fenólicos.
La solicitud de patente internacional WO
01/27134 describe un procedimiento comparativamente sencillo para
extraer estrógenos conjugados a partir de PMU: después de la adición
de una sal, tal como, por ejemplo, cloruro de sodio, la PMU se
extrae con al menos la misma proporción en volumen de un disolvente
orgánico tal como, por ejemplo, acetato de etilo y, en este caso,
los estrógenos conjugados se convierten en la fase orgánica. La
fase orgánica se separa y se seca con el fin de obtener el extracto.
En el documento WO 01/27134 no se hace ninguna indicación sobre la
pureza del extracto obtenido de estrógenos conjugados.
En el caso de los procedimientos de extracción
líquido-líquido precedentemente descritos y
conocidos por el estado de la técnica aparecen, no obstante, una
pluralidad de problemas tales como una fuerte formación de espuma,
formación de sedimentos, formación de emulsión y una mala separación
de fases. En general, se requieren varias etapas de extracción, lo
que conduce a pérdidas y a una obtención, sólo parcial, del
contenido en estrógenos. Además, estos procedimientos de extracción
requieren grandes volúmenes de disolventes en parte nocivos para la
salud. Además, en las memorias de patente antes indicadas no se hace
ningún comentario sobre el contenido de componentes lipófilos no
conjugados tales como, por ejemplo, derivados de flavonoides,
isoflavonoides, norisoprenoides no conjugados y compuestos no
conjugados equiparables, o también esteroides no conjugados, en
particular esteroides de androstano y pregnano, en los productos
obtenidos ni sobre una separación de estos componentes. Estos
procedimientos conocidos por el estado de la técnica no proporcionan
resultados satisfactorios en relación con el rendimiento o en
relación con la pureza del extracto obtenido, medido en el contenido
total de hormonas obtenido referido a la sustancia seca, o se basan
en una pluralidad de diferentes etapas del procedimiento y en la
utilización de grandes volúmenes de disolventes orgánicos y, en
parte, incluso indeseados desde un punto de vista toxicológico.
Además, a partir del estado de la técnica son
conocidos diferentes procedimientos de extracción en fases sólidas
con el fin de obtener una mezcla natural de estrógenos equinos
conjugados, ampliamente empobrecida en sustancias constitutivas
fenólicas de la orina. Así, la solicitud de patente internacional WO
98/08526 describe un procedimiento con el que en una extracción en
fase sólida en una resina adsorbente polímera semipolar, en
particular en una resina adsorbente polímera semipolar no iónica,
se puede obtener una mezcla empobrecida en sustancias constitutivas
fenólicas de la orina, ampliamente exenta de cresol y HPMF, y que
contiene prácticamente completo el contenido natural en estrógenos
de la PMU. En la solicitud de patente internacional WO 98/08526 se
describe un procedimiento similar, en el que en la extracción en
fase sólida pasa a emplearse gel de sílice como material
adsorbente. También, la solicitud de patente china CN 1308083
describe un procedimiento equiparable, en el que se utilizan
resinas adsorbentes polares con contenido en grupos ciano. Los
extractos obtenidos se adecuan como material de partida para la
preparación de productos farmacéuticos que contienen como componente
activo la mezcla natural de estrógenos conjugados a partir de
PMU.
Los requisitos de especificación farmacéuticos
establecidos, por ejemplo los valores límites a mantener en
relación con el contenido en estrógenos conjugados referido a la
sustancia seca, se cumplen normalmente por las mezclas de
estrógenos conjugados obtenidas a partir de la PMU de acuerdo con el
procedimiento del documento WO 98/08526 o el procedimiento del
documento WO 98/08525. Sin embargo, se ha comprobado que, junto al
contenido deseado en estrógenos conjugados, también pueden estar
contenidos compuestos lipófilos no conjugados en la sustancia seca
obtenida. A los compuestos lipófilos no conjugados pertenecen, por
ejemplo, diferentes derivados de flavonoides, isoflavonoides,
norisoprenoides no conjugados y compuestos no conjugados
equiparables tales como, por ejemplo, formononetina, genisteína,
daidzeína, biocanina A, equol y coumestrol, pero también esteroides
no conjugados, en particular esteroides de androstano y pregnano, y
estrógenos no conjugados, no debiéndose considerar esta lista como
exclusiva. La presencia de compuestos lipófilos no conjugados en la
mezcla de estrógenos conjugados obtenida a partir de la PMU no se
puede estandarizar, sino que tanto el contenido como también la
composición de los compuestos lipófilos libres y de los compuestos
lipófilos conjugados varía, por ejemplo, en función del alimento
ingerido por las yeguas preñadas.
Ciertamente, no se modifica la composición de la
mezcla natural en estrógenos equinos conjugados por la presencia
adicional de los compuestos lipófilos no conjugados, pero puede
estar reducido el contenido de los estrógenos equinos conjugados
referido a la sustancia seca. Mediante una separación preestablecida
de los componentes lipófilos no conjugados se podría obtener una
mayor concentración de las sustancias activas, es decir de los
estrógenos equinos conjugados en el extracto obtenido. También por
motivos de la seguridad de medicamentos puede ser conveniente
separar los compuestos lipófilos no conjugados, con el fin de
garantizar una composición uniforme de las cargas de extracto
individuales, dado que de esta forma se eliminan los componentes
lipófilos no conjugados, cuyo contenido y composición en la PMU
puede variar en función de la clase de la alimentación ingerida por
las yeguas preñadas, variable en función de la época del año y, con
ello, todos los extractos obtenidos presentarían un contenido
equiparable de estrógenos equinos conjugados referido a la sustancia
seca. Además, puede ser ventajosa una separación de los compuestos
lipófilos no conjugados con el fin de alcanzar un espectro de
acción fisiológico uniforme. Por ejemplo, puede ser conveniente
separar de la mezcla natural de estrógenos equinos conjugados
compuestos lipófilos no conjugados, eventualmente presentes, que
posiblemente ellos mismos pudieran poseer un efecto fisiológico
indeseado.
