ES2354607T3 - Procedimiento y aparato para producir liposomas. - Google Patents

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Lorne R. Palmer
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Abstract

Un procedimiento para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho procedimiento: proporcionar una solución acuosa en un primer depósito; proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica que encapsula el producto terapéutico; caracterizado porque la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.

Description

Procedimiento y aparato para producir liposomas.
Antecedentes de la invención
Se conocen ya muchos sistemas para administrar sustancias activas, tales como liposomas, nanopartículas, partículas poliméricas, inmunocomplejos y complejos de ligando y ciclodextrinas (véase, Drug Transport in antimicrobial and anticancer chemotherapy. G. Papadakou Ed., CRC Press, 1995). Los liposomas se preparan típicamente en el laboratorio mediante sonicación, diálisis con detergente, inyección de etanol o dilución, extrusión con prensa francesa, infusión de éter y evaporación de fase inversa. Los liposomas con múltiples bicapas se conocen como vesículas lipídicas multilamelares (MLV). Las MLV son candidatos para fármacos de liberación temporal debido a que los fluidos atrapados entre las capas solo se liberan a medida que se degrada cada membrana. Los liposomas con una bicapa única se conocen como vesículas lipídicas unilamelares (UV). Las UV pueden preparase pequeñas (SUV) o grandes
(LUV).
Algunos de los procedimientos anteriores para la producción de liposomas imponen condiciones severas o extremas que pueden dar como resultado la desnaturalización del material fosfolipídico sin tratar y fármacos encapsulados. Además, estos procedimientos no pueden escalarse fácilmente para una producción en masa de grandes volúmenes de liposomas. Además, la formación de vesículas lipídicas por dilución convencional con etanol, implica la inyección o adición en gotas de un lípido en un tampón acuoso. Las vesículas resultantes son típicamente heterogéneas en tamaño y contienen una mezcla de vesículas unilamelares y multilamelares.
Los liposomas convencionales se formulan para portar agentes terapéuticos contenidos dentro del espacio interior acuoso (fármacos solubles en agua) o repartidos en la capa o capas lipídicas (fármacos insolubles en agua). Los agentes activos que tienen semividas cortas en el torrente sanguíneo son particularmente adecuados para su suministro mediante liposomas. Se sabe que muchos agentes antineoplásicos, por ejemplo, tienen una semivida corta en el torrente sanguíneo de modo que su uso parenteral no es viable. Sin embargo, el uso de liposomas para suministro específico de sitio de agentes activos mediante el torrente sanguíneo está limitado gravemente por el rápido aclaramiento de liposomas de la sangre por células del sistema reticuloendotelial (SRE).
El documento EP-A-1 203 614 desvela técnicas para la preparación de vesículas lipídicas usando un aparato que tiene un primer conducto (fase lipídica) conectado a un segundo conducto (fase polar) de modo que las porciones exteriores de los conductos forman una superficie de contacto común (orificio). El orificio se dispone de modo que la fase lipídica pueda pasar de forma sustancialmente perpendicular a la dirección del flujo de la fase polar.
El documento WO 02/43699 desvela un procedimiento para preparar liposomas grandes (es decir, de 1 a 8 micrómetros de tamaño) que contienen una sustancia farmacéutica atrapada por infusión de una solución de alcohol que contiene lípidos directamente en una solución de polímero acuoso, tal como una solución de polietilenglicol (PEG).
El documento EP-A-1 013 268 desvela un procedimiento para producir liposomas o emulsiones mediante pulverización de una solución oleosa y una solución acuosa en una boquilla de mezcla, en la que los liposomas o emulsiones se forman en la bruma cuando las soluciones nebulizadas colisionan entre sí.
El documento WO 00/29103 desvela un procedimiento para preparar liposomas en el que las fases lipídica y acuosa se introducen en una cámara de premezcla con una alta velocidad a 90º entre sí, creando de este modo un flujo turbulento. De hecho, el premezclador se diseña para crear un vórtice turbulento mediante el cual una corriente de componente se inyecta por medio de alta presión en una segunda corriente de componente a 90º entre sí o ambas corrientes se inyectan por medio de alta presión a 90º entre sí. Véanse, por ejemplo, las Figuras 3 y 10 del documento WO 00/29103.
El documento WO 91/16039 desvela un procedimiento para producir liposomas mediante la adición de una solución acuosa directamente en una solución lipídica orgánica presente en un recipiente de reacción, seguido de la mezcla de los componentes con agitación fuerte. Véase, por ejemplo, página 6, líneas 1-7 y Ejemplo 1 del documento WO 91/16039.
El documento US-A-5 653 996 desvela un procedimiento para producir liposomas mediante la pulverización de una solución lipídica orgánica en o bajo la superficie de una solución de tampón acuosa. Véase, por ejemplo, col. 4, líneas 7-14, Figura 1 y la reivindicación 1 del documento US-A-5 653 996.
Isele U y col. en Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 83, nº. 11, Noviembre 1994, págs. 1608-1616 desvela un dispositivo de mezcla en el que las soluciones acuosa y orgánica se bombean en la cámara de mezcla desde el mismo lado. Véase, por ejemplo, la Figura 1 en la página 1069. Por lo tanto, las soluciones acuosa y orgánica no se introducen en el ambiente de mezcla en ningún ángulo particular.
El documento EP-A-0 055 576 desvela un procedimiento para preparar liposomas mediante la dispersión de una solución lipídica que contiene dos disolventes orgánicos diferentes en una solución acuosa. En particular, D9 enseña que el procedimiento preferido para la formación de la dispersión es mediante el pase de la solución lipídica a través de un filtro microporoso (es decir, membrana de policarbonato) antes de que entre en contacto con la solución acuosa presente en el dispersador. Véase, por ejemplo, página 10, líneas 19-26 y Ejemplos 1-IV del documento EP-A-0 055 576.
La patente de Estados Unidos nº 5.478.860, que se expidió a Wheeler y col., el 26 de Diciembre de 1995 y que se incorpora en el presente documento por referencia, desvela composiciones de microemulsión para el suministro de compuestos hidrófobos. Dichas composiciones tienen una diversidad de usos. En una realización, los compuestos hidrófobos son agentes terapéuticos que incluyen fármacos. La patente también desvela procedimientos para suministro in vitro e in vivo de compuestos hidrófobos a células.
La publicación de PCT WO01/05373 de Knopov, y col., que se incorpora por referencia en el presente documento, desvela técnicas para preparar vesículas lipídicas usando un procedimiento de tipo inyección de etanol con un mezclador estático que proporciona un ambiente turbulento (por ejemplo, números de Reynolds > 2000). A continuación pueden cargarse agentes terapéuticos después de la formación de las vesículas.
A pesar de los aparentes avances de la patente de Estados Unidos nº 5.478.860 y el documento WO01/05373, existe una necesidad de procedimientos y aparatos para formular y producir vesículas lipídicas y en particular vesículas lipídicas que encapsulan un agente terapéutico tal como un ácido nucleico. La presente invención satisface esta y otras necesidades.
Breve sumario de la invención
La presente invención proporciona procedimientos y aparato para preparar vesículas lipídicas que contienen opcionalmente un agente terapéutico. El agente terapéutico puede incluir, por ejemplo, una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, un fármaco o similares. La presente invención puede usarse para formar vesículas lipídicas que contienen ADN plasmídico encapsulado o fármacos de moléculas pequeñas. En un aspecto, las vesículas lipídicas se preparan rápidamente a baja presión y el enfoque es completamente escalable. En ciertas realizaciones preferidas, el procedimiento no implica un mezclador estático o equipamiento de extrusión especializado.
Como tal, en una realización, la presente invención proporciona un procedimiento para producir una vesícula lipídica, preferentemente un liposoma. El procedimiento comprende proporcionar una solución acuosa en un primer depósito; proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea un liposoma que encapsula el producto terapéutico. El procedimiento se caracteriza por que la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
En ciertos aspectos, la solución acuosa tal como un tampón, comprende un producto terapéutico, de modo que el producto terapéutico se encapsule en el liposoma.
Los productos terapéuticos adecuados incluyen, sin limitación, una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip (ARN de interferencia pequeño), ADN precondensado y un antígeno. En ciertos aspectos preferidos, el producto terapéutico es ácido nucleico.
En ciertos aspectos, el producto terapéutico es un ácido nucleico incluido en la solución acuosa. En ciertos aspectos, el producto terapéutico es lipófilo y está incluido en la solución lipídica orgánica. En ciertos aspectos, la eficacia de la encapsulación del producto terapéutico inicial es tan alta como aproximadamente el 90%.
En otra realización más, la presente invención proporciona un aparato para producir una vesícula lipídica, preferentemente un liposoma, que encapsula un producto terapéutico. El aparato comprende un primer depósito para contener una solución acuosa; un segundo depósito para contener una solución lipídica orgánica, en el que una de la solución acuosa y de la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico. El aparato también comprende un mecanismo de bomba configurado para bombear dichas soluciones acuosa y lipídica orgánica en una región de mezcla a caudales sustancialmente iguales. Durante el funcionamiento, la solución lipídica orgánica se mezcla con dicha solución acuosa en la región de mezcla para formar de forma sustancialmente instantánea un liposoma con producto terapéutico encapsulado. El aparato se caracteriza por que la región de mezcla incluye un conector T, introduciéndose dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
Estos y otros aspectos resultarán más evidentes cuando se lean con los dibujos adjuntos y las descripciones detalladas siguientes.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 proporciona un diagrama de flujo para un procedimiento de fabricación de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 2 proporciona un esquema de un procedimiento para preparar liposomas en una realización de la presente invención.
La Figura 3 proporciona un esquema de un aparato de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 4 proporciona un esquema de un aparato que tiene un sistema de ultrafiltración de acuerdo con una realización de la presente invención.
La Figura 5 muestra el efecto de variar la concentración de etanol de la solución lipídica inicial en el diámetro medio de SPLP y encapsulación de ADN. La eficacia de encapsulación de ADN y los tamaños de vesículas se determinaron después de la etapa de dilución.
La Figura 6 muestra el efecto de variar el pH de la solución plasmídica inicial en el diámetro medio de SPLP y encapsulación de ADN. La eficacia de encapsulación de ADN y los tamaños de vesículas se determinaron después de la etapa de dilución.
La Figura 7 muestra el efecto de variar el pH del tampón usado para la etapa de dilución en la eficacia de encapsulación de ADNp.
La Figura 8 muestra el efecto de variar la concentración salina del tampón usado para la etapa de dilución en la eficacia de encapsulación de ADNp.
La Figura 9A-B muestra un procedimiento esquemático de preparación de liposomas de la presente invención.
La Figura 10 muestra la encapsulación de safranina en ciertos liposomas de la presente invención.
La Figura 11 muestra un procedimiento esquemático de preparación de liposomas de la presente invención.
La Figura 12 ilustra una comparación entre una realización de la presente invención y un procedimiento de goteo de etanol para encapsular ADNp.
La Figura 13 muestra un conector T y la dinámica de flujo asociada de acuerdo con una realización.
La Figura 14 muestra diversos parámetros asociados con el flujo del conector T de la Figura 13.
Descripción detallada de la invención y realizaciones preferidas I. Definiciones
La expresión "ácido nucleico" se refiere a un polímero que contiene al menos dos nucleótidos. Los "nucleótidos" contienen un azúcar desoxiribosa (ADN) o ribosa (ARN), una base y un grupo fosfato. Los nucleótidos se enlazan entre sí a través de los grupos fosfato. Las "bases" incluyen purinas y pirimidinas, que incluyen adicionalmente los compuestos naturales adenina, timina, guanina, citosina, uracilo, inosina y análogos naturales y derivados sintéticos de purinas y pirimidinas, que incluyen, sin limitación, modificaciones que sitúan nuevos grupos reactivos tales como, sin limitación, aminas, alcoholes, tioles, carboxilatos y alquilaluros.
El ADN puede estar en forma de antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), cassetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico o derivados de estos grupos. El ARN puede estar en forma de ARN de oligonucleótido, ARNt (ARN de transferencia), ARNnp (ARN nuclear pequeño), ARNr (ARN ribosomal), ARNm (ARN mensajero), ARN antisentido, ARNip (ARN de interferencia pequeño), ribozimas, secuencias quiméricas o derivados de estos grupos.
"Antisentido" es un polinucleótido que interfiere con la función de ADN y/o ARN. Esto puede dar como resultado la supresión de la expresión. Los ácidos nucleicos naturales tienen una cadena principal de fosfato, los ácidos nucleicos artificiales pueden contener otros tipos de cadenas principales y bases. Estos incluyen APN (ácidos péptido nucleicos), fosfotionatos y otras variantes de la cadena principal de fosfato de ácidos nucleicos nativos. Además, el ADN y el ARN pueden ser monocatenarios, bicatenarios, tricatenarios o tetracatenarios.
El término "gen" se refiere a una secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, ADN) que comprende secuencias codificantes necesarias para la producción de un polipéptido o precursor (por ejemplo, virus del herpes simple). El polipéptido puede codificarse por una secuencia codificante de longitud completa o por cualquier parte de la secuencia codificante siempre que la actividad o propiedades funcionales deseadas (por ejemplo, actividad enzimática, unión a ligando, transducción de señales y similares) de la longitud completa o del fragmento se conserven.
Como se usa en el presente documento, la expresión "solución acuosa" se refiere a una composición que se comprende completamente, o en parte, de agua.
Como se usa en el presente documento, la expresión "solución lipídica orgánica" se refiere a una composición que se comprende completamente, o en parte, de un disolvente orgánico que tiene un lípido.
El término "lípido" se refiere a un grupo de compuestos orgánicos que son ésteres de ácidos grasos y se caracterizan por ser insolubles en agua pero solubles en muchos disolventes orgánicos. Habitualmente se dividen al menos en tres clases: (1) "lípidos simples" que incluyen grasas y aceites así como ceras, (2) "lípidos compuestos" que incluyen fosfolípidos y glucolípidos; (3) "lípidos derivados" tales como esteroides.
La expresión "lípido anfipático" se refiere, en parte, a cualquier material adecuado en el que la parte hidrófoba del material lipídico se orienta en una fase hidrófoba, mientras que una parte hidrófila se orienta hacia la fase acuosa. Los lípidos anfipáticos son habitualmente el componente principal de una vesícula lipídica. Las características hidrófilas derivan de la presencia de grupos polares o cargados tales como carbohidratos, grupos fosfato, carboxílico, sulfato, amino, sulfhidrilo, nitro, hidroxi y otros similares. Puede conferirse hidrofobicidad mediante la inclusión de grupos apolares que incluyen, sin limitación, grupos de hidrocarburos alifáticos de cadena larga saturados e insaturados y dichos grupos sustituidos por uno más grupos cicloalifáticos o heterocíclicos aromáticos. Los ejemplos de compuestos anfipáticos incluyen, sin limitación, fosfolípidos, aminolípidos y esfingolípidos. Los ejemplos representativos de fosfolípidos incluyen, sin limitación, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinotisol, ácido fosfatídico, palmitoiloleoil fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidilcolina, diolelilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina o dilinoleoilfosfatidilcolina. Otros compuestos que carecen de fósforo, tales como esfingolípidos, familias de glucoesfingolípidos, diacilgliceroles y \beta-aciloxiácidos, también están dentro del grupo designado como lípidos anfipáticos. Adicionalmente, el lípido anfipático descrito anteriormente puede mezclarse con otros lípidos incluyendo triglicéridos y esteroles.
La expresión "lípido aniónico" se refiere a cualquier lípido que está cargado negativamente a pH fisiológico. Estos lípidos incluyen, sin limitación, fosfatidilglicerol, cardiolipina, diacilfosfatidilserina, ácido diacilfosfatídico, N-dodecanoilfosfatidiletanolaminas, N-succinil fosfatidiletanolaminas, N-glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilgliceroles y otros grupos modificadores aniónicos unidos a lípidos neutros.
La expresión "lípido catiónico" se refiere a cualquiera de una variedad de especies lipídicas que portan una carga positiva neta a un pH selectivo, tal como pH fisiológico. Dichos lípidos incluyen, sin limitación, cloruro de N,N-dioelil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); cloruro de N-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio ("DDAB"); cloruro de N-(2,3-dioleoiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTAP"); 3-(N-(N',N'-dimetilaminoetano)-carbamoil)colesterol ("DC-Col") y bromuro de N-(1,2-dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio ("DMRIE"). Adicionalmente, están disponibles varias preparaciones comerciales de lípidos catiónicos que pueden usarse en la presente invención. Estas incluyen, por ejemplo, LIPOFECTIN® (liposomas catiónicos disponibles en el mercado que comprenden DOTMA y 1,2-dioleoil-sn-3-fosfoetanolamina ("DOPE") de GIBCOBRL, Grand Island, Nueva York, Estados Unidos); LIPOFECTAMINE® (liposomas catiónicos disponibles en el mercado que comprenden N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N-(2-(espermincarboxamido)etil)-N,N-dimetilamonio trifluoroacetato ("DOSPA") y ("DOPE"), de GIBCO/BRL); y TRANSFECTAM® (lípidos catiónicos disponibles en el mercado que comprenden dioctadecilamidoglicil carboxiespermina ("DOGS") en etanol de Promega Corp., Madison, Wisconsin, Estados Unidos). Los siguientes lípidos son catiónicos y tienen una carga positiva a pH por debajo del fisiológico: DODAP, DODMA, DMDMA y similares.
