ES2346967T3 - Marcadores de expresion genica para la prognosis del cancer de mama. - Google Patents
Marcadores de expresion genica para la prognosis del cancer de mama. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2346967T3 ES2346967T3 ES04702177T ES04702177T ES2346967T3 ES 2346967 T3 ES2346967 T3 ES 2346967T3 ES 04702177 T ES04702177 T ES 04702177T ES 04702177 T ES04702177 T ES 04702177T ES 2346967 T3 ES2346967 T3 ES 2346967T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- expression
- dna
- hskip1cm
- artificial sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Motor Power Transmission Devices (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un método de predicción de la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente de cáncer de mama sin recurrencia del cáncer de mama, que comprende determinar el nivel de expresión del transcrito de RNA de CD68 en una muestra de tejido de cáncer de mama obtenida de dicho paciente, normalizado contra el nivel de expresión de todos los transcritos de RNA o sus productos en dicha muestra, o de una serie de referencia de transcritos de RNA o sus productos de expresión, en donde la expresión de CD68 indica una probabilidad reducida de supervivencia a largo plazo sin recurrencia de cáncer de mama.
Description
Marcadores de expresión génica para la prognosis
del cáncer de mama.
La presente invención proporciona genes y series
de genes cuya expresión es importante en la diagnosis y/o prognosis
del cáncer de mama.
Los oncólogos tienen diversas opciones de
tratamiento disponibles, con inclusión de diferentes combinaciones
de fármacos quimioterapéuticos que están caracterizados como
"patrón de atención", y cierto número de fármacos que no
llevan una reivindicación indicadora de un cáncer particular, pero
para los cuales se dispone de pruebas de eficacia contra dicho
cáncer. La probabilidad óptima de resultados satisfactorios del
tratamiento requiere que se asignen los pacientes al tratamiento
óptimo disponible para el cáncer, y que esta asignación se haga lo
más pronto posible después de la diagnosis.
En la actualidad, los tests de diagnóstico
utilizados en la práctica clínica son de analito simple, y por
tanto no capturan el valor potencial del conocimiento de relaciones
entre docenas de marcadores diferentes. Además, los tests de
diagnóstico frecuentemente no son cuantitativos, basándose en
inmunohistoquímica. Este método proporciona a menudo resultados
diferentes en laboratorios diferentes, debido en parte a que los
reactivos no están normalizados, y en parte debido a que las
interpretaciones son subjetivas y no pueden cuantificarse
fácilmente. Tests basados en RNA no han sido utilizados con
frecuencia debido al problema de la degradación del RNA a lo largo
del tiempo y al hecho de que es difícil obtener muestras de tejido
recientes de los pacientes para el análisis. El tejido fijado
incrustado en parafina está disponible más fácilmente y se han
establecido métodos para detectar RNA en tejido fijado. Sin
embargo, estos métodos no permiten típicamente el estudio de
grandes números de genes (DNA o RNA) a partir de pequeñas cantidades
de material. Por ello, tradicionalmente el tejido fijado ha sido
utilizado raras veces para usos distintos de la detección
inmunohistoquímica de proteínas.
Recientemente, varios grupos han publicado
estudios concernientes a la clasificación de diversos tipos de
cáncer por análisis de la expresión génica en microrredes (véase,
v.g. Golub et al., Science 286:531-537
(1999); Bhattacharjae et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
98:13790-13795 (2001); Chen-Hsiang
et al., Bioinformatics 17 (Suppl.
1):S316-S322 (2001); Ramaswamy et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 98:15149-15154 (2001)).
Ciertas clasificaciones de cánceres de mama humanos basadas en
patrones de expresión génica han sido también publicadas (Martin
et al., Cancer Res. 60:2232-2238 (2000); West
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
98:11462-11467 (2001); Sorlie et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 98:10869-10874 (2001); Yan et
al., Cancer Res. 61:8375-8380 (2001)). Sin
embargo, estos estudios están enfocados en la mayoría de los casos
en la mejora y el refino de la clasificación ya establecida de
diversos tipos de cáncer, con inclusión de cáncer de mama, y
generalmente no proporcionan ideas nuevas acerca de las relaciones
de los genes expresados diferencialmente, y no relacionan los
descubrimientos con estrategias de tratamiento a fin de mejorar el
resultado clínico de la terapia del cáncer.
Adicionalmente, WO 02/10436 A2 describe series
particulares de genes que se expresan diferencialmente en tumores
caracterizados como tumores de MAI alta o MAI baja, series de genes
que pueden utilizarse para discriminar entre tumores de MAI alta y
baja, así como ensayos de diagnóstico para clasificación de tumores,
predicción del desenlace de un tumor, selección y monitorización de
regímenes de tratamiento y monitorización de la progresión/regresión
del tumor.
Van't Veer L.J. et al., "Gene
expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer",
Nature. 2002 Jan 31; 415(6871):530-6,
describen el uso del análisis de microrredes de DNA en tumores de
mama primarios de 117 pacientes jóvenes, y la aplicación de una
clasificación supervisada para identificar una huella de la
expresión génica fuertemente predictiva de un intervalo corto para
metástasis distantes (huella de "mala prognosis") en pacientes
sin células tumorales en ganglios linfáticos locales en el momento
de la diagnosis (ganglio linfático negativo).
Leek R.D. et al., "Association of
macrophage infiltration with angiogenesis and prognosis in invasive
breast carcinoma", Cancer Res. 1996 Oct
15;56(20):4625-9, después de haber
cuantificado la infiltración de macrófagos utilizando la
morfometría de recuento de Chalkley en una serie de carcinomas de
mama invasivos, describen que existía una coloración positiva
importante entre el grado vascular alto y el índice de macrófagos
incrementado (P = 0,03), y se observó una fuerte relación entre los
recuentos incrementados de macrófagos y la supervivencia reducida
sin recaída (P = 0,006) y la supervivencia global reducida (P =
0,004) como variable independiente de pronóstico.
Sin embargo, ninguno de estos tres documentos
describe los métodos o usos de la presente invención.
Aunque la biología y la bioquímica moleculares
modernas han descubierto centenares de genes cuyas actividades
influyen en el comportamiento de las células tumorales, el estado de
su diferenciación, y su sensibilidad o resistencia a ciertos
fármacos terapéuticos, con unas pocas excepciones, el estado de
estos genes no ha sido aprovechado para el propósito de tomar
rutinariamente decisiones clínicas acerca de los tratamiento con
fármacos. Una excepción notable es el uso de la expresión de la
proteína receptora de estrógenos (ER) en carcinomas de mama para
seleccionar pacientes para el tratamiento con fármacos
anti-estrógenos, tales como tamoxifeno. Otro
ejemplo excepcional es el uso de la expresión de la proteína ErbB2
(Her2) en carcinomas de mama para seleccionar pacientes con el
fármaco antagonista de Her2 Herceptina® (Genentech, Inc., South San
Francisco, CA).
A pesar de los avances recientes, el problema
del tratamiento del cáncer sigue siendo el direccionamiento de los
regímenes específicos de tratamiento a tipos de tumor
patogénicamente distintos, y la personalización final del
tratamiento del tumor a fin de maximizar el resultado. Por tanto,
existe necesidad de tests que proporcionen simultáneamente
información predictiva acerca de las respuestas del paciente a la
diversidad de opciones de tratamiento. Esto es particularmente
cierto para el cáncer de mama, cuya biología se conoce escasamente.
Está claro que la clasificación del cáncer de mama en un pequeño
número de subgrupos, tales como el subgrupo ErbB2^{+}, y
subgrupos caracterizados por expresión génica baja a inexistente del
receptor de estrógenos (ER) y un pequeño número de factores de
transcripción adicionales (Perou et al., Nature,
406:747-752 (2000)) no refleja la heterogeneidad
celular y molecular del cáncer de mama, y no permite el diseño de
estrategias de tratamiento que maximicen la respuesta del
paciente.
La invención se refiere a un método de
predicción de la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un
paciente de cáncer con mama sin recurrencia del cáncer de mama, que
comprende determinar el nivel de expresión del transcrito de RNA de
CD68 en una muestra de tejido de cáncer de mama obtenida de dicho
paciente, normalizado contra el nivel de expresión de todos los
transcritos de RNA o sus productos en dicha muestra, o de una serie
de referencia de transcritos de RNA o sus productos de expresión, en
donde la expresión de CD68 indica una probabilidad reducida de
supervivencia a largo plazo sin recurrencia del cáncer de mama.
El cáncer de mama puede ser carcinoma ductal de
mama invasivo.
En una realización, el método comprende
adicionalmente determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA de cualquiera de los genes siguientes: GRB7,
CTSL, Chk1, Her2, STK15, AIB1, SURV, EGFR, MYBL2, HIF1\alpha, o
sus productos de expresión, en donde la expresión de dichos genes o
sus productos de expresión por encima de un umbral de expresión
definido, indica una probabilidad reducida de supervivencia a largo
plazo sin recurrencia del cáncer de mama.
En otra realización, el método comprende
adicionalmente determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA de los genes siguientes: CTSL, FBX05, SURV,
CCNB1, MCM2, Chk1, MYBL2, HIF1A, cMET, EGFR, TS, y STK15, o sus
productos de expresión, en donde la expresión de dichos genes o sus
productos de expresión por encima de un umbral de expresión
definido indica una probabilidad reducida de supervivencia a largo
plazo sin recurrencia del cáncer de mama.
Dicho RNA puede aislarse de un espécimen de
tejido de cáncer de mama fijado incrustado en parafina de dicho
paciente.
En una realización, la invención concierne al
uso de una red que comprende polinucleótidos que se hibridan a los
genes siguientes:
- (a)
- CD68, GRB7, CTSL, Chk1, Her2, STK15, AIB1, SURV, EGFR, MYBL2, y HIF1\alpha; o
- (b)
- CD68, GRB7, TOP2A, Bcl2, DIABLO, CD3, ID1, PPM1D, MCM6, y WISP1; o
- (c)
- CD68, BBC3, GRB7, PRAME, TOP2A, CCNB1, EPHX1, CTSL, GSTM1, y APC; o
- (d)
- CD68, CD9, GRB7, TOP2A, Bcl2, CCNB1, CD3, DIABLO, ID1, y PPM1D; o
- (e)
- CD68, CTSL, FBX05, SURV, CCNB1, MCM2, Chk1, MYBL2, HIF1A, cMET, EGFR, TS, y STK15
para predecir la probabilidad de supervivencia a
largo plazo de un paciente de cáncer de mama sin recurrencia del
cáncer de mama.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente descripción proporciona una serie de
genes, cuya expresión tiene valor pronóstico, específicamente con
respecto a la supervivencia sin enfermedad.
La presente descripción acomoda el uso de
material de biopsia archivado incrustado en parafina para ensayo de
todos los marcadores de la serie, y por consiguiente es compatible
con los tipos de materiales de biopsia de mayor disponibilidad. La
misma es compatible también con varios métodos diferentes de
recogida de tejido tumoral, por ejemplo, por biopsia de núcleo o
aspiración con aguja fina. Adicionalmente, para cada miembro de la
serie de genes, la invención especifica secuencias de
oligonucleótidos que pueden utilizarse en el test.
Se describe también un método de predicción de
la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente de
cáncer de mama sin la recurrencia del cáncer de mama, que comprende
determinar el nivel de expresión de uno o más transcritos de RNA de
pronóstico o sus productos de expresión en una muestra de tejido de
cáncer de mama obtenida del paciente, normalizado contra el nivel
de expresión de todos los transcritos de RNA o sus productos en la
muestra de tejido de cáncer de mama, o de una serie de referencia de
transcritos de RNA o sus productos de expresión, en donde el
transcrito de RNA de pronóstico es el transcrito de uno o más genes
seleccionados del grupo constituido por TP53BP2, GRB7, PR, CD68,
Bcl2, KRT14, IRS1, CTSL, EstR1, Chk1, IGFBP2, BAG1, CEGP1, STK15,
GSTM1, FHIT, RIZ1, AIB1, SURV, BBC3, IGF1R, p27, GATA3, ZNF217,
EGFR, CD9, MYBL2, HIF1\alpha, pS2, ErbB3, TOP2B, MDM2, RAD51C,
KRT19, TS, Her2, KLK10, \beta-Catenina,
\gamma-Catenina, MCM2, PI3KC2A, IGF1, TBP, CCNB1,
FBX05, y DR5,
en donde la expresión de uno o más de GRB7,
CD68, CTSL, Chk1, AIB1, CCNB1, MCM2, FBX05, Her2, STK15, SURV, EGFR,
MYBL2, HIF1\alpha, y TS indica una probabilidad reducida de
supervivencia a largo plazo sin la recurrencia del cáncer de mama,
y
la expresión de uno o más de TP53BP2, PR, Bcl2,
KRT14, EstR1, IGFBP2, BAG1, CEGP1, KLK10,
\beta-Catenina,
\gamma-Catenina, DR5, PI3KCA2, RAD51C, GSTM1,
FHIT, RIZ1, BBC3, TBP, p27, IRS1, IGF1R, GATA3, ZNF217, CD9, pS2,
ErbB3, TOP2B, MDM2, IGF1, y KRT19 indica una probabilidad
incrementada de supervivencia a largo plazo sin recurrencia del
cáncer de mama.
Los niveles de expresión de al menos dos o al
menos 5, o al menos 10, o al menos 15 de los transcritos de RNA de
pronóstico o sus productos de expresión pueden determinarse. El
método puede comprender la determinación de los niveles de
expresión de todos los transcritos de pronóstico de RNA o sus
productos de expresión.
El cáncer de mama puede ser un carcinoma de mama
invasivo.
El RNA puede aislarse de un espécimen de tejido
de cáncer de mama fijado incrustado en cera, del paciente. El
aislamiento puede realizarse por cualquier método conocido en la
técnica, por ejemplo a partir de tejido de biopsia de núcleo o
células de aspirado con aguja fina.
Se describe también una red que comprende
polinucleótidos que se hibridan a dos o más de los genes siguientes:
\alpha-Catenina, AIB1, AKT1, AKT2,
\beta-actina, BAG1, BBC3, Bcl2, CCNB1, CCND1,
CD68, CD9, CDH1, CEGP1, Chk1, CIAP1, cMet.2, Cóntigo 27882, CTSL,
DR5, EGFR, EIF4E, EPHX1, ErbB3, EstR1, FBX05, FHIT1, FRP1, GAPDH,
GATA3, G-Catenina, GRB7, GRO1, GSTM1, GUS, HER2,
HIF1A, HNF3A, IGF1R, IGFBP2, KLK10, KRT14, KRT17, KRT18, KRT19,
KRT5, Maspin, MCM2, MCM3, MDM2, MMP9, MTA1, MYBL2, P14ARF, p27, P53,
PI3KC2A, PR, PRAME, pS2, RAD51C, 3RB1, RIZ1, STK15, STMY3, SURV,
TGFA, TOP2B, TP53BP2, TRAIL, TS, upa, VDR, VEGF, y ZNF217.
La red puede comprender polinucleótidos que se
hibridan a al menos 10, o al menos 15, o al menos 20, o a la
totalidad de los genes arriba enumerados.
La red puede comprender polinucleótidos que se
hibridan a los genes siguientes: TP53BP2, GRB7, PR, CD68, Bcl2,
KRT14, IRS1, CTSL, EstR1, Chk1, IGFBP2, BAG1, CEGP1, STK15, GSTM1,
FHIT, RIZ1, AIB1, SURV, BBC3, IGF1R, p27, GATA3, ZNF217, EGFR, CD9,
MYBL2, HIF1\alpha, pS2, RIZ1, ErbB3, TOP2B, MDM2, RAD51C, KRT19,
TS, Her2, KLK10, \beta-Catenina,
\gamma-Catenina, MCM2, PI3KC2A, IGF1, TBP, CCNB1,
FBX05 y DR5.
Los polinucleótidos pueden ser cDNAs, u
oligonucleótidos, y la superficie sólida sobre la cual se presentan
los mismos puede ser por ejemplo vidrio.
