ES2341404T3

ES2341404T3 - Utilizacion de derivados de la cisteina para preparar un medicamento destinado a tratar las patologias resultantes de la formacion de la proteina g het.

Info

Publication number: ES2341404T3
Application number: ES99929394T
Authority: ES
Inventors: Gregoire Prevost; Marie-Odile Lonchampt; Thomas Gordon
Original assignee: Ipsen Pharma SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1998-07-08
Filing date: 1999-07-05
Publication date: 2010-06-18
Anticipated expiration: 2019-07-05
Also published as: NO20010029D0; NZ509789A; US20030162786A1; AR019908A1; FR2780974B1; AU4622299A; WO2000002881A3; FR2780974A1; US20060035899A1; US7034025B2; DE69942095D1; MY122419A; ATE459625T1; US6544995B1; EP1100801A2; ZA200101061B; JP2002520327A; AU756268B2; EP1100801B1; RU2268889C2

Abstract

Utilización de un derivado de cisteína de fórmula general (A): **(Ver fórmula)** correspondiente a las subfórmulas (A1) o (A2): **(Ver fórmula)** en las que:X representa R12 e Y representa R8, o X e Y completan un ciclo de 6 eslabones, representando el conjunto X-Y el radical -CH(R8)-CH(R9)-; R1 representa H, un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono o alquiltio que comprende 1 a 6 átomos de carbono; R2 y R3 representan independientemente H o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono; R4 representa H2 u O; R5 representa H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, alquinilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, -OR10, -S(O)mR10 (representando m 0, 1, ó 2), -N(R10)(R11), -N-C(O)-R10, -NH-(SO2)-R10, -CO2-R10, C(O)-N(R10)(R11), y -(SO2)-N(R10)(R11); R6 y R7 representan independientemente H, un radical -C(O)-NH-CHR13-CO2R14, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R10)(R11), COOH, CON(R10)(R11), y halógeno, o R6 y R7 forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo; R8 y R9 representan independientemente, H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R10)(R11), COOH, CON(R10)(R11) y halógeno, o R8 y R9 forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo; R10 y R11 representan independientemente H, un radical arilo o heterociclo, o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono; R12 representa NR9, S, u O; R13 representa un radical alquilo inferior eventualmente sustituido con un radical elegido entre los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, -OR10, -S(O)mR10 (representando m 0, 1, ó 2) y -N(R10)(R11); R14 representa H o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono; entendiéndose que los compuestos de fórmula general (A) pueden presentarse también en forma de dímeros cuando dos radicales R1 que representan cada uno un átomo de hidrógeno se eliminan por oxidación; o de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula general (A); para preparar un medicamento destinado a tratar patologías que resultan de la formación de la proteína G heterotrímera, caracterizada porque la patología a tratar se elige entre patologías ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes y obesidad, pero también entre las patologías siguientes: el cólera, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), diarrea del viajero y la pubertad precoz familiar masculina.

Description

Utilización de derivados de la cisteína para preparar un medicamento destinado a tratar las patologías resultantes de la formación de la proteína G HET.

La presente invención se refiere en particular a la utilización de derivados de la cisteína para preparar un medicamento destinado a tratar patologías resultantes de la formación de la proteína G heterotrímera. Estas enfermedades comprenden en particular enfermedades ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, proliferación celular benigna, oncogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes, obesidad, y enfermedades proliferativas benignas y malignas.

Las proteínas G son en realidad la asociación estructural de tres subunidades distintas llamadas \alpha, \beta y \gamma, pero funcionan como entidades disociables constituidas por subunidades \alpha por un lado y dímeros \beta/\gamma por otro.

Las proteínas G participan en la transmisión de señales del exterior de la célula gracias a su interacción con los receptores de siete dominios transmembrana hacia el interior por medio de diferentes efectores que incluyen adenilato ciclasa, fosfolipasa C o incluso canales iónicos. La enzima adenilato ciclasa genera AMP cíclico (AMPc) (cf. Gilman, A.G. Biosci.Rep. 15, 65-97 (1995)). Así, se sabe que para activar la adenilato ciclasa es necesario que las proteínas G estén transitoriamente en una forma heterotrímera, forma en la que el monómero constituido por una subunidad \alpha está asociado al dímero constituido por las subunidades \beta y \gamma. Es únicamente en esta situación cuando la señal del exterior de la célula puede activar la subunidad \alpha de una proteína G, la cual podrá, tras disociación, modular la adenilato ciclasa y modular la producción de AMPc.

Se sabe también que los dímeros \beta/\gamma pueden activar directamente efectores que conducen a la activación de quinasas reguladas por señales extracelulares (ERKs) o MAP quinasas. Se ha demostrado una relación directa entre las subunidades \beta/\gamma y las quinasas src o de tipo src (cf. Gutkind, J.S. J.Biol.Chem. 273, 1839-1842 (1998)).

Por otra parte, toxinas bacterianas como Vibrio cholera y Bortella pertussis, péptidos como mastoporan y suramina se han presentado como moduladores directos de la actividad de las proteínas G (cf. Freissmuth, M., Boehm, S., Beindl, W., y col. Mol.Pharmacol. 49, 602-611 (1996); Boehm, S., Huck, S., Motejlek, A., y col. Journal of Neurochemistry 66, 1019-1026 (1996); Cachero, T.G., Rigual, R., Rocher, A. & Gonzalez, C. Eur.J. Neurosci. 8, 2320-2327 (1996); Danilenko, M., Worland, P., Carlson, B., Sausville, E.A. & Sharoni, Y. Biochem. Biophys. Res. Commun. 196, 1296-1302 (1993); Beindl, W., Mitterauer, T., Hohenegger, M., Ijzerman, A.P., Nanoff, C. & Freissmuth, M. Mol. Pharmacol. 50, 415-423 (1996)).

Por ejemplo, la toxina colérica modifica la subunidad \alpha_{S} de la proteína G por adición de una ADP-ribosa procedente del NAD en un sitio aceptor específico de la arginina. Esto bloquea completamente la actividad de la GTPasa, provocando una estimulación persistente de su efector siguiente, la adenilato ciclasa y conduciendo a una superproducción de AMPc.

Se conocen también los efectos nefastos de una proporción anormal de AMPc y en particular tienen lugar a nivel de las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, proliferación celular benigna, oncogénesis, infección viral y funciones inmunológicas, diabetes y obesidad.

La patente US 5.705.686 describe inhibidores de farnesiltransferasa p21ras de fórmula general C^{1}R en la que C^{1} es 3-mercapto-2-amino-propilamino y R es un grupo bifenilo eventualmente sustituido con un grupo carboxilo y/o un grupo metilo. Estos compuestos pueden utilizarse en el tratamiento del cáncer.

La solicitud de patente PCT WO 97/38697 describe entre otros el inhibidor de geranilgeraniltransferasas GGTI-286

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Este compuesto es utilizable en el tratamiento del cáncer gracias a sus propiedades de sensibilización de las células a las radiaciones.

