ES2624196T3

ES2624196T3 - Inhibidores polipéptidicos de HSP27 quinasa y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2624196T3
Application number: ES13001411.1T
Authority: ES
Inventors: Brandon Seal; Brian Ward; Alyssa Panitch
Original assignee: Purdue Research Foundation
Current assignee: Purdue Research Foundation
Priority date: 2007-01-10
Filing date: 2007-07-16
Publication date: 2017-07-13
Anticipated expiration: 2027-07-16
Also published as: EP2155228B1; US20170072009A1; WO2008085191A1; EP2617431A2; CA2898230C; DK2617431T3; DK2606903T3; ES2594281T3; US20090196927A1; EP2617431B1; CA2898230A1; US8536303B2; EP2155228A4; CA2689296A1; AU2007342674A1; US20140112947A1; ES2476842T3; US9649354B2; AU2007342674B2; EP2606903B1

Abstract

Un polipéptido que consiste en la secuencia - WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA; - RQRRKKRGKALARQLGVAA; - GRKKRRQRKALARQLGVAA; - YGRKKRRQRRRKALARQLGVAA; o - WLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA.

Description

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DESCRIPCION

Inhibidores polipeptidicos de HSP27 quinasa y usos de los mismos Campo de la invencion

La invencion esta en el campo de la biologfa celular y molecular, polipeptidos, descubrimiento de farmacos y metodos terapeuticos de uso.

Sumario de la invencion

En un primer aspecto, la presente invencion proporciona un polipeptido que consiste en la secuencia WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA; RQRRKKRGKALARQLGVAA; GRKKRRQRKALARQLGVAA; YGRKKRRQRRRKALARQLGVAA; o WLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA.

La presente divulgacion incluye un polipeptido que comprende o consiste en una secuencia de acuerdo con formula general I:

Z1 -X1-X2-X3-X4 X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2

donde Z1 y Z2 estan de forma independiente ausentes o son dominios de transduccion;

X1 se selecciona del grupo que consiste en KA, KKA y KKKA, o esta ausente;

X2 se selecciona del grupo que consiste en G, L, A, V, I, M, Y, W y F, o es un aminoacido alifatico;

X3 se selecciona del grupo que consiste en V, L, I, A, G, Q, N, S, T y C, o es un aminoacido alifatico;

X4 se selecciona del grupo que consiste en Q, N, H, R y K;

X5 se selecciona del grupo que consiste en Q y N;

X6 se selecciona del grupo que consiste en C, A, G, L, V, I, M, Y, W y F o es un aminoacido alifatico;

X7 se selecciona del grupo que consiste en S, A, C, T y G o es un aminoacido alifatico;

X8 se selecciona del grupo que consiste en V, L, I y M;

X9 esta ausente o es cualquier aminoacido; y X10 esta ausente o es cualquier aminoacido;

donde al menos una de las siguientes es cierta:

(a) X3 es N y X6 no es G;

(b) X6 es G y X3 no es N;

(c) X2 no es L;

(d) X4 no es R;

(e) X5 no es Q;

(f) X6 no es L;

(g) X8 no es V;

(h) X10 esta ausente; o

(i) X9 y X10 estan ausentes; y donde cuando X1 esta ausente, entonces Z1 es un dominio de transduccion que termina en KA.

En diversas divulgaciones X4 es R; X5 es Q y/o X8 es V. En diversas divulgaciones adicionales, X3 se selecciona del grupo que consiste en A, G, Q y N.

En una divulgacion preferida, al menos uno de Z1 y Z2 es un dominio de transduccion. En otro aspecto, la presente invencion proporciona composiciones, que comprenden uno o mas polipeptidos de la presente invencion y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

Una divulgacion proporciona secuencias de acido nucleico aisladas que codifican un polipeptido de la presente invencion. Tambien se desvelan vectores de expresion recombinantes que comprenden las secuencias de acido nucleico divulgadas, y celulas hospedadoras transfectadas con los vectores de expresion recombinantes desvelados.

En otro aspecto, la invencion proporciona dispositivos biomedicos, donde los dispositivos biomedicos comprenden uno o mas polipeptidos de la presente invencion dispuesto en o sobre el dispositivo biomedico. En diversas realizaciones, dichos dispositivos biomedicos se seleccionan del grupo que consiste en endoprotesis vasculares, injertos, shunts, injertos de endoprotesis vasculares, dispositivos de angioplastia, cateteres de globo, fistulas, apositos y cualquier dispositivo de suministro farmacologico implantable.

Tambien se divulgan metodos para uno o mas de los siguientes usos terapeuticos (a) reducir la proliferacion y/o migracion de celulas del musculo liso; (b) promover la relajacion del musculo liso; (c) aumentar la frecuencia contractil del musculo cardiaco; (d) aumentar la frecuencia de relajacion del musculo cardiaco; (e) promover la

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curacion de heridas; (f) tratar y/o reducir los trastornos fibroticos y/o queloides; (g) reducir la formacion de cicatrices; (h) alterar las adhesiones focales; (i) regular la polimerizacion de actina; y (j) tratar o reducir la incidencia de uno o mas de hiperplasia de la mtima, estenosis, reestenosis, aterosclerosis, tumores y metastasis de celulas del musculo liso, espasmo del musculo liso, angina, angina de Prinzmetal (vasoespasmo coronario), isquemia, ictus, bradicardia, hipertension, hipertrofia cardiaca y otros danos de organos finales asociados con la hipertension (incluyendo pero sin limitacion insuficiencia renal e ictus), hipertension pulmonar (de pulmon), asma (broncoespasmo), toxemia del embarazo, parto prematuro, preeclampsia/eclampsia, enfermedad o fenomeno de Raynaud, uremia hemolftica, isquemia mesenterica no oclusiva, fisura anal, acalasia, impotencia, migrana, lesion muscular isquemica asociada con espasmo del musculo liso, vasculopatia, tal como vasculopatfa de trasplante; bradiarritmia, bradicardia, insuficiencia cardiaca congestiva, miocardio aturdido, hipertension pulmonar, disfuncion diastolica, gliosis; enfermedad pulmonar obstructiva cronica, osteopenia, disfuncion endotelial, e inflamacion; donde el metodo comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz para llevar a cabo el o los usos terapeuticos de uno o mas polipeptidos o composiciones de acuerdo con la presente invencion, o equivalentes funcionales de los mismos.

Descripcion detallada de la invencion

Dentro de la presente solicitud, a no ser que se indique de otro modo, las tecnicas utilizadas pueden encontrarse en cualquiera de varias referencias bien conocidas tales como: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, editado por D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA), “Guide to Protein Purification” en Methods in Enzymology (M.P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA), Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2a Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. Nueva York, NY), y Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109-128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.

Se usa predominantemente en el presente documento la designacion de una unica letra para aminoacidos. Como se conoce bien por un experto en la materia, dichas designaciones de una unica letra son las siguientes: A es alanina; C es cistema; D es acido aspartico; E es acido glutamico; F es fenilalanina; G es glicina; H es histidina; I es isoleucina; K es lisina; L es leucina; M es metionina; N es asparagina; P es prolina; Q es glutamina; R es arginina; S es serina; T es treonina; V es valina; W es triptofano; e Y es tirosina.

Como se usa en el presente documento, las formas singulares “un” y “el” incluyen referentes plurales a no ser que el contexto claramente dicte otra cosa. Por ejemplo, la referencia a un “polipeptido” significa uno o mas polipeptidos.

Z1 -X1-X2-X3-X4 X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2

X1 se selecciona del grupo que consiste en KA, KKA y KKKA, o esta ausente;

X2 se selecciona del grupo que consiste en G, L, A, V, I, M, Y, W y F, o es un aminoacido alifatico; X3 se selecciona del grupo que consiste en V, L, I, A, G, Q, N, S, T y C, o es un aminoacido alifatico; X4 se selecciona del grupo que consiste en Q, N, H, R y K;

X5 se selecciona del grupo que consiste en Q y N;

X6 se selecciona del grupo que consiste en C, A, G, L, V, I, M, Y, W y F o es un aminoacido alifatico; X7 se selecciona del grupo que consiste en S, A, C, T y G o es un aminoacido alifatico;

X8 se selecciona del grupo que consiste en V, L, I y M;

donde al menos una de las siguientes es cierta:

(a) X3 es N y X6 no es G;

(b) X6 es G y X3 no es N;

(c) X2 no es L;

(d) X4 no es R;

(e) X5 no es Q;

(f) X6 no es L;

(g) X8 no es V;

(h) X10 esta ausente; o

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(i) X9 y X10 estan ausentes; y

donde cuando X1 esta ausente, entonces Z1 es un dominio de transduccion que termina en KA.

Ademas de los aminoacidos enumerados, X2, X3, X6 y X7 puede ser cualquier aminoacido alifatico (bien de origen natural o bien no), incluyendo pero sin limitacion beta-alanina y acido 2-aminociclohexano-1-carboxflico.

En diversas divulgaciones adicionales X4 es R; X5 es Q y/o X8 es V. En diversas divulgaciones adicionales, X3 se selecciona del grupo que consiste en V. L. L A, G, Q y N. En divulgaciones adicionales, X6 se selecciona del grupo que consiste en C, A, G, L, V, I, M, Y, W y F. En una divulgacion, X7 se selecciona del grupo que consiste en S, A, C, T y G.

