ES2380687T3

ES2380687T3 - Procedimientos para la preparación de maitansinol

Info

Publication number: ES2380687T3
Application number: ES06844315T
Authority: ES
Inventors: Ravi V.J. Chari; Wayne C. Widdison
Original assignee: Immunogen Inc
Current assignee: Immunogen Inc
Priority date: 2005-11-08
Filing date: 2006-11-08
Publication date: 2012-05-17
Anticipated expiration: 2026-11-08
Also published as: CA2625867A1; CA2625867C; US7411063B2; WO2007056550A2; EP1945647B9; JP2009514978A; EP1945647B1; JP5117390B2; ATE540956T1; DK1945647T3; EP1945647A4; EP1945647A2; WO2007056550A3; PL1945647T3; AU2006311485A1; AU2006311485B2; US20070112188A1

Abstract

Un proceso para preparar maitansinol, que comprende: a) reducir un éster-C3 del maitansinol con un reactivo reductor de hidruro con base de aluminio; b) extinguir la reacción de reducción; y c) someter la mezcla extinguida a una etapa de mantenimiento, en la que dicha etapa de mantenimiento convierte el acetal con puente C3 a C9 en maitansinol.

Description

Procedimientos para la preparación de maitansinol

Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere a procesos mejorados para la preparación de maitansinol y a un acetal con puente aislado de un éster-C3 del maitansinol.

Antecedentes de la invención

[0002] Los maitansinoides son fármacos muy citotóxicos. El primer miembro de esta clase, la maitansina, fue aislado por Kupchan et al. a partir del arbusto africano Maytenus serrata y se demostró que era de 100 a 1000 veces más citotóxico que los agentes quimioterapéuticos del cáncer convencionales, tales como el metotrexato, la daunorubicina, y la vincristina (patente de EEUU nº 3.896.111). Posteriormente, se descubrió que algunos microbios también producen maitansinoides, tales como el maitansinol y los ésteres-C3 del maitansinol (patente de EEUU nº 4.151.042). También se han indicado ésteres-C3 sintéticos del maitansinol y análogos del maitansinol (Kupchan et al., J. Med. Chem., 21:31-37 (1978); Higashide et al., Nature, 270:721-722 (19977); Kawai et al., Chem. Pharm. Bull., 32:3441-3451 (1984)). Los ejemplos de análogos del maitansinol a partir de los cuales se han preparado ésteres-C3 incluyen el maitansinol con modificaciones sobre el anillo aromático (por ejemplo, descloro) o en C-9, C-14 (por ejemplo, grupo metilo hidroxilado), C-15, C-18, C-20 y C-4,5.

[0003] Los ésteres-C3 naturales y sintéticos del maitansinol pueden clasificarse en dos grupos:

(a): la maitansina y sus análogos descritos anteriormente, que son ésteres-C3 con N-metil-L-alanina o derivados de N-metil-L-alanina (patentes de EEUU nº 4.137.230, 4.260.608, 5.208.020; y Chem. Pharm. Bull., 12:3441 (1984)); y

(b): ansamitocinas, que son ésteres-C3 con ácidos carboxílicos sencillos (patentes de EEUU nº 4.268.870, 4.265.814, 4.308.268, 4.308.269, 4.309.428, 4.317.821, 4.322.348, y 4.331.598).

[0004] Las ansamitocinas son una mezcla de compuestos compuestos predominantemente de ansamitocina P-2, ansamitocina P-3, ansamitocina P-3’, ansamitocina P-4 y ansamitocina P-4’ (véase la figura 1). El componente de ansamitocina P-3 de las ansamitocinas generalmente comprende más del 70% del material total en las ansamitocinas. Por tanto, la mezcla a menudo se denomina ansamitocina P-3. Las ansamitocinas se preparan mediante fermentación bacteriana, según se describe en las patentes de EEUU nº 4.162.940, 4.356.265, 4.228.239, y 6.790.954.

[0005] La maitansina, sus análogos y cada una de las especies de ansamitocina son ésteres-C3 del maitansinol que pueden convertirse en maitansinol mediante la escisión de sus respectivas cadenas laterales de éster. Las estructuras de los maitansinoles y varios ésteres-C3 se muestran en la figura 1. Generalmente, la escisión del resto éster se logra a través de una reacción de reducción. Así, por ejemplo, los ésteres-C3 del maitansinol pueden romperse mediante un tratamiento con hidruro de litio y trimetoxialuminio (LATH), o mediante otros hidruros de alcoxialuminio alcalinos a temperaturas reducidas, seguido de una extinción con agua o una disolución salina acuosa, y de una extracción con un disolvente orgánico para producir el maitansinol, según se describe en la patente de EEUU nº 6.333.410. El maitansinol es el material de partida habitual para la preparación de diversos fármacos de maitansinoides, según se describe en las patentes de EEUU nº 4.322.348, 4.331.598 y 6.333.410. Así, los procesos para preparar el maitansinol descritos hasta la fecha son tediosos de realizar y largos, porque los subproductos con base de aluminio de la reducción pueden formar suspensiones o geles que son difíciles de extraer y pueden retener cantidades significativas del producto (Anderson, N., “Practical Process Research & Development” (2000), ISBN nº 75-7, pg. 72.

Sumario de la invención

[0006] La presente invención se refiere a métodos mejorados para preparar el maitansinol mediante la reducción de ésteres-C3 del maitansinol. Los métodos producen mejores rendimientos del maitansinol minimizando la formación de productos secundarios no deseados. Un procesamiento simplificado también ayuda a disminuir el potencial de la exposición humana a productos químicos peligrosos.

[0007] Un hallazgo sorprendente que condujo a esta invención es que un importante subproducto no deseado formado durante la reducción de los ésteres-C3 del maitansinol, tal como las ansamitocinas, con un agente reductor de hidruro con base de aluminio, tal como LiAlH4 o LiAl(OMe)3H, es un acetal con puente C3 a C9 del maitansinol. Por tanto, la invención describe un proceso para preparar un maitansinol sustancialmente exento de acetales con puente a partir de ésteres-C3 del maitansinol. La reducción de los ésteres-C3 del maitansinol se realiza como se describe en la patente de EEUU nº 6.333.410, seguido de una extinción acuosa, que produce una mezcla básica. Tras la extinción, esta invención añade una importante etapa de mantenimiento. La etapa de mantenimiento comprende mantener la mezcla extinguida a una temperatura adecuada durante un periodo de tiempo adecuado para facilitar la conversión de cualquier acetal con puente al maitansinol deseado.

[0008] Después de que el acetal con puente se haya convertido en maitansinol, puede añadirse una base acuosa

o un tampón acuoso a la mezcla extinguida para minimizar con ello cualquier descomposición del maitansinol, y se añade un disolvente inmiscible en agua para precipitar los subproductos con base de aluminio del agente reductor no deseados. Como alternativa, cualquier subproducto con base de aluminio no deseado puede solubilizarse

5 disminuyendo el pH hasta aproximadamente 2 o menor.