Se describe también un método de predicción de
la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente
diagnosticado de cáncer de mama invasivo, sin la recurrencia del
cáncer de mama, que comprende los pasos de:
(1) determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA o los productos de expresión génica o una serie
de genes seleccionados del grupo constituido por
- (a)
- TP53BP2, Bcl2, BAD, EPHX1, PDGFR\beta, DIABLO, XIAP, YB1, CA9, y KRT8;
- (c)
- PR, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, IGFBP2, TIMP1, CA9, MMP9, y COX2;
- (e)
- Bcl2, TP53BP2, BAD, EPHX1, PDGFR\beta, DIABLO, XIAP, YB1, CA9, y KRT8;
- (f)
- KRT14, KRT5, PRAME, TP53BP2, GUS1, AIB1, MCM3, CCNE1, MCM6, e ID1;
- (g)
- PRAME, TP53BP2, EstR1, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, BBC3, y VEGFB;
- (h)
- CTSL2, GRB7, TOP2A, CCNB1, Bcl2, DIABLO, PRAME, EMS1, CA9, y EpCAM;
- (i)
- EstR1, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, BBC3, y VEGFB;
- (k)
- Chk1, PRAME, TP53BP2, GRB7, CA9, CTSL, CCNB1, TOP2A, "tumor size", e IGFBP2;
- (l)
- IGFBP2, GRB7, PRAME, DIABLO, CTSL, \beta-Catenina, PPM1D, Chk1, WISP1, y LOT1;
- (m)
- HER2, TP53BP2, Bcl2, DIABLO, TIMP1, EPHX1, TOP2A, TRAIL, CA9, y AREG;
- (n)
- BAG1, TP53BP2, PRAME, IL6, CCNB1, PAI1, AREG, "tumor size", CA9, y Ki67;
- (o)
- CEGPI, TP53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, STK15, AKT2, y FGF18;
- (p)
- STK15, TP53BP2, PRAME, 1L6, CCNE1, AKT2, DIABLO, cMet, CCNE2, y COX2;
- (q)
- KLK10, EstR1, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, y BBC3;
- (r)
- AIB1, TP53BP2, Bcl2, DIABLO, TIMP1, CD3, p53, CA9, GRB7, y EPHX1
- (w)
- EGFR, KRT14, GRB7, TOP2A, CCNB1, CTSL, Bcl2, TP, KLK10, y CA9;
- (x)
- HIF1a, PR, DIABLO, PRAME, Chk1, AKT2, GRB7, CCNE1, TOP2A, y CCNB1;
- (y)
- MDM2, TP53BP2, DIABLO, Bcl2, AIB1, TIMP1, CD3, p53, CA9, y HER2;
- (z)
- MYBL2, TP53BP2, PRAME, IL6, Bcl2, DIABLO, CCNE1, EPHX1, TIMP1, y CA9;
- (aa)
- p27, TP53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, STK15, AKT2, e ID1;
- (ac)
- SURV, GRB7, TOP2A, PRAME, CTSL, GSTM1, CCNB1, VDR, CA9, y CCNE2;
- (ad)
- TOP2B, TP53BP2, DIABLO, Bcl2, TIMP1, AIB1, CA9, p53, KRT8, y BAD;
- (ae)
- ZNF217, GRB7, TP53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, APC4, y \beta- Catenina,
en una muestra de tejido de cáncer de mama
obtenida del paciente, normalizada contra los niveles de expresión
de todos los transcritos de RNA o sus productos de expresión en
dicha muestra de tejido de cáncer de mama, o de una serie de
referencia de transcritos de RNA o sus productos;
(2) someter los datos obtenidos en el paso (1) a
análisis estadístico; y
(3) determinar si la probabilidad de dicha
supervivencia a largo plazo ha aumentado o disminuido.
Se describe también un método de predicción de
la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente
diagnosticado con cáncer de mama invasivo positivo a los receptores
de estrógenos (ER), sin la recurrencia del cáncer de mama, que
comprende los pasos de:
(1) determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA o los productos de expresión génica de una serie
de genes seleccionado del grupo constituido por CD68; CTSL; FBX05;
SURV; CCNB1; MCM2; Chk1; MYBL2; HIF1A; cMET; EGFR; TS; STK15,
IGFR1; BC12; HNF3A; TP53BP2; GATA3; BBC3; RAD51C; BAG1; IGFBP2; PR;
CD9; RB1; EPHX1; CEGP1; TRAIL; DR5; p27; p53; MTA; RIZ1; ErbB3;
TOP2B; EIF4E,, en donde la expresión de los genes siguientes en un
cáncer ER-positivo es indicativa de una probabilidad
reducida de supervivencia sin recurrencia del cáncer después de
cirugía: CD68; CTSL; FBXO5; SURV; CCNB1; MCM2; Chk1; MYBL2; HIF1A;
cMET; EGFR; TS; STK15, y en donde la expresión de los genes
siguientes es indicativa de una mejor prognosis para la
supervivencia sin recurrencia del cáncer después de cirugía: IGFR1;
BC12; HNF3A; TP53BP2; GATA3; BBC3; RAD51C; BAG1; IGFBP2; PR; CD9;
RB1; EPHX1; CEGP1; TRAIL; DR5; p27; p53; MTA; RIZ1; ErbB3; TOP2B;
EIF4E.
(2) someter los datos obtenidos en el paso (1) a
análisis estadístico; y
(3) determinar si la probabilidad de dicha
supervivencia a largo plazo ha aumentado o disminuido.
Se describe también un método de predicción de
la probabilidad de supervivencia a largo plazo de un paciente
diagnosticado con cáncer de mama invasivo negativo a los receptores
de estrógenos (ER), sin la recurrencia del cáncer de mama, que
comprende determinar los niveles de expresión de los transcritos de
RNA o los productos de expresión de los genes de la serie de genes
CCND1; UPA; HNF3A; CDH1; Her2; GRB7; AKT1; STMY3;
\alpha-Catenina; VDR; GRO1; KT14; KLK10; Maspin,
TGF\alpha, y FRP1, en donde la expresión de los genes siguientes
es indicativa de una probabilidad reducida de supervivencia sin
recurrencia del cáncer: CCND1; UPA; HNF3A; CDH1; Her2; GRB7; AKT1;
STMY3; \alpha -Catenina; VDR; GRO1, y en donde la expresión de los
genes siguientes es indicativa de una mejor prognosis para
supervivencia sin recurrencia del cáncer: KT14, KLK10, Maspin,
TGF\alpha, y FRP1.
Se describe también un método de preparación de
un perfil genómico personalizado para un paciente, que comprende los
pasos de:
(a) someter RNA extraído de un tejido de mama
obtenido del paciente a análisis de la expresión génica;
(b) determinar el nivel de expresión de uno o
más genes seleccionados de la serie de genes de cáncer de mama
enumerados en una cualquiera de las Tablas 1-5, en
donde el nivel de expresión está normalizado contra un gen o genes
de control y se compara opcionalmente con la cantidad encontrada en
una serie de tejidos de referencia del cáncer de mama; y
(c) crear un informe que resume los datos
obtenidos por el análisis de expresión génica.
El informe puede incluir, por ejemplo, la
predicción de la probabilidad de supervivencia a largo plazo del
paciente y/o recombinación para una modalidad de tratamiento de
dicho paciente.
Se describe también un método para amplificación
de un gen enumerado en las Tablas 5A y B por la reacción en cadena
de polimerasa (PCR), que comprende realizar dicha PCR por
utilización de un amplicón enumerado en las Tablas 5A y B y una
serie de iniciadores-sonda enumerados en las tablas
6A-F.
Se describe también un amplicón PCR enumerado en
las tablas 5A y B.
Se describe también una serie de
iniciadores-sonda PCR enumerados en las Tablas
6A-F.
Se describe también un método de pronóstico que
comprende:
(a) someter una muestra que comprende células de
cáncer de mama obtenidas de un paciente a análisis cuantitativo del
nivel de expresión del transcrito de RNA de al menos un gen
seleccionado del grupo constituido por GRB7, CD68, CTSL, Chk1,
AIB1, CCNB1, MCM2, FBX05, Her2, STK15, SURV, EGFR, MYBL2,
HIF1\alpha, y TS, o su producto, y
(b) identificar el paciente como propenso a
tener una probabilidad reducida de supervivencia a largo plazo sin
recurrencia del cáncer de mama si los niveles de expresión
normalizados del gen o genes, o sus productos, se elevan por encima
de un umbral de expresión definido.
Se describe también un método de pronóstico que
comprende:
(a) someter una muestra que comprende células de
cáncer de mama obtenidas de un paciente a análisis cuantitativo del
nivel de expresión del transcrito de RNA de al menos un gen
seleccionado del grupo constituido por TP53BP2, PR, Bcl2, KRT14,
EstR1, IGFBP2, BAG1, CEGP1, KLK10, \beta-Catenina,
\gamma-Catenina, DR5, PI3KCA2, RAD51C, GSTM1,
FHIT, RIZ1, BBC3, TBP, p27, IRS1, IGF1R, GATA3, ZNF217, CD9, pS2,
ErbB3, TOP2B, MDM2, IGF1, y KRT19, y
(b) identificar al paciente como propenso a
tener una probabilidad incrementada de supervivencia a largo plazo
sin recurrencia del cáncer de mama si los niveles de expresión
normalizados del o genes, o sus productos, se elevan por encima de
un umbral de expresión definido.
Se describe también un kit que comprende uno o
más de (1) tampón de extracción/reactivos y protocolo; (2) tampón de
transcripción inversa/reactivos y protocolo; y (3) tampón
qPCR/reactivos protocolo adecuados para la realización de cualquiera
de los métodos anteriores.
La Tabla 1 es una lista de genes, cuya expresión
se correlaciona con supervivencia del cáncer de mama. Resultados de
una prueba clínica retrospectiva. Análisis estadístico binario.
La Tabla 2 es una lista de genes, cuya expresión
se correlaciona con la supervivencia del cáncer de mama en pacientes
positivos a receptores de estrógenos (ER). Resultados de una prueba
clínica retrospectiva. Análisis estadístico binario.
La Tabla 3 es una lista de genes, cuya expresión
se correlaciona con la supervivencia del cáncer de mama en pacientes
negativos a receptores de estrógenos (ER). Resultados de una prueba
clínica retrospectiva. Análisis estadístico binario.
La Tabla 4 es una lista de genes, cuya expresión
se correlaciona con la supervivencia del cáncer de mama. Resultados
de una prueba clínica retrospectiva. Análisis estadístico binario de
riesgos proporcionales de Cox.
Las Tablas 5A y B muestran una lista de genes,
cuya expresión se correlaciona con la supervivencia del cáncer de
mama. Resultados de una prueba clínica retrospectiva. La tabla
incluye números de acceso para los genes, y secuencias amplicón
utilizadas para amplificación de la PCR.
Tablas 6A-6F. La tabla incluye
secuencias para los iniciadores directo e inverso (designados por
"f" y "r", respectivamente) y sondas (designadas por
"p") utilizadas para amplificación PCR de los amplicones
enumerados en las Tablas 5A-B.
A no ser que se defina de otro modo, los
términos técnicos y científicos utilizados en esta memoria tienen
el mismo significado que es comprendido comúnmente por una persona
con experiencia ordinaria en la técnica a la que pertenece esta
invención. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and
Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (Nueva York, NY
1994), y March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms
and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (Nueva York, NY 1992),
proporcionan a un experto en la técnica una guía general para muchos
de los términos utilizados en la presente solicitud.
Un experto en la técnica reconocerá muchos
métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en
esta memoria, que podrían utilizarse en la práctica de la presente
invención. De hecho, la presente invención no se limita en modo
alguno a los métodos y materiales descritos. Para los propósitos de
la presente invención, se definen a continuación los términos
siguientes.
El término "microrred" se refiere a una
disposición ordenada de elementos de red hibridables,
preferiblemente sondas de polinucleótidos, sobre un sustrato.
El término "polinucleótido", tanto si se
utiliza en singular como en plural, se refiere generalmente a
cualquier polirribonucleótido o polidesoxirribonucleótido, que
puede ser RNA o DNA no modificado o RNA o DNA modificado. Así, por
ejemplo, los polinucleótidos que se definen en esta memoria
incluyen, sin limitación, DNA mono- y bicatenario, DNA que incluye
regiones mono- y bicatenarias, RNA mono- y bicatenario, y RNA que
incluye regiones mono- y bicatenarias, moléculas híbridas que
comprenden DNA y RNA que puede ser monocatenario o, más típicamente,
bicatenario o que incluyen regiones mono- y bicatenarias.
Adicionalmente, el término "polinucleótido" como se utiliza en
esta memoria se refiere a regiones de triple hélice que comprenden
RNA o DNA o a la vez RNA y DNA. Las cadenas en tales regiones
pueden ser de la misma molécula o de moléculas diferentes. Las
regiones pueden incluir la totalidad de una o más de las moléculas,
pero más típicamente implican sólo una región de algunas de las
moléculas. Una de las moléculas de una región de triple hélice es a
menudo un oligonucleótido. El término "polinucleótido" incluye
específicamente cDNAs. El término incluye DNAs (con inclusión de
cDNAs) y RNAs que contiene una o más bases modificadas. Así, DNAs o
RNAs con cadenas principales modificadas por estabilidad o por
otras razones son "polinucleótidos" tal como se entiende dicho
término en esta memoria. Además, DNAs o RNAs que comprenden bases
poco comunes, tales como inosina, o bases modificadas, por ejemplo
bases tritiadas, se incluyen dentro del término
"polinucleótidos" como se define en esta memoria. En general,
el término "polinucleótido" abarca todas las formas química,
enzimática y/o metabólicamente modificadas de polinucleótidos sin
modificar, así como las formas químicas de DNA y RNA características
de virus y células, con inclusión de células simples y
complejas.
El término "oligonucleótido" se refiere a
un polinucleótido relativamente corto, que incluye, sin limitación,
desoxirribonucleótidos monocatenarios, ribonucleótidos mono- o
bicatenarios, híbridos RNA:DNA y DNAs bicatenarios.
Oligonucleótidos, tales como oligonucleótidos sonda de DNA
monocatenario, se sintetizan a menudo por métodos químicos, por
ejemplo utilizando sintetizadores automáticos de oligonucleótidos
que están disponibles comercialmente. Sin embargo, los
oligonucleótidos pueden fabricarse por una diversidad de otros
métodos, con inclusión de técnicas mediadas por DNA recombinante
in vitro y por expresión de DNAs en células y organismos.
Los términos "gen expresado
diferencialmente", "expresión génica diferencial" y sus
sinónimos, que se utilizan de modo intercambiable, se refieren a un
gen cuya presión está activada en un nivel mayor o menor en un
individuo que sufre una enfermedad, especialmente cáncer, tal como
cáncer de mama, con relación a su expresión en un individuo normal
o de control. Los términos incluyen también genes cuya expresión
está activada en un nivel mayor o menor en diferentes etapas de la
misma enfermedad. Se entiende también que un gen expresado
diferencialmente puede estar activado o inhibido al nivel del ácido
nucleico o al nivel de proteínas, o puede estar sometido a
remodelación alternativa para dar como resultado un producto
polipeptídico diferente. Tales diferencias pueden evidenciarse por
un cambio en los niveles de mRNA, expresión superficial, secreción u
otra distribución de un polipéptido, por ejemplo. La expresión
diferencial de genes puede incluir una comparación de la expresión
entre dos o más genes o sus productos génicos, o una comparación de
las relaciones de la expresión entre dos o más genes o sus
productos génicos, o incluso una comparación de dos productos del
mismo gen procesados diferentemente, que difieren entre individuos
normales e individuos que padecen una enfermedad, específicamente
cáncer, o entre diversos estadios de la misma enfermedad. La
expresión diferencial incluye diferencias tanto cuantitativas como
cualitativas en el patrón de expresión temporal o celular en un gen
o sus productos de expresión entre, por ejemplo, células normales y
enfermas, o entre células que han sufrido sucesos o estadios de
enfermedad diferentes. Para el propósito de esta invención, se
considera que está presente "expresión diferencial de genes"
cuando existe al menos una diferencia aproximada de 2 veces, de modo
preferible al menos aproximadamente de 4 veces, de modo más
preferible al menos aproximadamente de 6 veces, y de modo muy
preferible al menos aproximadamente de 10 veces entre la expresión
de un gen dado en individuos normales y enfermos, o en diversos
estadios del desarrollo de la enfermedad en un individuo
enfermo.
La expresión "amplificación génica" se
refiere a un proceso por el cual se forman copias múltiples de un
gen o fragmento de gen en una célula o línea de células particular.
La región duplicada (un tramo de DNA amplificado) se conoce a
menudo como "amplicón". Usualmente, la cantidad del RNA
mensajero (mRNA) producida, es decir, el nivel de expresión génica,
aumenta también en la proporción del número de copias producidas del
gen particular expresado.
El término "diagnosis" se utiliza en esta
memoria para hacer referencia a la identificación de un estado,
enfermedad o afección molecular o patológica, tal como la
identificación de un subtipo molecular de cáncer de cabeza y cuello,
cáncer de colon, u otro tipo de cáncer.