"Vesícula lipídica" se refiere a cualquier composición lipídica que pueda usarse para suministrar un compuesto incluyendo, sin limitación, liposomas, en la que se encapsula un volumen acuoso mediante una bicapa lipídica anfipática; o en la que los lípidos revisten un interior que comprende un componente molecular grande, tal como un plásmido, con un interior acuoso reducido; o agregados lipídicos o micelas, en las que el componente encapsulado está contenido dentro de una mezcla lipídica relativamente desordenada.
Como se usa en el presente documento, "encapsulado lipídico" puede referirse a una formulación lipídica que proporciona un compuesto con encapsulación completa, encapsulación parcial o ambas.
Como se usa en el presente documento, el término "SPLP" se refiere a una partícula lipídica plasmídica estable. Una SPLP representa una vesícula de lípidos que revisten un interior que comprende un ácido nucleico tal como un plásmido con un interior acuoso reducido.
II. General
La presente invención proporciona procedimientos y aparato para preparar vesículas lipídicas. Los procedimientos pueden usarse para preparar vesículas lipídicas que poseen una amplia serie de componentes lipídicos que incluyen, sin limitación, lípidos catiónicos, lípidos aniónicos, lípidos neutros, lípidos de polietilenglicol (PEG), lípidos poliméricos hidrófilos, lípidos fusogénicos y esteroles. Pueden incorporarse principios activos hidrófobos en el disolvente orgánico (por ejemplo, etanol) con el lípido y pueden añadirse ácidos nucleicos y principios activos hidrófilos a un componente acuoso. En ciertos aspectos, los procedimientos de la presente invención pueden usarse en la preparación de microemulsiones cuando una monocapa lipídica rodea a un núcleo de base oleosa. En ciertos aspectos preferidos, los procedimientos y aparato se usan en la preparación de vesículas lipídicas o liposomas, encapsulándose un agente terapéutico dentro del liposoma coincidiendo con la formación del liposoma.
III. Procedimientos de Preparación
La Figura 1 es un ejemplo de un diagrama de flujo representativo 100 de un procedimiento de la presente invención. Este diagrama de flujo es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto habitual en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
En un aspecto, el presente procedimiento proporciona una solución lipídica 110 tal como un lípido de uso clínico sintetizado bajo la Buena Práctica de Fabricación (GMP), que se solubiliza posteriormente en una solución orgánica 120 (por ejemplo, etanol). De forma similar, un producto terapéutico, por ejemplo, un agente activo terapéutico tal como ácido nucleico 112 u otro agente, se prepara bajo GMP. A partir de entonces, una solución de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) 115 que contiene un tampón (por ejemplo, de citrato) se mezcla con una solución lipídica 120 solubilizada en un alcanol inferior para formar una formulación liposomal 130. En aspectos preferidos de la presente invención, el agente terapéutico se "atrapa de forma pasiva" en el liposoma coincidiendo sustancialmente con la formación del liposoma. Sin embargo, los expertos en la materia se darán cuenta de que los procedimientos y el aparato de la presente invención son igualmente aplicables al atrapamiento o carga activos de los liposomas después de la formación de la vesícula.
De acuerdo con los procedimientos y el aparato de la presente invención, la acción de introducir de forma continua soluciones lipídicas y de tampón en un ambiente de mezcla, tal como en una cámara de mezcla, provoca una dilución continua de la solución lipídica con la solución de tampón, produciendo de este modo un liposoma de forma sustancialmente instantánea tras la mezcla. Como se usa en el presente documento, la frase "diluir continuamente una solución lipídica con una solución de tampón" (y variaciones) significa generalmente que la solución lipídica se diluye de forma suficientemente rápida en un proceso de hidratación con suficiente fuerza para efectuar la generación de vesículas. Mediante la mezcla de la solución acuosa con la solución lipídica orgánica, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas en presencia de la solución de tampón (acuosa) para producir un liposoma.
En los procedimientos de la presente invención, la solución lipídica orgánica preferentemente incluye un disolvente orgánico, tal como un alcanol inferior. En un aspecto, los liposomas se diluyen después 140 con un tampón (por ejemplo, de citrato) para aumentar el atrapamiento de ácido nucleico (por ejemplo, plasmídico). Antes de la concentración de la muestra 160, se retira el agente terapéutico libre (por ejemplo, ácido nucleico) mediante el uso, por ejemplo, de un cartucho de intercambio aniónico 150. Además, mediante el uso de una etapa de ultrafiltración 170 para retirar el alcanol, la muestra se concentra (por ejemplo, a aproximadamente 0,9 mg/ml de ADN plasmídico), se retira el alcanol y se reemplaza el tampón con un tampón de sustitución (por ejemplo, con un tampón salino) 180. A partir de entonces, la muestra se filtra 190 y se introduce en viales 195. El procedimiento se discutirá ahora en más detalle en el presente documento a continuación usando las etapas como se exponen en la Figura 1.
1. Solubilización de lípidos y disolución del agente terapéutico
En una realización, las vesículas de liposoma de los presentes procedimientos son formulaciones de partícula lipídica plasmídica estable (es decir, SPLP). Los expertos en la materia apreciarán que la siguiente descripción solamente tiene fines ilustrativos. Los procedimientos de la presente invención son aplicables a una amplia serie de tipos y tamaños de vesículas lipídicas. Estas vesículas lipídicas incluyen, sin limitación, vesículas lipídicas bicapa sencillas conocidas como vesículas lipídicas unilamelares que pueden prepararse pequeñas (SUV) o grandes (LUV), así como vesículas lipídicas multilamelares (MLV). Las vesículas adicionales incluyen micelas, partículas lípido-ácido nucleico, virosomas y similares. Los expertos en la materia conocerán otras vesículas lipídicas para las que los procedimientos y el aparato de la presente invención serán adecuados.
El tamaño preferido para los liposomas preparados de acuerdo con los presentes procedimientos y aparato están entre aproximadamente 50 y 550 nm de diámetro. En ciertos aspectos preferidos, la preparación de liposomas tiene una distribución de tamaños en la que el tamaño medio (por ejemplo, el diámetro) es de aproximadamente 70 nm a aproximadamente 300 nm y más preferentemente el tamaño medio es menor de aproximadamente 200 nm, tal como aproximadamente 150 nm o menos (por ejemplo, aproximadamente 100 nm).
En ciertos aspectos, la formulación de liposomas (por ejemplo, formulación de SPLP) de la presente invención incluye cuatro componentes lipídicos: un fosfolípido; colesterol; un lípido de PEG; y un lípido catiónico. En un aspecto preferido el fosfolípido es DSPC, el lípido de PEG es PEG-DSG y el lípido catiónico es DODMA. En un aspecto preferido, la composición molar es aproximadamente 20:45:10:25 DSPC:Col:PEG-DSG:DODMA. En ciertas realizaciones, la concentración de disolvente orgánico en la que los lípidos se solubilizan es de aproximadamente 45% v/v a aproximadamente 90% v/v. En ciertos aspectos preferidos, el disolvente orgánico es un alcanol inferior. Los alcanoles inferiores adecuados incluyen, sin limitación, metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, sus isómeros y combinaciones de los mismos. En una realización, el disolvente es preferentemente etanol con un volumen de aproximadamente 50-90% v/v. Preferentemente, los lípidos ocupan un volumen de aproximadamente 1 ml/g a aproximadamente 5 ml/g.
Los lípidos se solubilizan 120 usando, por ejemplo, un agitador superior a una temperatura adecuada. En un aspecto, la concentración de lípidos total de la solución es de aproximadamente 15,1 mg/ml (20 mM). En ciertos aspectos preferidos, el agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) se incluye en una solución acuosa (por ejemplo, tampón) y se diluye hasta una concentración final. En un aspecto preferido, por ejemplo, la concentración final es de aproximadamente 0,9 mg/mg en tampón de citrato, con un pH de aproximadamente 4,0. En este caso, el volumen de la solución de plásmido es la misma que la solución de alcanol-lípido. En una realización, la preparación de la solución de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) se realiza en un recipiente de acero inoxidable con envoltura con un mezclador superior. La muestra no necesita calentarse para prepararse, aunque en ciertos casos está a la misma temperatura que la solución lipídica antes de la formación de vesículas lipídicas.
En una realización, el agente terapéutico se incluye en la solución lipídica. En ciertos aspectos preferidos, el agente terapéutico en la solución lipídica es lipófilo. Los agentes lipófilos adecuados incluyen taxol, derivados del taxol, incluyendo, por ejemplo, protax III y paclitaxol, benzoporfirinas lipófilas, verteporfina el profármaco lipídico de foscarnet, 1-O-octadecil-sn-glicerol-3-fosfonoformato (ODG-PFA), dioleoil[3H]yododesoxiuridina ([3H]IDU-O12), péptidos inhibidores de la proteasa de VIH derivatizados con lípidos tales como: iBOC-[L-Phe]-[D-beta-Nal]-Pip-[alfa-(OH)-Leu]-Val (7194) y otros fármacos o profármacos derivatizados con lípidos.
2. Formación de Liposomas
Después de que las soluciones, por ejemplo, solución lipídica 120 y solución de agente terapéutico acuosa (por ejemplo, ácido nucleico) 115, se han preparado, se mezclan entre sí 130 usando, por ejemplo, un mezclador de bomba peristáltica. En un aspecto, las soluciones se bombean a caudales sustancialmente iguales en un ambiente de mezcla. El ambiente de mezcla incluye un conector "T" o cámara de mezcla. En este caso, se prefiere que las líneas de fluido, y por lo tanto los flujos de fluido, se encuentren en una apertura estrecha dentro del conector "T" como flujos opuestos a aproximadamente 180º entre sí.
Tras el encuentro y mezcla de los flujos de solución en el ambiente de mezcla, se forman vesículas lipídicas de forma sustancialmente instantánea. Las vesículas lipídicas se forman cuando una solución orgánica que incluye un lípido disuelto y una solución acuosa (por ejemplo, tampón) se mezclan de forma simultánea y continua. De forma ventajosa, y sorprendentemente, mediante la mezcla de la solución acuosa con la solución lipídica orgánica, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas hasta producir de forma sustancialmente instantánea un liposoma. El mecanismo de bomba puede configurarse para proporcionar caudales equivalentes o diferentes de las soluciones lipídica y acuosa en el ambiente de mezcla que crea vesículas lipídicas en un ambiente de alto alcanol.
De forma ventajosa, y sorprendentemente, los procedimientos y aparato para mezclar la solución lipídica y la solución acuosa como se enseña en el presente documento posibilitan la encapsulación del agente terapéutico en el liposoma formado de forma sustancialmente coincidente con la formación del liposoma con una eficacia de encapsulación de hasta aproximadamente el 90%. Pueden usarse etapas de procesamiento adicionales como se analiza en el presente documento para refinar adicionalmente la eficacia de encapsulación y la concentración si se desea.
En un aspecto preferido, usando los procedimientos y aparato de la presente invención, es posible formar vesículas lipídicas de forma instantánea en un procedimiento continuo de dos etapas que es completamente escalable. En un aspecto, las vesículas lipídicas se forman con un diámetro medio de menos de aproximadamente 200 nm, lo que no requiere una reducción de tamaño adicional mediante procedimientos de alta energía tales como extrusión de membrana, sonicación o microfluidización.
En una realización, las vesículas lipídicas se forman cuando los lípidos disueltos en un disolvente orgánico (por ejemplo, etanol) se diluyen de una manera por etapas mediante su mezcla con una solución acuosa (por ejemplo, tampón). Esta dilución controlada por etapas se consigue mezclando las corrientes acuosa y lipídica entre sí en una apertura, tal como un conector T. Las concentraciones de lípidos, disolventes y soluto resultantes pueden mantenerse constantes a lo largo del procedimiento de formación de vesículas.
Una realización del proceso de la invención se muestra en la Figura 2. En un aspecto, usando los procedimientos de la presente invención, se prepara una vesícula mediante una dilución por etapas de dos fases sin gradientes. Por ejemplo, en la primera dilución por etapas, las vesículas se forman en un ambiente de alto alcanol (por ejemplo, etanol) (por ejemplo, de aproximadamente 30% a aproximadamente 50% v/v de etanol). Estas vesículas pueden estabilizarse después mediante la disminución de la concentración de alcanol (por ejemplo, etanol) hasta menos o igual a aproximadamente el 25% v/v, tal como de aproximadamente el 17% v/v a aproximadamente el 25% v/v, de una manera por etapas. En aspectos preferidos, con el agente terapéutico presente en la solución acuosa, o en a solución lipídica, el agente terapéutico se encapsula de forma coincidente con la formación del liposoma.
Como se muestra en la Figura 2, en una realización, los lípidos se disuelven inicialmente en un ambiente de alcanol de aproximadamente el 40% v/v a aproximadamente el 90% v/v, más preferentemente de aproximadamente el 65% v/v a aproximadamente el 90% v/v y más preferentemente de aproximadamente el 80% v/v a aproximadamente el 90% v/v (A). A continuación, la solución lipídica se diluye por etapas mediante su mezcla con una solución acuosa dando como resultado la formación de vesículas a una concentración de alcanol (por ejemplo, etanol) de entre aproximadamente 37,5 y 50% (B). Mediante la mezcla de la solución acuosa con solución lipídica orgánica la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas para producir un liposoma. Además, las vesículas lipídicas tales como SPLP (una partícula lipídica) pueden estabilizarse más mediante una dilución adicional por etapas de las vesículas a una concentración de alcanol de menos o igual a aproximadamente el 25%, preferentemente entre aproximadamente el 19 y el 25% (C).
En ciertos aspectos, para ambas diluciones por etapas (A\rightarrowB y B\rightarrowC), las concentraciones de etanol, lípido y soluto resultantes se mantienen a niveles constantes en el recipiente receptor. A estas concentraciones de etanol mayores después de la etapa de mezcla inicial, el reordenamiento de los monómeros lipídicos en bicapas transcurre de una manera más ordenada en comparación con vesículas que se forman por dilución a concentraciones de etanol menores. Sin quedar ligado a ninguna teoría particular, se cree que estas concentraciones de etanol mayores promueven la asociación de ácidos nucleicos con lípidos catiónicos en las bicapas. En un aspecto preferido, la encapsulación de ácido
nucleico se produce dentro de un intervalo de concentraciones de alcanol (por ejemplo etanol) por encima del 22%.
En ciertos aspectos, después de que se formen las vesículas lipídicas, estas se recogen en otro recipiente, por ejemplo, un recipiente de acero inoxidable. En un aspecto, las vesículas lipídicas se forman a una velocidad de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 ml/min. En un aspecto, después de la etapa de mezcla 130, la concentración de lípidos es de aproximadamente 1-10 mg/ml y la concentración de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) es de aproximadamente 0,1-3 mg/ml. En ciertos aspectos preferidos, la concentración de lípidos es de aproximadamente 7,0 mg/ml y la concentración de agente terapéutico (por ejemplo, ADN plasmídico) es de aproximadamente 0,4 mg/ml para proporcionar una relación ADN:lípido de aproximadamente 0,06 mg/mg. La concentración del tampón es de aproximadamente 1-3 mM y la concentración del alcanol es de aproximadamente el 45% v/v a aproximadamente el 90% v/v. En aspectos preferidos, la concentración de tampón es de aproximadamente 3 mM y la concentración de alcanol es de aproximadamente el 45% v/v a aproximadamente el 60% v/v.
3. Dilución de liposomas
Volviendo a la Figura 1, después de la etapa de mezclado 130, el grado de encapsulación de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) puede potenciarse si la suspensión de vesículas lipídicas se diluye opcionalmente 140 antes de la retirada del plásmido libre. Por ejemplo, antes de la etapa de dilución 140, si el atrapamiento del agente terapéutico es de aproximadamente 30-40%, puede aumentarse hasta aproximadamente 70-80% después de la incubación tras la etapa de dilución 140. En la etapa 140, la formulación de liposoma se diluye hasta de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 40%, preferentemente aproximadamente el 20% de alcanol, mediante la mezcla con una solución acuosa tal como un tampón (por ejemplo, 1:1 con tampón de citrato, NaCl 100 mM, pH 4,0). Dicha dilución adicional se consigue preferentemente con un tampón. En ciertos aspectos dicha dilución adicional de la solución de liposoma es una dilución continua por etapas. Después opcionalmente se permite que la muestra diluida se incube a temperatura ambiente.
4. Retirada del agente terapéutico libre
Después de la etapa opcional de dilución 140, aproximadamente el 70-80% o más del agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) está atrapado dentro de la vesícula lipídica (por ejemplo, SPLP) y el agente terapéutico libre puede retirarse de la formulación 150. En ciertos aspectos, se usa cromatografía de intercambio aniónico. Ventajosamente, el uso de una resina de intercambio aniónico da como resultado una capacidad de retirada de ácido nucleico dinámica alta, es capaz de un uso único, puede preesterilizarse y validarse y es completamente escalable. Además, el procedimiento preferentemente da como resultado la retirada de agente terapéutico libre (por ejemplo, ácido nucleico tal como aproximadamente el 25% del plásmido total). El volumen de muestra después de la cromatografía no cambia y las concentraciones de agente terapéutico (por ejemplo ácido nucleico) y de lípido son de aproximadamente 0,64 y 14,4 mg/ml, respectivamente. En este punto, la muestra puede ensayarse con respecto a agente terapéutico encapsulado y ajustarse a aproximadamente 0,55 mg/ml.