Por otra parte, la solicitud de patente francesa FR 2 736 638 se refiere a inhibidores de farnesiltransferasa de fórmula general

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en la que Y representa un radical Y-S-A_{1}- en el que Y es en particular H o un radical R_{4}-S- en el que R_{4} representa en particular un radical de fórmula general

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en la que A_{1}, X, X_{1}, Y_{1}, R'_{1}, R_{2}, R'_{2} y R se definen como sigue,

A_{1} representa un radical alquileno(C_{1}-C_{4}) eventualmente sustituido en \alpha del grupo >C(X_{1})(Y_{1}) (en particular con un radical amino, alquilamino o dialquilamino),

X_{1} e Y_{1} representan cada uno un átomo de hidrógeno o forman conjuntamente con el átomo de carbono al que están unidos un grupo >C=O,

R'_{1} representa un átomo de hidrógeno o un radical alquilo(C_{1}-C_{6}),

X representa un átomo de oxígeno o de azufre,

R_{2} representa un radical alquilo, alquenilo o alquinilo de C_{1}-C_{6} átomos de carbono eventualmente sustituido con un radical hidroxilo, alcoxi(C_{1}-C_{4}), mercapto, alquiltio(C_{1}-C_{4}), alquilsulfinilo(C_{1}-C_{4}) o alquilsulfonilo(C_{1}-C_{4}), entendiéndose que cuando R_{é} representa un radical alquilo sustituido con un radical hidroxilo, R_{2} puede formar con el radical carboxi en \alpha una lactona,

R'_{2} representa un átomo de hidrógeno o un radical alquilo(C_{1}-C_{6}),

R representa un átomo de hidrógeno o un radical alquilo(C_{1}-C_{6}) eventualmente sustituido con un radical alcoxi(C_{1}-C_{4}), alquiltio(C_{1}-C_{4}), alquilsulfinilo(C_{1}-C_{4}), alquilsulfonilo(C_{1}-C_{4}), fenilo eventualmente sustituido, fenoxi, feniltio, fenilsulfinilo, fenilsulfonilo, alquilamino(C_{1}-C_{4}), di-alquil(C_{1}-C_{4})-amino del que cada parte alquílica es de C_{1}-C_{4} átomos de carbono,

entendiéndose que el radical

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está en posición 3 ó 4 del grupo naftilo.

Estos compuestos se describen como agentes anticancerosos que bloquean la capacidad de la proteína Ras mutada de transformar las células normales en células cancerosas.

La solicitante acaba de descubrir que ciertos derivados de la cisteína, a saber, los compuestos de fórmula general (A)

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correspondiente a las subfórmulas (A1) o (A2):

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en las que:

: X representa R_{12} e Y representa R_{8}, o X e Y completan un ciclo de 6 eslabones, representando el conjunto X-Y el radical -CH(R_{8})-CH(R_{9})-;

: R_{1} representa H, un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono o alquiltio que comprende 1 a 6 átomos de carbono;

: R_{2} y R_{3} representan independientemente H o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono;

: R_{4} representa H_{2} u O;

: R_{5} representa H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, alquenilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, alquinilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales ser sustituidos eventualmente con radicales elegidos entre el grupo compuesto por un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, -OR_{10}, -S(O)_{m}R_{10} (representando m 0, 1, ó 2), -N(R_{10})(R_{11}), -N-C(O)-R_{10}, -NH-(SO_{2})-R_{10}, - CO_{2}-R_{10}, C(O)-N(R_{10})(R_{11}), y -(SO_{2})-N(R_{10})(R_{11});

: R_{6} y R_{7} representan independientemente H, un radical -C(O)-NH-CHR_{13}-CO_{2}R_{14}, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales ser eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por los radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R_{10})(R_{11}), COOH, CON(R_{10})(R_{11}), y halógeno,

: o R_{6} y R_{7} forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo;

: R_{8} y R_{9} representan independientemente, H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales ser eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por los radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R_{10})(R_{11}), COOH, CON(R_{10})(R_{11}) y halógeno,

: o R_{8} y R_{9} forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo;

: R_{10} y R_{11} representan independientemente H, un radical arilo o heterociclo, o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono;

: R_{12} representa NR_{9}, S, u O;

: R_{13} representa un radical alquilo inferior eventualmente sustituido con un radical elegido entre los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, -OR_{10}, -S(O)_{m}R_{10} (representando m 0, 1, ó 2) y -N(R_{10})(R_{11});

: R_{14} representa H o un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono;

entendiéndose que los compuestos de fórmula general (A) pueden presentarse también en forma de dímeros cuando dos radicales R_{1} que representan cada uno un átomo de hidrógeno se eliminan por oxidación;

o de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula general (A);

utilizado para preparar un medicamento destinado a tratar patologías que resultan de la formación de la proteína G heterotrímera a excepción, sin embargo, del cáncer y enfermedades proliferativas.

Por radical alquilo inferior se entiende un radical alquilo lineal o ramificado que comprende 1 a 6 átomos de carbono, y en particular los radicales metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo, pentilo, neopentilo, isopentilo, hexilo, isohexilo. Por radical heterocíclico se entiende un radical constituido por uno o varios ciclos y que incluye al menos un heteroátomo. Por radical arilalquilo, heterocicloalquilo, alquiltio o alcoxi inferior se entiende radicales cuyo radical alquilo tiene el significado indicado anteriormente.

En particular se pueden utilizar los compuestos siguientes para preparar medicamentos destinados a tratar patologías que resultan de la formación de la proteína G heterotrímera:

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-butil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(1-metilpropil)-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 1-[2(R)-amino-3-mercaptopropil]-2(S)-n-butil-4-(1-naftoil)piperazina;

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(metoxifenil)-8-(1-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina];

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: disulfuro de bis-1,1'-7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil-(2-(1-naftil)-8-(2-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo [1,2a]-pirazin-7-ilo);

-: el compuesto de fórmula:

7

: - el compuesto de fórmula:

8

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-fenil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilmetoxi)metil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(1-fenilmetoxi)etil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2a]pirazina, o su forma dímera;

-: y 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilsulfoniletil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pira- zina;

o incluso una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos compuestos.

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Se utilizará preferiblemente uno de los compuestos siguientes para la invención:

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina (I);

-: disulfuro de bis-1,1'-7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil-(2-(1-naftil)-8-(2-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]-pirazin-7-ilo) (II);

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina (III);

-: el compuesto de fórmula:

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-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-butil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina (V);

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(metoxifenil)-8-(1-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina (VI);

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-: el compuesto de fórmula:

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-: 1-[2(R)-amino-3-mercaptopropil]-2(S)-n-butil-4-(1-naftoil)piperazina.

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

Más preferiblemente, uno de los compuestos siguientes se utilizará para la invención:

-: disulfuro de bis-1,1'-7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil-(2-(1-naftil)-8-(2-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo [1,2a]-pirazin-7-ilo) (II);

-: el compuesto de fórmula:

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o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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Finalmente, los compuestos siguientes se preferirán más en particular:

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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Por tanto la invención se refiere en primer lugar a la utilización de los compuestos de fórmula general (A) tales como los descritos anteriormente para preparar un medicamento destinado a tratar patologías que resultan de la formación de la proteína G heterotrímera. En particular, se refiere a la utilización de dichos inhibidores para preparar medicamentos destinados a tratar enfermedades ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes y obesidad.