El término "prognosis" se utiliza en esta
memoria para hacer referencia a la predicción de la probabilidad de
muerte atribuida al cáncer o progresión, con inclusión de
recurrencia, propagación metastásica, y resistencia a los fármacos,
de una enfermedad neoplástica, tal como cáncer de mama.
El término "predicción" se utiliza en esta
memoria para hacer referencia a la probabilidad de que un paciente
responda favorable o desfavorablemente a un fármaco o serie de
fármacos, así como el grado de dichas respuestas, o de que de un
paciente sobreviva, después de eliminación quirúrgica del tumor
primario y/o quimioterapia durante cierto tiempo sin recurrencia
del cáncer. Los métodos predictivos de la presente invención pueden
utilizarse clínicamente para tomar decisiones acerca del tratamiento
por selección de las modalidades de tratamiento más apropiadas para
cualquier paciente particular. Los métodos predictivos de la
presente invención son instrumentos valiosos en la predicción de si
un paciente tiene probabilidad de responder favorablemente a un
régimen de tratamiento, tal como intervención quirúrgica,
quimioterapia con un fármaco o combinación de fármacos
dado(a), y/o terapia de radiación, o si es probable la
supervivencia a largo plazo del paciente, después de cirugía y/o
finalización de la quimioterapia u otras modalidades de
tratamiento.
El término supervivencia a "largo plazo" se
utiliza en esta memoria para hacer referencia a la supervivencia
durante al menos 3 años, más preferiblemente durante al menos 8
años, muy preferiblemente durante al menos 10 años después de
cirugía u otro tratamiento.
El término "tumor", como se utiliza en esta
memoria, hace referencia a todo crecimiento y proliferación de
células neoplásticas, sea maligno o benigno, y a todas las células y
tejidos pre-cancerosos y cancerosos.
Los términos "cáncer" y "canceroso"
hacen referencia a o describen la afección fisiológica en los
mamíferos que se caracteriza típicamente por crecimiento celular
descontrolado. Ejemplos de cáncer incluyen, pero sin carácter
limitante, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer
de próstata, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer
pancreático, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de hígado,
cáncer de vejiga, cáncer del tracto urinario, cáncer de tiroides,
cáncer renal, carcinoma, melanoma, y cáncer cerebral.
La "patología" del cáncer incluye todos los
fenómenos que ponen en peligro el bienestar del paciente. Esto
incluye, sin limitación, crecimiento celular anormal o
incontrolable, metástasis, interferencia con el funcionamiento
normal de las células vecinas, liberación de citoquinas u otros
productos de secreción a niveles anormales, supresión o agravación
de la respuesta inflamatoria o inmunológica, neoplasia,
premalignidad, malignidad, invasión de los tejidos u órganos
circundantes o distantes, tales como ganglios linfáticos, etc.
"La severidad" de las reacciones de
hibridación puede ser determinada fácilmente por una persona con
experiencia ordinaria en la técnica, y en general es un cálculo
empírico dependiente de la longitud de la sonda, la temperatura de
lavado, y la concentración de sales. En general, las sondas más
largas requieren mayores temperaturas para reasociación apropiada,
en tanto que las sondas más cortas precisan temperaturas más bajas.
La hibridación depende por lo general de la capacidad del DNA
desnaturalizado para reasociarse cuando están presentes cadenas
complementarias en un entorno por debajo de su temperatura de
fusión. Cuanto mayor es el grado de homología deseada entre la
sonda y la secuencia hibridable, tanto mayor es la temperatura
relativa que puede utilizarse. Como resultado, se sigue que las
temperaturas relativas más altas tenderían a hacer más severas las
condiciones de la reacción, en tanto que las temperaturas más bajas
harían lo contrario. Para detalles y explicación adicionales de la
severidad de las reacciones de hibridación, véase Ausubel et al.,
Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience
Publishers (1995).
"Condiciones severas" o "condiciones de
alta severidad", como se definen en esta memoria, típicamente:
(1) emplean concentración iónica baja y temperatura alta para el
lavado, por ejemplo cloruro de sodio 0,015 M/citrato de sodio
0,0015 M/dodecilsulfato de sodio 0,1% a 50ºC; (2) emplean durante la
hibridación un agente desnaturalizante, tal como formamida, por
ejemplo, formamida al 50% (v/v) con tampón 0,1% de seroalbúmina
bovina/0,1% Ficoll/0,1% polivinilpirrolidona/fosfato de sodio 50 mM
a pH 6,5 con cloruro de sodio 750 mM, citrato de sodio 75 MM a
42ºC; o (3) emplean 50% formamida, 5 x SSC (NaCl 0,75 M, citrato de
sodio 0,075 M), fosfato de sodio 50 mM (pH 6,8), 0,1% pirofosfato
de sodio, 5 x solución de Denhardt, DNA de esperma de salmón tratado
por ultrasonidos (50 \mug/ml), 0,1% SDS, y 10% sulfato de
dextrano a 42ºC, con lavados a 42ºC en 0,2 x SSC (cloruro de
sodio/citrato de sodio) y 50% formamida a 55ºC, seguido por un
lavado de alta severidad consistente en 0,1 x SSC que contiene EDTA
a 55ºC.
Las "condiciones moderadamente severas"
pueden identificarse como ha sido descrito por Sambrook et al.,
Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Nueva York: Cold Spring
Harbor Press, 1989, e incluyen el uso de solución de lavado y
condiciones de hibridación (v.g., temperatura, concentración iónica
y % SDS) menos severas que las arriba descritas. Un ejemplo de
condiciones moderadamente severas consiste en incubación durante una
noche a 37ºC en una solución que comprende: 20% formamida, 5 x SSC
(NaCl 150 mM, citrato trisódico 15 mM), fosfato de sodio 50 mM (pH
7,6), 5 x solución de Denhardt, 10% sulfato de dextrano, y 20 mg/ml
de DNA de esperma de salmón desnaturalizado cizallado, seguido por
lavado de los filtros en 1 x SSC a aproximadamente
37-50ºC. El profesional experto reconocerá el modo
de ajustar la temperatura, la concentración iónica, etc en caso
necesario para acomodar factores tales como longitud de sonda y
análogos.
En el contexto de la presente invención, la
referencia a "al menos uno", "al menos dos", "al menos
cinco", etc de los genes enumerados en cualquier serie de genes
particular significa uno cualquiera o cualquiera y la totalidad de
las combinaciones de los genes enumerados.
Los términos "umbral de expresión", y
"umbral de expresión definido" se utilizan intercambiablemente
y hacen referencia al nivel de un gen o producto génico en
cuestión, por encima del cual el gen o producto génico sirve como
marcador predictivo para supervivencia de un paciente sin
recurrencia de cáncer. El umbral viene definido experimentalmente
por estudios clínicos tales como los descritos en el ejemplo que
sigue. El umbral de expresión puede seleccionarse para sensibilidad
máxima, para selectividad máxima, o para error mínimo. La
determinación del umbral de expresión para cualquier situación está
plenamente dentro del conocimiento de los expertos en la
técnica.
\vskip1.000000\baselineskip
La práctica de la presente invención empleará, a
no ser que se indique otra cosa, métodos convencionales de biología
molecular (con inclusión de métodos recombinantes), microbiología,
biología celular, y bioquímica, que están dentro de la experiencia
en la técnica. Dichos métodos se explican detalladamente en la
bibliografía, tal como, "Molecular Cloning: A Laboratory
Manual", 2ª edición (Sambrook et al., 1989);
"Oligonucleotide Synthesis" (M.J. Gait, ed., 1984); "Animal
Cell Culture" (R.I. Freshney, ed., 1987); "Methods in
Enzymology" (Academic Press, Inc.); "Handbook of Experimental
immunology", 4ª edición (D.M. Weir & C.C. Blackwell, eds.,
Blackwell Science Inc., 1987); "Gene Transfer Vectors for
Mammalian Cells" (J.M. Miller & M.P. Calos, eds., 1987);
"Current Protocols in Molecular Biology" (F.M. Ausubel et
al., eds., 1987); y "PCR: The Polymerase Chain Reaction",
(Mullis et al., eds., 1994).
\vskip1.000000\baselineskip
En general, los métodos de determinación del
perfil de la expresión génica pueden dividirse en dos grandes
grupos: métodos basados en análisis de hibridación de
polinucleótidos, y métodos basados en secuenciación de
polinucleótidos. Los métodos utilizados más comúnmente conocidos en
la técnica para la cuantificación de la expresión de mRNA en una
muestra incluyen transferencia Northern e hibridación in situ
(Parker & Barnes, Methods in Molecular Biology
106:247-283 (1999)), ensayos de protección de RNAsas
(Hod, Biotechniques 13:852-854 (1992); y
reacción en cadena de polimerasa de transcripción inversa
(RT-PCR) (Weis et al., Trends in Genetics
8:263-264 (1992)). Alternativamente, pueden
emplearse anticuerpos que puedan reconocer dúplex específicos, con
inclusión de dúplex de DNA, dúplex de RNA, y dúplex híbridos
DNA-RNA o dúplex DNA-proteína.
Métodos representativos para análisis de expresión de genes
Basándose en secuenciación incluyen Serial Analysis of Gene
Expression (SAGE), y análisis de expresión de genes por
secuenciación masiva de firma paralela (MPSS).
\vskip1.000000\baselineskip
De las técnicas arriba enumeradas, el método
cuantitativo más sensible y más flexible es RT-PCR,
que puede utilizarse para comparar los niveles de mRNA en
poblaciones de muestra diferentes, en tejidos normales y tumorales,
con o sin tratamiento mediante fármacos, para caracterizar patrones
de expresión génica, discriminar entre mRNAs estrechamente
relacionados, y para analizar la estructura del RNA.
El primer paso es el aislamiento de mRNA de una
muestra diana. El material de partida es típicamente RNA total
aislado de tumores humanos o líneas de células tumorales, y tejidos
o líneas de células normales correspondientes, respectivamente.
Así, puede aislarse RNA de una diversidad de tumores primarios, que
incluyen tumores o líneas de células tumorales de mama, pulmón,
colon, próstata, cerebro, hígado, riñón, páncreas, bazo, timo,
testículo, ovario, útero, etc., con DNA recogido de donantes sanos.
Si la fuente de mRNA es un tumor primario, el mRNA puede extraerse,
por ejemplo, de muestras de tejido congeladas o archivadas
incrustadas en parafina y fijadas (v.g. fijadas en formalina).
Los métodos generales para extracción de mRNA
son bien conocidos en la técnica y se describen en libros de texto
estándar de biología molecular, con inclusión de Ausubel et al.,
Current Protocols of Molecular Biology, John Wiley and Sons
(1997). Métodos para extracción de RNA a partir de tejidos
incrustados en parafina se describen, por ejemplo, en Rupp y
Locker, Lab. Invest. 56: A67 1987), y De Andrés et al.,
BioTechniques 18:42044 (1995). En particular, el aislamiento
del RNA puede realizarse utilizando kit de purificación, series de
tampones y proteasa de fabricantes comerciales, tales como Qiagen,
de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Por ejemplo, el
RNA total de células en cultivo puede aislarse utilizando
mini-columnas Qiagen RNeasy. Otros kits de
aislamiento de RNA disponibles comercialmente incluyen
MasterPure^{TM} Complete DNA and RNA Purification Kit
(EPICENTRE®, Madison, WI), y Paraffin Block RNA Isolation Kit
(Ambion, Inc.). El RNA total de muestras de tejido puede aislarse
utilizando RNA Stat-60 (Tel-Test).
El RNA preparado a partir de un tumor puede aislarse, por ejemplo,
por centrifugación en gradiente de densidad de cloruro de cesio.
Dado que el RNA no puede servir como molde para
la PCR, el primer paso en la determinación del perfil de expresión
génica por RT-PCR es la transcripción inversa del
molde de RNA en cDNA, seguido por su amplificación exponencial en
una reacción PCR. Las dos transcriptasas inversas utilizadas más
corrientemente son la transcriptasa inversa del virus de la
mieloblastosis de las aves (AMV-RT) y la
transcriptasa inversa de virus de la leucemia murina de Moloney
(MMLV-RT). El paso de transcripción inversa se
inicia típicamente utilizando iniciadores específicos, hexámeros
aleatorios, o iniciadores oligo-dT, dependiendo de
las circunstancias y de la meta de determinación del perfil de
expresión. Por ejemplo, el RNA extraído puede transcribirse
inversamente utilizando un kit RNA PCR de GeneAmp (Perkin Elmer,
CA, EE.UU.), siguiendo las instrucciones del fabricante. El cDNA
derivado puede utilizarse luego como molde en la reacción PCR
subsiguiente.
Aunque el paso PCR puede utilizar una diversidad
de DNA-polimerasas termoestables dependientes de
DNA, el mismo emplea típicamente la DNA-polimerasa
Taq, que tiene actividad de
5'-3'-nucleasa pero carece de
actividad de endonucleasa 3'-5' de corrección de
lectura. Así, la PCR TaqMan® utiliza típicamente la actividad de
5'-nucleasa de la polimerasa Taq o Tth para
hidrolizar una sonda de hibridación fijada a su amplicón diana, pero
se puede utilizar cualquier enzima con actividad de
5'-nucleasa equivalente. Se utilizan dos iniciadores
oligonucleotídicos para generar un amplicón típico de una reacción
PCR. Un tercer oligonucleótido, o sonda, está diseñado para
detectar secuencias de nucleótidos localizadas entre los dos
iniciadores PCR. La sonda es no-extensible por la
enzima DNA-polimerasa Taq, y está marcada con un
tinte informador fluorescente y un tinte fluorescente de extinción.
Cualquier emisión inducida por láser procedente del tinte informador
es extinguida por el tinte de extinción cuando los dos tintes están
localizados próximos uno a otro como ocurre en la sonda. Durante la
reacción de amplificación, la enzima DNA-polimerasa
Taq escinde la sonda de una manera dependiente del molde. Los
fragmentos de sonda resultantes se disocian en solución, y la señal
procedente del tinte informador liberado se libera del efecto de
extinción del segundo fluoróforo. Se libera una molécula de tinte
informador por cada nueva molécula sintetizada, y la detección del
tinte informador no extinguido proporciona la base para la
interpretación cuantitativa de los datos.
La RT-PCR Taqman® puede
realizarse utilizando el tipo disponible comercialmente, tal como,
por ejemplo, ABI PRISM 7700^{TM} Sequence Detection System^{TM}
(Perkin-Elmer-Applied Biosystems,
Foster City, CA, USA), o Lightcycler (Roche Molecular Biochemicals,
Mannheim, Alemania). En una realización preferida, el procedimiento
de la 5'-nucleasa se ejecuta en un dispositivo PCR
cuantitativo en tiempo real tal como el ABI PRISM 7700^{TM}
Sequence Detection System^{TM}. El sistema consiste en un
termociclador, láser, dispositivo acoplado de carga (CCD), cámara y
computadora. El sistema amplifica muestras en un formato de 96
pocillos en un termociclador. Durante la amplificación, la señal
fluorescente inducida por el láser es recogida en tiempo real por
cables de óptica de fibras para la totalidad de los 96 pocillos, y
es detectada en el CCD. El sistema incluye software para la
ejecución del instrumento y para el análisis de los datos.
Los datos del ensayo de
5'-nucleasa se expresan inicialmente como Ct, o el
ciclo umbral. Como se ha expuesto anteriormente, los valores de
fluorescencia se registran durante cada ciclo y representan la
cantidad de producto amplificada hasta dicho momento en la reacción
de amplificación. El momento en el que se registra la señal
fluorescente significativa es el ciclo umbral (C_{t}).
Para minimizar los errores y el efecto de la
variación de muestra a muestra, la RT-PCR se realiza
usualmente utilizando un patrón interno. El patrón interno ideal se
expresa a un nivel constante entre tejidos diferentes, y no se ve
afectado por el tratamiento experimental. Los RNAs utilizados más
frecuentemente para normalizar patrones de expresión génica son
mRNAs para los genes internos
gliceraldehído-3-fosfato-deshidrogenasa
(GAPDH) y \beta-actina.
Una variación más reciente de la técnica
RT-PCR es la PCR cuantitativa en tiempo real, que
mide la acumulación de productos PCR mediante una sonda fluorígena
de doble etiquetado (a saber, la sonda TaqMan®). La PCR en tiempo
real es compatible no sólo con la PCR competitiva cuantitativa, en
la que se utiliza un competidor interno para cada secuencia diana
para la normalización, sino también con la PCR cuantitativa
comparativa que utiliza un gen de normalización contenido en la
muestra, o un gen interno para RT-PCR. Para detalles
adicionales véase, v.g. Held et al., Genome Research 6:
986-994 (1996).
