ES2643216T3

ES2643216T3 - Polipéptidos con actividad de degradación de xantano y polinucleótidos que codifican la misma

Info

Publication number: ES2643216T3
Application number: ES13722377.2T
Authority: ES
Inventors: Dorotea Raventos Segura; Peter Fischer HALIN; Anders Viksoe-Nielsen; Lars Anderson; Martin Simon Borchert; Leigh Murphy; Astrid Boisen; Lorena G. PALMÉN; Kenneth Jensen; Carsten Sjoeholm; Tine Hoff; Charlotte Blom
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2012-05-07
Filing date: 2013-05-07
Publication date: 2017-11-21
Anticipated expiration: 2033-05-07
Also published as: CN117904080A; US9458441B2; DK2847308T3; CN104271723B; US20170073656A1; CN113201519A; WO2013167581A1; CN104271723A; EP2847308A1; AR090971A1; US20150132824A1; EP2847308B1; US9988616B2

Description

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Polipeptidos con actividad de degradacion de xantano y polinucleotidos que codifican la misma Referencia a un listado de secuencias

[0001] Esta aplicacion contiene un listado de secuencias en forma legible por ordenador.

Antecedentes de la invencion

Campo de la invencion

[0002] La presente invencion se refiere a polipeptidos con actividad de degradacion de xantano, en particular, actividad de xantano liasa y para GH9 endoglucanasas con actividad en goma xantana pretratada con xantano liasa, dominios catalfticos y polinucleotidos que codifican los polipeptidos y dominios catalfticos.

La invencion tambien se refiere a constructos de acidos nucleicos, vectores y celulas huesped que comprenden los polinucleotidos al igual que metodos de produccion y utilizacion de los polipeptidos y dominios catalfticos.

La invencion se refiere ademas a composiciones que comprenden GH9 endoglucanasas y/o xantano liasas para usar en detergentes y en las industrias de perforacion y aceite.

Descripcion de las tecnicas relacionadas

[0003] La goma xantana es un polisacarido derivado del revestimiento bacteriano de Xanthomonas campestris.

Se produce por la fermentacion de glucosa, sacarosa o lactosa por la bacteria Xanthomonas campestris.

Despues de un periodo de fermentacion, el polisacarido se precipita de un medio de crecimiento con alcohol isopropflico, se seca y se muele hasta conseguir un polvo fino.

Mas tarde, se anade a un medio lfquido para formar la goma.

[0004] La goma xantana es un polisacarido natural que consiste en azucares diferentes que se conectan por diferentes enlaces, tales como enlaces de p-D-mannosil-p-D-1,4-glucuronosilo y enlaces de p-D-glucosil-p-D-1,4- glucosilo.

La goma xantana es al menos parcialmente soluble en agua y forma soluciones altamente viscosas o geles.

[0005] La degradacion enzimatica completa de goma xantana requiere diferentes actividades enzimaticas incluyendo actividad de xantano liasa y actividad endo-p-1,4-glucanasa.

Las xantano liasas son enzimas que disocian el enlace de p-D-mannosil-p-D-1,4-glucuronosilo de xantano y se han descrito en la bibliograffa.

Las enzimas de degradacion de xantano que se conocen en la tecnica por ejemplo tienen dos xantano liasas aisladas de Paenibacillus alginolyticus XL-1 (por ejemplo Ruijssenaars et al. (1999) 'A pyruvated mannose- specific xanthan lyase involved in xanthan degradation by Paenibacillus alginolyticus XL-1', Appl.Environ.Microbiol. 65(6): 2446-2452 y Ruijssenaars et al. (2000), 'A novel gene encoding xanthan lyase of Paenibacillus alginolyticus strain XL-1, Appl.Environ.Microbiol. 66(9): 3945-3950).

[0006] Las glicosido hidrolasas son enzimas que catalizan la hidrolisis del enlace de glicosil para liberar azucares menores.

Hay sobre 100 clases de glicosido hidrolasas que han sido clasificadas, ver Henrissat et al. (1991) 'A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acid sequence similarities', J.Biochem. 280: 309-316 y el sitio web de Uniprot en
www.cazi.org.

La familia glicosido hidrolasa 9 (GH9) consiste en sobre 70 enzimas diferentes que son en su mayorfa endoglucanasas (EC 3.2.1.4), celobiohidrolasas (EC 3.2.1.91), p-glucosidasas (EC 3.2.1.21) y exo-p- glucosaminidasa (Ec 3.2.1.165).

Un GH9 de Microbacterium testaceum StLB037 con 84.5% de identidad de secucuencia con la SEQ ID NO: 12,79.1% identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 10 y 74.0% identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 14 se ha publicado por T.Morohoshi et al, (2011) J. Bacteriol. 193(8), 2072-2073.

[0007] En los ultimos anos, la goma xantana se ha usado como un ingrediente en muchos productos de consumo que incluyen alimentos (por ejemplo, como agente espesante en preparaciones para ensaladas y productos lacteos) y cosmeticos (por ejemplo como estabilizador y espesante en la pasta dental y maquillaje para prevenir ingredientes de la separacion) y cosmeticos (tales como cremas solares).

Se ha descubierto el uso de otra goma xantana en la industria de aceite al igual que un aditivo para regular la viscosidad de los fluidos de perforacion etc. El uso general de la goma xantana ha llevado a un deseo de degradar soluciones o geles de goma xantana que permiten asf la eliminacion mas facil de los subproductos.

Se ha sugerido anadir una xantano liasa a una composicion detergente para eliminar la goma xantana que contiene manchas, por ejemplo en la EP0896998A, pero esta publicacion no contiene cualquier dato experimental que demuestre cualquier efecto de la misma.

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[0008] La invencion proporciona enzimas nuevas y mejoradas para la degradacion de goma xantana y el uso de tales enzimas para fines de limpieza, como la eliminacion de manchas de goma xantana e industrias de perforacion y de aceite.

Resumen de la invencion

[0009] La invencion se fija fuera en las reivindicaciones anexas.

Por lo tanto,lLos parrafos de la descripcion que no se encuentren dentro del campo de dichas reivindicaciones se proporcionan para uso ilustrativo.

En un aspecto la invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa, seleccionada del grupo que consiste en:

(a) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos

91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 2;

(b) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 10;

(c) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 12;

(d) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 14;

(e) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% d e identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 48;

(f) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 52;

(g) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 56;

(h) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 82;

(i) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 86;

(j) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 90;

(k) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 94;

(l) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 98;

(m) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 102;

(n) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos

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91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 130;

(o) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 134;

(p) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con el polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 138;

(q) un polipeptido codificado por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con:

(i) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1;

(ii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9;

(iii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 11;

(iv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 13;

(v) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47;

(vi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51;

(VII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55;

(VIII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 81;

(ix) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85;

(x) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89;

(xi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93;

(XII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97;

(XIII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 101;

(xiv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129;

(xv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 133;

(xvi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137; o

(xvii) el complemento en toda su longitud del mismo de (i); (ii), (iii); (iv), (v); (vi), (VII); (VIII), (ix); (x), (xi); (XII), (XIII); (xiv), (xv), o (xvi);

(r) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos

89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 1;

(s) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 9;

(t) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 11;

(u) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 13;

(v) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 47;

(w) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 51;

(x) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 55;

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(y) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 81;

(z) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85;

(aa) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89;

(ab) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93;

(ac) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97;

(ad) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 101;

(ae) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129;

(af) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 133;

(ag) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137;

(ah) una variante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 134 o SEQ ID NO: 138 que comprende una sustitucion, delecion, y/o insercion en una o mas posiciones (por ejemplo diferentes); y

(ai) un fragmento del polipeptido de (a); (b), (c); (d), (e); (f), (g); (h), (i); (j), (k); (l), (m); (n), (o); (p), (q); (r), (s);

(t) , (u); (v), (w); (x), (y); (z), (aa); (ab), (ac); (ad), (ae); (af), (ag) o (ah) que tiene actividad en la Goma xantana pretratada con xantano liasa, actividad de degradacion de xantano y/o actividad endo- aislada p-1,4- glucanasa.

[0010] En otro aspecto, la invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa seleccionada del grupo que consiste en:

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46;

(c) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos

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91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126;

(k) un polipeptido codificado por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con:

(i) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3;

(ii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 45;

(iii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 59;

(iv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 63;

(v) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 105;

(vi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 109;

(vii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 113;

(viii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 117;

(ix) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 121;

(x) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 125; o

(xi) el complemento en toda su longitud del mismo de (i); (ii), (iii); (iv), (v); (vi), (VII); (VIII), (ix) o (x);

(l) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3;

(m) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 45;

(n) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 59;

(o) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 63;

(p) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos

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(q) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 109;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 113;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 117;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 121;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 125;

(v) una variante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122 o SEQ ID NO: 126 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas posiciones (por ejemplo varias); y

(w) un fragmento del polipeptido de (a); (b), (c); (d), (e); (f), (g); (h), (i); (j), (k); (l), (m); (n), (o); (p), (q); (r), (s); (t), (u) o (v) que tiene actividad de xantano liasa.

[0011] En otro aspecto, la invencion se refiere a una composicion que incluye una endoglucanasa aislada GH9 con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa, segun la invencion.

En otro aspecto, la composicion comprende ademas un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa segun la invencion.

La composicion de la invencion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes o una composicion para la degradacion de goma xantana.

[0012] Se ha descubierto sorprendentemente que la composicion que comprende una xantano liasa y una GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa es significativamente mas eficaz en la degradacion de goma xantana de lo que se habrfa previsto basada en la actividad de las enzimas individuales.

[0013] La presente invencion tambien se refiere a polinucleotidos aislados que codifican los polipeptidos de la presente invencion; constructos de acidos nucleicos; vectores de expresion recombinantes; celulas huesped recombinantes que comprenden los polinucleotidos; y metodos de la produccion de los polipeptidos.

[0014] La presente invencion se refiere ademas al uso de la composicion de la invencion para la degradacion de goma xantana, para el lavado o limpieza de tejidos y/o superficies duras, tal como lavado de platos, donde la composicion tiene un beneficio de detergencia enzimatica o para controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion.

La invencion tambien se refiere a metodos de la degradacion de goma xantana, donde la goma xantana esta sobre la superficie de una superficie dura o textil, donde la goma xantana se usa en la fracturacion de una formacion subterranea perpetrada por una perforacion o donde la goma xantana es un componente en torta filtrante de perforacion.

Resumen del listado de secuencias

[0015]

SEQ ID NO: 1 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp NN062047.

SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 1.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

SEQ ID NO: 3 es la secuencia de ADN truncada de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN018054.

SEQ ID NO: 4 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 3.

SEQ ID NO: 5 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 1 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 6 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 5.

SEQ ID NO: 7 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 3 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 8 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 7.

SEQ ID NO: 9 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Microbacterium sp NN062149.

SEQ ID NO: 10 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 9.

SEQ ID NO: 11 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Microbacterium sp NN062148.

SEQ ID NO: 12 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 11.

SEQ ID NO: 13 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Microbacterium sp NN062045.

SEQ ID NO: 14 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 13.

SEQ ID NO: 15 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 9 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 16 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 15.

SEQ ID NO: 17 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 11 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 18 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 17.

SEQ ID NO: 19 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 13 operativamente enlazada con una etiqueta His.

20 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 19.

21 es cebador D88F.

22 es cebador D89R.

23 es cebador D124F.

24 es cebador D125R.

25 es cebador D126F.

26 es cebador D127R.

27 es cebador D128F.

28 es cebador D129R.

29 es la secuencia de ADN del peptido senal de Savinasa.

30 es la etiqueta His (llamada tambien etiqueta polihistidina).

31 es cebador D117F.

32 es cebador D118R.

33 es cebador D158F.

34 es cebador D159R.

35 es cebador D168F.

36 es cebador D169R.

37 es cebador D170F.

38 es cebador D170R.

39 es cebador D171F.

40 es cebador D172R. es cebador D160F.

42 es cebador D161R.

43 es cebador F-C3AQX.

44 es cebador R-C3AQX.

es la secuencia de ADN de longitud completa de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN018054.

SEQ ID NO: 46 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 45.

SEQ ID NO: 47 es la secuencia de ADN de la truncada GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp NN062047.

SEQ ID NO: 48 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 47.

SEQ ID NO: 49 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 47 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 50 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 49.

SEQ ID NO: 51 es la secuencia de ADN de la endoglucanasa truncada GH9 como aislada de Paenibacillus sp NN062047.

SEQ ID NO: 52 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 51.

SEQ ID NO: 53 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 51 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 54 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 53.

SEQ: ID NO o CM es

SEQ: ID NO : 21 es

SEQ: ID NO : 22 es

SEQ: ID NO : 23 es

SEQ: ID NO : 24 es

SEQ: ID NO : 25 es

SEQ: ID NO : 26 es

SEQ: ID NO : 27 es

SEQ: ID NO : 28 es

SEQ: ID NO : 29 es

SEQ: ID NO : 30 es

SEQ: ID NO : 31 es

SEQ: ID NO : 32 es

SEQ: ID NO : 33 es

SEQ: ID NO : 34 es

SEQ: ID NO : 35 es

SEQ: ID NO : 36 es

SEQ: ID NO : 37 es

SEQ: ID NO : 38 es

SEQ: ID NO : 39 es

SEQ: ID NO : 40 es

SEQ: ID NO : 41 es

SEQ: ID NO : 42 es

SEQ: ID NO : 43 es

SEQ: ID NO : 44 es

SEQ: ID p cn

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

SEQ ID NO: 55 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp NN062253.

SEQ ID NO: 56 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 55

SEQ ID NO: 57 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 55 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 58 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 57.

SEQ ID NO: 59 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062250. SEQ ID NO: 60 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 59.

SEQ ID NO: 61 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 59 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 62 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 61.

SEQ ID NO: 63 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062047. SEQ ID NO: 64 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 63.

SEQ ID NO: 65 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 63 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 66 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 65.

SEQ ID NO: 67 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 45 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 68 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 67.

SEQ ID NO: 69 es cebador D244F.

SEQ ID NO: 70 es cebador D245R.

SEQ ID NO: 71 es cebador D242F.

SEQ ID NO: 72 es cebador D243R.

SEQ ID NO: 73 es cebador D271 F.

SEQ ID NO: 74 es cebador D272R.

SEQ ID NO: 75 es cebador D289F.

SEQ ID NO: 76 es cebador D290R.

SEQ ID NO: 77 es cebador D293F.

SEQ ID NO: 78 es cebador D294R.

SEQ ID NO: 79 es cebador D332F.

SEQ ID NO: 80 es cebador D333R.

SEQ ID NO: 81 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp NN062046.

SEQ ID NO: 82 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 81.

SEQ ID NO: 83 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 81 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 84 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 83.

SEQ ID NO: 85 es la secuencia de ADN de la endoglucanasa truncada GH9 como aislada de Paenibacillus sp NN018054.

SEQ ID NO: 86 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 85.

SEQ ID NO: 87 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 85.

SEQ ID NO: 88 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 87.

SEQ ID NO: 89 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp

NN062408.

SEQ ID NO: 90 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 89.

SEQ ID NO: 91 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 89.

SEQ ID NO: 92 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 91.

SEQ ID NO: 93 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp

NN018054.

SEQ ID NO: 94 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 93.

SEQ ID NO: 95 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 93 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 96 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 95.

SEQ ID NO: 97 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Paenibacillus sp

NN062332.

SEQ ID NO: 98 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 97.

SEQ ID NO: 99 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 97 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 100 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 99.

SEQ ID NO: 101 es la secuencia de ADN de la GH9 endoglucanasa como aislada de Microbacterium

testaceum.

SEQ ID NO: 102 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 101.

SEQ ID NO: 103 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 101 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 104 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 103.

SEQ ID NO: 105 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062147.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

SEQ ID NO: 106 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 105.

SEQ ID NO: 107 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 105 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 108 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 107.

SEQ ID NO: 109 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062193.

SEQ ID NO: 110 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 109.

SEQ ID NO: 111 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 109 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 112 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 111.

SEQ ID NO: 113 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062408.

SEQ ID NO: 114 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 113.

SEQ ID NO: 115 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 113 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 116 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 115.

SEQ ID NO: 117 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062332.

SEQ ID NO: 118 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 117.

SEQ ID NO: 119 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 117 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 120 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 119.

SEQ ID NO: 121 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062046.

SEQ ID NO: 122 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 121.

SEQ ID NO: 123 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 121 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 124 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 123.

SEQ ID NO: 125 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062253.

SEQ ID NO: 126 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 125.

SEQ ID NO: 127 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 125 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 128 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 127.

SEQ ID NO: 129 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Microbacterium sp NN062175.

SEQ ID NO: 130 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 129.

SEQ ID NO: 131 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 129 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 132 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 131.

SEQ ID NO: 133 es la secuencia de ADN de la xantano liasa como aislada de Paenibacillus sp NN062193. SEQ ID NO: 134 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 133.

SEQ ID NO: 135 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante de SEQ ID NO: 133 operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO: 136 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 135.

SEQ ID NO: 137 es la secuencia de ADN de la xantano liasa truncada como aislada de Paenibacillus sp NN062193.

SEQ ID NO: 138 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 137.

SEQ ID NO: 139 es la secuencia de ADN de la secuencia expresada recombinante operativamente enlazada con una etiqueta His.

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

140 es la secuencia de aminoacidos como deducida de SEQ ID NO: 139.

141 es cebador F-C597B.

142 es cebador R-C597B.

143 es cebador F-C5B9G.

144 es cebador R-C5B9G.

145 es cebador F-C59T2.

146 es cebador R-C59T2.

147 es cebador F-C4AM9.

148 es cebador R-C4AM9.

149 es cebador F-C4AKF.

150 es cebador R-C4AKF.

151 es cebador F-C59TM.

152 es cebador R-C59TM.

153 es cebador F-C59SY.

154 es cebador R-C59SY.

155 es cebador F-C3AX4.

156 es cebador R-C3AX4.

157 es cebador F-C4AKA.

158 es cebador R-C4AKA.

159 es cebador F-C3BXT.

160 es cebador R-C3BXT.

161 es cebador F-C597E.

de SEQ

ID

NO:

137

SEQ ID NO: 162 es cebador R-C597E. SEQ ID NO: 163 es cebador F-C597F. SEQ ID NO: 164 es cebador R-C597F. SEQ ID NO: 165 es cebador F-C3FCE. 5 SEQ ID NO: 166 es cebador R-C3FCE.

SEQ ID NO: 167 es cebador D14KMG. SEQ ID NO: 168 es cebador D14KMH. SEQ ID NO: 169 es cebador D14N38. SEQ ID NO: 170 es cebador D14N39.