Por lo tanto, es misión de la presente invención
desarrollar un procedimiento técnica y económicamente óptimo para
la obtención de una mezcla natural de estrógenos equinos conjugados,
estando ampliamente empobrecida la mezcla en compuestos lipófilos
no conjugados, en particular en derivados de flavonoides,
isoflavonoides y norisoprenoides no conjugados. En particular, es
misión de la presente invención desarrollar un procedimiento de
este tipo en el que únicamente se empleen pequeñas cantidades de
disolventes nocivos para la salud. Además, se ha de desarrollar un
procedimiento que se base únicamente en unas pocas etapas de
procedimiento y, con ello, proporcione un extracto de estrógenos
equinos conjugados que presente un contenido comparativamente
elevado en estrógenos conjugados, referido a la sustancia seca.
Además, con el procedimiento de la presente invención ha de ser
posible de modo sencillo tratar una mezcla de estrógenos conjugados
procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en
sustancias constitutivas fenólicas de la orina, que pueda contener
cantidades alternativas y eventualmente incrementadas de compuestos
lipófilos no conjugados, de manera que la mezcla de estrógenos
equinos conjugados natural, obtenida con la presente invención,
presente buenos contenidos en principios activos y cumpla las
especificaciones farmacéuticas exigidas, en particular debe mantener
los valores límite necesarios en relación con el contenido en
estrógenos conjugados referido a la sustancia seca.
Se ha encontrado ahora un procedimiento con el
cual se puede obtener, de manera sorprendentemente sencilla, una
mezcla de estrógenos equinos conjugados también a partir de una PMU
que presenta cantidades alternativas y eventualmente incrementadas
en compuestos lipófilos no conjugados, estando la mezcla de
estrógenos equinos conjugados obtenida ampliamente empobrecida en
derivados de flavonoides, isoflavonoides y norisoprenoides no
conjugados. En particular, el procedimiento de acuerdo con la
invención puede encontrar aplicación en una mezcla de estrógenos
conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida
en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, de modo que con
el procedimiento se obtiene una mezcla de estrógenos equinos
conjugados la cual presenta una elevada calidad de producto y
cumple con seguridad los requisitos de la especificación
farmacéutica, en particular también en relación con los valores
límites a mantener en relación con el contenido en estrógenos
conjugados referido s la sustancia seca.
El procedimiento de acuerdo con la invención
para la obtención de una mezcla natural de estrógenos equinos
conjugados se caracteriza porque la mezcla obtenida está empobrecida
en compuestos lipófilos no conjugados del grupo que abarca
flavonoides no conjugados, isoflavonoides no conjugados,
norisoprenoides no conjugados, esteroides no conjugados, en
particular esteroides de androstano y pregnano, y compuestos no
conjugados equiparables, y porque el procedimiento se distingue
porque
- a)
- una fase acuosa de partida, elegida del grupo que comprende
- (i)
- una solución acuosa de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina,
- (ii)
- un concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina,
- (iii)
- un concentrado de un líquido de la orina, y
- (iv)
- un concentrado de orina liberado de sustancias sólidas y mucilaginosas, el cual fue prepurificado mediante procedimientos de separación, seleccionados del grupo que comprende decantación, separación, filtración y combinaciones de los procedimientos antes mencionados, o un material retenido de orina concentrado, obtenido mediante filtración,
- \quad
- se somete a una extracción líquido-líquido con una cantidad suficiente de un agente de extracción y, a continuación, se separa la fase acuosa, representando el agente de extracción un disolvente orgánico, adecuado para la extracción de compuestos no conjugados del grupo antes indicado, no miscible o apenas miscible con agua y seleccionado del grupo consistente en alcoholes C_{4}-C_{10} de cadena lineal, ramificados o cíclicos, ácidos C_{2}-C_{10} esterificados, aldehídos C_{3}-C_{10}, cetonas C_{4}-C_{10}, éteres C_{2}-C_{10}, nitrilos C_{3}-C_{6} y halogenoalcanos C_{1}-C_{3}, y mezclas de los disolventes antes mencionados, y
- b)
- eventualmente, con la fase acuosa obtenida se repite la etapa a) del procedimiento y
- c)
- se obtiene una fase acuosa que contiene la mezcla natural de estrógenos conjugados y, eventualmente, esta fase se concentra.
Para el procedimiento de acuerdo con la
invención pueden emplearse como fase acuosa de partida una solución
acuosa (i) de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente
de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias
constitutivas fenólicas de la orina o un concentrado acuoso (ii) de
una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina
de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas
fenólicas de la orina. Esta solución acuosa o este concentrado
acuoso pueden obtenerse mediante un procedimiento tal como se ha
descrito ya, por ejemplo, en las solicitudes de patente
internacionales WO 98/08526 y WO 98/08525 o en la solicitud de
patente china CN 1308083 y, por consiguiente, resulta habitual para
el experto en la materia a partir de estas solicitudes de patente
publicadas. El contenido de estos documentos WO 98/08526, WO
98/08525 y CN 1308083 se hace también objeto de la presente
solicitud para fines de divulgación. Una solución acuosa o un
concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados
procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en
sustancias constitutivas fenólicas de la orina puede ser también el
producto de un proceso de extracción
líquido-líquido tal como se describe, por ejemplo,
en la solicitud de patente internacional WO 01/27134. Las
soluciones o los concentrados acuosos obtenidos según los
procedimientos descritos en las solicitudes de patente precedentes
pueden continuar concentrándose antes de su utilización en el
procedimiento de acuerdo con la invención de manera en sí conocida,
tal como por ejemplo por destilación, con el fin de obtener un
concentrado ampliamente liberado de disolvente orgánico.