En una divulgacion preferida, al menos uno de Z1 y Z2 es un dominio de transduccion.

Por lo tanto, de acuerdo con estas diversas divulgaciones, los polipeptidos de acuerdo con formula general I incluyen, pero sin limitacion, los siguientes:

Z1 -X1-X2-X3-K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-X4-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Z1 -X1-X2-X3-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-X3-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Z1 -X1-X2-A-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-X4-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-X4-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-A-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-X4-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-X4-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-G-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

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Z1 -X1-X2-N-K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-X1I-X2-N-X4-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 -X1-X2-N-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Z1 - KKKA-X2-X3- K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3-X4- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- R- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- R- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- R- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3-X4- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2

Z1 - KKKA-X2-X3- K-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- K-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- K- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-X3- K- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A-X4-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A-X4- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-A-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R- N-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- R- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A-X4- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A-X4-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K- N-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-A- K- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- R-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- K-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G-X4-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G-X4- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-X4X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2

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Z1 - KKKA-X2-G- R-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- R-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- R-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G-X4- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- K-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-G- K-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-G-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- R-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- K-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q-X4-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q-X4- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- R-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KK KA-X2-Q- R-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- R-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q-X4- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KK KA-X2-Q- K-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2-Q- K-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KKKA-X2-Q-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K-X5-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N -X4- N -X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - R- N-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - R- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - R- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N -X4- N -X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K-Q-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K- N-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KKKA-X2- N - K- N-X6-X7 - V-X9-X10-Z2

Z1-KA-X2-X3-K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-X4-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-X3- R- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-X3- K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-X3- K-X5-X6-X7 - V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-X3- K- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-X3-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-A- R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-A- K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-A-X4-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-A-X4- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

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Z1-KA-X2-A-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-K-Q-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-A-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-G- R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-G- K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-X4-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-G-X4- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-X4X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-G-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-Q- R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-Q- K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-Q-X4-Q-X6-X7 -X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2-Q-X4- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-X4 X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-X4-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-K-Q-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-Q-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Z1 - KA-X2- N - K-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1 - KA-X2- N -X4- N -X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-R-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-R-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-X4-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Z1-KA-X2-N-K-Q-X6-X7-X3-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-K-X5-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-K-Q-X6-X7-V-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-K-N-X6-X7-X8-X9-X10-Z2 Z1-KA-X2-N-K-N-X6-X7-V-X9-X10-Z2

Los polipeptidos WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA; RQRRKKRGKALARQLGVAA;

GRKKRRQRKALARQLGVAA; YGRKKRRQRRRKALARQLGVAA; o WLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA son utiles,

por ejemplo, como inhibidores de HSP27 quinasa, que pueden usarse como agentes terapeuticos para una

diversidad de trastornos, como se divulga en mas detalle posteriormente.

El termino “polipeptido” se usa en un sentido mas amplio para hacer referencia a una secuencia de aminoacidos subunitarios, analogos de aminoacidos o peptidomimeticos. Las subunidades se unen por enlaces peptfdicos, excepto donde se indique. Los polipeptidos descritos en el presente documento pueden sintetizarse qmmicamente o expresarse de forma recombinante.

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Preferentemente, los polipeptidos desvelados y de la invencion se sintetizan de forma qmmica. Los polipeptidos sinteticos, preparados usando las tecnicas bien conocidas de fase solida, fase Uquida o tecnicas de condensacion de peptidos, o cualquier combinacion de las mismas, pueden incluir aminoacidos naturales y no naturales. Los aminoacidos usados para smtesis peptfdica pueden ser resina de aminoacidos de Boc convencional (N-a-t- butiloxicarbonilo protegido por Na-amino) con los protocolos convencionales de desproteccion, neutralizacion, acoplamiento y lavado del procedimiento de fase solida original de Merrifield (1963, J. Am. Chem. Soc. 85: 21492154), o los aminoacidos de 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) protegidos por Na-amino labiles por bases descritos en primer lugar por Carpino y Han (1972, J. Org. Chem. 37: 3403-3409). Pueden obtenerse aminoacidos protegidos por Na-amino tanto Fmoc como Boc de Sigma, Cambridge Research Biochemical, u otras compares qmmicas con las que estan familiarizados los expertos en la materia. Ademas, los polipeptidos pueden sintetizarse con otros grupos protectores de Na con los que estan familiarizados los expertos en la materia.

Puede conseguirse smtesis peptfdica de fase solida por tecnicas con las que estan familiarizados los expertos en la materia y proporcionadas, por ejemplo, en Stewart y Young, 1984, Solid Phase Synthesis, Segunda Edicion, Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.; Fields y Noble, 1990, Int. J. Pept. Protein Re. 35: 161-214, o usando sintetizadores automaticos. Los polipeptidos de la invencion pueden comprender aminoacidos D (que son resistentes a proteasas espedficas de aminoacidos L in vivo), una combinacion de aminoacidos D y L, y diversos aminoacidos de “diseno” (por ejemplo, aminoacidos ^-metilo, aminoacidos Ca-metilo y aminoacidos Na-metilo, etc.) para transmitir propiedades especiales. Los aminoacidos sinteticos incluyen ornitina para lisina, y norleucina para leucina o isoleucina.

Ademas, los polipeptidos pueden tener enlaces peptidomimeticos, tales como enlaces esteres, para preparar peptidos con propiedades nuevas. Por ejemplo, puede generarse un peptido que incorpora un enlace peptfdico reducido, es decir, R1-CH2-NH-R2, donde R1 y R2 son restos o secuencias de aminoacidos. Puede introducirse un enlace peptfdico reducido como una subunidad dipeptfdica. Dicho polipeptido sena resistente a actividad proteasa, y poseena una semivida in vivo prolongada.

En una divulgacion, al menos uno de Z1 y Z2 es un dominio de transduccion. Como se usa en el presente documento, la expresion “dominio de transduccion” significa una o mas secuencias de aminoacidos o cualquier otra molecula que puede transportar el dominio activo a traves membranas celulares. Estos dominios pueden unirse con otros polipeptidos para dirigir el movimiento de polipeptido unido a traves de membranas celulares. En algunos casos, no es necesario que las moleculas de transduccion esten unidas covalentemente con el polipeptido activo. En una realizacion preferida, el dominio de transduccion se une con el resto del polipeptido mediante enlace peptfdico. (Vease, por ejemplo, Cell 55: 1179-1188, 1988; Cell 55: 1189-1193, 1988; Proc Natl Acad Sci USA 91: 664-668, 1994; Science 285: 1569-1572, 1999; J Biol Chem 276: 3254-3261,2001; y Cancer Res 61: 474-477, 2001. Ademas, Song et al., Chem. Biochem. 5, 1196-1203, desvelan inhibidores de MAPKAPK-2 tales como la secuencia LQRQLSI conjugada con dominio de transduccion).

En una divulgacion, tanto X1 como X3 son dominios de transduccion. En una divulgacion adicional, el dominio o los dominios de transduccion se seleccionan del grupo que consiste en (R)4-9; GRKKRRQRRRPPQ; RQRRKKRG; GRKKRRQR; AYARAAARQARA; DAATATRGRSAASRPTERPRAPARSASRPRRPVE;

GWTLNSAGYLLGLINLKALAALAKKIL; PLSSIFSRIGDP; ALLPAVLLALLAP; AAVLLPVLLAAP;

VTVLALGALAGVGVG; GALFLGWLGAAGSTMGAWSQP; GWTLNSAGYLLGLINLKALAALAKKIL;

KLALKLALKALKAALKLA; KETWWETWWTEWSQPKKKRKV; KAFAKLAARLYRKA; KAFAKLAARLYRAA; AAFAKLAARLYRKA; KAFAALAARLYRKA; KAFAKLAARLYRKAGC; KAFAKLAARLYRAAGC;

AAFAKLAARLYRKAGC; KAFAALAARLYRKAGC; KAFAKLAAQLYRKAGC, AGGGGYGRKKRRQRRR, y YARAAARQARA, YGRKKRRQRRR, WLRRIKAWLRRIKA; y WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKA.

Los polipeptidos ejemplares adicionales incluyen, pero sin limitacion, cualquiera de los enumerados anteriormente, donde uno o ambos de Z1 o Z2 se seleccionan del grupo que consiste en WLRRIKAWLRRIKA; YGRKKRRQRRR; y YARAAARQARA; asf como

YARAAARQARAKALNRQLGVA;

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WLRRIKAWLRRIKAKALNRQLAVAA;

WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALNRQLAVAA; y

YARAAARQARAKALARQLGVAA.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona composiciones, que comprenden WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA; RQRRKKRGKALARQLGVAA; GRKKRRQRKALARQLGVAA; YGRKKRRQRRRKALARQLGVAA; o WLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA, y un veMculo farmaceuticamente aceptable. Dichas composiciones farmaceuticas son especialmente utiles para llevar a cabo los metodos desvelados descritos posteriormente. Para administracion, los polipeptidos se combinan habitualmente con uno o mas adyuvantes apropiados para la via de administracion indicada. Los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidon, esteres de celulosa de acidos alcanoicos, acido estearico, talco, estearato de magnesio, oxido de magnesio, sales de sodio y calcio de acidos fosforicos y sulfuricos, goma arabiga, gelatina, alginato sodico, polivinilpirrolidona, sulfato de dextrano, recubrimientos o composiciones de gel o no de gel que contienen heparina y/o alcohol polivimlico, y se comprime o encapsula para administracion convencional. Como alternativa, los compuestos de la presente invencion pueden disolverse en solucion salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, soluciones coloidales de carboximetilcelulosa, etanol, aceite de mafz, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de sesamo, goma de tragacanto y/o diversos tampones. Se conocen bien en la tecnica farmaceutica otros adyuvantes y modos de administracion. El vetnculo o diluyente puede incluir material de retardo temporal, tal como gliceril monoestearato o gliceril diestearato solo o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la tecnica. Los polipeptidos pueden unirse con otros compuestos para promover una semivida aumentada in vivo, tales como polietilenglicol. Dicho enlace puede ser covalente o no covalente como se entiende por los expertos en la materia.