10

MATRIZ DE IDENTIDAD DE SECUENCIAS DE ENDOGLUCANASA GH9

: SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 48 SEQ ID NO: 52 SEQ ID NO: 56 SEQ ID NO: 82 SEQ ID NO: 86 SEQ ID NO: 90 SEQ ID NO: 94 SEQ ID NO: 98 SEQ ID NO: 102 SEQ ID NO: 130 SEQ ID NO: 134 SEQ ID NO: 138

SEQ 2: 100 51.3 49.9 50.0 62.7 64.7 81.2 51.6 55.5 49.7 53.9 53.4 48.5 50.7 52.9 56.2

SEQ 10: 51.3 100 78.7 78.3 47.9 47.9 51.7 54.1 52.1 52.0 52.1 52.8 79.3 78.9 52.6 52.6

SEQ 12: 49.9 78.7 100 74.3 48.4 48.4 50.8 53.6 52.6 51.6 52.6 53.4 84.6 99.7 53.4 53.4

SEQ 14: 50.0 78.3 74.3 100 48.4 48.4 50.8 51.3 52.3 53.2 52.3 52.8 74.2 74.4 53.5 53.5

SEQ 48: 62.7 47.9 48.4 48.4 100 100 62.0 54.4 56.1 49.4 54.1 54.5 48.5 48.4 53.9 56.3

SEQ 52: 64.7 47.9 48.4 48.4 100 100 64.8 55.4 56.1 51.9 56.1 56.7 48.5 48.4 56.5 56.5

SEQ 56: 81.2 51.7 50.8 50.8 62.0 64.8 100 53.2 56.1 52.3 54.5 54.0 50.0 51.0 53.0 56.3

SEQ 82: 51.6 54.1 53.6 51.3 54.4 55.4 53.2 100 70.5 63.5 69.8 69.9 53.7 53.9 66.4 66.6

SEQ 86: 55.5 52.1 52.6 52.3 56.1 56.1 56.1 70.5 100 66.8 100 73.1 51.9 52.8 68.4 68.2

SEQ 90: 49.7 52.0 51.6 53.2 49.4 51.9 52.3 63.5 66.8 100 67.7 68.0 52.0 52.1 64.3 64.9

SEQ 94: 53.9 52.1 52.6 52.3 54.1 56.1 54.5 69.8 100 67.7 100 72.8 51.9 52.8 68.2 68.2

SEQ 98: 53.4 52.8 53.4 52.8 54.5 56.7 54.0 69.9 73.1 68.0 72.8 100 54.2 53.5 67.7 67.9

SEQ 102: 48.5 79.3 84.6 74.2 48.5 48.5 50.0 53.7 51.9 52.0 51.9 54.2 100 84.7 52.2 52.2

SEQ 130: 50.7 78.9 99.7 74.4 48.4 48.4 51.0 53.9 52.8 52.1 52.8 53.5 84.7 100 53.5 53.5

SEQ 134: 52.9 52.6 53.4 53.5 53.9 56.5 53.0 66.4 68.4 64.3 68.2 67.7 52.2 53.5 100 100

SEQ 138: 56.2 52.6 53.4 53.5 56.3 56.5 56.3 66.6 68.2 64.9 68.2 67.9 52.2 53.5 100 100

MATRIZ DE IDENTIDAD DE SECUENCIAS DE XANTANO LIASA

: SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 46 SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 64 SEQ ID NO: 106 SEQ ID NO: 110 SEQ ID NO: 114 SEQ ID NO: 118 SEQ ID NO: 122 SEQ ID NO: 126

SEQ ID NO: 4: 100 100 50.8 66.1 52.1 53.3 50.3 53 55.8 66.2

SEQ ID NO: 46: 100 100 48.4 62.0 49.4 50.8 47.9 50.3 49.1 64.9

SEQ ID NO: 60: 50.8 48.4 100 51.7 64.5 68.9 63.6 68.9 46.8 46.5

SEQ ID NO: 64: 66.1 62.0 51.7 100 52.9 52.1 51.8 53.5 52.2 81.1

SEQ ID NO: 106: 52.1 49.4 64.5 52.9 100 64.3 60.6 63.8 47.6 48.0

SEQ ID NO: 110: 53.3 50.8 68.9 52.1 64.3 100 64.2 67.3 47.2 49.5

SEQ ID NO: 114: 50.3 47.9 63.6 51.8 60.6 64.2 100 65.4 45.6 48.6

SEQ ID NO: 118: 53 50.3 68.9 53.5 63.8 67.3 65.4 100 48.0 49.6

SEQ ID NO: 122: 55.8 49.1 46.8 52.2 47.6 47.2 45.6 48.0 100 55.9

SEQ ID NO: 126: 66.2 64.9 46.5 81.1 48.0 49.5 48.6 49.6 55.9 100

Breve descripcion de la figura

5 [0016] La Figura 1 muestra un mapa de plasmido del vector lineal con inserto de gen para SEQ ID NO: 87.

Definiciones

[0017] Variante alelica: el termino "variante alelica" significa cualquiera de dos o mas formas alternativas de un 10 gen que ocupa el mismo locus cromosomico.

La variacion alelica surge naturalmente a traves de la mutacion y puede resultar en el polimorfismo dentro de poblaciones.

Las mutaciones de gen pueden ser silenciosas (ningun cambio en el polipeptido codificado) o pueden codificar polipeptidos con secuencias de aminoacidos alteradas.

15 Una variante alelica de un polipeptido es un polipeptido codificado por una variante alelica de un gen.

[0018] Dominio catalftico: el termino "dominio catalftico" significa la region de una enzima que contiene la maquinaria catalftica de la enzima.

20 [0019] ADNc: el termino "ADNc" significa una molecula de ADN que se puede preparar por transcripcion inversa

a partir de una molecula de ARNm madura empalmada obtenida a partir de una celula eucariotica o procariotica. El ADNc carece de secuencias de intrones que pueden estar presentes en el ADN genomico correspondiente.

La transcripcion de ARN inicial primaria es un precursor para ARNm que se procesa a traves de una serie de pasos, incluyendo empalme, antes de aparecer como ARNm empalmado maduro.

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[0020] Limpieza o aplicacion de detergente: el termino "limpieza o aplicacion de detergente" significa la aplicacion de la endoglucanasa de la solicitud en cualquier composicion con motivo de limpieza o lavado, a mano, maquina o automatizada, una superficie dura o un textil.

[0021] Limpieza o composicion detergente: el termino "limpieza o composicion detergente" se refiere a composiciones que encuentran el uso en la eliminacion de compuestos no deseados de artfculos que se limpian, tales como tejidos, platos y superficies duras.

Los terminos abarcan cualquier material/compuesto seleccionado para el tipo particular de limpieza composicion deseada y la forma del producto (por ejemplo, lfquido, gel, polvo, granulado, pasta o composiciones de pulverizacion) e incluyen, pero no se limitan a composiciones detergentes (por ejemplo, detergentes de la ropa lfquidos y/o solidos y detergentes de tejido fino; formulaciones de limpieza de superficie dura, tal como para encimeras y ventanas de vidrio, madera, ceramica y metal; limpiadores de alfombra; limpiadores de horno; refrescantes de tejidos; suavizantes de tejidos; y pre-quitamanchas y textil, al igual que detergentes lavavajillas). Ademas de la endoglucanasa, la formulacion de detergente puede contener una o mas enzimas adicionales (tales como proteasas, amilasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectin liasas, xantanasas, peroxidaes, haloperoxigenasas, catalasas y mananasas, o cualquier mezcla de las mismas), y/o componentes tales como surfactantes, constructores, queladores o agentes quelantes, sistema blanqueador o componentes de blanqueador, polfmeros, acondicionadores de tejidos, potenciadores de espuma, supresores de espuma, colorantes, perfume, inhibidores de manchas, blanqueadores opticos, bactericidas, fungicidas, agentes de suspension de tierra, agentes anticorrosion, inhibidores enzimaticos o estabilizadores, activadores enzimaticos, transferasa(s), enzimas hidrolfticas, reductasas de oxido, agentes de azulado y colorantes fluorescentes, antioxidantes y solubilizantes.

[0022] Secuencia codificante: el termino "secuencia codificante" significa un polinucleotido, que especifica directamente la secuencia de aminoacidos de un polipeptido.

Los lfmites de la secuencia codificante se determinan generalmente por un marco de lectura abierto, que empieza con un codon de inicio tal como ATG, GTG o TTG y extremidades con un codon de terminacion tal como, TAA, TAG o TGA.

La secuencia codificante puede ser un ADN genomico, ADNc, ADN sintetico o una combinacion de los mismos.

[0023] Clarificacion de color: durante el lavado y desgaste se pueden acumular fibras sueltas o rotas en la superficie de los tejidos.

Una consecuencia puede ser que los colores del tejido parezcan menos brillantes o menos intensos debido a las contaminaciones de superficie.

La eliminacion de las fibras sueltas o rotas del textil parcialmente devolvera los colores originales y apariencias del textil.

Mediante el termino "clarificacion de color", como se utiliza en este caso, se entiende la restauracion parcial de los colores iniciales de textil.

[0024] Secuencias de control: el termino "secuencias de control" significa secuencias de acido nucleico necesarias para la expresion de un polinucleotido que codifica un polipeptido maduro de la presente invencion. Cada secuencia de control puede ser nativa (es decir, del mismo gen) o extranjera (es decir, a partir de un gen diferente) al polinucleotido que codifica el polipeptido o nativo o extranjero entre si.

Tales secuencias de control incluyen, pero de forma no limitativa, un lfder, secuencia de poliadenilacion, secuencia de propeptido, promotor, secuencia de peptido serial y terminador de transcripcion.

Como mfnimo, las secuencias de control incluyen un promotor y senales de parada transcripcional y traslacional. Las secuencias de control se pueden proporcionar con enlaces con motivo de la introduccion de sitios de restriccion especfficos que facilitan el ligamiento de las secuencias de control con la region de codificacion del polinucleotido que codifica un polipeptido.

[0025] Degradacion de goma xantana: el termino "degradacion de goma xantana" se define aquf como la despolimerizacion, degredacion o descomposicion de goma xantana en componentes menores.

La degredacion de goma xantana puede bien ser la eliminacion de uno o mas sacaridos de cadena lateral, el corte del esqueleto de goma xantana en componentes menores o la eliminacion de uno o mas sacaridos de cadena lateral y el corte del esqueleto de goma xantana en componentes menores.

La degredacion de goma xantana preferiblemente se puede medir utilizando el metodo de reduccion de viscosidad como se describe en el ejemplo 6.

Alternativamente, la degredacion de goma xantana se puede medir utilizando el metodo de extremidades de reduccion como se describe en el ejemplo 6 o el ensayo colorimetrico como se describe en ejemplos 25 y 26.

[0026] Valor de remision delta (ARem): los terminos "remision delta" o "valor de remision delta" se definen aquf como el resultado de una reflectancia o medicion de remision a 460 nm.

La muestra se mide con una muestra de similar color como antecedentes, preferiblemente una muestra a partir de un lavado de repeticion.

Una muestra que representa cada tipo de muestra se mide antes del lavado.

La remision delta es el valor de remision de la muestra lavada menos el valor de remision de la muestra sin lavar.

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[0027] El valor de rendimiento enzimatico delta (valor enzimatico ARem): el termino "valor de remision enzimatico delta" se define aqrn como el resultado de una reflectancia o medicion de remision a 460 nm.

La muestra se mide con una muestra de color similar como antecedentes, preferiblemente una muestra a partir de un lavado de repeticion.

Una muestra que representa cada tipo de muestra se mide antes del lavado.

La remision delta es el valor de remision de la muestra lavada en el detergente con una enzima presente menos el valor de remision de una muestra similar lavada en un detergente sin enzima presente.

[0028] Valor de intensidad enzimatica delta (Aint valor enzimatico): los terminos "intensidad enzimatica delta" o "valor de intensidad enzimatica delta" se definen aqrn como el resultado de un valor de intensidad enzimatica tal y como se define en el ensayo AMSA.

La intensidad delta es el valor de intensidad del area de muestra lavada en el detergente con una enzima presente menos el valor de intensidad del area de muestra lavada en detergente sin la enzima presente.

[0029] Componente detergente: el termino "componente detergente" se define aqrn para referirse a los tipos de productos qmmicos que se pueden usar en composiciones detergentes.

Ejemplos de componentes detergentes son surfactantes, hidrotropos, constructores, co-constructores, queladores o agentes quelantes, sistema blanqueante o componentes de blanqueador, polfmeros, agentes de matizado de tejido, acondicionadores de tejido, potenciadores de espuma, supresores de espuma, dispersantes, inhibidores de transferencia de tinte, agentes de blanqueamiento fluorescentes, perfume, blanqueadores opticos, bactericidas, fungicidas, agentes de suspension de tierra, polfmeros de liberacion de tierra, agentes de antireposicion, inhibidores enzimaticos o estabilizadores, activadores enzimaticos, antioxidantes y solubilizantes. La composicion detergente puede comprender de uno o mas de cualquier tipo de componente de detergente.

[0030] Composicion detergente: el termino "composicion detergente" se refiere a composiciones que encuentran su uso en la eliminacion de compuestos no deseados de artfculos que se limpian, tales como tejidos, platos y superficies duras.

La composicion detergente se puede utilizar por ejemplo para limpiar tejidos, platos y superficies duras tanto para limpieza de hogar como limpieza industrial.

Los terminos abarcan cualquier material/compuesto seleccionado para el tipo particular de composicion de limpieza deseada y la forma del producto (por ejemplo, lfquido, gel, polvo, granulado, pasta o composiciones de pulverizacion) e incluye, pero no esta limitado a composiciones detergentes (por ejemplo, detergentes de ropa ifquidos y/o solidos y detergentes de tejido fino; formulaciones de limpieza de superficie dura, tal como para ventanas metalicas y de vidrio, madera, ceramica y metal; limpiadores de alfombra; limpiadores de horno; refrescantes tejidos; suavizantes tejidos; y pre-quitamanchas de ropa y textil, al igual que detergentes de lavavajillas).

Ademas de conener una GH9 endoglucanasa de la invencion y/o xantano liasa de la invencion, la formulacion detergente puede contener una o mas enzimas adicionales (tales como proteasas, amilasas, lipasas, cutinasas, celulasas, endoglucanasas, xiloglucanasas, pectinasas, pectin liasas, xantanasas, peroxidaes, haloperoxigenasas, catalasas y mananasas, o cualquier mezcla de las mismas), y/o componentes tales como surfactantes, constructores, queladores o agentes quelantes, sistema blanqueador o componentes de blanqueador, polfmeros, acondicionadores tejidos, potenciadores de espuma, supresores de espuma, colorantes, perfume, inhibidores de manchas, blanqueadores opticos, bactericidas, fungicidas, agentes de suspension de tierra, agentes anticorrosion, inhibidores enzimaticos o estabilizadores, activadores enzimaticos, transferasa(s), enzimas hidrolfticas, oxido, reductasas, agentes de azulado y colorantes fluorescentes, antioxidantes y solubilizantes.

[0031] Lavavajillas: el termino "lavavajillas" se refiere a todos los tipos de lavados de vajillas, por ejemplo a mano o lavado de vajilla automatico.

Lavado de vajilla incluye, pero no esta limitado a la limpieza de todos los tipos de artfculos de loza tales como platos, tazas, cristales, cuencos, todos los tipos de cubertena tales como cucharas, cuchillos, tenedores y utensilios de servir al igual que ceramica, plasticos, metales, china, vidrio y acnlicos.

[0032] Composicion de lavado de vajillas: el termino "composicion de lavado de vajillas" se refiere a todos los tipos de composiciones para limpiar superficies duras.

La presente invencion no se restringe en cualquier tipo particular de composicion de lavado de vajillas o cualquier detergente particular.

[0033] Endoglucanasa: el termino "endoglucanasa" significa una endo-1,4-(1,3,1,4)-beta-D-glucan 4- glucanohidrolasa (E.C. 3,2,1,4) que cataliza la endohidrolisis de enlaces 1,4-beta-D-glicosfdicos en la celulosa, derivados qmmicos de la celulosa (tal como carboximetilcelulosa y celulosa de hidroxietilo), liquenina, beta-1,4 enlaces en beta-1,3 glucanos mezclados tales como beta-D-glucanos de cereal, xiloglucanos, xantanos y otro material vegetal que contiene componentes celulosicos.

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Actividad de endoglucanasa se puede determinar por la medicion de reduccion en la viscosidad de sustrato o aumento en la extremidades de reduccion determinadas por la reduccion de un ensayo de azucar (Zhang et al., 2006, Biotechnology Advances 24: 452-481).

Para fines de la presente invencion, la actividad de endoglucanasa se determina usando la carboximetilo celulosa (CMC) como sustrato segun el procedimiento de Ghose, 1987, Pure and Appl.Chem. 59: 257-268, a pH 5,40°C.

[0034] Beneficio de detergencia enzimatica: el termino "beneficio de detergencia encimatica" se define aquf como el efecto ventajoso que una enzima puede anadir a un detergente en comparacion con el mismo detergente sin la enzima.

Los beneficios de detergencia importantes que se pueden proporcionar por enzimas son la eliminacion de manchas sin o con suciedad que apenas es visible despues del lavado y limpieza, prevencion o reduccion de reposicion de suciedad liberada en el proceso de lavado un efecto que tambien se denomina antireposicion, restauracion completa o parcialmente de la blancura de tejidos, que fueron originalmente blancos pero despues de un uso y lavado repetidos han obtenido una aparicion grisacea o amarillenta un efecto que tambien es denominado blanqueamiento.

Los beneficios del cuidado textil, que no estan directamente relacionados con la eliminacion de mancha catalftica o prevencion de reposicion de suciedad son importantes tambien para los beneficios de detergencia enzimatica. Los ejemplos de tales beneficios de cuidado textil son prevencion o reduccion de transferencia de tinte de un tejido a otro tejido u otra parte del mismo tejido un efecto que es tambien denominado inhibicion de transferencia de tinte o anti-perdida de contraste, eliminacion de fibras salientes o rotas a partir de una superficie de tejido para reducir las tendencias de frisado o eliminar las pfldoras ya existentes o vello un efecto que tambien es denominado anti-frisado, mejora de la blandura de tejido, clarificacion de color del tejido y eliminacion de barros particulados que se retienen en las fibras del tejido o prenda.

El blanqueo enzimatico es ademas un beneficio de detergencia enzimatica donde la actividad catalftica generalmente se utiliza para catalizar la formacion del componente de blanqueo tal como peroxido de hidrogeno u otros peroxidos.

[0035] Expresion: el termino "expresion" incluye cualquier paso implicado en la produccion de un polipeptido que incluye, pero no esta limitado a la transcripcion, modificacion postranscripcional, traduccion, modificacion postraduccional y secrecion.

[0036] Vector de expresion: el termino "vector de expresion" significa una molecula de ADN lineal o circular que comprende un polinucleotido que codifica un polipeptido y esta operativamente enlazado a secuencias de control que proveen para su expresion.

[0037] Fragmento: el termino "fragmento" significa un polipeptido o un dominio catalftico con uno o mas (por ejemplo; varios) aminoacidos ausentes del amino y/o carboxilo terminal de un polipeptido maduro o dominio; donde el fragmento tiene actividad de degradacion de xantano tal como actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa o actividad de xantano liasa

[0038] Las GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa: el termino "GH9 endoglucanasas con actividad en goma xantana pretatada con xantano liasa" o una "endoglucanasa con actividad en goma xantana pretratada con xantano liasa y que pertenece a la clase GH9 de glicosil hidrolasas" se define como un polipeptido que comprende un dominio que pertenece a la GH9 clase de glicosil hidrolasas y que tiene una actividad significativa en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En un aspecto de la invencion unas GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa pueden ser un polipeptido con una secuencia seleccionada entre SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 134 y SEQ ID NO: 138.

En particular la GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa tiene una especificidad mas alta de goma xantana pretratada con xantano liasa la actividad especffica en CMC (carboximetilcelulosa) que es conocida como un sustrato excelente para endoglucanasas.

La actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa se puede determinar como descrita en el ejemplo 8 de abajo.

[0039] Limpieza de superficie dura: el termino "limpieza de superficie dura" se define aquf como limpieza de superficies duras donde las superficies duras pueden incluir suelos, mesas, paredes, techos, etc. Al igual que superficies de objetos duros tales como coches (lavado de vehfculos) y vajillas (lavavajillas).

El lavavajillas incluye pero de forma no limitativa la limpieza de vajillas, tazas, cristales, cuencos y cuberterfa tales como cucharas, cuchillos, tenedores, utensilios de servir, ceramica, plasticos, metales, china, vidrio y acrflicos.

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[0040] Celula huesped: el termino "celula huesped" significa cualquier tipo de celula que es susceptible de transformacion, transfeccion, transduccion o similar con un constructo de acidos nucleicos o vector de expresion que comprende un polinucleotido de la presente invencion.

El termino "celula huesped" abarca cualquier descendiente de una celula madre que no es identica a la celula madre debido a mutaciones que se produzcan durante la replicacion.

[0041] El rendimiento de lavado mejorado: el termino "rendimiento de lavado mejorado" se ha definido aquf como una enzima (variante) (tambien una mezcla de enzimas, no necesariamente solo variantes pero tambien columna vertebral y en combinacion con determinada composicion de limpieza, etc.) que muestra una alteracion del rendimiento de lavado de una variante de proteasa relativa al rendimiento de lavado de la variante de proteasa progenitora por ejemplo por eliminacion de mancha aumentada.

El termino "rendimiento de lavado" incluye el rendimiento de lavado en la colada pero tambien por ejemplo en el lavavajillas.

[0042] Aislado: el termino "aislado" significa una sustancia en una forma o ambiente que no se produce en la naturaleza.

Ejemplos no limitativos de sustancias aisladas incluyen (1) cualquier sustancia que no se produzca de forma natural, (2) cualquier sustancia que incluya, pero no este limitada a cualquier enzima, variante, acido nucleico, protefna, peptido o cofactor, que sea al menos parcialmente eliminada de uno o mas o todos los constituyentes de origen natural con el cual se asocia en la naturaleza; (3) cualquier sustancia modificada por la mano de un hombre con respecto a aquella sustancia encontrada en la naturaleza; o (4) cualquier sustancia modificada mediante el aumento de la cantidad de la sustancia con respecto a otros componentes con los que se asocia naturalmente (por ejemplo, copias multiples de un gen que codifica la sustancia; uso de un promotor mas fuerte que el promotor naturalmente asociado al gen que codifica la sustancia).

Una sustancia aislada puede estar presente en una muestra de caldo de fermentacion.

[0043] Lavado: el termino "lavado" se refiere tanto a lavado de hogar como a lavado industrial y significa el proceso del tratamiento de tejidos con una solucion que contiene una limpieza o composicion detergente de la presente invencion.

El proceso de lavado puede por ejemplo efectuarse utilizando por ejemplo una una lavadora de hogar o industrial o puede realizarse a mano.

[0044] Polipeptido maduro: el termino "polipeptido maduro" significa un polipeptido en su forma final seguida de modificaciones traduccionales y cualquiera postraduccionales, tal como tratamiento N-terminal, truncamiento C- terminal, glicosilacion, fosforilacion, etc. En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1055 de SEQ ID NO: 2 basados en el programa SignalP (Nielsen et al., 1997, Protein Engineering 10: 1-6) que predice que los aminoacidos -38 a -1 de SEQ ID NO: 2 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 10 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -33 a -1 de SEQ ID NO: 10 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 12 basados en el programa SignalP que predice aminoacidos -32 a -1 de SEQ ID NO: 12 son un peptido senal.

En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 14 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -33 a -1 de SEQ ID NO: 14 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1007 de SEQ ID NO: 48 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -36 a -1 de SEQ ID NO: 48 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 915 de SEQ ID NO: 52 basado en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -36 a -1 de SEQ ID NO: 52 son un peptido senal.

En un aspecto adicional, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1056 de SEQ ID NO: 56 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -38 a -1 de SEQ ID NO: 56 son un peptido senal.

[0045] En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1371 de SEQ ID NO: 82 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 82 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1203 de SEQ ID NO: 86 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 86 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1379 de SEQ ID NO: 90 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 90 son un peptido senal.

En un aspecto adicional, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1371 de SEQ ID NO: 94 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 94 son un peptido senal.

En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1372 de SEQ ID NO: 98 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 98 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 922 de SEQ ID NO: 102 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -32 a -1 de SEQ ID NO: 102 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 130 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -36 a -1 de SEQ ID NO: 130 son un peptido senal.

En un aspecto adicional, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1373 de SEQ ID NO: 134 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 134 son un peptido senal.

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En un aspecto adicional, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1204 de SEQ ID NO: 138 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -37 a -1 de SEQ ID NO: 138 son un peptido senal.

[0046] En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 760 de SEQ ID NO: 4 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -31 a -1 de SEQ ID NO: 4 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1043 de SEQ ID NO: 46 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -31 a -1 de SEQ ID NO: 46 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 896 de SEQ ID NO: 60 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -41 a -1 de SEQ ID NO: 60 son un peptido senal.

En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1038 de SEQ ID NO: 64 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -24 a -1 de SEQ ID NO: 64 son un peptido senal.

[0047] En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 901 de SEQ ID NO: 106 basado en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -32 a -1 de SEQ ID NO: 106 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 899 de SEQ ID NO: 110 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -32 a -1 de SEQ ID NO: 110 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 897 de SEQ ID NO: 114 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -61 a -1 de SEQ ID NO: 114 son un peptido senal.

En un aspecto adicional, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 933 de SEQ ID NO: 118 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -27 a -1 de SEQ ID NO: 118 son un peptido senal.

En un aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1049 de SEQ ID NO: 122 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -42 a -1 de SEQ ID NO: 122 son un peptido senal.

En otro aspecto, el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 900 de SEQ ID NO: 126 basados en el programa SignalP que predice que los aminoacidos -33 a -1 de SEQ ID NO: 126 son un peptido senal.

[0048] Se conoce en la tecnica que una celula huesped puede producir una mezcla de dos o mas polipeptidos maduros diferentes (es decir, con un aminoacido C-terminal y/o N-terminal diferente) expresado por el mismo polinucleotido.

Tambien se conoce en la tecnica que las celulas huesped diferentes procesan polipeptidos diferentemente y asf, una celula huesped que expresa un polinucleotido puede producir un polipeptido maduro diferente (por ejemplo, con un aminoacido diferente C-terminal y/o N-terminal) en comparacion con otra celula huesped que expresa el mismo polinucleotido.

[0049] Secuencia codificante del polipeptido maduro: el termino "secuencia de codificacion del polipeptido maduro" significa un polinucleotido que codifica un polipeptido maduro con actividad enzimatica tal como actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa o actividad de xantano liasa.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 115 a 3279 de SEQ ID NO: 1 basados en el programa SignalP (Nielsen et al., 1997, supra) que predice nucleotidos 1 a 114 de SEQ ID NO: 1 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 94 a 2373 de SEQ ID NO: 3 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 93 de SEQ ID NO: 3 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 600 a 3353 de SEQ ID NO: 9 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 501 a 599 de SEQ ID NO: 9 que codifican un peptido senal.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 174 a 2921 de SEQ ID NO: 11 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 78 a 173 de SEQ ID NO: 11 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 200 a 2953 de SEQ ID NO: 13 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 101 a 199 de SEQ ID NO: 13 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 209 a 3337 de SEQ ID NO: 45 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 116 a 208 de SEQ ID NO: 45 que codifican un peptido senal.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 109 a 3129 de SEQ ID NO: 47 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 108 de SEQ ID NO: 47 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 109 a 2853 de SEQ ID NO: 51 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 108 de SEQ ID NO: 51 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 115 a 3282 de SEQ ID NO: 55 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 114 de SEQ ID NO: 55 que codifican un peptido senal.

En un aspecto adicional, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 124 a 2811 de SEQ ID NO: 59 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 123 de SEQ ID NO: 59 que codifican un peptido senal.

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En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 73 a 3195 de SEQ ID NO: 63 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 72 de SEQ ID NO: 63 que codifican un peptido senal.

[0050] En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 4224 de SEQ ID NO: 81 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 81 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 3720 de SEQ ID NO: 85 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 85 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 4248 de SEQ ID NO: 89 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 89 que codifican un peptido senal.

En un aspecto adicional, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 4224 de SEQ ID NO: 93 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 93 que codifican un peptido senal.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 4227 de SEQ ID NO: 97 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 97 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 76 a 2841 de SEQ ID NO: 101 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 75 de SEQ ID NO: 101 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 97 a 2799 de SEQ ID NO: 105 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 96 de SEQ ID NO: 105 que codifican un peptido senal.

En un aspecto adicional, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 97 a 2793 de SEQ ID NO: 109 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 96 de SEQ ID NO: 109 que codifican un peptido senal.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 184 a 2874 de SEQ ID NO: 113 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 183 de SEQ ID NO: 113 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 82 a 2880 de SEQ ID NO: 117 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 81 de SEQ ID NO: 117 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 127 a 3273 de SEQ ID NO: 121 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 126 de SEQ ID NO: 121 que codifican un peptido senal.

En un aspecto adicional, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 100 a 2799 de SEQ ID NO: 125 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 99 de SEQ ID NO: 125 que codifican un peptido senal.

En un aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 97 a 2844 de SEQ ID NO: 129 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 96 de SEQ ID NO: 129 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 4230 de SEQ ID NO: 133 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 133 que codifican un peptido senal.

En otro aspecto, la secuencia codificante del polipeptido maduro es nucleotidos 112 a 3723 de SEQ ID NO: 137 basados en el programa SignalP que predice nucleotidos 1 a 111 de SEQ ID NO: 137 que codifican un peptido senal.

[0051] Constructo de acidos nucleicos: el termino "constructo de acidos nucleicos" significa una molecula de acido nucleico, bien uni- o bicatenario, que esta aislado de un gen de origen natural o se modifica para contener segmentos de acidos nucleicos de forma que de otro modo no existirfan en la naturaleza o que son sinteticos, que comprenden una o mas secuencias de control.

[0052] Operativamente enlazado: el termino "operativamente enlazado" significa una configuracion en la que una secuencia de control se coloca en una posicion apropiada relativa a la secuencia de codificacion de un polinucleotido tal que la secuencia de control dirige la expresion de la secuencia de codificacion.

[0053] Identidad de secuencia: la relacion entre dos secuencias de aminoacido o entre dos secuencias de nucleotidos se describe por el parametro "identidad de secuencia".

Para fines de la presente invencion, la identidad de secuencia entre dos secuencias de aminoacidos se determina utilizando el algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol.Biol. 48: 443-453) como se ha implementado en el programa de paquete Needle EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferiblemente version 5.0.0 o posterior.

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Los parametros usados son penalizacion por apertura de espacio de 10, penalizacion por extension de espacio de 0.5 y la (version de EMBOSS de BLOSUM62) matriz de sustitucion EBLOSUM62.

El resultado de Needle etiquetado "identidad mas larga" (obtenido utilizando la opcion -nobrief) se usa como la identidad en porcentaje y se calcula de la siguiente manera:

(Residuos identicos X 100)/(Longitud de alineamiento - numero total de espacios en el alineamiento)

[0054] Para fines de la presente invencion, la identidad de secuencia entre dos secuencias desoxirribonucleotidas se determina utilizando el algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman y Wunsch, 1970, supra) como se ha implementado en el programa Needle del paquete EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, supra), preferiblemente version 5.0.0 o posterior.

Los parametros usados son la penalizacion por apertura de espacio de 10, penalizacion por extension de espacio de 0.5 y la (EMBOSS version de NCBI NUC4.4) matriz de sustitucion EDNAFULL.

(Deoxirribonucleotidos identicos x 100)/(longitud de alineamiento - numero total de espacios en alineamiento)

[0055] Condiciones de astringencia: las diferentes condiciones de astringencia se definen de la siguiente manera.

[0056] El termino "condiciones de astringencia muy bajas" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, la prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado y 25% de formamida, seguido de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador finalmente se lava cada tres veces durante 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 45°C.

[0057] El termino "condiciones de astringencia bajas" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, la prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado, y 25% de formamida, seguido de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador finalmente se lava tres veces por cada 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 50°C.

[0058] El termino "condiciones de astringencia medias" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado, y 35% de formamida, seguidos de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador es finalmente lavado tres veces cada una durante 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 55°C.

[0059] El termino "condiciones de astringencia medio altas" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, la prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado, y 35% de formamida, seguidos de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador finalmente se lava tres veces cada 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 60°C.

[0060] El termino "condiciones de astringencia altas" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado, y 50% de formamida, seguido de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador finalmente se lava tres veces cada 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 65°C.

[0061] El termino "condiciones de astringencia muy altas" significa para sondas de al menos 100 nucleotidos de longitud, prehibridacion e hibridacion a 42°C en 5X SSPE, 0.3% sDs, 200 microgramos/ml de ADN de esperma de salmon cortado y desnaturalizado, y 50% de formamida, seguido de procedimientos de transferencia de Southern estandar durante 12 a 24 horas.

El material portador finalmente se lava tres veces por cada 15 minutos utilizando 2X SSC, 0.2% SDS a 70°C.

[0062] Subsecuencia: el termino "subsecuencia" significa un polinucleotido con uno o mas (por ejemplo; varios) nucleotidos ausentes del 5' y/o 3' extremo de una secuencia codificante del polipeptido maduro; donde la subsecuencia codifica un fragmento con actividad enzimatica, tal como actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa o actividad de xantano liasa.

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[0063] Textil: el termino "textil" significa cualquier material textil que incluya madejas, productos intermedios de madeja, fibras, materiales no-tejidos, materiales naturales, materiales sinteticos y cualquier otro material textil, tejidos hechos de estos materiales y productos hechos de tejidos (por ejemplo, prendas y otros artfculos).

El textil o tejido puede estar en forma de punto, tejidos, telas vaqueras, no-tejidos, fieltro, hilo y tela de rizo.

El textil puede ser de celulosa basado tal como celulosicos naturales, incluyendo algodon, planta de lino/lino, yute, ramio, sisal o bonote o derivados celulosicos artificiales (por ejemplo, originados de pulpa de madera) incluyendo viscosa/rayon, ramio, fibras de acetato de celulosa (tricel), liocel o mezclas de los mismos.

El textil o tejido tambien puede ser no celulosico basado tal como poliamidas naturales que incluyen lana, camello, cachemir, mohair, conejo y seda o polimerico sintetico tal como nilon, aramida, poliester, acrflico, polipropileno y licra/elastana o mezcla de los mismos al igual que la mezcla de base de celulosa y fibras basadas no celulosicas.

Ejemplos de mezclas son las mezclas de algodon y/o rayon/viscosa con uno o mas materiales complementarios tales como lana, fibras sinteticas (por ejemplo, fibras de poliamida, fibras acrflicas, fibras de poliester, fibras de alcohol polivinflico, fibras de cloruro de polivinilio, fibras de poliuretano, fibras de poliurea, fibras de aramida) y fibras con celulosa (por ejemplo rayon/viscosa, ramio, planta de lino/lino, yute, fibras de acetato de celulosa, liocel).

El tejido puede ser ropa lavable convencional, por ejemplo ropa manchada de hogar.

Cuando se usa el termino tejido o prenda resulta destinado a incluir tambien los termino de tejidos mas amplios.

[0064] Beneficio de cuidado textil: "beneficios de cuidado textil", que no estan directamente relacionados con la eliminacion de la mancha catalftica o prevencion de reposicion de suciedad son importantes tambien para beneficios de detergencia enzimatica.

Los ejemplos de tales beneficios de cuidado textil son la prevencion o reduccion de transferencia de tinte de un textil a otro textil u otra parte del mismo textil un efecto que es tambien denominado inhibicion de transferencia de tinte o anti-perdida de contraste, eliminacion de fibras salientes o rotas a partir de una superficie textil para reducir las tendencias de frisado o eliminar las pfldoras ya existentes o vello un efecto que tambien se denomina anti-frisado, mejora de la blandura de textil, clarificacion de color del textil y eliminacion de suciedad particulada que se retiene en las fibras del textil.

El blanqueo enzimatico es otro beneficio de detergencia enzimatica donde la actividad catalftica generalmente se utiliza para catalizar la formacion del componente de blanqueo tal como peroxido de hidrogeno u otros peroxidos u otras especies de blanqueo.

[0065] Variante: el termino "variante" significa una GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y una sustitucion, insercion, y/o delecion, en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Una sustitucion significa la sustitucion del aminoacido que ocupa una posicion con un aminoacido diferente; una eliminacion significa la delecion del aminoacido que ocupa una posicion; y un medio de insercion que anade uno o mas (por ejemplo, varios) aminoacidos por ejemplo 1-5 aminoacidos adyacentes a y que inmediatamente siguen al aminoacido que ocupa una posicion.

[0066] En una forma de realizacion, el termino "variante" significa un polipeptido con actividad de xantano liasa que incluye una alteracion, es decir, una sustitucion, insercion, y/o delecion, en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Una sustitucion significa la sustitucion del aminoacido que ocupa una posicion con un aminoacido diferente; una eliminacion significa la delecion del aminoacido que ocupa una posicion; y y una insercion significa la adicion de uno o mas (por ejemplo varios) aminoacidos por ejemplo 1-5 aminoacidos adyacentes a y que inmediatamente siguen al aminoacido que ocupa una posicion.

[0067] En otra forma de realizacion, el termino "variante" significa unas GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa que incluye una alteracion, es decir, una sustitucion, insercion y/o delecion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

El termino sustitucion significa el remplazo del aminoacido que ocupa una posicion con un aminoacido diferente; una eliminacion significa la delecion del aminoacido que ocupa una posicion; y una insercion significa la adicion de uno o mas (por ejemplo varios) aminoacidos por ejemplo 1-5 aminoacidos adyacentes a y que siguen inmediatamente al aminoacido que ocupa una posicion.

[0068] Rendimiento de lavado: el termino "rendimiento de lavado" se usa como una capacidad de la enzima para eliminar suciedad presente en el objeto que se va a limpiar durante por ejemplo lavado o limpieza de superficie dura.

La mejora en el rendimiento de lavado se puede cuantificar por el calculo del valor de intensidad denominado (int) tal y como se define en el 'ensayo de tension mecanica automatica para lavanderfa (AMSA)' aquf o el valor de remision (Rem) tal y como se define aquf.

Ver tambien la prueba de rendimiento de lavado en ejemplos 9, 18, 19, 28,31 y 32 aquf.

[0069] Blancura: el termino "blancura" se define aquf como un termino amplio con significados diferentes en regiones diferentes y para clientes diferentes.

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La perdida de blancura puede por ejemplo deberse a volverse grisaceo, amarillento o a la eliminacion de abrillantadores opticos/agentes de tintado.

El color grisaceo y amarillento se puede deber a reposicion de suciedad, suciedad del cuerpo, coloracion de por ejemplo hierro e iones de cobre o transferencia de tinte.