Además, para el procedimiento de acuerdo con la
invención pueden emplearse como fase acuosa de partida un
concentrado (iii) obtenido por concentración a partir de la PMU o un
concentrado (iv) obtenido a partir de la PMU el cual ya fue
previamente purificado por filtración o procedimientos equiparables.
La orina recogida (PMU) se libera primeramente, de manera en sí
conocida, de sustancias mucilaginosas y sólidos. Convenientemente,
se pueden depositar sólidos y sustancias mucilaginosas y éstos se
separan luego según métodos de separación en sí conocidos, por
ejemplo decantación, separación y/o filtración. Así, por ejemplo, la
PMU puede conducirse, por ejemplo, a través de un dispositivo de
separación en sí conocido, por ejemplo un separador, una instalación
de filtración o un sedimentador. Como dispositivo de separación
puede servir, por ejemplo, un lecho de arena, o pueden emplearse
separadores habituales en el comercio, por ejemplo separadores de
toberas o cámara. En caso deseado, también puede emplearse una
instalación de microfiltración o una instalación de ultrafiltración,
con cuya utilización se puede alcanzar al mismo tiempo una amplia
ausencia de gérmenes y virus de la PMU filtrada.
En caso deseado, a la urea o al concentrado de
urea pueden añadirse agentes conservantes, germicidas, bactericidas
y/o agentes antihelmínticos.
Como concentrado de urea previamente purificado
(iv) puede emplearse también un material retenido de PMU concentrado
que puede obtenerse a partir de la PMU mediante una filtración en
membrana en sí conocida. El contenido en sólidos del material
retenido y su composición pueden variar en función de la PMU
empleada y de la membrana utilizada para la filtración en membrana,
por ejemplo su anchura de poros, así como por las condiciones de la
filtración. Por ejemplo, en el caso de utilizar una membrana de
nanofiltración, puede alcanzarse una concentración casi exenta de
pérdidas del contenido en estrógenos en el material retenido de PMU
con una eliminación simultánea de hasta 50% en peso de las
sustancias constitutivas de la PMU de bajo peso molecular. Para el
procedimiento de acuerdo con la invención pueden emplearse
materiales retenidos de PMU que fueron concentrados hasta una
relación de aproximadamente 1:10, por ejemplo una relación de
aproximadamente 1:7, y cuyo volumen, por consiguiente, puede ser
concentrado hasta aproximadamente 1/10, por ejemplo aproximadamente
1/7 del volumen original de la PMU.
Si en el caso del concentrado que encuentra
utilización como fase acuosa de partida se trata de un concentrado
de la PMU o de un concentrado de PMU ya previamente purificado, por
ejemplo mediante filtración en membrana, la mezcla obtenida de
estrógenos equinos conjugados, la cual ha sido empobrecida en
compuestos lipófilos no conjugados mediante el procedimiento de
acuerdo con la invención, puede presentar ya una pureza suficiente,
pero posiblemente puede contener todavía cantidades significativas
de sustancias constitutivas fenólicas de la orina que deben ser
separadas mediante etapas ulteriores del procedimiento. Así, con la
fase acuosa obtenida puede llevarse a cabo, por ejemplo, un
procedimiento tal como el que ha sido descrito en las solicitudes de
patente internacionales WO 98/08526 y WO 98/08525 o en la solicitud
de patente china CN 1308083 y que, por consiguiente, es habitual
para el experto en la materia a partir de estas solicitudes de
patente publicadas, con el fin de obtener un producto que satisfaga
las especificaciones farmacéuticas necesarias para estrógenos
conjugados, también en relación con el contenido en sustancias
constitutivas fenólicas de la orina.
En el marco de esta invención se ha de
considerar como particularmente preferida la utilización de una
solución acuosa de una mezcla natural de estrógenos conjugados
procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en
sustancias constitutivas fenólicas de la orina o de un concentrado
acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedentes
de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias
constitutivas fenólicas de la orina en forma de fase acuosa de
partida.