De modo más particular, la invención se refiere a la utilización de los compuestos de fórmula general (A) para preparar un medicamento destinado a tratar el cólera, el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), la diarrea del viajero y la pubertad precoz familiar masculina.

La invención tiene también por objetivo nuevos productos de fórmula general (A) numerados de 1 a 7 y descritos más adelante en los ejemplos, a saber:

-: y 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilsulfoniletil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina.

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También tiene por objetivo los nuevos productos mencionados o sus sales farmacéuticamente aceptables como medicamentos, así como su utilización para preparar un medicamento destinado a tratar patologías resultantes de la formación de la proteína G heterotrímera. En particular, se refiere a la utilización de dichos productos para preparar medicamentos destinados a tratar enfermedades ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, proliferación celular benigna, oncogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes, obesidad, y enfermedades proliferativas benignas y malignas.

Los productos particularmente preferidos para una utilización de acuerdo con la invención serán, por tanto, los siguientes:

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-: el compuesto de fórmula:

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-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina, o su forma dímera;

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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Asimismo la invención se refiere más en particular a la utilización de los compuestos anteriormente citados para preparar un medicamento destinado a tratar el cólera, el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), la diarrea del viajero y la pubertad precoz familiar masculina.

Los compuestos de fórmula general (A) y su preparación se describen en la solicitud de patente WO 97/30053 o en los ejemplos más adelante. La síntesis del compuesto de fórmula (VII) se describe en la parte experimental de esta solicitud.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención pueden estar en forma de sólidos, por ejemplo polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, liposomas o supositorios. Los soportes sólidos apropiados pueden ser, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, celulosa-carboximetilo de sodio, polivinilpirrolidina y cera.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención también se pueden presentar en forma líquida, por ejemplo, disoluciones, emulsiones, suspensiones o jarabes. Los soportes líquidos apropiados pueden ser, por ejemplo, el agua, disolventes orgánicos tales como el glicerol o glicoles, lo mismo que sus mezclas, en proporciones variadas, en agua.

La administración de un medicamento de acuerdo con la invención se podrá hacer por vía tópica, oral, parenteral, por inyección (intramuscular, subcutánea, intravenosa, etc.), etc. La vía de administración dependerá por supuesto del tipo de enfermedad a tratar.

La dosis de administración considerada para un medicamento de acuerdo con la invención está comprendida entre 0,1 mg y 10 g según el tipo de patología a tratar.

A menos que se definan de otra forma, todos los términos técnicos y científicos empleados aquí tienen el mismo significado que el habitualmente comprendido para un experto común en el campo al que pertenece esta invención. Asimismo, todas las publicaciones, solicitudes de patentes, todas las patentes y cualquier otra referencia mencionada aquí se incorporan como referencia.

Ejemplos Ejemplo 1 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 1

El compuesto 1 se ha preparado de acuerdo con el siguiente esquema de síntesis:

Esquema 1

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1.a) Carbobenciloxi-L-ciclohexilalanina

Se combina L-fenilalanina (10,0 g; 60,6 mmoles) con PtO_{2} (430 mg) en ácido acético (60 ml) y la mezcla se hidrogena bajo H_{2} a 20-50 psi (137895-344737,5 Pa) durante una noche. Se añade a la mezcla una disolución acuosa de HCl al 5% para obtener una disolución límpida y la hidrogenación se hace continuar hasta que cesa el consumo de hidrógeno. El catalizador se elimina por filtración y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo se recoge en metanol y agua y el pH se ajusta a 4,4 por adición de una disolución de NaOH al 10%. El producto obtenido se recupera por filtración y se utiliza sin purificación suplementaria.

Se pone L-ciclohexilalanina (60,6 mmoles) en suspensión en agua (100 ml), se añade K_{2}CO_{3} (8,36 g; 60,6 mmoles), después una disolución de N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (15,1 g; 60,6 mmoles) en CH_{3}CN (150 ml) y la mezcla obtenida se agita vigorosamente durante 45 minutos. La mezcla se concentra para dar un volumen de aproximadamente 100 ml y se lava con Et_{2}O (100 ml), después se acidifica con HCl concentrado y se extrae con AcOEt (2x 50 ml). Las fases AcOEt combinadas se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtran y concentran para dar un aceite claro (17,27 g; 93%).

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 7,5-7,6 (1H, d); 7,2-7,5 (5H, m); 5,0-5,1 (2H, s); 3,9-4,1 (1H, m); 0,7-1,8 (13H, m).

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1.b) 2-(1-(S)-((fenilmetoxi)carbonil)-amino-2-(ciclohexil)métil)-4-(2-metilfenil)-imidazol

Se coloca Cbz-(L)-ciclohexilalanina (4,58 g; 15,0 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (2,44 g; 7,50 mmoles) en una mezcla 2:1 de DMF:H_{2}O (75 ml). La mezcla obtenida se agita hasta que se vuelve homogénea. Se eliminan los disolventes a presión reducida, se disuelve el residuo en DMF (60 ml) y se añade 2-bromo-2'-metilacetofenona (3,20g; 15,0 mmoles) en DMF (30 ml). La mezcla se agita durante una noche a temperatura ambiente, después se filtra y concentra a presión reducida. El cetoéster obtenido se pone en disolución en xilenos (100 ml) y se añade acetato amónico (19,5 g; 0,25 moles). La mezcla se calienta a reflujo durante aproximadamente 3 horas con eliminación de AcONH_{4} excedente y de agua liberada por medio de una trampa de Dean-Stark. La mezcla de reacción se concentra a presión reducida, se recoge en AcOEt y se lava con una disolución saturada de NaHCO_{3} (100 ml) y una disolución saturada de NaCl (100 ml). La fase AcOEt se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra a vacío. El producto bruto obtenido se purifica por cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla de CHCl_{3}/MeOH 98/2 como eluyente. Las fracciones que contienen el producto puro se combinan y concentran para dar el producto (2,52 g; 40%) en forma de una espuma ligeramente parda que se utiliza en la etapa siguiente sin purificación suplementaria.

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1.c) 2-(1-(S)-((fenilmetoxi)carbonil)-amino-2-(ciclohexil)metil)-1-((2-etoxi-2-oxo)etil)-4-(2-metilfenil)-imidazol

El producto intermedio 1.b (2,52 g; 6,0 mmoles) se pone en disolución en DMF (20 ml) y se trata con K_{2}CO_{3} (1,67g, 12,1 mmoles) y se añade bromoacetato de etilo (1,34 ml; 12,5 mmoles). La mezcla obtenida se caliente a 45ºC durante una hora y media. La mezcla se diluye con éter (50 ml) y se lava con una disolución saturada de NaHCO_{3} (50 ml) y después con una disolución saturada de NaCl (50 ml). La capa etérea se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra para dar un aceite que se utiliza en la etapa siguiente sin purificación suplementaria.