La blancura puede incluir uno o mas elementos de la lista de abajo: efectos de colorante o tinte; eliminacion de manchas incompletas (por ejemplo, suciedad del cuerpo, sebo, etc.); redeposicion, (color grisaceo, amarillento u otras decoloraciones del objeto) (la suciedad eliminada se reasocia con otra parte del textil sucio o limpio); cambios qufmicos en el textil durante la aplicacion; y clarificacion o abrilantacion de colores.

[0070] Xantano liasa: el termino "xantano liasa" se define aquf como una enzima que corta los enlaces de p-D- mannosil-p-D-1,4-glucuronosilo en la goma xantana (EC 4,2,2,12).

Para fines de la presente invencion, la actividad de xantano liasa se determina segun el procedimiento descrito en los ejemplos.

En un aspecto, los polipeptidos de la presente invencion tienen al menos 20%, por ejemplo, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 100% de la actividad de xantano liasa del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 60 o SEQ ID NO: 64.

La actividad de xantano liasa se puede determinar como se describe en el 'ensayo de actividad de xantano liasa' como se describe en la seccion de ejemplo.

Descripcion detallada de la invencion

[0071] La invencion se fija fuera en las reivindicaciones anexas.

Los parrafos de la descripcion que no estan dentro del campo de dichas reivindicaciones por lo tanto se proporcionan para uso ilustrativo.

La presente invencion proporciona polipeptidos con actividad de xantano liasa y para GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y polinucleotidos que codifican los polipeptidos.

La GH9 clase de endoglucanasa de enzimas previamente no se ha mostrado para degradar xantano.

Ademas, la combinacion de xantano liasa y unas GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa de la invencion muestra un rendimiento de lavado mejorado sinergfstico tras el que usa xantano liasa o GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada solo con xantano liasa.

Las GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratadas con xantano liasa y polipeptidos con actividad de xantano liasa.

[0072] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%, que tiene actividad de degradacion de xantano.

[0073] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0074] En un aspecto, los polipeptidos dieferen por no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

En un aspecto preferido, los polipeptidos diferen en no mas de 10 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

[0075] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2 o una variante alelica del mismo; o es un fragmento del mismo con actividad de endoglucanasa y actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1055 de SEQ ID NO: 2.

[0076] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 de al menos 85%, por ejemplo, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%, que tiene actividad de degradacion de xantano.

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[0077] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 90%, al menos 9l%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0078] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10.

En un aspecto preferido, los polipeptidos diferen en no mas de 10 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10.

[0079] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 10 o una variante alelica del mismo; o es un fragmento del mismo con actividad de endoglucanasa y con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 10.

[0080] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 de al menos 90%, por ejemplo, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0081] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

[0082] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 12 o una variante alelica del mismo; o es un fragmento del mismo con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 12.

[0083] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0084] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

[0085] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 14 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de al misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 14.

[0086] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0087] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

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[0088] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 48 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1007 de SEQ ID NO: 48.

[0089] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0090] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

[0091] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 52 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 915 de SEQ ID NO: 52.

[0092] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0093] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

[0094] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 56 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1056 de SEQ ID NO: 56.

[0095] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0096] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

[0097] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 82 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1371 de SEQ ID NO: 82.

[0098] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia con el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0099] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

[0100] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 86 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1203 de SEQ ID NO: 86.

[0101] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia con el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0102] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

En un aspecto preferido, los polipeptidos difieren en no mas de 10 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

[0103] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 90 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1379 de SEQ ID NO: 90.

[0104] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0105] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

[0106] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 94 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1371 de SEQ ID NO: 94.

[0107] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0108] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

[0109] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 98 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1372 de SEQ ID NO: 98.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0110] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0111] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

[0112] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 130 o una variante alelica del mismo; o es un fragmento del mismo con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 130.

[0113] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0114] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49 del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

8.9 o 10 aminoacidos del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

[0115] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 134 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1373 de SEQ ID NO: 134.

[0116] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a GH9 endoglucanasas aisladas con

actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al

menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0117] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

[0118] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 138 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1204 de SEQ ID NO: 138.

[0119] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una endoglucanasa GH9 aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 137 o el complemento en toda su longitud del mismo (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor, New York).

En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 o el complemento del mismo en toda su longitud.

5

10

15

20

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30

35

40

45

50

55

60

[0120] El polinucleotido de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137 o una subsecuencia del mismo, al igual que el polipeptido de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 138, o un fragmento del mismo, se puede utilizar para disenar sondas de acido nucleico para identificar y clonar ADN que codifica GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa de cepas de diferentes generos o especies segun metodos bien conocidos en la tecnica. En particular, tales sondas se pueden usar para la hibridacion con el ADN genomico o ADNc de una celula de interes, seguida de procedimientos de transferencia de Southern estandar, para identificar y aislar el gen correspondiente en estos.

Tales sondas pueden ser considerablemente mas cortas que la secuencia entera, pero deberfan ser al menos 15, por ejemplo, al menos 25, al menos 35 o al menos 70 nucleotidos de longitud.

Preferiblemente, la sonda de acidos nucleicos es al menos 100 nucleotidos de longitud, por ejemplo, al menos 200 nucleotidos, al menos 300 nucleotidos, al menos 400 nucleotidos, al menos 500 nucleotidos, al menos 600 nucleotidos, al menos 700 nucleotidos, al menos 800 nucleotidos o al menos 900 nucleotidos de longitud.

Se pueden usar tanto sondas de ADN como de ARN.

Las sondas estan tfpicamente marcadas para la deteccion del gen correspondiente (por ejemplo, con 32P, 3H, 35S, biotina o avidina).

Tales sondas se incluyen en la presente invencion.

[0121] Una genoteca de ADN o ADNc obtenido a partir de tales otras cepas se puede seleccionar para ADN que hibrida con las sondas anteriormente descritas y codifica una GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

Genomico u otro ADN de tales otras cepas se puede separar por electroforesis en gel de poliacrilamida o agarosa, u otras tecnicas de separacion.

El ADN de las bibliotecas o el ADN separado se puede transferir e inmovilizar en la nitrocelulosa u otro material de portador adecuado.

Para identificar un clon o ADN que hibrida con SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137 o una subsecuencia de la misma, el material portador se usa en una transferencia de Southern.

[0122] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0123] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

[0124] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 4 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 760 de SEQ ID NO: 4.

[0125] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad

de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al

menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al

menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0126] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0127] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 46 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1043 de SEQ ID NO: 46.

[0128] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0129] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

[0130] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 60 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 896 de SEQ ID NO: 60.

[0131] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0132] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

[0133] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 64 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1038 de SEQ ID NO: 64.

[0134] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad

de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al

menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0135] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

[0136] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 106 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 901 de SEQ ID NO: 106.

[0137] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados con actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

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[0138] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

[0139] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 110 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 899 de SEQ ID NO: 110.

[0140] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0141] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

[0142] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 114 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 897 de SEQ ID NO: 114.

[0143] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0144] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

[0145] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 118 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 933 de SEQ ID NO: 118.

[0146] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0147] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

[0148] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 122 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1049 de SEQ ID NO: 122.

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[0149] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0150] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

8,9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

[0151] Un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 126 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

En otro aspecto, el polipeptido comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 900 de SEQ ID NO: 126.

[0152] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, sEq ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125 o el complemento en toda su longitud de la misma (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor, New York).

[0153] El polinucleotido de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, o una subsecuencia de la misma, al igual que el polipeptido de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126 o un fragmento de la misma se puede utilizar para disenar sondas de acido nucleico para identificar y clonar polipeptidos de codificacion de ADN con actividad de xantano liasa de cepas de diferentes generos o especies segun metodos bien conocidos en la tecnica. En particular, tales sondas se pueden usar para la hibridacion con el ADN genomico o ADNc de una celula de interes, seguida de procedimientos estandar de transferencia de Southern, para identificar y aislar el gen correspondiente en este.

Preferiblemente, la sonda de acidos nucleicos es al menos 100 nucleotidos de longitud, por ejemplo, al menos 200 nucleotidos, al menos 300 nucleotidos, al menos 400 nucleotidos, al menos 500 nucleotidos, al menos 600 nucleotidos, al menos 700 nucleotidos, al menos 800 nucleotidos, o al menos 900 nucleotidos de longitud.

Se pueden usar tanto sondas de ADN como de ARN.

Las sondas tfpicamente se marcan para la deteccion del gen correspondiente (por ejemplo, con 32P, 3H, 35S, biotina o avidina).

Tales sondas se incluyen en la presente invencion.

[0154] Una genoteca de ADN o ADNc obtenido a partir de tales otras cepas se puede seleccionar para ADN que hibrida con las sondas anteriormente descritas y codifica un polipeptido con actividad de xantano liasa.

El ADN de las bibliotecas o el ADN separado se pueden transferir e inmovilizar en la nitrocelulosa u otro material de portador adecuado.

Para identificar un clon o ADN que hibrida con SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125 o una subsecuencia de la misma, el material portador se usa en una transferencia de Southern.

[0155] Para fines de la presente invencion, la hibridacion indica que el polinucleotido hibrida a una sonda de acidos nucleicos marcada que corresponde con (i) SEQ ID NO: 1, SEQ iD NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137; (ii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137; (iii) el complemento en toda su longitud de la misma; (iv) una subsecuencia de la misma; (v) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125; (vi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125; (VII) el

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complemento en toda su longitud de la misma; o (VIII) una subsecuencia de la misma; bajo condiciones de astringencia medias a condiciones de astringencia muy altas.

Las moleculas a las que la sonda de acidos nucleicos hibrida bajo estas condiciones se pueden detectar usando, por ejemplo, pelfcula radiografica o cualquiera de los otros medios de deteccion conocidos en la tecnica.

[0156] En un aspecto, la sonda de acidos nucleicos es un polinucleotido que codifica el polipeptido de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 134 o SEQ ID NO: 138; el polipeptido maduro de la misma; o un fragmento de la misma.

En otro aspecto, la sonda de acidos nucleicos es SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137.

[0157] En un aspecto, la sonda de acidos nucleicos es un polinucleotido que codifica el polipeptido de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122 o SEQ ID NO: 126; el polipeptido maduro de la misma; o un fragmento de la misma.

En otro aspecto, la sonda de acidos nucleicos es SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121 o SEQ ID NO: 125.

[0158] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0159] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9 de al menos 85%, por ejemplo, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0160] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 11 de al menos 90%, por ejemplo, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0161] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasas aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 13 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0162] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0163] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0164] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

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[0165] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 81 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0166] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0167] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0168] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0169] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0170] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0171] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 133 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0172] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0173] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 3 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0174] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 45 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos

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87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0175] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 59 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0176] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 63 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0177] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 105 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0178] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 109 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0179] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 113 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0180] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 117 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0181] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 121 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0182] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de sEq ID NO: 125 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

[0183] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 no es mas del 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un peptido enlazador pequeno de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de una carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

[0184] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas

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en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 no es mas del 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de cargo de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0185] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, es decir, sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan el plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un peptido enlazador pequeno de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0186] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de cargo de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0187] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por la carga de cambio de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0188] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduras de SEQ ID NO: 46 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0189] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto

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[0190] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0191] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0192] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0193] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0194] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, que es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amno o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0195] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas

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en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0196] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxiloterminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0197] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0198] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0199] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones. En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0200] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 acidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido de enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension

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[0201] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 amino acidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0202] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 amino acidos; pequenas extensiones de amino carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0203] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0204] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, que es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; amino pequeno o extensiones terminadas carboxilo, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0205] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, que es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto

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[0206] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, que es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0207] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos

conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena

extension que facilita la purificacion por la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His

(tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad en la goma xantana pretratadajon xantano liasa.

[0208] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, que es sustituciones de aminoacidos

conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 amino acidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0209] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0210] Ejemplos de sustituciones conservadoras estan en los grupos de aminoacidos basicos (arginina, lisina e histidina), aminoacidos acidos (acido glutamico y acido aspartico), aminoacidos polares (glutamina y asparagina), aminoacidos hidrofobicos (leucina, isoleucina y valina), aminoacidos aromaticos (fenilalanina, triptofano y tirosina), y pequenos aminoacidos (glicina, alanina, serina, treonina y metionina).

Las sustituciones de aminoacidos que generalmente no alteran la actividad especffica se conocen en la tecnica y se describen, por ejemplo, en H. Neurath y R.L. Hill, 1979, en, The Proteins, Academic Press, New York.

Las sustituciones comunes son Ala/Ser, Val/lle, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, y Asp/Gly.

[0211] Alternativamente, los cambios aminoacidos son de tal naturaleza que las propiedades ffsico qufmicas de los polipeptidos se alteran.

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Por ejemplo, los cambios aminoacidos pueden mejorar la termoestabilidad del polipeptido, alteran la especificidad de sustrato, cambian el pH optimo y similar.

[0212] Los aminoacidos esenciales en un polipeptido se pueden identificar segun los procedimientos conocidos en la tecnica, tales como mutagenesis dirigida al sitio o mutagenesis de escaneado de alanina (Cunningham and Wells, 1989, Science 244: 1081-1085).

En la tecnica anterior, las mutaciones de alanina unicas se introducen en cada residuo en la molecula y las moleculas mutantes resultantes se evaluan para celulasa y/o actividad de xantano liasa para identificar residuos de aminoacidos que son crfticos para la actividad de la molecula. Ver tambien, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708.

El sitio activo de la enzima u otra interaccion biologica puede tambien ser determinada por analisis ffsico de estructura, como se ha determinado por tales tecnicas como resonancia magnetica nuclear, cristalograffa, difraccion electronica o etiquetado de fotoafinidad, conjuntamente con la mutacion de aminoacidos de sitio de contacto putativo.

Ver, por ejemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64.

La identidad de aminoacidos esenciales tambien puede ser inferida a partir de un alineamiento con un polipeptido relativo.

[0213] Sustituciones de aminoacidos unicas o multiples, deleciones y/o inserciones se pueden hacer y evaluar usando metodos conocidos de mutagenesis, recombinacion, y/o redistribucion, seguidos de un procedimiento de seleccion pertinente, tal como los descritos en Reidhaar-Olson and Sauer, 1988, Science 241: 53-57; Bowie and Sauer, 1989, Proc.Natt.Acad.Sci.USA 86: 2152-2156; WO 95/17413; o WO 95/22625.

Otros metodos que se pueden usar incluyen PCR con tendencia al error, presentacion en fagos (por ejemplo, Lowman et al., 1991, Bioqufmica 30: 10832-10837; patente EEUU n° 5,223,409; WO 92/06204) y mutagenesis dirigida por region (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127).

[0214] Los metodos de mutagenesis/redistribucion se pueden combinar con alto rendimiento, metodos de seleccion automatizados para detectar la actividad de polipeptidos clonados, mutagenizados expresados por celulas huesped (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896).

Moleculas de ADN mutagenizadas que codifican polipeptidos activos se pueden recuperar de las celulas huesped y secuenciar rapidamente usando metodos estandar en la tecnica. Estos metodos permiten la determinacion rapida de la importancia de residuos de aminoacidos de individuo en un polipeptido.

[0215] El polipeptido puede ser un polipeptido hfbrido donde una region de un polipeptido se fusiona en el N- terminal o el C-terminal de una region de otro polipeptido.

[0216] El polipeptido puede ser un polipeptido de fusion o polipeptido de fusion escindible donde otro polipeptido se fusiona en el N-terminal o el C-terminal del polipeptido de la presente invencion.

Un polipeptido de fusion se produce por la fundicion de un polinucleotido que codifica otro polipeptido a un polinucleotido de la presente invencion.

Las tecnicas para producir polipeptidos de fusion se conocen en la tecnica e incluyen la union de las secuencias codificantes que codifican los polipeptidos de modo que estos estan en el mismo marco y que la expresion del polipeptido de fusion esta bajo el control del mismo promotor(es) y terminador.

Los polipeptidos de fusion tambien se pueden construir usando la tecnologfa de interna donde los polipeptidos de fusion se crean postraduccionalmente (Cooper et al., 1993, EMBO J. 12: 2575-2583; Dawson et al., 1994, Science 266: 776-779).

[0217] Un polipeptido de fusion puede ademas comprender un sitio de escision entre los dos polipeptidos.

Tras la secrecion de la protefna de fusion, el sitio se dividide se forma que se liberan los dos polipeptidos.

Los ejemplos de sitios de escision incluyen, pero de forma no limitativa, los sitios descritos en Martin et al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotecnol. 3: 568-576; Svetina et al., 2000, J. Biotechnol. 76: 245-251; Rasmussen-Wilson et al., 1997, Appl.Environ.Microbiol. 63: 3488-3493; Ward et al., 1995, Biotechnology 13: 498-503; and Contreras et al., 1991, Biotechnology 9: 378-381; Eaton et al., 1986, Biochemistry 25: 505-512; Collins-Racie et al., 1995, Biotechnology 13: 982-987; Carter et al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240-248; and Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35-48.

[0218] El polipeptido se puede expresar por una secuencia de ADN recombinante con la codificacion para una etiqueta His o etiqueta HQ para proporcionar, despues de cualquier modificacion postraduccional, el polipeptido maduro contiene todas o parte de las etiquetas His o HQ.

La etiqueta HQ, que tiene la secuencia -RHQHQHQ, se puede escindir completamente o parcialmente descomponer del polipeptido durante las modificaciones postraduccionales dando como resultado por ejemplo los aminoacidos adicionales -RHQHQ fijados al N-terminal del polipeptido maduro.

La etiqueta His que tiene la secuencia -RfHHHHH, se puede escindir completamente o parcialmente del polipeptido durante las modificaciones postraduccionales dando como resultado aminoacidos adicionales tales como -RfHHHH, -RfHHH, -RfHH, -RfH, -Rf, -RP o -R fijados al N-terminal del polipeptido maduro.

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Las composiciones que comprenden GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y polipeptidos con actividad de xantano liasa

[0219] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de la SEQ ID NO: 2 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 9l%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

Alternativamente, la composicion se puede utilizar para la degradacion de goma xantana tal como para controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion.

[0220] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

[0221] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 2 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de endoglucanasa y actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1055 de SEQ ID NO: 2.

[0222] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia con el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o de limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavado de platos.

[0223] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10.

[0224] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 10 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma que tiene actividad de endoglucanasa y que tiene actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 10.

[0225] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

Alternativamente, la composicion se puede utilizar para la degradacion de la goma xantana tal como para controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion.

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[0226] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

[0227] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 12 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 12.

[0228] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0229] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

8.9 o 10 aminoacidos, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

[0230] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 14 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 918 de SEQ ID NO: 14.

[0231] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o de limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

[0232] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

[0233] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 48 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1007 de SEQ ID NO: 48.

[0234] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de

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secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0235] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

8.9 o 10 aminoacidos, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

[0236] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 52 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 915 de SEQ ID NO: 52.

[0237] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0238] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

8.9 o 10 aminoacidos, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

[0239] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 56 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1056 de SEQ ID NO: 56.

[0240] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0241] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

8.9 o 10 aminoacidos, desde el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

[0242] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o

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consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 82 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1371 de SEQ ID NO: 82.

[0243] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0244] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

[0245] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 86 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1203 de SEQ ID NO: 86.

[0246] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0247] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

[0248] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 90 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1379 de SEQ ID NO: 90.

[0249] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

Alternativamente, la composicion se puede utilizar para la degradacion de la goma xantana tal como para

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controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion.

[0250] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

[0251] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 94 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a

1371 de SEQ ID NO: 94.

[0252] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0253] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

[0254] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 98 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98.

