ES2629165T3 - Métodos de tratamiento de una infección vírica - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la estructura:**Fórmula** en la que M+ es K+.

Description

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DESCRIPCION

Metodos de tratamiento de una infeccion vmca Antecedentes de la invencion

El hidrogeno ((R)-1-(6-amino-9H-purin-9-il)propan-2-iloxi)metilfosfonato de 3-(hexadeciloxi)propilo; (denominado CMX157, hexadeciloxipropil tenofovir o HDP-TFV), un conjugado lip^dico de tenofovir, se diseno para imitar la lisofosfatidilcolina para aprovechar las v^as de absorcion de Kpidos naturales y para conseguir altas concentraciones intracelulares del antivmco activo, con el objetivo de aumentar la eficacia del tenofovir (TFV) contra el VIH de tipo silvestre y mutante (Vease Hostetler et al. Enhanced oral absorption and antiviral activity of 1-O-octadecyl-sn- glycero-3-phospho-acyclovir and related compounds in hepatitis B virus infection, in vitro. Biochem Pharmacol 53:1815-1822 (1997); Painter et al., Antimicrob. Agents Chemother. 51:3505-9 (2007) y Painter, et al., Trends Biotechnol. 22:423-7 (2004)). Ademas, el CMX157 tambien puede usarse para tratar el VIH y/o el VHB e inhibir el desarrollo de resistencia a otros compuestos antivmcos. (Vease las Publicaciones PCT N.°WO 2009/094191 y WO 2009/094190). La estructura del CMX157 se muestra a continuacion:

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Los datos recientes han indicado que el gammaretrovirus virus xenotropico relacionado con el virus de la leucemia murina (XMRV) y otros virus relacionados con el virus de la leucemia murina (MLV) se asocian al cancer de prostata y/o al smdrome de fatiga cronica. (Vease, por ejemplo, Schlaberg R et al., PNAS, 106 (38): 6351-6 (2009) y Lombardi VC, et al., Detection of an infectious retrovirus, XMRV, in blood cells of patients with chronic fatigue syndrome, Science, 326 (5952): 585-9, (octubre de 2009) y Lo et al., PNAS early edition, publicado en lmea antes de la impresion el 23 de agosto de 2010, doi: 10.1073/pnas.1006901107). Hasta el momento, existe un tratamiento medico limitado para el cancer de prostata y no existe ningun tratamiento eficaz para el smdrome de fatiga cronica. Por tanto, existe una necesidad de nuevos farmacos que pueden usarse para tratar enfermedades vmcas.

El documento CN 1 810 816 A desvela sales de compuestos de monoester de tenofovir.

Sumario de la invencion

Un primer aspecto de la invencion proporciona los compuestos que tienen la estructura

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en la que M+ es K+.

Otro aspecto de la invencion proporciona composiciones farmaceuticas, una composicion en una forma de dosificacion de comprimido o capsula, una formulacion intravenosa, soluciones o suspensiones que comprenden los compuestos que se describen en el presente documento.

Un aspecto de la divulgacion proporciona procesos de preparacion de los compuestos que se describen en el presente documento. Los procesos comprenden disolver compuesto I en un disolvente,

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anadir una base a la mezcla del disolvente y el compuesto I y retirar el disolvente.

Otro aspecto de la divulgacion proporciona metodos de tratamiento o prevencion de una enfermedad vmca. Los metodos comprenden administrar a un sujeto una cantidad eficaz de los compuestos que se describen en el presente documento (por ejemplo, CMX157 o un compuesto de formula I). En una realizacion, el virus es un retrovirus, por ejemplo, virus xenotropico relacionado con el virus de la leucemia murina (XMRV).

Otro aspecto de la divulgacion proporciona metodos de tratamiento o prevencion del smdrome de fatiga cronica. Otro aspecto de la invencion proporciona metodos de tratamiento o prevencion del cancer de prostata.

Un aspecto adicional de la divulgacion proporciona metodos de tratamiento de un sujeto infectado con al menos un retrovirus y al sujeto no se le ha administrado ningun agente activo antivmco para el retrovirus.

Los metodos comprenden la administracion de compuestos que se describen en el presente documento al sujeto infectado en una cantidad eficaz para tratar la infeccion vmca.

Otro aspecto de la divulgacion proporciona metodos de tratamiento de un sujeto infectado con al menos un retrovirus y el sujeto ha desarrollado resistencia o una respuesta toxica a al menos otro compuesto antivmco en respuesta a la administracion previa de dicho al menos otro compuesto antivmco a dicho sujeto para la infeccion por retrovirus. Los metodos comprenden administrar al sujeto infectado compuestos que se describen en el presente documento en una cantidad eficaz para tratar la infeccion vmca.

Un aspecto adicional de la divulgacion proporciona metodos de inhibicion de la transmision sexual del VIH. Los metodos comprenden la aplicacion topica a la piel o el tejido epitelial de un ser humano de una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende un agente antivmco, el compuesto que se describe en el presente documento. Los metodos comprenden adicionalmente administrar simultaneamente al sujeto uno o mas agentes activos adicionales antivmcos con los compuestos que se describen en el presente documento.

Otro aspecto de la divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto/sal que se describe en el presente documento y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. Otro aspecto de la divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto/sal que se describe en el presente documento y al menos un agente activo antivmco adicional y un vehmulo farmaceuticamente aceptable.

Description detallada de la invencion

Los anteriores y otros aspectos de la presente invencion se describiran ahora en mas detalle con respecto a la descripcion y las metodologias que se proporcionan en el presente documento. Se debe apreciar que la invencion puede realizarse de diferentes formas y no debe interpretarse como que se limita a las realizaciones que se exponen en el presente documento. Mas bien, las presentes realizaciones se proporcionan de manera que la presente divulgacion sea minuciosa y completa y transmita completamente el alcance de la invencion a los expertos en la materia.

La terminologia utilizada en la divulgacion de la invencion en el presente documento tiene el proposito de describir realizaciones particulares solamente y no se pretende que sea limitante de la invencion. Como se usa en la descripcion de las realizaciones de la invencion y las reivindicaciones adjuntas, se pretende que las formas singulares "un", "una", "el" y "la" incluyan las formas plurales tambien, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Tambien, como se usa en el presente documento, "y/o" se refiere a y abarca cualquiera y todas las combinaciones posibles de uno o mas de los articulos enumerados asociados. Ademas, el termino "aproximadamente", como se usa en el presente documento cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad de un compuesto, dosis, tiempo, temperatura y similares, pretende abarcar variaciones del 20 %, del 10 %, del 5 %, del 1 %, del 0,5 % o incluso del 0,1 % de la cantidad especificada.

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Se entendera adicionalmente que las expresiones "comprende" y/o "que comprende", cuando se usan en la presente memoria descriptiva, especifican la presencia de las caractensticas, numeros enteros, etapas, operaciones, elementos y/o componentes indicados, pero no excluyen la presencia o adicion de una o mas de otras caractensticas, numeros enteros, etapas, operaciones, elementos, componentes y/o grupos de los mismos. A menos que se defina lo contrario, todos los terminos, incluyendo los terminos tecnicos y cientificos utilizados en la descripcion, tienen el mismo significado que se entiende comunmente por un experto habitual en la tecnica a la que pertenece la presente invencion.

La expresion "consiste esencialmente en" (y variantes gramaticales), como se aplica a las composiciones de la presente invencion, significa que la composicion puede contener componentes adicionales a condicion de que los componentes adicionales no alteren materialmente la composicion. La expresion "considerablemente alterado", como se aplica a una composicion, se refiere a un aumento o disminucion en la eficacia terapeutica de la composicion de al menos aproximadamente el 20 % o mas en comparacion con la eficacia de una composicion que consiste en los componentes citados.

A menos que el contexto indique lo contrario, se pretende espedficamente que las diversas caractensticas de la invencion que se describe en el presente documento pueden utilizarse en cualquier combinacion.

Ademas, la presente invencion tambien contempla que en algunas realizaciones de la invencion, cualquier caractenstica o combinacion de caractensticas expuesta en el presente documento puede excluirse u omitirse.

A. Definiciones

Como se usa en el presente documento, "metales alcalinos" son elementos qmmicos del Grupo 1 de la tabla periodica de los elementos, por ejemplo: litio (Li), sodio (Na) y potasio (K).

Los sujetos que se tratan mediante los metodos de la presente divulgacion son, en general, sujetos mairnferos y primates (por ejemplo, ser humano, mono, chimpance). Los sujetos pueden ser macho o hembra y pueden tener cualquier edad, incluso sujetos prenatales (es decir, en el utero), neonatales, lactantes, infantiles, adolescentes, adultos y geriatricos. Por tanto, en algunos casos, los sujetos pueden ser hembras embarazadas. El tratamiento puede ser para cualquier proposito, incluyendo el tratamiento terapeutico de sujetos infectadas previamente, asf como el tratamiento profilactico de sujetos no infectados (por ejemplo, sujetos identificados como que estan en alto riesgo de infeccion).

Como se usa en el presente documento, se pretende que "virus de la inmunodeficiencia humana" (o "VIH") como se usa en el presente documento incluya todos los subtipos del mismo, incluyendo el VIH subtipos A, B, C, D, E, F, G y O y el VIH-2.

Como se usa en el presente documento, se pretende que "virus de la hepatitis B" (o "VHB") como se usa en el presente documento incluya todos los subtipos (adw, adr, ayw y ayr) y/o genotipos (A, B, C, D, E, F, G y H) del mismo.

Como se usa en el presente documento, o "una cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que proporcionara cierto alivio, mitigacion y/o disminucion de al menos un smtoma clmico en el sujeto. Los expertos en la materia apreciaran que los efectos terapeuticos no necesitan ser completos o curativos, a condicion de que se proporcione algun beneficio al sujeto.