Espec. masas: 504,3 MH+.

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1.d) 8-(ciclohexilmetil)-6-oxo-2-(2-metilfenil)-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio bruto de la etapa 1.c se pone en disolución en ácido acético (50 ml) que contiene un catalizador de Pd al 10% sobre carbono (152 mg), después se hidrogena a una presión de 50 psi (344737,5 Pa) de H_{2} durante 18 horas a temperatura ambiente. El catalizador se elimina por filtración y el filtrado se calienta a 70ºC durante 2 horas. La mezcla obtenida se concentra a presión reducida, se disuelve en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) y se lava con una disolución saturada de NaHCO_{3} (100 ml). La capa del CH_{2}Cl_{2} se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra para dar un aceite viscoso que se utiliza en la etapa siguiente sin purificación suplementaria.

Espec. masas: 324,3 MH+.

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1.e) 8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidroimidazo[1,2-a]pirazina

El compuesto intermedio bruto de la etapa 1.c se pone en disolución en THF (25 ml) y se trata a temperatura ambiente con una disolución 1M de BH3 en THF (25 ml) durante media hora, después se lleva a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfría con un baño de hielo y se añade HCl 4N (40 ml) gota a gota a 0ºC. La mezcla se lleva nuevamente a temperatura ambiente, después se lleva a reflujo durante 1 hora. El medio de reacción se enfría después, se filtra y concentra a presión reducida. El residuo se trata con una disolución saturada de NaHCO_{3} (50 ml) y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (3x 50 ml). Las fases de CH_{2}Cl_{2} se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtran y concentran para dar un aceite ligeramente pardo (1,63 g; rendimiento de 87% con respecto a las etapas 1.c, 1.d y 1.e).

Espec. masas: 310,3 MH+.

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1.f) 8-(ciclohexilmetil)- 7-[2-((1,1-dimetiletoxi)carbonil)amino)-1-oxo-3-((trifenilmétil)tio)propil]- 2-(2-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-imidazo-[1,2a]-piperazina

Se pone en disolución en CH_{2}Cl_{2} (25 ml) diisopropilcarbodiimida (908 \mul; 5,80 mmoles) y BocCys(trt)-OH (5,37g; 11,6 mmoles), agitándose la mezcla obtenida durante 45 minutos. Se añade después 8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidroimidazo[1,2-a]pirazina (1,63 g; 5,27 mmoles). La mezcla de reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente. Se elimina el disolvente a presión reducida y el producto obtenido se purifica por cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla de CH_{2}Cl_{2}/MeOH 98/2 como eluyente. Las fracciones puras se concentran para dar un aceite viscoso que se utiliza en la etapa siguiente sin purificación suplementaria.

Espec. masas: 755,6 MH+.

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1.g) 7-(2-amino-1-oxo-3-(mercaptopropil))-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-4,5,6,7-tetrahidro-imidazo-[1,2a]-piperazina: 1

El producto intermedio de la etapa 1.f (3,54 g; 4,69 mmoles) se pone en disolución en ácido trifluoroacético (TFA, 80 ml) que contiene triisopropilsilano (1,92 ml; 9,38 mmoles) y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante una hora. La mezcla de reacción se filtra y el filtrado se concentra a presión reducida. El residuo se extrae por trituración con una disolución acuosa de TFA al 0,1% (6x 65 ml) y se filtra. El producto bruto se purifica por HPLC preparativa sobre una columna C18 utilizando un gradiente de 0 a 20% de CH_{3}CN en una disolución acuosa de TFA al 0,1% durante 30 minutos. Las fracciones puras de producto se reúnen y liofilizan. El producto inicial se liofiliza dos veces a partir de una disolución diluida de HCl para dar el producto en forma de su hidrocloruro (740 mg; 32%).

Espec. masas: 413,2 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 8,5-9,0 (3H, d, ancho); 7,8-8,0 (1H, s); 7,5-7,7 (1H, d); 7,2-7,5 (3H, m); 5,8-6,1 (1H, m); 4,65-4,8 (1H, s); 4,5-4,7 (1H, d); 4,1-4,4 (2H, m); 3,8-4,0 (1H, m); 3,2-3,7 (H_{2}O); 2,8-3,1 (2H, m); 2,35-2,5 (3H, s); 2,0-2,2 (1H, m); 1,8-2,05 (2H, m); 1,25-1,4 (4H, s ancho); 1,3-0,9 (6H, m).

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Ejemplo 2 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-fenil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 2

El compuesto 2 se prepara de acuerdo con el esquema 1, etapas b a g, de acuerdo con un método análogo al del ejemplo 1, reemplazando la 2-bromoacetofenona a la 2-bromo-2'-metilacetofenona en la etapa b.

Espec. masas: 399,2 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 8,5-8,9 (3H, d ancho); 8,0-8,2 (1H, s); 7,8-8,0 (2H, d); 7,45-7,56 (2H, t); 7,35-7,5 (1H, t); 5,9-6,05 (1H, s ancho); 4,65-4,8 (1H, s); 4,5-4,65 (1H, d); 4,1-4,35 (2H, m); 3,8-4,0 (1H, m); 3,2-3,8 (H_{2}O); 3,25-3,4 (1H, t); 2,8-3,05 (2H, m); 2,05-2,2 (1H, d); 1,85-2,05 (2H, t); 1,55-1,75 (4H, s ancho); 1,15-1,3 (1H, s ancho); 1,2-0,9 (5H, m).

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Ejemplo 3 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilmetoxi)metil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 3

El compuesto 3 se prepara de acuerdo con el esquema 1, etapas b a g, de acuerdo con un método análogo al del ejemplo 1, reemplazando el Boc-(L)-Ser(Bzl)-OH a la Cbz-(L)-ciclohexilalanina en la etapa b y siendo reemplazada la etapa d por una desprotección que utiliza TFA e iPr_{3}SiH de acuerdo con un método análogo a la reacción 1.g. El producto se obtiene en forma de un par de diastereoisómeros en una proporción de 2:3.

Espec. masas: 453,2 MH+.

Los tiempos de retención para los diastereoisómeros son 6,58 y 7,07 minutos respectivemente en el sistema de HPLC siguiente:

Eluyente:: 30-50% CH_{3}CN/0,1% TFA

Duración de la elución:: 24 minutos

Detección:: 254 nm

Columna:: proteína Vydac y péptido C18

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Ejemplo 4 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(1-fenilmetoxi)etil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 4

El compuesto 4 se prepara de acuerdo con el esquema 1, etapas b a g, de acuerdo con un método análogo al del ejemplo 3, reemplazando el Boc-(L)-Thr(Bzl)-OH al Boc-(L)-Ser(Bzl)-OH en la etapa b.

Espec. masas: 467,3 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 8,5-8,9 (3H, d, ancho); 8,0-8,1 (1H, s); 7,95-8,1 (2H, d); 7,4-7,5 (1H, t); 7,15-7,3 (1H, d); 7,0-7,2 (3H, m); 6,9-7,05 (2H, m); 5,85-5,95 (1H, d); 4,75-4,85 (1H, s ancho); 4,65-4,8 (1H, s ancho); 4,35-4,65 (3H, m); 4,1-4,25 (2H, q); 3,9-4,0 (3H, s); 2,8-3,1 (2H, m); 1,2-1,4 (3H, d).

