ES2586843T3

ES2586843T3 - Tratamiento de trastornos relacionados con BDNF usando laquinimod

Info

Publication number: ES2586843T3
Application number: ES10808442.7T
Authority: ES
Inventors: Liat Hayardeny
Original assignee: Teva Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Teva Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 2009-08-10
Filing date: 2010-08-09
Publication date: 2016-10-19
Anticipated expiration: 2030-08-09
Also published as: AU2016277618A1; PT2467372T; RS55071B1; EP2467372B1; AU2010282948B2; EP3064206B1; SMT201600281B; US20170239234A1; JP5859438B2; PL3064206T3; CA2771203C; CY1117916T1; AU2010282948A1; IL217901B; HUE029983T2; HRP20160997T1; PL2467372T3; EP2467372A4; EP2467372A1; DK2467372T3

Abstract

Laquinimod o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad eficaz para su uso en el tratamiento de un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, que es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfunción eréctil, un trastorno de la memoria, el síndrome de Rett, el trastorno bipolar o hipermanía, en el que el laquinimod o la sal farmacéuticamente aceptable se formula para administración periódica al sujeto.

Description

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DESCRIPCION

Tratamiento de trastornos relacionados con BDNF usando laquinimod Antecedentes

Los factores neurotroficos tienen una profunda influencia sobre los acontecimientos del desarrollo tales como muerte celular de origen natural, diferenciacion y el proceso consecuente (Snider, 1989). El factor neurotrofico derivado del cerebro (BDNF) es un factor neurotrofico que pertenece a la familia de las neurotrofinas de factores de crecimiento. El BDNF actua en ciertas neuronas del sistema nervioso central (SNC) y el sistema nervioso periferico (SNP), ayudando a dar soporte a la supervivencia de neuronas existentes y a fomentar el crecimiento y la diferenciacion de nuevas neuronas y sinapsis (Acheson, 1995; Huang, 2001). El aumento de BDNF se ha asociado con el tratamiento de varios trastornos incluyendo la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington (EH), la esclerosis lateral amiotrofica (ELA), trastornos depresivos, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, trastornos de la memoria, el smdrome de Rett, la enfermedad de Alzheimer, el trastorno bipolar y la hipermama.

La enfermedad de Parkinson es una enfermedad degenerativa cronica y progresiva del cerebro que deteriora el control motor, el habla y otras funciones. Una de las caractensticas mas llamativas de la enfermedad de Parkinson es que afecta principalmente a una poblacion neuronal restringida en el cerebro. Aunque otras neuronas tambien se ven afectadas, las neuronas dopaminergicas de la pars compacta de la sustancia negra son las mas vulnerables al proceso de la enfermedad (Chesselet, 2003). El BDNF tiene potentes efectos sobre la supervivencia y la morfologfa de las neuronas dopaminergicas mesencefalicas, aumentando su supervivencia y, por lo tanto, su perdida podna contribuir a la muerte de estas celulas en la enfermedad de Parkinson (EP) (Hyman, 1991; Howell, 2000).

La enfermedad de Huntington (EH) es un trastorno neurodegenerativo caracterizado por smtomas motores, cognitivos y psiquiatricos y por una degeneracion progresiva de las neuronas en los ganglios basales en la corteza cerebral. Los pacientes que padecen EH tienen niveles significativamente mas bajos de BDNF en el suero en comparacion con los controles sanos (Ciammola, 2007).

La esclerosis lateral amiotrofica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa cronica y debilitante que implica la degeneracion de neuronas motoras corticales, bulbares y medulares. El riluzol (2-amino-6- [trifluorometoxi]benzotiazol) es un antagonista de la neurotransmision glutamatergica que prolonga la supervivencia en la ELA (Riviere, 1998). Tambien se ha demostrado que el riluzol aumenta significativamente los niveles de BDNF en el cerebro de ratas, promoviendo asf la proliferacion de precursores (Katoh-Semba, 2002).

La depresion es otra indicacion en la que se ha demostrado que el BDNF tiene efecto. En un meta-analisis que abarca muchos estudios, pacientes con depresion mostraron tener niveles inferiores de BDNF que los sujetos sanos de control, y se ha demostrado que el tratamiento antidepresivo aumenta los niveles de BDNf en pacientes con depresion despues del tratamiento (Sen, 2008).

La retinitis pigmentosa es una enfermedad asociada con la perdida de celulas fotorreceptoras de la retina. Se ha demostrado que el cultivo con BDNF de explantes de retina procedentes de ratones rd, que parecen una mutacion en el mismo gen que se ha encontrado mutado en retinitis pigmentosa recesiva autosomica humana, mostraba un aumento en el numero de nucleos fotorreceptores en la capa nuclear externa (Caffe Romeo, 2001). Esto sugiere que aumentar los niveles de BDNF en seres humanos que padecen retinitis pigmentosa puede ralentizar la progresion de la enfermedad.

La disfuncion erectil es otra enfermedad que ha mostrado estar asociada con BDNF. En la patente de EE. UU. n.° 7.485.311, ejemplo 3, se demostro que el tratamiento de ratas en el modelo de congelacion del nervio cavernoso bilateral usando inyeccion intracavernosa de AAV-BDNF mejora la presion intracavernosa maxima en respuesta a la electroestimulacion del nervio cavernoso bilateral.

El BDNF tambien se ha asociado con el aprendizaje y la memoria. En un modelo de raton transgenico de ratones knockout para BNF, se ha demostrado que el deterioro en la produccion de BDNF causa deterioro en el aprendizaje y la memoria en la fase adulta y especialmente durante el desarrollo temprano (Monteggia, 2007). En un modelo de rata, se demostro que el BDNF endogeno en el hipocampo esta implicado en la formacion de la memoria. Mientras que la infusion de anticuerpos anti-BDNF de bloqueo de funcion mostro deteriora la memoria a corto plazo y a largo plazo en un modelo de aprendizaje motivado por el miedo, la infusion de BDNF humano recombinante facilito la retencion de la memoria a largo plazo (Alonsa, 2005). Aumentar los niveles de BDNF en pacientes humanos con necesidad de aprendizaje o mejora de la memoria tambien puede mejorar la memoria a corto y largo plazo.

El smdrome de Rett (SR) es un trastorno del desarrollo neurologico ligada al cromosoma X y la principal causa de retraso mental grave en mujeres, afectando a 1:10.000-15.000 nacimientos en todo el mundo (Amaral, 2007). La enfermedad esta asociada con mutaciones en el gen MeCP2. Una de las dianas de MeCP2 es el gen de BDNF. Esto sugiere que la desregulacion de la expresion de BDNF en el smdrome de Rett puede ser la causa de anomalfas estructurales observados en los pacientes, especialmente la ramificacion dendntica reducida y la perdida de espinas dendnticas (Amaral, 2007). Esto sugiere que el aumento de los niveles de BDNF en el smdrome de Rett puede ser una terapia viable en el tratamiento de la enfermedad.