5. Concentración de la muestra
En ciertos casos, la solución de liposoma se concentra opcionalmente aproximadamente 2-6 veces, preferentemente aproximadamente 4 veces, usando por ejemplo, ultrafiltración 160 (por ejemplo, diálisis de flujo tangencial). En una realización, la muestra se transfiere a un depósito de suministro de un sistema de ultrafiltración y se retira el tampón. El tampón puede retirarse usando diversos procedimientos, tales como mediante ultrafiltración. En un aspecto, el tampón se retira usando cartuchos rellenos con fibras huecas de polisulfona, por ejemplo, que tienen diámetros internos de aproximadamente 0,5 mm y un punto de corte de peso molecular nominal (NMWC) de 30.000. Los liposomas se conservan dentro de las fibras huecas y se recirculan mientras que el disolvente y las moléculas pequeñas se retiran de la formulación mediante su paso a través de los poros de las fibras huecas. En este procedimiento, el filtrado se conoce como la solución de permeado. Tras la compleción de la etapa de concentración, las concentraciones de agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) y lípido aumentan hasta aproximadamente 0,90 y 15,14 mg/ml respectivamente. En una realización, la concentración de alcanol permanece sin cambios, pero la relación alcanol:lípido disminuye aproximadamente cuatro veces.
6. Retirada del alcanol
En una realización, la formulación concentrada se diafiltra después frente a aproximadamente 5-15 volúmenes, preferentemente aproximadamente 10 volúmenes, de solución acuosa (por ejemplo, tampón) (por ejemplo, tampón de citrato pH 4,0 (citrato 25 mM, NaCl 100 mM) para retirar el alcanol 170. La concentración de alcanol al final de la etapa 170 es menor de aproximadamente el 1%. Preferentemente, las concentraciones de lípido y agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) permanecen sin cambios y el nivel de atrapamiento de agente terapéutico también permanece constante.
7. Reemplazamiento del tampón
Después de que se haya retirado el alcanol, la solución acuosa (por ejemplo, tampón) se reemplaza después por diafiltración frente a otro tampón 180 (por ejemplo, frente a 10 volúmenes de solución salina de NaCl 150 mM con Hepes 10 mM pH 7,4). Preferentemente, la relación de concentraciones de lípido y agente terapéutico (por ejemplo, ácido nucleico) permanecen sin cambios y el nivel de atrapamiento de ácido nucleico es aproximadamente constante. En ciertos casos, el rendimiento de la muestra puede mejorarse mediante el aclarado del cartucho con tampón a aproximadamente 10% del volumen de la muestra concentrada. En ciertos aspectos, este aclarado se añade después a la muestra concentrada.
8. Filtración estéril
En ciertas realizaciones preferidas, puede realizarse opcionalmente una filtración estéril 190 de la muestra a concentraciones de lípido de aproximadamente 12-14 mg/ml. En ciertos aspectos, la filtración se realiza a presiones por debajo de aproximadamente 275,79 kPa, usando un filtro de cápsula y un recipiente dispensador presurizado con una camisa de calefacción. Calentar la muestra ligeramente puede mejorar la facilidad de filtración.
9. Llenado estéril
La etapa de llenado estéril 195 se realiza usando procedimientos similares a los de las formulaciones liposomales convencionales. Los procedimientos de la presente invención dan como resultado aproximadamente 50-60% del agente terapéutico de entrada (por ejemplo, ácido nucleico) en el producto final. En ciertos aspectos preferidos, la relación de agente terapéutico y lípido del producto final es de aproximadamente 0,04 a 0,07.
IV. Agentes terapéuticos
Las formulaciones de fármaco basadas en lípidos y composiciones de la presente invención son útiles para el suministro sistémico o local de agentes terapéuticos o agentes bioactivos y también son útiles en los ensayos de diagnóstico. El siguiente análisis de refiere generalmente a liposomas; sin embargo, resultará inmediatamente evidente para los expertos en la materia que este mismo análisis es completamente aplicable a los otros sistemas de suministro de fármaco de la presente invención.
Como se describe anteriormente, el agente terapéutico se incorpora preferentemente a la vesícula lipídica durante la formación de la vesícula. En una realización, los principios activos hidrófobos pueden incorporarse al disolvente orgánico con el lípido, mientras que los principios activos de ácido nucleico e hidrófilos pueden añadirse al componente acuoso. En ciertos casos, el agente terapéutico incluye uno de una proteína, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, ribozimas, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado, un antígeno y combinaciones de los mismos. En aspectos preferidos, el agente terapéutico es ácido nucleico. El ácido nucleico puede codificar una proteína tal como, por ejemplo, un virus de herpes simple, timidina quinasa (HSV-TK), una citosina desaminasa, una xantina-guaninfosforribosiltransferasa, una p53, una purina nucleósido fosforilasa, una carboxilesterasa, una desoxicitidina quinasa, una nitrorreductasa, una timidina fosforilasa o citocromo P450 2B1.
En ciertos aspectos, se incorpora un agente terapéutico al componente lipídico orgánico. En ciertos casos el agente terapéutico es lipófilo. Los agentes lipófilos adecuados incluyen taxol, derivados del taxol, incluyendo, por ejemplo, protax III y Paclitaxol, benzoporfirinas lipófilas, verteporfina el profármaco lipídico de foscarnet, 1-O-octadecil-sn-glicerol-3-fosfonoformato (ODG-PFA), dioleoil[3H]yododesoxiuridina ([3H]IDU-O12), péptidos inhibidores de la proteasa de VIH derivatizados con lípidos tales como iBOC-[L-Phe]-[D-beta-Nal]-Pip-[alpha-(OH)-Leu]-Val (7194) y otros fármacos o profármacos derivatizados con lípidos.
En otra realización, las vesículas lipídicas de la presente invención pueden cargarse con uno o más agentes terapéuticos después de la formación de la vesícula. En ciertos aspectos, los agentes terapéuticos que se administran usando la presente invención puede ser cualquiera de una diversidad de fármacos que se seleccionan para ser un tratamiento apropiado para la enfermedad a tratar. Con frecuencia el fármaco es un agente antineoplásico tal como vincristina, doxorrubicina, mitoxantrona, camptotecina, cisplatino, bleomicina, ciclofosfamida, metotrexato, estreptozocina y similares. Los agentes antitumorales especialmente preferidos incluyen, por ejemplo, actinomicina D, vincristina, vinblastina, cistina arabinósido, antraciclinas, agentes alquilantes, compuestos de platino, antimetabolitos y análogos de nucleósidos, tales como metotrexato análogos de purina y pirimidina. También puede ser deseable suministrar agentes antiinfecciosos a tejidos específicos mediante los presentes procedimientos. Las composiciones de la presente invención también pueden usarse para el suministro selectivo de otros fármacos incluyendo, sin limitación, anestesia local, por ejemplo, dibucaína y clorpromacina; bloqueadores beta-adrenérgicos, por ejemplo, propanolol, timolol y labetolol; agentes antihipertensores, por ejemplo, clonidina e hidralacina; antidepresivos, por ejemplo, imipramina, amitriptilina, y doxepim: anticonvulsivos, por ejemplo, fenitoína; antihistamínicos, por ejemplo, difenhidramina, clorfenirimina y prometacina; agentes antibióticos/antibacterianos, por ejemplo, gentamicina, criprofloxacina y cefoxitina; agentes antifúngicos, por ejemplo, miconazol, treconazol, econazol, isoconazol, butaconazol, clotrimazol, itraconazol, nistatina, naftifina y anfotericina B, agentes antiparasitarios, hormonas, antagonistas de hormonas, inmunomoduladores, antagonistas de neurotransmisores, agentes antiglaucoma, vitaminas, narcóticos y agentes de formación de imágenes.
V. Aparato
En otra realización, la presente invención proporciona un aparato para llevar a cabo los procedimientos de la presente invención. La Figura 3 es un ejemplo de un esquema representativo de un aparato 300 de acuerdo con una realización de la presente invención. Este esquema es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto habitual en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
En una realización, el aparato de la presente invención incluye dos depósitos, un depósito de solución acuosa 310 y un depósito de solución orgánica 320, para contener solución acuosa y solución orgánica, respectivamente. En ciertos aspectos, las formulaciones de vesícula lipídica se preparan rápidamente, a baja presión (por ejemplo, < 68,95 kilopascales) y el aparato y los procedimientos de la presente invención son completamente escalables (por ejemplo 0,5 ml-5000 l). A una escala de 1 l, las vesículas lipídicas se forman a aproximadamente 0,4-0,8 l/min. En ciertos aspectos preferidos, el aparato no usa mezcladores estáticos ni equipamiento de extrusión especializado.
La cámara de mezcla 340 es, en una realización, un conector T, que tiene espigas de manguera opcionales, en las que las líneas de fluido 334 y 336 impactan entre sí a aproximadamente 180. En aspectos preferidos, se preparan vesículas lipídicas de diámetros medios bien definidos y reproducibles usando caudales sustancialmente iguales de las líneas de flujo. En otros aspectos, las vesículas lipídicas de diámetros medios bien definidos y reproducibles se preparan cambiando el caudal de las líneas de fluido, por ejemplo, para asegurar una mezcla suficiente en algunos casos. En aspectos preferidos, la varianza entre los caudales es menor del 50%, más preferentemente menor del aproximadamente 25% e incluso más preferentemente menor de aproximadamente el 5%.
La Figura 13 muestra un conector T y la dinámica de flujo asociada de acuerdo con una realización. Los ejemplos de caudales y tasas de cizallamiento y números de Reynolds (medida de la turbulencia) resultantes se muestran en la Figura 14 y se analizan en más detalle a continuación en el Ejemplo 8. Al comparar con sistemas anteriores, la presente invención proporciona un flujo no turbulento y tasas de cizallamiento aumentadas a caudales mucho menores (y sustancialmente equivalentes). Por ejemplo, la presente invención proporciona ventajosamente un flujo no turbulento (N_{re} < 2000) en el ambiente de mezcla con una tasa de cizallamiento entre aproximadamente 500/s y aproximadamente 3300/s a un caudal (ambas líneas de flujo) de entre aproximadamente 0,075 y aproximadamente 0,3 l/min.
La mezcla de los dos componentes fluidos puede accionarse usando, por ejemplo, una bomba peristáltica 330, una bomba de desplazamiento positivo o mediante la presurización de los recipientes de lípido-etanol y tampón 320, 310. En un aspecto, se usa una bomba Watson-Marlow 505Di/L equipada con un cabezal de bomba 505L; pueden usarse tubos de silicona (por ejemplo, endurecidos con platino con DI de 3,2 mm, grosor de pared de 2,4 mm; disponible de Watson Marlon como el nº de catálogo 913A032024) para líneas de flujo en un conector T de polipropileno o de acero inoxidable (por ejemplo, con un DI de 3,18 mm). Las vesículas lipídicas se forman típicamente a temperatura ambiente, pero las vesículas lipídicas pueden formarse a temperaturas elevadas de acuerdo con la presente invención. A diferencia de otros enfoques existentes, no existen requisitos generales para la composición de tampón. De hecho, los procedimientos y aparato de la presente invención pueden formular una vesícula lipídica mediante la mezcla de lípido en un alcanol con agua. En ciertos aspectos, los procedimientos y aparato de la presente invención forman vesículas lipídicas que tienen menos de 200 nm de diámetro.
Cuando se preparan vesículas lipídicas que contienen ADN plasmídico (tales como SPLP), la relación de plásmido y lípido catiónico y contraiones puede optimizarse. Para formulaciones purificadas, se prefiere una encapsulación de ADN plasmídico ("ADNp") del 70-95% después de la mezcla y etapas de retirada de etanol. El nivel de encapsulación de ADNp puede aumentarse mediante la dilución de esta formulación de SPLP inicial. De forma sorprendente, los procedimientos y aparato de la presente invención proporcionan una eficacia de encapsulación tras la mezcla de las soluciones (con agente terapéutico en uno de los componentes de la solución) en el ambiente de mezcla de hasta aproximadamente el 90%. Puede realizarse una purificación adicional, por ejemplo, dilución, como se analiza en el presente documento.
En ciertos aspectos, el aparato de producción de liposomas 300 de la presente invención incluye adicionalmente un mecanismo de control de la temperatura (no mostrado) para controlar la temperatura de los depósitos 310 y 320. Preferentemente, el fluido del primer depósito 310 y el segundo depósito 320 fluye a la cámara de mezcla 340 simultáneamente en aperturas separadas. El aparato 300 incluye adicionalmente un depósito de recogida 350 corriente abajo de la cámara de mezcla para la recogida de liposoma. Además, en ciertos aspectos, el aparato 300 incluye adicionalmente recipientes de almacenamiento corriente arriba de uno o ambos de los depósitos 310 y 320. Además, uno o ambos de los depósitos 310 y 320 son preferentemente recipientes de acero inoxidable con envoltura equipados con un mezclador superior.
En otra realización, la presente invención proporciona un aparato que tiene un sistema de ultrafiltración para llevar a cabo los procedimientos de la presente invención. La Figura 4 es un ejemplo de un esquema representativo de un aparato 400 de acuerdo con una realización de la presente invención. Este esquema es meramente una ilustración y no debería limitar el alcance de las reivindicaciones del presente documento. Un experto en la materia reconocerá otras variaciones, modificaciones y alternativas.
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En ciertos aspectos el aparato 400 incluye una pluralidad de depósitos y está equipado con un sistema de ultrafiltración. Un depósito de solución acuosa 440 y un depósito de solución orgánica 430 tienen cada uno vesículas de preparación corriente arriba 433 y 425 respectivamente. En un aspecto, el recipiente de preparación de lípido 425 está equipado opcionalmente con un recipiente de almacenamiento de alcanol 421 en comunicación fluida con el
mismo.
Como se muestra en la Figura 4, el sistema de ultrafiltración incluye un recipiente de incubación 450 en comunicación fluida con un recipiente de recogida 455, una columna de intercambio 460 y un cartucho de ultrafiltración de flujo tangencial 465. El sistema de ultrafiltración opcionalmente incluye un recipiente de permeado 470. En ciertos aspectos, la ultrafiltración se usa para concentrar muestras de SPLP y retirar después el etanol de la formulación mediante reemplazo de tampón.
En una realización de funcionamiento, las SPLP diluidas se transfieren al depósito de suministro del sistema de ultrafiltración. La concentración se realiza mediante la retirada de tampón y etanol usando, por ejemplo, cartuchos de flujo cruzado 465 rellenados con fibras huecas de polisulfona que poseen diámetros internos de aproximadamente 0,5 mm y un punto de corte de peso molecular (MWCO) de 100.000. Las SPLP se conservan dentro de las fibras huecas y se recirculan, mientras que el etanol y los componentes de tampón se retiran de la formulación mediante su paso a través de los poros de estas fibras huecas. Este filtrado se conoce como la solución de permeado y se descarta mediante el recipiente 470. Después de que se concentren las SPLP a la concentración de plásmido deseada, el tampón en el que se suspenden las SPLP se retira por ultrafiltración y se reemplaza con un volumen igual del tampón final. La ultrafiltración puede reemplazarse con otros procedimientos tales como diálisis convencional.
VI. Ejemplos Ejemplo 1
Este ejemplo ilustra diversas propiedades físicas y químicas de las SPLP preparadas de acuerdo con una realización de la presente invención.
Tabla I: la cantidad de etanol, ADNp y contenido de lípidos en las etapas del procedimiento de acuerdo con la presente invención.
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TABLA I
1 
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La Tabla II expone la especificación plasmídica preparada de acuerdo con un aspecto de la presente invención.
TABLA II
3 
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La tabla III expone la especificación de SPLP preparada de acuerdo con un aspecto de la presente invención.
TABLA III
4
Ejemplo 2
Este ejemplo ilustra diversos parámetros de procedimiento en una realización de la presente invención.
En una realización de SPLP, la variación de la concentración inicial de etanol para la disolución de lípidos tuvo escaso impacto en el tamaño del vehículo o la encapsulación del ADN, siempre que la concentración de etanol fue lo suficientemente alta para asegurar que no precipitaban ninguno de los componentes lipídicos individuales (véase, Figura 5). Por debajo del 75% de etanol, los lípidos no eran solubles incluso calentando a 55ºC. Los lípidos que se disolvieron en etanol al 75% a 55ºC formaron SPLP con diámetros medios mayores y menor encapsulación de ADN (véase, Figura 5).
La relación inicial de ADN y lípido ha variado de 0,048 a 0,081 mg de ADN: mg de formulación lipídica y se formaron vesículas de tamaño similar con un 77-90% de encapsulación de ADN.
Se han preparado SPLP con un intervalo de pH de aproximadamente 3,5 a 6 para la etapa de mezcla inicial y todas las formulaciones poseían diámetros de partícula medios de menos de 150 nm y eficacias de encapsulación de ADN de más del 50% (véase, Figura 6). A pH mayor, las vesículas también se preparan con tamaños de vesículas similares, pero con eficacias de encapsulación de ADN menores.
En ciertos aspectos, los diámetros de vesícula medios de vesículas vacías preparadas usando un procedimiento de la presente invención dependen de la concentración salina del tampón de dilución (por ejemplo, vesículas de esfingomielina:colesterol, vesículas de EPC:EPG). La variación de las condiciones iónicas en el tampón influye en la tendencia de un lípido dado a disponerse en bicapas y vesículas.
Durante el desarrollo de una formulación de SPLP, se descubrió que tanto el pH como la concentración salina del tampón de dilución tenían un efecto significativo en la eficacia de encapsulación de ADN. De forma natural, los tampones de dilución con valores de pH menores que la pKa para el componente lipídico catiónico (DODMA) dio valores de encapsulación mayores (Figura 7). De forma interesante, una concentración salina final de 150 mM también era óptima para encapsulación de ADN (Figura 8).