[0009] Otro aspecto de la invención se refiere al aislamiento del acetal con puente, y también a métodos para convertir el acetal con puente aislado en maitansinol bajo condiciones básicas o ácidas. [0010] Por consiguiente, un aspecto de la invención es un proceso para preparar el maitansinol, que comprende:

a) reducir un éster-C3 del maitansinol con un reactivo reductor de hidruro con base de aluminio; 10 b) extinguir la reacción de reducción; y c) someter la mezcla extinguida a una etapa de mantenimiento, en la que dicha etapa de mantenimiento

convierte el acetal con puente C3 a C9 en maitansinol. [0011] Otro aspecto de la invención es un acetal con puente C3 a C9 aislado de un éster-C3 del maitansinol. [0012] Otro aspecto de la invención es un proceso para preparar un acetal con puente C3 a C9 aislado de un

15 éster-C3 del maitansinol, que comprende: a) reducir un éster-C3 del maitansinol con un agente reductor de hidruro con base de aluminio; b) extinguir la reacción de reducción, para formar con ello un acetal con puente C3 a C9 de dicho éster-C3

del maitansinol; y c) aislar el acetal con puente. 20 [0013] Otro aspecto de la invención proporciona un acetal con puente C3 a C9 aislado, que es un compuesto representado por la fórmula (I’):

Fórmula (I’)

en la que:

X1 representa H, Cl, o Br; X2 representa H, o Me; X3 representa H, Me, o Me(CH2)pCOO, en el que p es entre 0-10; y

25 R1 representa alquilo, CH(CH3)N(CH3)Q, o CH(CH3)N(CH3)COR4; Q representa H, o un grupo protector de amino; y R4 representa alquilo, arilo, o (CH2)n(CR6R7)mSV, en el que n representa 0-9, m representa 0-2, con la condición de que m y n no son 0 al mismo tiempo, R6 representa H, alquilo o arilo, R7 representa H, alquilo o arilo, y V representa H, o un grupo protector de tiol.

[0014] En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto representado por la fórmula (I):

Fórmula (I)

en la que R1 representa alquilo, CH(CH3)N(CH3)Q, o CH(CH3)N(CH3)COR4; Q representa H, o un grupo protector de amino; y R4 representa alquilo, arilo, o (CH2)n(CR6R7)mSV, en el que n representa 0-9, m representa 0-2, con la condición de que m y n no son 0 al mismo tiempo, R6 representa H, alquilo o arilo, R7 representa H, alquilo o arilo, y V representa H, o un grupo protector de tiol.

Breve descripción de los dibujos

[0015] La figura 1a muestra la fórmula del maitansinol, y la figura 1b muestra las fórmulas de las principales especies de ansamitocinas que están presentes en una mezcla de ansatomicinas aisladas a partir de una fermentación bacteriana.

[0016] La figura 2 muestra la fórmula de la maitansina y algunos de sus análogos, y de análogos de maitansina que portan el resto N-metil-D-alanina no natural.

[0017] La figura 3 muestra la fórmula estructural de las especies de acetales con puente C3 a C9 producidas a partir de la reducción de la ansamitocina P-3. La fórmula estructural de la ansamitocina P-3 también se muestra como comparación. La cadena lateral de acetal del acetal con puente y la cadena lateral de éster de la ansamitocina P-3 están rodeadas con un círculo.

[0018] La figura 4 muestra un posible mecanismo para la conversión de acetales con puente C3 a C9 del maitansinol en maitansinol. El acetal con puente se ilustra mediante el compuesto de fórmula general (I) según se describe en la presente.

Descripción detallada de la invención

[0019] Los ésteres-C3 del maitansinol, tales como ansamitocinas, maitansina y derivados de maitansina, pueden reducirse mediante diversos agentes reductores de hidruro con base de aluminio, tales como LiAlH4 o LiAl(OMe)3H, a baja temperatura para producir el maitansinol, tal como se describe en la figura 2 de la patente de EEUU nº

6.333.410. La extinción de estas reacciones de reducción con agua o sales acuosas produce una mezcla muy básica, es decir, con un pH mayor que 11, que puede provocar la descomposición significativa del producto si se deja que la mezcla se caliente. Se ha intentado evitar cualquier descomposición del producto extinguiendo la reacción con agua y añadiendo inmediatamente ácido para neutralizar el pH antes de dejar que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente. Cuando se intentó este procedimiento para la reducción de ansamitocinas se obtuvo una cantidad significativa de un acetal con puente C3 a C9 del éster-C3 del maitansinol, dando como resultado un menor rendimiento del maitansinol deseado. La cadena lateral del acetal con puente derivado de la reducción del éster-C3 del maitansinol es idéntica a la cadena lateral del éster-C3, lo cual indica que la reducción de ésteres-C3 del maitansinol produce un acetal con puente que tiene la misma cadena lateral que la del material de partida (figura 3). El análisis de muestras de maitansinol brutas producidas mediante la reducción de ansamitocinas utilizando el método descrito en la patente de EEUU nº 6.333.410 indica que estas muestras también contienen acetales con puente.

[0020] La invención describe un método para reducir ésteres-C3 del maitansinol, seguido de una extinción y de una etapa de mantenimiento, que permite que cualquier acetal con puente formado en la reducción se convierta en maitansinol. Después de completar la conversión, el pH de la mezcla puede ajustarse mediante la adición de un ácido o un tampón acuoso para evitar la descomposición, inducida por bases, del maitansinol producido, y para permitir la precipitación de los subproductos con base de aluminio añadiendo un disolvente inmiscible en agua.

[0021] El material de partida para el método para preparar maitansinol puede ser cualquier éster-C3 del maitansinol natural o sintético, y los análogos del maitansinol adecuados que tengan un anillo aromático modificado

o modificaciones en posiciones distintas de la posición C3. Los ejemplos específicos de análogos del maitansinol adecuados que tienen un anillo aromático modificado incluyen:

(1): C-19-descloro (patente de EEUU nº 4.256.746) (preparado mediante una reducción con LAH de la ansamitocina P2);

(2): C-20-hidroxi (o C-20-desmetilo) +/- C-19-descloro (patentes de EEUU nº 4.361.650 y 4.307.016)

(preparado mediante una desmetilación utilizando Streptomyces o Actinomyces, o una descloración utilizando LAH); y

(3): C-20-desmetoxi, C-20-aciloxi (-OCOR), +/- descloro (patente de EEUU nº 4.294.757) (preparado mediante una acilación utilizando cloruros de acilo).