De acuerdo con la invención, en la etapa (a) del
procedimiento, con la fase acuosa de partida descrita con mayor
detalle anteriormente se puede llevar a cabo una extracción
líquido-líquido con una cantidad suficiente de un
agente de extracción el cual representa un disolvente orgánico no
miscible con agua o apenas miscible con ella y adecuado para la
extracción de compuestos lipófilos no conjugados, en particular de
flavonoides no conjugados, isoflavonoides no conjugados,
norisoprenoides no conjugados y esteroides no conjugados. Además,
el disolvente orgánico no debe ser miscible o apenas lo debe ser con
la fase acuosa de partida, significando apenas miscible que en la
fase acuosa esté presente como máximo 6% en volumen de disolvente
orgánico disuelto. Para esta etapa de extracción
líquido-líquido puede utilizarse básicamente todo
disolvente orgánico no miscible con agua, siempre que extraigan de
la fase acuosa los compuestos lipófilos no conjugados. Para la
extracción de compuestos lipófilos no conjugados, en particular de
flavonoides no conjugados, isoflavonoides no conjugados,
norisoprenoides no conjugados y esteroides no conjugados se adecuan,
por ejemplo, los siguientes disolventes orgánicos con 1 hasta 10
átomos de C los cuales pueden ser de cadena lineal, ramificados o
estar dispuestos cíclicamente: alcoholes
C_{4}-C_{10} (tales como, por ejemplo, butanol,
hexanol, ciclohexanol y pentanol), ácidos
C_{2}-C_{10} esterificados (tales como, por
ejemplo, acetato de etilo (= éster etílico de ácido acético),
acetato de metilo, acetato de propilo, acetato de isopropilo,
acetato de butilo, acetato de amilo, metilmalonato de etilo,
fosfonato de dimetilo), aldehídos C_{3}-C_{10} y
cetonas C_{4}-C_{10} (tales como, por ejemplo,
butanona, pentanona,
hexan-2,4-diona, hexanodial,
ciclohexanocarbaldehído,
metil-fenil-cetona y similares) o
bien compuestos alcoxi C_{3}-C_{10} en general,
éteres C_{2}-C_{10} (dietiléter,
metil-butilo terciario-éter), nitrilos
C_{3}-C_{6} y halogenoalcanos
C_{1}-C_{3} (cloruro de metileno), así como
mezclas de los disolventes antes mencionados. En particular, pueden
utilizarse en la presente invención ésteres alquílicos
C_{1}-C_{4} del ácido acético, hexanol,
dietiléter, cloruro de metileno, metil-butilo
terciario-éter y mezclas de los disolventes antes mencionados en
calidad de agentes de extracción. A partir de esta elección,
ésteres alquílicos C_{1}-C_{4} del ácido acético
y, en particular, el éster etílico del ácido acético (= acetato de
etilo) representan el agente de extracción de la presente invención
a utilizar de forma preferida.
En el caso de la extracción
líquido-líquido llevada a cabo de acuerdo con la
invención en la etapa (a) del procedimiento, por una cantidad
suficiente de un agente de extracción se ha de entender la relación
en volumen de la fase acuosa de partida al agente de extracción
como no limitante en el marco de esta invención. En general, se
emplea un volumen de disolvente orgánico que corresponde al volumen
de la fase acuosa de partida, pudiendo encontrarse no obstante la
relación de fase acuosa a orgánica en un intervalo entre 10:1 y
1:10. Preferiblemente, la relación en volumen de la fase acuosa de
partida al agente de extracción orgánico se encuentra en el
intervalo de 5:1 a 1:3; en particular se ha de considerar
conveniente una relación en volumen en el intervalo de 2:1 hasta
1:2.
La realización de un proceso de extracción de
este tipo es conocida por el experto en la materia a partir del
estado de la técnica. Habitualmente se lleva a cabo una extracción
líquido-líquido en un equipo que posibilita una
mezcladura a fondo continua de la fase acuosa y la fase orgánica no
miscible con agua. Por ejemplo, es adecuado un denominado equipo de
mezclador-sedimentador para la realización de un
proceso de extracción de este tipo, en el que las dos fases son
mezcladas mediante agitación.
Básicamente, la extracción
líquido-líquido descrita de acuerdo con la invención
puede llevarse a cabo a cualquier valor del pH de la fase acuosa de
partida. En una variante particularmente preferida de la extracción
líquido-líquido descrita de acuerdo con la
invención, en la etapa (a) del procedimiento se ajusta primeramente
el valor del pH de la fase acuosa de partida en un valor en el
intervalo entre 4 y 12. Preferiblemente, el valor del pH se ajusta
a un valor en el intervalo de 4,0 a 7,0, es decir en un intervalo
débilmente ácido hasta neutro. De modo muy particularmente
preferido, el valor del pH se ajusta a un valor en el intervalo de
4,0 a 6,0, en particular en el intervalo de 4,7 a 5,3.
Durante el ajuste del valor del pH, la solución
dispuesta se mezcla a fondo convenientemente en un recipiente
inerte y suficientemente grande tal como, por ejemplo, en un tonel
de acero noble con un agitador o un dispositivo equiparable, con el
fin de garantizar de esta forma un ajuste rápido y uniforme del
valor del pH. Para el ajuste del valor del pH pueden emplearse
bases o ácidos habituales. Así, por ejemplo, para disminuir el valor
del pH puede emplearse uno de los ácidos inorgánicos u orgánicos
habituales, convenientemente un ácido diluido. Se ha manifestado
como particularmente adecuado para disminuir o para ajustar un valor
del pH menor que 7, por ejemplo, la utilización de ácido sulfúrico
diluido, preferiblemente ácido sulfúrico 1 N, ácido acético
diluido, ácido fosfórico diluido o ácido clorhídrico diluido,
preferiblemente ácido clorhídrico 1 N.
La extracción líquido-líquido
descrita de acuerdo con la invención no requiere el ajuste de una
temperatura específica, sino que puede llevarse a cabo en un amplio
intervalo de temperaturas que puede encontrarse entre 5ºC y el
punto de ebullición del disolvente orgánico o bien, como máximo en
95ºC. Preferiblemente, la extracción
líquido-líquido de acuerdo con la invención se lleva
a cabo a la temperatura ambiente, ya que de este modo es mínima la
demanda de energía adicional. Como temperatura ambiente se considera
habitualmente la temperatura del entorno; por ejemplo, así se
designa una temperatura que se encuentra entre 10º y 30ºC.
La duración de una extracción
líquido-líquido de este tipo no se considera como
limitante en el marco de esta invención y puede oscilar entre 5 min
y varias horas; la duración oscila en función de la cantidad de la
fase acuosa de partida empleada. Típicamente, la fase acuosa
procedente de la etapa (a) del procedimiento y el agente de
extracción orgánico se mezclan entre sí durante 5 a 60 min,
preferiblemente durante 10 a 20 min, con el fin de conseguir una
transición lo más completa posible de los componentes lipófilos no
conjugados desde la fase acuosa a la fase orgánica.