1372 de SEQ ID NO: 98.

[0255] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia con el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0256] En un aspecto, los polipeptidos diferen en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102.

[0257] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 102 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 922 de SEQ ID NO: 102.

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[0258] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0259] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 de al menos 85%.

[0260] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

[0261] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 130 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 916 de SEQ ID NO: 130.

[0262] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la Goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0263] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

[0264] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 134 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1373 de SEQ ID NO: 134.

[0265] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tales y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

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[0266] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

[0267] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 138 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1204 de SEQ ID NO: 138.

[0268] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 137 o el complemento en toda su longitud de la misma (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor, New York).

[0269] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0270] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

[0271] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 4 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 760 de SEQ ID NO: 4.

[0272] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SeQ ID NO: 46 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0273] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,

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50

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65

40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

[0274] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 46 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1043 de SEQ ID NO: 46.

[0275] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0276] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

[0277] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 60 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 896 de SEQ ID NO: 60.

[0278] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0279] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

[0280] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 64 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1038 de SEQ ID NO: 64.

[0281] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos

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95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aqrn, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

[0282] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

[0283] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 106 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 901 de SEQ ID NO: 106.

[0284] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SeQ ID NO: 110 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0285] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

[0286] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 110 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 899 de SEQ ID NO: 110.

[0287] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y con una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SeQ ID NO: 114 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0288] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

[0289] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 114 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

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En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 897 de SEQ ID NO: 114.

[0290] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

Alternativamente, la composicion se puede utilizar para la degradacion goma xantana tal como para controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion.

[0291] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

[0292] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 118 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 933 de SEQ ID NO: 118.

[0293] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0294] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

8.9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

[0295] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 122 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 1049 de SEQ ID NO: 122.

[0296] En una forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de liasa y que tienen una identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

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[0297] En un aspecto, los polipeptidos difieren en no mas de 50 aminoacidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

8,9 o 10 aminoacidos, del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

[0298] Una composicion que comprende un polipeptido de la presente invencion preferiblemente comprende o consiste en la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 126 o una variante alelica de la misma; o es un fragmento de la misma con actividad de xantano liasa.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126.

En otro aspecto, la composicion comprende un polipeptido que comprende o consiste en los aminoacidos 1 a 900 de SEQ ID NO: 126.

[0299] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprenden polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, o el complemento en toda su longitud de la misma (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor, New York).

[0300] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia con la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0301] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0302] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 11 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0303] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a unas GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ Id NO: 13 de al menos 80%, por ejemplo,

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de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0304] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0305] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0306] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0307] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 81 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0308] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

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[0309] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0310] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0311] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

[0312] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 101 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0313] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0314] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

133 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0315] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende GH9 endoglucanasas aisladas con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0316] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende

polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 3 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al

menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al

menos 99%, o 100%.

[0317] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende

polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ iD NO: 45 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al

menos 99%, o 100%.

[0318] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende

polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ iD NO: 59 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al

menos 99%, o 100%.

[0319] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende

polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ iD NO: 63 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al

menos 99%, o 100%.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0320] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 105 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0321] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 109 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0322] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 113 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0323] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 117 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0324] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 121 de al menos 80%, por ejemplo, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0325] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion que comprende polipeptidos aislados que tienen actividad de xantano liasa codificada por un polinucleotido con una identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 125 de al menos 80%, por ejemplo,

5

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15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100%.

[0326] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 acidos de amino; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un peptido enlazador pequeno de sobre a 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0327] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 4 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0328] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0329] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

5

10

15

20

25

30

35

40

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50

55

60

65

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0330] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0331] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 46 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 amino acidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0332] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His

5

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40

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50

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60

65

[0333] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0334] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0335] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 60 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; amino pequeno o extensiones terminadas carboxilo, tal como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0336] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende una o mas componentes detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 64 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una pequena extension que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0337] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; posiciones) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0338] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86 no es mas dl 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0339] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

[0340] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

5

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30

35

40

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50

55

60

65

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tales y como se define aqrn, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0341] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

En una forma de realizacion, el numero de sustituciones de aminoacidos, deleciones y/o inserciones introducidas en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98 no es mas de 10, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0342] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el ambio de carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0343] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 106 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0344] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 110 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0345] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 114 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por la carga de red de cambio u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0346] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 118 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0347] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

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en el polipeptido maduro de SEQ ID NO: 122 no es mas de 10, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8 o 9.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0348] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 126 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

La variante preferiblemente tiene actividad de xantano liasa.

[0349] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

[0350] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protefna; deleciones pequenas, tfpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un peptido enlazador pequeno de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0351] En otra forma de realizacion, la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden variantes del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138 que comprenden una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas (por ejemplo; varias) posiciones.

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Los cambios aminoacidos pueden ser de una naturaleza menor, esto es sustituciones de aminoacidos conservadoras o inserciones que significativamente no afectan al plegado y/o actividad de la protema; deleciones pequenas, ffpicamente de 1-30 aminoacidos; pequenas extensiones de amino o carboxilo terminales, tales como un residuo de metionina aminoterminal; un pequeno peptido enlazador de hasta 20-25 residuos; o una extension pequena que facilita la purificacion por el cambio de la carga de red u otra funcion, tal como una etiqueta His (tracto de polihistidina), un epftopo antigenico o un dominio de union.

[0352] Ejemplos de sustituciones conservadoras son en los grupos de aminoacidos basicos (arginina, lisina e histidina), aminoacidos acidos (acido glutamico y acido aspartico), aminoacidos polares (glutamina y asparagina), aminoacidos hidrofobicos (leucina, isoleucina y valina), aminoacidos aromaticos (fenilalanina, triptofano y tirosina), y aminoacidos pequenos (glicina, alanina, serina, treonina y metionina).

Sustituciones de aminoacidos que generalmente no alteran la actividad espedfica se conocen en la tecnica y se describen, por ejemplo, en H. Neurath and R.L. Hill, 1979, In, The Proteins, Academic Press, New York. Sustituciones comunes son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, y Asp/Gly.

[0353] Alternativamente, los cambios aminoacidos son de tal naturaleza que las propiedades ffsico qmmicas de los polipeptidos se alteran.

Por ejemplo, los cambios aminoacidos pueden mejorar la termoestabilidad del polipeptido, alterar la especificidad de sustrato, cambiar el pH optimo y similar.

[0354] Los aminoacidos esenciales en un polipeptido se pueden identificar segun procedimientos conocidos en la tecnica, tales como mutagenesis dirigida al sitio o mutagenesis de escaneado de alanina (Cunningham and Wells, 1989, Science 244: 1081-1085).

En la tecnica anterior, las mutaciones de alanina unicas se introducen en cada residuo en la molecula, y las moleculas mutantes resultantes se evaluan para celulasa y/o actividad de xantano liasa para identificar residuos de aminoacidos que son cnticos para la actividad de la molecula. Ver tambien, Hilton et al., 1996, J. Biol.Chem. 271:4699-4708.

El sitio activo de la enzima u otra interaccion biologica puede tambien ser determinado por analisis ffsico de estructura, como determinado por tales tecnicas como resonancia magnetica nuclear, cristalograffa, difraccion electronica o etiquetado de fotoafinidad, conjuntamente con la mutacion de aminoacidos de sitio de contacto putativo.

Ver, por ejemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol.Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64.

La identidad de aminoacidos esenciales tambien puede ser inferidas a partir de un alineamiento con un relativo polipeptido.

[0355] Las sustituciones de aminoacidos unicas o multiples, deleciones y/o inserciones pueden realizarse y evaluarse usando metodos conocidos de mutagenesis, recombinacion y/o redistribucion, seguido de un procedimiento de seleccion pertinente, tal como los descritos en Reidhaar-Olson y Sauer, 1988, ciencia 241: 5357; Bowie y Sauer, 1989, Proc.NatI. Acad.Sci.USA 86: 2152-2156; WO 95/17413; o WO 95/22625.

Otros metodos que se pueden usar incluyen PCR con tendencia al error, presentacion en fagos (por ejemplo, Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837; U.S. Patent No. 5,223,409; WO 92/06204) y mutagenesis dirigida por region (Derbyshire et al., 1986, gen 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127).

[0356] Metodos de mutagenesis/redistribucion se pueden combinar con alto rendimiento, metodos de seleccion automatizados para detectar la actividad de clonados, polipeptidos mutagenizados expresados por celulas huesped (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896).

Formas de realizacion

[0357] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se define aqrn, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie

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dura tal como lavavajillas.

Alternativamente, la composicion se puede utilizar para la degradacion de la goma xantana tal como para controlar la viscosidad de los fluidos de perforacion. Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

[0358] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0359] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 64.

[0360] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SeQ ID NO: 106.

[0361] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SeQ ID NO: 110.

[0362] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SeQ ID NO: 114.

[0363] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SeQ ID NO: 118.

[0364] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion quecomprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 122.

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[0365] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 126.

[0366] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0367] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 46.

[0368] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 60.

[0369] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes tal y como se definen aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

[0370] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 106.

[0371] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 110.

[0372] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 114.

[0373] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

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[0374] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0375] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 10 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0376] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0377] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 46.

[0378] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 60.

[0379] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 64.

[0380] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 106.

[0381] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 110.

La composicion es preferiblemente una composicion detergente que comprende uno o mas componentes

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detergentes tal y como se define aquf, y se puede usar para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.

[0382] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0383] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

[0384] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0385] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 12 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0386] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0387] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 46.

[0388] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 60.

[0389] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 64.

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[0390] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 106.

[0391] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 110.

[0392] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 114.

[0393] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

[0394] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 122.

[0395] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 14 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 126.

[0396] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0397] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 46.

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[0398] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0399] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

[0400] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 106.

[0401] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 110.

[0402] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 114.

[0403] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

[0404] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0405] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 48 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0406] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

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[0407] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 46.

[0408] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 60.

[0409] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

[0410] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 106.

[0411] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 110.

[0412] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 114.

[0413] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

[0414] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

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[0415] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 52 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 126.

[0416] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0417] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 46.

[0418] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0419] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

[0420] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 106.

[0421] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 110.

[0422] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

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[0423] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 118.

[0424] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0425] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 56 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0426] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0427] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 46.

[0428] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprene la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0429] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 64.

[0430] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 106.

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[0431] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 110.

[0432] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 114.

[0433] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 118.

[0434] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0435] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 82 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0436] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0437] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 46.

[0438] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 60.

[0439] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

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[0440] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 106.

[0441] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 110.

[0442] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 114.

[0443] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 118.

[0444] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0445] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 86 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0446] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

[0447] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

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[0448] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0449] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

[0450] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 106.

[0451] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 110.

[0452] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 114.

[0453] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 118.

[0454] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0455] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 90 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

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[0456] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

[0457] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 46.

[0458] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0459] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 64.

[0460] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 106.

[0461] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 110.

[0462] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 114.

[0463] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

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[0464] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 122.

[0465] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 94 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0466] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 4.

[0467] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 46.

[0468] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 60.

[0469] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID nO: 64.

[0470] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 106.

[0471] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 110.

[0472] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

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SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0473] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID NO: 118.

[0474] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 122.

[0475] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 98 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de sEq ID nO: 126.

[0476] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

[0477] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

[0478] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 60.

[0479] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 64.

[0480] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 106.

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[0481] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 110.

[0482] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0483] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 118.

[0484] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 122.

[0485] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 102 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 126.

[0486] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

[0487] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

[0488] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 60.

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[0489] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 64.

[0490] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 106.

[0491] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 110.

[0492] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0493] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 118.

[0494] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 122.

[0495] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 130 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 126.

[0496] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

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[0497] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

[0498] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 60.

[0499] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 64.

[0500] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 106.

[0501] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 110.

[0502] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0503] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 118.

[0504] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 122.

[0505] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

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SEQ ID NO: 134 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 126.

[0506] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 4.

[0507] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 46.

[0508] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 60.

[0509] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de

SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 64.

[0510] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 106.

[0511] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 110.

[0512] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 114.

[0513] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 118.

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[0514] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID NO: 122.

[0515] Una forma de realizacion de la invencion es una composicion que comprende la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 138 con un polipeptido con actividad de xantano liasa de SEQ ID No: 126.

Fuentes de GH9 endoglucanasas con actividad en la goma xantana pretratadas con xantano liasa y polipeptidos con actividad de xantano liasa

[0516] Una GH9 endoglucanasa con actividad en la goma xantana pretratada con una xantano liasa de la presente invencion y polipeptidos con actividad de xantano liasa se pueden obtener de microorganismos de cualquier genero.

Para fines de la presente invencion, el termino "obtenerse de" como se utiliza en este caso en relacion con una fuente dada debe significar que el polipeptido codificado por un polinucleotido se produce por la fuente o por una cepa donde el polinucleotido de la fuente ha sido insertado.

En un aspecto, el polipeptido obtenido a partir de una fuente dada es secretado extracelularmente.

[0517] En un aspecto, el polipeptido es de una bacteria de la clase Bacilli, tal como del orden Bacillales o de la familia Paenibacillaceae, o del genero Paeniobacillus o de las especies Paeniobacillus tal como Paeniobacillus sp NN062047, Paeniobacillus sp NN062250, Paeniobacillus sp NN062253, Paeniobacillus sp NN018054, Paeniobacillus sp NN062046, Paeniobacillus sp NN062408, Paeniobacillus sp NN062332, Paeniobacillus sp NN062147 o Paeniobacillus sp NN062193.

[0518] En otro aspecto, el polipeptido de una bacteria de la clase Actinobacteria, tal como del tipo actinomicetales o de la familia Microbacteriaceae, o del genero Microbacterium o de las especies Microbacterium tal como Microbacterium testaceum, Microbacterium sp NN062045, Microbacterium sp NN062148, Microbacterium sp NN062175 o Microbacterium sp NN062149.

[0519] Se entiende que para las especies anteriormente mencionadas, la invencion abarca los estados perfectos e imperfectos, y otros equivalentes taxonomicos, por ejemplo, anamorfos, independientemente del nombre de especies por lo que estos son conocidos.

Los expertos en la tecnica facilmente reconoceran la identidad de equivalentes apropiados.

[0520] Las cepas de estas especies son accesibles facilmente al publico en un numero de colecciones de cultivo, tales como la coleccion American Type Culture Collection (ATCC), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS) y Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL).

[0521] El polipeptido se puede identificar y obtener de otras fuentes incluyendo microorganismos aislados de la naturaleza (por ejemplo, tierra, abonos, agua, etc.) o muestras de ADN obtenidas directamente de materiales naturales (por ejemplo, tierra, abonos, agua, etc.) utilizando las sondas anteriormente mencionadas.

Las tecnicas para el aislamiento de microorganismos y ADN directamente de habitats naturales se conocen en la tecnica. Un polinucleotido que codifica el polipeptido puede luego ser obtenido seleccionando de forma similar de una genoteca de ADN o ADNc de otro microorganismo o muestra de ADN mezclada.

Una vez un polinucleotido que codifica un polipeptido ha sido detectado con la sonda(s), el polinucleotido se puede aislar o clonar por la utilizacion de tecnicas que se conocen por aquellos tecnicos en la materia (ver, por ejemplo, Sambrook et al., 1989, supra).

Polinucleotidos

[0522] La presente invencion tambien se refiere a polinucleotidos aislados que codifican un polipeptido de la

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presente invencion, como se describe en este caso.

[0523] Las tecnicas usadas para aislar o clonar un polinucleotido se conocen en la tecnica e incluyen aislamiento de ADN o ADNc genomico o una combinacion de los mismos.

La clonacion de los polinucleotidos de ADN genomico puede ser efectuada, por ejemplo, usando la reaccion en cadena de polimerasa bien conocida (PCR) o seleccion de anticuerpo de bibliotecas de expresion para detectar fragmentos de ADN clonados con caracterfsticas estructurales compartidas.

Ver, p. ej., Innis et al., 1990, PCR: A Guide to Methods and Application, Academic Press, New York.

Otros procedimientos de amplificacion de acido nucleico tal como (LCR) reaccion en cadena de ligasa, (LAT) transcripcion activada de ligamiento y amplificacion basada en polinucleotido (NASBA) se pueden utilizar.

Los polinucleotidos se pueden clonar en una cepa de Bacillus subtilis o E. coli, o un organismo relativo y asf, por ejemplo, puede ser una variante alelica o de especies del polipeptido que codifican la region del polinucleotido.

[0524] La modificacion de un polinucleotido que codifica un polipeptido de la presente invencion puede ser necesaria para la sintetizacion de polipeptidos sustancialmente similar al polipeptido.

El termino "substancialmente similar" al polipeptido se refiere a formas del polipeptido que no se producen de forma natural.

Estos polipeptidos pueden diferir en alguna via disenada desde el polipeptido aislado de su fuente nativa, por ejemplo, variantes que difieren en la actividad especffica, termoestabilidad, pH optimo o similar.

Las variantes se pueden construir basandose en el polinucleotido presentado como la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID: NO:13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 133 o SEQ ID NO: 137 por ejemplo, una subsecuencia de la misma, y/o por introduccion de sustituciones de nucleotido que no suponen un cambio en la secuencia de aminoacidos del polipeptido, pero que corresponden al uso de codon del organismo huesped destinado a la produccion de la enzima o por introduccion de sustituciones de nucleotido que pueden dar lugar a una secuencia de aminoacidos diferente.

Para una descripcion general de sustitucion de nucleotido, ver Ford et al., (1991), 'Protein Expression and Purification', 2: 95-107.

Constructos de acidos nucleicos

[0525] La presente invencion tambien se refiere a constructos de acidos nucleicos que comprenden un polinucleotido de la presente invencion operativamente enlazado a una o mas secuencias de control que dirigen la expresion de la secuencia codificante en una celula huesped adecuada bajo condiciones compatibles con las secuencias de control.

[0526] Un polinucleotido se puede manipular en una variedad de vfas para proveer la expresion del polipeptido.

La manipulacion del polinucleotido antes de su insercion en un vector puede ser deseable o necesaria dependiendo del vector de expresion.

Las tecnicas para la modificacion de polinucleotidos utilizando metodos de ADN recombinante se conocen bien en la tecnica.

[0527] La secuencia de control puede ser un promotor, un polinucleotido que se reconoce por una celula huesped para la expresion de un polinucleotido que codifica un polipeptido de la presente invencion.

El promotor contiene secuencias de control transcripcionales que median la expresion del polipeptido.

El promotor puede ser cualquier polinucleotido que muestre actividad transcripcional en la celula huesped incluyendo hfbridos mutantes, truncados y promotores, y puede se obtenido de genes que codifican polipeptidos extracelulares o intracelulares bien homologos o heterologos a la celula huesped.

[0528] Ejemplos de promotores adecuados para la transcripcion dirigente de los constructos de acidos nucleicos de la presente invencion en una celula huesped bacteriana son los promotores obtenidos del gen Bacillus amyloliquefaciens de alfa-amilasa (amyQ), gen Bacillus licheniformis de alfa-amilasa (amilo), gen Bacillus licheniformis penicilinasa (penP), gen Bacillus stearothermophilus de amilasa maltogenica (amyM), gen de levansucrasa de Bacillus subtilis (sacB), Bacillus subtilis xyIA y xyIB genes, gen Bacillus thuringiensis crilllA (Agaisse and Lereclus, 1994, Molecular Microbiology 13: 97-107), operon E. Coli lac, promotor E. Coli trc (Egon et al., 1988, Gene 69: 301-315), gen de agarasa Streptomyces coelicolor (dagA) y gen de beta-lactamasa procariotica (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc.NatI. Acad.Sci.USA 75: 3727-3731), al igual que el promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc.NatI. Acad.Sci.USA 80: 21-25).