Como se usa en el presente documento, "especificidad" o "espedficamente contra" se refiere a un compuesto que puede inhibir selectivamente la actividad metabolica y/o la replicacion del ADN de un determinado tipo de celulas infectadas por virus. La especificidad puede someterse a ensayo mediante el uso de cualquiera de los metodos conocidos para un experto en la materia, por ejemplo, ensayos de CI90 y/o CI50. En algunas realizaciones, los compuestos que se describen en el presente documento pueden tener una CI90 y/o una CI50 contra las celulas infectadas por virus que sean al menos aproximadamente tres veces inferiores a la CI90 y/o la CI50 contra las celulas normales (no infectadas). En algunas realizaciones, los compuestos que se describen en el presente documento pueden tener una CI90 y/o una CI50 contra las celulas infectadas por virus que sean aproximadamente de tres veces a diez veces inferiores a la CI90 y/o la CI50 contra las celulas normales (no infectadas). En algunas realizaciones, los compuestos que se describen en el presente documento pueden tener una CI90 y/o una CI50 contra las celulas infectadas por virus que sean al menos diez veces inferiores a la CI90 y/o la CI50 contra las celulas normales (no infectadas). En algunas realizaciones, los compuestos que se describen en el presente documento pueden tener una citotoxicidad espedfica contra celulas infectadas y/o transformadas por virus. La citotoxicidad puede medirse por cualquiera de los metodos conocidos para un experto en la materia.

A menos que se indique otra cosa, se pretende que las estructuras representadas en el presente documento incluyan todas las formas isomericas (por ejemplo, enantiomericas, diastereomericas y geometricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimetrico, isomeros de doble enlace (Z) y (E) e isomeros conformacionales (Z) y (E). Por tanto, los isomeros estereoqmmicos individuales

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as^ como las mezclas enantiomericas, diastereomericas y geometricas (o conformacionales) de los presentes compuestos estan dentro del alcance de la invencion. A menos que se indique lo contrario, todas las formas tautomericas de los compuestos de la invencion estan dentro del alcance de la invencion.

Como se usa en el presente documento, la expresion "retrovirus gamma" se refiere a un genero de la familia Retroviridae. Los ejemplos incluyen, por ejemplo, el virus de la leucemia murina, el virus de la leucemia felina, el virus del sarcoma felino y el virus de la reticuloendoteliosis aviar. Muchos retrovirus gamma comparten un elemento estructural de ARN conservado, conocido como una senal de encapsidacion del nucleo.

Como se usan en el presente documento, las expresiones "tratamiento", "tratar" y "que trata" se refieren a invertir, aliviar, inhibir el progreso de una enfermedad o trastorno como se describe en el presente documento, o retrasar, eliminar o reducir la incidencia o aparicion de un trastorno o enfermedad como se describe en el presente documento, en comparacion con lo que ocurrina en ausencia de la medida adoptada. En algunas realizaciones, el tratamiento puede administrarse despues de que se hayan desarrollado uno o mas smtomas. En otras realizaciones, el tratamiento puede administrarse en ausencia de smtomas. Por ejemplo, el tratamiento puede administrarse a un individuo susceptible antes de la aparicion de los smtomas (por ejemplo, a la luz de antecedentes de smtomas y/o a la luz de factores de susceptibilidad geneticos o de otro tipo). El tratamiento tambien puede continuarse despues de que desaparezcan los smtomas, por ejemplo para prevenir o retrasar su repeticion.

Como se usan en el presente documento, los terminos "prevenir", "profilactico" o "profilaxis" significan provocar que los smtomas clmicos de una enfermedad o afeccion no se desarrollen, es decir, inhibir el comienzo de una enfermedad o afeccion en un sujeto que puede estar expuesto o predispuesto a la enfermedad o afeccion, pero que aun no experimenta o manifiesta los smtomas de la enfermedad o afeccion. Administracion preventiva significa que un compuesto de la invencion se administra a un sujeto antes de la observacion de los smtomas y/o de una presunta exposicion a un agente causante de la enfermedad (por ejemplo, un patogeno o carcinogeno). En general, la administracion preventiva puede reducir (a) la probabilidad de que un sujeto que recibe el tratamiento desarrolle la afeccion y/o (b) la duracion y/o gravedad de los smtomas en el caso de que el sujeto desarrolle la afeccion.

El compuesto activo de la presente invencion puede administrarse opcionalmente en combinacion (o junto) con otros compuestos y/o agentes activos utiles en el tratamiento de infecciones vmcas como se describen en el presente documento. La administracion de dos o mas compuestos "en combinacion" o "junto con" significa que los dos compuestos se administran suficientemente cerca en el tiempo para tener un efecto combinado, por ejemplo un efecto aditivo y/o sinergico. Los dos compuestos pueden administrarse simultaneamente (concurrentemente) o secuencialmente o pueden ser dos o mas acontecimientos que se producen dentro de un corto penodo de tiempo antes o despues el uno del otro. La administracion simultanea puede realizarse mediante la mezcla de los compuestos antes de la administracion o mediante la administracion de los compuestos en el mismo punto en el tiempo pero en diferentes sitios anatomicos o utilizando diferentes vfas de administracion. En algunas realizaciones, el otro agente antivmco, opcionalmente, puede administrarse simultaneamente.

"Parenteral" como se usa en el presente documento se refiere a una inyeccion subcutanea, intravenosa, intraarterial, intramuscular o intravftrea o a tecnicas de infusion.

"Por via topica" como se usa en el presente documento abarca la administracion por via rectal y por pulverizacion para inhalacion, asf como las vfas mas comunes de la piel y las membranas mucosas de la boca y la nariz y en pasta de dientes.

B. Compuestos

Los investigadores de la presente invencion descubrieron que la forma de acido libre de CMX157 es relativamente inestable. (Vease el Ejemplo 2) Es sorprendente encontrar que las sales de CMX157 son mucho mas estables que CMX157 y poseen propiedades ffsicas superiores tales como higroscopicidad y propiedades de manipulacion, que hacen que el procesamiento y la formulacion sean mas faciles.

En particular, un aspecto de la invencion proporciona el compuesto que tiene la estructura de

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en la que M+ es K+. La sal puede estar en diversas formas, todas las cuales estan incluidas dentro del alcance de la invencion. Estas formas incluyen la forma anhidra o solvatos. En otras realizaciones, la sal puede ser cristalina.

C. Proceso de preparacion

En general, los compuestos de la presente divulgacion pueden prepararse mediante tecnicas convencionales conocidas en la tecnica y mediante procesos conocidos analogos a los mismos. Por ejemplo, el CMX157 puede prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos o variaciones de los mismos que seran evidentes para los expertos en la materia. Vease, por ejemplo, Painter et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 51, 3505-3509 (2007) y la Publicacion de Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2007/0003516 en Almond et al.

Se exponen a continuacion metodos generales para preparar compuestos de la presente divulgacion. En la siguiente divulgacion, todas las variables son, a menos que se indique lo contrario, como se definen en las formulas que se describen en el presente documento. Las siguientes descripciones no limitantes ilustran las metodologias generales que pueden utilizarse para obtener los compuestos que se describen en el presente documento.

En una realizacion, el compuesto que se describe en el presente documento puede prepararse disolviendo el compuesto 1 en un disolvente apropiado,

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anadiendo una base adecuada a la mezcla del disolvente y el compuesto 1 y retirando el disolvente para proporcionar el compuesto de formula I.

El disolvente utilizado en la preparacion puede ser cualquier disolvente adecuado conocido por un experto en la materia o una combinacion de disolventes que proporcione un rendimiento satisfactorio del producto. En una realizacion, el disolvente es una mezcla de al menos dos disolventes. Una combinacion de ejemplo de disolventes incluye, pero no se limita a, diclorometano y metanol, asi como diclorometano y etanol. En una realizacion, la relacion molar del diclorometano y el metanol esta en un intervalo de aproximadamente 1:1 a 9:1. En una realizacion, la relacion molar del diclorometano y el metanol esta en un intervalo de aproximadamente 7:3 a 9:1. En una realizacion adicional, la relacion molar del diclorometano y el metanol es de aproximadamente 9:1.

La base utilizada en la preparacion puede ser cualquier base adecuada conocida por un experto en la materia o una combinacion de bases que proporcione un rendimiento satisfactorio del producto. En algunas realizaciones, la base es una base de alcoholato de metal alcalino. Las bases de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, metoxido de potasio, metoxido de sodio, terc-butoxido de litio, hidroxido de amonio, hidroxido de sodio, hidroxido de potasio e hidroxido de litio.

El proceso que se describe en el presente documento puede incluir adicionalmente la etapa de recristalizacion para retirar impurezas, productos secundarios y material de partida sin reaccionar. La etapa de recristalizacion comprende la etapa de disolver el producto en un disolvente adecuado a una temperatura apropiada, enfriar a una temperatura apropiada durante un penodo de tiempo suficiente para precipitar el compuesto de formula I, filtrar para proporcionar los compuestos de formula I. En algunas realizaciones, la temperatura para la etapa de disolucion esta en un intervalo de aproximadamente 50 °C a 80 °C.

D. Agentes/compuestos antiviricos adicionales

Los agentes activos antiviricos adicionales que pueden utilizarse en la realizacion de la presente divulgacion incluyen inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores nucleosidicos de la transcriptasa inversa (este termino en el presente documento incluye inhibidores nucleosidicos de la transcriptasa inversa), inhibidores no nucleosidicos de la transcriptasa inversa, inhibidores de la integrasa, inhibidores de la entrada, inhibidores de la fusion, inhibidores de la maduracion y combinaciones de los mismos. Se conocen y se describen numerosos ejemplos en, por ejemplo, la Publicacion de Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2006/0234982 de Dahl et al. en la Tabla A en la misma y en la Tabla A como se expone a continuacion.

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Los ejemplos adicionales incluyen, pero no se limitan a, el inhibidor de la integrasa Isentress o raltegravir (MK-0518: Merck), el inhibidor de CCR5 Maraviroc o selzentry (y K-427 857, Pfizer) y otros de estas clases.

Se proporcionan ejemplos adicionales en la Patente de los EE.UU. N.° 7.094.413 de Buelow et al.; la Patente de los EE.UU. N.° 7.250.421 de Nair et al., la Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2007/0265227 de Heneine et al. y la Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2007/0072831 de Cai et al.