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En pacientes con trastorno bipolar que padecen hipermama, se demostro que los niveles de BDNF variaban dependiendo de si el paciente estaba tratado o sin tratar. Antes del tratamiento con los tratamientos conocidos para la mama, se encontro que los niveles de BDNF eran menores que en los controles sanos, pero tras el tratamiento, la diferencia entre los niveles de BDNF en el suero de los pacientes tratados y los controles ya no era significativa (Tramontina, 2009). Puede ser posible tratar la hipermama aumentando los niveles de BDNF en pacientes que lo necesiten.

Yinghui Hu et al. (Journal of Neurochemisrty, 2008, Vol. 105, paginas 1-17) instruye sobre la implicacion de BDNF en varias afecciones patologicas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, de Parkinson, de Huntington, el smdrome de Rett, la depresion, la ansiedad y disfunciones cognitivas.

Se han identificado varios agentes para aumentar los niveles de BDNF, incluyendo riluzol y antidepresivos tales como fluoxetina (Prozac®) (Katoh-Semba, 2002; Molteni, 2006).

Sumario de la invencion

En el presente documento se divulga otro agente, es decir, laquinimod, que se ha demostrado que aumenta el BDNF en los seres humanos. Laquinimod es un compuesto sintetico novedoso con una alta biodisponibilidad oral, que se ha sugerido como una formulacion oral para la esclerosis multiple remitente recidivante (EMRR). No se ha informado de la relacion entre laquinimod y BDNF. Laquinimod es un compuesto cuyo nombre qmmico es N-etil-N-fenil-1,2- dihidro-4-hidroxi-5-cloro-1-metil-2-oxoquinolina-3-carboxamida, y su numero de registro qmmico es 248281-82-7. El procedimiento de smtesis de laquinimod y la preparacion de su sal de sodio se divulga en la patente de EE. UU. n.° 6.077.851. Se divulga un procedimiento adicional de smtesis de laquinimod en la patente de EE. UU. n.° 6.875.869 y en la publicacion de la solicitud de patente de EE. UU. n.° 2007-0088050. Se divulgan composiciones farmaceuticas que comprenden laquinimod de sodio en la publicacion de la solicitud internacional PCT n.° WO 2005/074899, asf como en las publicaciones de las solicitudes de patente de EE. UU. 2007-0293537 y 2009-0162432.

La presente solicitud proporciona un procedimiento para aumentar el nivel en suero del factor neurotrofico derivado del cerebro (BDNF) en un sujeto humano, que comprende administrar periodicamente al sujeto una cantidad de laquinimod, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo, eficaz para aumentar el nivel en suero de BDNF en el sujeto humano. El procedimiento puede comprender, ademas, administrar periodicamente al sujeto una cantidad de un segundo agente que aumenta el BDNF.

La presente solicitud tambien proporciona un procedimiento para tratar a un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrofica, trastornos depresivos, trastornos de ansiedad, retinitis pigmentosa, disfuncion erectil, trastornos de la memoria, smdrome de Rett, enfermedad de Alzheimer, trastorno bipolar e hipermama, que comprende administrar periodicamente laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en una cantidad eficaz para tratar al sujeto humano.

La presente solicitud tambien proporciona el uso de laquinimod en la fabricacion de un medicamento para aumentar el nivel en suero de BDNF en un sujeto humano.

La presente solicitud tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende una cantidad de laquinimod eficaz para su uso en el aumento del nivel en suero de BDNF en un sujeto humano.

La presente solicitud tambien proporciona una preparacion farmaceutica que comprende una cantidad de laquinimod y una cantidad de un segundo agente que aumenta el BDNF, eficaz para su uso en el aumento del nivel en suero de BDNF en un sujeto humano.

Breve descripcion de las figuras

Figura 1:: Muestra el analisis unidireccional de BDNF que compara el grupo de placebo y el grupo de

laquinimod a 0,6: mg al inicio del estudio.

Figura 2:: Muestra el analisis unidireccional de BDNF que compara el grupo de placebo y el grupo de

laquinimod a 0,6: mg en la semana 112 (V3).

Figura 3:: Muestra el analisis unidireccional de BDNF que compara el grupo de placebo y el grupo de

laquinimod a 0,6 mg en la semana 36 (V9).

Figura 4: Muestra los resultados de la prueba de natacion forzada realizada en el Ejemplo 2.1. (N = 5/grupo)

Laquinimod (1-25 mg/kg/dx3d p.o.) mostro actividad antidepresiva siendo la dosis de 1 mg/kg p.o. la mas activa.

4A: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg/dx4, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg/dx4, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la distancia recorrida [cm] en ratones Balb C [4 min]

4B: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg/dx4, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg/dx4, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la velocidad (cm/s) en ratones Balb C [4 min]

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4C: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg/dx4, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg/dx4, -90 min, p.o.) en la PNF sobre el movimiento (duracion en movimiento) en ratones Balb C [4 min]

4D: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg/dx4, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg/dx4, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la duracion total de inmovilidad [10 %] en ratones Balb C [4 min]

Figura 5: Muestra los resultados de la prueba de natacion forzada realizada en el Ejemplo 2.2. (* p <0,01

frente al control) Laquinimod (0,5-25 mg/kg/dx3d p.o.) mostro actividad antidepresiva con dosis en 5 y 25 mg/kg induciendo actividad antidepresiva significativa.

5A: Efecto de laquinimod (0,5; 1; 5; 25 mg/kg, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la distancia recorrida [cm] en ratones Balb C [4 min]

5B: Efecto de laquinimod (0,5; 1; 5; 25 mg/kg, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la velocidad en ratones Balb C [4 min]

5C: Efecto de laquinimod (0,5; 1; 5; 25 mg/kg, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg, -90 min, p.o.) en la PNF sobre el movimiento (duracion total) en ratones Balb C [4 min]

5D: Efecto de laquinimod (0,5; 1; 5; 25 mg/kg, p.o., -90) y fluoxetina (10 mg/kg, -90 min, p.o.) en la PNF sobre la duracion total de inmovilidad [10 %] en ratones Balb C [4 min]

Figura 6: Muestra la prueba de campo abierto - resultados de los parametros de motilidad realizados en el

Ejemplo 3.1. (N = 5/grupo) Laquinimod (1-25 mg/kg/dx3d p.o.) no modifico los parametros generales de movilidad en campo abierto en ratones Balb/c.

6A: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg, p.o.; -90 min) y fluoxetina (10 mg/kg, p.o.; -90 min) y combinacion en la prueba de campo abierto sobre la distancia recorrida [cm] en ratones BALB/c [20 min]

6B: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg, p.o.; -90 min) y fluoxetina (10 mg/kg, p.o.; -90 min) y combinacion en la prueba de campo abierto sobre la distancia media [cm/s] en ratones BALB/c [20 min]

6C: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg, p.o.; -90 min) y fluoxetina (10 mg/kg, p.o.; -90 min) y combinacion en la prueba de campo abierto sobre la duracion total de inmovilidad en ratones BALB/c [20 min]

6D: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg, p.o.; -90 min) y fluoxetina (10 mg/kg, p.o.; -90 min) y combinacion en la prueba de campo abierto sobre la duracion total de movilidad fuerte [s] en ratones BALB/c [20 min]

Figura 7: Muestra la prueba de campo abierto - resultados de los parametros de ansiedad (en la zona 2)

realizados en el Ejemplo 3.1. (N = 5/grupo) Laquinimod (1-25 mg/kg/dx3d p.o.) mostro tendencia hacia un efecto ansiolftico siendo los animales mas activos en el centro (zona 2).