[0022] Los ejemplos específicos de análogos del maitansinol adecuados que tienen modificaciones en otras posiciones incluyen:

(1): C-9-SH (patente de EEUU nº 4.424.219) (preparado mediante la reacción del maitansinol con H2S o P2S5);

(2): C-14-alcoximetilo (desmetoxi/CH2OR) (patente de EEUU nº 4.331.598);

(3): C-14-hidroximetilo o aciloximetilo (CH2OH o CH2OAc) (patente de EEUU nº 4.450.254) (preparado a partir de Nocardia);

(4): C-15-hidroxi/aciloxi (patente de EEUU nº 4.364.866) (preparado mediante la conversión del maitansinol por Streptomyces);

(5): C-15-metoxi (patentes de EEUU nº 4.313.946 y 4.315.929) (aislado a partir de Trewia nudiflora);

(6): C-18-N-desmetilo (patentes de EEUU nº 4.362.663 y 4.322.348) (preparado mediante la desmetilación del maitansinol por Streptomyces); y

(7): 4,5-desoxi (patente de EEUU nº 4.371.533) (preparado mediante la reducción con tricloruro de titanio/LAH del maitansinol).

[0023] Tal como se emplea en la presente, la expresión “éster-C3 del maitansinol” incluye ésteres-C3 de análogos del maitansinol adecuados, tales como los descritos anteriormente. Cualquiera de los análogos descritos anteriormente y cualquier otro análogo conocido del maitansinol puede tener numerosos ésteres en la posición C3 conocidos. Así, los expertos en la técnica puede imaginar con facilidad numerosos ésteres-C3 de análogos del maitansinol adecuados que sean apropiados para su uso como material de partida. Los ejemplos no limitantes de ésteres-C3 del maitansinol incluyen el antibiótico C-15003PND, también conocido como C18-Ndesmetilansamitocina (patente de EEUU nº 4.322.348), 20-desmetoxi-20-aciloximaitansina (patente de EEUU nº 4.294.757), 19-descloromaitansina, y 20-desmetoxi-20-acetoxi-19-descloromaitansina (patente de EEUU nº 4.294.757).

[0024] La etapa de reducir un éster-C3 del maitansinol con un agente reductor de hidruro con base de aluminio es muy conocida en la técnica. Los ejemplos no limitantes de agentes reductores de hidruro con base de aluminio adecuados incluyen LiAlH4, LiAl(OMe)3H, hidruro de bis(2-metoxietoxi)aluminio y sodio, LiAl(OMe)2,5H1,5, y otros hidruros de alcoxialuminio alcalinos preparados mediante la adición de una cantidad no estequiométrica de un alcohol a un hidruro de aluminio alcalino. Se prefiere el LiAl(OMe)3H.

[0025] La temperatura y otras condiciones para la reducción de los ésteres-C3 del maitansinol se describen en la patente de EEUU nº 6.333.410, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

[0026] Después de un periodo de tiempo adecuado determinado con facilidad por los expertos en la técnica, la reacción de reducción se extingue con agua o sales acuosas, también descrito en la patente de EEUU nº 6.333.410. Esta extinción produce una mezcla con un pH básico.

[0027] Los acetales con puente C3 a C9 formados en la reacción de reducción entonces pueden convertirse en maitansinol dejando en reposo la mezcla extinguida básica durante un periodo de mantenimiento. La etapa de mantenimiento comprende mantener la mezcla extinguida a una temperatura adecuada durante un periodo de tiempo adecuado para facilitar la conversión de cualquier acetal con puente en el maitansinol deseado. De manera deseable, la etapa de mantenimiento comprende mantener la mezcla extinguida a una temperatura de aproximadamente -15 ºC a aproximadamente -50 ºC durante un periodo de al menos aproximadamente 0,25 y 5 horas o mayor. La etapa de mantenimiento bajo las condiciones básicas permite que cualquier acetal con puente formado durante la reacción de reducción se convierta en maitansinol. El tiempo necesario para la etapa de mantenimiento bajo las condiciones descritas anteriormente dependerá de varios factores, tales como la escala de la reacción, la concentración, y las temperaturas de extracción, y puede determinarse controlando la conversión del acetal con puente en maitansinol. Por ejemplo, se extrae una muestra de una parte alícuota de la reacción y se analiza. Los expertos en la técnica comprenderán que las muestras pueden prepararse y analizarse mediante varios métodos, algunos de los cuales incluyen, pero no se limitan a una cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en fase normal, una HPLC en fase inversa, y una cromatografía en capa fina. En un caso representativo, las ansamitocinas se reducen con LiAl(OMe)3H y después se extingue con agua. Se añade una pequeña parte alícuota de la reacción extinguida a una mezcla de agua:ácido acético:acetato de etilo 0,3:0,05:1 (v:v:v). Esto básicamente detiene la conversión del acetal con puente a maitansinol. La capa orgánica de la muestra de ensayo se analiza para determinar si la conversión del acetal con puente en maitansinol es completa, o si debe extenderse el periodo de mantenimiento. Las ansamitocinas, el maitansinol y el acetal con puente pueden separarse mediante una cromatografía de sílice en capa fina y mediante una HPLC en fase inversa. El análisis mediante TLC o HPLC permite controlar la conversión de las ansamitocinas en los acetales con puente, y la conversión de los acetales con puente en maitansinol.

[0028] Aunque es más conveniente convertir el acetal con puente en maitansinol bajo condiciones básicas, el acetal con puente también puede convertirse bajo condiciones ácidas. La conversión del acetal con puente en maitansinol bajo condiciones ácidas no resulta sorprendente, puesto que la ruptura de los grupos protectores de acetal es habitual en las síntesis orgánicas. Aunque sin pretender limitarse a ninguna explicación, se cree que la conversión del acetal con puente en maitansinol mediante una base acuosa se produce por la desprotonación del carbamato cíclico con la eliminación del aldehído (figura 4).

[0029] Cuando el acetal con puente se convierte en maitansinol, el maitansinol resultante puede aislarse mediante varios medios conocidos por los expertos en la técnica. Para evitar la descomposición del maitansinol resultante, el pH de la mezcla extinguida básica puede ajustarse de aproximadamente 3 a aproximadamente 9, lo más preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 7, añadiendo un tampón ácido o acuoso. Los ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido fórmico, y ácido acético. De éstos, los ácidos preferidos son el ácido fórmico y el ácido acético, puesto que producen un precipitado de subproductos con base de aluminio que puede filtrarse con facilidad.

[0030] Además, para ayudar al aislamiento, los subproductos con base de aluminio pueden precipitarse al pH ajustado mediante la adición de un disolvente inmiscible en agua tal como, por ejemplo, acetato de etilo, acetato de butilo, o diclorometano. El pH puede ajustarse y el disolvente inmiscible en agua añadirse simultáneamente, o estas etapas pueden realizarse por separado y en cualquier orden. El ácido y el disolvente inmiscible en agua se añaden a 0 ºC o menos, preferiblemente entre -20 ºC y -60 ºC, más preferiblemente entre -25 ºC a -50 ºC, y lo más preferiblemente entre -30 ºC y -40 ºC, para precipitar los subproductos con base de aluminio. Los subproductos con base de aluminio precipitados pueden retirarse mediante varios medios conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el precipitado puede filtrarse con facilidad, y puede verse que el filtrado está sustancialmente exento de acetales con puente del material de partida de éster-C3.