Los polipeptidos pueden componerse en una forma solida (incluyendo granulos, polvos o supositorios) o en una forma lfquida (por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones). Los polipeptidos de la invencion pueden aplicarse en una diversidad de soluciones. Las soluciones adecuadas para su uso de acuerdo con la invencion son esteriles, disuelven suficientes cantidades de los polipeptidos y no son perjudiciales para la aplicacion propuesta.

La presente divulgacion incluye un acido nucleico aislado que codifica un polipeptido de la presente invencion. Los acidos nucleicos apropiados de acuerdo con la presente divulgacion resultaran evidentes para un experto en la materia basandose en la divulgacion proporcionada en el presente documento y el nivel general de experiencia en la tecnica.

La presente divulgacion incluye ademas un vector de expresion que comprende secuencias de control de ADN unidas operativamente con los acidos nucleicos aislados de la presente invencion, como se ha divulgado anteriormente. Las “secuencias de control” unidas operativamente con los acidos nucleicos divulgados son secuencias de acidos nucleicos capaces de efectuar la expresion de los acidos nucleicos divulgados. No es necesario que las secuencias de control sean contiguas con los acidos nucleicos, siempre que actuen para dirigir la expresion de los mismos. Por lo tanto, por ejemplo, pueden estar presentes secuencias no traducidas intermedias pero transcritas entre una secuencia promotora y el acido nucleico y la secuencia promotora aun puede considerarse “unida operativamente” con la secuencia codificante. Otras de dichas secuencias de control incluyen, pero sin limitacion, senales de poliadenilacion, senales de determinacion, y sitios de union a ribosomas. Dichos vectores de expresion pueden ser de cualquier tipo conocido en la tecnica, incluyendo pero sin limitacion vectores de expresion basados en plasmidos y virales.

En una divulgacion, la solicitud proporciona celulas hospedadoras modificadas por ingeniena genetica que comprenden los vectores de expresion divulgados. Dichas celulas hospedadoras pueden ser celulas procariotas o celulas eucariotas, y pueden transfectarse de forma transitoria o estable, o pueden transducirse con vectores virales.

En otro aspecto, la invencion proporciona dispositivos biomedicos que comprenden uno o mas de los polipeptidos de la presente invencion dispuestos en o sobre el dispositivo biomedico. Como se usa en el presente documento, un “dispositivo biomedico” se refiere a un dispositivo que puede implantarse en un sujeto, por ejemplo, un ser humano, para proporcionar un resultado deseado. Los dispositivos biomedicos de acuerdo con este aspecto de la invencion se seleccionan del grupo que consiste en endoprotesis vasculares (incluyendo pero sin limitacion endoprotesis coronarias), apositos tales como pelfculas (por ejemplo, pelfculas de poliuretano), injertos (incluyendo pero sin limitacion injertos vasculares), shunts, injertos de endoprotesis vasculares, fistulas, dispositivos de angioplastia, cateteres de globo y dispositivos de suministro farmacologico implantables. Son dispositivos biomedicos divulgados adicionales barreras de adhesion (incluyendo pero sin limitacion carboximetilcelulosa, acido hialuronico y laminas de PTFE) para separar el tejido, hidrocoloides (partfculas coloidales hidrofilas unidas con espuma de poliuretano), hidrogeles (polfmeros reticulados que contienen aproximadamente al menos 60 % de agua), otros lfquidos viscosos y especies de tipo hidrogel (incluyendo pero sin limitacion, las divulgadas en el documento US 20030190364), espumas (hidrofilas o hidrofobas), alginatos de calcio (compuestos no entrelazados de fibras de alginato de calcio), celofan, pluronics (es decir, poli(etilenglicol)-bloque-poli(propilenglicol)) y polfmeros biologicos.

Como se usa en el presente documento, el termino “injertos” se refiere a injertos e implantes tanto naturales como prosteticos. En una realizacion preferida el injerto es un injerto vascular.

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Como se usa en el presente documento, la expresion “endoprotesis vascular” incluye la endoprotesis vascular en s^ misma, asf como cualquier vaina u otro componente que puede usarse para facilitar la colocacion de la endoprotesis vascular.

Como se usa en el presente documento, “dispuesto en o sobre” significa que el o los polipeptidos puede estar directa o indirectamente en contacto con una superficie externa, una superficie interna, o incluido dentro del dispositivo biomedico. El contacto “directo” se refiere a la disposicion de los polipeptidos directamente en o sobre el dispositivo, incluyendo pero sin limitacion empapar un dispositivo biomedico en una solucion que contiene uno o mas polipeptidos, recubrir por centrifugado o pulverizar de una solucion que contiene uno o mas polipeptidos en un dispositivo, implantar cualquier dispositivo que suministre el polipeptido, y administrar el polipeptido a traves de un cateter directamente a la superficie o en cualquier organo.

El contacto “indirecto” significa que el o los polipeptidos no entran en contacto directamente con el dispositivo biomedico. Por ejemplo, el o los polipeptidos pueden estar dispuestos en una matriz, tal como una matriz de gel (tal como un recubrimiento de heparina) o un fluido viscoso, que se dispone sobre el dispositivo biomedico. Dichas matrices pueden prepararse para, por ejemplo, modificar las propiedades de union y liberacion del o los polipeptidos segun se requiera. En un ejemplo no limitante, se dispone un recubrimiento de heparina sobre el dispositivo biomedico (tal como una lamina o un dispositivo vascular de poli(tetrafluoroetileno) (PTFE)) y el o los polipeptidos se disponen sobre o en un recubrimiento de heparina; en este ejemplo, el o los polipeptidos pueden suministrarse a un sujeto que lo necesite de una manera controlada. En un ejemplo no limitante, la liberacion del o los polipeptidos de superficies intersticiales de laminas o dispositivos vasculares de poli(tetrafluoroetileno) (PTFE) puede controlarse adsorbiendo o uniendo en primer lugar la heparina con la superficie y/o intersticios del dispositivo de PTFE seguido de adsorcion del polipeptido. Tambien pueden usarse capas alternantes de heparina y el polipeptido para aumentar la dosis del polipeptido y/o momento de liberacion. En condiciones fisiologicas dentro del cuerpo, la cinetica de la asociacion y disociacion de polipeptidos divulgados en el presente documento con y desde heparina conducira a un perfil de liberacion retardada en comparacion con liberacion del polipeptido desde un dispositivo de PTFE desnudo. Ademas, el perfil de liberacion puede alterarse adicionalmente mediante cambios en la temperatura local, pH o fuerza ionica. Dicha liberacion controlada tiene gran valor para su uso en los diversos tratamientos terapeuticos para los que pueden usarse los dispositivos biomedicos, como se analiza posteriormente.

Se conocen en la tecnica recubrimientos de heparina sobre diversos dispositivos medicos. Las aplicaciones en seres humanos incluyen cateteres venosos centrales, endoprotesis vasculares coronarias, dispositivos de asistencia ventricular, circuitos de sangre extracorporeos, dispositivos de toma de muestras sangumeas e injertos vasculares. Dicho recubrimientos pueden estar una forma de gel o no de gel. Como se usa en el presente documento “recubrimiento de heparina” incluye heparina adsorbida en la superficie, heparina unida con la superficie, y heparina incluida en la superficie del polfmero de PTFE. Un ejemplo del metodo para unir la heparina sena usar plasma de amomaco para tratar, por ejemplo, una superficie de PTFe y hacer reaccionar las aminas resultantes con heparina oxidada. La acumulacion capa a capa de la heparina y uno o mas polipeptidos podna usarse despues para aumentar el polipeptido en la superficie y expandir el tiempo de suministro. Las formas de gel del recubrimiento de heparina pueden incluir, pero sin limitacion, cualquier hidrogel que contenga heparina unida bien covalentemente o bien ffsicamente al gel. El recubrimiento de heparina se dispone sobre el dispositivo biomedico, que incluye contacto directo con una superficie externa o una superficie interna del dispositivo biomedico, o se incluye dentro del dispositivo biomedico. El contacto “directo” se refiere a la disposicion directamente sobre o en el dispositivo, incluyendo pero sin limitacion, empapar un dispositivo biomedico en una solucion que contiene heparina (donde los polipeptidos pueden anadirse como parte de la solucion de recubrimiento de heparina, o pueden disponerse posteriormente en o sobre en el recubrimiento de heparina despues de que entre en contacto con el dispositivo), recubrir por centrifugacion o pulverizar una solucion de recubrimiento de heparina en el dispositivo (donde los polipeptidos pueden anadirse como parte de la solucion de recubrimiento de heparina, o pueden disponerse posteriormente en o sobre el recubrimiento de heparina despues de que entre en contacto con el dispositivo), y administrar la solucion de recubrimiento de heparina que contiene los polipeptidos a traves de un cateter directamente sobre la superficie o en cualquier organo. Las caractensticas ffsicas y composicion espedfica de la capa de heparina pueden ser cualesquiera que proporcionen el perfil de liberacion deseado del o los polipeptidos. Vease, por ejemplo, Seal y Panitch, Biomacromolecules 2003(4): 1572-1582 (2003); documento US20030190364; y Carmeda BioActive Surface (CBAS™) el producto de Carmeda AB en Estocolmo, Suecia. El contacto “indirecto” significa que el recubrimiento de heparina no esta directamente en contacto con el dispositivo tal como, por ejemplo, cuando se coloca un recubrimiento intermedio entre la superficie del dispositivo y el recubrimiento de heparina. En un ejemplo no limitante, el o los polipeptidos podnan adsorberse inicialmente (directa o indirectamente) y despues adsorberse en un recubrimiento de heparina; esto podna seguirse opcionalmente por capas polipeptfdicas, capas de heparina, o combinaciones de las mismas posteriores, segun se desee. Como se entendera por los expertos en la materia, puede usarse cualquier polisacarido sulfatado o polfmero con carga negativa de manera similar a la heparina como se ha descrito anteriormente, para proporcionar caractensticas de liberacion deseadas.