Figura 8: Muestra la prueba de campo abierto - resultados de los parametros de ansiedad (en la zona 2 + 3)

realizados en el Ejemplo 3.1. (N = 5/grupo) Laquinimod (1-25/kg/dx3d p.o.) mostro tendencia hacia un efecto ansiolftico siendo los animales mas activos en el centro (zonas 2 + 3). Se demostro que 1 mg/kg era la dosis mas potente.

8C: Efecto de laquinimod (1; 5; 10; 25 mg/kg, p.o.; -90 min) y fluoxetina (10 mg/kg, p.o.; -90 min) y combinacion en la prueba de campo abierto sobre la frecuencia de ponerse a dos patas en ratones BALB/c [20 min]

Figura 9: Muestra la prueba de campo abierto - resultados de los parametros de motilidad realizados en el

Ejemplo 3.2. (N = 5/grupo; *p <0,05 frente al control) Laquinimod (0,5-25 mg/kg/dx3d p.o.) indujo un ligero aumento en la motilidad (0,5-5 mg/kg) en el campo abierto en ratones Balb/c.

Figura 10: Muestra la prueba de campo abierto - resultados de los parametros de ansiedad (en las zonas 2 +

3) realizados en el Ejemplo 3.2. Laquinimod (0,5-25 mg/kg/dx3d d.o.) muestra un efecto ansiolftico significativo mostrando los animales mas actividad en el centro (zonas 2 + 3). Tanto la fluoxetina como el laquinimod (0,5-5 mg/kg) mostraron efectos ansiolfticos significativos frente al control. La dosis mas potente fue laquinimod a 5 mg/kg.

Figura 11: Muestra los resultados del modelo de laberinto en cruz elevado realizado en el Ejemplo 4.1.

Laquinimod (5 y 25 mg/kg/dx3d p.o.) mostro efecto ansiolftico significativo. Laquinimod mostro un aumento dependiente de la dosis en la actividad sobre el brazo abierto. La dosis a 25 mg/kg p.o. fue la mas activa.

Figura 12: Muestra los resultados del modelo de laberinto en cruz elevado realizado en el Ejemplo 4.2.

(Parametros del brazo abierto en ratones Balb/c -5 min; N = 5/grupo) Laquinimod (5-25 mg/kg/dx3d p.o.) mostro efecto ansiolftico significativo.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se define por las reivindicaciones. La materia no englobada por el alcance de las

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reivindicaciones no forma parte de la invencion actualmente reivindicada.

La presente solicitud proporciona un procedimiento para aumentar el nivel en suero del factor neurotrofico derivado del cerebro (BDNF) en un sujeto humano, que comprende administrar periodicamente al sujeto una cantidad de laquinimod, o sal farmaceuticamente aceptable del mismo, eficaz para aumentar el nivel en suero de BDNF en el sujeto humano.

En un modo de realizacion, la cantidad de laquinimod o sal farmaceuticamente aceptable del mismo se administra al sujeto humano una vez al dfa. En otro modo de realizacion, la administracion periodica continua durante al menos 3 dfas.

En un modo de realizacion, la cantidad de laquinimod administrada es 0,1 mgMa-40,0 mgMa. En otro modo de realizacion, la cantidad de laquinimod administrada es 0,6 mg/dfa. En otro modo de realizacion, la cantidad de laquinimod se administra por via oral.

En un modo de realizacion, el sujeto esta padeciendo una enfermedad relacionada con el BDNF. En otro modo de realizacion, la enfermedad relacionada con el BDNF es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la esclerosis lateral amiotrofica, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, un trastorno de la memoria, el smdrome de Rett, la enfermedad de Alzheimer, el trastorno bipolar o la hipermama.

En un modo de realizacion, el trastorno depresivo es la depresion, la depresion en pacientes con cancer, depresion en pacientes con enfermedad de Parkinson, la depresion posterior a infarto de miocardio, la depresion en pacientes con virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la depresion sintomatica subsindromica, la depresion en mujeres esteriles, la depresion pediatrica, la depresion mayor, la depresion de un unico episodio, la depresion recidivante, la depresion inducida por abusos a los ninos, la depresion posparto, la depresion mayor segun el DSM-IV, la depresion mayor refractaria al tratamiento, la depresion severa, la depresion psicotica, la depresion posterior a apopiejfa, el dolor neuropatico, la enfermedad mamaco-depresiva incluyendo enfermedad mamaco-depresiva con episodios mixtos y enfermedad mamaco-depresiva con episodios de depresion, el trastorno afectivo estacional, la depresion bipolar BP I, la depresion bipolar BP II o la depresion mayor con distimia.

En otro modo de realizacion, el trastorno de ansiedad es la ansiedad generalizada, trastorno de panico, fobia, trastorno de estres postraumatico, el trastorno obsesivo-compulsivo, la ansiedad por separacion o la ansiedad infantil.

En un modo de realizacion, el procedimiento comprende, ademas, administrar periodicamente al sujeto una cantidad de un segundo agente que aumenta el BDNF.

En un modo de realizacion, la cantidad del segundo agente que aumenta el BDNF, cuando se toma en solitario, no es eficaz para aumentar el nivel en suero de BDNF en el sujeto.

En un modo de realizacion, la administracion del laquinimod precede sustancialmente a la administracion del segundo agente que aumenta el BDNF. En otro modo de realizacion, la administracion del segundo agente que aumenta el BDNF precede sustancialmente a la administracion del laquinimod.

En un modo de realizacion, el efecto sobre el sujeto es mayor que el efecto sobre un sujeto tratado con el segundo agente que aumenta el BDNF en solitario. En otro modo de realizacion, el aumento en el nivel en suero de BDNF en el sujeto es mayor que el aumento en el nivel en suero de BDNF en un sujeto tratado con el segundo agente que aumenta el BDNF en solitario.

En un modo de realizacion, la sal farmaceuticamente aceptable de laquinimod es laquinimod de sodio.

En un modo de realizacion, el diagnostico del sujeto anterior a la administracion exclrna esclerosis multiple, diabetes mellitus dependiente de la insulina, lupus eritematoso sistemico, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis, asma, aterosclerosis, apoplejfa y enfermedad de Alzheimer.

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Para los modos de realizacion anteriores, cada modo de realizacion divulgado en el presente documento se contempla como aplicable a cada uno de los otros modos de realizacion divulgados.

Terminos

Como se usa en el presente documento, y a menos que se establezca de otro modo, cada uno de los siguientes terminos tendra la definicion establecida a continuacion.

Como se usa en el presente documento, "administrar al sujeto" significa la entrega de, la dispensacion de, o la aplicacion de medicamentos, farmacos o remedios a un sujeto para aliviar o curar una afeccion patologica. La administracion oral es una forma de administracion de los presentes compuestos al sujeto.