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Ejemplo 3
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para realizar vesículas de EPC y POPC.
Las vesículas de POPC son útiles como vesículas "sumidero" para ensayos de fusión de membrana. En particular, pueden usarse en exceso para retirar lípidos de PEG de otros liposomas, desestabilizando de este modo los otros liposomas y permitiéndoles fusionarse con la membrana deseada. Las vesículas de EPC son útiles para retirar colesterol de placas arteriales.
Las vesículas se prepararon con una concentración de etanol inicial del 80% y una concentración de lípidos de 10 mM. Después de mezclar y diluir, la concentración de etanol fue del 20% y la concentración de lípidos fue de 5 mM. La formulación de EPC se mezcló y diluyó con PBS y el POPC se mezcló y diluyó con HBS. Ambas preparaciones se concentraron y se retiró el etanol usando un cartucho de ultrafiltración, es decir, EPC contra PBS, y el POPC contra HBS. Ambas preparaciones se filtraron de forma estéril usando filtros de jeringa de 0,22 \mum.
TABLA IV Datos de vesículas de EPC y POPC
6
Ejemplo 4
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas de EPC/colesterol con un gradiente de pH.
Las vesículas lipídicas unilamelares (LUV) que comprenden EPC y colesterol se han preparado tradicionalmente mediante películas lipídicas hidratantes para formar vesículas lipídicas multilamelares (MLV) que se han sometido a reducción de tamaño de vesícula usando extrusión de alta presión. Se conoce bien que estas vesículas pueden prepararse con interiores acuosos ácidos y un gradiente pH a través de la bicapa lipídica. Se ha demostrado que las moléculas lipófilas débilmente básicas se acumulan en estas vesículas a concentraciones internas altas. Diversos liposomas cargados con fármaco que están actualmente en las últimas etapas de los ensayos clínicos utilizan este enfoque (por ejemplo, Myocet: vesículas cargadas con doxorrubicina).
En un aspecto, se usó safranina para determinar si dicho gradiente de pH estaba presente. La safranina es un colorante lipófilo básico que se ha usado para estudiar gradientes de membrana de pH.
Se prepararon vesículas de EPC/Col usando los presentes procedimientos y aparato a una concentración inicial de etanol del 80% y concentración de lípidos 10 mM (véase Figura 9A-B). Después de la mezcla y dilución, la concentración de etanol fue del 20% y la concentración de lípidos fue de 5 mM. Se prepararon tres formulaciones diferentes:
1. Mezclada y diluida con PBS (control).
2. Mezclada y diluida con citrato 150 mM (la concentración final de citrato es 94 mM).
3. Mezclada y diluida con citrato 300 mM (la concentración final de citrato es 188 mM).
Después de la mezcla y dilución, cada muestra se concentró y se retiró el etanol usando ultrafiltración. Después de la etapa de concentración, cada muestra se diafiltró frente a su tampón de dilución para asegurar que el tampón de citrato ácido presente dentro de las vesículas no se filtrara durante la retirada del etanol. Todas las muestras se formularon finalmente con un tampón externo de solución salina tamponada con fosfato a pH 7,4. Después de la filtración estéril, los diámetros de vesícula medios de estas formulaciones fueron muy similares (90-92 nm) y poseían una desviación típica y valores de Chi cuadrado aceptables (Tabla V).
Después de la diálisis, las vesículas se ensayaron con respecto a concentración de lípidos usando el ensayo de colesterol Infinity. Después se prepararon soluciones que contenían lípido 5 mM y safranina 0,2 mM obtenidos de una solución madre 10 mM filtrada. Las soluciones se incubaron a 37ºC durante 30 minutos. Después se pasó una alícuota de 500 \mul de cada solución incubada por una columna de filtración de gel de Sepharose CL4B de 2 ml. El colorante libre se separó de las vesículas y las fracciones que contenían lípidos se recogieron y analizaron. La concentración de safranina se determinó mediante la medida de la fluorescencia de las muestras a excitación a 516 nm y emisión a 585 nm.
Las vesículas con interiores ácidos acumularon safranina, mostrando las vesículas que contenían citrato 94 nM la mayor encapsulación. Por el contrario, las vesículas control con PBS encapsularon muy poca safranina. Las vesículas con citrato 188 mM también encapsularon algo de safranina, pero no tanta como las vesículas que contenían citrato 94 mM (véase Figura 10).
TABLA V Vesículas de EPC/Col cargadas con Safranina
7 
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Ejemplo 5
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas de esfingomielina/colesterol.
Las vesículas de esfingomielina/colesterol son deseables debido a su durabilidad y fuerza. Estas vesículas también pueden usarse para encapsular fármacos usando un gradiente de pH. Sin embargo, estas LUV han necesitado tradicionalmente formarse a temperaturas mayores de 65ºC y usando extrusión de alta presión. Para formar estas vesículas con el lipomixer, deberían tomarse en cuenta varias variables, tales como concentración de etanol, concentración de lípidos y la concentración salina del tampón de mezcla y dilución.
Las vesículas se formularon en una relación de 55/45 SM/Col (mol:mol), mientras que la concentración inicial de etanol después de mezclar variaba de 50 a 25%. Los tampones de dilución ensayados incluyeron PBS, agua, citrato 10 mM, citrato 150 mM, y citrato 300 mM. Las concentraciones de lípido finales variaron de 0,5 a 2,5 mM. Las vesículas formuladas en presencia de sal (es decir, usando tampones) fueron de 200-500 nm, lo que indicaba una MLV. Se dializaron alícuotas de estas muestras frente a citrato 150 mM y agua en un intento de retirar el etanol y estabilizar las vesículas.
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Ejemplo 6
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención para preparar vesículas que encapsulan de forma pasiva moléculas pequeñas tales como calceína.
La calceína es un colorante fluorescente que se autoinactiva a concentraciones mayores de 10 mM. Pueden usarse vesículas que encapsulan calceína en ensayos de fusión para determinar si las vesículas se han fusionado entre sí. La fusión disminuye la concentración de calceína interna provocando que emita fluorescencia. Las vesículas se prepararon con DSPC:COL:PEG-DLG:DODMA (20:55:10:15) a una concentración de etanol del 19% y lípido 2 mM después de mezcla y dilución (véase la Figura 11). Los lípidos disueltos en etanol se mezclaron con una solución que contenía citrato 20 mM y calceína 75 mM y después se diluyeron las vesículas resultantes con NaCl 300 mM y calceína 37,5 mM. La calceína se obtuvo a partir de una solución madre 100 mM. La concentración de calceína final en las vesículas fue de 37,5 mM.
Después de mezcla y dilución las vesículas se dializaron durante una noche frente a HBS para retirar el colorante no encapsulado. Esto no tuvo éxito en la retirada de todo el colorante libre, de modo que las vesículas se pasaron a través de una columna de filtración en gel. La fracción de lípido se recogió y se analizó. Se descubrió que la calceína de hecho se inactivaba a la concentración dentro de las vesículas. Esto es una clara demostración de que los procedimientos y aparato de la presente invención pueden usarse para preparar vesículas que encapsulan de forma pasiva moléculas pequeñas.
TABLA VI Vesículas con Calceína encapsulada
8 
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Ejemplo 7
Este ejemplo ilustra el uso de un procedimiento de la presente invención frente a procedimientos de la técnica anterior.
En referencia a la Figura 12, los lípidos se disolvieron en etanol al 90% (A) y se diluyeron: por etapas usando el aparato de la presente invención hasta etanol al 45% (B) y 22,5% (C), representado por la línea continua ("LipoMixer"); o se añadieron en gotas en el tampón con agitación hasta una concentración de etanol final del 22,5% (C), representado por la línea punteada. Incluso aunque las concentraciones de etanol finales para ambas preparaciones era la misma, la SPLP formada de acuerdo con los procedimientos de la presente invención tenía una encapsulación de ADN del 85% mientras que las vesículas preparadas por goteo de etanol solo tenían una encapsulación de ADN del 5%.
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Ejemplo 8
Este ejemplo ilustra diversas condiciones y propiedades para formar liposomas de acuerdo con la presente invención. Debería apreciarse que pueden usarse otras condiciones y parámetros y que los usados en el presente documento son meramente ejemplares.
En referencia a las Figuras 13 y 14, se modelan diversos caudales (sustancialmente equivalentes para flujos de solución lipídica y acuosa) y se analizan para mostrar diversos parámetros tales como tasa de cizallamiento y número de Reynolds (N_{re}) y tamaño de vesícula. Los parámetros y condiciones se determinaron en la salida del conector T corrigiendo con respecto a la densidad y viscosidad de la solución de etanol resultante. No se ha explicado la turbulencia adicional como resultado del encuentro de las dos corrientes entre sí en oposición, así como tampoco la turbulencia adicional como resultado de que las corrientes tengan que doblar una esquina de 90º.

Claims (44)

1. Un procedimiento para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho procedimiento:
proporcionar una solución acuosa en un primer depósito;
proporcionar una solución lipídica orgánica en un segundo depósito, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico;
mezclar dicha solución acuosa con dicha solución lipídica orgánica, mezclándose dicha solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa de modo que se produzca de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica que encapsula el producto terapéutico; caracterizado porque
la mezcla incluye introducir la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en un ambiente de mezcla a caudales sustancialmente iguales y el ambiente de mezcla incluye un conector T, introduciéndose la solución acuosa y la solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
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2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la vesícula lipídica es un liposoma.
3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene una concentración de aproximadamente el 20% v/v a aproximadamente el 50% v/v de disolvente orgánico.
4. El procedimiento de la reivindicación 3, que comprende adicionalmente diluir adicionalmente la solución de liposoma.
5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicha dilución adicional es con un tampón.
6. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicha dilución adicional de la solución de liposoma es una dilución continua por etapas.
7. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que la solución de liposoma tiene una concentración de menos de aproximadamente el 25% v/v de disolvente orgánico después de la dilución.
8. El procedimiento de la reivindicación 3, que comprende adicionalmente retirar dicho disolvente orgánico asociado con dicha solución de liposoma para formar una forma final.
9. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución lipídica orgánica comprende un disolvente orgánico.
10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que dicho disolvente orgánico es un alcohol inferior.
11. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que dicho disolvente orgánico comprende agua.
12. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende una solución orgánica.
13. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende un tampón.
14. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha vesícula lipídica es de menos de aproximadamente 200 nm de diámetro.
15. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha vesícula lipídica se forma a una velocidad de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 ml/min.
16. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución acuosa comprende el producto terapéutico.
17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho producto terapéutico se selecciona del grupo que consiste en una proteína, un plásmido, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado y un antígeno.
18. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que dicho producto terapéutico es un ácido nucleico.
19. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que el producto terapéutico es una especie cargada.
20. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha solución lipídica orgánica comprende el producto terapéutico.
21. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que el producto terapéutico es lipófilo.
22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el producto lipófilo se selecciona del grupo que consiste en protax III, Paclitaxol, taxol, derivados de taxol y profármacos derivatizados con lípidos.
23. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que se controla la temperatura de uno o ambos del primer y el segundo depósitos.
24. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que uno o ambos del primer y el segundo depósitos incluyen un recipiente de acero inoxidable con envoltura con un mezclador superior.
25. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que durante la mezcla la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas en presencia de la solución acuosa.
26. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene un pH de aproximadamente 3,5 a aproximadamente 8,0.
27. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho ácido nucleico codifica una proteína seleccionada del grupo que consiste en una timidina quinasa del virus del herpes simple (HSV-TK), una citosina desaminasa, una xantina-guaninfosforribosil transferasa, una p53, una purina nucleósido fosforilasa, una carboxilesterasa, una desoxicitidina quinasa, una nitrorreductasa, una timidina fosforilasa, y un citocromo P450 2B1.
28. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene una eficacia de encapsulación de ácido nucleico de más de aproximadamente el 50%.
29. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene una eficacia de encapsulación de ácido nucleico de entre aproximadamente el 80% y aproximadamente el 90%.
30. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma tiene un diámetro de aproximadamente 150 nm o menos.
31. El procedimiento de la reivindicación 18, en el que dicho liposoma está en una solución que tiene una concentración salina de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 200 mM.
32. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, comprendiendo dicho procedimiento adicionalmente:
proporcionar dicha solución lipídica orgánica que tiene una concentración de aproximadamente el 70% v/v a aproximadamente el 100% v/v de disolvente orgánico en el segundo depósito.
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33. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que durante la mezcla la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continua por etapas hasta una concentración de aproximadamente el 35% v/v a aproximadamente el 50% v/v de disolvente orgánico.
34. El procedimiento de la reivindicación 32, en el que el producto terapéutico es uno de una especie aniónica y una especie catiónica.
35. Un aparato para producir una vesícula lipídica que encapsula un producto terapéutico, comprendiendo dicho aparato:
un primer depósito para contener una solución acuosa;
un segundo depósito para contener una solución lipídica orgánica, en el que una de la solución acuosa y la solución lipídica orgánica incluye un producto terapéutico; y
un mecanismo de bomba configurado para bombear dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en una región de mezcla a caudales sustancialmente iguales;
mezclándose la solución lipídica orgánica con dicha solución acuosa en la región de mezcla para formar de forma sustancialmente instantánea una vesícula lipídica con producto terapéutico encapsulado; caracterizado por que
la región de mezcla incluye un conector T, introduciéndose dicha solución acuosa y dicha solución lipídica orgánica en el conector T como flujos opuestos a sustancialmente 180º entre sí.
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36. El aparato de la reivindicación 35, en el que la vesícula lipídica es un liposoma.
37. El aparato de la reivindicación 36, que incluye adicionalmente un recipiente receptor para recibir el liposoma con producto terapéutico encapsulado.
38. El aparato de la reivindicación 36, en el que el liposoma está en una solución que tiene una primera concentración, incluyendo adicionalmente el aparato un sistema de filtración acoplado al recipiente receptor, configurándose dicho sistema de filtración para aumentar la concentración de la solución de liposoma con producto terapéutico encapsulado hasta una segunda concentración.
39. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el producto terapéutico se selecciona del grupo que consiste una proteína, un plásmido, un ácido nucleico, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, ARNt, ARNnp, ARNip, ADN precondensado y un antígeno.
40. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el mecanismo de bomba incluye una bomba peristáltica.
41. El aparato de la reivindicación 36, en el que durante la mezcla, la solución lipídica orgánica experimenta una dilución continúa por etapas en presencia de la solución acuosa.
42. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que la solución lipídica orgánica incluye el producto terapéutico y en el que el producto terapéutico es lipófilo.
43. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que la solución acuosa incluye el producto terapéutico.
44. El aparato de la reivindicación 35 o 36, en el que el producto terapéutico es uno de una especie aniónica y una especie catiónica.