Los pasos de un protocolo representativo para
determinación del perfil de expresión génica utilizando tejidos
fijados incrustados en parafina como la fuente de RNA, que incluyen
aislamiento del mRNA, purificación, extensión con iniciadores y
amplificación se dan en diversos artículos de revista publicados
{por ejemplo: T.E. Godfrey et al. J. Molec. Diagnostics 2:
84-91 [2000]; K. Specht et al., Am. J.
Pathol. 158: 419-29 [2001]}. Resumidamente, un
proceso representativo comienza con corte de secciones de
aproximadamente 10 \mum de espesor de muestras de tejido tumoral
incrustadas en parafina. Se extrae a continuación el RNA, y se
eliminan las proteínas y el DNA. Después de análisis de la
concentración de RNA, pueden incluirse si es necesario pasos de
reparación y/o amplificación del RNA, y el RNA se transcribe
inversamente utilizando promotores específicos de genes seguido por
RT-PCR.
Los iniciadores y sondas de PCR pueden diseñarse
basándose en secuencias de intrón presentes en el gen a amplificar.
En este caso, el primer paso en el diseño del iniciador/sonda es la
delineación de secuencias de intrón dentro de los genes. Esto puede
hacerse mediante software públicamente disponible, tal como el
software DNA BLAT desarrollado por Kent, W.J. Genome Res. 12
(4): 656-64 (2002), o por el software BLAST con
inclusión de sus variaciones. Los pasos subsiguientes siguen
métodos bien establecidos de diseño de iniciadores y sondas PCR.
Con objeto de evitar señales inespecíficas, es
importante enmascarar las secuencias repetitivas dentro de los
intrones cuando se diseñan los iniciadores y las sondas. Esto puede
realizarse fácilmente utilizando el programa Repeat Masker
disponible en línea del Baylor College of Medicine, que criba
secuencias de DNA contra una biblioteca de elementos repetitivos y
devuelve una secuencia de consulta en la cual los elementos
repetitivos están enmascarados. Las secuencias de intrón
enmascaradas pueden utilizarse luego para diseñar secuencias de
iniciadores y sondas utilizando cualesquiera paquetes de diseño
iniciador/sonda disponibles al público comercialmente o de
cualquier otro modo, tales como Primer Express (Applied Biosystems);
MGB "assay-by-design" (Applied
Biosystems); Primer3 (Steve Rozen y Helen J. Skaletsky (2000)
Primer3 en la WWW para usuarios generales y para biólogos
programadores. En: Krawetz S, Misener S (eds) Bioinformatics
Methods and Protocols: Methods in Molecular Biology. Humana
Press, Totowa, NJ, pp 365-386).
Los factores más importantes considerados en el
diseño de iniciadores PCR incluyen longitud del iniciador,
temperatura de fusión (Tm), y contenido en G/C, especificidad,
secuencias complementarias de iniciadores, y secuencia del extremo
3'. Por lo general, los iniciadores PCR óptimos tienen habitualmente
17-30 bases de longitud, y contienen
aproximadamente 20-80%, tal como, por ejemplo,
aproximadamente 50-60% de bases G+C. Típicamente se
prefieren valores Tm entre 50 y 80ºC, v.g. aproximadamente 50 a
70ºC.
Para directrices adicionales en relación con el
diseño de iniciadores y sondas PCR véase, v.g. Dieffenbach, C.W.
et al., "General Concepts for PCR Primer Design" en:
PCR Primer, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Nueva York, 1995, pp. 133-155;
Innis y Gelfand, "Optimization of PCRs" en: PCR Protocols,
A Guide to Methods and Applications, CRC Press, Londres, 1994,
pp. 5-11; y Plasterer, T.N. Primerselect: Primer
and probe design. Methods Mol. Biol.
70:520-527 (1997), cuyas descripciones completas se
incorporan expresamente por la presente por su referencia.
\vskip1.000000\baselineskip
La expresión diferencial de genes puede
identificarse también, o confirmarse utilizando la técnica de
microrredes. Así, el perfil de expresión de genes asociados con el
cáncer de mama puede medirse en tejido tumoral reciente o
incrustado en parafina, utilizando tecnología de microrredes. En
este método, las secuencias polinucleotídicas de interés (con
inclusión de cDNAs y oligonucleótidos) se extienden en placas, o se
despliegan, sobre un sustrato de microchip. Las secuencias
dispuestas en redes se hibridan luego con sondas de DNA específicas
de las células o tejidos de interés. De igual modo que en el método
RT-PCR, la fuente de mRNA es típicamente RNA total
aislado de tumores o líneas de células tumorales humanos, y tejidos
o líneas de células normales correspondientes. Así, puede aislarse
RNA de una diversidad de tumores primarios o líneas de células
tumorales. Si la fuente de mRNA es un tumor primario, el mRNA puede
extraerse, por ejemplo, de muestras de tejidos congeladas o
archivadas incrustadas en parafina y fijadas (v.g. fijadas en
formalina), que se emplean rutinariamente y se guardan en la
práctica clínica diaria.
En una realización específica de la técnica de
microrredes, se aplican inserciones amplificadas por PCR de clones
de cDNA a un sustrato en una red densa. Preferiblemente, se aplican
al sustrato al menos 10.000 secuencias de nucleótidos. Los genes
dispuestos en microrredes, inmovilizados en el microchip a 10.000
elementos cada uno, son adecuados para hibridación en condiciones
severas. Pueden generarse sondas de cDNA marcadas fluorescentemente
por incorporación de nucleótidos fluorescentes mediante
transcripción inversa de RNA extraído de los tejidos de interés.
Las sondas de cDNA marcadas aplicadas al chip se hibridan con
especificidad a cada mancha de DNA en la red. Después de lavado
severo para eliminar las sondas no fijadas específicamente, se
escanea el chip por microscopia láser confocal o por otro método de
detección, tal como una cámara CCD. La cuantificación de la
hibridación de cada elemento dispuesto en red permite la evaluación
de la abundancia de mRNA correspondiente. Con la fluorescencia dual
en color, las sondas de CDNA marcadas por separado generadas por dos
fuentes de RNA se hibridan por pares a la red. La abundancia
relativa de los transcritos de las dos fuentes correspondientes a
cada gen especificado se determina de este modo simultáneamente. La
escala miniaturizada de la hibridación proporciona una evaluación
conveniente y rápida del patrón de expresión para grandes números de
genes. Se ha demostrado que dichos métodos tienen la sensibilidad
requerida para detectar transcritos raros, que se expresan a razón
de un pequeño número de copias por célula, y para detectar
reproduciblemente al menos aproximadamente diferencias de dos veces
en los niveles de expresión (Schena et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 93 (2): 106-149 (1996)). El análisis
de microrredes puede realizarse por medio de equipos disponibles
comercialmente, siguiendo protocolos del fabricante, por ejemplo
por utilización de la tecnología Affymetrix GenChip, o la tecnología
de microrredes de Incyte.
El desarrollo de métodos de microrredes para
análisis en gran escala de la expresión génica hace posible la
búsqueda sistemática de marcadores moleculares de clasificación del
cáncer y la predicción de resultados en una diversidad de tipos de
tumor.
\vskip1.000000\baselineskip
El análisis serial de la expresión génica (SAGE)
es un método que permite el análisis simultáneo y cuantitativo de
un gran número de transcritos génicos, sin necesidad de proporcionar
una sonda de hibridación individual para cada transcrito. En primer
lugar, se genera un marcador de secuencia corto (aproximadamente
10-14 pb) que contiene información suficiente para
identificar singularmente un transcrito, con tal que la etiqueta se
obtenga de una posición singular en cada transcrito. A continuación,
se enlazan muchos transcritos unos a otros para formar moléculas
seriadas largas, que pueden secuenciarse, revelando la identidad de
los marcadores múltiples simultáneamente. El patrón de expresión de
cualquier población de transcritos puede evaluarse cuantitativamente
por determinación de la abundancia de marcadores individuales, e
identificación del gen correspondiente a cada marcador. Para más
detalles véase, v.g. Velculescu et al., Science
270:484-487 (1995); y Velculescu et al., Cell
88:243-51 (1997).
\vskip1.000000\baselineskip
La tecnología MassARRAY (Sequenon, San Diego,
California) es un método automatizado de alta capacidad para el
análisis de la expresión génica utilizando espectrometría de masas
(MS) para la detección. De acuerdo con este método, después del
aislamiento del RNA, transcripción inversa y amplificación por PCR,
los cDNAs se someten a escisión con iniciadores. Los productos de
escisión con iniciadores derivados de cDNA se purifican, y se
distribuyen en una red de chips que está pre-cargada
con los componentes necesarios para la preparación de la muestra de
MS MALTI-TOF. Los diversos cDNAs presentes en la
reacción se cuantifican por análisis de las áreas de los picos del
espectro de masas obtenido.
\vskip1.000000\baselineskip
Este método, descrito por Brenner et al.,
Nature Biotechnology 18: 630-634 (2000), es un
método de secuenciación que combina la secuenciación de firmas no
basadas en gel con clonación in vitro de millones de moldes
sobre microcuentas separadas de 5 \mum de diámetro. En primer
lugar, se construye una biblioteca de microcuentas de moldes de DNA
por clonación in vitro. Esto va seguido por el ensamblaje de
una red planar de las microcuentas que contienen moldes en una
celda de flujo a una densidad elevada (típicamente mayor que 3 x
10^{6} microcuentas/cm^{2}). Los extremos libres de los moldes
clonados en cada microcuenta se analizan simultáneamente, utilizando
un método de secuenciación de firmas Basándose en fluorescencia que
no requiere separación de los fragmentos de DNA. Se ha demostrado
que este método proporciona simultánea y exactamente, en una sola
operación, centenares de miles de secuencias firma de genes a
partir de una biblioteca de cDNA de levadura.
\vskip1.000000\baselineskip
Los métodos de inmunohistoquímica son adecuados
también para detectar los niveles de expresión de los marcadores de
pronóstico descritos en esta memoria. Así, anticuerpos o antisueros,
preferiblemente antisueros policlonales, y muy preferiblemente
anticuerpos monoclonales específicos para cada marcador se utilizan
para detectar la expresión. Los anticuerpos pueden detectarse por
marcación directa de los anticuerpos propiamente dichos, por
ejemplo, con marcadores radiactivos, marcadores fluorescentes,
marcadores de haptenos tales como biotina, o una enzima tal como
peroxidasa de rábano picante o fosfatasa alcalina. Alternativamente,
se utiliza un anticuerpo primario sin marcar en asociación con un
anticuerpo secundario marcado, que comprende antisueros, antisueros
policlonales o un anticuerpo monoclonal específico para el
anticuerpo primario. Protocolos y kits de inmunohistoquímica son
bien conocidos en la técnica y están disponibles comercialmente.
\vskip1.000000\baselineskip
El término "proteoma" se define como la
totalidad de las proteínas presentes en una muestra (v.g. tejido,
organismo, o cultivo de células) en un momento determinado. La
proteómica incluye, entre otras cosas, el estudio de los cambios
globales de expresión de las proteínas en una muestra (a lo que se
hace referencia también como "proteómica de expresión"). La
proteómica incluye típicamente los pasos siguientes: (1) separación
de las proteínas individuales en una muestra por electroforesis en
gel 2-D (2-D PAGE); (2)
identificación de las proteínas individuales recuperadas del gel
(v.g. por espectrometría de masas o secuenciación
N-terminal, y (3) análisis de los datos utilizando
bioinformática. Los métodos de la proteómica son suplementos
valiosos para otros métodos de determinación del perfil de la
expresión génica, y pueden utilizarse, solos o en combinación con
otros métodos, para detectar los productos de los marcadores de
pronóstico descritos en esta memoria.
\vskip1.000000\baselineskip
Los pasos de un protocolo representativo para la
determinación del perfil de la expresión génica utilizando tejidos
fijos incrustados en parafina como la fuente de RNA, que incluyen
aislamiento del mRNA, purificación, extensión con iniciadores y
amplificación, se dan en diversos artículos de revistas publicados
{por ejemplo: T.E. Godfrey et al. J. Molec. Diagnostics 2:
84-91 [2000]; K. Specht et al., Am. J.
Pathol. 158: 419-29 [2001]). Resumidamente, un
proceso representativo comienza con el corte de secciones de
aproximadamente 10 \mum de espesor de muestras de tejido tumoral
incrustadas en parafina. El RNA se extrae a continuación, y se
eliminan las proteínas y el DNA. Después del análisis de la
concentración de RNA, pueden incluirse pasos de reparación y/o
amplificación del RNA en caso necesario, y el RNA se transcribe
inversamente utilizando promotores específicos de genes seguido por
RT-PCR. Finalmente, los datos se analizan para
identificar la o las mejores opciones de tratamiento disponibles
para el paciente sobre la base del patrón de expresión génica
característico identificado en la muestra de tumor examinada.
\vskip1.000000\baselineskip
Un aspecto importante de la presente invención
es la utilización de la expresión medida de ciertos genes por
tejido de cáncer de mama para proporcionar información de
pronóstico. Para este propósito es necesario corregir (normalizar)
tanto las diferencias en la cantidad de RNA ensayada como la
variabilidad en la calidad del RNA utilizado. Por tanto, el ensayo
mide e incorpora típicamente la expresión de ciertos genes de
normalización, que incluyen genes internos bien conocidos, tales
como GAPDH y Cyp1. Alternativamente, la normalización puede basarse
en la señal media o mediana (Ct) de la totalidad de los genes
ensayados o una gran subserie de los mismos (enfoque de
normalización global). Sobre una base de gen por gen, la cantidad
medida normalizada de mRNA del tumor de un paciente se compara con
la cantidad encontrada en una serie de referencia de tejido del
cáncer de mama. El número (N) de tejidos de cáncer de mama en esta
serie de referencia debería ser suficientemente alto para asegurar
que las diferentes series de referencia (como un todo) se comportan
esencialmente de igual manera. Si se cumple esta condición, la
identidad de los tejidos de cáncer de mama individuales presentes
en una serie particular no tendrá un impacto significativo sobre las
cantidades relativas de los genes ensayados. Usualmente, la serie
de referencia de tejidos de cáncer de mama consiste en al menos
aproximadamente 30, con preferencia al menos aproximadamente 40
especímenes de tejido de cáncer de mama FPE diferentes. A no ser que
se indique otra cosa, los niveles de expresión normalizados para
cada mRNA/tumor testado/paciente se expresarán como un porcentaje
del nivel de expresión medido en la serie de referencia. De modo más
específico, la serie de referencia de un número suficientemente
alto (v.g. 40) de tumores produce una distribución de niveles
normalizados de cada especie de mRNA. El nivel medido en una
muestra de tumor particular a analizar cae en cierto percentil
dentro de este intervalo, el cual puede ser determinado por métodos
bien conocidos en la técnica. A continuación, a no ser que se
indique otra cosa, la referencia a los niveles de expresión de un
gen supone expresión normalizada con relación a la serie de
referencia, aunque esto no siempre se indica explícitamente.
Detalles adicionales de la invención se
describirán en el ejemplo no limitante siguiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
Se diseñó y condujo un estudio de expresión de
genes con el objetivo primario de caracterizar molecularmente la
expresión de genes en muestras de tejido incrustadas en parafina y
fijadas de carcinoma ductal invasivo de mama, y explorar la
correlación entre tales perfiles moleculares y la supervivencia sin
enfermedad.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizaron ensayos moleculares sobre tejidos
de tumor de mama primario incrustados en parafina y fijados con
formalina, obtenidos de 79 pacientes individuales diagnosticados con
cáncer de mama invasivo. Todos los pacientes en el estudio
presentaban 10 o más ganglios positivos. La edad media era 57 años,
y el tamaño medio de los tumores clínicos era 4,4 cm. Los pacientes
se incluyeron en el estudio únicamente si la evaluación
histopatológica, realizada como se describe en la sección de
Materiales y Métodos, indicaba cantidades adecuadas de tejido
tumoral y patología homogénea.
\vskip1.000000\baselineskip
Cada bloque representativo de tumor se
caracterizó por histopatología estándar para diagnóstico, evaluación
semi-cuantitativa de la cantidad de tumor, y grado
del tumor. Un total de 6 secciones (de 10 micrómetros de espesor
cada una) se prepararon y pusieron en dos tubos de microcentrífuga
de la marca Costar (polipropileno, tubos de 1,7 ml, transparentes;
3 secciones en cada tubo). Si el tumor constituía menos del 30% del
área total del espécimen, la muestra puede haber sido disecada
toscamente por el patólogo, utilizando microdisección grosera, e
introduciendo el tejido tumoral directamente en el tubo Costar.