Otros promotores se describen en "Useful proteins from recombinant bacteria" en Gilbert et al., 1980, Scientific American 242: 74-94; and in Sambrook et al., 1989, supra.

Ejemplos de promotores en serie se describen en la WO 99/43835.

[0529] Ejemplos de promotores adecuados para la transcripcion dirigente de los constructos de acidos nucleicos de la presente invencion en una celula huesped fungica filamentosa son promotores obtenidos de los genes para

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acetamidasa de Aspergillus nidulans, alfa-amilasa neutra de Aspergillus niger, alfa-amilasa estable en acido de Aspergillus niger, glucoamilasa de Aspergillus niger o de Aspergillus awamori (glaA), amilasa de Aspergillus oryzae TAKA, proteasa alcalina de Aspergillus oryzae, triosa fosfato isomerasa de Aspergillus oryzae, proteasa de tipo tripsina de Fusarium oxysporum (WO 96/00787), amiloglucosidasa de Fusarium venenatum (WO 00/56900), Fusarium venenatum Daria (WO 00/56900), Fusarium venenatum Quinn (WO 00/56900), lipasa de Rhizomucor miehei, proteinasa aspartica de Rhizomucor miehei, beta-glucosidasa de Trichoderma reesei, celobiohidrolasa I de Trichoderma reesei, celobiohidrolasa II de Trichoderma reesei, endoglucanasa de Trichoderma reesei I, endoglucanasa II de Trichoderma reesei, endoglucanasa III de Trichoderma reesei, endoglucanasa de Trichoderma reesei IV, endoglucanasa V de Trichoderma reesei, xilanasa de Trichoderma reesei I, xilanasa de Trichoderma reesei II, beta-xilosidasa de Trichoderma reesei, al igual que el promotor NA2- tpi (un promotor modificado a partir de un gen de alfa-amilasa neutra de Aspergillus donde el lfder no traducido ha sido sustituido por un lfder no traducido a partir de un gen de triosa fosfato isomerasa de Aspergillus; ejemplos no limitativos incluyen promotores modificados a partir de un gen de alfa-amilasa neutra de Aspergillus niger donde el lfder no traducido ha sido sustituido por un lfder no traducido a partir de un Aspergillu nidulans o gen de triosa fosfato isomerasa de Aspergillus oryzae); y promotores mutantes, truncados e hfbridos de los mismos.

[0530] En un huesped de levadura, los promotores utiles se obtienen de los genes para enolasa de Saccharomyces cerevisiae (ENO-1), galactocinasa de Saccharomyces cerevisiae (GAL1), deshidrogenasa de alcohol de Saccharomyces cerevisiae/gliceraldehfdo-3-fosfato dehidrogenasa (ADH1, aDH2/GAP) triosa fosfato isomerasa de Saccharomyces cerevisiae (TPI), metalotionefna de Saccharomyces cerevisiae (CUP1) y quinasa de 3-fosfoglicerato de Saccharomyces cerevisiae.

Otros promotores utiles para celulas huesped de levadura son descritas por Romanos et al., 1992, Yeast 8: 423488.

[0531] La secuencia de control tambien puede ser un terminador de transcripcion, que se reconoce por una celula huesped para terminar la transcripcion.

El terminador esta operativamente enlazado al 3'-terminal del polinucleotido que codifica el polipeptido.

Cualquier terminador que es funcional en la celula huesped se puede utilizar en la presente invencion.

[0532] Los terminadores preferidos para celulas huesped bacterianas se obtienen de los genes para proteasa alcalina de Bacillus clausii (aprH), de alfa-amilasa de Bacillus licheniformis (amyL) y ARN ribosomico de Escherichia coli (rrnB).

[0533] Los terminadores preferidos para celulas huesped fungicas filamentosas se obtienen de los genes para antranilato sintasa de Aspergillus nidulans, Aspergillus nigerglucoamilase, alfa-glucosidasa de Aspergillus niger, TAKA amilasa de Aspergillus oryzae y proteasa de tipo tripsina de Fusarium oxysporum.

[0534] Los terminadores preferidos para celulas huesped de levadura se obtienen de los genes para enolasa de Saccharomyces cerevisiae, citocromo de Saccharomyces cerevisiae C (CYC1) y gliceraldehfdo-3-fosfato- deshidrogenasa de Saccharomyces cerevisiae.

Otros terminadores utiles para celulas huesped de levadura son descritas por Romanos et al., 1992, supra.

[0535] La secuencia de control tambien puede ser una region de estabilizador de ARNm abajo de un promotor y arriba de la secuencia codificante de un gen que aumenta la expresion del gen.

[0536] Ejemplos de regiones estabilizadoras de ARNm adecuado se obtienen a partir de un gen Bacillus thuringiensis criIIIA (WO 94/25612) y un gen Bacillus subtilis SP82 (Hue et al., 1995, Journal of Bacteriology 177: 3465-3471).

[0537] La secuencia de control tambien puede ser un lfder, una region no traducida de un ARNm que es importante para la traduccion por la celula huesped.

El lfder esta operativamente enlazado al 5'-terminal del polinucleotido que codifica el polipeptido.

Cualquier lfder que es funcional en la celula huesped puede ser utilizado.

[0538] Los lfderes preferidos para celulas huesped fungicas filamentosas se obtienen de los genes para TAKA amilasa de Aspergillus oryzae y triosa fosfato isomerasa de Aspergillus nidulans.

[0539] Los lfderes adecuados para las celulas huesped de levadura se obtienen de los genes para enolasa de Saccharomyces cerevisiae (ENO-1), quinasa de 3-fosfoglicerato de Saccharomyces cerevisiae, alfa-factor de Saccharomyces cerevisiae y alcohol deshidrogenasa de Saccharomyces cerevisiae/gliceraldehfdo-3-fosfato de dehidrogenasa (ADH2/GAP).

[0540] La secuencia de control tambien puede ser una secuencia de poliadenilacion, una secuencia operativamente enlazada al 3'-terminal del polinucleotido y, cuando se transcribe, se reconoce por la celula huesped como una senal para anadir residuos de poliadenosina para ARNm transcrito.

Cualquier secuencia de poliadenilacion que es funcional en la celula huesped puede ser utilizada.

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[0541] Las secuencias de poliadenilacion preferidas para celulas huesped fungicas filamentosas se obtienen de los genes para antranilato sintasa de Aspergillus nidulans, glucoamilasa de Aspergillus niger, alfa-glucosidasa de Aspergillus niger TAKA amilasa de Aspergillus oryzae y proteasa de tipo tripsina de Fusarium oxysporum.

[0542] Las secuencias de poliadenilacion utiles para celulas huesped de levadura se describen en Guo and Sherman, 1995, Mol.Cellular Biol. 15: 5983-5990.

[0543] La secuencia de control tambien puede ser una region codificante del peptido senal que codifica un peptido senal enlazado al N-terminal de un polipeptido y dirige el polipeptido en la via secretora de la celula.

El 5'-extremo de la secuencia codificante del polinucleotido puede intrfnsecamente contener una secuencia codificante del peptido senal naturalmente enlazada en el marco de lectura de traduccion con el segmento de la secuencia codificante que codifica el polipeptido.

Alternativamente, el 5'-extremo de la secuencia codificante puede contener una secuencia codificante del peptido senal que es extranjera a la secuencia codificante.

Una secuencia codificante del peptido senal foraneo se puede requerir donde la secuencia codificante naturalmente no contiene una secuencia codificante del peptido senal.

Alternativamente, una secuencia codificante del peptido senal foraneo puede sencillamente reemplazar la secuencia codificante del peptido senal natural para mejorar la secrecion del polipeptido.

Sin embargo, cualquier secuencia codificante del peptido senal que dirige el polipeptido expresado en la via secretora de una celula huesped puede ser utilizada.

[0544] Las secuencias codificantes del peptido senal eficaces para celulas huesped bacterianas son las secuencias codificantes del peptido senal obtenidas de los genes para amilasa maltogenica Bacillus NCIB 11837, subtilisina de Bacillus licheniformis, beta-lactamasa de Bacillus licheniformis, alfa-amilasa de Bacillus stearothermophilus, proteasas neutrales de Bacillus stearothermophilus (nprT, nprS, nprM) y Bacillus subtilis prsA.

Otros peptidos senal se describen por Simonen and Palva, 1993, Microbiological Reviews 57: 109-137.

[0545] Secuencias codificantes del peptido senal eficaces para celulas huesped fungicas filamentosas son las secuencias codificantes del peptido senal obtenidas de los genes para amilasa neutra de Aspergillus niger, glucoamilasa de Aspergillus niger, TAKA amilasa de Aspergillus oryzae, celulasa de Humicola insolens, endoglucanasa V de Humicola insolens, lipasa Humicola lanuginosa y proteinasa aspartica de Rhizomucor miehei.

[0546] Peptidos senal utiles para celulas huesped de levadura se obtienen de los genes para alfa-factor de Saccharomyces cerevisiae e invertasa de Saccharomyces cerevisiae.

Otras secuencias codificantes del peptido senal utiles se describen en Romanos et al., 1992, supra.

[0547] La secuencia de control tambien puede ser una secuencia codificante del propeptido que codifica un propeptido posicionado en el N-terminal de un polipeptido.

El polipeptido resultante se conoce como una proenzima o propolipeptido (o un zimogeno en algunos casos).

Un propolipeptido es inactivo generalmente y se puede convertir en un polipeptido activo por escision catalftica o autocatalftica del propeptido desde el propolipeptido.

La secuencia codificante del propeptido se puede obtener de los genes para proteasa alcalina de Bacillus subtilis (aprE), proteasa neutra de Bacillus subtilis (nprT), lacasa myceliophthora thermophila (WO 95/33836), proteinasa aspartica de Rhizomucor miehei, y alfa-factor de Saccharomyces cerevisiae.

[0548] Donde ambos peptidos senal y secuencias de propeptido estan presentes, la secuencia de propeptido esta situada junto al N-terminal de un polipeptido y la secuencia de peptido senal esta situada junto al N-terminal de la secuencia de propeptido.

[0549] Tambien puede ser deseable anadir secuencias reguladoras que regulan la expresion del polipeptido relativa al crecimiento de la celula huesped.

Los ejemplos de sistemas reguladores son aquellos que causan la expresion del gen que se activa o desactiva en respuesta a una sustancia qufmica o estfmulo ffsico, incluyendo la presencia de un compuesto regulador.

Los sistemas reguladores en sistemas procarioticos incluyen los operadores lac, tac y sistemas trp.

En la levadura, el sistema ADH2 o sistema GAL1 se puede utilizar.

En hongos filamentosos, el promotor de glucoamilasa de Aspergillus niger, promotor Aspergillus oryzae de TAKA alfa-amilasa y promotor de glucoamilasa de Aspergillus oryzae se pueden utilizar.

Otros ejemplos de secuencias reguladoras son aquellas que permiten la amplificacion genica.

En sistemas eucarioticos, estas secuencias reguladoras incluyen el gen de dihidrofolato reductasa que se amplifica en presencia de metotrexato y los genes de metalotionefna que se amplifican con metales pesados.

En estos casos, el polinucleotido que codifica el polipeptido serfa operativamente enlazado con la secuencia reguladora.

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Vectores de expresion

[0550] La presente invencion tambien se refiere a vectores de expresion recombinantes que comprenden un polinucleotido de la presente invencion, un promotor y senales de parada transcripcional y traslacional.

Los varios nucleotidos y secuencias de control se pueden juntar para producir un vector de expresion recombinante que puede incluir uno o mas sitios de restriccion convenientes para permitir la insercion o sustitucion del polinucleotido que codifica el polipeptido en tales sitios.

Alternativamente, el polinucleotido se puede expresar por la insercion del polinucleotido o un constructo de acido nucleico que comprende el polinucleotido en un vector apropiado para la expresion.

En la creacion del vector de expresion, la secuencia codificante se localiza en el vector de modo que la secuencia codificante es operativamente enlazada con las secuencias de control apropiadas para la expresion.

[0551] El vector de expresion recombinante puede ser cualquier vector (por ejemplo, un plasmido o viral) que pueda ser convenientemente sometido a procedimientos de ADN recombinantes y pueda provocar la expresion del polinucleotido.

La eleccion del vector tfpicamente dependera de la compatibilidad del vector con la celula huesped en que el vector debe ser introducido.

El vector puede ser un plasmido lineal o cerrado circular.

[0552] El vector puede ser un vector de replicacion autonoma, es decir, un vector que existe como una entidad extracromosomica, la replicacion del cual es independiente de replicacion cromosomica, por ejemplo, un plasmido, un elemento extracromosomico, un minicromosoma o un cromosoma artificial.

El vector puede contener cualquier medio para asegurar la autorreplicacion.

Alternativamente, el vector puede ser uno que, cuando se introduce en la celula huesped, se integra en el genoma y se replica con el cromosoma(s) en que se ha integrado.

Ademas, un vector unico o plasmido o dos o mas vectores o plasmidos que juntos contienen el ADN total que se introduce en el genoma de la celula huesped o un transposon, se puede utilizar.

[0553] El vector contiene preferiblemente uno o mas marcadores seleccionables que permiten la seleccion facil de celulas transformadas, transfectadas, transducidas o similar.

Una etiqueta seleccionable es un gen el producto del cual proporciona para biocida o resistencia vinca, resistencia a metales pesados, prototrofia para auxotrofos y similar.

[0554] Ejemplos de marcadores seleccionables bacterianos son Bacillus licheniformis o genes Bacillus subtilis dal, o marcadores que confieren resistencia antibiotica tal como ampicilina, cloranfenicol, canamicina, neomicina, espectinomicina o resistencia a tetraciclina.

Los marcadores adecuados para celulas huesped de levadura incluyen, pero de forma no limitativa, ADE2, HIS3, LEU2, LYS2, MET3, TRP1 y URA3.

Los marcadores seleccionables para usar en una celula huesped fungica filamentosa incluyen, pero de forma no limitativa, amdS (acetamidasa), argB (ornitina-carbamoiltransferasa), barra (fosfonitricina acetiltransferasa), hph (higromicina fosfotransferasa), niaD (nitrato-reductasa), pyrG (orotidina-5'-fosfato-descarboxilasa), sC (sulfato adeniltransferasa) y trpC (antranilato sintasa), al igual que equivalentes de los mismos.

Preferidos para usar en una celula de Aspergillus son Aspergillus nidulans o Aspergillus oryzae amdS y genes pyrG y un gen bar de Streptomyces hygroscopicus.

[0555] El vector contiene preferiblemente un elemento(s) que permite la integracion del vector en el genoma de la celula huesped o replicacion autonoma del vector en la celula independiente del genoma.

[0556] Para la integracion en el genoma de la celula huesped, el vector puede depender de la secuencia que codifica del polinucleotido del polipeptido o cualquier otro elemento del vector para la integracion en el genoma por recombinacion homologa o no-homologa.

Alternativamente, el vector puede contener polinucleotidos adicionales para dirigir la integracion por recombinacion homologa en el genoma de la celula huesped a una ubicacion(es) precisa en el cromosoma(s). Para aumentar la probabilidad de integracion a una ubicacion precisa, los elementos integracionales deberfan contener un numero suficiente de acidos nucleicos, tal como 100 a 10,000 pares de bases, 400 a 10,000 pares de bases y 800 a 10,000 pares de bases, que tienen un alto grado de identidad de secuencia a la secuencia diana correspondiente para mejorar la probabilidad de recombinacion homologa.

Los elementos integracionales pueden ser cualquier secuencia que sea homologa a la secuencia diana en el genoma de la celula huesped.

Ademas, los elementos integracionales pueden ser polinucleotidos codificantes o no codificantes.

Por otro lado, el vector se puede integrar en el genoma de la celula huesped por recombinacion no-homologa.

[0557] Para replicacion autonoma, el vector puede comprender ademas un origen de replicacion que permita al vector replicar autonomamente en la celula huesped en cuestion.

El origen de replicacion puede ser cualquier plasmido de replicacion que funciona en una celula mediante replicacion autonoma.

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El termino "origen de replicacion" o "plasmido de replicacion" significa un polinucleotido que permite replicar un plasmido o vector in vivo.

[0558] Ejemplos de orfgenes bacterianos de replicacion son los orfgenes de replicacion de plasmidos pBR322; pUC19; pACYC177, y pACYC184 que permiten la replicacion en el E. Coli y puBl10; pE194; pTA1060 y pAMB1 que permiten la replicacion en el Bacillus.

[0559] Ejemplos de orfgenes de replicacion para usar en una celula huesped de levadura son el origen de replicacion de 2 micras, ARS1, ARS4, la combinacion de ARS1 y CEN3, y la combinacion de ARS4 y CEN6.

[0560] Ejemplos de orfgenes de replicacion utiles en una celula fungica filamentosa son AMA1 y ANS1 (Gems et al., 1991, Gene 98: 61-67; Cullen et al., 1987, Nucleic Acids Res. 15: 9163-9175; WO 00/24883).

Aislamiento del gen AMA1 y construccion de plasmidos o vectores que comprenden el gen se puede realizar segun los metodos descritos en la WO 00/24883.

[0561] Mas de una copia de un polinucleotido de la presente invencion se puede insertar en una celula huesped para aumentar la produccion de un polipeptido.

Un aumento en el numero de copias del polinucleotido se puede obtener por la integracion de al menos una copia adicional de la secuencia en el genoma de la celula huesped o incluyendo un gen marcador seleccionable amplificable con el polinucleotido donde las celulas que contienen copias amplificadas del gen marcador seleccionable y asf copias adicionales del polinucleotido se pueden seleccionar por el cultivo de las celulas en presencia del agente seleccionable apropiado.

[0562] Los procedimientos usados para enlazar los elementos anteriormente descritos para construir los vectores de expresion recombinantes de la presente invencion se conocen por un experto en la materia (ver, por ejemplo, Sambrook et al., 1989, supra).

Celulas huesped

[0563] La presente invencion tambien se refiere a celulas huesped recombinantes, que comprenden un polinucleotido de la presente invencion operativamente enlazado a una o mas secuencias de control que dirigen la produccion de un polipeptido de la presente invencion.

Una construccion o vector que comprende un polinucleotido se introduce en una celula huesped de modo que la construccion o vector se mantiene como un integrante cromosomico o como un vector extracromosomal que se duplica como se ha descrito anteriormente.

El termino "celula huesped" abarca cualquier descendiente de una celula madre que no es identico a la celula madre debido a mutaciones que se producen durante la replicacion.

La eleccion de una celula huesped en gran parte dependera del gen que codifica el polipeptido y su fuente.

[0564] La celula huesped puede ser cualquier celula util en la produccion recombinante de un polipeptido de la presente invencion, por ejemplo, una procariota o una eucariota.

[0565] La celula huesped procariotica puede ser cualquier bacteria gram-positiva o gram-negativa.

Las bacterias gram-positivas incluyen, pero de forma no limitativa, Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus y Streptomyces.

Las bacterias gram-negativas incluyen, pero de forma no limitativa, Campylobacter, E. Coli, Flavobacterium, Fusobacterium, helicobacteria, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella y Ureaplasma.