Como se usa en el presente documento, "BDNF" significa el factor neurotrofico derivado del cerebro, un factor neurotrofico que pertenece a la familia de las neurotrofinas de factores de crecimiento.

Como se usa en el presente documento, una "enfermedad relacionada con el BDNF" es una enfermedad en la que un paciente que padece la enfermedad tiene niveles en suero de BDNF que son mas bajos que los de un individuo sano correspondiente y/o una enfermedad en la que la elevacion de BDNF en un paciente que padece la enfermedad puede estar asociada con una mejora de la enfermedad o de los smtomas de la misma.

Como se usa en el presente documento, un "agente que aumenta el BDNF" es cualquier agente que eleva directa o indirectamente el nivel de BDNF en un sujeto. Por ejemplo, un agente que aumenta el BDNF puede ser riluzol o un antidepresivo, tal como fluoxetina. Como se usa en el presente documento, el termino "agente" incluye cualquier molecula, compuesto, protema, peptido, polipeptido, acido nucleico, anticuerpo o farmaco o cualquier combinacion de los mismos.

Como se usa en el presente documento, una "cantidad" o "dosis" de laquinimod, medida en miligramos, se refiere a los miligramos de acido de laquinimod presentes en una preparacion, independientemente de la forma de la preparacion. Por ejemplo, 0,6 mg de laquinimod significa que la cantidad de acido de laquinimod en una preparacion es de 0,6 mg, independientemente de la forma de la preparacion. Por lo tanto, cuando esta en forma de una sal, por ejemplo, sal de sodio de laquinimod, el peso de la forma de sal necesaria para proporcionar una dosis de 0,6 mg de laquinimod sena mayor que 0,6 mg, debido a la presencia del ion adicional de la sal, pero sena una cantidad equivalente molar.

Como se usa en el presente documento, "eficaz", como en una cantidad eficaz para conseguir un fin, significa la cantidad de un componente que es suficiente para proporcionar una respuesta terapeutica indicada sin efectos secundarios adversos indebidos (tales como toxicidad, irritacion o respuesta alergica) acorde con una proporcion razonable de beneficio/riesgo cuando se usa en la manera de esta divulgacion. Por ejemplo, una cantidad eficaz para tratar un smtoma de un trastorno o enfermedad sin causar efectos secundarios adversos indebidos. La cantidad eficaz espedfica variara con factores tales como la afeccion particular que se este tratando, el estado ffsico del paciente, el tipo de mamffero que se este tratando, la duracion del tratamiento, la naturaleza del tratamiento concurrente (si lo hay) y las formulaciones espedficas empleadas y la estructura de los compuestos o sus derivados.

Una "sal" es la sal de los presentes compuestos que se han modificado preparando sales de acidos o bases de los compuestos. La expresion "sal farmaceuticamente aceptable" en este sentido, se refiere a las sales de adicion de acidos o de bases inorganicas y organicas, relativamente no toxicas, de compuestos de la presente invencion.

Se puede usar una sal farmaceuticamente aceptable de laquinimod. Una sal farmaceuticamente aceptable de laquinimod, como se usa en la presente solicitud, incluye litio, sodio, potasio, magnesio, calcio, manganeso, cobre, cinc, aluminio y hierro. Se describen formulaciones de sal de laquinimod y el procedimiento para preparar las mismas, por ejemplo, en la publicacion de la solicitud de patente de EE. UU. n.° 2005-0192315 y publicacion de la solicitud internacional PCT n.° WO 2005/074899, que se incorporan por la presente por referencia en la presente solicitud.

Como se usa en el presente documento, "tratar" o "tratamiento" engloba, por ejemplo, inducir la inhibicion, la regresion o la estasis del trastorno y/o la enfermedad. Como se usa en el presente documento, "inhibicion" de la progresion de la enfermedad o complicaciones de la enfermedad en un sujeto significa prevenir o reducir la progresion de la enfermedad y/o las complicaciones de la enfermedad en el sujeto.

Como se usa en el presente documento, "vedculo farmaceuticamente aceptable" se refiere a un vedculo o excipiente que es adecuado para su uso con seres humanos y/o animales sin efectos secundarios adversos indebidos (tales como toxicidad, irritacion y respuesta alergica) acorde con una proporcion razonable de beneficio/riesgo. Puede ser un disolvente, agente de suspension o vedculo farmaceuticamente aceptable, para suministrar los presentes compuestos al sujeto.

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Una unidad de dosificacion, como se usa en el presente documento, puede comprender un unico compuesto o mezclas de compuestos de los mismos. Una unidad de dosificacion se puede preparar para formas orales de dosificacion, tales como comprimidos, capsulas, pfldoras, polvos y granulos.

El laquinimod se puede administrar en mezcla con diluyentes, disolventes, excipientes o veldculos farmaceuticos adecuados (denominados colectivamente en el presente documento como un vedculo farmaceuticamente aceptable) adecuadamente seleccionados con respecto a la forma pretendida de administracion y de forma coherente con las practicas farmaceuticas convencionales. La unidad puede estar en una forma adecuada para la administracion oral. El laquinimod se puede administrar en solitario, pero en general se mezcla con un vedculo farmaceuticamente aceptable, y se coadministra en la forma de un comprimido o capsula, liposoma, o como un polvo aglomerado. Ejemplos de vedculos solidos adecuados incluyen lactosa, sacarosa, gelatina y agar. Las capsulas o comprimidos se pueden formular facilmente y se pueden hacer faciles de tragar o masticar; otras formas solidas incluyen granulos y polvos a granel. Los comprimidos pueden contener aglutinantes, lubricantes, diluyentes, agentes disgregantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes, agentes inductores de flujo y agentes de fusion adecuados.

Se describen ejemplos espedficos de las tecnicas, vedculos y excipientes farmaceuticamente aceptables que se pueden usar para formular formas orales de dosificacion de la presente invencion, por ejemplo, en la publicacion de la solicitud de patente de EE. UU. n.° 2005/0192315, las publicaciones de las solicitudes internacionales PCT n.° WO 2005/074899, WO 2007/047863 y WO 2007/146248, cada uno de las cuales se incorpora por la presente por referencia en la presente solicitud.

Las tecnicas generales y composiciones para preparar formas de dosificacion utiles en la presente invencion se describen en las siguientes referencias: 7 Modern Pharmaceutics, capftulos 9 y 10 (Banker y Rhodes, Editores, 1979); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman et al., 1981); Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2a edicion (1976); Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985); Avances in Pharmaceutical Sciences (David Ganderton, Trevor Jones, Eds., 1992); Avances in Pharmacuetal Sciences Vol. 7 (David Ganderton, Trevor Jones, James McGinity, Eds., 1995); Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms (Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Serie 36 (James McGinity, Ed., 1989); Pharmaceutical Particulate Carriers: Therapeutic Applications: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 61 (Alain Rolland, Ed., 1993); Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract (Ellis Horwood Books in the Biological Sciences. Series in Pharmaceutical Technology; J. G. Hardy, S. S. Davis, Clive G. Wilson, Eds.); Modern Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 40 (Gilbert S. Banker, Christopher T. Rhodes, Eds.). Estas referencias en su totalidad se incorporan en la presente como referencia en la presente solicitud.