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Ejemplo 5 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 5

El compuesto 5 se ha preparado de acuerdo con el siguiente esquema de síntesis:

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Esquema 2

14

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5.h) 2-(1-(S)-((fenilmetoxi)carbonil)-amino-2-(2-oxo-2-(fenilmetoxi)etil)-4-(2-metoxifenil)-imidazol

Se mezcla Cbz-(L)-Asp(Obzl)-OH (5,00 g; 14,0 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (2,28 g; 7,00 mmoles) en una mezcla 1:1 1 de DMF:H_{2}O (75 ml). La mezcla obtenida se agita hasta que se vuelve homogénea. Se eliminan los disolventes a presión reducida, se disuelve el residuo en DMF (60 ml) y se añade 2-bromo-2'-metoxiacetofenona (3,21 g; 14,0 mmoles) en DMF (30 ml). La mezcla obtenida se agita durante media hora a temperatura ambiente, después se filtra y concentra a presión reducida. El cetoéster obtenido se tritura con una mezcla 1:1 de Et_{2}O:hexanos (2x 40 ml), después se pone en suspensión en xilenos (100 ml). Se añade acetato amónico (17,5 g; 0,23 moles) y la mezcla se calienta a reflujo durante aproximadamente una hora y media con eliminación de AcONH_{4} excedente y de agua liberada por medio de una trampa de Dean-Stark. El medio de reacción se lava con una disolución saturada de NaHCO_{3} (50 ml), se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra a vacío para dar 6,66 g (98%) del producto deseado.

Espec. masas: 486,3 MH+.

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5.i) 2-(I-(S)-((fenilmetoxi)carbonil)-amino-2-((2-fenilmetoxi-2-oxo)etil)-1-((2-etoxi-2-oxo)etil)-4-(2-metoxifenil)-imidazol

El producto intermedio 5.i se prepara de acuerdo con un método análogo al de la etapa 1.c.

Espec. masas: 572,3 MH+.

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5.j) ácido (6-oxo-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazin-8-il)-acético

El producto intermedio 5.j se prepara de acuerdo con un método análogo al de la etapa 1.d.

Espec. masas: 302,2 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 8,35-8,5 (1H, d, ancho); 8,0-8,1 (1H, dd); 7,45-7,55 (1H, s); 7,15-7,25 (1H, m); 7,0-7,1 (1H, m); 6,9-7,0 (1H, m); 4,85-5,0 (1H, s ancho); 4,55-4,75 (2H, q); 3,85-3,95 (3H, s); 2,8-2,95 (2H, d).

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5.k) 8-hidroxietil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio 5.k se prepara de acuerdo con un método análogo al de la etapa 1.e, excepto el hecho de que se utiliza una proporción molar de 6/9 de BH_{3} con respecto al sustrato.

Espec. masas: 274,3 MH+.

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5.l) 7-((1,1-dimetiletoxi)carbonil)-8-hidroxietil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio 5.k (1,36 g; 5,0 mmoles) se pone en suspensión en H_{2}O (5 ml) y se añade una mezcla de dicarbonato de di-t-butilo (1,20 g; 5,5 mmoles) en p-dioxano (10 ml). El medio de reacción se agita vigorosamente y se mantiene a pH 8,0-8,4 por adición, gota a gota, de una disolución 2,5N de NaOH hasta que la reacción se termine (seguido de la reacción por CCM sobre gel de sílice, eluyente AcOEt:hexanos 3:2). El producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla de AcOEt:hexanos 3:2 como eluyente (sistema Biotage, columnas pre-rellenas de 4 x 15 cm). Las fracciones que contienen el producto se combinan y concentran a vacío para dar una espuma blanca (1,60 g; 86%).

Espec. masas: 374,3 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6): 7,95-8,05 (1H, d,d); 7,45-7,55 (1H, s); 7,10-7,25 (1H, m); 7,0-7,1 (1H, m); 6,9-7,05 (1H, m); 5,05-5,15 (1H, t); 4,25-4,35 (1H, t); 4,05-4,2 (1H, s ancho); 4,0-4,1 (1H, m); 3,9-4,0 (3H, s); 3,9-4,0 (1H, m); 3,25-3,35 (2H, m); 1,9-2,1 (2H, m); 1,15-1,25 (9H, s).

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5.m) 7-((1,1-dimetiletoxi)carbonil)-8-fenoxietil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio 5.1 (746 mg; 2,00 mmoles) se disuelve en THF (10 ml) que contiene trifenilfosfina (550 mg; 2,1 mmoles) y fenol (198 mg; 2,1 mmoles). La mezcla se enfría a 0ºC bajo nitrógeno y se añade gota a gota azodicarboxilato de dietilo (330 \mul; 2,1 mmoles) durante 10 minutos. Se agita después la mezcla de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente. Después se enfría nuevamente el medio de reacción a 0ºC y se añade trifenilfosfina (275 mg; 1,05 mmoles) y fenol (99 mg; 1,05 mmoles). Se añade después azodicarboxilato de dietilo (166 \mul; 1,05 mmoles) gota a gota durante 10 minutos, después la mezcla se agita otra vez durante 1 hora a temperatura ambiente. Se eliminan los disolventes a presión reducida y el producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla de AcOEt:hexanos 3:2 como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se combinan y concentran a vacío. Después de recristalización en AcOEt y hexanos, se obtiene el producto deseado en forma de un sólido blanco (863 mg; 96%).

Espec. masas: 450,4 MH+.

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5.n) 7-(2(((1,1-dimetiletoxi)carbonil)amino)-1-oxo-3-((trifenilmetil)tio)propil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-imidazo-[1,2a]-piperazina

El producto intermedio 5.m (850 mg; 1,89 mmoles) se trata con una mezcla de TFA (10 ml) que contiene iPr_{3}SiH (387\mul, 1,89 mmoles) a temperatura ambiente durante 20 min. Se eliminan los disolventes a presión reducida y el producto bruto se reparte entre AcOEt (15 ml) y una disolución saturada de NaHCO_{3} (15 ml). La fase AcOEt se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y concentra a presión reducida. El producto desprotegido se combina con Boc-(L)-Cys(Trt)-OH de acuerdo con un método análogo al de la etapa 1.f (1,26 g; 84%).

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5.o) 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-4,5,6,7-tetrahidro-imidazo-[1,2a]-piperazina

El producto 5 se prepara a partir del compuesto intermedio 5.n de acuerdo con un método análogo al de la etapa 1.g.

Espec. masas: 274,3 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6 a 90ºC): 8,5-9,2 (3H, s, ancho); 7,95-8,1 (1H, d); 7,85-8,0 (1H, s); 7,35-7,5 (1H, m); 7,15-7,35 (3H, m); 7,0-7,15 (1H, t); 6,85-7,0 (3H, m); 5,9-6,1 (1H, s, ancho); 4,5-4,8 (2H, m, ancho); 4,15-4,45 (3H, m, ancho); 3,9-4,0 (3H, s); 3,75-4,0 (1H, m, ancho); 2,8-3,05 (2H, m, ancho); 2,55-2,75 (2H, m, ancho).