[0031] Tal como se emplea en la presente, “sustancialmente exento” en este contexto indica que quedan menos del 10% en peso de los acetales con puente de los ésteres-C3 de partida. Más preferiblemente, quedan menos del 5% de los acetales con puente, y lo más preferiblemente quedan menos del 2% de los acetales con puente.

[0032] Como altenativa, en lugar de precipitar los subproductos con base de aluminio puede añadirse un ácido fuerte, tal como ácido clorhídrico o ácido sulfúrico, después de la extinción para ajustar el pH a aproximadamente 2 o menor, para disolver los subproductos con base de aluminio. La disolución de los subproductos con base de aluminio permite una extracción eficaz de la fase acuosa. La cantidad de ácido necesaria para disolver los subproductos con base de aluminio dependerá de la concentración y del tipo de ácido utilizado, y la determinación de esto está dentro de los conocimientos de los expertos en la técnica.

[0033] Las condiciones muy ácidas necesarias para disolver los subproductos con base de aluminio pueden descomponer potencialmente una porción significativa del maitansinol. Sin embargo, puesto que la extracción es eficaz y los subproductos con base de aluminio sólidos se disuelven bajo condiciones ácidas, puede llevarse a cabo una extracción rápida con facilidad. El uso de un extractor centrífugo, por ejemplo, puede permitir realizar la extracción mientras se expone el material a unas condiciones muy ácidas durante sólo unos pocos minutos o quizás segundos. Se ha empleado una extracción centrífuga ácida representativa para la extracción de penicilina (Podbielniak, W.J., Kaiser, H.R., Ziegenhorn, G.J. (1970), “Centrifugal solvent extraction in the History of Penicillin Production”, Chem. Eng. Prog. Symp., vol. 66, pp. 44-50). Los expertos en la técnica saben que el grado de descomposición del producto bajo condiciones ácidas dependerá del tiempo de exposición, y que están disponibles muchos métodos para realizar extracciones rápidas. El maitansinol extraído estará sustancialmente exento de acetales con puente del material de partida de éster-C3.

[0034] Otro aspecto de la invención consiste en proporcionar acetales con puente C3 a C9 del maitansinol aislados. El acetal con puente es, en efecto, una forma del maitansinol que tiene un grupo protector en los alcoholes C3 y C9, de modo que puede utilizarse para preparar derivados maitansinoides sintéticos. Cualquier análogo del maintansinol, tales como los descritos en la presente, puede tener cualquiera de una serie de numerosas estructuras de puente, incluyendo las descritas en la presente. Por tanto, los expertos en la técnica pueden imaginar numerosos acetales con puente C3-C9 abarcados por la presente invención.

[0035] Los acetales con puente C3-C9 representativos incluyen compuestos de fórmula (I’):

Fórmula (I’)

en la que:

R1 representa alquilo, CH(CH3)N(CH3)Q, o CH(CH3)N(CH3)COR4.

[0036] Cuando R1 es alquilo, los alquilos preferidos con grupos alquilo C1-C4, tales como CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH2CH3, CH(CH3)CH2CH3, CH2CH(CH3)2, y (CH2)3CH3.

[0037] Cuando R1 es CH(CH3)N(CH3)Q, Q es H, o Q representa un grupo protector de amino, muchos de los cuales se describen en “Protective groups in organic synthesis”, 2ª edición. Los grupos Q representativos incluyen, pero no se limitan a sulfenamidas, tales como S-alquilo y S-arilo, carbamatos, tales como COO-alquilo, COO-arilo, COOCH2CH2SiMe3, COOCMe3, COOCH2CCl3, y COOCH2CF3, y grupos sililo, tales como SiMe3 y SiMe2-tBu. Cuando parte de Q es alquilo, los grupos alquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a grupos alquilo C1-C10, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, ciclopentilo y similares. Además, cuando parte de Q es arilo, los grupos arilo adecuados incluyen, pero no se limitan a grupos arilo o heterocíclicos sencillos o sustituidos de C1-C12, tal como fenilo, piridilo, y naftilo.

[0038] Cuando R1 es CH(CH3)N(CH3)COR4, R4 se selecciona de alquilo, arilo o (CH2)n(CR6R7)mSV, en el que n representa 0-9, m representa 0-2, con la condición de que m y n no son 0 al mismo tiempo; R6 representa H, alquilo

o arilo, R7 representa H, alquilo o arilo, y V representa H, o un grupo protector de tiol, muchos de los cuales se describen en “Protective groups in organic synthesis”, 2ª edición. Los grupos protectores de tiol representativos incluyen, pero no se limitan a arilo, S-alquilo, S-arilo, SiMe3, SiMe2-tBu, ArNO2, Ar(NO2)2, CO-alquilo, CO-arilo, en los que cuando parte de V es un alquilo, los grupos alquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a alquilo lineal, alquilo ramificado, o alquilo cíclico de C1-C10, tales como metio, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, ciclopentilo y similares. Además, cuando parte de V es un arilo, los grupos arilo adecuados incluyen, pero no se limitan a grupos arilo o heterocíclicos sencillos o sustituidos de C1-C12, tal como fenilo, piridilo, y naftilo. Los expertos en la técnica comprenderán que el grupo R1 presente en la cadena lateral de acetal puede variarse reduciendo un éster-C3 de maitansinol que tiene la correspondiente cadena lateral de éster-C3.

[0039] Con respecto a los grupos representados por R4, los grupos alquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a alquilo C1-C10 lineal y alquilo C3-C10 ramificado o cíclico, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, ciclopentilo y similares. Además, con respecto a los grupos representados por R4, los grupos arilo adecuados incluyen, pero no se limitan a un grupo arilo o heterocíclico C3-C12 sencillo o sustituido, tal como fenilo, piridilo y naftilo.

[0040] Con respecto a los grupos representados por R6 y R7, los grupos alquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a grupos alquilo C1-C10 lineales, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, ciclopentilo y similares. Además, con respecto a los grupos representados por R6 y R7, los grupos arilo adecuados incluyen, pero no se limitan a un grupo arilo o heterocíclico C3-C12 sencillo o sustituido, tal como fenilo, piridilo y naftilo.

[0041] En otro aspecto, el acetal con puente se representa mediante la fórmula (I):

Fórmula (I)

en la que R1 es como se definió anteriormente para la fórmula (I’).

[0042] Los acetales con puente puede prepararse como subproductos de la reducción de ésteres-C3 del maitansinol según se describió anteriormente, y pueden aislarse mediante cromatografía tal como, pero sin limitarse a cromatografía en fase normal, cromatografía en sílice, cromatografía en sílice unida a ciano, o cromatografía en fase inversa. Un ejemplo de un aislamiento de este tipo se indica en el ejemplo 3.