Los comprimidos pueden contener aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes, agentes inductores de flujo y agentes de fusion adecuados. Por ejemplo, para administracion oral en la forma de unidad de dosificacion de un comprimido o capsula, el componente de farmaco activo se puede combinar con un vedculo oral, no toxico, farmaceuticamente aceptable, inerte tal como lactosa, gelatina, agar, almidon, sacarosa, glucosa, metilcelulosa, fosfato dicalcico, sulfato de calcio, manitol, sorbitol, celulosa microcristalina y similares. Los aglutinantes adecuados incluyen almidon, gelatina, azucares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, almidon de mafz, gomas naturales y sinteticas tales como goma arabiga, tragacanto o alginato de sodio, povidona, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificacion incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, acido estearico, estearilfumarato de sodio, talco y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitacion, almidon, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana, croscarmelosa de sodio, almidon glicolato de sodio y similares.

Se entiende que, cuando se proporciona un intervalo de parametros, todos los numeros enteros dentro de ese intervalo, y las decimas de los mismos, tambien se proporcionan por la invencion. Por ejemplo, "0,1 mg-40,0 mg" incluye 0,1 mg, 0,2 mg, 0,3 mg, 0,4 mg, etc. hasta 40,0 mg.

La presente invencion se entendera mejor por referencia a los detalles experimentales que siguen, pero los expertos en la tecnica apreciaran facilmente que los experimentos espedficos detallados son solo ilustrativos de la invencion como se describe mas completamente en las reivindicaciones que siguen despues.

Detalles experimentales

EJEMPLO 1: Ensayo clinico que muestra el efecto de laquinimod en los niveles de BDNF en sujetos humanos afectados por esclerosis multiple remitente recidivante

Se inicio un estudio en pacientes con esclerosis multiple remitente recidivante (EMRR) usando laquinimod, 0,6 mg al dfa, en forma de la sal de sodio, en una formulacion de comprimido oral, una vez al dfa. El estudio era un estudio multinacional, multicentrico, aleatorizado, doble ciego, de grupos paralelos, controlado con placebo para evaluar la eficacia, la tolerabilidad y la seguridad de dos dosis de laquinimod en sujetos con EMRR. Los sujetos elegibles se distribuyeron aleatoriamente en los siguientes tres grupos:

1. 0,6 mg de laquinimod por via oral (p.o.) una vez al dfa;

5

10

15

20

25

30

35

40

2. 0,3 mg de laquinimod por via oral (p.o.) una vez al dfa; y

3. Placebo concordante, por via oral (p.o.) una vez al dfa.

Los sujetos deben cumplir los siguientes criterios de inclusion para incluirlos en el estudio:

1. un diagnostico de EM confirmada como se define por los criterios de McDonald;

2. un curso de la enfermedad EMRR;

3. al menos una recidiva documentada en los 12 meses anteriores a la seleccion;

4. al menos una lesion acentuada por gadolinio en su exploracion de RM en la seleccion;

5. deambulacion con una puntuacion EDSS de Kurtzke de 1,0-5,0 (modificada);

6. entre 18-50 anos de edad inclusive;

7. libre de recidiva y sin corticoesteroides o ACTH durante al menos 30 dfas anteriores a la exploracion de RM en la seleccion;

8. libre de recidiva y sin corticoesteroides entre la seleccion y la distribucion aleatoria;

9. las mujeres de edad fertil practican un procedimiento anticonceptivo fiable;

10. dispuestos y capaces de cumplir con los requisitos del protocolo mientras dure el estudio; y

11. capaces de proporcionar el consentimiento firmado, por escrito e informado antes de entrar en el estudio.

Los sujetos que cumplfan cualquiera de los siguientes criterios de exclusion se excluyeron del estudio:

1. padedan alguna forma de EM progresiva;

2. uso de tratamientos inmunosupresores o citotoxicos dentro de los 6 meses anteriores a la visita de seleccion (incluyendo azatioprina, ciclofosfamida y metotrexato);

3. uso de farmacos experimentales y/o participacion en estudios clmicos de farmacos dentro de los 6 meses anteriores a la seleccion;

4. tratamiento previo con inmunomoduladores (incluyendo IFN-U 1a y 1b, acetato de glatiramer, laquinimod e IVIG) dentro de los 2 meses anteriores a la seleccion;

5. uso de inhibidores potentes de CYP3A4, por ejemplo, cetoconazol y eritromicina por via oral dentro de 2 semanas anteriores a la visita inicial;

6. uso previo de amiodarona;

7. uso de fluoxetina un mes anterior a la visita inicial;

8. uso de sustratos de CYP1A2 tales como teofilina y warfarina dentro de 2 semanas anteriores a la seleccion;

9. tratamiento previo con cladribina en los ultimos 2 anos anteriores a la visita de seleccion;

10. sujetos para los que estana contraindicada la inmunosupresion potencial, por ejemplo, hepatitis B/C o VIH.

11. irradiacion corporal total o irradiacion linfoide total previa,

12. tratamiento cronico con corticoesteroides (30 o mas dfas consecutivos) dentro de los 2 meses anteriores a la seleccion;

13. embarazo o lactancia;

14. sujetos con una afeccion medica o quirurgica clmicamente significativa o inestable que impedina la participacion segura y completa en el estudio, segun lo determinado por la historia clmica, examenes ffsicos, ECG, pruebas anormales de laboratorio y radiograffa de torax.

15. incapacidad para dar su consentimiento informado o para completar el estudio, o si el sujeto esta considerado por el investigador como un candidato inadecuado para el estudio, por cualquier razon;

16. antecedentes conocidos de sensibilidad a Gd; o

17. incapacidad de someterse con exito a exploracion de RM.

La duracion del estudio fue de 40 semanas y consistia en 2 periodos: 4 semanas de penodo de seleccion (semana - 4 [seleccion] a semana 0 [inicio del estudio]) y 36 semanas de tratamiento doble ciego (semana 0 [inicio del estudio] a semana 36 [terminacion]).

Los sujetos se evaluaron en los sitios de estudio en las semanas -4, 0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32 y 36. Las 5 muestras para los marcadores inflamatorios se recogieron en todas las visitas entre 0 y 36 semanas.

Se midio la concentracion BDNF en el suero en los pacientes en el grupo de placebo (102 pacientes estaban en el grupo) y en el grupo laquinimod de 0,6 mg (106 pacientes estaban en el grupo) en la semana 0 (V0), semana 12 (V3) y semana 36 (V9). El analisis del contenido de BDNF en el plasma se realizo usando el procedimiento de ELISA de tipo sandwich. La concentracion de BDNF en el suero se expresa en terminos de pg/ml.

10 Resultados

Los resultados en las tablas a continuacion representan los niveles medios de BDNF tanto en el grupo de laquinimod de 0,6 mg/dfa como en el grupo de placebo.