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Ejemplo 6 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo-[1,2a]pirazina, dímero: 6

El compuesto 5.o (467 mg; 0,687 mmoles) se pone en disolución en H_{2}O (25 ml) y el pH de la disolución se ajusta a 7,2 por adición de una disolución acuosa diluida de NH_{4}OH. Se añade acetonitrilo para dar una disolución límpida y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche. El producto bruto se purifica por HPLC preparativa sobre una columna C 18 utilizando un gradiente de 15 a 40% de CH_{3}CN en TFA al 0,1% en un período de 50 minutos. Las fracciones puras de producto se reúnen y liofilizan. El producto inicial se liofiliza dos veces a partir de una disolución diluida de HCl para dar el producto en forma de su hidrocloruro (161 mg; 45%).

Espec. masas: 903,5 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6 a 90ºC): 8,7-9,3 (3H, s ancho); 7,95-8,1 (1H, d); 7,85-8,0 (1H, s); 7,3-7,5 (1H, t); 7,1-7,3 (3H, m); 7,0-7,15 (1H, t); 6,8-7,0 (3H, m); 5,85-6,1 (1H, s ancho); 4,7-4,9 (1H, s ancho); 4,45-4,7 (1H, m ancho); 4,1-4,5 (4H, m ancho); 3,85-4,0 (4H, s); 3,3-3,5 (2H, m ancho); 2,5-2,8 (2H, m ancho).

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Ejemplo 7 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilsulfoniletil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina: 7

El compuesto 7 se ha preparado de acuerdo con el siguiente esquema de síntesis:

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Esquema 3

15

7.p) 7-((1,1-dimetiletoxi)carbonil)-2-(2-metoxifenil)-8-(feniltioetil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio 5.1 (1,23 g; 3,30 mmoles), tri-n-butilfosfina (1,64 ml; 6,60 mmoles) y disulfuro de fenilo (1,44 g; 6,60 mmoles) se mezclan en THF (10 ml). La mezcla se agita a temperatura ambiente bajo argón durante 4 horas. Se eliminan los disolventes a presión reducida y el producto bruto se purifica por cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla de AcOEt:hexanos 1:1 como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se combinan y concentran a vacío para dar el producto en forma de una espuma blanca (1,43 g; 93%).

Espec. masas: 466,3 MH+.

7.q) 7-((1,1-dimetiletoxi)carbonil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilsulfoniletil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]pirazina

El producto intermedio 7.p (650 mg; 1,40 mmoles) se disuelve en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se añade ácido 3-cloroperoxibenzoico (483 mg; 2,80 mmoles) en varias porciones en un período de 10 minutos. La mezcla se vierte sobre una columna de sílice y se eluye con una mezcla de hexanos:AcOEt 7:3, después con una mezcla de hexanos:AcOEt 1:1 para dar el producto puro (220 mg; 32%).

Espec. masas: 498,3 MH+.

RMN ^{1}H (DMSO-d6 a 30ºC): 7,9-8,0 (3H, m); 7,7-7,85 (1H, m); 7,6-7,75 (2H, m); 7,45-7,55 (1H, s); 7,15-7,25 (1H, m); 6,9-7,1 (2H, m); 5,1-5,25 (1H, t); 4,1-4,3 (1H, d ancho); 4,0-4,15 (1H, m); 3,8-4,0 (1H, m); 3,85-3,95 (3H, s); 3,6-3,8 (1H, m); 3,4-3,6 (1H, m); 3,2-3,4 (H_{2}O más una señal imprecisa); 1,9-2,3 (2H, m); 1,3-1,5 (9H, s).

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Etapa 7.n)

La etapa 7.n se realiza de acuerdo con un método análogo a la etapa 5.n. El producto bruto se utiliza sin purificación complementaria en la etapa siguiente.

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Etapa 7.o)

La etapa 7.o se realiza de acuerdo con un método análogo a la etapa 5.o.

Espec. masas: 501,3 MH+.

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Preparación del compuesto de fórmula (VII)

Este compuesto, similar a los descritos en la solicitud de patente PCT WO 97/30053, se puede preparar de acuerdo con el esquema de síntesis siguiente:

16

Parte farmacológica

Con el fin de ilustrar la utilidad de la invención, se estudiará el efecto de un tratamiento de una línea de células humanas MCF-7 por los compuestos siguientes:

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina, denominado en esta parte como compuesto (I);

-: disulfuro de bis-1,1'-7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil-(2-(1-naftil)-8-(2-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo [1,2a]pirazin-7-ilo), denominado en esta parte como compuesto (II);

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-(2-metilfenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina, denominado en esta parte como compuesto (III);

-: el compuesto de fórmula:

17

denominado en esta parte como compuesto (IV);

7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-butil-2-(2-metoxifenil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina, denominado en esta parte como compuesto (V);

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(metoxifenil)-8-(1-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina, denominado en esta parte como compuesto (VI);

-: el compuesto de fórmula:

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denominado en esta parte como compuesto (VII).

Procedimientos Línea celular

Las líneas celulares MCF-7 (células pleurales humanas, cáncer de pecho) se han adquirido en la American Tissue Culture Collection (Rockville, Maryland, USA).

Medida de la cantidad intracelular de AMP cíclico para las células MCF-7

Se ponen en cultivo células MCF-7 sembradas en placas de 24 pozos (2.10^{4} células/pozo) durante 5 días en medio de Eagle modificado por Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) completado con 10% de suero fetal bovino inactivado por calentamiento (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50000 unidades/l de penicilina y 50 mg/l de estreptomicina (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), y glutamina 2 mM (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). El medio de cultivo se reemplaza después de dos lavados con un medio sin suero completado o no con los agentes especificados para un tiempo indicado en las diferentes figuras. Se añaden después a 37ºC agentes que activan la producción de AMP cíclico. La reacción se detiene al cabo de 30 minutos por supresión del medio y adición rápida de 100 \mul de disolución de HCl 0,1N. Esos extractos se congelan a -80ºC hasta que sean utilizados. La concentración de AMPc se mide utilizando un estuche comercial de medida (referencia NEK033 de NEN, Les Ulis, France) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se determina la radioactividad por un contador Gamma (Gamma Maser-1277, LKB, Turku, Finland).

Medida de la proliferación celular in vitro

Las células MCF-7 (3000 células/pozo) se cultivan en placas de 96 pozos en 80 \mul de medio de Eagle modificado por Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) completado con 10% de suero fetal bovino inactivado por calentamiento (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50000 unidades/l de penicilina y 50 mg/l de estreptomicina (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), y glutamina 2 mM (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), se han sembrado sobre una placa de 96 pozos en el día 0. Las células se han tratado en el día 1 durante 96 horas con concentraciones crecientes hasta 50 \muM de cada uno de los compuestos a probar. Al final de este período, la cuantificación de la proliferación celular se evalúa por ensayo colorimétrico basándose en la escisión de la sal de tetrazolio WST1 por las deshidrogenasas mitocondriales en las células viables conducentes a la formación de formazán (Boehringer Mannheim, Meylan, France). Esas pruebas se realizan por duplicado con 8 determinaciones por concentración probada. Para cada compuesto a probar, los valores incluidos en la parte lineal de la línea sigmoidea se han retenido para un análisis de regresión lineal y se han utilizado para calcular la concentración inhibidora (CI_{50}).