El inhibidor no nucleosfdico de la transcriptasa inversa ("INNTI") 6-cloro-4-ciclopropiletinil-4-trifluorometil-1,4- dihidro=2H3,1-benzoxazin-2-ona, y sales farmaceuticamente aceptables del mismo, se describen en, por ejemplo, la Patente de los EE.UU. N.° 5.519.021. Los ejemplos de la presente divulgacion incluyen efavirenz.

El inhibidor nucleosfdico de la transcriptasa inversa ("INTI") 2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosina-1-il)-1,3-oxatiolano ("FTC"), y sales farmaceuticamente aceptables del mismo, se describen en, por ejemplo, la Patente de los EE.UU. N.° 6.642.245 de Liotta et al. Los ejemplos de la presente invencion incluyen emtricitabina.

Los inhibidores de la integrasa incluyen, pero no se limitan a, los que se describen en la Publicacion de Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2007/0072831, el documento WO 02/30426, el documento WO 02/30930, el documento WO 02/30931, el documento WO 02/055079, el documento WO 02/36734, la Patente de los EE.UU. N.° 6.395.743; la Patente de los EE.UU. N.° 6.245.806; la Patente de los EE.UU. N.° 6.271.402; el documento WO 00/039086; el documento WO 00/075122; el documento WO 99/62513; el documento WO 99/62520; el documento WO 01/00578; Jing, et al., Biochemistry, 41, 5397-5403, (2002); Pais, et al., J. Med. Chem., 45, 3184-94 (2002); Goldgur, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 96, 13040-13043 (1999); Espeseth, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 97,1124411249, (2000); el documento WO 2005/016927, el documento WO 2004/096807, el documento WO 2004/035577, el documento WO 2004/035576 y el documento US 2003/0055071.

___________________________________________Tabla A.___________________________________________

5,6 dihidro-5-azacitidina__________________________________________________________________________

5-aza 2'desoxicitidina____________________________________________________________________________

5-azacitidina___________________________________________________________________________________

2'-desoxiguanosina 5-il-carbociclica (BMS200.475)____________________________________________________

9-(arabinofuranosil)guanina; 9-(2'-desoxirribofuranosil)guanina___________________________________________

9-(2'-desoxi-2'-fluororribofuranosil)-2,6-diaminopurina___________________________________________________

9-(2'-desoxi-2'-fluororribofuranosil)guanina___________________________________________________________

9-(2'-desoxirribofuranosil)-2,6-diaminopurina__________________________________________________________

9-(arabinofuranosil)-2,6-diaminopurina

Abacavir, Ziagen®______________________________________________________________________________

Aciclovir, ACV; 9-(2-hidroxietoxilmetil)guanina

Adefovir dipivoxilo, Hepsera®_____________________________________________________________________

Amdoxivir, DAPD_______________________________________________________________________________

Amprenavir, Agenerase®_________________________________________________________________________

araA; 9-p-D-arabinofuranosiladenina (Vidarabina)______________________________________________________

Sulfato de atazanivir (Reyataz®)___________________________________________________________________

AZT; 3'-azido-2',3'-didesoxitimidina, Zidovudina, (Retrovir®)______________________________________________

BHCG; (+-)-(1a,2b,3a)-9-[2,3-bis(hidroximetil)ciclobutil]guanina___________________________________________

BMS200.475; 2'-desoxiguanosina 5-il-carbociclica_____________________________________________________

Buciclovir; (R) 9-(3,4-dihidroxibutil)guanina___________________________________________________________

BvaraU; 1-p-D-arabinofuranosil-E-5-(2-bromovinil)uracilo (Sorivudina)______________________________________

Calanolida A

Capravirina____________________________________________________________________________________

CDG; 2'-desoxiguanosina carbodclica

Cidofovir, HPMPC; (S)-9-(3-hidroxi-2-fosfonilmetoxipropil)citosina_________________________________________

Clevudina, L-FMAU; 2'-Fluoro-5-metil-p-L-arabino-furanosiluracilo

Combivir® (lamivudina/zidovudina)_________________________________________________________________

Cytallene; [1-(4'-hidroxi-1',2'-butadienil)citosina]_______________________________________________________

DAPD; (-)-p-D-2,6-diaminopurina dioxolano__________________________________________________________

ddA; 2',3'-didesoxiadenosina______________________________________________________________________

ddAPR; 2,6-diaminopurina-2',3'-didesoxirrib6sido______________________________________________________

ddC; 2',3'-didesoxicitidina (Zalcitabina)______________________________________________________________

ddl; 2',3'-didesoxiinosina, didanosina, (Videx®, Videx® EC)______________________________________________

Delavirdina, Rescriptor®

Didanosina, ddI, Videx®; 2',3'-didesoxiinosina_________________________________________________________

DXG; guanosina dioxolano

E-5-(2-bromovinil)-2'-desoxiuridina_________________________________________________________________

Efavirenz, Sustiva®_____________________________________________________________________________

Enfuvirtida, Fuzeon®____________________________________________________________________________

F-ara-A; fluoroarabinosiladenosina (Fludarabina)______________________________________________________

FDOC; (-)-p-D-5-fluoro-1-[2-(hidroximetil)-1,3-dioxolano]citosina__________________________________________

FEAU; 2'-desoxi-2'-fluoro-1-p-D-arabinofuranosil-5-etiluracilo_____________________________________________

FIAC; 1-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-ababinofuranosil)-5-yodocitosina__________________________________________

FIAU; 1-(2-desoxi-2-fluoro-p-D-ababinofuranosil(-5-yodouridina___________________________________________

FLG; 2',3'-didesoxi-3'-fluoroguanosina

FLT; 3'-desoxi-3'-fluorotimidina____________________________________________________________________

Fludarabina; F-ara-A; fluoroarabinosiladenosina;

FMAU; 2'-Fluoro-5-metil-p-L-arabino-furanosiluracilo___________________________________________________

FMdC________________________________________________________________________________________

Foscarnet; acido fosfonoformico, PFA_______________________________________________________________

FPMPA; 9-(3-fluoro-2-fosfonilmetoxipropil)adenina_____________________________________________________

Ganciclovir, GCV; 9-(1,3-dihidroxi-2-propoximetil)guanina_______________________________________________

GS-7340; 9-[R-2-[[(S)-[[(S)-1-(isopropoxicarbonil)etil]amino]-fenoxifosfinil metoxi]propil]adenina__________________

HPMPA; (S)-9-(3-hidroxi-2-fosfonilmetoxipropil)adenina_________________________________________________

HPMPC; (S)-9-(3-hidroxi-2-fosfonilmetoxipropil)citosina (Cidofovir)________________________________________

Hidroxiurea, Droxia®____________________________________________________________________________

Indinavir, Crixivan®_____________________________________________________________________________

Kaletra® (Iopinavir/ritonavir)

Lamivudina, 3TC, Epivir™; (2R,5S,cis)-4-amino-1-(2-hidroximetil-1,3-oxatiolan-5-il)-(1H)-pirimidin-2-ona__________

L-d4C; L-3'-desoxi-2',3'-dideshidrocitidina

L-ddC; L-2',3'-didesoxicitidina______________________________________________________________________

L-Fd4C; L-3'-desoxi-2',3'-dideshidro -5-fluorocitidina

L-FddC; L-2',3'-didesoxi-5-fluorocitidina______________________________________________________________

Lopinavir______________________________________________________________________________________

Nelfinavir, Viracept®____________________________________________________________________________

Nevirapina, Viramune®__________________________________________________________________________

Oxetanocina A; 9-(2-desoxi-2-hidroximetil-p-D-eritro-oxetanosil)adenina____________________________________

Oxetanocina G; 9-(2-desoxi-2-hidroximetil-p-D-eritro-oxetanosil)guanina____________________________________

Penciclovir____________________________________________________________________________________

PMEDAP; 9-(2-fosfonilmetoxietil)-2,6-diaminopurina____________________________________________________

PMPA, tenofovir; (R)-9-(2-fosfonilmetoxipropil)adenina

PPA; acido fosfonoacetico________________________________________________________________________

Ribavirina; 1-p-D-ribofuranosil-1,2,4-triazol-3-carboxamida

Ritonavir, Norvir®_______________________________________________________________________________

Saquinavir, Invirase®, Fortovase®

Sorivudina, BvaraU; 1-p-D-arabinofuranosil-E-5-(2-bromovinil)uracilo______________________________________

Estavudina, d4T, Zerit®; 2',3'-dideshidro-3'-desoxitimidina_______________________________________________

Trifluorotimidina, TFT;____________________________________________________________________________

Trizivir® (sulfato de abacavir/lamivudina/zidovudina)___________________________________________________

Vidarabina, araA; 9-p-D-arabinofuranosiladenina______________________________________________________

Viread®, disoproxil fumarato de tenofovir (DF), Bis POC PMPA, TDF;______________________________________

Acido 2,4,6,8-tetraoxa-5-fosfanonanedioico, 5-[[(1R)-2-(6-amino-9H-purin-9-il)-1-metiletoxi]metil]-, bis(1-metiletil) ester, 5-oxido, (2E)-2-butenodioato (1:1)

Zalcitabina, Hivid®, ddC; 2',3'0-didesoxicitidina________________________________________________________

Zidovudina, AZT, Retrovir®; 3'-azido-2',3'-didesoxitimidina

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Zonavir; 5-propinil-1-arabinosiluracilo

En otra realizacion, las composiciones de la presente divulgacion pueden incluir los compuestos activos que se describen en el presente documento en combinacion con uno o mas (por ejemplo, 1, 2, 3) agentes activos adicionales que se han descrito anteriormente, de forma analoga a la conocida en la tecnica. Por ejemplo, se describen combinaciones de efavirenz (un INTI), emtricitabina (un INNTI) y DF de tenofovir (un INTI) en, por ejemplo, Dahl et al., la Publicacion de Solicitud de Patente de los EE.UU. N.° 2007/0099902 de Dahl et al. Los ejemplos espedficos de dichas combinaciones incluyen, pero no se limitan a: compuestos que se describen en el presente documento en combinacion con:

(a) FTC/Efavirenz;

(b) 3TC/Efavirenz;

(c) AZT/3TC;

(d) FTC;

(e) 3TC;

(f) FTC/Isentress;

(g) 3TC/Isentress;

(h) PPL-100;

(i) FTC/TMC278;

(k) 3TC/TMC278;

(l) FTC/TMC125; o

(m) 3TC/TMC125.