Valores iniciales (en V0)

Tabla 1: Media y desviaciones estandar

Nivel: Numero Media Desviacion estandar Media estandar Error inferior al 95 % Error superior al 95 %

Placebo: 95 14110,7 6432,61 659,97 12800 15421

Laquinimod 0,6 mg: 96 13892,7 7267,89 741,78 12420 15365

15 Tabla 2: Prueba t

Laquinimod 0,6 mg-placebo - Asumiendo varianzas desiguales

Diferencia: -218,0 Proporcion t -0,2196

Dif. error estandar: 922,9 DF 186,6984

Dif. CL superior: 1740,7 Prob > 111 0,8264

Dif. CL inferior: -2176,7 Prob > t 0,5868

Confianza: 0,95 Prob < t 0,4132

Valores de la semana 12 (en V3)

Tabla 3: Medias y desviaciones estandar

Placebo: 96 13073,9 5712,02 582,98 11916 14231

Laquinimod 0,6 mg: 100 15519,6 7204,47 720,45 14090 16949

Tabla 4: Prueba t

20 Laquinimod 0,6 mg-placebo - Asumiendo varianzas desiguales

Diferencia: 2445,70 Proporcion t 2,638935

Dif. error estandar: 926,77 DF 187,3752

Dif. CL superior: 4273,95 Prob > 111 0,0090*

Dif. CL inferior: 617,44 Prob > t 0,0045*

Confianza: 0,95 Prob < t 0,9955

Valores de la semana 36 (en V9)

Tabla 5: Media y desviaciones estandar

Placebo: 92 12783,6 6017,17 627,33 11538 14030

Laquinimod 0,6 mg: 92 15335,8 6699,89 698,51 13948 16723

Tabla 6: Prueba t

5

10

15

20

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30

35

40

45

Laquinimod 0,6 mg-placebo - Asumiendo varianzas desiguales

Diferencia: 2552,21 Proporcion t 2,718403

Dif. error estandar: 938,86 DF 179,9376

Dif. CL superior: 4404,81 Prob > 111 0,0072*

Dif. CL inferior: 699,61 Prob > t 0,0036*

Confianza: 0,95 Prob < t 0,9964

Partiendo de V3 hay una elevacion estad^sticamente significativa de BDNF (al nivel de confianza del 95 %) entre el grupo de placebo y el grupo de laquinimod de 0,6 mg. La diferencia tambien fue estadfsticamente significativa en V9.

El laquinimod es eficaz en el modelo experimental de encefalomielitis autoinmunitaria (EAEa), y actualmente se esta probando en pacientes con EM (en ensayo clmico de fase III), lo que sugiere, por lo tanto, la posibilidad de su uso en el tratamiento de la esclerosis multiple (EM). El laquinimod tambien es eficaz en aumentar los niveles de BDNF en los pacientes.

La capacidad del laquinimod de aumentar los niveles de BDNF es inesperada. No se ha establecido una conexion por sf misma entre el tratamiento de EM y el aumento de los niveles de BDNF. No todos los agentes que son eficaces en el tratamiento de EM son eficaces en la elevacion de los niveles de BDNF. Un estudio reciente mostro que el tratamiento con interferon-13 1a e inmunoglobulinas, incluso despues de 12 meses, e incluso en pacientes con Em que se benefician del tratamiento, no mostraba un aumento en los niveles en plasma de BDNF (Sarchielli, 2007). El hallazgo de que el laquinimod eleva los niveles de BDNF en pacientes despues de solo 12 semanas de tratamiento es inesperado.

EJEMPLO 2: El laquinimod muestra actividad antidepresiva en modelos de ratones - la prueba de natacion forzada (PNF)

Los trastornos de depresion y ansiedad son afecciones onerosas con tasas de prevalencia de por vida de aproximadamente un 7-20 %. Los modelos animales son herramientas indispensables en la busqueda para identificar nuevos farmacos antidepresivos. Diversos paradigmas se han desarrollado y son fundamentales en la deteccion del potencial antidepresivo de novedosos compuestos en entornos preclmicos (Cryan, 2002; Ganbarana, 2001).

La prueba de natacion forzada (PNF) es una de las herramientas mas ampliamente usadas para detectar actividad antidepresiva de forma preclmica. La prueba aguda se describio por primera vez por Porsolt et al. (1977).

La prueba se basa en la observacion de que las ratas y los ratones desarrollan una postura inmovil cuando se colocan en un cilindro ineludible de agua. Se considera que este comportamiento es una desesperacion conductual en oposicion a la forma activa de hacer frente a condiciones de estres. Un antidepresivo reducira la inmovilidad y aumentara el comportamiento motivado del roedor para escapar de las condiciones desesperadas. Esto se evidencia por el aumento en el tiempo de la natacion, la distancia recorrida, la velocidad y los intentos por escalar por las paredes (fuerte movilidad).

La PNF esta considerada como una herramienta de deteccion con una alta fiabilidad y validez predictiva. La prueba se puede realizar en ratones y ratas.

En el ejemplo 2.1 y 2.2 descritos a continuacion, la PNF se realizo en ratones macho (Balb/c Harlan IL) despues de 3 dfas de administracion del farmaco, 90 minutos despues de la ultima administracion del farmaco. Se usaron cilindros redondos de vidrio de 18 cm de diametro y 20 cm de profundidad. La temperatura del agua era de 24-28 °C. El comportamiento motivado se definio por inmovilidad, natacion y fuerte movilidad.

La inmovilidad en los animales se definio por una actividad inferior a un 10 % de movimiento del centro de gravedad del animal, como se determina por el sistema Noldus. La natacion se definio por la distancia y la velocidad del animal, y la escalada se relaciono con la fuerte movilidad (movimiento del centro de gravedad mas de un 30 %). Los animales se liberaron en el cilindro durante 6 minutos y la puntuacion se realizo en los ultimos 4 minutos despues de 2 minutos de adaptacion.

Todos los resultados se analizaron mediante el sistema Noldus (Holanda) que incluye una camara y un software para los analisis de comportamiento de los animales.

Ejemplo 2.1

Los ratones Balb/c se dividieron en 6 grupos (5/grupo) y se les administro diariamente durante 3 dfas laquinimod (1, 5, 10 y 2 5 mg/kg por via oral en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg por via oral) o vefuculo. En el tercer dfa, 90 min despues de la administracion, los ratones se expusieron a la prueba de natacion forzada. El comportamiento se grabo en video y se analizo usando el software Ethovision (Noldus Holanda). El resultado se muestra en la Fig. 4.

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Conclusion:

Los resultados muestran que el laquinimod mostro una actividad antidepresiva significativa, que se expresa por la movilidad aumentada y la inmovilidad reducida a 1 mg/kg, y una tendencia a la significancia a dosis mas altas (laquinimod a 25 mg/kg). En este experimento, el control positivo de fluoxetina no mostro efecto significativo, debido posiblemente a condiciones no optimas de tiempo y de dosis.