Si se obtuvo más de un bloque de tumor como
parte del procedimiento quirúrgico, se utilizó para el análisis el
bloque más representativo de la patología.
\vskip1.000000\baselineskip
Se extrajo el mRNA y se purificó a partir de
muestras de tejido fijadas e incrustadas en parafina, y se preparó
para el análisis de la expresión génica como se describe en la
sección 9 anterior.
Los ensayos moleculares de la expresión génica
cuantitativa se realizaron por RT-PCR, utilizando el
Sistema de Detección de Secuencia^{TM} ABI PRISM 7900^{TM}
(Perkin-Elmer-Applied Biosystems,
Foster City, CA, EE.UU.). El ABI PRISM 7900^{TM} se compone de un
termociclador, láser, dispositivo acoplador de carga (CCD), cámara
y computadora. El sistema amplifica las muestras en un formato de
384 pocillos en un termociclador. Durante la amplificación, la
señal fluorescente inducida por el láser se recoge en tiempo real
mediante cables de fibra óptica para la totalidad de los 384
pocillos, y se detecta en el CCD. El sistema incluye software para
operación del instrumento y para el análisis de los datos.
\vskip1.000000\baselineskip
Se analizó el tejido tumoral para 185 genes
relacionados con el cáncer y 7 genes de referencia. Los valores
umbrales de ciclo (CE) para cada paciente se normalizaron basados en
la mediana de los 7 genes de referencia para dicho paciente
particular. Los datos de resultados clínicos estaban disponibles
para todos los pacientes a partir de una revisión de los datos de
registro y de gráficos de paciente seleccionados.
Los resultados se clasificaron como:
- 0
- murieron debido a cáncer de mama o a causa desconocida o sobreviven con recurrencia de cáncer de mama;
- 1
- sobreviven sin recurrencia de cáncer de mama o murieron debido a una causa distinta del cáncer de mama
\vskip1.000000\baselineskip
El análisis se realizó por:
- 1.
- Análisis de la relación entre la expresión génica normalizada y los desenlaces binarios de 0 ó 1.
- 2.
- Análisis de la relación entre la expresión génica normalizada y el tiempo hasta el acontecimiento (0 ó 1 como se ha definido arriba) donde se confirmaron los pacientes que sobrevivían sin recurrencia del cáncer de mama o que murieron debido a una causa distinta del cáncer de mama. Este enfoque se utilizó para evaluar el impacto de pronóstico de genes individuales así como de series de genes múltiples.
\vskip1.000000\baselineskip
En el primer enfoque (binario), el análisis se
realizó sobre la totalidad de los 79 pacientes con carcinoma de mama
invasivo. Se realizó un test t sobre los grupos de pacientes
clasificados como sin recurrencia y sin muerte relacionada con
cáncer de mama al cabo de 3 años, frente a recurrencia, o muerte
relacionada con cáncer de mama al cabo de 3 años, y se calcularon
los valores p para diferencias entre los grupos para cada gen.
La Tabla 1 enumera los 47 genes para los cuales
el valor p para las diferencias entre los grupos era < 0,10. La
primera columna de valores medios de expresión se refiere a
pacientes que no tenían una recurrencia metastásica o no murieron de
cáncer de mama. La segunda columna de valores medios de expresión se
refiere a pacientes que o bien tenían una recurrencia metastásica o
murieron de cáncer de mama.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
En la Tabla 1 que antecede, los valores t
negativos indican mayor expresión, asociada con desenlaces peores
e, inversamente, los valores t mayores (positivos) mayor indican
expresión asociada con mejores desenlaces. Así, por ejemplo, la
expresión elevada del gen CD68 (valor t = -3,41, CT medio de vivos
< CT medio de fallecidos) indica una probabilidad reducida de
supervivencia sin enfermedad. Análogamente, la expresión elevada del
gen BC12 (valor t = 4,00; CT medio de vivos > CT medio de
fallecidos) indica una probabilidad incrementada de supervivencia
sin enfermedad.
Basándose en los datos indicados en la tabla 1,
la expresión de cualquiera de los genes siguientes en el cáncer de
mama por encima de un umbral de expresión definido indica una
probabilidad reducida de supervivencia sin recurrencia de cáncer
después de la cirugía: Grb7, CD68, CTSL, Chk1, Her2, STK15, AIB1,
SURV, EGFR, MYBL2, HIF 1\alpha.
Basándose en los datos indicados en la Tabla 1,
la expresión de cualquiera de los genes siguientes en el cáncer de
mama por encima de un umbral de expresión definido indica un mejor
pronóstico para supervivencia sin recurrencia de cáncer de mama
después de cirugía: TP53BP2, PR, Bcl2, KRT14, EstR1, IGFBP2, BAG1,
CEGP1, KLK10, \beta-Catenina, GSTM1, FHIT, Riz1,
IGF1, BBC3, IGFR1, TBP, p27, IRS1, IGF1R, GATA3, CEGP1, ZNF217, CD9,
pS2, ErbB3, TOP2B, MDM2, RAD51, y KRT19.
\vskip1.000000\baselineskip
57 pacientes con CT normalizado para el receptor
de estrógenos (ER) > 0 (es decir, pacientes
ER-positivos) se sometieron a análisis separado. Se
realizó un test t sobre los dos grupos de pacientes clasificados
como sin recurrencia y sin muerte relacionada con cáncer de mama al
cabo de 3 años, o con recurrencia o muerte relacionada con cáncer de
mama a los 3 años, y se calcularon los valores p para las
diferencias entre los grupos para cada gen. La Tabla 2, siguiente,
enumera los genes en los cuales el valor p para las diferencias
entre los grupos era < 0,105. La primera columna de valores
medios de expresión se refiere a pacientes que no tenían recurrencia
metastásica ni murieron por cáncer de mama. La segunda columna de
valores medios de expresión se refiere a pacientes que o bien
padecían una recurrencia de metástasis o murieron por cáncer de
mama.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Para cada gen, se utilizó un algoritmo de
clasificación a fin de identificar el mejor valor umbral (CT) para
utilizar cada gen aisladamente en la predicción del desenlace
clínico.
Basándose en la serie de datos indicados en la
Tabla 2, la expresión de los genes siguientes en el cáncer
ER-positivo por encima de un nivel de expresión
definido es indicativa de una probabilidad reducida de supervivencia
sin recurrencia de cáncer después de cirugía: CD68; CTSL; FBX05;
SURV; CCNB1; MCM2; Chk1; MYBL2; HIF1A; cMET; EGFR; TS; STK15.
Muchos de estos genes (CD68, CTSL, SURV, CCNB1, MCM2, Chk1, MYBL2,
EGFR, y STK15) se identificaron también como indicadores de mal
pronóstico en el análisis previo, que no estaba limitado al cáncer
de mama ER-positivo. Basándose en la serie de datos
indicada en la Tabla 2, la expresión de los genes siguientes en el
cáncer ER-positivo por encima de un nivel de
expresión definido es indicativa de un mejor pronóstico para la
supervivencia sin recurrencia de cáncer después de cirugía: IGFR1;
BC12; HNF3A; TP53BP2; GATA3; BBC3; RAD51C; BAG1; IGFBP2; PR; CD9;
RB1; EPHX1; CEGP1; TRAIL; DR5; p27; p53; MTA; RIZ1; ErbB3; TOP2B;
EIF4E. De los últimos genes, IGFR1; BC12; TP53BP2; GATA3; BBC3;
RAD51C; BAG1; IGFBP2; PR; CD9; CEGP1; DR5; p27; RIZ1; ErbB3; TOP2B;
EIF4E se han identificado también como indicadores de buen
pronóstico en el análisis previo, no limitado a cáncer de mama
ER-positivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Veinte pacientes con CT normalizado para
receptor de estrógenos (ER) < 1,6 (es decir, pacientes
ER-negativos) se sometieron a análisis separado. Se
realizó un test t sobre los dos grupos de pacientes clasificados
como sin recurrencia y sin muerte relacionada con cáncer de mama a
los 3 años, o con recurrencia o muerte relacionada con cáncer de
mama a los 3 años, y se calcularon los valores p para las
diferencias entre los grupos para cada gen. La Tabla 3 enumera los
genes en los cuales el valor p para las diferencias entre los grupos
era < 0,118. La primera columna de valores de expresión media se
refiere a pacientes que no presentaban una recurrencia metastásica
ni murieron por cáncer de mama. La segunda columna de valores de
expresión media se refiere a pacientes que o bien presentaban una
recurrencia metastásica o murieron por cáncer de mama.
Basándose en la serie de datos indicados en la
Tabla 3, la expresión de los genes siguientes en el cáncer
ER-negativo por encima de un nivel de expresión
definido es indicativa de una probabilidad reducida de supervivencia
sin recurrencia de cáncer (p<0,05): CCND1; UPA; HNF3A; CDH1;
Her2; GRB7; AKT1; STMY3; \alpha-Catenina; VDR;
GRO1. Únicamente 2 de estos genes (Her2 y Grb7) se identificaron
también como indicadores de mal pronóstico en el análisis previo,
no limitado a cáncer de mama ER-negativo. Basándose
en la serie de datos indicada en la Tabla 3, la expresión de los
genes siguientes en el cáncer ER-negativo por encima
de un nivel de expresión definido es indicativa de un mejor
pronóstico para supervivencia sin recurrencia de cáncer (KT14;
KLK10; Maspin, TGF\alpha, y FRP1). De los últimos genes,
únicamente KLK10 ha sido identificado como indicador de buen
pronóstico en el análisis previo, no limitado a cáncer de mama
ER-negativo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se emprendieron dos enfoques a fin de determinar
si la utilización de genes múltiples podría proporcionaría mejor
discriminación entre los desenlaces.
En primer lugar, se realizó un análisis de
discriminación utilizando un enfoque gradual directo. Se generaron
modelos que clasificaban el desenlace con mayor discriminación que
la obtenida con cualquier gen individual solo.
De acuerdo con un segundo enfoque (enfoque de
tiempo hasta el acontecimiento), se definió para cada gen un modelo
de Riesgo Proporcional de Cox (véase, v.g., Cox, D.R., y Oakes, D.
(1984), Analysis of Survival Data, Chapman and Hall,
Londres, Nueva York) con el tiempo hasta recurrencia o muerte como
variable dependiente, y el nivel de expresión del gen como la
variable independiente. Se identificaron los genes que tienen un
valor p < 0,10 en el modelo de Cox. Para cada gen, el modelo de
Cox proporciona el riesgo relativo (RR) de recurrencia o muerte
para un cambio unidad en la expresión del gen. Puede seleccionarse
distribuir los pacientes en subgrupos para cualquier valor umbral
de la expresión medida (en la escala CT), en la cual todos los
pacientes con valores de expresión superiores al umbral presentan
mayor riesgo, y todos los pacientes con valores de expresión
inferiores al umbral presentan un riesgo menor, o viceversa,
dependiendo de si el gen es un indicador de pronóstico malo (RR
> 1,01) o bueno (RR < 1,01). Así, cualquier valor umbral
definirá subgrupos de pacientes con riesgo respectivamente
incrementado o reducido. Los desenlaces se resumen en la Tabla 4. La
tercera columna, con el encabezamiento: exp(coef) muestra los
valores RR.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
Los análisis binarios y de tiempo hasta el
acontecimiento, con pocas excepciones, identificaban los mismos
genes como marcadores de pronóstico. Por ejemplo, la comparación de
las Tablas 1 y 4 muestra que 10 genes estaban representados en los
15 primeros genes en ambas listas. Adicionalmente, cuando ambos
análisis identificaban el mismo gen a [p < 0,10], lo que ocurría
para 21 genes, los mismos eran siempre concordantes con respecto a
la dirección (signo positivo o negativo) de la correlación con
supervivencia/recurrencia. Globalmente, estos resultados respaldan
la conclusión de que los marcadores identificados tienen valor de
pronóstico significativo.
\newpage
Para los modelos de Cox que comprenden más de
dos genes (modelos multivariante), se realiza la entrada escalonada
de cada gen individual en el modelo, donde el primer gen introducido
se preselecciona de entre aquellos genes que tienen valores p
univariantes significativos, y el gen seleccionado para entrada en
el modelo en cada paso subsiguiente es el gen que mejora
óptimamente el ajuste del modelo a los datos. Este análisis puede
realizarse con cualquier número total de genes. En el análisis
cuyos resultados se muestran a continuación, la entrada escalonada
se realizó para hasta 10 genes.
El análisis multivariante se realiza utilizando
la ecuación siguiente:
RR=exp[coef(genA) x
Ct(genA) + coef(genB) x Ct(genB) +
coef(genC) x Ct(genC) +
............].
En esta ecuación, los coeficientes para los
genes que son indicadores de desenlace favorable son números
positivos y los coeficientes para los genes que son indicadores de
desenlace desfavorable son números negativos. Los valores "Ct"
en la ecuación son \DeltaCts, es decir reflejan la diferencia
entre el valor Ct medio normalizado para una población y el valor
Ct normalizado medido para el paciente en cuestión. La convención
utilizada en el análisis presente ha sido que los \DeltaCts por
debajo y por encima del valor medio de la población tienen signos
positivos y signos negativos, respectivamente (reflejando mayor o
menor abundancia de mRNA). El riesgo relativo (RR) calculado por
resolución de esta ecuación indicará si el paciente tiene una
probabilidad aumentada o reducida de supervivencia a largo plazo sin
recurrencia de cáncer.
\vskip1.000000\baselineskip
Se realizó un análisis multivariante escalonado,
utilizando el Modelo de Riesgo Proporcional de Cox, sobre los datos
de expresión génica obtenidos para el total de 79 pacientes con
carcinoma de mama invasivo. Por este análisis se han identificado
las series de 10 genes siguientes como genes que tienen valor
predictivo particularmente fuerte de supervivencia del paciente:
- (a)
- TP53BP2, Bcl2, BAD, EPHX1, PDGFR\beta, DIABLO, XIAP, YB1, CA9, y KRT8.
- (b)
- GRB7, CD68, TOP2A, Bcl2, DIABLO, CD3, ID1, PPM1D, MCM6, y WISP1.
- (c)
- PR, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, IGFBP2, TIMP1, CA9, MMP9, y COX2.
- (d)
- CD68, GRB7, TOP2A, Bcl2, DIABLO, CD3, ID1, PPM1D, MCM6, y WISP1.
- (e)
- Bcl2, TP53BP2, BAD, EPHX1, PDGFR\beta, DIABLO, XIAP, YB1, CA9, y KRT8.
- (f)
- KRT14, KRT5, PRAME, TP53BP2, GUS1, AIB1, MCM3, CCNE1, MCM6, e ID1.
- (g)
- PRAME, TP53BP2, EstR1, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, BBC3, y VEGFB.
- (h)
- CTSL2, GRB7, TOP2A, CCNB1, Bcl2, DIABLO, PRAME, EMS1, CA9, y EpCAM.
- (i)
- EstR1, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, BBC3, y VEGFB.
- (k)
- Chk1, PRAME, p53BP2, GRB7, CA9, CTSL, CCNB1, TOP2A, "tumor size", e IGFBP2.
- (l)
- IGFBP2, GRB7, PRAME, DIABLO, CTSL, (\beta-Catenina, PPM1D, Chk1, WISP1, y LOT1.
- (m)
- HER2, TP53BP2, Bcl2, DIABLO, TIMP1, EPHX1, TOP2A, TRAIL, CA9, y AREG.
- (n)
- BAG1, TP53BP2, PRAME, IL6, CCNB1, PAI1, AREG, "tumor size", CA9, y Ki67.
- (o)
- CEGP1, TP53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, STK15, AKT2, y FGF18.
- (p)
- STK15, TP53BP2, PRAME, IL6, CCNE1, AKT2, DIABLO, cMet, CCNE2, y COX2.
- (q)
- KLK10, EstR1, TP53BP2, PRAME, DIABLO, CTSL, PPM1D, GRB7, DAPK1, y BBC3.
- (r)
- AIB1, TP53BP2, Bcl2, DIABLO, TIMP1, CD3, p53, CA9, GRB7, y EPHX1.
- (s)
- BBC3, GRB7, CD68, PRAME, TOP2A, CCNB1, EPHX1, CTSL, GSTM1, y APC.
- (t)
- CD9, GRB7, CD68, TOP2A, Bcl2, CCNB1, CD3, DIABLO, ID1, y PPM1D.
- (w)
- EGFR, KRT14, GRB7, TOP2A, CCNB1, CTSL, Bcl2, TP, KLK10, y CA9.
- (x)
- HIF1\alpha, PR, DIABLO, PRAME, Chk1, AKT2, GRB7, CCNE1, TOP2A, y CCNB1.