E. Formulaciones farmaceuticas y administracion

En una realizacion, la presente invencion es una composicion farmaceutica que comprende el compuesto de la presente invencion. En otra realizacion, la composicion farmaceutica comprende adicionalmente un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La expresion "veldculo farmaceuticamente aceptable" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier sustancia, no en sf un agente terapeutico, utilizada como vehfculo para la administracion de un agente terapeutico a un sujeto. Los ejemplos de vehfculos farmaceuticamente aceptables y metodos de fabricacion para diversas composiciones incluyen, pero no se limitan a, los que se describen en Remington Pharmaceutical Sciences, 18a Ed., Mack Publishing Co. (1990) (Vease tambien la Solicitud de Patente de los EE.UU. 2007/0072831).

El compuesto de la invencion puede formularse con vehfculos, diluyentes y excipientes convencionales, que se seleccionaran de acuerdo con la practica habitual. Los comprimidos contendran excipientes, sustancias de deslizamiento, cargas, aglutinantes, diluyentes y similares. Las formulaciones acuosas se preparan en forma esteril y cuando tienen por objeto la administracion distinta de la oral generalmente seran isotonicas. Las formulaciones contienen opcionalmente excipientes tales como los que se exponen en el "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986) e incluyen acido ascorbico y otros antioxidantes, agentes quelantes tales como EDTA, hidratos de carbono tales como dextrina, hidroxialquilcelulosa, hidroxialquilmetilcelulosa, acido estearico y similares.

El compuesto de la invencion (en lo sucesivo en el presente documento denominado principio activo) puede administrarse por cualquier via apropiada para la afeccion que se va a tratar, vfas adecuadas incluyendo la oral, rectal, nasal, topica (incluyendo la ocular, bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa, intradermica, intratecal y epidural). La via de administracion preferida puede variar con, por ejemplo, la afeccion del receptor.

Aunque es posible que el principio activo se administre solo, es preferible presentarlo como formulaciones farmaceuticas. Las formulaciones de la presente invencion, tanto para su uso veterinario como para su uso humano, comprenden al menos un principio activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables (excipientes, diluyentes, etc.) de los mismos y opcionalmente otros ingredientes terapeuticos. El vehfculo o vehfculos deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulacion y no perjudiciales para el receptor de los mismos.

Las formulaciones incluyen las adecuadas para la administracion oral, rectal, nasal, topica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa, intradermica, intratecal y epidural). Las formulaciones pueden presentarse oportunamente en una forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica de la farmacia. Dichos metodos incluyen la etapa de poner en asociacion el principio activo con el vehfculo que constituye uno o mas ingredientes adyuvantes. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociacion uniforme e mtimamente el principio activo con vehfculos lfquidos o vehfculos solidos finamente divididos o ambos, y despues, si es necesario, dando forma al producto.

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Las formulaciones de la presente invencion adecuadas para la administracion oral pueden presentarse como unidades individuales tales como capsulas, obleas o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del principio activo; como un polvo o granulos; como una solucion o una suspension en un lfquido acuoso o un lfquido no acuoso; o como una emulsion lfquida de aceite-en-agua o una emulsion lfquida de agua-en- aceite. El principio activo tambien puede presentarse como un bolo, electuario o pasta.

Un comprimido puede fabricarse por compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes adyuvantes. Los comprimidos por compresion pueden prepararse comprimiendo en una maquina adecuada el principio activo en una forma fluida tal como un polvo o granulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, tensioactivo o agente dispersante. Los comprimidos moldeados pueden fabricarse moldeando en una maquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente lfquido inerte. Los comprimidos pueden estar opcionalmente recubiertos o ranurados y pueden formularse de manera que proporcionen una liberacion lenta o controlada del principio activo en el mismo.

Para las infecciones del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las formulaciones, en algunas realizaciones, se aplican como una pomada o crema topica que contiene el principio activo en una cantidad de, por ejemplo, del 0,005 al 20 % p/p (incluyendo el principio activo en un intervalo entre el 0,05 % y el 20 % en incrementos del 0,05% p/p tal como el 0,6% p/p, el 0,65% p/p, el 0,7% p/p, etc.), en algunas realizaciones, del 0,05 al 15 % p/p y en otras realizaciones, del 0,05 al 10 % p/p. Cuando se formula en una pomada, el principio activo puede emplearse con una base de pomada parafrnica o miscible en agua. Como alternativa, el principio activo puede formularse en una crema con una base de crema aceite-en-agua.

Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos el 30 % p/p de un alcohol polilddrico, es decir, un alcohol que tiene dos o mas grupos hidroxilo tal como propilenglicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones topicas pueden incluir deseablemente un compuesto que potencie la absorcion o penetracion del principio activo a traves de la piel u otras areas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetracion dermica incluyen dimetilsulfoxido y analogos relacionados.

La fase oleosa de las emulsiones de la presente invencion puede estar constituida por ingredientes conocidos de una manera conocida. Aunque la fase puede comprender meramente un emulsionante (tambien conocido como emulgente), deseablemente comprende una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o tanto con una grasa como con un aceite. En algunas realizaciones, se incluye un emulsionante hidrofilo junto con un emulsionante lipofilo que actua como estabilizante. En algunas realizaciones, incluye tanto un aceite como una grasa. Juntos, el emulsionante o emulsionantes con o sin estabilizante o estabilizantes constituyen la denominada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y la grasa constituyen la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones en crema.

Los emulgentes y estabilizantes de emulsion adecuados para su uso en la formulacion de la presente invencion incluyen Tween®60, Span®80, alcohol cetoesteanlico, alcohol bendlico, alcohol miristflico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio.

La eleccion de aceites o grasas para la formulacion adecuados se basa en conseguir las propiedades cosmeticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayona de los aceites susceptibles de utilizarse en las formulaciones de emulsion farmaceuticas es muy baja. En algunas realizaciones, la crema debe ser preferentemente un producto no graso, que no manche y que sea lavable con una consistencia adecuada para evitar filtraciones de los tubos u otros recipientes. Pueden utilizarse esteres de alquilo mono o dibasicos, lineales o de cadena ramificada, tales como diisoadipato, estearato de isocetilo, diester de propilenglicol de acidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de esteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo los tres ultimos los esteres preferidos. Estos pueden usarse solos o en combinacion dependiendo de las propiedades requeridas. Como alternativa, pueden utilizarse lfpidos de alto punto de fusion tales como parafina filante blanca y/o parafina lfquida u otros aceites minerales.

Las formulaciones adecuadas para la administracion topica en el ojo tambien incluyen colirios en los que el principio activo se disuelve o se suspende en un vehfculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el principio activo. En algunas realizaciones, el principio activo esta presente en dichas formulaciones en una concentracion del 0,1 al 20%. En algunas realizaciones, el principio activo esta presente en una concentracion del 0,1 al 10%. En algunas realizaciones, el principio activo esta presente en una concentracion de aproximadamente el 1,5 % p/p.

Las formulaciones adecuadas para la administracion topica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el principio activo en una base aromatizada, por lo general sacarosa y goma arabiga o tragacanto; pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga; y enjuagues bucales que comprenden el principio activo en un vehfculo lfquido adecuado.

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Las formulaciones para la administracion rectal pueden presentarse en forma de un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para la administracion nasal en las que el velmculo es un solido incluyen un polvo grueso que tiene un tamano de partfcula, por ejemplo, en el intervalo de 20 a 500 micrometros (incluyendo tamanos de partfcula en un intervalo entre 20 y 500 micrometros en incrementos de 5 micrometros tal como 30 micrometros, 35 micrometros, etc.), que se administra de la manera en la que se toma el rape, es decir por inhalacion rapida a traves del conducto nasal desde un recipiente del polvo sostenido cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas en las que el velmculo es un lfquido, para la administracion de, por ejemplo, una pulverizacion nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo. Las formulaciones adecuadas para la administracion en aerosol pueden prepararse de acuerdo con metodos convencionales y pueden administrarse con otros agentes terapeuticos tales como pentamidina para el tratamiento de la neumoma por Pneumocystis.

Las formulaciones adecuadas para la administracion vaginal pueden presentarse como formulaciones en pesarios, anillos, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizaciones que contienen, ademas del principio activo, velmculos tales como los que se sabe en la tecnica que son apropiados.

Las formulaciones adecuadas para la administracion parenteral incluyen soluciones de inyeccion esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que convierten la formulacion en isotonica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitarias o multiples, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en condiciones de secado por congelacion (liofilizado) que requiere solo la adicion del velmculo lfquido esteril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea pueden prepararse a partir de polvos, granulos y comprimidos esteriles del tipo descrito anteriormente. Las formulaciones de dosificacion unitaria preferidas son las que contienen una dosis diaria o una subdosis diaria unitaria, como se ha indicado anteriormente en el presente documento, o una fraccion apropiada de las mismas, de un principio activo.

Ha de entenderse que ademas de los ingredientes mencionados en particular anteriormente las formulaciones de la presente invencion pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica teniendo en cuenta el tipo de formulacion en cuestion, por ejemplo los adecuados para la administracion oral pueden incluir agentes aromatizantes.

La presente invencion proporciona adicionalmente composiciones veterinarias que comprenden al menos el principio activo como se ha definido anteriormente junto con un velmculo veterinario. Los velmculos veterinarios son materiales utiles para el proposito de administrar la composicion y pueden ser materiales solidos, lfquidos o gaseosos que sean por lo demas inertes o aceptables en la tecnica veterinaria y sean compatibles con el principio activo. Estas composiciones veterinarias pueden administrarse por via oral, parenteral o por cualquier otra via deseada.