Tambien se desvelan metodos para uno o mas de los siguientes usos terapeuticos

(a) reducir la proliferacion y/o migracion de celulas del musculo liso; (b) promover la relajacion del musculo liso;

(c) aumentar la frecuencia contractil del musculo cardiaco; (d) aumentar la frecuencia de relajacion del musculo

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cardiaco; (e) promover la curacion de heridas; (f) tratar y/o reducir trastornos fibroticos y/o queloides; (g) reducir la formacion de cicatrices; (h) alterar las adhesiones focales; (i) regular la polimerizacion de actina; y (j) tratar o reducir la incidencia de uno o mas de hiperplasia de la mtima, estenosis, reestenosis, aterosclerosis, tumores y metastasis de celulas de musculo liso, espasmo del musculo liso, angina, angina de Prinzmetal (vasoespasmo coronario), isquemia, ictus, bradicardia, hipertension, hipertrofia cardiaca y otros danos de organos finales asociados con la hipertension (incluyendo pero sin limitacion insuficiencia renal e ictus), hipertension pulmonar (de pulmon), asma (broncoespasmo), toxemia del embarazo, parto prematuro, preeclampsia/eclampsia, enfermedad o fenomeno de Raynaud, uremia hemolftica, isquemia mesenterica no oclusiva, fisura anal, acalasia, impotencia, migrana, lesion muscular isquemica asociada con espasmo del musculo liso, vasculopatfa, tal como vasculopatfa de trasplante; bradiarritmia, bradicardia, insuficiencia cardiaca congestiva, miocardio aturdido, hipertension pulmonar, disfuncion diastolica, gliosis (proliferacion de astrocitos, y puede incluir deposicion de matriz extracelular, incluyendo pero sin limitacion dicha proliferacion y deposicion de ECM en areas danadas del sistema nervioso central); enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) (es decir, enfermedades del tracto respiratorio caracterizadas por obstruccion o limitacion de las vfas aereas; incluyendo, pero sin limitacion, bronquitis cronica y enfisema) reabsorcion del hueso (osteopenia) asociada con el envejecimiento o la inmovilizacion (lo que conduce a fracturas oseas); disfuncion endotelial limitante e inflamacion; donde el metodo comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz para llevar a cabo el o los usos terapeuticos de uno o mas polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion o equivalentes funcionales de los mismos.

Sin quedar ligado a ningun mecanismo espedfico, los inventores creen que los polipeptidos de la presente invencion proporcionan su efecto terapeutico como resultado de inhibir la fosforilacion de HSP27 por HSP27 quinasa (MAPKAP2), aunque la presente invencion tambien abarca mecanismos alternativos, incluyendo pero sin limitacion inhibicion de la fosforilacion de HSP27 por MAPKAP3 y MAPKAP5.

Dado que MAPKAP2 esta cadena abajo de la MAP quinasa p38, cualquier uso terapeutico para el que sean utiles los inhibidores de MAPK p38 tambien estan dentro del alcance de la presente divulgacion.

En una divulgacion el individuo es un mairnfero; en otra divulgacion, el individuo un ser humano.

Como se usa en el presente documento, “tratar” o “tratando” significa conseguir uno o mas de los siguientes: (a) reducir la gravedad del trastorno; (b) evitar el desarrollo de smtomas caractensticos del trastorno o los trastornos que se tratan; (c) limitar el empeoramiento de smtomas caractensticos del trastorno o los trastornos que se tratan; (d) limitar la reaparicion del trastorno o los trastornos en pacientes que han tenido previamente el trastorno o los trastornos; y (e) limitar la reaparicion de smtomas en pacientes que han sido previamente sintomaticos para el trastorno o los trastornos.

Como se usa en el presente documento, el termino “"reducir” o “reduciendo” significa limitar la aparicion del trastorno en individuos en riesgo de desarrollar el trastorno.

Como se usa el presente documento, “administrar” incluye administracion in vivo, asf como administracion directamente a tejido ex vivo, tal como injertos venosos.

La hiperplasia de la mtima es un proceso complejo que conduce a insuficiencia del injerto, y es la causa mas habitual de fallo de los injertos de derivacion arterial. Aunque no se entiende completamente, la hiperplasia de la mtima esta mediada por una secuencia de acontecimientos que incluyen lesion de celulas endoteliales y posterior proliferacion de musculo liso vascular y migracion del medio a la mtima. Este proceso esta asociado con una modulacion fenotfpica de las celulas del musculo liso de un fenotipo contractil a uno sintetico. Las celulas del musculo liso “sinteticas” secretan protemas de matriz extracelular, lo que conduce a estrechamiento patologico del lumen de los vasos lo que conduce a estenosis del injerto y en ultima instancia fallo del injerto. Dicha lesion de celulas endoteliales y posterior proliferacion de celulas de musculo liso y migracion a la mtima tambien caracterizan la reestenosis, mas habitualmente despues de angioplastia para despejar un vaso sangumeo obstruido.

En algunos metodos divulgados, tales como los relacionados con la reduccion de la aparicion de proliferacion y/o migracion de celulas de musculo liso, o promocion de la relajacion del musculo liso, la administracion puede ser directa, poniendo en contacto un vaso sangumeo en un sujeto que se trata con uno o mas polipeptidos de la invencion. Por ejemplo, puede forzarse una preparacion lfquida de uno o mas polipeptidos de acuerdo con la invencion a traves de un cateter poroso, o inyectarse de otro modo a traves de un cateter al sitio de la lesion, o puede extenderse un gel o lfquido viscoso que contenga el o los polipeptidos de acuerdo con la invencion en el sitio de la lesion. En estas divulgaciones de suministro directo, se prefiere mas que el o los polipeptidos divulgados o de la invencion se suministren a celulas del musculo liso en el sitio de la lesion o intervencion. Esto puede conseguirse, por ejemplo, suministrando los vectores de expresion recombinante divulgados (mas preferentemente un vector viral, tal como un vector adenoviral) al sitio. Mas preferentemente, se consigue suministro en celulas de musculo liso usando el o los polipeptidos divulgados o de la invencion que incluyen al menos un dominio de transduccion para facilitar la entrada en las celulas del musculo liso.

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En diversas otras divulgaciones de los metodos, particularmente las que implican reducir la aparicion de proliferacion y/o migracion de celulas de musculo liso, el metodo se realiza en un sujeto que se ha sometido, se esta sometiendo o se va a someter a un procedimiento seleccionado del grupo de consiste en angioplastia, colocacion de endoprotesis vascular, endarterectoirna, atereotomna, cio^a de derivacion (tal como derivacion de arteria coronaria; cirugfas de derivacion vascular periferica), injerto vascular, trasplante de organos, implante de dispositivo prostetico, reconstrucciones microvasculares, construccion de colgajo quirurgico plastico y colocacion de cateter.

En otra divulgacion, los metodos divulgados comprenden tratar o reducir la aparicion de uno o mas trastornos seleccionados del grupo que consiste en hiperplasia de la mtima o neomtima, estenosis, reestenosis y aterosclerosis, que comprenden poner en contacto a un sujeto que lo necesite con una cantidad eficaz para tratar o reducir la hiperplasia de la mtima o neomtima, estenosis, reestenosis y/o aterosclerosis de uno o mas polipeptidos divulgados o de la invencion.