- (y)
- MDM2, TP53BP2, DIABLO, Bcl2, AIB1, TIMP1, CD3, p53, CA9, y HER2.
- (z)
- MYBL2, TP53BP2, PRAME, IL6, Bcl2, DIABLO, CCNE1, EPHX1, TIMP1, y CA9.
- (aa)
- p27, TP53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, STK15, AKT2, e ID1.
- (ab)
- RAD51, GRB7, CD68, TOP2A, CIAP2, CCNB1, BAG1, IL6, FGFR1, y TP53BP2.
- (ac)
- SURV, GRB7, TOP2A, PRAME, CTSL, GSTM1, CCNB1, VDR, CA9, y CCNE2.
- (ad)
- TOP2B, TP53BP2, DIABLO, Bcl2, TIMP1, AIB1, CA9, p53, KRT8, y BAD.
- (ae)
- ZNF217, GRB7, p53BP2, PRAME, DIABLO, Bcl2, COX2, CCNE1, APC4, y \beta-Catenina.
\vskip1.000000\baselineskip
Si bien la presente invención se ha descrito con
referencia a lo que se considera son las realizaciones específicas,
debe entenderse que la invención no está limitada a tales
realizaciones. Por el contrario, debe entenderse que la invención
abarca diversas modificaciones y equivalentes incluidos dentro del
alcance de las reivindicaciones adjuntas.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
<110> GENOMIC HEALTH, INC.
\hskip1cmRUSH UNIVERSITY MEDICAL CENTER
\hskip1cmCOBLEIGH, Melody
\hskip1cmSHAK, Steven
\hskip1cmBAKER, Joffre
\hskip1cmCRONIN, Maureen
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> MARCADORES DE EXPRESIÓN GÉNICA PARA
PROGNOSIS DEL CÁNCER DE MAMA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 39740-0008 PCT
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> No asignado
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
2004-01-14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> US 60/440,861
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2003-01-15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 440
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> FastSEQ for Windows Versión 4.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 69
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 80
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 84
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 69
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 65
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 64
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 79
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 31
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 32
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 84
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 32
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 33
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 62
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 33
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 34
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 34
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 35
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 36
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 36
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 37
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 76
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 37
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 38
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 39
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 39
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 40
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 90
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 40
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 41
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 41
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 42
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 42
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 43
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 43
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 44
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 44
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 45
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 45
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 46
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 46
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 47
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 48
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 48
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 49
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 49
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 50
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 50
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 51
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 51
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 52
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 70
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 52
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 53
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 53
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 54
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 54
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 55
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 70
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 55
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 56
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 76
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 56
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 57
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 57
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 58
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 58
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 59
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 59
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 60
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 60
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 61
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 80
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 61
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 62
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 78
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 62
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 63
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 63
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 64
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 64
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 65
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 65
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 66
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 69
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 67
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 68
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 69
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 69
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 70
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 70
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 71
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 72
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 73
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 74
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 75
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 76
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 76
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 77
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 78
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 78
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 79
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 79
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 80
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 68
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 80
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 81
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 82
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 83
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 84
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 62
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 84
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 85
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 85
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 85
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 86
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 87
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 86
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 87
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 88
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 78
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 88
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 89
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 89
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 90
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 74
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 90
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 91
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 69
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 91
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 92
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 90
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 92
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 93
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 80
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 93
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 94
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 65
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 94
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 95
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 83
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 95
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 96
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 96
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 97
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 72
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 97
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 98
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 66
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 98
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 99
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 82
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 99
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 100
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 81
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 100
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 101
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 73
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 101
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 102
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 65
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 102
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 103
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 70
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 103
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 104
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 67
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 104
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 105
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 105
\hskip1cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 106
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 106
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 107
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 75
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 107
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 108
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 77
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 108
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 109
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 76
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 109
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 110
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 70
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Amplicón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 110
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 111
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 111
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 112
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 112
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 113
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 113
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 114
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 114
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 115
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 115
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 116
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 116
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 117
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 117
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 118
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 118
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 119
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 119
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 120
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 120
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 121
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 121
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 122
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 122
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 123
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 123
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 124
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 124
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 125
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 125
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 126
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 126
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 127
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 127
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 128
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 128
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 129
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 129
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 130
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 130
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 131
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 131
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 132
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 132
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 133
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 133
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 134
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 134
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 135
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 135
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 136
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 136
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 137
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 137
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 138
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 138
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 139
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 139
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 140
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 140
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 141
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 141
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 142
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 142
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 143
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 143
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 144
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 144
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 145
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 145
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 146
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 146
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 147
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 147
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 148
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 148
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 149
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 149
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 150
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 150
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 151
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 151
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 152
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 152
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 153
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 153
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 154
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 154
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 155
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 155
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 156
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 156
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 157
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 157
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 158
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 158
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 159
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 159
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 160
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 160
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 161
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 161
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 162
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 162
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 163
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 163
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 164
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 164
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 165
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 165
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 166
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 166
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 167
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 167
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 168
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 168
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 169
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 169
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 170
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 170
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 171
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 171
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 172
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 172
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 173
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 173
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 174
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 174
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 175
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 175
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 176
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 176
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 177
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 177
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 178
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 178
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 179
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 179
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 180
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 180
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 181
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 181
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 182
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 182
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 183
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 183
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 184
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 184
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 185
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 185
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 186
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 186
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 187
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 187
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 188
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 188
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 189
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 189
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 190
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 190
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 191
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DMA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 191
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 192
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 192
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 193
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 193
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 194
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 194
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 195
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 195
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 196
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 196
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 197
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 197
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 198
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 198
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 199
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 199
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 200
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 200
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 201
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 201
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 202
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 202
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 203
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 203
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 204
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 204
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 205
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 205
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 206
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 206
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 207
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 207
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 208
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 208
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 209
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 209
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 210
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 210
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 211
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 211
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 212
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 212
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 213
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 213
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 214
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 214
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 215
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 215
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 216
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 216
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 217
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 217
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 218
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 218
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 219
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 219
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 220
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 220
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 221
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 221
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 222
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 222
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 223
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 223
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 224
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 224
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 225
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 225
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 226
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 226
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 227
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 227
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 228
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 228
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 229
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 229
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 230
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 230
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 231
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 231
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 232
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 232
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 233
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 2S
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 233
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 234
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 234
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 235
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 235
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 236
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 236
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 237
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 237
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 238
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 238
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 239
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 239
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 240
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 240
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 241
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 241
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 242
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 242
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 243
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 243
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 244
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DMA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 244
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 245
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 245
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 246
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 246
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 247
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 247
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 248
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 248
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 249
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 249
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 250
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 250
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 251
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 251
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 252
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 252
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 253
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 253
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 254
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 254
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 255
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 255
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 256
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 256
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 257
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<200>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 257
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 258
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 258
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 259
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 259
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 260
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 260
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 261
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 261
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 262
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 262
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 263
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 263
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 264
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 264
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 265
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 265
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 266
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 266
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 267
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 267
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 268
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 268
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 269
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 269
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 270
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 270
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 271
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 271
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 272
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 272
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 273
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 273
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 274
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 274
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 275
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 275
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 276
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 276
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 277
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 277
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 278
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 278
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 279
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 279
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 280
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 280
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 281
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 281
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 282
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 282
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 283
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 283
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 284
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 284
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 285
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 285
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 286
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 286
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 287
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 287
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 288
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 288
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 289
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 289
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 290
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 290
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 291
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 291
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 292
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 292
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 293
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 293
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 294
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 294
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 295
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 295
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 296
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 296
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 297
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 297
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 298
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 298
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 299
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 299
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 300
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 300
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 301
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 301
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 302
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 302
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 303
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 303
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 304
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 304
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 305
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 305
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 306
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 306
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 307
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 307
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 308
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 308
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 309
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 309
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 310
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 310
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 311
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 311
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 312
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 312
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 313
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 313
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 314
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 314
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 315
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 315
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 316
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 316
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 317
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 317
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 318
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 318
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 319
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 319
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 320
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 320
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 321
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 321
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 322
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 322
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 323
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 323
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 324
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 324
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 325
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 325
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 326
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 326
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 327
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 327
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 328
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 328
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 329
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 329
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 330
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 330
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 331
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 331
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 332
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 332
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 333
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 333
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 334
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 334
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 335
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 335
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 336
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 336
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 337
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 337
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 338
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 338
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 339
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 339
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 340
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 340
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 341
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 341
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 342
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 342
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 343
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 343
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 344
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 344
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 345
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 345
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 346
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 346
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 347
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 347
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 348
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 348
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 349
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 349
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 350
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 350
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 351
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 351
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 352
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 352
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 353
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 353
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 354
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 354
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 355
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 355
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 356
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 356
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 357
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 357
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 358
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 358
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 359
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 359
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 360
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 360
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 361
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 361
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 362
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 362
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 363
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 363
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 364
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 364
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 365
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 365
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 366
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 366
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 367
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 367
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 368
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 368
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 369
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 369
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 370
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 370
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 371
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 371
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 372
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 372
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 373
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 373
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 374
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 374
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 375
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 375
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 376
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 376
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 377
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 377
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 378
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 378
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 379
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 379
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 380
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 380
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 381
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 381
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 382
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 382
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 383
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 383
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 384
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 384
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 385
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 385
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 386
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 386
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 387
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 387
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 388
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 388
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 389
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 389
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 390
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 390
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 391
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 391
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 392
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 392
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 393
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 393
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 394
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 394
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 395
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 395
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 396
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 396
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 397
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 397
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 398
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 398
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 399
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 399
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 400
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 400
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 401
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 401
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 402
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 402
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 403
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 403
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 404
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 404
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 405
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 405
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 406
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 406
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 407
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 407
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 408
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 408
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 409
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 409
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 410
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 410
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 411
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 411
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 412
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 412
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 413
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 413
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 414
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 414
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 415
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 415
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 416
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 416
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 417
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 417
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 418
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 418
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 419
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 419
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 420
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 420
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 421
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 421
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 422
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 422
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 423
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 423
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 424
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 424
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 425
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 425
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 426
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 426
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 427
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 427
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 428
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 428
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 429
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 429
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 430
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 430
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 431
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 431
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 432
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 432
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 433
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 433
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 434
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 434
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 435
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 435
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 436
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 436
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 437
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 437
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 438
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador directo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 438
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 439
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Iniciador inverso
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 439
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 440
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Sonda
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 440
\hskip1cm
Claims (14)
1. Un método de predicción de la probabilidad de
supervivencia a largo plazo de un paciente de cáncer de mama sin
recurrencia del cáncer de mama, que comprende determinar el nivel de
expresión del transcrito de RNA de CD68 en una muestra de tejido de
cáncer de mama obtenida de dicho paciente, normalizado contra el
nivel de expresión de todos los transcritos de RNA o sus productos
en dicha muestra, o de una serie de referencia de transcritos de RNA
o sus productos de expresión, en donde la expresión de CD68 indica
una probabilidad reducida de supervivencia a largo plazo sin
recurrencia de cáncer de mama.
2. El método de la reivindicación 1, en donde el
cáncer de mama es carcinoma ductal de mama invasivo.
3. El método de la reivindicación 2, que
comprende adicionalmente determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA de cualquiera de los genes siguientes: GRB7,
CTSL, Chk1, Her2, STK15, AIB1, SURV, EGFR, MYBL2, HIF1\alpha, o
sus productos de expresión, en donde la expresión de dichos genes o
sus productos de expresión por encima de un umbral de expresión
definido indica una probabilidad reducida de supervivencia a largo
plazo sin recurrencia del cáncer de mama.
4. El método de la reivindicación 1, en el cual
el cáncer de mama es cáncer de mama ER-positivo.
5. El método de la reivindicación 4, que
comprende adicionalmente determinar los niveles de expresión de los
transcritos de RNA de los genes siguientes: CTSL, FBX05, SURV,
CCNB1, MCM2, Chk1, MYBL2, HIF1A, cMET, EGFR, TS, and STK15, o sus
productos de expresión, en donde la expresión de dichos genes o sus
productos de expresión por encima de un umbral de expresión definido
indica una probabilidad reducida de supervivencia a largo plazo sin
recurrencia del cáncer de mama.
6. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el cual dicho RNA se aísla de un
espécimen de tejido de cáncer de mama fijado e incrustado en cera de
dicho paciente.
7. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el cual dicho RNA se aísla de tejido de
biopsia de núcleo de células de aspirado con aguja fina.
8. El método de la reivindicación 1, que
comprende adicionalmente el paso de crear un informe que resume los
datos obtenidos por dicho método.
9. Uso de una red que comprende polinucleótidos
que se hibridan a los genes siguientes:
- (a)
- CD68, GRB7, CTSL, Chk1, Her2, STK15, AIB1, SURV, EGFR, MYBL2, y HIF1\alpha; o
- (b)
- CD68, GRB7, TOP2A, Bcl2, DIABLO, CD3, ID1, PPM1D, MCM6, y WISP1; o
- (c)
- CD68, BBC3, GRB7, PRAME, TOP2A, CCNB1, EPHX1, CTSL, GSTM1, y APC; o
- (d)
- CD68, CD9, GRB7, TOP2A, Bcl2, CCNB1, CD3, DIABLO, ID1, y PPM1D; o
- (e)
- CD68, CTSL, FBX05, SURV, CCNB1, MCM2, Chk1, MYBL2, HIF1A, cMET, EGFR, TS, y STK15
para predecir la probabilidad de supervivencia a
largo plazo de un paciente de cáncer de mama sin recurrencia del
cáncer de mama.
\vskip1.000000\baselineskip
10. El uso de la reivindicación 9, en el cual
dichos polinucleótidos son cDNAs.
11. El uso de la reivindicación 10 en donde
dichos cDNAs tienen una longitud de aproximadamente 500 a 5000
bases.
12. El uso de la reivindicación 11, en el cual
dichos polinucleótidos son oligonucleótidos.
13. El uso de la reivindicación 12, en el cual
dichos oligonucleótidos tienen una longitud de aproximadamente 20 a
80 bases.