Los compuestos que se describen en el presente documento pueden usarse para proporcionar formulaciones farmaceuticas de liberacion controlada que contengan como principio activo el compuesto de la invencion ("formulaciones de liberacion controlada") en las que la liberacion del principio activo puede controlarse y regularse para permitir una dosificacion menos frecuente o para mejorar el perfil farmacocinetico o de toxicidad del compuesto de la invencion. Pueden prepararse, de acuerdo con metodos convencionales, formulaciones de liberacion controlada adaptadas para la administracion oral en las que las unidades individuales comprenden uno o mas compuestos de la invencion. Pueden emplearse formulaciones de liberacion controlada para el tratamiento o la profilaxis de diversas infecciones microbianas, en particular infecciones bacterianas humanas, protozoarias parastticas humanas o vmcas humanas, provocadas por especies microbianas incluyendo Plasmodium, Pneumocystis, los virus del herpes (CMV, VHS 1, VHS 2, VZV y similares), retrovirus, adenovirus y similares. Las formulaciones de liberacion controlada pueden utilizarse para tratar infecciones por el VIH y afecciones relacionadas tales como la tuberculosis, la malaria, la neumoma por Pneumocystis, la retinitis por cMv, el SIDA, el complejo relacionado con el SIDA (CRS) y la linfadenopatfa generalizada progresiva (LGP) y afecciones neurologicas relacionadas con el SIDA tales como la esclerosis multiple y la paraparesia espastica tropical. Otras infecciones retrovmcas humanas que pueden tratarse con las formulaciones de liberacion controlada de acuerdo con la invencion incluyen el virus linfotropico de los linfocitos T humano y las infecciones por VIH-2. En consecuencia, la divulgacion proporciona formulaciones farmaceuticas para su uso en el tratamiento o la profilaxis de las afecciones y las infecciones microbianas, humanas o veterinarias, mencionadas anteriormente.

Potenciadores farmacocineticos. Los compuestos que se describen en el presente documento pueden emplearse en combinacion con potenciadores farmacocineticos (a veces tambien denominados "agentes de refuerzo"). Un aspecto de la divulgacion proporciona el uso de una cantidad eficaz de un potenciador para potenciar o "reforzar" la farmacocinetica del compuesto de la invencion. Una cantidad eficaz de un potenciador, por ejemplo, la cantidad requerida para potenciar el compuesto activo de la invencion, es la cantidad necesaria para mejorar el perfil farmacocinetico o actividad del compuesto en comparacion con su perfil cuando se usa solo. El compuesto posee un perfil farmacocinetico eficaz mejor de lo que sena sin la adicion del potenciador. La cantidad de potenciador farmacocinetico utilizado para potenciar la potencia del compuesto es, preferentemente, subterapeutica (por

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ejemplo, dosificaciones por debajo de la cantidad de agente de refuerzo utilizado convencionalmente para tratar terapeuticamente la infeccion en un paciente). Una dosis de potenciador para los compuestos de la invencion es subterapeutica para tratar la infeccion, pero lo suficientemente alta para efectuar la modulacion del metabolismo de los compuestos de la invencion, de manera que su exposicion en un paciente se refuerza por el aumento de la biodisponibilidad, el aumento de los niveles sangumeas, el aumento de la semivida, el aumento del tiempo hasta la concentracion maxima, la inhibicion mayor/mas rapida de la integrasa del VIH, el RT o la proteasa y/o la reduccion del aclaramiento sistemico. Un ejemplo de un potenciador farmacocinetico es el RITONAVIR™ (Abbott Laboratories).

F. Metodos de tratamiento

De acuerdo con un aspecto de la divulgacion se proporcionan metodos para el tratamiento de trastornos provocados por infecciones vmcas. En algunos aspectos, el virus es un retrovirus. En una realizacion, el virus es un retrovirus gamma. Como se usa en el presente documento, "retrovirus" es un virus de ARN que se replica en una celula hospedadora por medio de la enzima transcriptasa inversa para producir ADN a partir de su genoma de ARN. El ADN se incorpora despues en el genoma del hospedador mediante una enzima integrasa. El virus se replica a partir de entonces como parte del ADN de la celula hospedadora. Los retrovirus son virus envueltos que pertenecen a la familia vmca Retroviridae. Los retrovirus de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y el virus xenotropico relacionado con el virus de la leucemia murina (XMRV). Ademas, existen pruebas para indicar que el XMRV puede estar relacionado con el smdrome de fatiga cronica (SFC). (Vease, por ejemplo, Lombardi, et al., Detection of an infectious retrovirus, XMRV, in blood cells of patients with chronic fatigue syndrome, Science, vol. 326, P 585-589 (octubre de 2009)).

En una realizacion, el compuesto utilizado para tratar al sujeto es una sal de potasio de CMX157. En otra realizacion, el compuesto utilizado para tratar al sujeto es la forma libre de CMX157.

En una realizacion, el sujeto es un ser humano. En una realizacion, el sujeto es un sujeto inmunodeprimido y/o inmunodeprimido. En algunas realizaciones, los efectos secundarios toxicos en el sujeto inmunodeficiente disminuyen en comparacion con los efectos secundarios toxicos del uso de tenofovir u otros agentes antivmicos. En una realizacion, el sujeto padece el smdrome de fatiga cronica. En una realizacion, el sujeto padece cancer de prostata.

Los smtomas del smdrome de fatiga cronica (SFC) pueden incluir, por ejemplo, la fatiga que altera la vida en las actividades habituales de la vida diaria, incluyendo conjuntos de smcope, dolor en el pecho, dolores musculares, palpitaciones, dolor de garganta, fiebre de bajo grado, incapacidad para hacer ejercicio sin que un empeoramiento de todos los smtomas se extienda al dfa siguiente, linfadenoparta cervical, deterioro cognitivo y depresion resultante e intolerancia a alcohol. Tambien puede producirse una activacion inmunitaria cronica intensa que los acompana.

En una realizacion, los metodos de la presente divulgacion alivian uno o mas smtomas asociados al smdrome de fatiga cronica.

Como se usa en el presente documento, la inmunodeficiencia (o deficiencia inmunitaria) es un estado en el que la capacidad del sistema inmunitario para combatir enfermedades infecciosas se ve comprometida o esta totalmente ausente. Un sujeto inmunodeprimido es un sujeto que tiene una inmunodeficiencia de cualquier tipo o de cualquier nivel. El sujeto inmunocomprometido de ejemplo incluye, pero no se limita a, un sujeto con inmunodeficiencia primaria (un sujeto que nace con defectos en el sistema inmunitario) y un sujeto con inmunodeficiencia secundaria (adquirida). Ademas, otras causas habituales de inmunodeficiencia secundaria incluyen, pero no se limitan a, la malnutricion, el envejecimiento y medicamentos particulares (por ejemplo la terapia inmunosupresora, tal como la quimioterapia, los farmacos antirreumaticos modificadores de la enfermedad, los farmacos inmunosupresores despues del trasplante de organos, los glucocorticoides). Otras enfermedades de ejemplo que deterioran directa o indirectamente el sistema inmunitario incluyen, pero no se limitan a, diversos tipos de cancer, (por ejemplo, de medula osea y de celulas sangumeas (leucemia, linfoma, mieloma multiple)), smdrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) provocado por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), infecciones cronicas y enfermedades autoinmunes (por ejemplo, la encefalomielitis diseminada aguda (EMDA), la enfermedad de Addison, la alopecia areata, la espondilitis anquilosante, el smdrome de anticuerpos antifosfolfpidos (APS), la anemia hemolftica autoinmune, la hepatitis autoinmune, la enfermedad del ofdo interno autoinmune, el penfigoide ampolloso, la enfermedad celfaca, la enfermedad de Chagas, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica, la enfermedad de Crohn, la dermatomiositis, la diabetes mellitus de tipo 1, la endometriosis, el smdrome de Goodpasture, la enfermedad de Graves, el smdrome de Guillain-Barre (SGB), la enfermedad de Hashimoto, la hidradenitis supurativa, la enfermedad de Kawasaki, la nefroparta por IgA, la purpura trombocitopenica idiopatica, la cistitis intersticial, el lupus eritematoso, la enfermedad mixta del tejido conectivo, la esclerodermia, la esclerosis multiple (EM), la miastenia grave, la narcolepsia, la neuromiotoma, el penfigo vulgar, la anemia perniciosa, la psoriasis, la artritis psoriasica, la polimiositis, la cirrosis biliar primaria, la artritis reumatoide, la esquizofrenia, la esclerodermia, el smdrome de Sjogren, el smdrome del hombre ngido, la arteritis temporal (tambien conocida como "arteritis de celulas gigantes"), la colitis ulcerosa, la vasculitis, el vitiligo, la granulomatosis de Wegener).

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La actividad antivmco de CMX157 se ha descrito en las Patentes de los Estados Unidos N.° 6.716.825, 7.034.014, 7.094.772, 7.098.197, 7.452.898 y la publicacion PCT N.°WO 2008/133966.

2. Tratamiento de infecciones del compartimento privilegiado

Tambien se ha descubierto que los compuestos que se describen en el presente documento pueden asociarse o unirse a partmulas vmcas. Dado que las partmulas vmcas migran o penetran en compartimentos celulares o tisulares que generalmente no son accesible a los agentes terapeuticos activos (creando de este modo un "deposito" de la infeccion sustancialmente sin tratar cuando a los sujetos se les administran por via sistemica dichos agentes), este hallazgo hace posible (a) el tratamiento de la infeccion en dichos compartimentos privilegiados y (b) el uso de agentes activos en tratamientos profilacticos o microbicidas (en los que la asociacion o union del agente activo al virus antes de que ocurra la infeccion es terapeuticamente beneficiosa).