[0566] La celula huesped bacteriana puede ser cualquier celula de Bacillus incluyendo, pero no de forma limitada Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis y Celulas de bacillus thuringiensis.

[0567] La celula huesped bacteriana tambien puede ser cualquier celula de Streptococcus incluyendo, pero no de forma limitada, Streptococcus equisimilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis y Streptococcus equi subesp.Celulas de Zooepidemicus.

[0568] La celula huesped bacteriana tambien puede ser cualquier celula de Streptomyces incluyendo, pero no de forma limitada, Streptomyces achromogenes, Streptomyces avermitilis, Streptomyces coelicolor, Streptomyces griseus, y celulas de Streptomyces lividans.

[0569] La introduccion de ADN en una celula de Bacillus se puede efectuar por transformacion de protoplasto (ver, por ejemplo, Chang and Cohen, 1979, Mol.Gen.Genet. 168: 111-115), transformacion celular competente (ver, por ejemplo, Young and Spizizen, 1961, J.Bacteriol. 81: 823-829 o Dubnau y Davidoff-Abelson, 1971, J. Mol.Biol. 56: 209-221), electroporacion (ver, por ejemplo, Shigekawa y Dower, 1988 Biotechniques 6: 742-751) o conjugacion (ver, por ejemplo, Koehler and Thorne, 1987, J. Bacteriol. 169: 5271-5278).

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La introduccion de ADN en una celula de E. coli se puede efectuar por transformacion de protoplasto (ver, por ejemplo, Hanahan, 1983, J. Mol.Biol. 166: 557-580) o electroporacion (ver, por ejemplo, Dower et al., 1988, Nucleic Acids Res. 16: 6127-6145).

La introduccion de ADN en una celula de Streptomyces se puede efectuar por transformacion de protoplasto, electroporacion (ver, por ejemplo, Gong et al., 2004, Folia Microbiol. (Praha) 49: 399-405), conjugacion (ver, por ejemplo, Mazodier et al., 1989, J.Bacteriol. 171: 3583-3585) o transduccion (ver, por ejemplo, Burke et al., 2001, Proc.Natl. Acad.Sci.USA 98: 6289-6294).

La introduccion de ADN en una celula de Pseudomonas se puede efectuar por electroporacion (ver, por ejemplo, Choi et al., 2006, J. Microbiol. Metodos 64: 391-397) o conjugacion (ver, por ejemplo, Pinedo and Smets, 2005, Appl.

Environ.Microbiol. 71: 51-57).

La introduccion de ADN en una celula de Streptococcus se puede efectuar por competencia natural (ver, por ejemplo, Perry and Kuramitsu, 1981, Infect.lmmun. 32: 1295-1297), transformacion de protoplasto (ver, por ejemplo, Catt and Jollick, 1991, Microbios 68: 189-207), electroporacion (ver, por ejemplo, Buckley et al., 1999, Appl.Environ. Microbiol. 65: 3800-3804) o conjugacion (ver, por ejemplo, Clewell, 1981, Microbiol.Rev. 45: 409436).

Sin embargo, cualquier metodo conocido en la tecnica para la introduccion de ADN en una celula huesped puede ser usado.

[0570] La celula huesped tambien puede ser una eucariota, tal como un mamffero, insecto, planta o celula fungica.

[0571] La celula huesped puede ser una celula fungica. "Hongos" como se utiliza en este caso incluye el phyla Ascomycota, Basidiomycota, Chytridiomycota y Zygomycota al igual que la Oomycota y todos los hongos mitosporicos (como se ha definido por Hawkswort et al., en, Ainswort y Bisby's Dictionary of The Fungi, 8th edicion, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, UK).

[0572] La celula huesped fungica puede ser una celula de levadura. "Levadura" como se utiliza en este caso incluye levadura ascoesporogena (Endomycetales), levadura basidioesporogenea y levadura de los Fungi Imperfecti (Blastomicetos).

Ya que la clasificacion de levadura puede cambiar en el futuro, para los fines de esta invencion, la levadura debe ser definida como se describe en Biology and Activities of Yeast (Skinner, Passmore, and Davenport, editors, Soc. App.Bacteriol.Symposium Series No. 9, 1980).

[0573] La celula huesped de levadura puede ser una Candida, Hansenula, Kluyveromyces, Pichia,

Saccharomyces, Schizosaccharomyces o celula de Yarrowia, tal como un Kluyveromyce lactis, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii,

Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces, norbensis Saccharomyces oviformis o celula de Yarrowia lipolytica.

[0574] La celula huesped fungica puede ser una celula fungica filamentosa. "Fungica filamentosa" incluye todas las formas filamentosas de la subdivision Eumycota y Oomycota (como se ha definido por Hawkswort et al., 1995, supra).

Los hongos filamentosos son generalmente caracterizados por una pared micelial compuesta por quitina, celulosa, glucano, quitosano, manano y otros polisacaridos complejos.

El crecimiento vegetativo es por alargamiento hifal y el catabolismo de carbono es estrictamente aerobico.

En cambio, el crecimiento vegetativo por levaduras tal como Saccharomyces cerevisiae es por el injerto de un talo unicelular y catabolismo de carbono pueden ser fermentativos.

[0575] La celula huesped fungica filamentosa puede ser un Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Bjerkandera, Ceriporiopsis, Chrysosporium, Coprinus, Coriolus, Cryptococcus, Filibasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporte, Mucor, Myceliophthora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomices, Penicillium, Phanerochaete, Phlebia, Piromices, Pleurotus, Schizofilum, Talaromyces, Termoascus, Thielavia, Tolipocladium, Trametes o celula de Trichoderma.

[0576] Por ejemplo, la celula huesped fungica filamentosa puede ser un Aspergillu awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bjerkandera, Ceriporiopsis adusta, Ceriporiopsis aneirina, Ceriporiopsis caregiea, Ceriporiopsis gilvescens, Ceriporiopsis pannocinta, rivulosa Ceriporiopsis, Ceriporiopsis subrufa, Chrysosporium subvermispora, Chrysosporium inops, Chrysosporium keratinophilum, Chrysosporium lucknowense, Chrysosporium merdarium, Chrysosporium pannicola, Chrysosporium queenslandicum, Chrysosporium tropicum, Chrysosporium zonatum, Coprinus cinereus, Coriolus hirsutus, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium, torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Mucor miehei, Myceliophthora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpurogenum, Phanerochaete chrysosporium, Phlebia radiata, Pleurotus eryngii, Thielavia

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terrestris, Trametes villosa, Trametes versicolor, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei o celula de Trichoderma viride.

[0577] Las celulas fungicas se pueden transformar por un proceso que implica la formacion de protoplasto, transformacion de los protoplastos y regeneracion de la pared celular en cierto modo conocida de por si.

Los procedimientos adecuados para la transformacion de Aspergillus y Celulas huesped de Trichoderma se describen en EP 238023, Yelton et al., 1984, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81: 1470-1474 y Christensen et al., 1988, Bio/Technology 6: 1419-1422.

Los metodos adecuados para la transfomacion de las especies de fusarium se describen por Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156, y WO 96/00787.

La levadura se puede transformar utilizando los procedimientos descritos por Becker y Guarente, en Abelson, J.N. and Simon, M.I., editors, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology, Volume 194, pp 182-187, Academic Press, Inc., New York; Ito et al., 1983, J.Bacteriol. 153: 163; and Hinnen et al., 1978, Proc.Natl. Acad.Sci.USA 75: 1920.

Metodos de produccion

[0578] La presente invencion tambien se refiere a metodos de produccion de un polipeptido de la presente invencion, que comprenden (a) cultivo de una celula, que en su forma tipo salvaje produce el polipeptido, bajo condiciones propicias para la produccion del polipeptido; y (b) recuperacion del polipeptido.

En un aspecto preferido, la celula es una celula de Paenibacillus o una celula Microbacterium.

[0579] La presente invencion tambien se refiere a metodos de produccion de un polipeptido de la presente invencion, que comprenden (a) cultivo de una celula huesped recombinante de la presente invencion bajo condiciones propicias para la produccion del polipeptido; y (b) recuperacion del polipeptido.

[0580] Las celulas huesped se cultivan en un medio nutritivo adecuado para la produccion del polipeptido usando metodos conocidos en la tecnica. por ejemplo, la celula se puede cultivar por cultivo en matraz de agitacion o fermentacion a escala pequena o a gran escala (incluyendo, lote continuo, lote alimentado o fermentaciones en estado solido) en el laboratorio o fermentadores industriales realizados en un medio adecuado y bajo condiciones que permiten expresar y/o aislar el polipeptido.

El cultivo tiene lugar en un medio nutritivo adecuado que comprende fuentes de nitrogeno y carbono y sales inorganicas, usando procedimientos conocidos en la tecnica. Los medios adecuados estan disponibles de proveedores comerciales o se pueden preparar segun composiciones publicadas (por ejemplo, en catalogos de la American Type Culture Collection).

Si el polipeptido se segrega en el medio nutritivo, el polipeptido se puede recuperar directamente del medio.

Si el polipeptido no se segrega, este se puede recuperar de lisatos de celula.

[0581] El polipeptido se puede detectar utilizando metodos conocidos en la tecnica que son especfficos para los polipeptidos tales como metodos para la determinacion de celulosa o actividad de xantano liasa.

Estos metodos de deteccion incluyen, pero de forma no limitativa, el uso de anticuerpos especfficos, formacion de un producto enzimatico o desaparicion de un sustrato enzimatico.

Por ejemplo, un ensayo enzimatico se puede utilizar para determinar la actividad del polipeptido.

[0582] El polipeptido se puede recuperar utilizando metodos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, el polipeptido se puede recuperar del medio nutritivo por procedimientos convencionales incluyendo, pero no de forma limitativa, coleccion, centrifugacion, filtracion, extraccion, secado por pulverizacion, evaporacion o precipitacion.

[0583] El polipeptido se puede purificar por una variedad de procedimientos conocidos en la tecnica incluyendo, pero no de forma limitativa, cromatograffa (por ejemplo, intercambio ionico, afinidad, cromatoenfoque hidrofobico y exclusion de tamano), procedimientos electroforeticos (por ejemplo, isoelectroenfoque preparativo), solubilidad diferencial (por ejemplo, precipitacion de sulfato amonico), SDS-PAGE o extraccion (ver, por ejemplo, Protein Purification, Janson and Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989) para obtener polipeptidos sustancialmente puros.

[0584] En un aspecto alternativo, el polipeptido no se recupera, sino que una celula huesped de la presente invencion que expresa el polipeptido se usa como una fuente del polipeptido.

Formulaciones de caldo de fermentacion o composiciones celulares

[0585] La presente invencion tambien se refiere a una formulacion de caldo de fermentacion o una composicion celular que comprende un polipeptido de la presente invencion.

El producto de caldo de fermentacion comprende ademas ingredientes adicionales usados en el proceso de fermentacion, tales como, por ejemplo, celulas (incluyendo, las celulas huesped que contienen el gen que codifica el polipeptido de la presente invencion que se usan para producir el polipeptido de interes), detrito celular, biomasa, medios de fermentacion y/o productos de fermentacion.

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En algunas formas de realizacion, la composicion es un caldo completo con inactivacion celular que contiene acido(s) organico, celulas inactivadas y/o detrito celular, y medio de cultivo.

[0586] El termino "caldo de fermentacion" como se utiliza en este caso se refiere a una preparacion producida por fermentacion celular que experimenta ninguna o una recuperacion minima y/o purificacion.

Por ejemplo, los caldos de fermentacion se producen cuando los cultivos microbianos crecen hasta saturacion, incubados bajo condiciones limitativas de carbon para permitir la sintesis de proteina (por ejemplo, expresion de enzimas por celulas huesped) y secrecion en el medio de cultivo celular.

El caldo de fermentacion puede contener contenidos no fraccionados o fraccionados de los materiales de fermentacion derivados al final de la fermentacion.

Tipicamente, el caldo de fermentacion no se fracciona y comprende el medio de cultivo consumido y los restos celulares presentes despues de las celulas microbianas (por ejemplo, celulas fungicas filamentosas) se eliminan, por ejemplo, por centrifugacion.

En algunas formas de realizacion, el caldo de fermentacion contiene medio de cultivo celular consumido, enzimas extracelulares, y celulas microbianas viables y/o no viables.

[0587] En una forma de realizacion, la formulacion de caldo de fermentacion y las composiciones celulares comprenden un primer componente de acido organico que comprende al menos un 1-5 acido organico de carbono y/o una sal derivada y un segundo componente de acido organico que comprende al menos un 6 o mas acido organico de carbono y/o una sal derivada.

En una forma de realizacion especffica, el primer componente de acido organico es acido acetico, acido formico, acido propionico, una sal derivada o una mezcla de dos o mas de los componentes de acido organico anteriormente mencionados y el segundo es acido benzoico, acido ciclohexanecarboxilico, acido 4-metilvalerico, acido fenilacetico, una sal derivada, o una mezcla de dos o mas de los anteriormente mencionados.

[0588] En un aspecto, la composicion contiene un acido(s) organico, y opcionalmente contiene ademas celulas inactivadas y/o restos celulares.

En una forma de realizacion, las celulas inactivadas y/o detrito celular se eliminan de un caldo completo con inactivacion celular para proporcionar una composicion que es libre de estos componentes.

[0589] Las formulaciones de caldo de fermentacion o composiciones celulares pueden comprender ademas un conservante y/o agente anti-microbiano (por ejemplo; bacterioestatico), incluyendo, pero no de forma limitativa, sorbitol, cloruro sodico, sorbato de potasio y otros conocidos en la tecnica.

[0590] El caldo completo con inactivacion celular o composicion puede contener los contenidos no fraccionados de los materiales de fermentacion derivados al final de la fermentacion.

Tipicamente, el caldo completo con inactivacion celular o composicion contiene el medio de cultivo consumido y detrito celular presente despues de que las celulas microbianas (por ejemplo, celulas fungicas filamentosas) hayan crecido hasta saturacion, hayan crecido bajo condiciones limitantes de carbon para permitir la sintesis de proteina.

En algunas formas de realizacion, el caldo completo con inactivacion celular o composicion contiene el medio de cultivo celular consumido, enzimas extracelulares y celulas fungicas filamentosas muertas.

En algunas formas de realizacion, las celulas microbianas presentes en el caldo completo con inactivacion celular o composicion se pueden permeabilizar y/o lisar usando metodos conocidos en la tecnica.

[0591] Un caldo completo o composicion celular como se describe en este caso es tipicamente un lfquido, pero puede contener componentes insolubles, tales como celulas inactivadas, detrito celular, componentes de medios de cultivo y/o enzima(s) insoluble.

En algunas formas de realizacion, los componentes insolubles se pueden retirar para proporcionar una composicion de lfquido clarificado.

[0592] Las formulaciones de caldo completo y composiciones celulares de la presente invencion se pueden producir por un metodo descrito en WO 90/15861 o WO 2010/096673.

Composiciones detergentes

[0593] En una forma de realizacion, la invencion se dirige a composiciones detergentes que incluyen una enzima de la presente invencion en combinacion con uno o mas componentes de composicion de limpieza adicionales.

La eleccion de componentes adicionales forma parte de la competencia del experto e incluye ingredientes convencionales, incluyendo los componentes no limitativos ejemplares que se exponen abajo.

[0594] La eleccion de componentes puede incluir, para el cuidado textil, la consideracion del tipo de textil que se limpia, el tipo y/o grado de suciedad, la temperatura a la que se realiza, la limpieza y la formulacion del producto detergente.

Aunque los componentes mencionados abajo se categorizan por un tftulo general segun una funcionalidad particular, esto no se interpreta como una limitacion ya que el componente puede tener una o mas

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funcionalidades adicionales que el experto en la materia apreciara.

[0595] La composicion detergente puede ser adecuada para el blanqueo de tejidos tal como por ejemplo tejidos, telas o lino, o para limpiar superficies duras tal como por ejemplo suelos, mesas o lavavajillas.

Enzima de la presente invencion

[0596] En una forma de realizacion de la presente invencion, el polipeptido de la presente invencion se puede anadir a una composicion detergente en una cantidad que corresponde a 0.0001-200 mg de protefna enzimatica, tal como 0.0005-100 mg de protefna enzimatica, preferiblemente 0.001-30 mg de protefna enzimatica, mas preferiblemente 0.005-8 mg de protefna enzimatica, aun mas preferiblemente 0.01-2 mg de protefna enzimatica por litro de solucion de lavado.

[0597] Una composicion para usar en el lavavajillas automatico (ADW), por ejemplo, puede incluir 0.0001%-50%, tal como 0.001 %-20%, tal como 0.01 %-10%, tal como 0.05-5% de protefna enzimatica en peso de la composicion.

[0598] Una composicion para usar en la granulacion de lavanderfa, por ejemplo, puede incluir 0.0001 %-50%, tal como 0.001%-20%, tal como 0.01 %-10%, tal como 0.05%-5% de protefna enzimatica por peso de la composicion.

[0599] Una composicion para usar en el lfquido de lavanderfa, por ejemplo, puede incluir 0.0001 %-10%, tal como 0.001-7%, tal como 0.1%-5% de protefna enzimatica por peso de la composicion.

[0600] La enzima(s) de la composicion detergente de la invencion se puede estabilizar utilizando agentes estabilizantes convencionales, por ejemplo, un poliol tal como propilenglicol o glicerol, un azucar o alcohol de azucar, acido lactico, acido borico o un derivado de acido borico, por ejemplo, un ester de borato aromatico, o un derivado de acido boronico de fenilo tal como 4-formilfenil acido boronico y la composicion se puede formular como se describe en, por ejemplo, WO92/19709 y WO92/19708.

[0601] En determinados mercados, las condiciones de lavado diferentes y, como tal, se usan diferentes tipos de detergentes.

Esto se describe por ejemplo en la EP 1 025 240.

Por ejemplo, en Asia (Japon) se usa un sistema de concentracion de detergente bajo, mientras Estados Unidos usa un sistema de concentracion de detergente medio y Europa usa un sistema de concentracion de detergente alto.

[0602] Un sistema de concentracion detergente bajo incluye detergentes donde menos del aproximadamente 800 ppm de componentes detergentes estan presentes en la agua de lavado.

Los detergentes japoneses se consideran tfpicamente un sistema de concentracion de detergente bajo, ya que estos tienen aproximadamente 667 ppm de componentes detergentes presentes en el agua de lavado.

[0603] Una concentracion de detergente media incluye detergentes donde entre aproximadamente 800 ppm y aproximadamente 2000 ppm de componentes detergentes estan presentes en el agua de lavado.

Los detergentes norteamericanos son generalmente considerados sistemas de concentracion de detergente medios, ya que estos tienen aproximadamente 975 ppm de componentes detergentes presentes en la agua de lavado.

[0604] Un sistema de concentracion de detergente alto incluye detergentes donde mas de aproximadamente 2000 ppm de componentes detergentes estan presentes en la agua de lavado.

Los detergentes europeos generalmente estan considerados sistemas de concentracion de detergente altos, ya que estos tienen aproximadamente 4500-5000 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado.

[0605] Los detergentes latinoamericanos son generalmente detergentes de constructor de fosfato de espuma altos y la gama de detergentes usados en America latina puede pertenecer a concentraciones de detergente medias y altas, ya que estas varian de 1500 ppm a 6000 ppm de componentes detergentes en el agua de lavado. Tales composiciones detergentes son todas las formas de realizacion de la invencion.