En una divulgacion adicional, el metodo divulgado se usa para tratar tumores y/o metastasis, incluyendo pero sin limitacion tumores del musculo liso. En una divulgacion, el tumor es un leiomiosarcoma, que se define como una neoplasia maligna que surge del musculo. Dado que los leiomiosarcomas pueden surgir de las paredes de vasos sangumeos tanto grandes como pequenos, pueden aparecer en cualquier parte del cuerpo, pero son mas comunes los leiomiosarcomas peritoneales, uterinos y gastrointestinales (particularmente esofagicos). Como alternativa, el tumor de musculo liso puede ser un leiomioma, una neoplasia de musculo liso no maligna. En una divulgacion adicional, el metodo puede combinarse con otros tratamientos para tumores y/o metastasis de celulas de musculo liso, tales como quimioterapia, radioterapia y cirugfa para retirar el tumor. Sin estar limitado a ningun mecanismo espedfico, los inventores creen que la administracion de los polipeptidos divulgados o de la invencion puede usarse para tratar tumores y/o metastasis por cualquiera de o todos los siguientes mecanismos: prevenir la resistencia a farmacos para farmacos antineoplasicos o promover la susceptibilidad a farmacos antineoplasicos, promover la apoptosis de celulas cancerosas, reducir la invasion celular a traves de expresion de metaloproteinasa de matriz reducida y migracion reducida de celulas cancerosas, y mediante supresion de la oncogenesis viral.

En una divulgacion adicional de los metodos se usan para tratar o reducir la aparicion de espasmos del musculo liso, que comprenden poner en contacto un sujeto o injerto que lo necesite con una cantidad eficaz para reducir el espasmo del musculo liso de uno o mas polipeptidos divulgados o de la invencion.

Se encuentran musculos lisos en las paredes de vasos sangumeos, vfas respiratorias, el tracto gastrointestinal y el tracto genitourinario. La contraccion tonica patologica del musculo liso constituye un espasmo. Muchas afecciones patologicas se asocian con el espasmo del musculo liso vascular (“vasoespasmo”), el musculo liso que reviste los vasos sangumeos. Esto puede provocar smtomas tales como angina e isquemia (si esta implicada una arteria coronaria), o ictus como en el caso de vasoespasmo inducido por hemorragia subaracnoidea si esta implicado un vaso cerebral. La hipertension (alta presion sangumea) esta provocada por vasoconstriccion excesiva, asf como engrosamiento, de la pared vascular, particularmente en los vasos mas pequenos de la circulacion.

Por lo tanto, en una divulgacion adicional de los metodos, el espasmo de celulas musculares comprende un vasoespasmo, y los metodos se usan para tratar o reducir la aparicion de vasoespasmo. Las divulgaciones del metodo incluyen, pero sin limitacion, metodos para tratar o inhibir la angina, vasoespasmo coronario, angina de Prinzmetal (espasmo focal episodico de una arteria coronaria epicardica), isquemia, ictus, bradicardia e hipertension.

En otra divulgacion de los metodos, la aparicion de espasmo del musculo liso se reduce por tratamiento de un injerto, tal como un injerto venoso o arterial, con el o los polipeptidos divulgados o de la invencion. Uno de los conductos ideales para reconstruccion vascular periferica y coronaria es la vena safena mayor. Sin embargo, la manipulacion quirurgica durante la recogida del conducto con frecuencia conduce a vasoespamo. La etiologfa exacta del vasoespamo es compleja y mas probablemente multifactorial. La mayona de las investigaciones han sugerido que el vasoespamo se debe a la constriccion potenciada o relajacion alterada del musculo liso vascular en el medio de la vena. Numerosos agentes vasoconstrictores tales como endotelina-1 y tromboxano aumentan durante la cirugfa y dan como resultado contraccion del musculo liso vascular. Otros vasoconstrictores tales como norepinefrina, 5-hidroxitriptamina, acetilcolina, histamina, angiotensina II, y fenilefrina se han implicado en el espasmo de injerto venoso. La papaverina es un vasodilatador del musculo liso que se ha usado. En circunstancias en las que el espasmo se produce incluso en presencia de papaverina, los cirujanos usan distension mecanica intraluminal para romper el espasmo. Esto conduce a lesion de la pared del injerto venoso y posterior hiperplasia de la mtima. La hiperplasia de la mtima es la causa principal de fallo del injerto.

Por lo tanto, en la presente divulgacion, el injerto puede ponerse en contacto con el o los polipeptidos divulgados o de la invencion, durante la recogida del donante de injerto, despues de la recogida (antes de la implantacion) y/o durante la implantacion en el receptor del injerto (es decir: ex vitro o in vivo). Esto puede conseguirse, por ejemplo, suministrando los vectores de expresion recombinantes divulgados (mas preferentemente un vector viral, tal como un vector adenoviral) al sitio, y transfectando las celulas del musculo liso. Mas preferentemente, se consigue suministro en el musculo liso usando el o los polipeptidos divulgados o de la invencion que incluyen al menos un dominio de transduccion para facilitar la entrada en las celulas del musculo liso. Durante la implantacion de injertos, se prefiere que el sujeto que recibe el injerto se trate de forma sistemica con heparina, dado que se ha mostrado que

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la heparina se une con dominios de transduccion de protemas y evita que se transduzcan a celulas. Este enfoque conducira a transduccion de protemas localizada del injerto solamente, y no a tejidos perifericos. Los metodos de la presente divulgacion reducen la aparicion de espasmo de injerto venoso durante la recogida y/o implantacion del injerto, y de este modo mejoran el exito del injerto tanto a corto como a largo plazo.

En diversas otras divulgaciones de los metodos, el espasmo de celulas musculares se asocia con un trastorno incluyendo, pero sin limitacion hipertension pulmonar (de pulmon), asma (broncoespasmo), toxemia del embarazo, parto prematuro, preeclampsia/eclampsia, enfermedad o fenomeno de Raynaud, uremia hemolftica, isquemia mesenterica no oclusiva (isquemia de los intestinos que esta provocada por flujo sangumeo inadecuado a los intestinos), fisura anal (que esta provocada por espasmo persistente del esfrnter anal interno), acalasia (que esta provocada por espasmo persistente del esfrnter esofagico inferior), impotencia (que esta provocada por una falta de relajacion de los vasos en el pene, la ereccion requiere vasodilatacion de los vasos sangumeos del cuerpo cavernoso (penianos), migrana (que esta provocada por espasmo de los vasos sangumeos intracraneales), lesion muscular isquemica asociada con espasmo del musculo liso y vasculopatfa, tal como vasculopatfa de trasplante (una reaccion en los vasos trasplantados que es similar a la aterosclerosis, implica remodelacion constrictiva y en ultima instancia anulacion de los vasos sangumeos trasplantados, esta es la causa principal de fallo del trasplante cardiaco).

En otras divulgaciones, los metodos se usan para uno o mas de promover la curacion de heridas, reducir la formacion de cicatrices, tratar y/o reducir los trastornos fibroticos y tratar y/o reducir los queloides. En estas divulgaciones, un “individuo que lo necesite” es un individuo que ha padecido o padecera (por ejemplo, mediante un procedimiento quirurgico) una herida que puede dar como resultado formacion de cicatriz, o ha dado como resultado formacion de cicatriz. Como se usa en el presente documento, el termino “herida” se refiere en general a lesiones de la piel y el tejido subcutaneo. Dichas heridas incluyen, pero sin limitacion laceraciones; quemaduras; punciones; ulceras de presion; ulceras de decubito; aftas; traumatismo, mordeduras; fistulas; ulceras; lesiones provocadas por infecciones; heridas periodontales; heridas endodonticas; smdrome de boca ardiente; heridas de laparotoirna; heridas quirurgicas; heridas de incision; contracturas despues de quemaduras; fibrosis tisular, incluyendo pero sin limitacion fibrosis pulmonar idiopatica, fibrosis hepatica, fibrosis renal, fibrosis retroperitoneal y fibrosis qrnstica, pero excluyendo fibrosis de los vasos sangumeos o fibrosis del tejido cardfaco; y heridas resultantes de procedimientos quirurgicos cosmeticos. En estas divulgaciones, se prefiere que el o los polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion se dispongan en o sobre un aposito u otra administracion topica. Dichos apositos pueden ser cualquiera usado en la tecnica, incluyendo pero sin limitacion pelmulas (por ejemplo, pelmulas de poliuretano), hidrocoloides (partmulas coloidales hidrofilas unidas con espuma de poliuretano), hidrogeles (polfmeros reticulados que contienen aproximadamente al menos 60 % de agua), espumas (hidrofilas o hidrofobas), alginatos calcicos (compuestos no entrelazados de fibras de alginato calcico), celofan y polfmeros biologicos tales como los descritos en la publicacion de solicitud de patente de Estados Unidos numero 20030190364, publicada el 9 de octubre de 2003.

Como se usa en el presente documento, la frase “reducir la formacion de cicatrices” significa cualquier reduccion de la formacion de cicatrices que proporcione un beneficio terapeutico o cosmetico para el paciente. Dicho beneficio terapeutico o cosmetico puede conseguirse, por ejemplo, reduciendo el tamano y/o profundidad de una cicatriz en relacion con la formacion de cicatriz en ausencia de tratamiento con los metodos divulgados, o reduciendo el tamano de una cicatriz existente. Como se usa en el presente documento, dichas cicatrices incluyen cicatrices de todos los tipos, incluyendo pero sin limitacion, queloides; cicatrices hipertroficas; y formacion de adhesion entre superficies de organos, incluyendo pero sin limitacion las que se producen como resultado de la cirugfa.