14. El uso de la reivindicación 13, que
comprende aproximadamente 330.000 oligonucleótidos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44086103P | 2003-01-15 | 2003-01-15 | |
| US440861P | 2003-01-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2346967T3 true ES2346967T3 (es) | 2010-10-22 |
Family
ID=32771871
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10162868.3T Expired - Lifetime ES2561179T3 (es) | 2003-01-15 | 2004-01-14 | Marcadores de expresión génica para prognosis del cáncer de mama |
| ES15190640T Expired - Lifetime ES2725892T3 (es) | 2003-01-15 | 2004-01-14 | Marcadores de expresión génica para prognosis del cáncer de mama |
| ES04702177T Expired - Lifetime ES2346967T3 (es) | 2003-01-15 | 2004-01-14 | Marcadores de expresion genica para la prognosis del cancer de mama. |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10162868.3T Expired - Lifetime ES2561179T3 (es) | 2003-01-15 | 2004-01-14 | Marcadores de expresión génica para prognosis del cáncer de mama |
| ES15190640T Expired - Lifetime ES2725892T3 (es) | 2003-01-15 | 2004-01-14 | Marcadores de expresión génica para prognosis del cáncer de mama |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (7) | US20040231909A1 (es) |
| EP (4) | EP2230319B1 (es) |
| JP (1) | JP4723472B2 (es) |
| AT (1) | ATE470723T1 (es) |
| AU (2) | AU2004205878B2 (es) |
| CA (5) | CA2829472C (es) |
| DE (1) | DE602004027600D1 (es) |
| DK (3) | DK3059322T3 (es) |
| ES (3) | ES2561179T3 (es) |
| WO (1) | WO2004065583A2 (es) |
Families Citing this family (104)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6984522B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
| US8044259B2 (en) * | 2000-08-03 | 2011-10-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells |
| US20060062786A1 (en) * | 2000-11-08 | 2006-03-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors |
| US20050214209A1 (en) * | 2001-05-25 | 2005-09-29 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors |
| US7348003B2 (en) | 2001-05-25 | 2008-03-25 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods of treating cancer using antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors |
| US20050129616A1 (en) * | 2001-05-25 | 2005-06-16 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors |
| US7361341B2 (en) * | 2001-05-25 | 2008-04-22 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods of treating cancer using antibodies that immunospecifically bind to trail receptors |
| US20090226429A1 (en) * | 2001-05-25 | 2009-09-10 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies That Immunospecifically Bind to TRAIL Receptors |
| JP2005516958A (ja) * | 2001-12-20 | 2005-06-09 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド | Ｔｒａｉｌレセプターに免疫特異的に結合する抗体 |
| US7081340B2 (en) * | 2002-03-13 | 2006-07-25 | Genomic Health, Inc. | Gene expression profiling in biopsied tumor tissues |
| US20040231909A1 (en) | 2003-01-15 | 2004-11-25 | Tai-Yang Luh | Motorized vehicle having forward and backward differential structure |
| CA3061769C (en) * | 2003-06-24 | 2021-10-26 | Genomic Health, Inc. | Methods of predicting the likelihood of long-term survival of a human patient with node-negative, estrogen receptor (er) positive, invasive ductal breast cancer without the recurrence of breast cancer |
| ES2905579T3 (es) | 2003-07-10 | 2022-04-11 | Genomic Health Inc | Algoritmo del perfil de expresión y prueba para el pronóstico de la recaída del cáncer de mama |
| US20060003391A1 (en) * | 2003-08-11 | 2006-01-05 | Ring Brian Z | Reagents and methods for use in cancer diagnosis, classification and therapy |
| US20050112622A1 (en) * | 2003-08-11 | 2005-05-26 | Ring Brian Z. | Reagents and methods for use in cancer diagnosis, classification and therapy |
| CA2563074C (en) * | 2004-04-09 | 2014-05-20 | Genomic Health, Inc. | Gene expression markers for predicting response to chemotherapy |
| US20080131916A1 (en) * | 2004-08-10 | 2008-06-05 | Ring Brian Z | Reagents and Methods For Use In Cancer Diagnosis, Classification and Therapy |
| US20100035240A1 (en) * | 2004-08-10 | 2010-02-11 | Cardiff Biologicals Limited | Methods and kit for the prognosis of breast cancer |
| CA2580795A1 (en) * | 2004-09-22 | 2006-04-06 | Tripath Imaging, Inc. | Methods and compositions for evaluating breast cancer prognosis |
| US8065093B2 (en) | 2004-10-06 | 2011-11-22 | Agency For Science, Technology, And Research | Methods, systems, and compositions for classification, prognosis, and diagnosis of cancers |
| CA2585571C (en) * | 2004-11-05 | 2020-01-21 | Genomic Health, Inc. | Predicting response to chemotherapy using gene expression markers |
| JP4939425B2 (ja) * | 2004-11-05 | 2012-05-23 | ジェノミック ヘルス， インコーポレイテッド | 乳癌の治療反応の予後および予測の分子指標 |
| CA2587519A1 (en) * | 2004-12-07 | 2006-06-15 | Genentech, Inc. | Selecting patients for therapy with a her inhibitor |
| EP3698807A1 (en) | 2005-01-21 | 2020-08-26 | Genentech, Inc. | Fixed dosing of her antibodies |
| RS53128B (sr) | 2005-02-23 | 2014-06-30 | Genentech Inc. | Produžavanje vremena progresije bolesti ili preživljavanja kod pacijenata obolelih od kancera jajnika korišćenjem pertuzumaba |
| US20080275652A1 (en) * | 2005-05-13 | 2008-11-06 | Universite Libre De Bruxelles | Gene-based algorithmic cancer prognosis |
| JP2006316040A (ja) | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Genentech Inc | Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法 |
| US20070099209A1 (en) * | 2005-06-13 | 2007-05-03 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
| WO2007025044A2 (en) * | 2005-08-24 | 2007-03-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators |
| EP1945754B1 (en) | 2005-10-31 | 2014-07-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
| US7662580B2 (en) | 2005-11-10 | 2010-02-16 | Aurelium Biopharma Inc. | Tissue diagnostics for breast cancer |
| TW200731980A (en) * | 2005-12-29 | 2007-09-01 | Alcon Mfg Ltd | RNAi-mediated inhibition of HIF1A for treatment of ocular angiogenesis |
| WO2007123772A2 (en) | 2006-03-31 | 2007-11-01 | Genomic Health, Inc. | Genes involved in estrogen metabolism |
| ES2539042T3 (es) * | 2006-06-02 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Procedimiento de identificación de si un paciente será respondedor o no a inmunoterapia |
| WO2008063521A2 (en) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | The General Hospital Corporation | Gene-based clinical scoring system |
| EP2106439B1 (en) | 2007-01-24 | 2014-11-12 | The Regents of the University of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing pancreatic cancer |
| MX2009008981A (es) | 2007-03-02 | 2009-09-02 | Genentech Inc | Prediccion de respuesta a un inhibidor her. |
| EP2508531B1 (en) | 2007-03-28 | 2016-10-19 | President and Fellows of Harvard College | Stitched polypeptides |
| WO2008150512A2 (en) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Methods for identifying an increased likelihood of recurrence of breast cancer |
| US9551033B2 (en) | 2007-06-08 | 2017-01-24 | Genentech, Inc. | Gene expression markers of tumor resistance to HER2 inhibitor treatment |
| WO2008154249A2 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Genentech, Inc. | Gene expression markers of tumor resistance to her2 inhibitor treatment |
| WO2009026128A2 (en) * | 2007-08-16 | 2009-02-26 | Genomic Health, Inc. | Gene expression markers of recurrence risk in cancer patients after chemotherapy |
| GB0720113D0 (en) * | 2007-10-15 | 2007-11-28 | Cambridge Cancer Diagnostics L | Diagnostic, prognostic and predictive testing for cancer |
| WO2009067655A2 (en) * | 2007-11-21 | 2009-05-28 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods of feature selection through local learning; breast and prostate cancer prognostic markers |
| EP2065475A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-03 | Siemens Healthcare Diagnostics GmbH | Method for therapy prediction in tumors having irregularities in the expression of at least one VEGF ligand and/or at least one ErbB-receptor |
| WO2009114534A1 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | The Regents Of The University Of California | Multi-gene classifiers and prognostic indicators for cancers |
| BRPI0812682A2 (pt) | 2008-06-16 | 2010-06-22 | Genentech Inc | tratamento de cáncer de mama metastático |
| US10359425B2 (en) * | 2008-09-09 | 2019-07-23 | Somalogic, Inc. | Lung cancer biomarkers and uses thereof |
| US20100221752A2 (en) * | 2008-10-06 | 2010-09-02 | Somalogic, Inc. | Ovarian Cancer Biomarkers and Uses Thereof |
| WO2010045234A1 (en) * | 2008-10-14 | 2010-04-22 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Methods of optimizing treatment of estrogen-receptor positive breast cancers |
| GB0821787D0 (en) * | 2008-12-01 | 2009-01-07 | Univ Ulster | A genomic-based method of stratifying breast cancer patients |
| US20120041274A1 (en) | 2010-01-07 | 2012-02-16 | Myriad Genetics, Incorporated | Cancer biomarkers |
| US12680139B2 (en) | 2009-01-07 | 2026-07-14 | Myriad Genetics, Inc. | Cancer biomarkers |
| WO2011005384A2 (en) * | 2009-05-29 | 2011-01-13 | Baylor College Of Medicine | Dna repair or brca1-like gene signature |
| US20120121586A1 (en) | 2009-05-29 | 2012-05-17 | Astrid Kiermaier | Modulators for her2 signaling in her2 expressing patients with gastric cancer |
| WO2010146059A2 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
| EP2275569A1 (en) * | 2009-07-17 | 2011-01-19 | Centre Leon Berard | ZNF217 a new prognostic and predictive biomarker of recurrent, invasive and metastatic phenotypes in cancer |
| GB0917457D0 (en) * | 2009-10-06 | 2009-11-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
| EP4350001A3 (en) * | 2009-11-23 | 2024-06-19 | Genomic Health, Inc. | Methods to predict clinical outcome of cancer |
| WO2011088137A2 (en) * | 2010-01-12 | 2011-07-21 | H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute | Bad pathway gene signature |
| WO2011107819A1 (en) * | 2010-03-01 | 2011-09-09 | Adelbio | Methods for predicting outcome of breast cancer, and/or risk of relapse, response or survival of a patient suffering therefrom |
| WO2011146568A1 (en) | 2010-05-19 | 2011-11-24 | Genentech, Inc. | Predicting response to a her inhibitor |
| EP3812469A1 (en) | 2010-07-07 | 2021-04-28 | Myriad Genetics, Inc. | Gene signatures for cancer prognosis |
| JP5905003B2 (ja) | 2010-07-09 | 2016-04-20 | ソマロジック・インコーポレーテッド | 肺癌バイオマーカーとその使用 |
| MX350533B (es) | 2010-08-13 | 2017-09-08 | Somalogic Inc | Biomarcadores de cancer pancreatico y usos de los mismos. |
| SI2603600T1 (sl) | 2010-08-13 | 2019-04-30 | Aileron Therapeutics, Inc. | Peptidomimetični makrocikli |
| EP2611941A4 (en) | 2010-08-30 | 2014-01-22 | Myriad Genetics Inc | GENESIS OF CANCER DIAGNOSIS AND PROGNOSIS |
| SG190867A1 (en) | 2010-11-23 | 2013-07-31 | Krisani Biosciences P Ltd | Method and system for prognosis and treatment of diseases using portfolio of genes |
| WO2012109233A2 (en) * | 2011-02-07 | 2012-08-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for predicting recurrence risk in breast cancer patients |
| TW201806968A (zh) | 2011-10-18 | 2018-03-01 | 艾利倫治療公司 | 擬肽巨環化合物 |
| MX357402B (es) * | 2011-11-08 | 2018-07-09 | Genomic Health Inc | Metodo para predecir el pronostico de cancer de mama. |
| WO2013083810A1 (en) | 2011-12-09 | 2013-06-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Identification of non-responders to her2 inhibitors |
| HK1205454A1 (en) | 2012-02-15 | 2015-12-18 | Aileron Therapeutics, Inc. | Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles |
| WO2013170174A1 (en) | 2012-05-10 | 2013-11-14 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Method of diagnosing, treating and determining progression and survival of cancer cells using bcl-2 antagonist of cell death (bad) pathway gene signature |
| US9890430B2 (en) | 2012-06-12 | 2018-02-13 | Washington University | Copy number aberration driven endocrine response gene signature |
| WO2014071241A1 (en) | 2012-11-01 | 2014-05-08 | Aileron Therapeutics, Inc. | Disubstituted amino acids and methods of preparation and use thereof |
| ES2938766T3 (es) | 2012-11-16 | 2023-04-14 | Myriad Genetics Inc | Firmas génicas para el pronóstico de cáncer |
| RU2692773C2 (ru) | 2012-11-30 | 2019-06-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Идентификация пациентов, нуждающихся в совместной терапии с использованием ингибитора pd-l1 |
| US20150352193A1 (en) | 2013-01-18 | 2015-12-10 | Ellis Kline | Selective glycosidase regimen for immune programming and treatment of cancer |
| US10386370B2 (en) | 2013-02-11 | 2019-08-20 | Incuron, Inc. | Use of facilitates chromatin transcription complex (FACT) in cancer |
| CN103465779B (zh) * | 2013-09-17 | 2015-12-09 | 哈尔滨工程大学 | 双引擎全向四驱行进机构 |
| CN103558383B (zh) * | 2013-10-28 | 2015-11-18 | 深圳市第二人民医院 | Aldh2基因在检测上尿路上皮癌中的应用 |
| CN103558382B (zh) * | 2013-10-28 | 2015-11-18 | 深圳市第二人民医院 | Ccne1基因在检测上尿路上皮癌中的应用 |
| KR20150088433A (ko) | 2014-01-24 | 2015-08-03 | 삼성전자주식회사 | c-Met 저해제의 효능 예측을 위한 바이오마커 TFF1 |
| CA2947624A1 (en) | 2014-05-13 | 2015-11-19 | Myriad Genetics, Inc. | Gene signatures for cancer prognosis |
| WO2016025785A1 (en) * | 2014-08-15 | 2016-02-18 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Systems and methods for characterizing cancer |
| JP2018503595A (ja) | 2014-09-24 | 2018-02-08 | エルロン・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｉｌｅｒｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． | ペプチド模倣大環状分子およびその製剤 |
| BR112017005598A2 (pt) | 2014-09-24 | 2017-12-12 | Aileron Therapeutics Inc | macrociclos peptidomiméticos e usos dos mesmos |
| CN107077536B (zh) | 2014-10-24 | 2021-09-28 | 皇家飞利浦有限公司 | 使用靶基因表达的数学建模评价TGF-β细胞信号传导途径的活性 |
| CA2965217A1 (en) | 2014-10-24 | 2016-04-28 | Koninklijke Philips N.V. | Medical prognosis and prediction of treatment response using multiple cellular signaling pathway activities |
| US11610644B2 (en) | 2014-10-24 | 2023-03-21 | Koninklijke Philips N.V. | Superior bioinformatics process for identifying at risk subject populations |
| WO2016154058A1 (en) | 2015-03-20 | 2016-09-29 | Aileron Therapeutics, Inc. | Peptidomimetic macrocycles and uses thereof |
| EP3073268A1 (en) * | 2015-03-27 | 2016-09-28 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des Öffentlichen Rechts | Biomarker panel for diagnosing cancer |
| CA2995520A1 (en) | 2015-08-14 | 2017-02-23 | Hendrik Jan VAN OOIJEN | Assessment of nfkb cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression |
| CN107058523A (zh) * | 2017-03-21 | 2017-08-18 | 温州迪安医学检验所有限公司 | 一种乳腺癌复发风险评估21基因检测引物及其应用 |
| EP3461916A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-03 | Koninklijke Philips N.V. | Assessment of jak-stat3 cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression |
| EP3461915A1 (en) | 2017-10-02 | 2019-04-03 | Koninklijke Philips N.V. | Assessment of jak-stat1/2 cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression |
| EP3502279A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-26 | Koninklijke Philips N.V. | Assessment of mapk-ap 1 cellular signaling pathway activity using mathematical modelling of target gene expression |
| CN110045120A (zh) * | 2018-01-15 | 2019-07-23 | 长庚医疗财团法人基隆长庚纪念医院 | 检测生物样品中wisp1的浓度在制备用于乳癌筛检及侦测复发的检测试剂盒及其应用 |
| WO2020013355A1 (ko) * | 2018-07-10 | 2020-01-16 | 서울대학교산학협력단 | 악성 엽상종 예후 예측용 조성물 및 이를 포함하는 키트 |
| WO2021030460A1 (en) * | 2019-08-12 | 2021-02-18 | Baylor College Of Medicine | Proteogenomic methods for diagnosing cancer |
| CN113862363A (zh) * | 2021-10-27 | 2021-12-31 | 中山大学附属第一医院 | 免疫相关基因在乳腺癌预后的试剂盒和系统中的应用 |
| CN114480650A (zh) * | 2022-02-08 | 2022-05-13 | 深圳市陆为生物技术有限公司 | 一种预测三阴乳腺癌临床预后复发风险的标志物及模型 |
| EP4793361A1 (en) * | 2023-10-09 | 2026-08-19 | Liqsci Biotecnologia Ltda | In vitro diagnostic and/or prognostic process for tumors in liquid samples, kit and in vitro clinical monitoring process |
Family Cites Families (105)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4699877A (en) | 1982-11-04 | 1987-10-13 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for detecting human tumors |
| CA1252046A (en) | 1982-11-04 | 1989-04-04 | Martin J. Cline | Methods for oncogenic detection |
| USRE35491E (en) | 1982-11-04 | 1997-04-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for detecting human tumors |
| US7838216B1 (en) | 1986-03-05 | 2010-11-23 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Human gene related to but distinct from EGF receptor gene |
| US5015568A (en) | 1986-07-09 | 1991-05-14 | The Wistar Institute | Diagnostic methods for detecting lymphomas in humans |
| US5202429A (en) | 1986-07-09 | 1993-04-13 | The Wistar Institute | DNA molecules having human BCL-2 gene sequences |
| US4968603A (en) | 1986-12-31 | 1990-11-06 | The Regents Of The University Of California | Determination of status in neoplastic disease |