Ejemplo 2.2

Los ratones Balb/c se dividieron en 6 grupos (5 ratones/grupo) y se les administro laquinimod diariamente durante 3 dfas con (0,5, 1, 5 y 25mg/kg p.o. en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg p.o.) o vetuculo. En el tercer dfa, 90 minutos despues de la administracion, los ratones se expusieron a la prueba de natacion forzada. El comportamiento se grabo en video y se analizo usando el software Ethovision (Noldus Holanda). El resultado se muestra en la Fig. 5.

Conclusion:

Los resultados muestran que el laquinimod mostro una actividad antidepresiva significativa, que se expresa por la movilidad aumentada y la inmovilidad reducida a 5 y 25 mg/kg. El control positivo de fluoxetina mostro una tendencia a la misma actividad. Esto es debido posiblemente a condiciones no optimas de tiempo y de dosis.

EJEMPLO 3: El laquinimod muestra actividad ansiolitica en modelos de raton - la prueba de campo abierto

Los trastornos de ansiedad son terminos colectivos que cubren varias formas diferentes de miedo y ansiedad anormal y patologica. Los criterios de diagnostico psiquiatrico actuales reconocen una amplia variedad de trastornos de ansiedad. Estudios recientes han encontrado que hasta un 18 % de los estadounidenses puede verse afectado por uno o mas de ellos (Kessler et al.). Los trastornos se dividen en varias clases que incluyen: ansiedad generalizada, trastornos de panico, fobias, trastornos de estres postraumatico (TEPT), trastorno obsesivo- compulsivo (TOC), ansiedad de separacion y ansiedad infantil.

Los farmacos antidepresivos administrados cronicamente, particularmente inhibidores selectivos de la recaptacion de serotonina (5-HT) (SSRI), son clmicamente eficaces en el tratamiento de todos los trastornos de ansiedad, incluyendo trastorno de estres postraumatico (TEPT) y trastorno obsesivo-compulsivo (TOC). Mientras que la eficacia clmica de los ansiolfticos tradicionales, como las benzodiazepinas (BZD), esta limitada al trastorno de ansiedad generalizada o ataques agudos de panico (Borsini et al.). Por lo tanto, el efecto ansiolftico potencial de los antidepresivos es de gran relevancia.

La prueba de campo abierto - actividad locomotora exploratoria usada en los Ejemplos 3.1 y 3.2 descritos a continuacion es uno de los mas populares en la evaluacion del comportamiento de los animales. Pone a prueba tanto los parametros de motilidad como la ansiedad (Prut et al.). Un raton individual se coloca en una novedosa pista circular de plexiglas de 50 x 50cm cuyo suelo esta dividido en 3 zonas digitales: la zona externa periferica 1, la zona media 2 y la zona mas central 3. El comportamiento del animal en el campo abierto se registra por grabacion en video durante 20 minutos y posteriormente se analiza digitalmente usando el software Noldus para el comportamiento animal. Las mediciones incluyen la motilidad general (distancia recorrida, la velocidad y fuerte movilidad) y los parametros de ansiedad (incluyendo la frecuencia de las visitas al area central, el tiempo trascurrido en el campo interno y el numero de eventos de ponerse a dos patas en el centro). Cuanto mas tiempo permanece y actua el animal en el centro, menos ansioso esta.

Ejemplo 3.1

Los ratones Balb/c macho se dividieron en 6 grupos (5/grupo) y se les administro laquinimod (1, 5, 10 y 25 mg/kg p.o. en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg p.o.) o vetuculo diariamente durante 3 dfas. En el tercer dfa, 90 min despues de la administracion, los ratones se expusieron al campo abierto durante 20 min. El comportamiento se grabo en video y se analizo usando el software Ethovision (Noldus Holanda). Los resultados con respecto a los parametros de motilidad se muestran en la Fig. 6. Los resultados con respecto a los parametros de ansiedad se muestran en las Fig. 7 y 8.

Conclusion:

Parametros de motilidad - el laquinimod y la fluoxetina no modificaron significativamente los parametros de motilidad en el campo en este modelo.

Parametros de ansiedad (zona 2) - los animales tratados con laquinimod y con fluoxetina tendfan actuar mas en el centro en terminos de frecuencia, tiempo transcurrido, distancia recorrida y el numero de elevaciones a dos patas. Los resultados muestran que 1 mg/kg y 5 mg/kg eran las mas potentes.

Parametros de ansiedad (zonas 2 y 3) - los animales tratados con laquinimod tendfan a actuar mas en el centro, como se evidencia por el tiempo trascurrido, la distancia recorrida y el numero de elevaciones a dos patas. Los resultados muestran que 1 mg/kg fue la dosificacion mas potente de laquinimod en este experimento.

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Este modelo muestra que el laquinimod muestra efectos ansiolfticos.

Ejemplo 3.2

Los ratones Balb/c macho se dividieron en 6 grupos (5/grupo) y se les administro laquinimod (0,5, 1, 5 y 25mg/kg p.o. en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg p.o.) o vehnculo diariamente durante 3 d^as. En el tercer dfa, 90 min despues de la administracion, los ratones se expusieron al campo abierto durante 20 minutos. El comportamiento se grabo en video y se analizo usando el software Ethovision (Noldus Holanda). Los resultados de los parametros de motilidad se muestran en la Fig. 9. Los resultados de los parametros de ansiedad se muestran en la Fig. 10.

Conclusion:

Parametros de motilidad - laquinimod (0,5-25 mg/kg/dx3d p.o.) indujo un ligero aumento en la motilidad (0,5-5 mg/kg) en el campo abierto en ratones Balb/c.

Parametros de ansiedad - los animales tratados con laquinimod (0,5-5 mg/kg p.o.) y con fluoxetina (10 mg/kg p.o.) actuaron significativamente mas en el centro, a juzgar por la frecuencia, el tiempo trascurrido y el numero de elevaciones a dos patas. 5 mg/kg fue la mas potente.

Este modelo muestra que el laquinimod muestra efectos ansiolfticos.

EJEMPLO 4: El laquinimod muestra actividad ansiolftica en modelo de raton - laberinto en cruz elevado (LCE)

El modelo de LCE usado en los Ejemplos 4.1 y 4.2 descritos a continuacion utiliza el miedo natural de los roedores a evitar lugares abiertos y elevados. El aparato consiste en un laberinto en cruz con dos brazos cerrados y dos opuestos abiertos, elevado por encima del suelo. Los animales ingenuos pasan solo aproximadamente un 30 % del tiempo de la prueba en los brazos abiertos, mientras que el tratamiento con benzodiazepinas aumenta significativamente la exploracion en los brazos abiertos (Pellow et al.). Este es uno de los modelos mas ampliamente usados para estudiar los efectos del comportamiento de ansiedad.

El laberinto consistfa en dos brazos opuestos abiertos (40 x 10 cm) y dos brazos cerrados opuestos (40 x 10 cm, con paredes de 40 cm) sobre una plataforma de 50 cm por encima del suelo. Los ratones se colocaron en el cuadrante central (10 x 10 cm) frente a un brazo abierto y se grabaron en video durante una exploracion de 5 min. Se puntuaron las entradas en los brazos y la duracion cuando las cuatro patas entraban en el brazo.