Medida de la actividad de la MAP quinasa

Se cultivan células MCF7 en placas de 6 pozos (5.10^{5} células/pozo) en el medio de Eagle modificado por Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) completado con 10% de suero de bovino fetal inactivado por calor (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), una mezcla de antibióticos: 50000 unidades/l de penicilina y 50 mg/l de estreptomicina (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) y glutamina 2 mM (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). Después de 24 horas de cultivo, las células se incuban durante 48 horas en medio que no contiene suero para llevar las células al estado de reposo. Las células se tratan entonces durante una hora, ya sea por el compuesto I o por el PD98059 (Calbiochem,France Biochem, Meudon, France), un inhibidor específico de la activación de la MAP quinasa. Después las células son estimuladas (o no) durante 5 minutos por 12,5 ng/ml de factor de crecimiento epidérmico (EGF). La reacción se detiene por dos lavados con PBS (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) a 4ºC que no contiene ni calcio ni magnesio y por adición de 150 \mul de tampón de lisis a 4ºC cuya composición es la siguiente: tris 10 mM, NaCl 150 mM, EGTA 2 mM, ditiotreitol 2 mM, PMSF 1 mM, ortovanadato 2 mM, 10 \mug/ml de leupeptina y 10 \mug/ml de aprotinina. Se realiza una dosificación de las proteínas contenidas en los extractos por el método de Bradford (reactivos Biorad, Ivry-Sur-Seine, France). Esos extractos se congelan a -80ºC hasta que sean utilizados. La actividad de la MAP quinasa se mide por medio de un estuche comercial de medida (referencia RPN 84, Amersham, Life Science, Les Ulis, France) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se determina la radioactividad por medio de un contador de centelleo Packard (Tricarb 5000CA).

Material

El péptido vasointestinal (VIP) se ha adquirido de Bachem (Voisins le Bretonneux, France). La toxina colérica, forskolina, isoproterenol, prostaglandina E2 y el PD 98059 se han adquirido de Calbiochem (France Biochem, Meodon, France). Los compuestos de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) y (VII) han sido suministrados por Biomeasure Inc. (Milford, MA, USA). Todos estos compuestos se han utilizado siguiendo las recomendaciones de sus fabricantes.

Resultados

La figura 1 muestra que la activación de la adenilato ciclasa por la toxina colérica (200 ng/ml) o por la forskolina (10 \muM) conduce a una elevación muy importante de la proporción de AMP cíclico. Un pretratamiento de las células durante 30 minutos con 30 \muM de compuesto (I) no modifica la producción de AMP cíclico inducida por el activador directo de la adenilato ciclasa, la forskolina. En cambio, la producción de AMP cíclico estimulada por el activador directo de la subunidad, la toxina colérica, está muy inhibida por el compuesto (I). Esto revela que la misma adenilato ciclasa no se modifica por el compuesto (I) y que éste impide la formación del complejo heterotrímero.

El VIP se ha presentado como un ligando extracelular de un receptor acoplado a la proteína G que estimula la síntesis de AMP cíclico en células humanas de cáncer de pecho. La figura 2 muestra que el tratamiento por el VIP de células humanas de cáncer de pecho MCF-7 aumenta la cantidad intracelular de AMP cíclico de manera dependiente de la concentración. La concentración de VIP de 10 nM que ofrece una producción de AMP cíclico casi óptima se utilizará para las pruebas siguientes. Esta concentración está de acuerdo con los datos ya publicados referentes a la línea de células humanas de cáncer de pecho T47D.

La figura 3 muestra que un pretratamiento de 30 minutos de las células MCF-7 resultantes de cultivos in vitro por el compuesto de fórmula (I) es suficiente para inhibir de manera dependiente de la concentración la acumulación de AMP cíclico estimulada por el VIP. Una inhibición casi completa se ha obtenido a una concentración de 100 \muM del compuesto de fórmula (I). Estos resultados muestran que un tratamiento por el compuesto (I) es suficiente para bloquear la transducción de la señal cuya vía utiliza las proteínas G heterotrímeras como mediadoras.

La figura 4 muestra que un tratamiento de una hora por el compuesto de fórmula (I) es suficiente para modificar la respuesta al VIP. Tratamientos de una duración más larga (8 horas y 24 horas) continúan inhibiendo la producción de AMP cíclico, pero el principal efecto se obtiene muy rápidamente.

El compuesto (I) es capaz también de inhibir la formación de AMP cíclico inducida por otros agentes que estimulan los receptores de siete dominios transmembrana. En las células MCF7, por ejemplo, la actividad de la adenilato ciclasa muy aumentada por la prostaglandina E_{2} está inhibida por un tratamiento de 30 minutos por el compuesto (I). Esto sugiere que el tratamiento de las células por el compuesto (I) modifica la forma heterotrímera de las proteínas G disociando la subunidad del dímero \beta/\gamma.

La inhibición de la estimulación por el VIP no está restringida a compuestos de estructura análoga a la del compuesto de fórmula (I). Como muestra la tabla I, los compuestos (II), (III), (IV), (V), (VI) y (VII) probados en el mismo modelo son también capaces de reducir la cantidad de AMP cíclico inducida por el VIP.

El conjunto de estos resultados sugiere que los compuestos probados modulan la actividad de la adenilato ciclasa modificando la forma heterotrímera de las proteínas G. Ahora bien, se sabe que los dímeros \beta/\gamma pueden activar directamente efectores conducentes a la activación de quinasas reguladas por señales extracelulares (ERKs) o MAP quinasas.

La figura 6 muestra que un tratamiento de las células durante 1 hora por el compuesto (I) duplica la actividad basal de la MAP quinasa. Esto sugiere que impidiendo la formación del complejo heterotrímero el compuesto (I) libera el heterodímero - que, él, permanece ligado a la membrana y activa la vía de ras. En cambio, la figura 7 muestra que después de una estimulación de 5 minutos de la MAP quinasa por el factor de crecimiento EGF, la actividad de la enzima ha aumentado aproximadamente 7 veces. Un pre-tratamiento durante 1 hora de las células, ya sea por el compuesto (I) o por el PD98059, un inhibidor específico de la activación de la MAP quinasa, reduce 2 veces la actividad de la MAP quinasa. Estos resultados sugieren que el compuesto (I) estimula en el estado basal la vía de ras e inhibe esta misma vía si ésta es estimulada, explicando así su efecto antiproliferativo.

La tabla II muestra en efecto que los compuestos (I), (II), (III) y (IV) son capaces de inhibir la proliferación in vitro de las células tumorales humanas MCF7.