Los metodos de acuerdo con estas divulgaciones son clmicamente utiles para tratar todos los tipos de heridas para reducir la formacion de cicatrices, tanto para reducir la formacion de cicatrices inicial, como para el tratamiento terapeutico de cicatrices existentes (es decir: retirar cortando la cicatriz despues de su formacion, tratarla con los compuestos de la invencion y dejar que la cicatriz se cure mas lentamente). En una divulgacion, los individuos que necesitan tratamiento o limitacion de la cicatrizacion (tales como queloides o cicatrizacion hipertrofica) son individuos altamente pigmentados, incluyendo pero sin limitacion individuos de origen asiatico o africano, que son susceptibles a queloides, y por lo tanto se pueden beneficiar de los metodos divulgados para terapia profilactica para limitar el desarrollo de queloides, asf como para el tratamiento de queloides. En diversas otras divulgaciones preferidas, los individuos que necesitan terapia para tratar o limitar los trastornos fibroticos son los que padecen o estan en riesgo de uno o mas trastornos fibroticos asociados con la expresion de CTGF inducida por TGFp, incluyendo pero sin limitacion fibrosis tisular (incluyendo pero sin limitacion fibrosis pulmonar idiopatica, fibrosis hepatica, fibrosis renal, fibrosis retroperitoneal, fibrosis qrnstica, fibrosis de los vasos sangumeos, fibrosis del SNC y fibrosis de tejido cardfaco); nefropatfa diabetica, glomeruloesclerosis y nefropatfa de IgA (causas de insuficiencia renal y la necesidad de dialisis y retrasplante); retinopatfa diabetica y degeneracion macular (enfermedades fibroticas del ojo y causas principales de la ceguera); cirrosis y atresia biliar (causas principales de fibrosis e insuficiencia hepatica); insuficiencia cardiaca congestiva; fibrosis pulmonar; esclerodermia; adhesiones abdominales; y fibrosis intersticial.

En diversas otras divulgaciones, los individuos que necesitan terapia para tratar y/o limitar los trastornos fibroticos y/o queloides son los que tienen niveles elevados de uno o mas de los siguientes biomarcadores:

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Expresion de TGFpi;

colageno I;

expresion de CTGF; y

actina de musculo liso alfa.

Pueden detectarse niveles elevados de dichos biomarcadores usando tecnicas convencionales, incluyendo pero sin limitacion, tecnicas inmunologicas (ELISA, inmunocitoqmmica, etc.) usando anticuerpos disponibles en el mercado contra el o los biomarcadores.

Como se divulga posteriormente, los polipeptidos divulgados o de la invencion inhiben la expresion de colageno y CTGF inducida por TGFpi en fibroblastos queloides humanos, que estan elevados en afecciones fibroticas; lo que indica que los individuos con niveles elevados de uno o mas de estos biomarcadores pueden beneficiarse especialmente de los metodos divulgados. Como se usa en el presente documento, un nivel “elevado” del o los biomarcadores significa cualquier aumento por encima de lo normal para ese individuo o individuos en situacion similar en un tejido diana relevante. Dichos tejidos diana son los afectados por condiciones afecciones fibroticas, incluyendo pero sin limitacion sangre, exudado de heridas y biopsias tomadas de tejidos afectados por fibrosis incluyendo pero sin limitacion los divulgados anteriormente (piel, rinon, pulmon, tugado, peritoneo, vaso sangumeo, corazon, retina, etc.). En diversas realizaciones adicionales, un individuo que lo necesite es uno que tiene un nivel de uno o mas de los biomarcadores enumerados 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 50 %, 75 %, 100 % o mas por encima de los niveles normales. La determinacion del nivel del o los biomarcadores puede realizarse usando tecnicas convencionales en este campo para medir la expresion genica y/o proteica, incluyendo pero sin limitacion los divulgados posteriormente.

Un nivel “normal” de este o estos biomarcadores puede establecerse por cualquier medio adecuado, incluyendo pero sin limitacion determinar un nivel normal en ese individuo o individuos en situacion similar en ausencia de afecciones fibroticas y/o queloides, o cualquier otro medio adecuado para establecer un patron de referencia.

Las vfas preferidas de suministro para estas diversas indicaciones de las diferentes divulgaciones de los metodos vanan. Se prefiere administracion topica para metodos que impliquen el tratamiento o reduccion de la incidencia de espasmo de injerto venoso, hiperplasia de la mtima, reestenosis, insuficiencia de injertos prosteticos debido a la hiperplasia de la mtima, endoprotesis vascular, insuficiencia del injerto de la endoprotesis vascular debido a remodelacion constrictiva/hiperplasia de la mtima, fallo del injerto microvascular debido a vasoespasmo, vasculopatfa de trasplante, cicatrizacion, fibrosis, formacion de queloides, disfuncion sexual masculina y femenina y para promover la curacion de heridas. Como se usa en el presente documento, “administracion topica” se refiere a suministrar el polipeptido a la superficie del organo.

La administracion intratecal, definida como suministrar el polipeptido en el lfquido cefalorraqrndeo, es la via preferida de suministro para tratar o reducir la incidencia de vasoespasmo inducido por hemorragia subaracnoidea e ictus. La administracion intraperitoneal, definida como suministrar el polipeptido en la cavidad peritoneal, es la via preferida de suministro para tratar o reducir la incidencia de isquemia mesenterica no oclusiva. La administracion oral es la via preferida de suministro para tratar o reducir la incidencia de acalasia. La administracion intravenosa es la via preferida de suministro para tratar o reducir la incidencia de hipertension y bradicardia. La administracion mediante supositorio se prefiere para tratar o reducir la incidencia de fisura anal. El suministro por aerosol se prefiere para tratar o reducir la incidencia de asma (es decir: broncoespasmo). Se prefiere administracion intrauterina para tratar o reducir la incidencia de parto prematuro y preeclampsia/eclampsia.

En otra divulgacion de los metodos, los metodos se usan para aumentar la frecuencia contractil en el musculo cardiaco. Los individuos que pueden beneficiarse de dicho tratamiento incluyen los que muestran una frecuencia cardiaca reducida en relacion con una frecuencia cardiaca normal para el individuo, o en relacion con una frecuencia cardiaca “normal” para un individuo en situacion similar. Como se usa en el presente documento, la frase “aumentar la frecuencia contractil en el musculo cardiaco” significa cualquier aumento en la frecuencia contractil que proporcione un beneficio terapeutico al paciente. Dicho beneficio terapeutico puede conseguirse, por ejemplo, aumentando la frecuencia contractil para acercarla a la frecuencia contractil normal del individuo, una frecuencia contractil normal para un individuo en situacion similar o alguna otra frecuencia contractil diana deseada. En una divulgacion, los metodos dan como resultado un aumento de al menos el 5 % en la frecuencia contractil del paciente que necesite dicho tratamiento. En divulgaciones adicionales preferidas, los metodos dan como resultado un aumento de al menos 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % y/o 50 % en la frecuencia contractil del paciente que necesite dicho tratamiento. En una divulgacion preferida, el aumento de la frecuencia contractil en el musculo cardiaco se consigue aumentando la frecuencia de relajacion del musculo cardiaco (es decir: si los musculos se relajan mas rapido, laten mas rapido). En una divulgacion mas preferida, los metodos dan como resultado un aumento de al menos el 5 % en la frecuencia de relajacion del musculo cardiaco del paciente que necesite dicho tratamiento. En divulgaciones adicionales preferidas, los metodos dan como resultado un aumento de al menos 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % y/o 50 % en la frecuencia de relajacion del musculo cardiaco del paciente que necesite dicho tratamiento.

En una divulgacion adicional de los metodos, los metodos se realizan para tratar uno o mas trastornos cardiacos que

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pueden beneficiarse de aumentar la frecuencia contractil en el musculo cardiaco. Dichos trastornos cardiacos incluyen bradiarritmias, bradicardias, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension pulmonar, miocardio aturdido y disfuncion diastolica. Como se usa en el presente documento, “bradiarritmia” significa una reduccion anomala de la frecuencia del latido cardiaco a menos de 60 latidos por minuto, generalmente provocada por una alteracion de los impulsos electricos al corazon. Una causa habitual de las bradiarritmias es la enfermedad cardiaca coronaria, que conduce a la formacion de ateromas que limitan el flujo de sangre al tejido cardiaco, y de este modo el tejido cardiaco se dana. Las bradiarritmias debidas a enfermedad de las arterias coronarias se producen mas frecuentemente despues del infarto de miocardio. Los smtomas incluyen, pero sin limitacion, perdida de energfa, debilidad, smcope e hipotension. Como se usa en el presente documento, “insuficiencia cardiaca congestiva” significa una incapacidad de corazon para bombear aportes adecuados de sangre por todo el cuerpo. Dicha insuficiencia cardiaca puede deberse a una diversidad de afecciones o trastornos, incluyendo pero sin limitacion hipertension, anemia, hipertiroidismo, defectos de las valvulas cardiacas incluyendo pero sin limitacion estenosis aortica, insuficiencia aortica e insuficiencia de la tricuspide; defectos cardiacos congenitos incluyendo pero sin limitacion coartacion de la aorta, defectos del septo, estenosis pulmonar y tetralogfa de Fallot; arritmias, infarto de miocardio, cardiomiopatfa, hipertension pulmonar y enfermedad pulmonar incluyendo pero sin limitacion bronquitis cronica y enfisema. Los smtomas de la insuficiencia cardiaca congestiva incluyen, pero sin limitacion, fatiga, dificultad para respirar, edema pulmonar e hinchazon de los tobillos y las piernas.