[0043] El acetal con puente aislado se convierte en maitansinol mediante una incubación con un ácido o una base a una temperatura que varía de aproximadamente 40 ºC a aproximadamente -40 ºC. Generalmente, la reacción se realiza a temperatura ambiente. El tiempo necesario para la reacción dependerá de varios factores, tales como el pH, la temperatura, la escala de la reacción, y la concentración, y puede controlarse mediante HPLC. Los ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido acético y ácido fórmico. Las bases adecuadas incluyen trietilamina, diisopropiletilamina, NaOH o cualquier base fuerte. Para la conversión bajo condiciones ácidas, el pH se ajusta entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5, de forma óptima entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4. Para la conversión bajo condiciones básicas, el pH se ajusta entre aproximadamente 8 y aproximadamente 13, de forma óptima entre aproximadamente 9 y aproximadamente 12.

[0044] Los expertos en la técnica reconocerán y comprenderán que los equivalentes funcionales de los procedimientos, las condiciones de procesamiento y las técnicas ilustrados en la presente pueden utilizarse a gran escala (por ejemplo, industrial). Esta invención pretende abarcar todos estos equivalentes conocidos.

Ejemplos

Materiales y métodos

[0045] La presente invención se describe más a fondo mediante los siguientes ejemplos, que son ilustrativos del proceso. Los parámetros del proceso que se ofrecen a continuación pueden ser adoptados y adaptados por los expertos en la técnica para ajustarse a sus necesidades concretas.

[0046] Todas las reacciones se realizaron bajo una atmósfera de argón con agitación magnética. Las temperaturas del baño de enfriamiento se mantuvieron utilizando acetona como disolvente y una unidad de enfriamiento NesLab CC-100. El tetrahidrofurano se adquirió como un disolvente anhidro en Aldrich. Los ésteres-C3 del maitansinol, tales como ocinas, se produjeron según se describe en la patente de EEUU nº 6.790.954. El D-DM1-SMe se preparó según se describe en la patente de EEUU nº 6.333.410. El D-DM4-SMe se preparó según se describe en la publicación de patente de EEUU nº 2004/0235840. Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) se obtuvieron a 400 MHz utilizando un Bruker ADVANCET de serie RMN. Se empleó un espectrómetro de masas de trampa de iones Bruker ESQUIRET 3000 para obtener los espectros de masas y se utilizó en línea o separado de un Agilent 1100 de serie HPLC. Cuando resultó pertinente, las muestras se analizaron utilizando el método de HPLC analítica en fase inversa descrito a continuación. Además, cuando resultó pertinente, las muestras se purificaron utilizando el método de HPLC preparativa descrito a continuación. Los ensayos cromatográficos en capa fina (TLC) analíticos se realizaron utilizando placas de sílice de TLC y una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v).

[0047] Método de HPLC:

A. Método de HPLC en fase inversa analítica:

Columna: Kromasil C8 150 x 4,6 mm, 5 micrones. Temperatura: ambiente. Caudal: 1,0 ml/min. Volumen de inyección : 4,0 microlitros.

Tiempo: % de agua desionizada + ácido trifluoroacético al 0,1% % de acetonitrilo

0: 63 37

15: 58 42

25: 42 58

35: 32 68

36: 63 37

43: 63 37

B. Método de HPLC en fase inversa preparativa:

Columna: Kromasil C8 250 x 20 mm, 10 micrones. Temperatura: ambiente. Caudal: 19 ml/min. Volumen de inyección : generalmente entre 0,1-0,2 ml.

Tiempo % de agua desionizada % de acetonitrilo

0 63 37

15 58 42

25 42 58

35 32 68

36 63 37

43 63 37

Ejemplo 1: Preparación de LiAl(OMe)3H 0,67 M

[0048] Un matraz de 200 ml de tres bocas se dotó de una barra de agitación magnética y un termómetro. Se trasladó al matraz una disolución de hidruro de aluminio y litio 1 M de LiAlH4 en tetrahidrofurano (71 ml, 71 mmol) y 26,8 ml de tetrahidrofurano mediante una jeringa. El matraz se enfrió en un baño a -60 ºC con agitación hasta que los contenidos alcanzaron -43 ºC. Se añadió gota a gota una disolución de 8,7 ml de metanol (6,85 g, 214 mmol) en 8,0 ml de tetrahidrofurano mediante una jeringa mientras se mantenía la temperatura de los contenidos por debajo de -40 ºC y -45 ºC. La disolución se agitó a -45 ºC durante 10 min más.

Ejemplo 2: Preparación de LiAl(OMe)2,5H1,5

[0049] Un matraz de 200 ml de tres bocas se dotó de una barra de agitación magnética y un termómetro. Se trasladó al matraz una disolución de hidruro de aluminio y litio 1 M de LiAlH4 en tetrahidrofurano (71 ml, 71 mmol) y 28 ml de tetrahidrofurano mediante una jeringa. El matraz se enfrió en un baño a -60 ºC con agitación hasta que los contenidos alcanzaron -43 ºC. Se añadió gota a gota una disolución de 7,25 ml de metanol (5,71 g, 178 mmol) en 8,0 ml de tetrahidrofurano mediante una jeringa mientras se mantenía la temperatura de los contenidos por debajo de -40 ºC y -45 ºC. La disolución se agitó a -45 ºC durante 10 min más.

Ejemplo 3: Preparación del compuesto de acetal con puente que aparece en la fórmula (I), R1 = CH(CH3)2