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Families Citing this family (544)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
US7718189B2 (en) 2002-10-29 2010-05-18 Transave, Inc. Sustained release of antiinfectives
CA2532228C (en) * 2003-07-16 2017-02-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
US9198645B2 (en) * 2003-11-26 2015-12-01 The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce of The National Institute of Standards and Technology Controlled vesicle self-assembly in continuous two phase flow microfluidic channels
LT3173073T (lt) 2004-05-03 2025-01-10 Ipsen Biopharm Ltd. Liposomos, skirtos vaistų pristatymui
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain
US8715591B2 (en) * 2004-07-21 2014-05-06 The United States of America, as represented by the Secretary of Commerce, The National Institute of Standards and Technology Microfluidic apparatus to control liposome formation
EP1802277B1 (de) * 2004-10-18 2010-01-13 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Liposomale zusammensetzung einen wirkstoff zur relaxierung glatter muskulatur enthaltend, die herstellung dieser zusammensetzung und deren therapeutische verwendung
US9393315B2 (en) 2011-06-08 2016-07-19 Nitto Denko Corporation Compounds for targeting drug delivery and enhancing siRNA activity
JP2006248978A (ja) * 2005-03-10 2006-09-21 Mebiopharm Co Ltd 新規なリポソーム製剤
CA2605068A1 (en) 2005-04-15 2006-10-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Delivery of sirna by neutral lipid compositions
CN101267805A (zh) * 2005-07-27 2008-09-17 普洛体维生物治疗公司 制造脂质体的系统和方法
EP1934348B1 (en) * 2005-10-11 2018-05-02 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Compositions for silencing the expression of vdac1 and uses thereof
CN101346393B (zh) 2005-11-02 2015-07-22 普洛体维生物治疗公司 修饰的siRNA分子及其应用
EP3067047B1 (en) 2005-12-08 2022-04-20 Insmed Incorporated Lipid-based compositions of antiinfectives for treating pulmonary infections
EP2012750B1 (en) * 2006-04-06 2018-02-21 Insmed Incorporated Methods for coacervation induced liposomal encapsulation and formulations thereof
KR101128639B1 (ko) * 2006-11-17 2012-03-26 현대중공업 주식회사 휠식 건설기계의 핸들 및 조이스틱 조향을 위한유압제어장치
EP2117304A4 (en) * 2007-02-07 2011-08-24 Gradalis Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING SIALIC ACID PRODUCTION AND TREATMENT OF HEREDITARY INCLUSION BODY MYOPATHY
WO2008109432A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Therapeutic targeting of interleukins using sirna in neutral liposomes
WO2008137717A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Transave, Inc. Compositions of multicationic drugs for reducing interactions with polyanionic biomolecules and methods and uses thereof
US9114081B2 (en) 2007-05-07 2015-08-25 Insmed Incorporated Methods of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9119783B2 (en) 2007-05-07 2015-09-01 Insmed Incorporated Method of treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
US9333214B2 (en) 2007-05-07 2016-05-10 Insmed Incorporated Method for treating pulmonary disorders with liposomal amikacin formulations
EP3494964B1 (en) * 2007-05-14 2021-04-07 Konica Minolta Holdings, Inc. Liposome and method for producing liposome
WO2009046220A2 (en) * 2007-10-02 2009-04-09 Mdrna, Inc. Lipopeptides for delivery of nucleic acids
ES2535419T3 (es) 2007-12-27 2015-05-11 Protiva Biotherapeutics Inc. Silenciamiento de expresión de quinasa tipo polo usando ARN interferente
EP2281041B1 (en) 2008-04-15 2014-07-02 Protiva Biotherapeutics Inc. Silencing of csn5 gene expression using interfering rna
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
US8900627B2 (en) * 2008-06-06 2014-12-02 Mirna Therapeutics, Inc. Compositions for the in vivo delivery of RNAi agents
CA2740000C (en) 2008-10-09 2017-12-12 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
JP2012505913A (ja) * 2008-10-16 2012-03-08 マリーナ バイオテック，インコーポレイテッド 遺伝子発現を抑制する治療におけるリポソームによる効率的な送達のプロセスおよび組成物
JP2012507565A (ja) 2008-10-30 2012-03-29 グオ・ペイシュエン Ｄｎａのシークエンシング及び他の用途のための、膜に組み込まれたウイルスｄｎａパッケージングモータタンパク質コネクタバイオセンサ
CN111808084A (zh) 2008-11-10 2020-10-23 阿布特斯生物制药公司 用于递送治疗剂的新型脂质和组合物
WO2011000107A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US8716464B2 (en) 2009-07-20 2014-05-06 Thomas W. Geisbert Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression
US9222086B2 (en) 2009-09-23 2015-12-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer
CN107028886A (zh) 2009-11-04 2017-08-11 不列颠哥伦比亚大学 含有核酸的脂质粒子及相关的方法
ES2691276T3 (es) * 2009-11-30 2018-11-26 Shiseido Company, Ltd. Polimerosoma y procedimiento para su producción
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
EP3000885B1 (en) 2009-12-18 2018-07-25 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Organic compositions to treat hsf1-related diseases
US20120296403A1 (en) 2010-02-10 2012-11-22 Novartis Ag Methods and compounds for muscle growth
WO2011120023A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting survivin gene expression uses thereof
US20130037977A1 (en) 2010-04-08 2013-02-14 Paul A. Burke Preparation of Lipid Nanoparticles
WO2011133584A2 (en) 2010-04-19 2011-10-27 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting hras gene expression and uses thereof
DK2561077T3 (en) 2010-04-23 2016-08-01 Arrowhead Res Corp Organic compositions for the treatment of beta-ENaC-related diseases
WO2011139843A2 (en) 2010-04-28 2011-11-10 Marina Biotech, Inc. Multi-sirna compositions for reducing gene expression
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
WO2011141704A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc Novel cyclic cationic lipids and methods of use
KR20190039347A (ko) 2010-06-03 2019-04-10 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 활성제의 전달을 위한 생분해성 지질
WO2012006101A2 (en) 2010-06-28 2012-01-12 The General Hospital Corporation Blood substitutes and uses thereof
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
EP2591114B1 (en) 2010-07-06 2016-06-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunisation of large mammals with low doses of rna
MX342608B (es) 2010-07-06 2016-10-06 Novartis Ag * Particulas de suministro similares a viriones para moleculas de arn de autorreplicacion.
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
LT4226941T (lt) 2010-08-31 2025-01-10 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegilintos liposomos, skirtos imunogeną koduojančios rnr pristatymui
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012051211A2 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Novartis Ag Antigen delivery platforms
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
JP5952197B2 (ja) * 2011-01-19 2016-07-13 協和発酵キリン株式会社 標的遺伝子の発現を抑制する組成物
CA2864394C (en) 2011-03-02 2021-10-19 Jack Roth A method of predicting a response to a tusc2 therapy
BR112013024663A2 (pt) * 2011-03-25 2016-12-20 Terumo Corp composição de lipossomas de liberação controlada de longa duração e método para produção da mesma
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US9011903B2 (en) 2011-06-08 2015-04-21 Nitto Denko Corporation Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
US10196637B2 (en) 2011-06-08 2019-02-05 Nitto Denko Corporation Retinoid-lipid drug carrier
EP2729165B1 (en) 2011-07-06 2017-11-08 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
MX366055B (es) 2011-08-31 2019-06-26 Novartis Ag Liposomas pegilados para admistracion de acido ribonucleico (arn) que codifica para inmunogeno.
CA3185394A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Organic compositions to treat hsf1-related diseases
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
DE19216461T1 (de) 2011-10-03 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte nukleoside, nukleotide und nukleinsäuren und verwendungen davon
WO2013059922A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 The University Of British Columbia Limit size lipid nanoparticles and related methods
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
EP3485875A1 (en) * 2011-11-04 2019-05-22 Nitto Denko Corporation Single use system for sterelily producing lipid-nucleic acid particles
WO2013086373A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
WO2013086354A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
AU2012347605B2 (en) 2011-12-07 2017-09-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US9035039B2 (en) 2011-12-22 2015-05-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing SMAD4
EP2802658A2 (en) 2012-01-09 2014-11-19 Novartis AG Rnai agents to treat beta-catenin related diseases
EP2817287B1 (en) 2012-02-24 2018-10-03 Arbutus Biopharma Corporation Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
BR112014024131A2 (pt) 2012-03-29 2017-07-25 Shire Human Genetic Therapies lipídios catiônicos ionizáveis
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
WO2013151665A2 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
WO2013163628A2 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Duke University Genetic correction of mutated genes
EA201492004A1 (ru) 2012-05-02 2015-08-31 Новартис Аг Органические композиции для лечения kras-ассоциированных заболеваний
AU2013256008B2 (en) 2012-05-04 2016-02-25 The Johns Hopkins University Lipid-based drug carriers for rapid penetration through mucus linings
KR101493961B1 (ko) * 2012-05-16 2015-02-17 한국생명공학연구원 압출공정 없이 핵산 함유 나노 리포솜을 제조하는 방법
PL2852391T3 (pl) 2012-05-21 2022-04-11 Insmed Incorporated Układy do leczenia infekcji płuc
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
EP2858679B2 (en) 2012-06-08 2024-06-05 Translate Bio, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
EP2874605A1 (en) 2012-07-18 2015-05-27 Onyx Therapeutics, Inc. Liposomal compositions of epoxyketone-based proteasome inhibitors
CN110464709A (zh) 2012-08-10 2019-11-19 德克萨斯州大学系统董事会 用于治疗中风的神经保护性脂质体组合物和方法
JPWO2014046191A1 (ja) 2012-09-21 2016-08-18 テルモ株式会社 局所麻酔薬持続徐放性リポソーム製剤
PL2922554T3 (pl) 2012-11-26 2022-06-20 Modernatx, Inc. Na zmodyfikowany na końcach
US10124066B2 (en) 2012-11-29 2018-11-13 Insmed Incorporated Stabilized vancomycin formulations
EP3031921B1 (en) 2012-12-12 2025-03-12 The Broad Institute, Inc. Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications
CN105247051A (zh) 2013-02-28 2016-01-13 箭头研究公司 治疗epas1相关疾病的有机组合物
BR112015022855A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-07 Shire Human Genetic Therapies composições e método para produção de um anticorpo in vitro
JP6586075B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-02 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
CN105142614A (zh) 2013-03-14 2015-12-09 迪克纳制药公司 用于配制阴离子试剂的方法
RS57739B1 (sr) 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP3388834B1 (en) 2013-03-15 2020-04-15 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
CN105143456A (zh) 2013-03-15 2015-12-09 不列颠哥伦比亚大学 用于转染的脂质纳米粒子和相关方法
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US9693958B2 (en) 2013-03-15 2017-07-04 Cureport, Inc. Methods and devices for preparation of lipid nanoparticles
US9828582B2 (en) 2013-03-19 2017-11-28 Duke University Compositions and methods for the induction and tuning of gene expression
CN105683379A (zh) 2013-06-17 2016-06-15 布罗德研究所有限公司 用于对有丝分裂后细胞的疾病和障碍进行靶向和建模的系统、方法和组合物的递送、工程化和优化
MX374532B (es) 2013-06-17 2025-03-06 Broad Inst Inc Suministro, uso y aplicaciones terapéuticas de los sistemas y composiciones crispr-cas, para actuar sobre trastornos y enfermedades utilizando componentes víricos.
RU2716420C2 (ru) 2013-06-17 2020-03-11 Те Брод Инститьют Инк. Доставка и применение систем crispr-cas, векторов и композиций для целенаправленного воздействия и терапии в печени
JP6620093B2 (ja) 2013-07-23 2019-12-11 アービュートゥス バイオファーマ コーポレイションＡｒｂｕｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法
US10195291B2 (en) 2013-09-24 2019-02-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the manufacture of lipid nanoparticles
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051135A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag Organic compositions to treat hepcidin-related diseases
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
CN106413811A (zh) 2013-10-22 2017-02-15 夏尔人类遗传性治疗公司 精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的mrna疗法
ES3032935T3 (en) 2013-10-22 2025-07-29 Translate Bio Inc Lipid formulations for delivery of messenger rna
AU2014340149B2 (en) 2013-10-22 2020-12-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. CNS delivery of mRNA and uses thereof
US9636034B2 (en) 2013-10-23 2017-05-02 Verily Life Sciences Llc Non-invasive analyte detection system with modulation source
US10542918B2 (en) 2013-10-23 2020-01-28 Verily Life Sciences Llc Modulation of a response signal to distinguish between analyte and background signals
EP3470089A1 (en) 2013-12-12 2019-04-17 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using particle delivery components
EP3080259B1 (en) 2013-12-12 2023-02-01 The Broad Institute, Inc. Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation
JP7103750B2 (ja) 2013-12-12 2022-07-20 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド ゲノム編集のためのＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系及び組成物の送達、使用及び治療適用
SG10201804975PA (en) 2013-12-12 2018-07-30 Broad Inst Inc Delivery, Use and Therapeutic Applications of the Crispr-Cas Systems and Compositions for HBV and Viral Diseases and Disorders
JP6793547B2 (ja) 2013-12-12 2020-12-02 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 最適化機能ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系による配列操作のための系、方法および組成物
JP6712948B2 (ja) 2013-12-12 2020-06-24 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 組成物、及びヌクレオチドリピート障害におけるｃｒｉｓｐｒ−ｃａｓ系の使用方法
AR094658A1 (es) * 2014-01-14 2015-08-19 Fast Rehydration Llc Formulación de sales de rehidratación liposomal
US10751283B2 (en) 2014-01-14 2020-08-25 Capability Building, Inc. Liposomal rehydration salt formulation and associated methods of use
KR102396026B1 (ko) * 2014-01-21 2022-05-09 안자리움 바이오사이언시스 아게 하이브리도좀, 이를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법 및 이의 용도
PL4023249T3 (pl) 2014-04-23 2025-03-10 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
US9850269B2 (en) 2014-04-25 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
LT3466432T (lt) 2014-05-15 2020-12-28 Insmed Incorporated Būdai, skirti plaučių netuberkuliozinėms mikobakterinėms infekcijoms gydyti
JP6557722B2 (ja) 2014-05-30 2019-08-07 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 核酸の送達のための生分解性脂質
CN106536056B (zh) 2014-06-13 2021-07-16 儿童医学中心公司 分离线粒体的产品和方法
KR102559979B1 (ko) 2014-06-24 2023-07-25 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 핵산의 전달용 입체화학적으로 풍부한 조성물
HUE060907T2 (hu) 2014-06-25 2023-04-28 Acuitas Therapeutics Inc Új lipidek és lipid nanorészecske formulációk nukleinsavak bevitelére
BR112016030852A2 (pt) 2014-07-02 2018-01-16 Shire Human Genetic Therapies encapsulação de rna mensageiro
EP3736334A1 (en) 2014-07-16 2020-11-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions to treat apoc3-related diseases
WO2016028682A1 (en) 2014-08-17 2016-02-25 The Broad Institute Inc. Genome editing using cas9 nickases
US9765333B2 (en) 2014-08-21 2017-09-19 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing marburg virus gene expression
EP3191592A1 (en) 2014-09-11 2017-07-19 Novartis AG Inhibition of prmt5 to treat mtap-deficiency-related diseases
WO2016049163A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Use and production of chd8+/- transgenic animals with behavioral phenotypes characteristic of autism spectrum disorder
WO2016045732A1 (en) * 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
WO2016049258A2 (en) 2014-09-25 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Functional screening with optimized functional crispr-cas systems
EP3201338B1 (en) 2014-10-02 2021-11-03 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
WO2016089883A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 Novartis Ag Compositions and methods for diagnosis and treatment of prostate cancer
JP6767976B2 (ja) 2014-12-05 2020-10-14 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 関節疾患の治療のためのメッセンジャーｒｎａ治療法
WO2016094872A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Dead guides for crispr transcription factors
EP3889260A1 (en) 2014-12-12 2021-10-06 The Broad Institute, Inc. Protected guide rnas (pgrnas)
WO2016094880A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs)
WO2016094874A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems
EP3234192B1 (en) 2014-12-19 2021-07-14 The Broad Institute, Inc. Unbiased identification of double-strand breaks and genomic rearrangement by genome-wide insert capture sequencing
WO2016106236A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 The Broad Institute Inc. Rna-targeting system
CA2970370A1 (en) 2014-12-24 2016-06-30 Massachusetts Institute Of Technology Crispr having or associated with destabilization domains
US9861710B1 (en) 2015-01-16 2018-01-09 Verily Life Sciences Llc Composite particles, methods, and in vivo diagnostic system
WO2016130600A2 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Duke University Compositions and methods for epigenome editing
WO2016149508A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for pompe disease
CA2977827C (en) 2015-03-19 2023-10-17 University Of Connecticut Systems and methods for continuous manufacturing of liposomal drug formulations
EP3275448B1 (en) 2015-03-24 2025-10-29 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid-containing lipid nanoparticles
US11298318B2 (en) * 2015-04-13 2022-04-12 Fountain Technologies International, Llc One-step method for production of ultra-small lipid structures
EP4353257A3 (en) 2015-04-13 2024-08-07 CureVac Manufacturing GmbH Method for producing rna compositions
WO2016197132A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
EP3302525A2 (en) 2015-06-05 2018-04-11 Novartis AG Methods and compositions for diagnosing, treating, and monitoring treatment of shank3 deficiency associated disorders
WO2016205749A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
TWI906646B (zh) 2015-06-18 2025-12-01 美商博得學院股份有限公司 降低脫靶效應的ｃｒｉｓｐｒ酶突變
WO2016205745A2 (en) 2015-06-18 2016-12-22 The Broad Institute Inc. Cell sorting
AU2016279077A1 (en) 2015-06-18 2019-03-28 Omar O. Abudayyeh Novel CRISPR enzymes and systems
PT3313829T (pt) 2015-06-29 2024-07-08 Acuitas Therapeutics Inc Formulações de lípidos e de nanopartículas lipídicas para a administração de ácidos nucleicos
WO2017019891A2 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
WO2017031370A1 (en) 2015-08-18 2017-02-23 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for altering function and structure of chromatin loops and/or domains
WO2017035278A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof
JP6948313B6 (ja) 2015-09-17 2022-01-14 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療剤の細胞内送達のための化合物および組成物
US12241053B2 (en) 2015-10-09 2025-03-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
EP4089175A1 (en) 2015-10-13 2022-11-16 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
JP6997704B2 (ja) 2015-10-14 2022-02-04 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 生産性向上のためのｒｎａ関連酵素の修飾
EP4647126A3 (en) 2015-10-16 2026-02-11 Ipsen Biopharm Ltd. Stabilizing camptothecin pharmaceutical compositions
CN116814590A (zh) 2015-10-22 2023-09-29 布罗德研究所有限公司 Vi-b型crispr酶和系统
EP3368687B1 (en) 2015-10-27 2021-09-29 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for targeting cancer-specific sequence variations
WO2017075478A2 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures
WO2017075465A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting gata3
WO2017075451A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting pou2af1
HRP20230209T1 (hr) 2015-10-28 2023-04-14 Acuitas Therapeutics Inc. Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
US11903974B2 (en) 2015-11-30 2024-02-20 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods and compositions relating to chondrisomes from cultured cells
KR102787119B1 (ko) 2015-11-30 2025-03-27 듀크 유니버시티 유전자 편집에 의한 인간 디스트로핀 유전자의 교정을 위한 치료용 표적 및 사용 방법
PL3386484T3 (pl) 2015-12-10 2022-07-25 Modernatx, Inc. Kompozycje i sposoby dostarczania środków terapeutycznych
US10736880B2 (en) 2015-12-18 2020-08-11 The Board Of Regents Of The University Of Texas Systems Therapeutics for preterm labor management
US12110490B2 (en) 2015-12-18 2024-10-08 The Broad Institute, Inc. CRISPR enzymes and systems
LT3394030T (lt) 2015-12-22 2022-04-11 Modernatx, Inc. Junginiai ir kompozicijos terapinei medžiagai teikti intraceliuliniu būdu
WO2017124037A1 (en) 2016-01-15 2017-07-20 The Children's Medical Center Corporation Therapeutic use of mitochondria and combined mitochondrial agents
EP3825400B1 (en) 2016-04-08 2024-12-25 Translate Bio, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
US20190127713A1 (en) 2016-04-13 2019-05-02 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
AU2017257274B2 (en) 2016-04-19 2023-07-13 Massachusetts Institute Of Technology Novel CRISPR enzymes and systems
KR20260004568A (ko) 2016-04-19 2026-01-08 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 신규한 crispr 효소 및 시스템
EP3445853A1 (en) 2016-04-19 2019-02-27 The Broad Institute, Inc. Cpf1 complexes with reduced indel activity
EP3469074B1 (en) 2016-06-13 2020-12-09 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
CN109642231A (zh) 2016-06-17 2019-04-16 博德研究所 Vi型crispr直向同源物和系统
US12595478B2 (en) 2016-06-29 2026-04-07 The Broad Institute, Inc. Crispr-Cas systems having destabilization domain
CN109563511A (zh) 2016-06-30 2019-04-02 阿布特斯生物制药公司 用于递送信使rna的组合物和方法
JP7490211B2 (ja) 2016-07-19 2024-05-27 デューク ユニバーシティ Ｃｐｆ１に基づくゲノム編集の治療適用
CN106074402A (zh) * 2016-07-28 2016-11-09 浙江美保龙生物技术有限公司 一种猪细小病毒脂质体稀释液冻干制品及其制备方法
EP4485466A3 (en) 2016-08-17 2025-04-02 The Broad Institute Inc. Novel crispr enzymes and systems
WO2018035387A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 The Broad Institute, Inc. Novel crispr enzymes and systems
CN106074404A (zh) * 2016-08-17 2016-11-09 浙江美保龙生物技术有限公司 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒脂质体稀释液冻干制品及其制备方法
EP3500294A4 (en) 2016-08-22 2020-07-29 Arbutus Biopharma Corporation ANTI-PD-1 ANTIBODIES, OR THEIR FRAGMENTS, FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS B
WO2018049025A2 (en) 2016-09-07 2018-03-15 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses
WO2018047148A1 (en) 2016-09-12 2018-03-15 Novartis Ag Compounds for the inhibition of mirna
US12499971B2 (en) 2016-09-28 2025-12-16 The Broad Institute, Inc. Systematic screening and mapping of regulatory elements in non-coding genomic regions, methods, compositions, and applications thereof
US12447213B2 (en) 2016-10-07 2025-10-21 The Broad Institute, Inc. Modulation of novel immune checkpoint targets
JP7041136B2 (ja) 2016-10-12 2022-03-23 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｔｕｓｃ２免疫療法のための方法および組成物
US12491261B2 (en) 2016-10-26 2025-12-09 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations
EP3532103B1 (en) 2016-10-26 2025-12-03 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations
EP3535396A1 (en) 2016-11-01 2019-09-11 Novartis AG Methods and compositions for enhancing gene editing
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
JP2020500020A (ja) 2016-11-14 2020-01-09 ノバルティス アーゲー 融合誘導性タンパク質ｍｉｎｉｏｎに関連する組成物、方法、および治療上の使用
AU2017378427A1 (en) 2016-12-14 2019-06-20 Ligandal, Inc. Methods and compositions for nucleic acid and protein payload delivery
EA201991747A1 (ru) 2017-02-27 2020-06-04 Транслейт Био, Инк. НОВАЯ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННАЯ мРНК CFTR
JP2020511141A (ja) 2017-03-15 2020-04-16 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 新規Ｃａｓ１３ｂオルソログＣＲＩＳＰＲ酵素及び系
CA3055653A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
EP4186888B1 (en) 2017-03-15 2025-11-26 ModernaTX, Inc. Compound and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
WO2018170322A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
EP3596112A2 (en) 2017-03-17 2020-01-22 Newcastle University Adeno-associated virus vector delivery of a fragment of micro-dystrophin to treat muscular dystrophy
MX2019012280A (es) 2017-04-11 2020-01-23 Arbutus Biopharma Corp Composiciones dirigidas.