TABLA 1 Efectos de los compuestos I, II, III y IV incubados durante 30 minutos sobre la producción de AMP cíclico estimulada por el VIP en las células MCF7

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Las células se incuban durante 30 minutos en presencia o no de los compuestos I, II, III y IV (30 \muM) que son estimuladas después por VIP 10^{-8} M. La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica. Los datos representan la media \pm ESM (n=5 para el testigo y n=1 para los diferentes compuestos).

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TABLA II Inhibición del crecimiento in vitro de las células MCF7 por los compuestos I, II, III y IV

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Los resultados de las CI_{50} se expresan en \muM y representan la media de 2 experimentos.

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Figuras

Figura 1

Efecto del compuesto I sobre la producción de AMP cíclico estimulada por la toxina colérica o la forskolina en las células MCF7

Las células se incuban durante 30 minutos en presencia o no del compuesto 1 (30 \muM) y son estimuladas después, ya sea por la toxina colérica (200 ng/ml) durante 90 minutos o por la forskolina (10^{-5} M) durante 30 minutos. La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica. Los datos representan la media \pm ESM (n=3).

Figura 2

Efecto de concentraciones crecientes de VIP sobre la producción de AMP cíclico en las células MCF7

Las células son estimuladas durante 30 minutos por el VIP a las concentraciones indicadas. La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica.

Figura 3

Efecto de diferentes concentraciones de compuesto I sobre la producción de AMP cíclico estimulada por el VIP en las células MCF7

Las células se incuban durante 24 horas en presencia de concentraciones crecientes del compuesto I y son estimuladas después durante 30 minutos por VIP 10^{-8} M. La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica. Los datos representan la media \pm ESM (n = 3).

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Figura 4

Efecto del tiempo de incubación de las células MCF7 en presencia del compuesto I sobre la producción de AMP cíclico estimulada por el VIP

Las células se incuban durante 1, 8 ó 24 horas en presencia o no del compuesto I (30 \muM) y son estimuladas después por VIP 10^{-8} M. La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica. Los datos representan la media \pm ESM (n = 1).

Figura 5

Efecto del compuesto I sobre la producción de AMP cíclico estimulada por el VIP, isoproterenol o prostaglandina E_{2} en las células MCF7

Las células se incuban durante 30 minutos en presencia o no del compuesto I (30 \muM) y son estimuladas después durante 30 minutos, ya sea por el VIP (10^{-8} M) o por el isoproterenol (10^{-6} M) o por la PGE_{2} (10^{-6} M). La cuantificación de AMP cíclico se determina por dosificación radio-inmunológica. Los datos representan la media \pm ESM (n = 3).

Figura 6

Efecto del compuesto I sobre la actividad basal de la MAP quinasa en las células MCF7

Las células privadas de suero durante 48 horas se tratan durante 1 hora por el compuesto I (10 y 50 \muM). La actividad de la MAP quinasa se determina en los lisados celulares y se expresa en pmoles de Pi incorporado/minuto/4 \mug de proteína.(n = 3 para las muestras testigo y n = 2 para las células tratadas por el compuesto I).

Figura 7

Efecto del compuesto I comparado con el PD98059 sobre la actividad de la MAP quinasa en las células MCF7

Las células privadas de suero durante 48 horas se tratan durante 1 hora ya sea por el compuesto 1 (10 y 50 \muM) o por el PD98059 (10 y 50 \muM). Las células son estimuladas después por la adición de EGF (12,5 ng/ml) durante 5 minutos. La actividad de la MAP quinasa se determina en los lisados celulares y se expresa en pmoles de Pi incorporado/minuto/4 \mug de proteína.(n = 4).

Claims

1. Utilización de un derivado de cisteína de fórmula general (A):

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correspondiente a las subfórmulas (A1) o (A2):

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en las que:

: R_{4} representa H_{2} u O;

: R_{5} representa H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, alquenilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, alquinilo que comprende hasta 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por un radical alquilo que comprende 1 a 6 átomos de carbono, -OR_{10}, -S(O)_{m}R_{10} (representando m 0, 1, ó 2), -N(R_{10})(R_{11}), -N-C(O)-R_{10}, -NH-(SO_{2})-R_{10}, -CO_{2}-R_{10}, C(O)-N(R_{10})(R_{11}), y -(SO_{2})-N(R_{10})(R_{11});

: R_{6} y R_{7} representan independientemente H, un radical -C(O)-NH-CHR_{13}-CO_{2}R_{14}, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R_{10})(R_{11}), COOH, CON(R_{10})(R_{11}), y halógeno,

: o R_{6} y R_{7} forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo;

: R_{8} y R_{9} representan independientemente, H, o uno de los radicales alquilo que comprenden 1 a 6 átomos de carbono, arilo, arilalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, heterociclo o heterocicloalquilo cuyo radical alquilo comprende 1 a 6 átomos de carbono, pudiendo esos radicales estar eventualmente sustituidos con radicales elegidos entre el grupo compuesto por radicales OH, alquilo o alcoxi que comprende 1 a 6 átomos de carbono, N(R_{10})(R_{11}), COOH, CON(R_{10})(R_{11}) y halógeno,

: o R_{8} y R_{9} forman conjuntamente un radical arilo o un heterociclo;

: R_{12} representa NR_{9}, S, u O;

para preparar un medicamento destinado a tratar patologías que resultan de la formación de la proteína G heterotrímera, caracterizada porque la patología a tratar se elige entre patologías ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes y obesidad, pero también entre las patologías siguientes: el cólera, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), diarrea del viajero y la pubertad precoz familiar masculina.

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2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto utilizado se elige entre uno de los compuestos siguientes:

-: disulfuro de bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(metoxifenil)-8-(1-metilpropil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina;

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenoxietil)-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2a]pirazina, o su forma dímera; y

-: 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-2-(2-metoxifenil)-8-(fenilsulfoniletil)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a] pirazina;

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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3. Utilización de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque el ompuesto utilizado se elige entre uno de los compuestos siguientes:

-: 1-[2(R)-amino-3-mercaptopropil]-2(S)-n-butil-4-(1-naftoil)piperazina;

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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4. Utilización de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizada porque el compuesto utilizado se elige entre uno de los compuestos siguientes:

-: o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de estos últimos.

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5. Utilización de 7-(2-amino-1-oxo-3-tiopropil)-8-(ciclohexilmetil)-2-fenil-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2a]pirazina o de una sal farmacéuticamente aceptable de este compuesto para la preparación de un medicamento caracterizado porque la patología a tratar se elige entre las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes, obesidad, cólera, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), diarrea del viajero y pubertad precoz familiar masculina.

6. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la patología a tratar se elige entre patologías ligadas a las funciones biológicas o trastornos siguientes: olfato, gusto, percepción de la luz, neurotransmisión, neurodegeneración, funcionamiento de las glándulas endocrinas y exocrinas, regulación autocrina y paracrina, tensión arterial, embriogénesis, infección viral, funciones inmunológicas, diabetes y obesidad.

7. Utilización de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la patología a tratar se elige entre las patologías siguientes: el cólera, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), diarrea del viajero y la pubertad precoz familiar masculina.