En general, un compartimento privilegiado es un compartimento celular o tisular al que dicho virus penetra in vivo, al que dicho agente activo no penetra de manera eficiente in vivo en ausencia de dicho virus y al que dicho agente activo es llevado in vivo por dicho virus cuando dicho agente activo se une a dicho virus. Por ejemplo, cuando el compartimento privilegiado es un compartimento tisular, este puede ser el cerebro (sistema nervioso central), el tejido linfoide o los testfculos. Los ejemplos de compartimentos celulares privilegiados incluyen, pero no se limitan a, las celulas dendnticas, la microglia, los monocitos/macrofagos y combinaciones los mismos. Pueden prepararse y realizarse composiciones y metodos de tratamiento de infecciones del compartimento privilegiado como se ha descrito anteriormente. Se analizan composiciones, dispositivos y metodos profilacticos en mas detalle a continuacion.

El tratamiento para las infecciones de compartimentos privilegiados usando CMX157 se ha descrito en las Publicaciones PCT N.°WO 2009/094191 y WO 2009/094190.

F. Composiciones topicas y metodos microbicidas

La presente invencion puede tomar la forma de composiciones topicas que contienen el agente activo descrito en el presente documento para inhibir o combatir una infeccion vmca, por ejemplo, para su uso profilactico. Se conocen y describen dichas composiciones (con agentes activos distintos de los desvelados en el presente documento) en, por ejemplo, la Patente de los EE.UU. N.° 6.545.007.

Dichas composiciones pueden tomar varias formas. Por tanto, en una realizacion, la composicion esta en forma de una crema, locion, gel o espuma que se aplica a la piel o cavidad epitelial afectada y, preferentemente, se extiende sobre toda la piel o superficie epitelial que se encuentra en riesgo de contacto con fluidos corporales. Dichas formulaciones, que son adecuadas para su administracion vaginal o rectal, pueden estar presentes como suspensiones acuosas u oleosas, soluciones o emulsiones (formulaciones lfquidas) que contienen ademas del principio activo, vehfculos tales como los que se sabe en la tecnica que son apropiados. Para lubricantes "independientes" (es decir, lubricantes que no estan envasados previamente con preservativos), generalmente se prefieren geles y formulaciones acuosas similares, por diversas razones (tanto cientfficas como economicas) conocidas por los expertos en la materia. Estas formulaciones son utiles para proteger no solo contra la transmision sexual de un retrovirus, sino tambien para prevenir la infeccion de un bebe durante el paso a traves del canal del parto. De este modo, la administracion vaginal puede tener lugar antes de las relaciones sexuales, durante las relaciones sexuales e inmediatamente antes del parto.

Un metodo de aplicacion de un lubricante antivmco a los genitales, para los fines desvelados en el presente documento, consiste en extraer una pequena cantidad (tal como una cucharilla o varios mililitros) de un gel, crema, pomada, emulsion o formulacion similar desde un tubo, tarro o recipiente similar plastico o metalico o de un paquete sellado plastico, metalico u otro que contenga una dosis unica de dicha composicion, y extender la composicion por la superficie del pene inmediatamente antes del acto sexual. Los metodos alternativos de aplicacion incluyen: (1) extender la composicion sobre superficies accesibles dentro de la vagina o recto poco antes del acto sexual; y (2) poner un preservativo, diafragma o dispositivo similar, que ya se haya recubierto o puesto en contacto de otro modo con un lubricante antivmco, sobre el pene o dentro de la vagina. En una realizacion preferida, cualquiera de estos metodos de extension de un lubricante antivmco por las superficies de los genitales provoca que el lubricante recubra y permanezca en contacto con las superficies genitales y epiteliales a lo largo del acto sexual.

En una realizacion, las composiciones se usan en conjunto con los preservativos, para potenciar la eficacia de reduccion del riesgo de los preservativos y proporcionar la maxima proteccion para los usuarios. La composicion o bien puede aplicarse como recubrimiento sobre los preservativos durante la fabricacion y pueden incluirse dentro de paquetes de plastico o de papel de aluminio hermeticos convencionales que contengan un preservativo por paquete, o puede aplicarse manualmente por un usuario en el interior o el exterior de un preservativo, inmediatamente antes de su uso.

Como se usa en el presente documento, "preservativo" se refiere a un dispositivo de barrera que se utiliza para proporcionar una barrera ffsica hermetica entre los organos genitales masculinos y femeninos durante el acto sexual

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y que se retira despues del acto sexual. Este termino incluye los preservativos convencionales que cubren el pene; tambien incluye los denominados "preservativos femeninos" que se insertan en la cavidad vaginal antes del acto sexual. El termino "preservativo" no incluye los diafragmas, capuchones cervicales u otros dispositivos de barrera que cubran solamente una parte de las membranas epiteliales dentro de la cavidad vaginal. Preferentemente, los preservativos deben estar hechos de latex o un material plastico sintetico tal como poliuretano, ya que estos proporcionan un alto grado de proteccion contra los virus.

En otra realizacion la composicion esta en forma de una pfldora intravaginal, una pfldora intrarrectal o un supositorio. El supositorio o pfldora debe insertarse en la cavidad vaginal o rectal de una manera que permita que el supositorio o pfldora, mientras se disuelve o erosiona, recubra las paredes vaginales o rectales con una capa profilactica del antivmco.

En otra realizacion mas, la composicion se aplica topicamente mediante la liberacion desde un dispositivo intravaginal. Pueden adaptarse facilmente dispositivos tales como anillos vaginales, esponjas vaginales, diafragmas, capuchones cervicales, preservativos femeninos y similares para liberar la composicion en la cavidad vaginal despues de la insercion.

Las composiciones utilizadas en los metodos de la presente divulgacion tambien pueden comprender agentes activos adicionales, tales como otro u otros agentes para prevenir la infeccion por retrovirus y agentes que protejan a los individuos de la concepcion y de otras enfermedades de transmision sexual. Por tanto, en otra realizacion, las composiciones comprenden adicionalmente uno o mas agentes antivmcos adicionales, viricidas eficaces contra las infecciones vmcas y/o espermicidas.

En una realizacion particular, la composicion contiene nonoxinol, un tensioactivo espermicida ampliamente utilizado. La composicion resultante puede considerarse como una composicion "bifuncional", ya que tendna dos agentes activos que proporcionan dos funciones deseadas distintas, en un vetnculo lfquido relativamente inerte; el nonoxinol proporcionana un agente anticonceptivo espermicida y un derivado de dihidroalcoxibenciloxopirimidina (DABO) proporcionana propiedades antivmcas. Es probable que el nonoxinol provoque algun nivel de irritacion, en al menos algunos usuarios; este es un efecto secundario lamentable pero bien conocido de los tensioactivos espermicidas tales como el nonoxinol y el octoxinol, que atacan y destruyen las membranas de bicapa lipfdica que rodean las celulas del esperma y otras celulas de mairnferos.

Las composiciones tambien pueden contener un lubricante que facilite la aplicacion de la composicion a las areas deseadas de la piel y el tejido epitelial y reduzca la friccion durante el acto sexual. En el caso de una pfldora o supositorio, el lubricante puede aplicarse al exterior de la forma de dosificacion para facilitar la insercion.

En otra realizacion mas, la divulgacion proporciona un dispositivo para la inhibicion de la transmision sexual de un retrovirus que comprende (a) una estructura de barrera para la insercion en la cavidad vaginal y (b) una composicion que comprende un agente activo como se describe en el presente documento. Como se ha mencionado anteriormente, los dispositivos preferidos que actuan como estructuras de barrera y que pueden adaptarse para aplicar el agente antivmco, incluyen la esponja vaginal, el diafragma, el capuchon cervical o el preservativo (masculino o femenino).

Los metodos, composiciones y dispositivos pueden adaptarse en general para liberar el agente activo de una manera sensible al tiempo que mejor se corresponda con la sincronizacion de la actividad sexual. Cuando se aplican topicamente en forma de una locion o un gel, las composiciones se aplican preferentemente inmediatamente antes de la actividad sexual. Otros modos de aplicacion, tales como dispositivos y supositorios, pueden disenarse para liberar el agente activo durante un penodo prolongado de tiempo, a una velocidad predeterminada, dependiendo de las necesidades del consumidor.

Las composiciones topicas y metodos microbicidas que usan CMX157 tambien se han descrito en las Publicaciones PCT N.° WO 2009/094191 y WO 2009/094190.

G. Ejemplos

La presente invencion se describira ahora en mas detalle con referencia a los siguientes ejemplos. Ha de entenderse que los ejemplos que no estan cubiertos por las reivindicaciones son ejemplos de referencia. El ejemplo de la invencion se proporciona con fines de ilustracion y no debe interpretarse como limitante del alcance de la invencion.

EJEMPLO 1. SELECCION Y PREPARACION DE SALES

1. Seleccion preliminar de sales

Se realizo una seleccion preliminar de sales sobre CMX157. Se seleccionaron formadores de cocristales en forma conjunta entre la siguiente lista: acido cttrico, acido fumarico, acido gentfsico, acido hipurico, acido maleico, acido L- mandelico, acido orotico, acido oxalico, sacarina, acido succmico, acido L-tartarico, acido toluenosulfonico,

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amomaco, L-arginina, hidroxido de calcio, dietilamina, dietilaminoetanol, etilendiamina, 1H imidazol, L-lisina, 2- hidroxietilmorfolina, N-metil-glucamina, metanolato de potasio, terc-butoxido de cinc. La seleccion de sal/cocristal incluyo la evaporacion en cuatro disolventes seguida del equilibrio de fases en cuatro disolventes adicionales. Los residuos solidos se investigaron por microscopfa Raman despues de cada experimented

La comparacion de los espectros Raman indico una formacion de sal/cocristal en el caso de la muestra de gentisato (cristalino). Se descubrio que las muestras de fumarato y hipurato eran mezclas de material cristalino y amorfo. Los espectros de Raman detectados de estas muestras indicaron una formacion de sal. Los espectros Raman de las siguientes muestras amorfas revelaron diferencias con el espectro del farmaco libre y el del correspondiente formador de sal: muestra de calcio, muestra de dietil amina, muestra de dietilaminoetanol, muestra de etilendiamina, muestra de imidazol, muestra de potasio. Los espectros de Raman de las muestras de L-mandelato y de succinato revelaron solo ligeras diferencias en comparacion con los espectros del farmaco libre y el del correspondiente formador de sal. La investigacion de la placa despues del almacenamiento de la placa a temperatura ambiente durante doce dfas dio como resultado un material parcialmente cristalino en el caso de N-metilglucamina, etilendiamina e imidazol. Los espectros de Raman registrados de estas muestras indicaron una posible formacion de sal.