| US5831066A (en) | 1988-12-22 | 1998-11-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of bcl-2 gene expression |
| US5922855A (en) * | 1993-12-17 | 1999-07-13 | Oregon Health Sciences University | Mammalian DNA mismatch repair genes MLH1 and PMS1 |
| US6037134A (en) * | 1994-03-07 | 2000-03-14 | New York University Medical Center | Methods that detect compounds that disrupt receptor tyrosine kinase/GRB-7 complexes |
| US7625697B2 (en) * | 1994-06-17 | 2009-12-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for constructing subarrays and subarrays made thereby |
| US5858678A (en) | 1994-08-02 | 1999-01-12 | St. Louis University | Apoptosis-regulating proteins |
| US5830753A (en) | 1994-09-30 | 1998-11-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor dage and uses thereof. |
| US6218529B1 (en) * | 1995-07-31 | 2001-04-17 | Urocor, Inc. | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate, breast and bladder cancer |
| US6716575B2 (en) | 1995-12-18 | 2004-04-06 | Sugen, Inc. | Diagnosis and treatment of AUR1 and/or AUR2 related disorders |
| JP3944241B2 (ja) | 1995-12-18 | 2007-07-11 | スージェン・インコーポレーテッド | Ａｕｒ―１および／またはａｕｒ―２関連疾患の診断および処置 |
| US5670325A (en) | 1996-08-14 | 1997-09-23 | Exact Laboratories, Inc. | Method for the detection of clonal populations of transformed cells in a genomically heterogeneous cellular sample |
| US5741650A (en) | 1996-01-30 | 1998-04-21 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for detecting colon cancer from stool samples |
| US5821082A (en) | 1996-05-23 | 1998-10-13 | St. Louis University Health Sciences Center | Anti-proliferation domain of a human Bcl-2 and DNA encoding the same |
| CA2744096C (en) | 1996-07-31 | 2013-07-30 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease |
| US5952178A (en) | 1996-08-14 | 1999-09-14 | Exact Laboratories | Methods for disease diagnosis from stool samples |
| US5928870A (en) | 1997-06-16 | 1999-07-27 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for the detection of loss of heterozygosity |
| US6203993B1 (en) | 1996-08-14 | 2001-03-20 | Exact Science Corp. | Methods for the detection of nucleic acids |
| US6143529A (en) | 1996-08-14 | 2000-11-07 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for improving sensitivity and specificity of screening assays |
| US6020137A (en) | 1996-08-14 | 2000-02-01 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for the detection of loss of heterozygosity |
| US6146828A (en) | 1996-08-14 | 2000-11-14 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for detecting differences in RNA expression levels and uses therefor |
| US6100029A (en) | 1996-08-14 | 2000-08-08 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for the detection of chromosomal aberrations |
| US5861278A (en) | 1996-11-01 | 1999-01-19 | Genetics Institute, Inc. | HNF3δ compositions |
| DE69739105D1 (de) | 1996-11-20 | 2008-12-24 | Univ Yale | Survivin, ein protein das zelluläre apoptosis hemmt, und dessen modulation |
| US5830665A (en) | 1997-03-03 | 1998-11-03 | Exact Laboratories, Inc. | Contiguous genomic sequence scanning |
| US6033893A (en) | 1997-06-26 | 2000-03-07 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human cathepsin |
| WO1999002714A1 (en) | 1997-07-07 | 1999-01-21 | Abbott Laboratories | Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast |
| DE69836823D1 (de) * | 1997-10-21 | 2007-02-15 | Univ Glasgow | Jmy, mit-aktivator für p300/cbp, dafür kodierendenucleinsäure und deren verwendungen |
| WO1999044062A1 (en) * | 1998-02-25 | 1999-09-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Cellular arrays for rapid molecular profiling |
| US6020135A (en) | 1998-03-27 | 2000-02-01 | Affymetrix, Inc. | P53-regulated genes |
| GB2339200B (en) | 1998-06-06 | 2001-09-12 | Genostic Pharma Ltd | Genostics |
| AU4158799A (en) | 1998-06-06 | 1999-12-30 | Genostic Pharma Limited | Probes used for genetic filing |
| US6696558B2 (en) | 1998-09-09 | 2004-02-24 | The Burnham Institute | Bag proteins and nucleic acid molecules encoding them |
| AU2342900A (en) | 1998-09-23 | 2000-05-01 | Cleveland Clinic Foundation, The | Novel interferon stimulated and repressed genes |
| US9534254B1 (en) * | 1999-02-02 | 2017-01-03 | Abbott Molecular Inc. | Patient stratification for cancer therapy based on genomic DNA microarray analysis |
| US6251601B1 (en) | 1999-02-02 | 2001-06-26 | Vysis, Inc. | Simultaneous measurement of gene expression and genomic abnormalities using nucleic acid microarrays |
| WO2000050595A2 (en) | 1999-02-25 | 2000-08-31 | Ivan Gout | Nucleic acid molecules associated with melanoma and thyroid tumors |
| US20020039764A1 (en) | 1999-03-12 | 2002-04-04 | Rosen Craig A. | Nucleic, acids, proteins, and antibodies |
| AU3395900A (en) | 1999-03-12 | 2000-10-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides |
| US6960439B2 (en) | 1999-06-28 | 2005-11-01 | Source Precision Medicine, Inc. | Identification, monitoring and treatment of disease and characterization of biological condition using gene expression profiles |
| US6692916B2 (en) | 1999-06-28 | 2004-02-17 | Source Precision Medicine, Inc. | Systems and methods for characterizing a biological condition or agent using precision gene expression profiles |
| US6326148B1 (en) | 1999-07-12 | 2001-12-04 | The Regents Of The University Of California | Detection of copy number changes in colon cancer |
| US6710170B2 (en) | 1999-09-10 | 2004-03-23 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer |
| US6271002B1 (en) | 1999-10-04 | 2001-08-07 | Rosetta Inpharmatics, Inc. | RNA amplification method |
| WO2001025250A1 (en) | 1999-10-06 | 2001-04-12 | The Regents Of The University Of California | Differentially expressed genes associated with her-2/neu overexpression |
| CA2391455A1 (en) | 1999-12-01 | 2001-06-07 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| US6750013B2 (en) | 1999-12-02 | 2004-06-15 | Protein Design Labs, Inc. | Methods for detection and diagnosing of breast cancer |
| US6248535B1 (en) | 1999-12-20 | 2001-06-19 | University Of Southern California | Method for isolation of RNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissue specimens |
| WO2001051664A2 (en) * | 2000-01-12 | 2001-07-19 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Method of detecting and characterizing a neoplasm |
| EP1276901A2 (en) | 2000-01-13 | 2003-01-22 | Amsterdam Support Diagnostics B.V. | A universal nucleic acid amplification system for nucleic acids in a sample |
| US6322986B1 (en) | 2000-01-18 | 2001-11-27 | Albany Medical College | Method for colorectal cancer prognosis and treatment selection |
| US6618679B2 (en) | 2000-01-28 | 2003-09-09 | Althea Technologies, Inc. | Methods for analysis of gene expression |
| WO2001055448A1 (en) | 2000-01-31 | 2001-08-02 | Human Genome Sciences, Inc. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
| AU4592601A (en) | 2000-03-21 | 2001-10-03 | Millennium Predictive Medicine | Novel genes, compositions, kits, and method for identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer |
| US7157227B2 (en) | 2000-03-31 | 2007-01-02 | University Of Louisville Research Foundation | Microarrays to screen regulatory genes |
| AU2001266787A1 (en) | 2000-06-07 | 2002-01-08 | Human Genome Sciences, Inc. | Nucleic acids, proteins, and antibodies |
| AU2001280008A1 (en) | 2000-07-21 | 2002-02-05 | Global Genomics Ab | A method and an algorithm for mRNA expression analysis |
| AU2001277202A1 (en) | 2000-07-26 | 2002-02-05 | Applied Genomics, Inc. | Bstp-ras/rerg protein and related reagents and methods of use thereof |
| WO2002008765A2 (en) | 2000-07-26 | 2002-01-31 | Stanford University | Basal cell markers in breast cancer and uses thereof |
| WO2002008260A2 (en) | 2000-07-26 | 2002-01-31 | Stanford University | Bstp-ecg1 protein and related reagents and methods of use thereof |
| WO2002010436A2 (en) * | 2000-07-28 | 2002-02-07 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Prognostic classification of breast cancer |
| US7795232B1 (en) | 2000-08-25 | 2010-09-14 | Genta Incorporated | Methods of treatment of a bcl-2 disorder using bcl-2 antisense oligomers |
| US6378397B1 (en) * | 2000-10-25 | 2002-04-30 | Jenn Jianq Co., Ltd. | Differential gearing device |
| US6602670B2 (en) | 2000-12-01 | 2003-08-05 | Response Genetics, Inc. | Method of determining a chemotherapeutic regimen based on ERCC1 expression |
| US6582919B2 (en) | 2001-06-11 | 2003-06-24 | Response Genetics, Inc. | Method of determining epidermal growth factor receptor and HER2-neu gene expression and correlation of levels thereof with survival rates |
| US20030143539A1 (en) * | 2000-12-08 | 2003-07-31 | Francois Bertucci | Gene expression profiling of primary breast carcinomas using arrays of candidate genes |
| WO2002068579A2 (en) | 2001-01-10 | 2002-09-06 | Pe Corporation (Ny) | Kits, such as nucleic acid arrays, comprising a majority of human exons or transcripts, for detecting expression and other uses thereof |
| US7776518B2 (en) | 2001-01-12 | 2010-08-17 | Yale University | Detection of survivin in the biological fluids of cancer patients |
| JP4368110B2 (ja) | 2001-01-12 | 2009-11-18 | エール ユニヴァーシティ | 癌患者の生物学的流体中のサバイビンの検出 |
| EP1425302A2 (en) | 2001-01-24 | 2004-06-09 | Protein Design Labs | Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer |
| WO2002059271A2 (en) | 2001-01-25 | 2002-08-01 | Gene Logic, Inc. | Gene expression profiles in breast tissue |
| KR20030094281A (ko) | 2001-03-12 | 2003-12-11 | 모노젠, 인크. | 세포에 기초한 질병상태의 검출 및 질병상태의 구별 |
| US20050260572A1 (en) | 2001-03-14 | 2005-11-24 | Kikuya Kato | Method of predicting cancer |
| US6655515B2 (en) * | 2001-05-24 | 2003-12-02 | Tecumseh Products Company | Modular bi-directional overrunning wheel clutch |
| PT1410011E (pt) | 2001-06-18 | 2011-07-25 | Rosetta Inpharmatics Llc | Diagnóstico e prognóstico de pacientes com cancro da mama |
| WO2003011897A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-13 | The Regents Of The University Of California | Modulation of heregulin and her3 interaction |
| US6898531B2 (en) * | 2001-09-05 | 2005-05-24 | Perlegen Sciences, Inc. | Algorithms for selection of primer pairs |
| AU2002343443A1 (en) | 2001-09-28 | 2003-04-14 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Classification of lung carcinomas using gene expression analysis |
| CN1612936A (zh) | 2001-11-09 | 2005-05-04 | 苏尔斯精细医药公司 | 利用基因表达分布图识别、监控和治疗疾病以及鉴定生物学状态 |
| US20030198972A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-10-23 | Erlander Mark G. | Grading of breast cancer |
| US7081340B2 (en) | 2002-03-13 | 2006-07-25 | Genomic Health, Inc. | Gene expression profiling in biopsied tumor tissues |
| EP1492871A2 (en) | 2002-03-28 | 2005-01-05 | QLT Inc. | Cancer associated protein kinases and their uses |
| EP1900827A3 (en) | 2002-05-21 | 2008-04-16 | Bayer HealthCare AG | Methods and compositions for the prediction, diagnosis, prognosis, prevention and treatment of malignant neoplasia |
| EP2305813A3 (en) * | 2002-11-14 | 2012-03-28 | Dharmacon, Inc. | Fuctional and hyperfunctional sirna |
| DE602004015064D1 (de) * | 2003-01-06 | 2008-08-28 | Wyeth Corp | Zusammensetzungen und verfahren zur diagnose und behandlung von kolonkrebs |
| US20040231909A1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-11-25 | Tai-Yang Luh | Motorized vehicle having forward and backward differential structure |
| DE602004017426D1 (de) | 2003-02-20 | 2008-12-11 | Genomic Health Inc | Benutzung von intronischen rna sequenzen zur quantifizierung der genexpression |
| CA2527285A1 (en) | 2003-05-28 | 2004-12-23 | Genomic Health, Inc. | Gene expression markers for predicting response to chemotherapy |
| CA3061769C (en) * | 2003-06-24 | 2021-10-26 | Genomic Health, Inc. | Methods of predicting the likelihood of long-term survival of a human patient with node-negative, estrogen receptor (er) positive, invasive ductal breast cancer without the recurrence of breast cancer |
| ES2905579T3 (es) | 2003-07-10 | 2022-04-11 | Genomic Health Inc | Algoritmo del perfil de expresión y prueba para el pronóstico de la recaída del cáncer de mama |
| CA2563074C (en) | 2004-04-09 | 2014-05-20 | Genomic Health, Inc. | Gene expression markers for predicting response to chemotherapy |
| CA2585571C (en) | 2004-11-05 | 2020-01-21 | Genomic Health, Inc. | Predicting response to chemotherapy using gene expression markers |
| JP4939425B2 (ja) | 2004-11-05 | 2012-05-23 | ジェノミック ヘルス， インコーポレイテッド | 乳癌の治療反応の予後および予測の分子指標 |
| AU2006287175A1 (en) | 2005-09-01 | 2007-03-08 | Precision Therapeutics, Inc. | Chemo-sensitivity assays using tumor cells exhibiting persistent phenotypic characteristics |
| EP1777523A1 (en) | 2005-10-19 | 2007-04-25 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | An in vitro method for the prognosis of progression of a cancer and of the outcome in a patient and means for performing said method |
| WO2007123772A2 (en) | 2006-03-31 | 2007-11-01 | Genomic Health, Inc. | Genes involved in estrogen metabolism |
| WO2009026128A2 (en) | 2007-08-16 | 2009-02-26 | Genomic Health, Inc. | Gene expression markers of recurrence risk in cancer patients after chemotherapy |
| DK2294215T3 (da) | 2008-05-12 | 2013-04-22 | Genomic Health Inc | Tests til forudsigelse af cancerpatienters respons på forskellige kemoterapeutiske behandlingsmuligheder |
| JP5818788B2 (ja) | 2009-07-02 | 2015-11-18 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ | 共凝集したラテックスポリマー分散液並びにその製造方法及びその使用 |
| EP4350001A3 (en) | 2009-11-23 | 2024-06-19 | Genomic Health, Inc. | Methods to predict clinical outcome of cancer |
-
2003
- 2003-05-19 US US10/440,861 patent/US20040231909A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-01-14 EP EP10162868.3A patent/EP2230319B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 DK DK15190640.1T patent/DK3059322T3/da active
- 2004-01-14 JP JP2006500964A patent/JP4723472B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 AT AT04702177T patent/ATE470723T1/de active
- 2004-01-14 WO PCT/US2004/000985 patent/WO2004065583A2/en not_active Ceased
- 2004-01-14 CA CA2829472A patent/CA2829472C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 CA CA2829476A patent/CA2829476C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 AU AU2004205878A patent/AU2004205878B2/en not_active Expired
- 2004-01-14 CA CA2829477A patent/CA2829477C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 EP EP10162867A patent/EP2230318A1/en not_active Ceased
- 2004-01-14 ES ES10162868.3T patent/ES2561179T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 DK DK10162868.3T patent/DK2230319T3/en active
- 2004-01-14 EP EP04702177A patent/EP1587957B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 ES ES15190640T patent/ES2725892T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 US US10/758,307 patent/US7569345B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 DE DE602004027600T patent/DE602004027600D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 DK DK04702177.9T patent/DK1587957T3/da active
- 2004-01-14 CA CA3013889A patent/CA3013889A1/en not_active Abandoned
- 2004-01-14 EP EP15190640.1A patent/EP3059322B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 CA CA2513117A patent/CA2513117C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-14 ES ES04702177T patent/ES2346967T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-06-04 US US12/478,632 patent/US8034565B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-11-16 AU AU2009238287A patent/AU2009238287B2/en not_active Expired
-
2011
- 2011-08-30 US US13/221,549 patent/US8206919B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-05-16 US US13/473,526 patent/US8741605B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-04-21 US US14/257,723 patent/US9944990B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-02-15 US US15/897,617 patent/US11220715B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2561179T3 (es) | Marcadores de expresión génica para prognosis del cáncer de mama | |
| ES2488845T5 (es) | Predicción de la probabilidad de recidiva de cáncer | |
| ES2905579T3 (es) | Algoritmo del perfil de expresión y prueba para el pronóstico de la recaída del cáncer de mama | |
| ES2636470T3 (es) | Marcadores de expresión génica para predecir la respuesta a la quimioterapia | |
| CA2585571C (en) | Predicting response to chemotherapy using gene expression markers | |
| AU2012206980B2 (en) | Gene expression markers for breast cancer prognosis | |
| HK1227946A1 (en) | Gene expression markers for breast cancer prognosis | |
| AU2015202326A1 (en) | Gene expression markers for breast cancer prognosis | |
| HK1148784A (en) | Gene expression markers for breast cancer prognosis |