AU2018251801B2 (en) 2017-04-12 2024-11-07 Massachusetts Institute Of Technology Novel type VI CRISPR orthologs and systems
WO2018191657A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for delivery of active agents
WO2018191719A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipid delivery of therapeutic agents to adipose tissue
WO2018191750A2 (en) 2017-04-14 2018-10-18 The Broad Institute Inc. Novel delivery of large payloads
CN110799492B (zh) 2017-04-28 2023-06-27 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的新型羰基脂质和脂质纳米颗粒制剂
US11591601B2 (en) 2017-05-05 2023-02-28 The Broad Institute, Inc. Methods for identification and modification of lncRNA associated with target genotypes and phenotypes
CA3062426A1 (en) 2017-05-08 2018-11-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Compositions for facilitating membrane fusion and uses thereof
MX2019013752A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Translate Bio Inc Tratamiento de la fibrosis quística mediante el suministro de arnm que codifica cftr optimizado en codones.
WO2018213726A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 The Broad Institute, Inc. Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
IL271275B1 (en) 2017-06-13 2026-04-01 Flagship Pioneering Innovations V Inc Preparations containing croons and their uses
WO2018232120A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
US11530413B2 (en) 2017-07-21 2022-12-20 Novartis Ag Compositions and methods to treat cancer
WO2019027055A1 (ja) 2017-08-04 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸含有脂質ナノ粒子
CA3073020A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
WO2019036028A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICULAR FORMULATIONS
WO2019036030A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Acuitas Therapeutics, Inc. LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICLE FORMULATIONS
EP4501322A3 (en) 2017-08-17 2025-04-16 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
EP3675817A1 (en) 2017-08-31 2020-07-08 Modernatx, Inc. Methods of making lipid nanoparticles
IT201700099627A1 (it) * 2017-09-06 2019-03-06 Anna Angela Barba Produzione di vettori nano-liposomiali incapsulanti ferro altamente biodisponibile con tecnica in continuo.
KR20240161202A (ko) 2017-09-11 2024-11-12 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 아포지단백질 C-III (APOC3)의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제 및 조성물
AU2018338318B2 (en) 2017-09-21 2022-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
WO2019071054A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 The Broad Institute, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODIFYING THE FUNCTION AND STRUCTURE OF BUCKLES AND / OR CHROMATIN DOMAINS
WO2019135816A2 (en) 2017-10-23 2019-07-11 The Broad Institute, Inc. Novel nucleic acid modifiers
WO2019089828A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Acuitas Therapeutics, Inc. Lamellar lipid nanoparticles
WO2019089803A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for studying cell evolution
US11638695B2 (en) 2017-11-01 2023-05-02 Osaka University Development of method and apparatus for producing lipid particles having desired particle diameter
EP3710039A4 (en) 2017-11-13 2021-08-04 The Broad Institute, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF CANCER BY TARGETING THE CLEC2D-KLRB1 PATH
CN109893664B (zh) * 2017-12-11 2022-03-11 四川大学 一种阳离子脂质纳米颗粒/dna复合物及其制备方法
WO2019118806A1 (en) 2017-12-14 2019-06-20 Solid Biosciences Inc. Non-viral production and delivery of genes
US11167043B2 (en) 2017-12-20 2021-11-09 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
WO2019126709A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 The Broad Institute, Inc. Cas12b systems, methods, and compositions for targeted dna base editing
WO2019139997A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Trucode Gene Repair, Inc. Polymer-based nanoparticles, related formulation methods, and apparatus
EP3740580A4 (en) 2018-01-19 2021-10-20 Duke University GENOME ENGINEERING WITH CRISPR-CAS SYSTEMS IN EUKARYONTS
WO2019150309A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Hammack Scott Modulators of gpr68 and uses thereof for treating and preventing diseases
MA52074A (fr) 2018-03-19 2021-01-27 Bayer Healthcare Llc Nouveaux systèmes d'endonucléase à arn programmable et leurs utilisations
EP3773505B1 (en) 2018-03-30 2026-04-29 Insmed Incorporated Methods for continuous manufacture of liposomal drug products
WO2019213276A1 (en) 2018-05-02 2019-11-07 Novartis Ag Regulators of human pluripotent stem cells and uses thereof
JP7449275B2 (ja) 2018-05-02 2024-03-13 インスメッド インコーポレイテッド リポソーム薬物製剤の製造方法
US11690921B2 (en) 2018-05-18 2023-07-04 Sangamo Therapeutics, Inc. Delivery of target specific nucleases
MY208145A (en) 2018-06-18 2025-04-18 Res Inst Nationwide Childrens Hospital Adeno-associated virus vector delivery of muscle specific micro-dystrophin to treat muscular dystrophy
JP2021532815A (ja) 2018-08-07 2021-12-02 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 新規Ｃａｓ１２ｂ酵素およびシステム
EP3842538A4 (en) 2018-08-10 2022-06-08 Kyoto University METHOD OF TRANSFECTION INTO CARDIOMYOCYTES USING CATIONIC LIPID
US12479791B2 (en) 2018-08-10 2025-11-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cationic lipid
US12421507B2 (en) 2018-08-20 2025-09-23 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for optochemical control of CRISPR-CAS9
KR102950141B1 (ko) 2018-08-24 2026-04-07 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 전령 rna의 정제 방법
WO2020061367A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
WO2020061295A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
WO2020061457A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
IL281615B2 (en) 2018-09-21 2026-01-01 Acuitas Therapeutics Inc Systems and methods for producing lipid nanoparticles and liposomes
EP3856757A4 (en) 2018-09-28 2022-06-29 Nutcracker Therapeutics, Inc. Tertiary amino lipidated cationic peptides for nucleic acid delivery
CA3114435A1 (en) 2018-10-01 2020-04-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
HRP20240586T1 (hr) 2018-10-09 2024-07-19 The University Of British Columbia Sastavi i sustavi koji sadrže transfekcijske sposobne vezikle bez organskih otapala i deterdženta i s njim povezanim postupcima
CA3116576A1 (en) 2018-10-18 2020-04-23 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents
EP3876999A4 (en) 2018-11-09 2022-08-31 Arbutus Biopharma Corporation NEGATIVELY CHARGED PEG-LIPID CONJUGATES
KR20210105889A (ko) 2018-11-09 2021-08-27 아뷰터스 바이오파마 코포레이션 지질 나노입자 제제
AU2019376006A1 (en) 2018-11-09 2021-06-03 Arbutus Biopharma Corporation Cationic lipids containing silicon
WO2020106946A1 (en) 2018-11-21 2020-05-28 Translate Bio, Inc. TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
CN113710799B (zh) 2018-11-28 2024-11-12 克里斯珀医疗股份公司 用于在LNP中使用的编码CAS9的优化mRNA
US11166996B2 (en) 2018-12-12 2021-11-09 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Anellovirus compositions and methods of use
SG11202105577TA (en) 2019-01-09 2021-06-29 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Rnai agents for inhibiting expression of hif-2 alpha (epas1), compositions thereof, and methods of use
PT3908568T (pt) 2019-01-11 2024-09-30 Acuitas Therapeutics Inc Lípidos para a administração de agentes ativos por nanopartículas lipídicas
US12534714B2 (en) 2019-03-18 2026-01-27 The Broad Institute, Inc. Type VII CRISPR proteins and systems
SG11202110036RA (en) * 2019-03-19 2021-10-28 Arcturus Therapeutics Inc Method of making lipid-encapsulated rna nanoparticles
EP3711749A1 (en) 2019-03-19 2020-09-23 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Method of making lipid nanoparticles
EP3947646A1 (en) 2019-04-05 2022-02-09 Precision BioSciences, Inc. Methods of preparing populations of genetically-modified immune cells
US12496279B2 (en) 2019-04-11 2025-12-16 The Johns Hopkins University Nanoparticles for drug delivery to brain
CN114026228A (zh) 2019-05-07 2022-02-08 精密生物科学公司 用于识别序列的工程化大范围核酸酶的优化
WO2020236972A2 (en) 2019-05-20 2020-11-26 The Broad Institute, Inc. Non-class i multi-component nucleic acid targeting systems
CA3143679A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and hbv-targeting rnai
US20220273715A1 (en) 2019-07-25 2022-09-01 Precision Biosciences, Inc. Compositions and methods for sequential stacking of nucleic acid sequences into a genomic locus
CN114901253A (zh) 2019-08-14 2022-08-12 爱康泰生治疗公司 用于递送核酸的改进的脂质纳米颗粒
WO2021046265A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions comprising closed-ended dna and cleavable lipids and methods of use thereof
CA3155015A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Carbonate containing lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
AU2020350759A1 (en) 2019-09-19 2022-03-31 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
EP4031662A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 Translate Bio, Inc. Mrna encoding engineered cftr
JP2023502576A (ja) 2019-11-22 2023-01-25 ジェネレーション バイオ カンパニー イオン化可能な脂質およびそれらのナノ粒子組成物
US12194089B2 (en) 2020-02-04 2025-01-14 CureVac SE Coronavirus vaccine
KR20230004456A (ko) 2020-03-04 2023-01-06 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 면역 요법에 대한 종양 세포의 감작화를 위한 방법 및 조성물
EP4121018A4 (en) 2020-03-17 2024-07-03 Genevant Sciences Gmbh CATIONIC LIPIDS FOR LIPID DNANOPARTICLE DELIVERY OF THERAPEUTICS TO HEPATIC STELLA CELLS
JP7746280B2 (ja) 2020-03-27 2025-09-30 ジェネレーション バイオ カンパニー 新規脂質及びそれらのナノ粒子組成物
IL296781A (en) 2020-03-30 2022-11-01 BioNTech SE Rna compositions targeting claudin-18.2
EP4132576A1 (en) 2020-04-09 2023-02-15 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Nucleic acid vaccines for coronavirus
CN115996707A (zh) 2020-04-20 2023-04-21 德克萨斯大学系统董事会 生物活性干粉组合物及其制造和使用方法
IL297419B2 (en) 2020-04-22 2025-02-01 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US20230183664A1 (en) 2020-05-11 2023-06-15 Precision Biosciences, Inc. Self-limiting viral vectors encoding nucleases
CA3172171A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Victor Bartsevich Treatment of retinitis pigmentosa using improved engineered meganucleases
US12188060B2 (en) 2020-05-15 2025-01-07 Crispr Therapeutics Ag Messenger RNA encoding Cas9 for use in genome-editing systems
EP3915544A1 (en) * 2020-05-25 2021-12-01 Leon-Nanodrugs GmbH Method for producing a liposome dispersion
IL299094A (en) 2020-06-15 2023-02-01 Res Inst Nationwide Childrens Hospital Administration of an adeno-associated virus vector for muscular dystrophies
WO2025056938A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 BioNTech SE Rna compositions for delivery of incretin agents
ES3054438T3 (en) 2020-07-16 2026-02-03 Acuitas Therapeutics Inc Cationic lipids for use in lipid nanoparticles
WO2022040435A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nanodrugs for targeted drug delivery and use thereof
CN112206726A (zh) * 2020-09-04 2021-01-12 仲恺农业工程学院 海藻酸钠/乳脂粉昆虫病毒微胶囊及其制备方法
IL301253A (en) 2020-09-13 2023-05-01 Arcturus Therapeutics Inc As a mass of large RNA lipid nanoparticles
JP2023549011A (ja) 2020-09-15 2023-11-22 ヴァーヴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 遺伝子編集のための脂質製剤
CZ310613B6 (cs) 2020-09-23 2026-01-28 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
WO2022076547A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Precision Biosciences, Inc. Lipid nanoparticle compositions
EP4228658A4 (en) 2020-10-14 2025-02-19 George Mason Research Foundation, Inc. IONIZABLE LIPIDS AND METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
WO2022099003A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines
WO2022115645A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
AU2021403156A1 (en) 2020-12-18 2023-07-13 Genevant Sciences Gmbh Peg lipids and lipid nanoparticles
US11918643B2 (en) 2020-12-22 2024-03-05 CureVac SE RNA vaccine against SARS-CoV-2 variants
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
IL305353A (en) 2021-02-26 2023-10-01 Ethris Gmbh Formulations for aerosol formation and aerosols for the delivery of nucleic acid
EP4059491A1 (de) 2021-03-17 2022-09-21 Evonik Operations GmbH Vorrichtung und verfahren zur herstellung von nanocarriern und/oder nanoformulierungen
DK4319803T3 (da) 2021-04-08 2025-12-15 Vaxthera Sas Coronavirusvaccine omfattende et mosaikprotein
AU2022262778A1 (en) 2021-04-22 2023-11-30 Precision Biosciences, Inc. Engineered meganucleases that target human mitochondrial genomes
WO2022226305A1 (en) 2021-04-22 2022-10-27 Precision Biosciences, Inc. Engineered meganucleases that target human mitochondrial genomes
EP4352215A1 (en) 2021-06-11 2024-04-17 LifeEDIT Therapeutics, Inc. Rna polymerase iii promoters and methods of use
AU2022291742A1 (en) 2021-06-14 2023-12-21 Generation Bio Co. Cationic lipids and compositions thereof
US20240316102A1 (en) 2021-07-01 2024-09-26 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
CZ310443B6 (cs) 2021-07-19 2025-06-25 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Cyklohexanové lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
CA3227103A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Matthew P. GEMBERLING Compositions and methods for modulating expression of frataxin (fxn)
US20240252684A1 (en) 2021-07-30 2024-08-01 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2023023055A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Compositions and methods for optimizing tropism of delivery systems for rna
TW202328067A (zh) 2021-09-14 2023-07-16 美商雷納嘉德醫療管理公司 環狀脂質及其使用方法
CN118317944A (zh) 2021-09-14 2024-07-09 雷纳嘉德医疗管理公司 非环状脂质及其使用方法
CN116064598B (zh) 2021-10-08 2024-03-12 苏州艾博生物科技有限公司 冠状病毒的核酸疫苗
AR127312A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Suzhou Abogen Biosciences Co Ltd Compuestos lipídicos ycomposiciones de nanopartículas lipídicas
TW202327646A (zh) 2021-10-15 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 Rna分子
EP4426828A1 (en) 2021-11-01 2024-09-11 Tome Biosciences, Inc. Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
CA3237482A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone Precise genome editing using retrons
JP2024542188A (ja) 2021-11-16 2024-11-13 セイル バイオメディシンズ インコーポレイテッド 新規イオン化可能な脂質および脂質ナノ粒子ならびにそれらを使用する方法
JP2024542260A (ja) 2021-11-22 2024-11-13 セイル バイオメディシンズ インコーポレイテッド 新規イオン化可能な脂質および脂質ナノ粒子ならびにそれらを使用する方法
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US20250059131A1 (en) 2021-12-16 2025-02-20 Acuitas Therapeutics, Inc. Fluorinated cationic lipids for use in lipid nanoparticles
EP4700017A2 (en) 2021-12-16 2026-02-25 Acuitas Therapeutics Inc. Fluorinated cationic lipids for use in lipid nanoparticles
CA3242402A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticle formulations
PE20241621A1 (es) 2021-12-17 2024-08-07 Pfizer Composiciones de polinucleotidos y sus usos
AU2022420615A1 (en) 2021-12-22 2024-07-04 Tome Biosciences, Inc. Co-delivery of a gene editor construct and a donor template
EP4452928A1 (en) 2021-12-23 2024-10-30 Renagade Therapeutics Management Inc. Constrained lipids and methods of use thereof
EP4463135A2 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023141602A2 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Renagade Therapeutics Management Inc. Engineered retrons and methods of use
US20250345416A1 (en) 2022-01-27 2025-11-13 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
KR20240146674A (ko) 2022-01-31 2024-10-08 제네반트 사이언시즈 게엠베하 지질 나노입자를 위한 이온화 가능한 양이온성 지질
CN118900701A (zh) 2022-01-31 2024-11-05 盖纳万科学有限公司 聚(烷基噁唑啉)-脂质缀合物及含有聚(烷基噁唑啉)-脂质缀合物的脂质颗粒
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023178182A1 (en) 2022-03-16 2023-09-21 10X Genomics, Inc. Compositions and methods for detection and treatment of coronavirus infection
KR20240166554A (ko) 2022-03-25 2024-11-26 세일 바이오메디슨스, 인크. 신규한 이온화 가능 지질 및 지질 나노입자, 및 이를 사용하는 방법
WO2023184038A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Nanovation Therapeutics Inc. Mrna delivery method and composition thereof
IL316038A (en) 2022-04-04 2024-11-01 Univ California Preparations and methods for genetic complementation
AU2023251104A1 (en) 2022-04-07 2024-10-17 Renagade Therapeutics Management Inc. Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents
WO2023198828A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Universitat Autònoma De Barcelona Treatment of neuromuscular diseases via gene therapy that expresses klotho protein
WO2023205744A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion compositions