[0050] Este ejemplo describe la preparación del compuesto de acetal con puente que aparece en la fórmula (I), en la que R1 es CH(CH3)2, por la reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)3H, seguido de una extinción con ácido fórmico acuoso. Las ansamitocinas (3,0 g, 4,72 mmol) se pesaron en un matraz de tres bocas equipado con un termómetro. Se añadió tetrahidrofurano (15 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -57 ºC. Cuando los contenidos del matraz alcanzaron -35 ºC, se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (56 ml, 37,7 mmol) mediante una jeringa utilizando una bomba para jeringa. La temperatura de la reacción se mantuvo entre -30 ºC y -40 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre -34 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota al matraz una disolución de ácido fórmico al 88% (1,85 ml, 2,16 g, 41,5 mmol) en 23 ml de agua desionizada a una velocidad que no produjo una excesiva formación de espuma, seguido de 66 ml de acetato de etilo. Se retiró el baño de enfriamiento y se dejó que la mezcla se calentase hasta la temperatura ambiente. Se comprobó el pH de la mezcla con papel para pH, y se descubrió que era aproximadamente pH 6. Los subproductos con base de aluminio precipitados se retiraron mediante una filtración al vacío, y el disolvente se eliminó del filtrado mediante evaporación rotatoria al vacío. Se añadió acetato de butilo (10 ml) al residuo, y el disolvente entonces se evaporó para eliminar el agua residual. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando diclorometano:metanol 95:5 (v:v) produciendo una banda de elución más tardía (maitansinol) y una banda de elución más temprana. La banda de maitansinol se recogió, y el disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria para producir 1,55 g de maitansinol (58% de rendimiento en peso). El disolvente se eliminó de la banda de elución más temprana, y el material se disolvió en un volumen mínimo de acetonitrilo, y después se purificó mediante una HPLC en fase inversa preparativa. El compuesto de fórmula (I) (tiempo de retención 26 min) se recuperó, y el disolvente se eliminó mediante una evaporación rotatoria para producir 440 mg (15% de rendimiento en peso). Caracterización del maitansinol: RMN de1H (CDCl3) 8 0,83 (s, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,30 (d, 3H, J = 6,0 Hz), 1,50 (m, 2H), 1,69 (s, 3H), 2,10 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 2,52 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 2,88 (d, 1H, J = 5,4 Hz), 3,12 (d, 1H, J = 12,7 Hz), 3,2 (s, 3H), 3,36 (s, 3H), 3,46 (m, 2H), 3,54 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 3,64 (s a, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,36 (dd, 1H, J = 12, 1,0 Hz), 5,53 (dd, 1H, J = 15, 9,3 Hz), 6,14 (d, 1H, J = 11 Hz), 6,14 (d, 1H, J = 11 Hz), 6,27 (s, 1H), 6,44 (dd, 1H, J = 15, 11 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 6,96 (d, 1H, J = 1,8 Hz); Caracterización del compuesto de fórmula (I): R1 = CH(CH3)2: RMN de 1H (CDCl3) 8 0,78 (s, 3H), 0,97 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 1,04 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 1,23 (m, 1H), 1,28 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 1,54 (m, 1H), 1,66 (s, 3H), 1,72 (m, 2H), 2,03 (dd, 1H, J = 14, 3,6 Hz), 2,3 (d, 1H, J = 14 Hz), 2,49 (dd, 1H, J = 11,7, 14 Hz), 2,92 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 3,14 (s, 3H), 3,12 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,52 (m, 3H), 3,65 (m, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,31 (m, 2H), 5,52 (dd, 1H, J = 16, 8,7 Hz), 6,13 (d, 1H, J = 11 Hz), 6,34 (s, 1H), 6,45 (dd, 1H, J = 16, 11 Hz), 6,80 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 1,5 Hz); MS (M+1 encontrado: 619,3, M+1 calculado: 619,2).

Ejemplo 4: Conversión del compuesto de fórmula (I), R1 = CH(CH3)2, en maitansinol bajo condiciones básicas (pH 11) a temperatura ambiente

[0051] Este ejemplo describe la conversión del compuesto de fórmula (I), en la que R1 es CH(CH3)2, a maitansinol bajo condiciones básicas (pH 11) a temperatura ambiente. Se añadió diisopropiletilamina a una disolución de 30 ml de tetrahidrofurano y 10 ml de agua desionizada mientras se controla el pH utilizando un pH-metro hasta que se obtuvo un pH de 11. El compuesto de fórmula (I) (3,0 mg, mmol) preparado en el ejemplo 3 se disolvió en 1,5 ml de una disolución de tetrahidrofurano/agua a pH 11 a temperatura ambiente y se mezcló bien. La disolución se analizó mediante HPLC/MS en diversos momentos. El tiempo de retención del producto y el espectro de masas se correspondían con los del maitansinol auténtico. La conversión fue aproximadamente ½ completa después de 15 min.

Ejemplo 5: Conversión de los acetales con puente de fórmula (I) en maitansinol bajo condiciones ácidas (pH 2,0) a temperatura ambiente

[0052] Se añadió ácido trifluoroacético a una disolución de 30 ml de tetrahidrofurano y 10 ml de agua desionizada mientras se controla el pH utilizando un pH-metro hasta que se obtuvo un pH de 2,0. El compuesto de fórmula (I) (3,0 mg, mmol) se disolvió en 1,5 ml de una disolución de tetrahidrofurano/agua a pH 2 a temperatura ambiente y se mezcló bien. La disolución se analizó mediante HPLC/MS en diversos momentos. El tiempo de retención del producto y el espectro de masas se correspondían con los del maitansinol auténtico. La conversión fue aproximadamente ½ completa después de 1 hora.

Ejemplo 6: Ensayo para determinar el porcentaje de conversión de los acetales con puente de fórmula (I) a maitansinol

[0053] Se añadieron con rapidez aproximadamente 0,2 ml de la mezcla de reacción a un tubo de ensayo que contenía 0,3 ml de agua, 0,05 ml de ácido acético, y 1 ml de acetato de etilo, y se mezcló bien. La mezcla resultante no convirtió el acetal con puente de fórmula (I) en maitansinol a ninguna tasa apreciable. La capa orgánica junto con el maitansinol auténtico, las ansamitocinas auténticas y el compuesto de fórmula (I) se analizaron mediante una cromatografía en capa fina utilizando diclorometano:metanol 95:5 (v:v). Las bandas de la mezcla de reacción tratada se identificaron si comigraban con uno de los compuestos auténticos. La capa orgánica también se analizó diluyendo primero un volumen de acetonitrilo y analizando mediante HPLC en fase inversa. Los tiempos de retención de las ansamitocinas auténticas, el maitansinol auténtico y el compuesto de fórmula (I) se determinaron a 16,2 min, 8,7 min, y 16,9 min, respectivamente.

Ejemplo 7: Reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)3H utilizando agua, seguido de una extinción con ácido fórmico acuoso para producir maitansinol

[0054] Las ansamitocinas (3,0 g, 4,72 mmol) se pesaron en un matraz de tres bocas equipado con un termómetro. Se añadió tetrahidrofurano (15 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -50 ºC. Cuando los contenidos del matraz alcanzaron -35 ºC, se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (56 ml, 37,7 mmol) mediante una jeringa utilizando una bomba para jeringa. La temperatura de la reacción se mantuvo entre -30 ºC y -40 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre -32 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota agua desionizada (7,7 ml) a la reacción a -35 ºC para producir una mezcla extinguida básica. La mezcla extinguida básica se analizó después de unos periodos de mantenimiento ajustados mediante el ensayo de cromatografía en capa fina descrito en el ejemplo 6. El compuesto de fórmula (I) se detectó después de un mantenimiento durante 5 y 15 minutos. Después de 30 minutos, una muestra de la mezcla extinguida básica se analizó de nuevo mediante el método de la cromatografía en capa fina. Ya no se detectó compuesto de fórmula (I). Entonces se añadió ácido fórmico acuoso (agua desionizada, 15 ml y ácido fórmico al 88%, 1,85 ml) al matraz, seguido de 66 ml de acetato de etilo. Se desconectó la unidad de enfriamiento, y se dejó que la mezcla se calentase lentamente hasta la temperatura ambiente. Se comprobó el pH de la mezcla con papel para pH, y se descubrió que era aproximadamente pH 6. Los subproductos de aluminio precipitados se retiraron mediante una filtración al vacío. El disolvente se evaporó del filtrado mediante evaporación rotatoria al vacío. Se añadió acetato de butilo al residuo, y el disolvente entonces se evaporó para eliminar el agua remanente. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v) para producir 2,2 g de maitansinol (85% de rendimiento en peso).