De acuerdo con los resultados de la seleccion preliminar, se realizo una optimizacion de cristalizacion adicional para las siguientes sales: muestra de gentisato, muestra de fumarato, muestra de hipurato, muestra de etilendiamina, muestra de imidazol, muestra de N-metilglucamina, muestra de potasio y muestra de succinato.

2. Preparacion de las sales

La forma de acido libre de CMX157 puede prepararse mediante metodos conocidos para un experto en la materia (Vease, por ejemplo, Painter et al., Antimicrob Agents Chemother 51:3505-9 (2007) y Painter, et al., Trends Biotechnol 22:423-7 (2004)).

Sal de sodio de CMX157: se disolvieron (55,0 gramos, 96,5 mmol) de forma de acido libre de CMX157 en una solucion de DCM:MeOH (9:1, 550 ml) a temperatura ambiente. Se anadio metoxido de sodio (solucion 0,5 M en metanol, 193,1 ml, 96,5 mmol) a la solucion y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se concentro al vacte hasta sequedad (bano de agua 50 °C). La espuma de color blanquecino resultante se disolvio en etanol (200 ml) a 60 °C, se diluyo con acetona (200 ml), se enfrio a temperatura ambiente y se envejecio durante 18 horas. La suspension se mantuvo a 5 °C durante 48 horas, se filtro, se lavo con acetona (200 ml) y se seco al vacte a 35 °C durante 48 horas para producir 54,4 g (95,2 %) de la sal de sodio de CMX157 en forma de un solido de color blanco. HPLC (ABC) pureza del 99,6 %.

Sal de potasio de CMX157: Se disolvieron (55,0 gramos, 96,5 mmol) de forma de acido libre de CMX157 en una solucion de DCM:MeOH (9:1, 550 ml) a temperatura ambiente. Se anadio metoxido de potasio (solucion al 25 % en metanol, 28,5 ml, 96,5 mmol) a la solucion y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se concentro al vacte hasta sequedad (bano de agua a 50 °C). La espuma de color blanquecino resultante se disolvio en etanol (200 ml) a 60 °C, se diluyo con acetona (200 ml), se enfrio a temperatura ambiente y se envejecio durante 18 horas. La suspension se mantuvo a 5°C durante 48 horas, se filtro, se lavo con acetona (200 ml) y se seco al vacte a 35 °C durante 48 horas para producir 48,4 g (82,4 %) de la sal de potasio de CMX157 en forma de un solido de color blanco. HPLC (ABC) pureza del 97,4 %.

Sal de litio de CMX157: Se disolvieron (55,0 gramos, 96,5 mmol) de forma de acido libre de CMX157 en una solucion de DCM:MeOH (9:1, 550 ml) a temperatura ambiente. Se anadio terc-butoxido de litio (7,73 g, 96,5 mmol) a la solucion y se agitaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se concentro al vacte hasta sequedad (bano de agua a 50 °C). El solido de color blanquecino resultante se disolvio en etanol (800 ml) a 70 °C, se enfrio a temperatura ambiente y se envejecio durante 16 horas. La suspension fina se filtro, se lavo con acetona (200 ml) y se seco al vacte a 35 °C durante 48 horas para producir 51,2 g (92,1 %) de sal de litio de CMX157en forma de un solido de color blanco. HPLC (ABC) pureza del 95,7 %.

Sal de Amonio de CMX157: Se disolvieron (55,0 gramos, 96,5 mmol) de forma de acido libre de CMX157 en 2- propanol (220 ml) a 78 °C en presencia de hidroxido de amonio (solucion al 28-30 % 13,54 ml, 96,5 mmol). La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se envejecio durante 18 horas. La suspension se mantuvo a 5 °C durante 48 horas, se filtro y se seco al aire durante aproximadamente 48 horas para producir 51,7 g (91,3 %) de sal de amonio de CMX157 en forma de un solido de color blanco. HPLC (ABC) pureza del 98,7 %.

EJEMPLO 2 PROPIEDADES DE LAS SALES

1. Estabilidad de CMX157 y sales de CMX157

Se realizo un ensayo de estabilidad para CMX157 y sus sales para investigar la calidad del compuesto con el tiempo en diversos ambientes. Se establecieron condiciones aceleradas utilizando un horno de vacte Isotemp ajustado a ya sea 40 °C o 60 °C. Si se necesitaba una alta humedad, una solucion saturada de cloruro de sodio creaba un estado

del aire que contema aproximadamente el 75 % de humedad.

Para la determinacion de la cantidad de CMX157 presente en las muestras dentro del estudio de estabilidad, se utilizo un patron de referencia de una pureza conocida. Se ha demostrado que El patron de referencia es estable a 5 temperature ambiente y condiciones aceleradas. Para el analisis, se disolvieron 40 mg de muestras y patrones en 100,0 ml de diluyente (80 H2O: 20 Metanol: 2 NH4OH). La separacion del farmaco y las impurezas se consiguo utilizando un gradiente de fase movil (Tabla 1) en un HPLC Shimadzu A20 con una columna Phenomenex Synergi Polar RP 4 p 150 x 3 mm. Mediante la comparacion de las areas de las muestras a una longitud de onda de 259 nM (A max) con las del patron de referencia, se determino el porcentaje de CMX157.

10

Tabla 1. El gradiente de fase movil para HPLC

Tiempo

% de acetato de amonio 50 mM con EDTA 50 ^M % de metanol Caudal (ml/min)

0,00

35 65 0,8

12,00

20 80 0,8

18,00

5 95 0,8

18,01

35 65 0,8

22,00

final final 0,8

La estabilidad para CMX157 y diversas sales de CMX157 en diferentes condiciones se resume en la Tabla 2. Como se muestra en la Tabla 2, aproximadamente el 30 % del acido libre se descompone despues de que se pusiera a 15 60 °C durante 4 semanas (28 dfas). Por el contrario, las sales de sodio, potasio, litio y amonio de CMX157 han

mantenido la estabilidad en condiciones de temperatura ambiente o a 40 °C despues de 2 semanas o 4 semanas.

Tabla 2. Estabilidad para diversas sales para CMX157

Tipo de CMX157

acido libre

inicial: 94,5 %

40/75 60 °C

9 dfas 91,5 % 81,4 %

4 semanas 93,9 % 70,2 %

Na +

inicial: 99,6 %

IA 40/75

2 semanas 95,5 % 96,9 %

4 semanas 99,5 % 99,9 %

K +

inicial 97,4 %

IA 40/75

2 semanas 98,3 % 98,2 %

4 semanas 99,6 % 99,4 %

Li +

inicial: 95,7 %

IA 40/75

2 semanas 97,1 % 97,3 %

4 semanas 97,5 % 99,0 %

NH4 +

inicial: 98,7 %

IA 40/75

2 semanas 98,9 % 98,5 %

4 semanas 100,3 % 101,6 %

Referencia: LJK017 paginas 136, 139, 148, 152, 157, 160

20 2. Higroscopicidad para las sales

De acuerdo con la observacion de los investigadores de la presente invencion, la sal de potasio para CMX157 es menos higroscopica que otras sales.

25 3. Elaborabilidad para las sales

De acuerdo con la observacion de los investigadores de la presente invencion, la sal de potasio para CMX157 es menos pegajosa en comparacion con otras sales durante el proceso de filtracion.

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EJEMPLO 3 EVALUACION ANTI-XMRV DE CMX157

El siguiente ejemplo demuestra los resultados de las evaluaciones in vitro anti-retrovirus xenotropico murino (XMRV) de CMX157 en paralelo con tenofovir y otros agentes antivmcos. Los materiales de ensayo se evaluaron en celulas PG-4 contra XMRV recogidos del sobrenadante sin celulas de celulas de cancer de prostata 22Rv1 utilizando una curva de dosis respuesta completa. Los detalles experimentales y los resultados se analizan a continuacion.

1. Compuestos

Se solubilizaron los materiales de ensayo (sal de K+ de CMX157 y Tenofovir) a 40 mM y 10 mM en agua, respectivamente, y se almacenaron a -20 °C. Los materiales de ensayo se evaluaron usando una concentracion de ensayo alta de 1 |jM y se diluyeron en serie en incrementos semilogantmicos para el ensayo antivmco in vitro (SOW104-11-01). Se realizo un segundo ensayo (SOW104-11-02) utilizando una concentracion de ensayo alta de 1 jM para CMX157, pero concentracion de ensayo aumentada de 100 jM para tenofovir. Se adquirio ribavirina de Sigma y se utilizo como compuesto de control positivo. Se obtuvieron AZT e indinavir del NIH AIDS Repository y se utilizaron como compuestos de control adicionales.

2. Ensayo de citoproteccion de Anti-XMRV

(1) Preparacion de celulas

Se hicieron pases de celulas de PG (ATCC n.° CRL-2032; astrocitos felinos) en matraces T-75 en medio 5A de McCoy suplementado con suero fetal bovino inactivado por calor al 10 %, L-glutamina 2 mmol/l, penicilina 100 U/ml y estreptomicina 100 jg/ml antes de su uso en el ensayo antivmco. El dfa anterior al ensayo, las celulas se dividieron 1:2 para asegurar que estaban en una fase de crecimiento exponencial en el momento de la infeccion. Se realizo la cuantificacion de celulas totales y de viabilidad utilizando un hemocitometro y colorante de exclusion azul de tripano. La viabilidad celular tema que ser superior al 95 % para las celulas para se fueran a utilizar en el ensayo. Las celulas se resuspendieron a 5 x 104 celulas por ml (SOW104-11-01) o 1 x 105 celulas por ml (SOW104-11-02) en medio de cultivo tisular y se anadieron a placas de microtitulacion de fondo plano en un volumen de 100 jl para la incubacion durante la noche a 37 °C/CO2 al 5 %.