WO2023215831A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Tome Biosciences, Inc. Guide rna compositions for programmable gene insertion
US20250346905A1 (en) 2022-05-05 2025-11-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University INTERFERING RNA THERAPY FOR PLN-R14del CARDIOMYOPATHY
AU2023268051A1 (en) 2022-05-13 2025-01-02 BioNTech SE Rna compositions targeting hiv
WO2023225670A2 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Tome Biosciences, Inc. Ex vivo programmable gene insertion
CA3256897A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for the administration of nucleic acids and their methods of use
JP2025522297A (ja) 2022-05-25 2025-07-15 ビオンテック エスエー サルポックス抗原の送達のためのｒｎａ組成物及び関連する方法
JP2025518221A (ja) 2022-05-30 2025-06-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア 核酸の送達のための複合体
GB202208022D0 (en) 2022-05-31 2022-07-13 Sisaf Ltd Therapeutic compounds and compositions
EP4536197A1 (en) 2022-06-07 2025-04-16 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
IL317874A (en) 2022-06-24 2025-02-01 Tune Therapeutics Inc Compounds, systems and methods for reducing low density lipoproteins through targeted gene suppression
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
JP2025525439A (ja) 2022-06-30 2025-08-05 インダプタ セラピューティクス インコーポレイテッド 操作されたナチュラルキラー（ｎｋ）細胞と抗体療法との組み合わせおよび関連する方法
WO2024006863A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Precision NanoSystems ULC Lipid nanoparticle formulations for vaccines
CA3261865A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Tune Therapeutics, Inc. TARGETED TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
GB202210794D0 (en) 2022-07-22 2022-09-07 Sisaf Ltd Lipid formulations
EP4569093A1 (en) 2022-08-12 2025-06-18 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2024037578A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Composition of lipid nanoparticles
KR20250077608A (ko) 2022-08-19 2025-05-30 튠 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 표적 유전자 억제를 통한 b형 간염 바이러스 조절용 조성물, 시스템 및 방법
WO2024042236A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Ethris Gmbh Stable lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
EP4327829A1 (en) 2022-08-26 2024-02-28 Ethris GmbH Stabilization of lipid or lipidoid nanoparticle suspensions
US20260060926A1 (en) 2022-08-31 2026-03-05 Sail Biomedicines, Inc. Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same
JP2025530171A (ja) 2022-09-07 2025-09-11 アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子製剤で使用するための脂質
EP4584011A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Evonik Operations GmbH Improved nanocarrier manufacturing
WO2024057237A1 (en) 2022-09-16 2024-03-21 Pfizer Inc. Lipid nanoparticles
WO2024064642A2 (en) 2022-09-19 2024-03-28 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for modulating t cell function
WO2024063789A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
JP2025533527A (ja) 2022-09-23 2025-10-07 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ＣＳＰ抗原の送達のための組成物及び関連方法
WO2024064931A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of liver stage antigens and related methods
WO2024063788A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
IL319704A (en) 2022-09-23 2025-05-01 Nchroma Bio Inc Compositions and methods for epigenetic regulation of HBV gene expression
WO2024074376A1 (en) 2022-09-27 2024-04-11 Resolution Therapeutics Limited Therapeutic macrophages
WO2024074634A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 BioNTech SE Rna compositions targeting claudin-18.2
WO2024074211A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 BioNTech SE Rna compositions targeting claudin-18.2
WO2024089634A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions against influenza and rsv
IL320459A (en) 2022-10-27 2025-06-01 Pfizer Rna molecules encoding rsv-f and vaccines containing them
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
US20250367129A1 (en) 2022-11-04 2025-12-04 Pfizer Inc. Lipid Compounds and Uses Thereof
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)
AU2023406303A1 (en) 2022-12-01 2025-05-29 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids, ionizable lipids, sterols, lipid anchored polymers and helper lipids, their uses
EP4626400A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 Generation Bio Co. Novel polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same
WO2024119074A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Generation Bio Co. Stealth lipid nanoparticle compositions for cell targeting
WO2024119103A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers
JP2026500218A (ja) 2022-12-11 2026-01-06 ファイザー・インク インフルエンザおよびｒｓｖに対する免疫原性組成物
WO2024138194A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Tome Biosciences, Inc. Platforms, compositions, and methods for in vivo programmable gene insertion
EP4642797A1 (en) 2022-12-28 2025-11-05 BioNTech SE Rna compositions targeting hiv
EP4649087A2 (en) 2023-01-11 2025-11-19 Engage Biologics Inc. Non-viral expression systems and methods of use thereof
WO2024154052A1 (en) 2023-01-16 2024-07-25 Pfizer Inc. Immunogenic compositions and methods of inducing an immune response against varicella zoster virus
US20240252614A1 (en) 2023-01-18 2024-08-01 Pfizer Inc. Vaccines against respiratory diseases
EP4658636A1 (en) 2023-01-31 2025-12-10 Pfizer Inc. Lipid compounds and uses thereof
WO2024163678A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Fusion proteins and systems for targeted activation of frataxin (fxn) and related methods
WO2024163683A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Systems, compositions, and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) and x-inactive specific transcript (xist)
WO2024194756A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Pfizer Inc. Modulating the innate immunity of rna
EP4698651A1 (en) 2023-04-19 2026-02-25 Gradalis, Inc. Compositions and methods for modulating sialic acid production and treating hereditary inclusion body myopathy (hibm)
WO2024228044A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 BioNTech SE Optimized csp variants and related methods
WO2024229309A2 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Manifold Biotechnologies, Inc. Methodsand compositions for high-throughput protein delivery, screening, and detection
WO2024228150A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 BioNTech SE Optimized csp variants and related methods
CN121443580A (zh) 2023-05-05 2026-01-30 爱康泰生治疗公司 用于脂质纳米颗粒制剂的脂质
WO2024234006A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Tome Biosciences, Inc. Systems, compositions, and methods for targeting liver sinusodial endothelial cells (lsecs)
WO2024238700A1 (en) 2023-05-15 2024-11-21 Chroma Medicine, Inc. Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
AU2024270764A1 (en) 2023-05-15 2025-12-04 Nchroma Bio, Inc. Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
WO2024240962A1 (en) 2023-05-25 2024-11-28 Ethris Gmbh Gm-csf-encoding nucleic acids, pharmaceutical compositions, methods and uses thereof
AU2024279278A1 (en) 2023-05-31 2025-12-18 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
US20250000960A1 (en) 2023-06-14 2025-01-02 Pfizer Inc. Polynucleotide compositions and uses thereof
AU2024305649A1 (en) 2023-06-16 2026-01-08 Acuitas Therapeutics, Inc. Mixed amide ester containing lipids for use in lipid nanoparticles
KR20260032546A (ko) 2023-06-16 2026-03-09 아퀴타스 테라퓨틱스 인크. 아미드 포함 지질
EP4727913A1 (en) 2023-06-16 2026-04-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Lipids for use in lipid nanoparticles
EP4736848A1 (en) 2023-06-28 2026-05-06 Shanghai Regenelead Therapies Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing cationic lipid and use thereof
CN121443279A (zh) 2023-06-28 2026-01-30 环球生命科学解决方案加拿大有限公司 用于细胞疗法的脂质纳米颗粒制剂和相关方法
WO2025017476A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Pfizer Inc. Lipid nanoparticles comprising polymer-conjugated lipids and uses thereof
WO2025024324A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium antigens and related methods
IL325865A (en) 2023-07-21 2026-03-01 BioNTech SE Compositions for administering Plasmodium antigens and related methods
WO2025024337A1 (en) 2023-07-24 2025-01-30 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium antigens and related methods
WO2025022367A2 (en) 2023-07-27 2025-01-30 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use
WO2025027492A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Pfizer Inc. Coronavirus antigen variants
WO2025029840A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for multiplexed activation and repression of t cell gene expression
CN121909284A (zh) 2023-07-31 2026-04-21 图恩疗法股份有限公司 用于调节il-2基因表达的组合物和方法
WO2025027089A1 (en) 2023-08-01 2025-02-06 BioNTech SE Ionizable thiolipids and uses thereof
WO2025026545A1 (en) 2023-08-01 2025-02-06 BioNTech SE Ionizable thioplipids and uses thereof
CN121866336A (zh) 2023-08-03 2026-04-14 百欧恩泰欧洲股份公司 靶向hiv的rna组合物
WO2025027579A2 (en) 2023-08-03 2025-02-06 BioNTech SE Rna compositions targeting hiv
WO2025030097A2 (en) 2023-08-03 2025-02-06 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
WO2025030154A1 (en) 2023-08-03 2025-02-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus glycoprotein b antigens and related methods
WO2025038494A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for lymphoid cell differentiation using targeted gene activation
CN121729225A (zh) 2023-08-25 2026-03-24 埃泽瑞斯公司 具有增强药物应用的特定表面活性剂性质的稳定脂质和类脂质纳米颗粒制剂
WO2025050069A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion using engineered integration enzymes
WO2025052278A1 (en) 2023-09-05 2025-03-13 Genevant Sciences Gmbh Pyrrolidine based cationic lipids for lipid nanoparticle delivery of therapeutics to hepatic stellate cells
WO2025051994A1 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Coave Therapeutics Ionizable lipid nanoparticles
WO2025054556A1 (en) 2023-09-07 2025-03-13 BioNTech SE Rna compositions for delivery of mpox antigens and related methods
WO2025052180A2 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2025057088A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 BioNTech SE Rna compositions for delivery of incretin agents
WO2025059073A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Tune Therapeutics, Inc. Epigenetic editing methods and systems for differentiating stem cells
WO2025057115A2 (en) 2023-09-15 2025-03-20 Pfizer Inc. Methods and compositions for continuous production of nucleic acids
WO2025064850A1 (en) 2023-09-22 2025-03-27 BioNTech SE Rna constructs with n-terminal degrons to enhance an immune response
WO2025072383A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 The Broad Institute, Inc. Viral open reading frames, uses thereof, and methods of detecting the same
AU2024352437A1 (en) 2023-09-27 2026-03-19 Resolution Therapeutics Limited Therapeutic macrophages
AU2024357861A1 (en) 2023-10-12 2026-04-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Nickase-retron template-based precision editing system and methods of use
WO2025083619A1 (en) 2023-10-18 2025-04-24 Life Edit Therapeutics, Inc. Rna-guided nucleases and acive fragments and variants thereof and methods of use
WO2025088570A1 (en) 2023-10-26 2025-05-01 Crispr Therapeutics Ag Ionizable lipids and ionizable lipid nanoparticles
WO2025097055A2 (en) 2023-11-02 2025-05-08 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods of use of t cells in immunotherapy
WO2025106754A1 (en) 2023-11-15 2025-05-22 BioNTech SE Coronavirus vaccine
US20250161227A1 (en) 2023-11-17 2025-05-22 Acuitas Therapeutics, Inc. Pegylated lipids
WO2025114520A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 Coave Therapeutics Ionizable lipid nanoparticles
WO2025128696A1 (en) 2023-12-12 2025-06-19 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipid compounds for use in lipid nanoparticles
WO2025126019A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Pfizer Inc. Rna molecules
WO2025132122A1 (en) 2023-12-13 2025-06-26 Berlin Institute Of Health Methods of delivering therapeutics using lipid nanoparticles
WO2025124711A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 BioNTech SE Glycolipid compositions
WO2025126071A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 Pfizer Inc. Rna molecules
WO2025129158A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Broad Institute, Inc. Engineered arc delivery vesicles and uses thereof
US20250332281A2 (en) 2023-12-15 2025-10-30 Capstan Therapeutics, Inc. Humanized anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2025126113A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Pfizer Inc. Lipid compounds and uses thereof
WO2025126118A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Pfizer Inc. Lipid compounds and uses thereof
WO2025134066A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Biontech Delivery Technologies Gmbh Ionizable lipids
WO2025133105A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Biontech Delivery Technologies Gmbh Compositions and methods
WO2025133951A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Genevant Sciences Gmbh Ionizable lipids suitable for lipid nanoparticles
WO2025134062A2 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Biontech Delivery Technologies Gmbh Ionizable lipids
WO2025134046A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Pfizer Inc. Methods and vaccine compositions for lyme disease
WO2025144938A1 (en) 2023-12-26 2025-07-03 Emmune, Inc. Systems for nucleic acid transfer
WO2025149492A1 (en) 2024-01-08 2025-07-17 BioNTech SE Rna encoding an immune inhibitory il-1 family member
WO2025155753A2 (en) 2024-01-17 2025-07-24 Renagade Therapeutics Management Inc. Improved gene editing system, guides, and methods
WO2025163460A2 (en) 2024-01-30 2025-08-07 Pfizer Inc. Vaccines against respiratory diseases
WO2025166325A1 (en) 2024-02-02 2025-08-07 Editas Medicine, Inc. MODIFIED GUIDE RNAs
WO2025174908A1 (en) 2024-02-12 2025-08-21 Life Edit Therapeutics, Inc. Novel rna-guided nucleases and proteins for polymerase editing
WO2025174858A1 (en) 2024-02-15 2025-08-21 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipid compounds for use in lipid nanoparticles
WO2025184508A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Acuitas Therapeutics, Inc. Materials and methods for encapsulating therapeutics in lipid nanoparticles
WO2025186719A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Pfizer Inc. Immunogenic compositions and uses thereof
WO2025186725A2 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Pfizer Inc. Improved lnp formulations and uses thereof
WO2025191415A1 (en) 2024-03-11 2025-09-18 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated escherichia coli saccharides and uses thereof
US20260061042A1 (en) 2024-03-26 2026-03-05 Pfizer Inc. Polynucleotide compositions and uses thereof
WO2025202287A1 (en) 2024-03-26 2025-10-02 Resolution Therapeutics Limited Method of producing macrophages
WO2025202937A1 (en) 2024-03-26 2025-10-02 BioNTech SE Cancer vaccines
WO2025210520A1 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Genevant Sciences Gmbh Lipid nanoparticles for inducing an immunological response
WO2025210521A1 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Genevant Sciences Gmbh Lipid nanoparticles for stimulating t cells
WO2025213131A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 BioNTech SE Rna compositions for delivery of orthopox antigens and related methods
WO2025213138A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
WO2025217264A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Acuitas Therapeutics, Inc. Cationic lipid compounds for use in lipid nanoparticles
WO2025219491A1 (en) 2024-04-17 2025-10-23 Global Life Sciences Solutions Canada Ulc Method and composition for hdr template dna delivery
WO2025219528A1 (en) 2024-04-17 2025-10-23 Global Life Sciences Solutions Canada Ulc Non-destructive plasmid delivery to immune cells
WO2025219199A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Evonik Operations Gmbh Process for producing nanocarriers and/or nanoformulations
EP4677108A1 (en) 2024-04-22 2026-01-14 Basecamp Research Ltd Method and compositions for detecting off-target editing
WO2025224182A2 (en) 2024-04-23 2025-10-30 Basecamp Research Ltd Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