A continuación de la etapa de extracción,
mediante mezcladura a fondo se deja reposar la mezcla de fases con
el fin de alcanzar una separación de las fases. La separación de
fases puede durar, en función de los volúmenes empleados, un
espacio de tiempo de 10 min hasta varias horas, dejándose reposar
preferiblemente las fases durante 30 a 120 min. Cuando la fase
acuosa y la fase orgánica se han separado una de otra, la fase
acuosa se separa y se conserva para la utilización ulterior,
mientras que la fase orgánica se desecha.
La etapa (a) del procedimiento antes descrita
puede repetirse eventualmente; entonces se une, de acuerdo con la
invención, una etapa (b) del procedimiento opcional en la que con la
fase acuosa obtenida en la etapa (a) del procedimiento se lleva a
cabo una extracción líquido-líquido renovada con una
cantidad suficiente de un agente de extracción que representa un
disolvente orgánico adecuado para la extracción de compuestos
lipófilos no conjugados, en particular de flavonoides no
conjugados, isoflavonoides no conjugados, norisoprenoides no
conjugados y esteroides no conjugados, no miscible con agua o apenas
miscible con ella.
Para la elección del agente de extracción y del
tipo de realización de la extracción, es decir el equipo que
encuentra utilización, la duración y la temperatura del proceso de
extracción han de considerarse ejemplares las posibilidades antes
indicadas bajo la etapa (a) del procedimiento.
\newpage
En las etapas (a) y (b) del procedimiento pueden
utilizarse, de acuerdo con la invención, en ambas etapas tanto
diferentes agentes de extracción como también el mismo agente de
extracción. Preferiblemente, en las dos etapas de extracción se
utiliza el mismo agente de extracción, en particular en ambas etapas
de extracción ha de encontrar utilización como agente de extracción
éster alquílico C_{1}-C_{4} del ácido acético,
pero en particular éster etílico del ácido acético.
En la extracción líquido-líquido
llevada a cabo de acuerdo con la invención en la etapa (b) del
procedimiento, por una cantidad suficiente de un agente de
extracción se ha de entender como no limitante en el marco de esta
invención la relación en volumen de la fase acuosa procedente de la
etapa (a) del procedimiento, ya extraída una vez y que contiene los
estrógenos equinos conjugados, al agente de extracción. En general,
se emplea un volumen de disolvente orgánico que se encuentra
claramente por debajo del volumen de la fase acuosa obtenida en la
etapa (a) del procedimiento, pudiendo encontrarse no obstante la
relación de fase acuosa a fase orgánica en un intervalo entre 40:1
y 1:2. Preferiblemente, la relación en volumen de la fase acuosa
obtenida en la etapa (b) del procedimiento al agente de extracción
orgánico se encuentra en el intervalo de 20:1 a 1:1. En particular,
se considera conveniente una relación en volumen en el intervalo de
10:1 a 2:1.
A continuación de la etapa de extracción,
mediante mezcladura a fondo en la etapa (b) del procedimiento se
deja reposar la mezcla de fases con el fin de alcanzar una
separación de las fases. La separación de fases puede durar un
espacio de tiempo de 10 min hasta varias horas, dejándose reposar
preferiblemente las fases durante 20 a 90 min. Cuando la fase
acuosa y la fase orgánica se han separado una de otra, la fase
acuosa se separa y se conserva para la utilización ulterior,
mientras que la fase orgánica se desecha.
Después de la separación de la fase orgánica de
la fase acuosa se obtiene, en la etapa (c) del procedimiento, una
fase acuosa que contiene la mezcla natural de estrógenos conjugados.
Esta fase acuosa contiene la mezcla natural de estrógenos
conjugados que se manifiesta en la PMU junto a una proporción
extremadamente pequeña del contenido en componentes lipófilos no
conjugados originalmente presente en la PMU o en los concentrados
de PMU preparados. En caso deseado, esta fase acuosa puede continuar
concentrándose de manera en sí conocida con el fin de obtener un
concentrado ampliamente exento de disolvente orgánico y adecuado
para la elaboración. Así, por ejemplo, a partir de la fase acuosa
obtenida pueden separarse por destilación los restos todavía
presentes de disolvente orgánico. Mediante la destilación puede
también ajustarse el contenido en sustancia seca de la fase acuosa
del extracto a un valor concreto, preferiblemente a un contenido de
sustancia seca en el intervalo entre 5 y 15%, en particular a un
contenido de sustancia seca de 9%. A continuación, para la
estabilización de la mezcla natural de estrógenos equinos conjugados
obtenida puede ajustarse todavía el valor del pH de la solución
acuosa del extracto a un valor en el intervalo alcalino,
preferiblemente en el intervalo entre 8 y 13, preferiblemente a un
valor entre 9 y 12. Para el ajuste del valor del pH se adecuan
bases que encuentran utilización habitualmente para el ajuste del
valor del pH, por ejemplo NaOH 1 N o Na_{2}CO_{3}.