Como se usa en el presente documento, “miocardio aturdido” significa musculo cardiaco que no esta funcionando (bombeando/latiendo) debido a isquemia cardiaca (falta de flujo sangumeo/oxfgeno a los vasos que abastecen al musculo cardiaco).

Como se usa en el presente documento “disfuncion diastolica” significa una incapacidad del corazon para llenarse de sangre durante la diastole (la fase de reposo de la contraccion cardiaca). Esta afeccion sucede habitualmente al comienzo de la hipertrofia ventricular izquierda. El musculo cardiaco se agranda y se vuelve ngido de modo que no puede llenarse de forma adecuada. La disfuncion diastolica puede dar como resultado insuficiencia cardiaca y funcion cardiaca inadecuada.

Como se usa en el presente documento, “hipertension pulmonar” significa un trastorno en el que la presion sangumea en las arterias que abastecen a los pulmones es anormalmente alta. Las causas incluyen, pero sin limitacion, aporte inadecuado de oxfgeno a los pulmones, tal como en bronquitis cronica y enfisema; embolia pulmonar, y fibrosis pulmonar intestinal. Los smtomas y senales de hipertension pulmonar son con frecuencia sutiles y no espedficos. En los estadios tardfos, la hipertension pulmonar conduce a insuficiencia cardiaca derecha que se asocia con agrandamiento del hfgado, agrandamiento de venas en el cuello y edema generalizado.

En una divulgacion adicional de los metodos, se usan metodos para tratar un trastorno muscular cardiaco que comprenden administrar a un individuo que padece una o mas de bradiarritmia, bradicardia, insuficiencia cardiaca congestiva, miocardio aturdido, hipertension pulmonar y disfuncion diastolica, una cantidad eficaz para aumentar la frecuencia contractil del musculo cardiaco de uno o mas polipeptidos divulgados o de la invencion.

El tratamiento de bradiarritmia incluye uno o mas de los siguientes (a) mejorar la frecuencia del latido cardiaco a niveles mas cercanos a lo normal para el individuo, mas cercanos a una frecuencia deseada o que aumentan hasta al menos por encima de 60 latidos por minuto; (b) reducir la aparicion de uno o mas de perdida de energfa, debilidad, smcope e hipotension en pacientes que padecen bradiarritmia; (c) reducir el empeoramiento de uno o mas de perdida de energfa, debilidad, smcope e hipotension en pacientes que padecen bradiarritmia y sus smtomas; (d) reducir la reaparicion de bradiarritmia en pacientes que han padecido previamente bradiarritmia; y (e) reducir la reaparicion de uno o mas de perdida de energfa, debilidad, smcope e hipotension en pacientes que previamente han padecido bradiarritmia.

De forma similar, el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva incluye uno o mas de los siguientes (a) mejorar la capacidad del corazon para bombear suministros adecuados de sangre por todo el cuerpo a niveles mas cercanos a lo normal para el individuo, o mas cercanos a una capacidad de bombeo deseada; (b) reducir el desarrollo de uno o mas de fatiga, dificultad respiratoria, edema pulmonar e hinchazon de los tobillos y las piernas en pacientes que padecen insuficiencia cardiaca congestiva; (c) reducir el empeoramiento de uno o mas de fatiga, dificultad respiratoria, edema pulmonar, e hinchazon de los tobillos y las piernas en pacientes que padecen insuficiencia cardiaca congestiva y sus smtomas; (d) reducir la reaparicion de insuficiencia cardiaca congestiva en pacientes que previamente han padecido insuficiencia cardiaca congestiva; y (e) reducir la reaparicion de uno o mas de fatiga, dificultad respiratoria, edema pulmonar e hinchazon de los tobillos y las piernas en pacientes que previamente han padecido insuficiencia cardiaca congestiva.

El tratamiento de miocardio aturdido significa uno o mas de (a) mejorar la capacidad del musculo cardiaco para bombear mejorando la oxigenacion del musculo isquemico, o reduciendo la necesidad de las celulas miocardicas de oxfgeno y (b) reducir la reaparicion de miocardio aturdido en pacientes que han padecido previamente miocardio aturdido.

De forma similar, el tratamiento de la disfuncion diastolica incluye uno o mas de (a) reducir la aparicion de

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insuficiencia cardiaca y/o funcion cardiaca inadecuada permitiendo que el corazon se relaje y se llene mas completamente; (b) reducir la reaparicion de disfuncion diastolica en pacientes que previamente han padecido disfuncion diastolica; y (c) reducir la reaparicion de insuficiencia cardiaca y/o funcion cardiaca inadecuada en pacientes que previamente han padecido disfuncion diastolica.

El tratamiento de la hipertension pulmonar incluye uno o mas de los siguientes (a) reducir la presion sangumea en las arterias que abastecen a los pulmones a niveles mas cercanos a lo normal para el individuo, o mas cercanos a una presion deseada; (b) reducir la aparicion de uno o mas de agrandamiento de las venas en el cuello, agrandamiento del hngado, y edema generalizado en pacientes que padecen hipertension pulmonar; (c) reducir el empeoramiento de uno o mas de agrandamiento de venas en el cuello, agrandamiento del hngado y edema generalizado en pacientes que padecen hipertension pulmonar y sus smtomas; (d) reducir la reaparicion de hipertension pulmonar en pacientes que han padecido previamente hipertension pulmonar; y (e) reducir la reaparicion de uno o mas de agrandamiento de venas en el cuello, agrandamiento del tngado y edema generalizado en pacientes que han padecido previamente hipertension pulmonar.

La presente divulgacion tambien incluye metodos para reducir la aparicion de un trastorno de musculo cardiaco que comprende administrar a un individuo en riesgo de desarrollar bradiarritmia, bradicardia, insuficiencia cardiaca congestiva, miocardio aturdido, hipertension pulmonar y disfuncion diastolica una cantidad eficaz para aumentar la frecuencia contractil del musculo cardiaco de uno o mas polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion.

Por ejemplo, los metodos para reducir la aparicion de insuficiencia cardiaca congestiva implican la administracion de uno o mas polipeptidos divulgados o de la invencion a un sujeto que padece uno o mas de hipertension, anemia, hipertiroidismo, defecto de las valvulas cardiacas incluyendo pero sin limitacion estenosis aortica, insuficiencia aortica e insuficiencia de la tricuspide; defectos cardiacos congenitos incluyendo pero sin limitacion coartacion de la aorta, defectos del septo, estenosis pulmonar y tetralogfa de Fallot; arritmias, infarto de miocardio, cardiomiopatfa, hipertension pulmonar y enfermedad pulmonar incluyendo pero sin limitacion bronquitis cronica y enfisema.

De forma similar, los metodos para reducir la aparicion de bradiarritmia implican administracion del o los polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion a un sujeto que padece uno o mas de enfermedad cardiaca coronaria y formacion de ateroma, o que ha tenido previamente un infarto de miocardio o trastorno de conduccion.

De forma similar, los metodos para reducir la aparicion de hipertension pulmonar implican administracion del o los polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion a un sujeto que padece uno o mas de bronquitis cronica, enfisema, embolia pulmonar y fibrosis pulmonar intestinal.

La reduccion de la aparicion de miocardio aturdido implica la administracion del o los polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion a un sujeto que padece isquemia cardiaca.

La reduccion de la aparicion de o tratamiento de disfuncion diastolica implica la administracion del o los polipeptidos o composiciones divulgados o de la invencion a un sujeto que padece hipertrofia ventricular izquierda.

En otras divulgaciones, los metodos se usan para tratar o limitar la incidencia de la induccion de regeneracion neuronal para lesiones del sistema nervioso central. Como se usa en el presente documento, “regeneracion neural” incluye tanto regenerar una conexion neural danada, como promover un aumento de la funcion neural (incluyendo pero sin limitacion el tratamiento de Alzheimer y neuropatfa periferica); dicha regeneracion neural puede estar en el sistema nervioso periferico o el sistema nervioso central. Sin quedar limitado a ningun mecanismo de accion espedfico, los inventores creen que la administracion de los peptidos a un paciente que lo necesite evita o limita la actividad de la protema rho, que se sabe que provoca colapso del cono del crecimiento; por lo tanto, la minimizacion de la actividad de rho potencia el crecimiento de neuritas.

En otras divulgaciones, los metodos se usan para tratar o limitar la incidencia de gliosis (proliferacion de astrocitos en areas danadas del sistema nervioso central). Los astrocitos son las celulas del tejido conectivo del SNC y tienen funciones que incluyen la acumulacion en areas con neuronas danadas. La gliosis se produce durante cualquier lesion cerebral traumatica, insercion de electrodos neurales y durante la lesion de la medula espinal, asf como en diversos trastornos neurodegenerativos incluyendo pero sin limitacion smdrome de Korsakoff y complejo de demencia del SIDA. Sin quedar limitado a ningun mecanismo de accion espedfico, los inventores creen que la administracion de los peptidos a un paciente que lo necesite previene o limita la respuesta fibrotica de astrocitos y posiblemente microglia para inhibir la fibrosis.