Ejemplo 8: Reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)2,5H1,5, seguido de una extinción acuosa y una neutralización del pH con ácido fórmico

[0055] Este ejemplo describe la reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)2,5H1,5 utilizando agua, seguido de una extinción con ácido fórmico acuoso. Las ansamitocinas (1,0 g, 1,57 mmol) se pesaron en un matraz de tres bocas equipado con un termómetro. Se añadió tetrahidrofurano (5 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -50 ºC. Cuando los contenidos del matraz alcanzaron -35 ºC, se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (18,5 ml, 12,4 mmol) mediante una jeringa utilizando una bomba para jeringa. La temperatura de la reacción se mantuvo entre -30 ºC y -40 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre -32 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota agua desionizada (2,5 ml) a la reacción a -35 ºC para producir una mezcla extinguida básica. La mezcla extinguida básica se analizó mediante el ensayo de cromatografía en capa fina descrito en el ejemplo 6. Se detectó el compuesto de fórmula (I). Después de 30 minutos, la mezcla extinguida básica se analizó de nuevo mediante el método de la cromatografía en capa fina. Ya no se detectó compuesto de fórmula (I). Entonces se añadió ácido fórmico acuoso (agua desionizada, 5 ml y ácido fórmico al 88%, 0,62 ml) al matraz, seguido de 22 ml de acetato de etilo. Se desconectó la unidad de enfriamiento, y se dejó que la mezcla se calentase lentamente hasta la temperatura ambiente. Se comprobó el pH de la mezcla con papel para pH, y se descubrió que era aproximadamente pH 6. La mezcla se filtró al vacío, y el disolvente se eliminó mediante una evaporación rotatoria al vacío. Se añadió acetato de butilo (5 ml) al residuo, y el disolvente entonces se evaporó para eliminar el agua remanente. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v) para producir 0,63 g de maitansinol (71% de rendimiento en peso).

Ejemplo 9: Reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)3H, seguido de una extinción acuosa y una acidificación con HCl

[0056] Este ejemplo describe la reducción de las ansamitocinas con LiAl(OMe)3H utilizando agua, seguido de HCl acuoso. Las ansamitocinas (200 mg, 0,32 mmol) se pesaron en un matraz de fondo redondo de 25 ml. Se añadió tetrahidrofurano (1,0 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -42 ºC. Después de 10 min se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (3,8 ml, 2,52 mmol) mediante una jeringa. La temperatura del baño se mantuvo entre -32 ºC y -42 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre -32 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota 1 ml de agua desionizada a la reacción. Después de un periodo de mantenimiento de 30 min, se añadieron con rapidez al matraz 2 ml de HCl 3 M y 10 ml de acetato de etilo. Se desconectó la unidad de enfriamiento y la mayoría de los subproductos de aluminio entraron en disolución. Los contenidos se trasladaron a un embudo de separación y se mezclaron bien. La capa orgánica se retuvo y se lavó con 2 ml de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y el disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria al vacío. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v) para producir 117 mg de maitansinol (66% de rendimiento en peso).

Ejemplo 10: Reducción de D-DM1-SMe a maitansinol

[0057] Este ejemplo describe la reducción de D-DM1-SMe, mostrado en la figura 2, a maitansinol. Se pesó D-DM1-SMe (10,0 g, 12,7 mmol) en un matraz de tres bocas equipado con un termómetro. Se añadió tetrahidrofurano (40,5 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -50 ºC. Cuando los contenidos del matraz alcanzaron -35 ºC, se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (150 ml, 100 mmol) mediante una jeringa utilizando una bomba para jeringa. La temperatura de la reacción se mantuvo entre -30 ºC y -40 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre 32 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota agua desionizada (20 ml) a la reacción a -35 ºC para producir una mezcla extinguida básica. Después de 30 min se añadió ácido fórmico acuoso (agua desionizada, 40 ml y ácido fórmico al 88%, 5,0 ml) al matraz, seguido de 180 ml de acetato de etilo. Se desconectó la unidad de enfriamiento, y se dejó que la mezcla se calentase lentamente hasta la temperatura ambiente. Se comprobó el pH de la mezcla con papel para pH, y se descubrió que era aproximadamente pH 6. La mezcla se filtró al vacío, y el disolvente se eliminó mediante una evaporación rotatoria al vacío. Se añadió acetato de butilo (25 ml) al residuo, y el disolvente entonces se evaporó para eliminar el agua remanente. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v) para producir 4,83 g de maitansinol (67% de rendimiento en peso).

Ejemplo 11: Reducción de D-DM4-SMe a maitansinol

[0058] Este ejemplo describe la reducción de D-DM4-SMe, mostrado en la figura 2, a maitansinol. Se pesó D-DM4-SMe (501 mg, 0,60 mmol) en un matraz de tres bocas equipado con un termómetro. Se añadió tetrahidrofurano (2,0 ml) al matraz con agitación, y el matraz se enfrió en un baño de enfriamiento a -50 ºC. Cuando los contenidos del 5 matraz alcanzaron -35 ºC, se añadió gota a gota una disolución de LiAl(OMe)3H 0,67 M en tetrahidrofurano (7,1 ml, 4,75 mmol) mediante una jeringa utilizando una bomba para jeringa. La temperatura de la reacción se mantuvo entre -30 ºC y -40 ºC a lo largo de la adición. Después de completar la adición, la reacción se agitó durante 2 horas entre 32 ºC y -37 ºC. Se añadió gota a gota agua desionizada (1 ml) a la reacción a -35 ºC para producir una mezcla extinguida básica. Después de 30 min se añadió ácido fórmico acuoso (agua desionizada, 2,0 ml y ácido fórmico al 10 88%, 0,24 ml) al matraz, seguido de 9 ml de acetato de etilo. Se desconectó la unidad de enfriamiento, y se dejó que la mezcla se calentase lentamente hasta la temperatura ambiente. La mezcla se filtró al vacío, y el disolvente se eliminó mediante una evaporación rotatoria al vacío. Se añadió acetato de butilo (2 ml) al residuo, y el disolvente entonces se evaporó para eliminar el agua remanente. El residuo se purificó mediante una cromatografía en sílice utilizando una fase móvil de diclorometano:metanol 95:5 (v:v) para producir 443 mg de maitansinol (65% de

15 rendimiento en peso).