La fase acuosa obtenida de acuerdo con la
invención en la etapa (c) del procedimiento y, eventualmente,
elaborada todavía ulteriormente o concentrada puede servir como
material de partida para la preparación de medicamentos que
contienen la mezcla natural de estrógenos equinos conjugados. En
caso deseado, mediante un proceso de secado adecuado tal como, por
ejemplo, secado por pulverización, se puede preparar una mezcla de
sólidos exenta de agentes eluyentes. Si la mezcla natural de
estrógenos conjugados se ha de utilizar para la preparación de
medicamentos sólidos, puede ser conveniente aportar por mezcladura a
la fase acuosa con contenido en estrógenos conjugados una sustancia
de soporte sólida ya antes de la concentración o del secado, con el
fin de obtener de este modo una mezcla de sustancias sólidas con
contenido en estrógenos conjugados y sustancias de soporte. Tanto
la fase acuosa que contiene la mezcla de estrógenos como también un
concentrado preparado a partir de ella o un producto sólido secado
pueden incorporarse, de manera en sí conocida, en preparados
galénicos sólidos o líquidos tales como, por ejemplo, tabletas,
grageas, cápsulas o emulsiones. Estos preparados galénicos pueden
prepararse según métodos en sí conocidos utilizando sustancias de
soporte sólidas o líquidas habituales tales como, por ejemplo,
almidón, celulosa, lactosa o talco, o parafinas líquidas, y/o
utilizando coadyuvantes farmacéuticos habituales, por ejemplo
agentes disgregantes de tabletas, inductores de disolución o agentes
conservantes. Así, el producto con contenido en estrógenos
conjugados puede mezclarse, de una manera en sí conocida, con las
sustancias de soporte y coadyuvantes farmacéuticos, y la mezcla
puede llevarse a una forma de dosificación adecuada.
En el caso de la extracción
líquido-líquido descrita de acuerdo con la
invención, a partir de una fase acuosa de partida la cual puede
representar una solución acuosa de una mezcla natural de estrógenos
conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya
empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, un
concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados
procedentes de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en
sustancias constitutivas fenólicas de la orina, un concentrado de un
líquido de la orina o un concentrado de orina eventualmente
purificado con antelación por filtración, se elimina una pluralidad
de compuestos lipófilos no conjugados en un procedimiento sencillo.
En el caso de los compuestos lipófilos no conjugados separados se
trata, en particular, de flavonoides no conjugados, isoflavonoides
no conjugados, norisoprenoides no conjugados y esteroides no
conjugados, en este caso en particular se trata de derivados de
androstano no conjugados y de derivados de pregnano no
conjugados.
En comparación con los métodos de extracción
líquido-líquido clásicos, encuentran en este caso
aplicación volúmenes menores de disolventes orgánicos, ya que como
fase acuosa de partida siempre se emplea un concentrado de la PMU
original. Por ejemplo, si para la fase acuosa de partida de la
extracción líquido-líquido descrita de acuerdo con
la invención encuentra aplicación un concentrado acuoso, el cual ha
sido obtenido con ayuda del procedimiento descrito en la solicitud
de patente internacional WO 98/08526, en lugar de 5000 l de PMU
sólo se emplean para la extracción aproximadamente 35 l de
concentrado y cantidades correspondientemente pequeñas de
disolventes orgánicos.
Si para la extracción
líquido-líquido de acuerdo con la invención como
fase acuosa de partida se emplea una solución acuosa de una mezcla
natural de estrógenos conjugados procedentes de la orina de yeguas
preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de
la orina o un concentrado acuoso de una mezcla natural de
estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya
empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, la
mezcla natural de estrógenos equinos conjugados, obtenida en forma
de extracto de principios activos, empobrecida en componentes
lipófilos no conjugados y en sustancias constitutivas fenólicas de
la orina, se distingue por una clara optimización de la
especificación farmacéutica, tal como se pudo comprobar de acuerdo
con la invención. En particular, mediante la extracción
líquido-líquido se manifiesta una mejora del 8 al
20% de la relación de los estrógenos equinos conjugados a la
sustancia seca, sin que se observen pérdidas dignas de mención en
el procedimiento de extracción de estrógenos equinos conjugados. Con
ello, la fase acuosa obtenida en la etapa (c) del procedimiento, la
cual contiene la mezcla natural de estrógenos equinos conjugados,
presenta, en comparación con el estado de la técnica, una
composición ventajosa y un contenido en hormonas totales
incrementado con relación a la sustancia seca. Con ello, se obtiene
un producto de calidad claramente mejorado, por ejemplo en relación
con la composición y el contenido en principios activos.
Se ha de designar como extraordinariamente
sorprendente el hecho de que un procedimiento hipotéticamente
sencillo de una extracción líquido-líquido de una
solución o concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos
conjugados, empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la
orina procedente de la orina de yeguas preñadas con contenido en
cantidades diferentes y alternantes de componentes lipófilos no
conjugados coopere de este modo a la mejora de calidad del extracto
obtenido de principios activos. En particular, es muy sorprendente
que la proporción de compuestos lipófilos no conjugados, que puede
oscilar fuertemente en función de la PMU utilizada, tanto
cuantitativamente como también en su composición, pueda reducirse de
manera segura mediante el procedimiento de acuerdo con la
invención, de modo que en la etapa (c) del procedimiento pueda
obtenerse, como fase acuosa, una mezcla de estrógenos equinos
conjugados naturales, que cumple los elevados requisitos de la
especificación farmacéutica, por ejemplo los requisitos establecidos
de acuerdo con la USP o la Farmacopea Europea.
Además, se ha de considerar como muy
sorprendente el hecho de que en la realización del procedimiento de
extracción de acuerdo con la invención puedan separarse también
compuestos lipófilos no conjugados tales como, por ejemplo, agentes
desespumantes, que han sido añadidos a la PMU previamente como
coadyuvantes en etapas del tratamiento dispuestas previamente, por
ejemplo en el marco de una preparación del concentrado.
En el procedimiento de acuerdo con la invención
se ha comprobado, como ventaja adicional, que el tratamiento
ulterior del concentrado extraído obtenido, en forma de una mezcla
natural de estrógenos equinos conjugados, empobrecida en compuestos
lipófilos no conjugados, y su transformación en una forma galénica
se simplifique y facilite esencialmente. Sorprendentemente, el
extracto de principios activos obtenido con el procedimiento de
acuerdo con la invención se distingue por un comportamiento de
secado muy bueno, y el sólido obtenido después del secado se
distingue por una capacidad de fluencia extraordinariamente buena.