(2) Dilucion de compuesto

Se realizaron diluciones semilogantmicas en serie. Se retiro el medio de la monocapa de celulas y se transfirieron 100 jl de concentraciones 2X de medios que conteman compuesto (DMEM suplementado con FBS al 2%, L- glutamina 2 mmol/l, penicilina 100 U/ml y estreptomicina 100 jg/ml para SOW104-11-01 o medio de cultivo de celulas PG-4 para SOW104-11-02) a la placa de microtitulacion de 96 pocillos. Se evaluaron ribavirina y AZT en paralelo como compuestos de control para SOW104-11-01. Se evaluaron Indinavir y AZT en paralelo como compuestos de control para SOW104-11-02.

(3) Preparacion del Virus

El virus XMRV se recogio del sobrenadante libre de celulas de celulas de cancer de prostata humano 22Rv1 (ATCC n.° CRL-2505). Una alfcuota titulada previamente de virus se retiro del congelador (-80 °C) y se dejo descongelar en una cabina de seguridad biologica. El virus se diluyo en medio de ensayo FBS al 2 %, de manera que la cantidad de virus anadida a cada pocillo en un volumen de 100 jl fuera la cantidad que se determino que produce del 85 al 95 % de muerte celular seis dfas despues de la infeccion (sobre la base de valores de densidad optica) para SOW104-11- 01. Se utilizo medio de cultivo de celulas PG-4 para diluir el virus en un volumen de 100 jl en la cantidad que se determino que produce del 85 al 95 % de muerte celular seis dfas despues de la infeccion para SOW104-11-02.

(4) Tincion con XTT de placas de microtitulacion

Se cuantifico la inhibicion de los efectos citopaticos (CPE, por sus siglas en ingles) inducidos por virus midiendo la reduccion del colorante de tetrazolio XTT (hidroxido de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-[(fenilamino)carbonil]- 2H-tetrazolio). El XTT en celulas metabolicamente activas es metabolizado por la enzima NADPH oxidasa mitocondrial a un producto de formazan soluble. Se preparo solucion de XTT a diario como una solucion madre de 1 mg/ml en PBS. Se preparo una solucion de metosulfato de fenazina (PMS) a 0,15 mg/ml en PBS y se almaceno en la oscuridad a -20 °C. Se preparo XTT/PMS inmediatamente antes de su uso mediante la adicion de 40 jl de PMS por ml de solucion de XTT. Se anadieron 50 jl de XTT/PMS a cada pocillo de la placa y la placa se incubo durante 4 h a 37 °C. Se ha determinado empmcamente que las 4 h de incubacion estan dentro del intervalo de respuesta lineal para la reduccion del colorante XTT con los numeros indicados de celulas para cada ensayo. Se utilizaron selladores adhesivos de placas en lugar de las tapas, la placa sellada se invirtio varias veces para mezclar el producto de formazan soluble y la placa se leyo a 450 nm (longitud de onda de referencia 650 nm) con un espectrofotometro de formato de placa de 96 pocillos SpectraMax Plus 384 de Molecular Devices.

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(5) Analisis de los datos

Se recogieron datos en bruto del software Softmax Pro 4.6 y se importaron en una hoja de calculo XLfit4 de Microsoft Excel para analizar (analisis de ajuste de curva de cuatro parametros) y representar graficamente los datos. Utilizando Microsoft Excel, se proporcionaron CE50 y CE90 (el 50 % y el 90 % de inhibicion de la replicacion del virus), TC50 y CT90 (el 50 % y el 90 % de reduccion de la viabilidad celular) y un mdice terapeutico (IT, CT50/CE50 y CT90/CE90). La CE50, CE90, CT50 y CT90 se expresan como medias ± desviacion tfpica. La cifra significativa es de tres dfgitos. Los datos en bruto tanto para la actividad antivmca como para la toxicidad con una representacion grafica de los datos se proporcionan en una copia impresa que resume la actividad del compuesto individual.

3. Resultados

(1) Evaluaciones Anti-XMRV

Se evaluaron la sal de K+ de CMX157 y el tenofovir contra XMRV recogido de celulas de cancer de prostata 22Rv1 en celulas PG-4 usando una curva de respuesta a la dosis de seis concentraciones. Los resultados de los ensayos de XMRV se resumen en la Tabla 3.

El compuesto de control AZT se evaluo en paralelo con los materiales de ensayo presentados y produjo valores de CE50 de 0,8 y 0,07 |jM. El aumento de la potencia observada en SOW 104-11-02 indica el aumento de la densidad celular y el uso de medio de cultivo de celulas PG-4 proporciono condiciones de ensayo superiores en comparacion con las utilizadas en SOW 104-11-01. Tambien se evaluaron ribavirina y indinavir en paralelo con los materiales de ensayo presentados y proporcionaron valores de CE50 de 10,1 jg/ml y 0,8 jM, respectivamente, con indices terapeuticos calculados de 6,5 y 2,7, respectivamente.

El tenofovir fue inactivo hasta 1 jM cuando se evaluo en SOW 104-11-01 y la sal de K+ de CMX157 produjo valores de CE50 de 0,04 jM. Se realizo un segundo ensayo utilizando una concentracion de ensayo alta aumentada para el tenofovir que dio como resultado un valor de CE50 de 2,4 jM y 0,003 jM para CMX157.

Tabla 3: Actividad de compuestos en el Ensayo de citoproteccion Anti-XMRV

Compuesto

CE50 de PG-4/XMRV (pM) CT50 de PG-4 (pM) indice terapeutico

Ribavirina (jg/ml)

10,1 65,2 6,5

IDV (Indinavir)

0,8 2,2 2,7

AZT (Retrovir)

0,8 >1,0 >1,2

0,07

>10,0 >143,0

0,6

>1,0 >15,6

TFV (Tenofovir)

>1,0 >1,0 —

2,4

>100,0 >41,5

2,6

>100,0 >38,6

CMX157

0,04 0,4 10,0

0,003

>0,1 >333,0

0,06

5,9 97,8

Como se ha mostrado anteriormente en la Tabla 3, la sal de K+ de CMX157 demostro aproximadamente una actividad antivmca aproximadamente 60 a 800 veces mayor que la del tenofovir en celulas PG-4 contra XMRV recogidas de celulas de cancer de prostata 22Rv1.

El CMX157 fue un inhibidor potente de XMRV in vitro con una CE50 aproximadamente 20 veces menor que la del AZT y 800 veces menor que la del TFV. Se obtuvieron valores mayores de CE50 para todos los compuestos cuando se usaron celulas PG-4 de mas pases.

EJEMPLO 4 ACTIVIDAD ANTI-XMRV EN LAS CELULAS

La Tabla 4 muestra los datos de un ensayo de actividad anti-XMRV. Espedficamente, el ensayo de actividad anti- XMRV se completo en celulas LNCaP (ensayo de 6 dfas) de acuerdo con los metodos descritos en PLoS ONE, volumen 5 (4), abril de 2010, e9948, paginas 1-7.

Tabla 4. Actividad anti-XMRV

Actividad anti-XMRV en celulas LNCaP (ensayo de 6 dfas)

Citotoxicidad (CI50, jM)

Compuesto

CE50, jM CE90, jM Celulas LNCaP

AZT

0,0081 ± 0,011 0,055 ± 0,051 >100

CMX157

0,0031 ± 0,0021 0,037 ± 0,016 >100

Actividad anti-XMRV en celulas LNCaP (ensayo de 6 dfas)

Citotoxicidad (CI50, jM)

Compuesto

CE50, |jM CE90, jM Celulas LNCaP

Disoproxil fumarato de tenofovir

0,029 ± 0,026 0,21 ± 0,15 87,4

Tenofovir

4,5 ± 3,8 17,4 ± 9,0 >100

Raltegravir

0,00054 ± 0,00057 0,0032 ± 0,0029> >100

Estos datos muestran valores de CE50 y CE90 para CMX157 son comparables o superiores a los de otros compuestos activos, tales como AZT, disoproxil fumarato de tenofovir, tenofovir y raltegravir. La citotoxicidad de CMX157 en las celulas LNCaP tambien se sometio a ensayo.

5

Lo anterior es ilustrativo de la presente invencion y no ha de interpretarse como limitante de la misma. La invencion se define por las siguientes reivindicaciones.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que tiene la estructura:

   5

   imagen1

   en la que M+ es K+.
2. 2. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto que tiene la estructura:

   10

   imagen2

   en la que M+ es K+.

   15 3. Un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad vmca, en el que el compuesto tiene la estructura:

   imagen3

   en la que M+ es K+.

   20
3. 4. Una composicion farmaceutica para su uso en el tratamiento de una enfermedad vmca que comprende un compuesto que tiene la estructura:

   imagen4

   en la que M+ es K+.
4. 5. El compuesto o composicion farmaceutica o compuesto o composicion farmaceutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en los que el compuesto es anhidro o esta en forma de solvato.

   5
5. 6. El compuesto o composicion farmaceutica o compuesto o composicion farmaceutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en los que el compuesto esta en forma cristalina.
6. 7. El compuesto o composicion farmaceutica o compuesto o composicion farmaceutica para el uso de una 10 cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en los que el compuesto tiene una pureza del 98,2 % despues de haber sido

   mantenido a 40 °C y una humedad del 75 % durante 2 semanas.
7. 8. El compuesto o composicion farmaceutica o compuesto o composicion farmaceutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en los que el compuesto tiene una pureza del 99,4 % despues de haber sido

   15 mantenido a 40 °C y una humedad del 75 % durante 4 semanas.
8. 9. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 2 o la composicion farmaceutica para el uso de la reivindicacion 4 en forma de un comprimido administrado por via oral.