Ejemplo 4.1

Los ratones Balb/c macho se dividieron en 6 grupos (5/grupo) y se les administro laquinimod (0,5, 1, 5 y 25mg/kg p.o. en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg p.o.) o vehnculo diariamente durante 3 dfas. En el tercer dfa, 90 min despues de la administracion, los ratones se expusieron al LCE durante 5 minutos. Los ratones se colocaron en el cuadrante central (10 x 10 cm) frente a un brazo abierto y se grabaron en video durante una exploracion de 5 minutos. Se puntuaron las entradas en los brazos y la duracion cuando las cuatro patas entraban en el brazo. El comportamiento se grabo en video y se analizo usando el software Ethovision (Noldus Holanda). Los resultados se muestran en la Fig. 11.

Conclusion:

Los ratones tratados con laquinimod muestran actividad ansiolftica de una manera dependiente de la dosis. El efecto maximo se obtuvo con la dosis de 25 mg/kg p.o.

Ejemplo 4.2

Los ratones Balb/c macho se dividieron en 6 grupos (5/grupo) y se les administro laquinimod (0,5, 1, 5 y 25mg/kg p.o. en forma de solucion de laquinimod de sodio a traves de sonda oral), fluoxetina (control positivo 10 mg/kg p.o.) o vetnculo diariamente durante 3 dfas. En el tercer dfa, 90 min despues de la administracion, los ratones se expusieron al LCE durante 5 min. El comportamiento se grabo en video y se analizaron los parametros de los brazos abiertos usando el software Ethovision (Noldus Holanda). Los resultados se muestran en la Fig. 12.

Conclusion:

Los ratones tratados con laquinimod muestran actividad ansiolftica de una manera dependiente de la dosis. El efecto maximo se obtuvo con 5-25 mg/kg p.o.

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Referencias

1. Publicacion de la solicitud internacional PCT n.°WO 2007/047863, publicada el 26 de abril de 2007, fecha de presentacion internacional de 18 octubre de 2006.

2. Publicacion de la solicitud internacional PCT n.° WO 2007/146248, publicada el 21 de diciembre de 2007, fecha de presentacion internacional de 12 junio de 2007.

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20. Pellow S, et al. (1985) “Validation of open: closed arm entries in an elevated plus-maze as a measure of anxiety in the rat”. J Neurosci Methods. 14:149-167.

21. Porsolt R.D., et al. (1977) “Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants”. Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 229: 327-33 6.

22. Prut L, y Belzung C. (2003) “The open field as a paradigm to measure the effects of drugs on anxiety-like behaviors: a review”. Eur J Pharmacol. 463:3-33.

17. Riviere, M (1998) “An analysis of extended survival in patients with amyotrophic lateral sclerosis treated with riluzole”. Arch Neurol, 55:526-8.

18. Sarchielli, P, et al. (2007) “Production of Brain-derived neurotrophic factor by mononuclear cells of patients with multiple sclerosis treated with glatiramer acetate, interferon-p la, and high doses of immunoglobulins”. Multiple

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19. Sen, S, et al. (2008) “Serum brain-derived neurotrophic factor, depression, and antidepressant medications: meta-analyses and implications”. Biol Psychiatry, 64:527-532.

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5 21. Tramontina, JF, et al. (2009) “brain-derived neurotrophic factor serum levels before and after treatment for

acute mania”. Neuroscience Letters, 452:111-3.

Claims

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10

15

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40

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50

REIVINDICACIONES

1. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en una cantidad eficaz para su uso en el tratamiento de un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, que es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, un trastorno de la memoria, el smdrome de Rett, el trastorno bipolar o hipermama, en el que el laquinimod o la sal farmaceuticamente aceptable se formula para administracion periodica al sujeto.
2. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de la reivindicacion 1, en el que la administracion periodica comprende administracion una vez al dfa.
3. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de la reivindicacion 1 o 2, en el que la administracion periodica continua durante al menos 3 dfas.
4. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la cantidad de laquinimod o de la sal farmaceuticamente aceptable del mismo es de
0. 1 mg/dfa-40,0 mg/dfa.
5. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de la reivindicacion 4, en el que la cantidad de laquinimod o de la sal farmaceuticamente aceptable del mismo es de 0,6 mg/dfa.
6. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el laquinimod o la sal farmaceuticamente aceptable del mismo se formula para administrarse por via oral.
7. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la enfermedad relacionada con el BDNF es un trastorno depresivo y el trastorno depresivo es la depresion, la depresion en pacientes con cancer, la depresion en un paciente con enfermedad de Parkinson, la depresion posterior a infarto de miocardio, la depresion en un paciente con virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la depresion sintomatica subsindromica, la depresion en una mujer esteril, la depresion pediatrica, la depresion mayor, la depresion de un unico episodio, la depresion recidivante, la depresion inducida por abusos a los ninos, la depresion posparto, la depresion mayor segun el DSM-IV, la depresion mayor refractaria al tratamiento, la depresion severa, la depresion psicotica, la depresion posterior a apoplejfa, el dolor neuropatico, la enfermedad mamaco-depresiva incluyendo enfermedad mamaco-depresiva con episodios mixtos y enfermedad mamaco-depresiva con episodios de depresion, el trastorno afectivo estacional, la depresion bipolar Bp

1, la depresion bipolar BP II o la depresion mayor con distimia.
8. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la enfermedad relacionada con el BDNF es un trastorno de ansiedad y el trastorno de ansiedad es la ansiedad generalizada, el trastorno de panico, la fobia, el trastorno de estres postraumatico, el trastorno obsesivo-compulsivo, la ansiedad por separacion o la ansiedad infantil.
9. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, que comprende ademas administrar periodicamente al sujeto un segundo agente que aumenta el BDNF, que es riluzol o fluoxetina.
10. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que la sal farmaceuticamente aceptable de laquinimod es laquinimod de sodio.
11. Uso de laquinimod en la fabricacion de un medicamento para tratar a un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, que es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, un trastorno de la memoria, el smdrome de Rett, el trastorno bipolar o la hipermama.
12. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de laquinimod para su uso en el tratamiento de un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, que es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, un trastorno de la memoria, el smdrome de Rett, el trastorno bipolar o la hipermama.
13. Una preparacion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de laquinimod y una cantidad eficaz de un segundo agente que aumenta el BDNF, que es riluzol o fluoxetina, para su uso en el tratamiento de un sujeto humano que padece una enfermedad relacionada con el BDNF, que es la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, un trastorno depresivo, un trastorno de ansiedad, la retinitis pigmentosa, la disfuncion erectil, un trastorno de la memoria, el smdrome de Rett, el trastorno bipolar o la hipermama.
14. Laquinimod o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que la enfermedad relacionada con el BDNF es la enfermedad de Huntington.
15. Uso de la reivindicacion 11 o la composicion farmaceutica de la reivindicacion 12 o la preparacion farmaceutica de la reivindicacion 13, en el que la enfermedad relacionada con el BDNF es la enfermedad de Huntington.