De esta forma, por ejemplo el concentrado extraído, obtenido de
acuerdo con la invención, se puede aplicar de una forma claramente
más sencilla sobre el material de soporte que una solución no
extraída. También el ajuste de la concentración del principio
activo se simplifica y es reproducible.
El procedimiento de acuerdo con la invención
ofrece, como ya se ha descrito en detalle con anterioridad, una
serie de ventajas y mejoras con respecto al estado conocido de la
técnica. Así, la invención posibilita la utilización también de
cantidades alternantes de PMU que contiene componentes lipófilos no
conjugados, la cual puede presentar, por ejemplo, una proporción
incrementada en flavonoides libres, isoflavonoides libres,
norisoprenoides libres o derivados de esteroides libres, en este
caso, en particular, en esteroides de androstano y pregnano libres,
sin que peligren las especificaciones farmacéuticas a cumplir. Con
el procedimiento de acuerdo con la invención se puede garantizar
una composición uniforme de cargas individuales de extracto, dado
que los componentes lipófilos no conjugados, cuyo contenido y
composición en la PMU puede variar en función del tipo de
alimentación ingerida por las yeguas preñadas, son constantemente
eliminados y con ello, todos los extractos obtenidos presentan un
contenido equiparable de estrógenos equinos conjugados referido a la
sustancia seca. Además, mediante la separación de los componentes
lipófilos no conjugados, conseguida con el procedimiento de acuerdo
con la invención, se alcanza una concentración más elevada de las
sustancias activas, es decir de los estrógenos equinos conjugados,
en el extracto obtenido. El procedimiento de acuerdo con la
invención presenta, adicionalmente, también ventajas económicas, ya
que se reduce claramente el riesgo de perder principios activos
valiosos al no cumplir la especificación farmacéutica, por ejemplo
en el caso de contenidos insuficientes de estrógenos conjugados
referidos a la sustancia seca. Además, mediante la aplicación del
procedimiento descrito de acuerdo con la invención se posibilita un
ajuste esencialmente más preciso y reproducible del contenido en
principios activos del extracto obtenido. El procedimiento de
acuerdo con la invención proporciona un componente de principio
activo de calidad mejorada con un contenido en hormonas
incrementado, referido al contenido en sustancia seca. Este
componente de principio activo se adecua extraordinariamente para
la preparación de productos farmacéuticos que, como principio
activo, contienen una mezcla de estrógenos equinos conjugados
naturales.
Los siguientes ejemplos han de explicar más
detalladamente la invención, pero sin limitar su alcance.
En los siguientes ejemplos se indica una
prescripción de trabajo general para la obtención de extractos de
principios activos a partir de PMU que contienen la mezcla natural
de los estrógenos conjugados contenidos en la PMU y que están
ampliamente emprobrecidos en compuestos lipófilos no conjugados
tales como, por ejemplo, flavonoides no conjugados, isoflavonoides
no conjugados, norisoprenoides no conjugados, esteroides no
conjugados, en particular esteroides de androstano y pregnano, y
compuestos no conjugados equiparables. Se demuestra cómo se puede
obtener de acuerdo con la invención también a partir de PMU, que
puede presentar proporciones alternativas o incrementadas de
compuestos lipófilos no conjugados, un extracto de calidad con
elevados contenidos en principios activos.
Como fase acuosa de partida encuentran
aplicación 25,3 kg (Ejemplo 1) o 26,7 kg (Ejemplo 2) de concentrado
acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de
la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias
constitutivas fenólicas de la orina, los cuales fueron preparados a
partir de aproximadamente 5000 l de PMU con ayuda del procedimiento
descrito en la solicitud de patente internacional WO 98/08526
(contenido en sustancia seca (= TS) y también contenidos en
estrógenos conjugados, determinados mediante HPLC y GC, por ejemplo
sal sulfato de estroncio, y compuestos lipófilos no conjugados, por
ejemplo formononetina, están representados en la siguiente Tabla de
ejemplos para distintas cargas de concentrado acuoso empleado). Este
concentrado acuoso se mezcla a fondo en el tonel de acero noble con
ayuda de un agitador mientras que el valor del pH se ajusta a un
valor de aproximadamente 5,0 con H_{2}SO_{4} 1 N. La solución
obtenida se mezcla en un equipo de
mezclador-sedimentador en una relación de 10:8 de
fase acuosa a fase orgánica con éster etílico de ácido acético (EE
- datos cuantitativos, véase la siguiente Tabla de ejemplos) y se
agita intensamente durante aproximadamente 15 min. Después, la
mezcla se deja reposar durante aproximadamente 90 min para la
separación de fases. A continuación, las fases se separan y la fase
acuosa se mezcla de nuevo en la relación 10:2 de fase acuosa a fase
orgánica con éster etílico de ácido acético (EE - datos
cuantitativos, véase la siguiente Tabla de ejemplos) y se agita
durante 15 min. Después de la extracción, la mezcla se deja reposar
durante aproximadamente 30 min para la separación de fases. Después
de la separación de la fase orgánica, la fase acuosa se transfiere
a una caldera de reacción. A partir de la fase acuosa se separan por
destilación, a presión normal, restos todavía presentes de éster
etílico de ácido acético. Mediante la destilación, el contenido en
sustancia seca se ajusta a aproximadamente 9%. A continuación, el
valor del pH de la solución se ajusta a aproximadamente 11,0
mediante la adición de NaOH 1 N o Na_{2}CO_{3}. El contenido de
la fase de extracto acuosa, así obtenida, en estrógenos conjugados
se verifica mediante análisis de HPLC y GC (contenido en sustancia
seca (= TS) y también mediante contenidos en estrógenos conjugados
determinados mediante HPLC y GC, por ejemplo sal sulfato de
estroncio, y compuestos lipófilos no conjugados, por ejemplo
formononetina, se representan en la siguiente Tabla de ejemplos
para diferentes cargas de concentrado acuoso empleado). La relación
de los componentes de hormonas individuales entre sí, es decir la
proporción relativa de sulfato de estroncio, sulfato de equilina y
17-alfa-DH-sulfato
de equilina en la mezcla de estrógenos conjugados puede variar en
las distintas cargas en virtud de las oscilaciones naturales de la
PMU. Mediante una mezcladura pre-establecida de las
distintas cargas entre sí se puede ajustar entre sí la relación
deseada de los componentes de hormonas individuales.