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un proceso para preparar maitansinol, que comprende: a) reducir un éster-C3 del maitansinol con un reactivo reductor de hidruro con base de aluminio; b) extinguir la reacción de reducción; y c) someter la mezcla extinguida a una etapa de mantenimiento, en la que dicha etapa de mantenimiento

convierte el acetal con puente C3 a C9 en maitansinol. 2.- El proceso de la reivindicación 1, que comprende además ajustar el pH de la mezcla extinguida después de la etapa de mantenimiento a entre aproximadamente 3 y aproximadamente 9, y añadir un disolvente inmiscible en agua, en el que dicho ajuste del pH y dicha adición de un disolvente inmiscible en agua se realizan simultáneamente

o en cualquier orden. 3.- El proceso de la reivindicación 2, en el que el pH se ajusta añadiendo un ácido o un tampón acuoso. 4.- Un proceso para convertir un acetal con puente C3 a C9 de un éster-C3 del maitansinol en maitansinol, que

comprende incubar el acetal con puente con un ácido o una base.
5.- El proceso de la reivindicación 4, en el que el ácido es ácido clorhídrico, ácido fosfórico, ácido trifluoroacético, ácido acético, o ácido fórmico. 6.- El proceso de la reivindicación 2, en el que el disolvente inmiscible en agua se selecciona del grupo que consiste

en acetato de etilo, diclorometano y acetato de butilo.
7.- El proceso de la reivindicación 1, que comprende además ajustar el pH de la mezcla extinguida después de la etapa de mantenimiento a aproximadamente 2 o menor. 8.- El proceso de la reivindicación 1, en el que la etapa de mantenimiento comprende mantener la mezcla extinguida

a una temperatura de aproximadamente -15 ºC a aproximadamente -50 ºC durante un periodo de al menos aproximadamente 0,25 a aproximadamente 5 horas.
9.- El proceso de la reivindicación 4, en el que la base es trietilamina, diisopropiletilamina, NaOH o una base fuerte. 10.- El proceso de la reivindicación 4, en el que la incubación se realiza a una temperatura de aproximadamente 40 ºC a aproximadamente -40 ºC.
11.- Un proceso para preparar un acetal con puente C3 a C9 aislado de un éster-C3 del maitansinol, que comprende:

a) reducir un éster-C3 del maitansinol con un agente reductor de hidruro con base de aluminio; b) extinguir la reacción de reducción, para formar con ello un acetal con puente C3 a C9 de dicho éster-C3 del maitansinol; y

c) aislar el acetal con puente. 12.- El proceso de la reivindicación 11, en el que el aislamiento es mediante cromatografía. 13.- El proceso de la reivindicación 12, en el que la cromatografía es una cromatografía en fase normal o una

cromatografía en fase inversa. 14.- El proceso de la reivindicación 1 o la reivindicación 11, en el que el acetal con puente es un compuesto de fórmula (I):

Fórmula (I)

en la que R1 representa alquilo, CH(CH3)N(CH3)Q, o CH(CH3)N(CH3)COR4; Q representa H, o un grupo protector de amino; y R4 representa alquilo, arilo, o (CH2)n(CR6R7)mSV, en el que n representa 0-9, m representa 0-2, con la condición de que m y n no son 0 al mismo tiempo, R6 representa H, alquilo o arilo, R7 representa H, alquilo o arilo, y V representa H, o un grupo protector de tiol.
15.- El proceso de la reivindicación 14, en el que dicho alquilo representado por R1 es CH3, CH2CH3, CH(CH3)2, CH2CH2CH3, CH(CH3)CH2CH3, CH2CH(CH3)2, o (CH2)3CH3.
16.- El proceso de la reivindicación 14, en el que R1 es CH(CH3)N(CH3)Q.
17.- El proceso de la reivindicación 16, en el que Q representa un grupo protector de amina, seleccionado del grupo que consiste en grupos sulfenamida, grupos carbamato y grupos sililo.
18.- El proceso de la reivindicación 14, en el que R1 es CH(CH3)N(CH3)COR4.
19.- El proceso de la reivindicación 18, en el que R4 es (CH2)n(CR6R7)mSV, y V es un grupo protector de tiol seleccionado del grupo que consiste en arilo, S-alquilo, S-arilo, SiMe3, SiMe2-tBu, ArNO2, Ar(NO2)2, CO-alquilo, y CO-arilo.
20.- El proceso de la reivindicación 18, en el que R4 es CH2CH2SH, CH2CH2SSCH3, CH2CH2CH(CH3)SH, CH2CH2CH(CH3)SSCH3, CH2CH2C(CH3)2SH, o CH2CH2C(CH3)2SSCH3.
21.- El proceso de las reivindicaciones 1, 2, 11 ó 14, en el que el agente reductor de hidruro con base de aluminio se selecciona del grupo que consiste en LiAlH4, LiAl(OMe)3H, LiAl(OMe)2,5H1,5, e hidruro de bis(2-metoxietoxi)aluminio y sodio.
22.- El proceso de la reivindicación 21, en el que el agente reductor de hidruro con base de aluminio es LiAl(OMe)3H.
23.- El proceso de las reivindicaciones 1, 2, 11 ó 14, en el que la reacción de reducción se extingue con agua.
24.- El proceso de las reivindicaciones 1, 2, 11 ó 14, en el que la reacción de reducción se extingue con una disolución salina acuosa.
25.- El proceso de la reivindicación 24, en el que la disolución salina acuosa es una disolución saturada de cloruro de sodio.
26.- El proceso de la reivindicación 11, en el que la reacción de reducción se extingue con una disolución acuosa de tartrato de potasio y sodio.
27.- El proceso de la reivindicación 26, en el que dicho acetal con puente es un compuesto de fórmula (I) según se define en la reivindicación 14.
28.- El proceso de la reivindicación 11, en el que el acetal con puente es un compuesto de fórmula
29.- Un acetal con puente C3 a C9 aislado de un éster-C3 del maitansinol, que es un compuesto de fórmula (I’):

Fórmula (I’)

en la que:

X1 representa H, Cl, o Br; X2 representa H, o Me; X3 representa H, Me, o Me(CH2)pCOO, en el que p es entre 0-10; y

5 R1 representa alquilo, CH(CH3)N(CH3)Q, o CH(CH3)N(CH3)COR4; Q representa H, o un grupo protector de amino; y R4 representa alquilo, arilo, o (CH2)n(CR6R7)mSV, en el que n representa 0-9, m representa 0-2, con la condición de que m y n no son 0 al mismo tiempo, R6 representa H, alquilo o arilo, R7 representa H, alquilo o arilo, y V representa H, o un grupo protector de tiol.
30.- El acetal con puente C3 a C9 aislado de la reivindicación 29, que es un compuesto de fórmula (I) según se 10 define en una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 20.

MaitansinolAnsamitocina P-2, R = Et; Ansamitocina P-3, R = iPr; Ansamitocina P-3’, R = n-Pr; Ansamitocina P-4, R = iBu; Ansamitocina P-4’, R = nBu

Figura 1a Figura 1b Maitansina, R = CH3cadena lateral de N-metil-D-alanina no natural L-DM1, R = CH2CH2SH R = CH3 L-DM4, R = CH2CH2C(CH3)2SH D-DM1 R = CH2CH2SH

D-DM4 R = CH2CH2C(CH3)2SH

Acetal con puente de ansamitocina P-3 Ansamitocina P-3 Acetal con puente (I) Maitansinol