WO2025231114A1 (en) 2024-05-01 2025-11-06 Acuitas Therapeutics, Inc. Method of using lipid nanoparticles for intramuscular delivery
WO2025233894A1 (en) 2024-05-09 2025-11-13 University Of Miami Engineered meganucleases that target human mitochondrial genomes
WO2025235862A1 (en) 2024-05-10 2025-11-13 Inndura Therapeutics Inc. A modified immune cell receptor comprising a target-binding domain and the extracellular domain of cd16a
WO2025240833A1 (en) 2024-05-17 2025-11-20 Acuitas Therapeutics, Inc. Galnac lipid compounds for use in lipid nanoparticles
WO2025250808A1 (en) 2024-05-29 2025-12-04 The Brigham And Women’S Hospital, Inc. Anti-crispr delivery compositions and methods
WO2025260068A1 (en) 2024-06-14 2025-12-18 Tune Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulation for delivery of nucleic acids to cells
WO2025262460A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 BioNTech SE Lipid compositions for nucleic acid delivery
WO2026003754A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Life Edit Therapeutics, Inc. Novel reverse transcriptases and uses thereof
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026015647A1 (en) 2024-07-09 2026-01-15 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for cell differentiation using targeted gene activation of dll4 and/or vcam1
WO2026015882A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 BioNTech SE Hsv antigen fragments and related methods
WO2026018181A1 (en) 2024-07-17 2026-01-22 Pfizer Inc. Immunogenic compositions and uses thereof
WO2026018213A1 (en) 2024-07-18 2026-01-22 Vaxthera Sas A broadly protective mosaic vaccine against highly pathogenic avian influenza viruses
WO2026020171A2 (en) 2024-07-19 2026-01-22 Aera Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor constructs
WO2026022677A1 (en) 2024-07-22 2026-01-29 Genevant Sciences Gmbh Permanently charged cationic lipids
WO2026022656A2 (en) 2024-07-22 2026-01-29 Genevant Sciences Gmbh Lipid particle formulations with permanently charged cationic lipids
WO2026047603A1 (en) 2024-08-28 2026-03-05 BioNTech SE Sars-cov-2 immunogenic compositions
WO2026055342A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Arsenal Biosciences, Inc. Synthetic pathway activators
WO2026057626A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 BioNTech SE Peptidoglycan hydrolases having multiple enzymatically active domains
WO2026057625A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 BioNTech SE Peptidoglycan hydrolases having a chap domain with engineered active site
WO2026064512A1 (en) 2024-09-18 2026-03-26 Generation Bio Co. Polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions comprising the same
WO2026064753A1 (en) 2024-09-23 2026-03-26 Tune Therapeutics, Inc. Dna methyltransferase-like protein (dnmt3l) or dna methyltransferase 3a (dnmt3a) repressor systems for epigenetic editing
WO2026072773A1 (en) 2024-09-27 2026-04-02 Pfizer Inc. Compositions and methods for reduction of double-stranded rna
WO2026068864A1 (en) 2024-09-30 2026-04-02 BioNTech SE Engineered ch1 and cl domains for the prevention of chain mispairing
WO2026078579A1 (en) 2024-10-08 2026-04-16 Precision Biosciences, Inc. Methods and compositions for treating hepatitis b virus-related conditions
WO2026078565A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 Crispr Therapeutics Ag Messenger rna encoding cas9 for use in genome-editing systems
WO2026083241A1 (en) 2024-10-15 2026-04-23 Genevant Sciences Gmbh Ionizable lipids comprising n,n-substituted hydroxylamine esters
WO2026082899A2 (en) 2024-10-16 2026-04-23 BioNTech SE Rna for preventing or treating tuberculosis

Family Cites Families (131)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4394448A (en) 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
DE3068743D1 (en) 1980-01-16 1984-08-30 Weder Hans G Process and dialysis-installation for the preparation of bilayer-vesicles and their use
US4598051A (en) 1980-03-12 1986-07-01 The Regents Of The University Of California Liposome conjugates and diagnostic methods therewith
GR77320B (es) * 1980-12-22 1984-09-11 Procter & Gamble
US4394372A (en) 1980-12-22 1983-07-19 The Procter & Gamble Company Process for making lipid membrane structures
US4602354A (en) 1983-01-10 1986-07-22 Ncr Corporation X-and-OR memory array
US4515736A (en) 1983-05-12 1985-05-07 The Regents Of The University Of California Method for encapsulating materials into liposomes
JPS607932A (ja) * 1983-06-29 1985-01-16 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd リポソーム懸濁液およびその製法
US5550289A (en) 1985-01-07 1996-08-27 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(1,(1-1)-dialkyloxy)-and N-(1,(1-1)-dialkenyloxy alk-1-yl-N-N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5208036A (en) 1985-01-07 1993-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5320906A (en) 1986-12-15 1994-06-14 Vestar, Inc. Delivery vehicles with amphiphile-associated active ingredient
US4895452A (en) 1988-03-03 1990-01-23 Micro-Pak, Inc. Method and apparatus for producing lipid vesicles
EP0422124A4 (en) 1988-06-27 1991-10-16 Genex Corporation Thermal release of recombinant protein into culture media
JPH0720857B2 (ja) 1988-08-11 1995-03-08 テルモ株式会社 リポソームおよびその製法
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
JPH03126211A (ja) 1989-10-12 1991-05-29 Nippon Chemicon Corp 電解コンデンサ用電解液
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
DE4013580A1 (de) 1990-04-24 1991-10-31 Schering Ag Verfahren zur herstellung von wirkstoffhaltigen waessrigen liposomensuspensionen
JP2958076B2 (ja) * 1990-08-27 1999-10-06 株式会社ビタミン研究所 遺伝子導入用多重膜リポソーム及び遺伝子捕捉多重膜リポソーム製剤並びにその製法
JPH0665382B2 (ja) * 1991-03-20 1994-08-24 雪印乳業株式会社 リポソーム調製装置とその装置を使用するリポソーム調製方法
JP2774417B2 (ja) 1991-08-07 1998-07-09 株式会社ディ・ディ・エス研究所 ペプチド骨格を有する分枝鎖型糖複合体及び微粒子キャリヤー
US5283185A (en) 1991-08-28 1994-02-01 University Of Tennessee Research Corporation Method for delivering nucleic acids into cells
US5298422A (en) 1991-11-06 1994-03-29 Baylor College Of Medicine Myogenic vector systems
US6001644A (en) 1991-12-17 1999-12-14 The Regents Of The University Of California Mammalian transformation complex comprising a lipid carrier and DNA encoding CFTR
US5858784A (en) 1991-12-17 1999-01-12 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery
WO1993017125A1 (en) 1992-02-19 1993-09-02 Baylor College Of Medicine Oligonucleotide modulation of cell growth
ATE194767T1 (de) * 1992-03-23 2000-08-15 Univ Georgetown In liposomen verkapseltes taxol und verwendungsverfahren
EP0646178A1 (en) 1992-06-04 1995-04-05 The Regents Of The University Of California expression cassette with regularoty regions functional in the mammmlian host
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
JP2854203B2 (ja) 1992-09-03 1999-02-03 株式会社ディ・ディ・エス研究所 リポソームの製造法
US5478860A (en) 1993-06-04 1995-12-26 Inex Pharmaceuticals Corp. Stable microemulsions for hydrophobic compound delivery
CA2163860A1 (en) 1993-06-30 1995-01-12 Chung C. Hsu Method for preparing liposomes
JP3479535B2 (ja) 1993-07-08 2003-12-15 ザ リポソーム カンパニー、インコーポレーテッド リポソームの粒径を制御する方法
US5578475A (en) 1993-07-12 1996-11-26 Life Technologies, Inc. Composition and methods for transfecting eukaryotic cells
US5674908A (en) 1993-12-20 1997-10-07 Life Technologies, Inc. Highly packed polycationic ammonium, sulfonium and phosphonium lipids
FR2714830B1 (fr) 1994-01-10 1996-03-22 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations.
US6075012A (en) 1994-02-11 2000-06-13 Life Technologies, Inc. Reagents for intracellular delivery of macromolecules
US6989434B1 (en) 1994-02-11 2006-01-24 Invitrogen Corporation Reagents for intracellular delivery of macromolecules
CA2194221C (en) 1994-06-22 2001-01-02 Megabios Corporation Cationic amphiphiles
FR2722506B1 (fr) 1994-07-13 1996-08-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
US5627159A (en) 1994-10-27 1997-05-06 Life Technologies, Inc. Enhancement of lipid cationic transfections in the presence of serum
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
WO1996040726A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Genta Incorporated Novel carbamate-based cationic lipids
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US20030069173A1 (en) 1998-03-16 2003-04-10 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced transfections
US5811406A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Regents Of The University Of California Dry powder formulations of polynucleotide complexes
US5976567A (en) 1995-06-07 1999-11-02 Inex Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US6007838A (en) * 1995-06-07 1999-12-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Process for making liposome preparation
EP0874910A4 (en) 1995-06-07 1999-04-21 Life Technologies Inc ENHANCED CATIONIC LIPID TRANSFECTION BY PEPTIDES
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
EP0840744A4 (en) 1995-06-07 1999-03-10 Genta Inc CATIONIC LIPIDS BASED ON PHOSPHONIC ACID
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US6339173B1 (en) 1996-07-22 2002-01-15 Promega Biosciences, Inc. Amide-based cationic lipids
US6330349B1 (en) 1995-11-30 2001-12-11 Chromavision Medical Systems, Inc. Automated method for image analysis of residual protein
US5817856A (en) 1995-12-11 1998-10-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Radiation-protective phospholipid and method
DK0807431T3 (da) * 1996-05-14 2004-07-26 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåde til fremstilling af carotenoidpræparater
US6284267B1 (en) 1996-08-14 2001-09-04 Nutrimed Biotech Amphiphilic materials and liposome formulations thereof
US6210707B1 (en) 1996-11-12 2001-04-03 The Regents Of The University Of California Methods of forming protein-linked lipidic microparticles, and compositions thereof
US6034135A (en) 1997-03-06 2000-03-07 Promega Biosciences, Inc. Dimeric cationic lipids
US5877220A (en) 1997-03-06 1999-03-02 Genta, Incorporated Amide-based oligomeric cationic lipids
AU733310C (en) 1997-05-14 2001-11-29 University Of British Columbia, The High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles
US6835395B1 (en) 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
AU7490098A (en) 1997-05-15 1998-12-08 Genzyme Corporation Cationic amphiphile formulations
JP2002508765A (ja) * 1997-06-23 2002-03-19 アルザ コーポレイション リポソーム被包ポリヌクレオチド組成物および方法
US20030083272A1 (en) 1997-09-19 2003-05-01 Lahive & Cockfield, Llp Sense mrna therapy
CA2309727C (en) 1997-10-10 2012-12-04 Inex Pharmaceuticals Corporation Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6734171B1 (en) 1997-10-10 2004-05-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6410328B1 (en) 1998-02-03 2002-06-25 Protiva Biotherapeutics Inc. Sensitizing cells to compounds using lipid-mediated gene and compound delivery
CA2271582A1 (en) 1998-05-14 1999-11-14 Sean C. Semple Method for administration of therapeutic agents, including antisense, with repeat dosing
US20030044454A1 (en) 1998-06-30 2003-03-06 Masaru Fukui Compositions containing liposomes and/or emulsions and process for the preparation thereof
AU747597B2 (en) 1998-07-20 2002-05-16 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal encapsulated nucleic acid-complexes
US6900049B2 (en) 1998-09-10 2005-05-31 Cell Genesys, Inc. Adenovirus vectors containing cell status-specific response elements and methods of use thereof
NZ512244A (en) 1998-11-12 2003-12-19 Invitrogen Corp Polycationic transfection reagents for introducing anions into a cell
WO2000029103A1 (en) 1998-11-13 2000-05-25 Optime Therapeutics, Inc. Method and apparatus for liposome production
US6649780B1 (en) 1998-12-22 2003-11-18 Valentis, Inc. Cationic lipids
JP5117648B2 (ja) 1999-04-20 2013-01-16 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア カチオン性ｐｅｇ脂質および使用方法。
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
US20010048940A1 (en) 1999-06-18 2001-12-06 Jennifer D. Tousignant Cationic amphiphile micellar complexes
DK1198490T3 (da) 1999-07-14 2006-06-19 Alza Corp Neutral lipopolymer og liposomsammensætninger indeholdende samme
BR0012624B1 (pt) 1999-07-15 2011-08-09 métodos para a preparação de agentes terapêuticos envolvidos por lipìdeos.
US6242188B1 (en) * 1999-07-30 2001-06-05 Applied Gene Technologies, Inc. Sample processing to release nucleic acids for direct detection
EP1471870B1 (en) 2000-01-10 2014-08-20 Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Use of lipid conjugates in the treatment of disease
ES2336887T5 (es) 2000-03-30 2019-03-06 Whitehead Inst Biomedical Res Mediadores de interferencia por ARN específicos de secuencias de ARN
AU2001275423B2 (en) 2000-06-09 2007-01-11 Regulon, Inc. Encapsulation of polynucleotides and drugs into targeted liposomes
US20030072794A1 (en) 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
ATE354350T1 (de) 2000-10-25 2007-03-15 Univ British Columbia Lipidformulierungen zur zielgerichteten abgabe
EP1337664A4 (en) 2000-10-27 2005-01-19 Invitrogen Corp METHOD FOR INTRODUCING ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES IN EUKARYOTIC CELLS
EP1203614A1 (de) * 2000-11-03 2002-05-08 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung von Lipidvesikeln
CA2429814C (en) 2000-12-01 2014-02-18 Thomas Tuschl Rna interference mediating small rna molecules
AU2002219998B2 (en) * 2000-12-01 2006-03-02 Biomira, Inc. Preparation of large liposomes by infusion into peg
EP1386004A4 (en) 2001-04-05 2005-02-16 Ribozyme Pharm Inc MODULATION OF GENE EXPRESSION ASSOCIATED WITH INFLAMMATORY PROLIFERATION AND GROWTH OF NEURITIES BY METHODS INVOLVING NUCLEIC ACID
ES2295351T3 (es) 2001-04-21 2008-04-16 Curevac Gmbh Dispositivo para la inyeccion de rnam.
US20040142892A1 (en) 2001-04-30 2004-07-22 The University Of British Columbia Autogene nucleic acids encoding a secretable RNA polymerase
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
ES2340499T3 (es) 2001-06-05 2010-06-04 Curevac Gmbh Arnm de antigeno tumoral estabilizado con un contenido de g/c aumentado.
US20040063654A1 (en) 2001-11-02 2004-04-01 Davis Mark E. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
AU2003205048B2 (en) * 2002-01-09 2009-02-26 Transave, Inc. Efficient liposomal encapsulation
WO2003059322A1 (en) 2002-01-09 2003-07-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. Efficient nucleic acid encapsulation into medium sized liposomes
WO2003059381A2 (en) 2002-01-18 2003-07-24 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
WO2003097805A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 California Pacific Medical Center Delivery of nucleic acid-like compounds
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
JP2007524349A (ja) 2003-01-16 2007-08-30 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア ＩＣＡＭ−１のｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法
US7803781B2 (en) 2003-02-28 2010-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression
US7067169B2 (en) 2003-06-04 2006-06-27 Chemat Technology Inc. Coated implants and methods of coating
EP1638919B1 (en) 2003-06-18 2012-09-26 Biolab Ltd. Sphingolipids polyalkylamines conjugates
CA2532228C (en) 2003-07-16 2017-02-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
EP1664316B1 (en) 2003-09-15 2012-08-29 Protiva Biotherapeutics Inc. Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof
CA2569664C (en) 2004-06-07 2013-07-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
JP4764426B2 (ja) 2004-06-07 2011-09-07 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド カチオン性脂質および使用方法
EP1773857A4 (en) 2004-07-02 2009-05-13 Protiva Biotherapeutics Inc THE IMMUNE SYSTEM STIMULATING SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF
WO2007086881A2 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
US20060228406A1 (en) 2005-03-17 2006-10-12 Invitrogen Corporation Transfection reagent for non-adherent suspension cells
CN101267805A (zh) 2005-07-27 2008-09-17 普洛体维生物治疗公司 制造脂质体的系统和方法
CA2721333C (en) 2008-04-15 2020-12-01 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
EP2281041B1 (en) 2008-04-15 2014-07-02 Protiva Biotherapeutics Inc. Silencing of csn5 gene expression using interfering rna
WO2011000107A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US9006417B2 (en) 2010-06-30 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
CN103380113B (zh) 2010-11-15 2018-03-30 生命科技公司 含胺的转染试剂及其制备和使用方法
JP6620093B2 (ja) 2013-07-23 2019-12-11 アービュートゥス バイオファーマ コーポレイションＡｒｂｕｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ メッセンジャーｒｎａを送達するための組成物及び方法

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