Este procedimiento de extracción puede llevarse
a cabo de manera análoga, si en lugar del concentrado acuoso de una
mezcla natural de estrógenos conjugados procedentes de la orina de
yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas
fenólicas de la orina, se emplea como fase acuosa de partida un
concentrado de un líquido de orina, un concentrado de orina
eventualmente prepurificado por filtración, o como fase acuosa de
partida se emplea una solución acuosa de una mezcla natural de
estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya
empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas.
Claims (9)
1. Procedimiento para la obtención de una mezcla
natural de estrógenos equinos conjugados, caracterizado
porque la mezcla obtenida está empobrecida en compuestos lipófilos
no conjugados del grupo que abarca flavonoides no conjugados,
isoflavonoides no conjugados, norisoprenoides no conjugados,
esteroides no conjugados, en particular esteroides de androstano y
pregnano, y compuestos no conjugados equiparables, y porque el
procedimiento se distingue porque
- a)
- una fase acuosa de partida, elegida del grupo que comprende
- (i)
- una solución acuosa de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina,
- (ii)
- un concentrado acuoso de una mezcla natural de estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina,
- (iii)
- un concentrado de un líquido de la orina obtenido por concentración, y
- (iv)
- un concentrado de orina liberado de sustancias sólidas y mucilaginosas
- (v)
- un concentrado de orina liberado de sustancias sólidas y mucilaginosas, el cual fue prepurificado mediante procedimientos de separación, seleccionados del grupo que comprende decantación, separación, filtración y combinaciones de los procedimientos antes mencionados, o un material retenido de orina concentrado, obtenido mediante filtración,
- \quad
- se somete a una extracción líquido-líquido con una cantidad suficiente de un agente de extracción y, a continuación, se separa la fase acuosa, representando el agente de extracción un disolvente orgánico, adecuado para la extracción de compuestos no conjugados del grupo antes indicado, no miscible o apenas miscible con agua y seleccionado del grupo consistente en alcoholes C_{4}-C_{10} de cadena lineal, ramificados o cíclicos, ácidos C_{2}-C_{10} esterificados, aldehídos C_{3}-C_{10}, cetonas C_{4}-C_{10}, éteres C_{2}-C_{10}, nitrilos C_{3}-C_{6} y halogenoalcanos C_{1}-C_{3}, y mezclas de los disolventes antes mencionados, y
- b)
- eventualmente, con la fase acuosa obtenida se repite la etapa a) del procedimiento y
- c)
- se obtiene una fase acuosa que contiene la mezcla natural de estrógenos conjugados y, eventualmente, esta fase se concentra.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que en la etapa (a) del procedimiento, como fase acuosa de
partida se utiliza una solución acuosa (i) de una mezcla natural de
estrógenos conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya
empobrecida en sustancias constitutivas fenólicas de la orina, o un
concentrado acuoso (ii) de una mezcla natural de estrógenos
conjugados procedente de la orina de yeguas preñadas, ya empobrecida
en sustancias constitutivas fenólicas de la orina.
3. Procedimiento según la reivindicación 2, en
el que el empobrecimiento en sustancias constitutivas fenólicas de
la orina se efectúa mediante extracción en fase sólida en resinas
adsorbedoras semipolares no iónicas o en gel de sílice
hidrofobizado.
4. Un procedimiento según una de las
reivindicaciones precedentes, en el que el agente de extracción se
elige del grupo consistente en éster alquílico
C_{1}-C_{4} del ácido acético, hexanol,
dietiléter, cloruro de metileno, metilo-butilo
terciario-éter y mezclas de los disolventes antes mencionados.
5. Un procedimiento según la reivindicación 4,
en el que el agente de extracción es éster alquílico
C_{1}-C_{4} del ácido acético, preferiblemente
éster etílico del ácido acético.
6. Un procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que en la etapa (a) del procedimiento
la fase acuosa de partida se ajusta a un valor del pH en el
intervalo entre 4 y 12.
7. Un procedimiento según la reivindicación 6,
en el que el valor del pH se ajusta en el intervalo de 4,0 a 7,0,
en particular en el intervalo de 4,0 a 6,0 y, preferiblemente, en el
intervalo de 4,7 a 5,3.
8. Un procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, en el que en la etapa (a) del procedimiento
la relación en volumen de la fase acuosa de partida al agente de
extracción se encuentra en el intervalo de 5:1 a 1:3,
preferiblemente en el intervalo de 2:1 a 1:2.
9. Un procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 8, en el que en la etapa (b) del procedimiento
la relación en volumen de la fase acuosa obtenida en la etapa (a)
del procedimiento al agente de extracción se encuentra en el
intervalo de 20:1 a 1:1, preferiblemente en el intervalo de 10:1 a
2:1.
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