En otras divulgaciones, los metodos se usan para tratar o limitar la incidencia de la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC), que es un grupo de enfermedades del tracto respiratorio caracterizadas por obstruccion o limitacion del flujo de aire. La EPOC puede estar provocada por una diversidad de factores, incluyendo pero sin limitacion consumo de tabaco (fumadores cronicos en riesgo), exposicion a polvo de carbon (trabajadores de la industria de la minena del carbon particularmente en riesgo), defectos congenitos (incluyendo pero sin limitacion deficiencia de antitripsina alfa-1), o puede ser idiopatica (sin causa conocida). La EPOC incluye, pero sin limitacion, bronquitis cronica y enfisema. Los smtomas caractensticos de EPOC (para cuyo tratamiento o reduccion de su incidencia

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pueden usarse los metodos divulgados) incluyen, pero sin limitacion, infecciones respiratorias recurrentes, tos grave, sibilancia constante, apnea con esfuerzo mmimo o descanso, hipoxia y produccion excesiva de esputo.

Los polipeptidos divulgados o de la invencion pueden usarse solos o junto con otros tratamientos para EPOC, incluyendo, broncodilatadores, antibioticos y esteroides orales o intravenosos.

En otras divulgaciones, los metodos se usan para tratar o limitar la incidencia de inflamacion. Como se usa en el presente documento, la inflamacion significa respuesta del sistema inmunitario a infeccion, irritacion o asociada con cuerpos ajenos (introduccion de biomateriales) en el cuerpo.

Los smtomas caractensticos de inflamacion (para cuyo tratamiento o reduccion de su incidencia pueden usarse los metodos divulgados) incluyen, pero sin limitacion enrojecimiento, calor, hinchazon, dolor y disfuncion de los organos implicados. Los trastornos inflamatorios espedficos que pueden tratarse, o cuya incidencia puede reducirse, por los metodos divulgados incluyen, pero sin limitacion, asma, artritis (reumatoide o degenerativa), septicemia, choque endotoxemico, psoriasis, enteritis por radiacion, esclerodermia, cirrosis, fibrosis intersticial, enfermedad de Crohn, apendicitis, gastritis, laringitis, meningitis, pancreatitis y otitis.

Sin quedar ligado a ningun mecanismo accion de espedfico, los inventores creen que la administracion de los polipeptidos divulgados o de la invencion a un paciente que necesite un tratamiento antiinflamatorio suprime la respuesta a citocinas inflamatorias incluyendo, pero sin limitacion, TGF pi.

En todas las divulgaciones anteriores de los metodos terapeuticos, los polipeptidos divulgados o de la invencion pueden usarse como el unico agente activo, o pueden combinarse con uno o mas tratamientos adicionales para la indicacion, como se determina por un medico tratante.

Como se usa en el presente documento para todos los metodos desvelados una “cantidad eficaz” del o los polipeptidos es una cantidad que es suficiente para proporcionar el beneficio de tratamiento pretendido. Una cantidad eficaz de los polipeptidos que pueden emplearse vana generalmente entre aproximadamente 0,01 |ig/kg de peso corporal y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal, variando preferentemente entre aproximadamente 0,05 |ig/kg y aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal. Sin embargo, los niveles de dosificacion se basan en una diversidad de factores, incluyendo el tipo de lesion, la edad, el peso, sexo, la condicion medica del individuo, la gravedad de la afeccion, la via de administracion y el compuesto particular empleado. Por lo tanto, el regimen de dosificacion puede variar ampliamente, pero puede determinarse rutinariamente por un medico usando metodos convencionales.

La presente invencion puede entenderse mejor con referencia a los ejemplos adjuntos que se pretende que sean solamente para fines de ilustracion.

Ejemplo

Ejemplo 1 Mutagenesis de exploracion de alanina y aminoacidos

Los dominios terapeuticos y de transduccion de peptidos se optimizaron para maximizar la especificidad e inhibicion de MK2. En primer lugar, para entender mejor la importancia de cada aminoacido en la inhibicion de MK2, se realizaron exploraciones de alanina y aminoacidos d de la secuencia terapeutica del inhibidor de MK2. Usando el Ensayo de Lisado Omnia TM para el kit MAPKAP-K2 de Invitrogen, se determino la velocidad de reaccion para MK2 en presencia y ausencia de cada uno de los peptidos enumerados en la Tabla 1. Brevemente, se evaluaron las concentraciones de peptido inhibidor a 12,5, 25, 50 y 100 |imol. El kit contiene un tampon de reaccion patentado al que se anade lo siguiente (se proporcionan las concentraciones finales): ATP 1 mM, DTT 0,2 mM, sustrato peptfdico modificado por Sox MAPKAP-K2 10 |iM, 5 ng de MK2 y el inhibidor peptfdico de interes (volumen final de 50 |il). Las reacciones se realizaron en los pocillos de una placa de 96 pocillos de union a protema baja proporcionada con el kit, y se tomaron lecturas de fluorescencia cada 30 segundos durante 20 minutos en un Espectrofotometro M5 de Molecular Devices. Las velocidades de reaccion para una concentracion inhibidora de MK2 de 100 |iM se muestran en la Tabla 2 y son representativas de tendencias a diferentes concentraciones.

Los resultados de este estudio muestran varias optimizaciones posibles y dilucidan los aminoacidos que son mas cruciales para la funcion de este peptido. En primer lugar, la alanina C-terminal no potencia la inhibicion de MK2. Retirar una alanina dara como resultado una pequena optimizacion del coste. Ademas, las exploraciones tanto de aminoacido d como de alanina muestran que la asparagina no es crucial para la inhibicion de mK2.

Tabla 1: Evaluacion de Secuencia Inhibidora de MK2 -La Importancia de cada Aminoacido

Controles: Exploracion de alanina Exploracion de aminoacidos d

KALNRQLGVA*: KALNRQLGVAA KdALNRQLGVAA

KKKALNRQLGVAA#: KAANRQLGVAA KAdLNRQLGVAA

(WLRRIKAhLNRQLGVAA: KALARQLGVAA KALdNRQLGVAA

Controles: Exploracion de alanina Exploracion de aminoacidos d

: KALNAQLGVAA KALNdRQLGVAA

: KALNRALGVAA KALNRdQLGVAA

: KALNRQAGVAA KALNRQdLGVAA

: KALNRQLAVAA

: KALNRQLGAAA KALNRQLGdVAA

* = Control para determinar el requisito de la A final; # = Control para determinar la importancia de las K iniciales

Tabla 2:

Velocidades de reaccion para Variantes de Inhibidores de MK2 (n=3)

Secuencia Peptidica: % de velocidad de reaccion de KALNRQLGVAA a una concentracion de inhibidor de 100 p,M (+/- ETM*)

KALNRQLGVAA: 100 % (+/- 3 %)

KALNRQLGVA: 100 % (+/- 3 %)

KAANRQLGVAA: 152 % (+/- 3 %)

KALARQLGVAA: 39 % (+/-1 %)

KALNAQLGVAA: 358 % (+/- 8 %)

KALNRALGVAA: 358 % (+/-15 %)

KALNRQAGVAA: 118 % (+/- 4 %)

KALNRQLAVAA: 72 % (+/- 3 %)

KALNRQLGAAA: 373 % (+/-13 %)

KAdLNRQLGVAA: 146 % (+/- 4 %)

KALdNRQLGVAA: 95 % (+/- 6 %)

KALNdRQLGVAA: 306 % (+/- 4 %)

KALNRdQLGVAA: 276 % (+/- 3 %)

KALNRQdLGVAA: 357 % (+/-10 %)

KALNRQLGdVAA: 260 % (+/-14 %)

KKKALNRQLGVAA: 91 % (+/- 4 %)

* ETM = Error tfpico de la media para tres valores

De hecho, el reemplazo de la asparagina con una alanina puede potenciar la inhibicion de MK2 y dara como 5 resultado un pequeno ahorro de costes. La Tabla 2 indica que la sustitucion de la glicina por alanina aumenta ligeramente la inhibicion. Adicionalmente, estos resultados muestran que la esteroqmmica es importante para la funcion peptfdica inhibidora. Ninguna sustitucion de aminoacidos d potencio significativamente la inhibicion de MK2, y la mayona de las sustituciones redujeron en gran medida la eficacia del peptido inhibidor de MK2. La exploracion de alanina tambien muestra la importancia de varios aminoacidos. De acuerdo con esta exploracion de alanina, la 10 arginina, glutamina y valina son absolutamente necesarias para la inhibicion de MK2. Aunque las dos leucinas son aminoacidos menos importantes, su retirada aun reduce la eficacia del peptido inhibidor.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un polipeptido que consiste en la secuencia

5 • WLRRIKAWLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA;

• RQRRKKRGKALARQLGVAA;

• GRKKRRQRKALARQLGVAA;

• YGRKKRRQRRRKALARQLGVAA; o

• WLRRIKAWLRRIKAKALARQLGVAA.

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2. Un dispositivo biomedico que comprende el polipeptido de acuerdo con la reivindicacion 1 dispuesto en o sobre dicho dispositivo biomedico.
3. El dispositivo biomedico de acuerdo con la reivindicacion 2, seleccionandose dicho dispositivo biomedico del 15 grupo que consiste en: una endoprotesis vascular, un injerto, un shunt, un injerto de endoprotesis vascular, un

dispositivo de angioplastia, un cateter de globo, una fistula, un aposito y un dispositivo de suministro farmacologico implantable.
4. Una composicion que comprende el polipeptido de acuerdo con la reivindicacion 1 y un vehfculo 20 farmaceuticamente aceptable.