[0606] Un polipeptido de la presente invencion tambien se puede incorporar a las formulaciones de detergente descritas en WO97/07202.

Surfactantes

[0607] La composicion detergente puede comprender uno o mas surfactantes, que puede ser anionico y/o cationico y/o no ionico y/o semipolar y/o zwitterionico, o una mezcla de los mismos.

En una forma de realizacion particular, la composicion detergente incluye una mezcla de uno o mas tensioactivos

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no ionicos y uno o mas surfactantes anionicos.

El tensioactivo(s) esta tfpicamente presente a un nivel de aproximadamente 0.1 % a 60% en peso, tal como aproximadamente 1% a aproximadamente 40%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 20%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 10%.

El tensioactivo(s) se elige en base a la aplicacion de limpieza deseada e incluye cualquier tensioactivo(s) convencional conocido en la tecnica. Se puede utilizar cualquier tensioactivo conocido en la tecnica para usar en detergentes.

[0608] Cuando se ha incluido en este, el detergente normalmente contendra de aproximadamente 1% a aproximadamente 40% en peso, tal como de aproximadamente 5% a aproximadamente 30%, incluyendo de aproximadamente 5% a aproximadamente 15% o de aproximadamente 20% a aproximadamente 25% de un tensioactivo anionico.

Los ejemplos no limitativos de surfactantes anionicos incluyen sulfatos y sulfonatos, en particular, alquilbencenosulfonatos lineales (LAS), isomeros de LAS, alquilbencenosulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanosulfonatos, alfa-olefinsulfonatos (AOS), sulfonatos de olefina, sulfonatos de alqueno, alkane-2,3- diilbis(sulfatos), hidroxialcanosulfonatos y disulfonatos, alquilsulfatos (AS) tal como sulfato dodecil de sodio (SDS), sulfatos de alcohol grasos (FAS), sulfatos de alcohol primarios (PAS), etersulfatos alcoholicos (AES o AEOS o FES, conocidos tambien como etoxisulfatos alcoholicos o sulfatos de eter de alcohol graso), alcanosulfonatos secundarios (SAS), sulfonatos de parafina (PS), sulfonatos de ester, esteres de glicerol de acido graso sulfonatado, esteres de metilo de acido graso alfa-sulfo (alfa-SFMe o SES) incluyendo sulfonato de ester metflico (MES), acido alquil- o alquenilsuccfnico, acido succfnico de dodecenil/tetradecenil (DTSA), derivados de acido graso de aminoacidos, diesteres y monoesteres de acido sulfo-succfnico o jabon y combinaciones de los mismos.

[0609] Cuando se incluye en esto, el detergente normalmente contendra de aproximadamente 0% a aproximadamente 10% en peso de un tensioactivo cationico.

Los ejemplos no limitativos de surfactantes cationicos incluyen alquildimetiletanolamina quat (ADMEAQ), bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), cloruro de dimetildistearilamonio (DSDMAC) y alquilbenzildimetilamonio, compuestos de amonio cuaternario de alquilo, compuestos amonio cuaternario alcoxilado (AQA) y combinaciones de los mismos.

[0610] Cuando se incluye en esto, el detergente normalmente contendra de aproximadamente 0.2% a aproximadamente 40% en peso de un tensioactivo no ionico, por ejemplo de aproximadamente 0.5% a aproximadamente 30%, en particular de aproximadamente 1% a aproximadamente 20%, de aproximadamente 3% a aproximadamente 10%, tal como de aproximadamente 3% a aproximadamente 5% o de aproximadamente 8% a aproximadamente 12%.

Ejemplos no limitativos de surfactantes no ionicos incluyen etoxilatos de alcohol (AE o AEO), propoxilatos alcoholicos, alcoholes grasos propoxilados (PFA), esteres alquflicos de acido graso alcoxilado, tales como esteres alquflicos de acido graso etoxilado y/o propoxilado, etoxilatos de alkilofenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglucosidos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de acido graso (FAM), dietanolamidas de acido graso (FADA), monoetanolamidas de acido graso etoxilado (EFAM), monoetanolamidas de acido graso propoxilado (PFAM), amidas de acido graso de polihidroxi alquilo o derivados de n-acilo n-alquilo de glucosamina (glucamidas, GA, o glucamida de acido graso, FAGA), al igual que productos disponibles bajo los nombres comerciales SPAN y TWEEN, y combinaciones de los mismos.

[0611] Cuando se incluye en esto, el detergente normalmente contendra de aproximadamente 0% a

aproximadamente 10% en peso de un tensioactivo semipolar.

Ejemplos no limitativos de surfactantes semipolares incluyen oxidos de amina (AO) tal como oxido de

alquildimetilamina, N-(coco alquil)-N, oxido de n-dimetilamina y N-(tallow-alquil)-N, oxido N-bis(2-

hidroxietil)amina, alcanolamidas de acido graso y alcanolamidas de acido graso etoxilado y combinaciones de los mismos.

[0612] Cuando se incluye en esto, el detergente normalmente contendra de aproximadamente 0% a

aproximadamente 10% en peso de un tensioactivo bipolar.

Ejemplos no limitativos de surfactantes zwitterionicos incluyen betafna, alquildimetilbetafna, sulfobetafna y combinaciones de los mismos.

Hidrotropos

[0613] Un hidrotropo es un compuesto que solubiliza compuestos hidrofobicos en soluciones acuosas (u opuestamente, sustancias polares en un ambiente no polar).

Tfpicamente, los hidrotropos tienen ambos un caracter hidrofflico e hidrofobico (las denominadas propiedades anfifflicas como se conoce por surfactantes); sin embargo la estructura molecular de hidrotropos generalmente no favorecen la autoagregacion espontanea, ver por ejemplo review by Hodgdon and Kaler (2007), Current Opinion in Colloid & Interface Science 12: 121-128.

Los hidrotropos no muestran una concentracion crftica por encima de la cual se produce la autoagregacion como

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se ha descubierto para surfactantes y formacion de lipidos, micelar, laminar u otras mesofases bien definidas.

En cambio, muchos hidrotropos muestran un proceso de agregacion de tipo continuo donde los tamanos de agregados crecen, ya que la concentracion aumenta.

Sin embargo, muchos hidrotropos alteran el comportamiento de fase, estabilidad y propiedades coloidales de sistemas que contienen sustancias de caracter polar y no polar, incluyendo mezclas de agua, aceite, surfactantes y polfmeros.

Los hidrotropos se usan clasicamente a traves de industrias de farma, cuidado personal, alimentos para aplicaciones tecnicas.

El uso de hidrotropos en composiciones detergentes permite por ejemplo formulaciones mas concentradas de surfactantes (como en el proceso de compactacion de detergentes lfquidos que eliminan el agua) sin inducir fenomenos no deseados tales como la separacion de fase o alta viscosidad.

[0614] El detergente puede contener 0-5% en peso, tal como aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 5% de un hidrotropo.

Se puede utilizar cualquier hidrotropo conocido en la tecnica para usar en detergentes.

Ejemplos no limitativos de hidrotropos incluyen sulfonato de benceno de sodio, sulfonato de p-tolueno de sodio (STS), sulfonato de xileno de sodio (SXS), Cumeno sulfonato de sodio (SCS), sulfonato de cimeno de sodio, oxidos de amina, alcoholes y poliglicoleteres, hidroxinaftoato de sodio, sulfonato de hidroxinaftaleno de sodio, sulfato de etilhexilo de sodio y combinaciones de los mismos.

Constructores y co-constructores

[0615] La composicion detergente puede contener aproximadamente 0-65% en peso, tal como aproximadamente 5% a aproximadamente 45% de un constructor o co-constructor de detergente o una mezcla de los mismos.

En un deteregente de lavavajillas, el nivel de constructor es tfpicamente 40-65%, particularmente 50-65%.

El constructor y/o co-constructor puede particularmente ser un agente quelante que forma complejos hidrosolubles con Ca y Mg.

Se puede utilizar cualquier constructor y/o co-constructor conocido en la tecnica para usar en los detergentes de la ropa.

Los ejemplos no limitativos de constructores incluyen zeolitas, difosfatos (pirofosfatos), trifosfatos tales como trifosfato de sodio (STP o STPP), carbonatos tales como carbonato de sodio, silicatos solubles tal como metasilicato de sodio, silicatos estratificados (por ejemplo, SKS-6 de Hoechst), etanolaminas tal como 2- aminoetan-1-ol (MEA), dietanolamina (DEA, tambien conocida como iminodietanol), trietanolamina (TEA, tambien conocida como 2,2'.2"-nitrilotriethanol) e inulina de carboximetilo (CMI), y combinaciones de las mismas.

[0616] La composicion detergente tambien puede contener 0-20% 0-20% en peso, tal como aproximadamente 5% a aproximadamente 10%, de un co-constructor detergente o una mezcla de los mismos.

La composicion detergente puede incluir un co-constructor solo o en combinacion con un constructor, por ejemplo un constructor de zeolita.

Ejemplos no limitativos de co-constructores incluyen homopolfmeros de poliacrilatos o copolfmeros de los mismos, tal como poli(acido acrilico) (PAA) o copoli(acidoacrilico/acido maleico (PAA/PMA).

Otros ejemplos no limitativos incluyen citrato, queladores tales como aminocarboxilatos, aminopolicarboxilatos y fosfonatos, y alquil- o acido alquenilsuccfnico.

Los ejemplos especfficos adicionales incluyen acido 2,2'.2"-nitrilotriacetico (NTA), acido etilenodiaminatetraacetico (EDTA), acido dietilenotriaminopentaacetico (DTPA), acido iminodisuccfnico (IDS), acido etilenodiamina-N,N'-disuccfnico (EDDS), acido metilglicinediacetico (MGDA), acido-N glutamico, acido N- diacetico (GLDA), acido 1-hidroxietano-1,1-difosfonico (HEDP), acido etilenediaminetetra-(metilenefosfonico) (EDTMPA), acido dietilenetriaminepentakis(metilenefosfonico) (DTPMPA o DTMpA), acido N-(2- hidroxietil)iminodiacetico (EDG), acido de acid-N-monoacetico aspartico (ASMA), acido-N aspartico, acido N- diacetico (ASDA), acido de acid-N-monopropionico aspartico (ASMP), acido iminodisuccfnico (IDA), acido N-(2- sulfometil)-aspartico (SMAS), acidos N-(2-sulfoetil)-aspartico (SEAS), acido N-(2-sulfometil)-glutamico (SMGL), acido N-(2-sulfoetil)-glutamico (SEGL), acido N-metiliminodiacetico (MIDA), a-alanina-N, acido N-diacetico (a- ALDA), serina-N, acido N-diacetico (SEDA), isoserina-N, acido N-diacetico (ISDA), fenilalanina-N, acido N- diacetico (PHDA), acido-N antranflico, acido N-diacetico (ANDA), acido-N sulfanflico, acido N-diacetico (SLDA), taurina-N, acido N-diacetico (TUDA) y sulfometil-N, acido N-diacetico (SMDA), N-(2-hidroxietil)-etilidenediamina- N, N, N'-triacetato (HEDTA), dietanolglicina (DEG), dietilentriamina penta (acido metilenefosfonico) (DTPMP), aminotris(acido metilenefosfonico) (ATMP) y combinaciones y sales derivadas.

Otros constructores ejemplares y/o co-constructores se describen, por ejemplo, en la WO 09/102854, US 5977053

Sistemas blanqueantes

[0617] El detergente puede contener 0-50% en peso, tal como aproximadamente 0.1% a aproximadamente 25%, de un sistema blanqueante.

Se puede utilizar cualquier sistema blanqueante conocido en la tecnica para usar en los detergentes de la ropa. Los componentes de sistema blanqueante adecuados incluyen catalizadores de blanqueo, fotoblanqueadores,

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activadores de blanqueo, fuentes de peroxido de hidrogeno tal como percarbonato de sodio y perboratos de sodio, peracidos preformados y sus mezclas derivadas.

Los peracidos preformados adecuados incluyen, pero de forma no limitativa, acidos peroxicarboxflicos y sales, acidos percarbonicos y sales, acidos perimfdicos y sales, acidos peroximonosulfuricos y sales, por ejemplo, oxona (R) y sus mezclas derivadas.

Ejemplos no limitativos de sistemas blanqueantes incluyen sistemas blanqueantes basados en peroxido, que pueden comprender, por ejemplo, una sal inorganica, incluyendo sales de metal alcalino tales como sales de sodio de perborato (normalmente mono- o, tetrahidrato) percarbonato, persulfato, perfosfato, sales de persilicato, en combinacion con un activador blanqueante de formacion de peracido.

El termino activador blanqueante se entiende aquf como un compuesto que reacciona con blanqueador de peroxfgeno como peroxido de hidrogeno para formar un peracido.

El peracido asf formado constituye el blanqueador activado.

Los activadores blanqueantes adecuados para ser usados aquf incluyen aquellos de la clase de esteres de amidas, imidas o anhfdridos.

Los ejemplos adecuados son diamina de tetracetiletileno, (TAED) sodio 4-[(3,5,5-trimetilhexanoil)oxi]benzeno (ISONOBS) sulfonato, acido diperoxido dodecanoico, 4-(dodecanoiloxi)bencenesulfonato (LOBS), 4- (decanoiloxi)bencenesulfonato, 4-(decanoiloxi)benzoato (DOBS), 4-(nonanoiloxi)-bencenesulfonato (NOBS) y/o aquellos descritos en la WO98/17767.

Una familia particular de activadores de blanqueador de interes fue descrita en EP624154 y particularmente preferida en que la familia es citrato de trietilo de acetilo (ATC).

ATC o un corto triglicerido de cadena como triacetina tiene la ventaja de que es respetuoso con el medioambiente, ya que degrada finalmente en el acido cftrico y alcohol.

Ademas el citrato de trietilo de acetilo y triacetina tiene una estabilidad hidrolitical buena en el producto sobre almacenamiento y es un activador de blanqueador eficaz.

ATC finalmente proporciona una capacidad de construccion buena al aditivo de lavanderfa.

Alternativamente, el sistema de blanqueador puede comprender peroxiacidos de, por ejemplo, la amida, imida o tipo sulfona.

El sistema blanqueante tambien puede comprender peracidos tal como acido 6-(ftalimido)peroxihexanoico (PAP). El sistema blanqueante tambien puede incluir un catalizador de blanqueador.

En algunas formas de realizacion del componente de blanqueador puede ser un catalizador organico seleccionado del grupo que consiste en catalizadores organicos con las formulas siguientes:

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(iii) y sus mezclas derivadas; donde cada uno R1 es independientemente un grupo de alquilo ramificado que contiene de 9 a 24 carbonos o grupo alquilo lineal que contiene de 11 a 24 carbonos, preferiblemente cada uno R1 es independientemente un grupo alquilo ramificado que contiene de 9 a 18 carbonos o grupo alquilo lineal que contiene de 11 a 18 carbonos, mas preferiblemente cada R1 esta independientemente seleccionado del grupo que consiste en 2-propilheptilo, 2-butiloctilo, 2-pentilnonilo 2-hexildecilo, n-dodecilo, n-tetradecilo, n-hexadecilo, n-octadecilo, isononilo, isodecilo, isotridecilo e iso-pentadecilo.

Otros sistemas blanqueantes ejemplares se describen, por ejemplo en WO2007/087258; WO2007/087244; WO2007/087259 y WO2007/087242.

Los fotoblanqueadores adecuados por ejemplo pueden ser ftalocianina sulfonatada de zinc Polfmeros

[0618] El detergente puede contener 0-10% en peso, tal como 0.5-5%, 2-5%, 0.5-2% o 0.2-1% de un polfmero. Cualquier polimerico conocido en la tecnica para usar en detergentes se puede utilizar.

El polfmero puede funcionar como un co-constructor como se ha mencionado anteriormente o puede proporcionar antirredeposicion, proteccion de fibra, liberacion de suciedad, inhibicion de transferencia de tinte, limpieza de grasa y/o propiedades anti-espumantes.

Algunos polfmeros pueden tener mas de una de las propiedades anteriormente mencionadas y/o mas de uno de los motivos abajo mencionados.

Los polfmeros ejemplares incluyen (carboximetil)cellulosa (CMC), poli(alcohol polivinflico) (PVA); poli(vinilpirrolidona) (PVP), poli(etileneglicol) o poli(etileno oxido) (PEG), etoxilado poli(etileneimina), inulina de carboximetilo (CMI) y policarboxilatos tales como PAA, PAA/PMA, acido poliaspartico y copolfmeros de lauril metacrilato/acido acrflico, modificado hidrofobicamente CMC (HM-CMC) y siliconas, copolfmeros de acido tereftalico y glicoles oligomericos, copolfmeros de poli(etileno tereftalato) y poli(oxieteno tereftalato) (PET-POET), PVP, poli(vinilimidazole) (PVI); poli(vinilpiridina-N-oxido) (PVPO o PVPNO) y vinilimidazol de polivinilpirrolidona

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(PVPVI).

Otros polfmeros ejemplares incluyen policarboxilatos sulfonatados, oxido de polietileno y oxido de polipropileno (PEO-PPO) y sulfato etoxi dicuaternio.

Otros polfmeros ejemplares se describen en, por ejemplo, la WO 2006/130575.

Sales de los polfmeros anteriormente mencionados tambien se contemplan.

Agentes de matizado de tejido

[0619] Las composiciones detergentes de la presente invencion tambien pueden incluir agentes de matizado de tejido tales como colorantes o pigmentos, que cuando se formulan en composiciones detergentes se pueden depositar sobre un tejido cuando dicho tejido contacta con una solucion de lavado que comprende dichas composiciones detergentes y asf alterar el tinte de dicho tejido a traves de la absorcion/reflexion de luz visible.

Los agentes de blanqueamiento fluorescente emiten al menos alguna luz visible.

En cambio, los agentes de matizado de tejido alteran el tinte de una superficie, ya que estos absorben al menos una porcion del espectro de luz visible.

Los agentes de matizado de tejido adecuados incluyen colorantes y conjugados de arcilla de tinte, y tambien pueden incluir pigmentos.

Los colorantes adecuados incluyen colorantes de molecula pequena y colorantes polimericos.

Los colorantes de molecula pequena adecuados incluyen colorantes de molecula pequena seleccionados del grupo que consiste en colorantes que se encuentran en las clasificaciones de fndice de color (C.I.) de azul directo, rojo directo, violeta directo, azul acido, rojo acido, violeta acido, azul basico, violeta basico y rojo basico o mezclas derivadas, por ejemplo como se describe en WO2005/03274; WO2005/03275; WO2005/03276 y EP1876226.

La composicion detergente preferiblemente comprende de aproximadamente 0.00003 % en peso a aproximadamente 0.2 % en peso, de aproximadamente 0.00008 % en peso a aproximadamente 0.05 % en peso o incluso de aproximadamente 0.0001 % en peso a aproximadamente 0.04 % en peso de agente de matizado de tejido.

La composicion puede comprender de 0.0001 % en peso a 0.2 % en peso de agente de matizado de tejido, esto se puede preferir especialmente cuando la composicion es en forma de una bolsa de dosis unitaria.

Los agentes de matizado adecuados tambien se describen en, por ejemplo la WO 2007/087257 y WO2007/087243.

Enzimas adicionales

[0620] El aditivo de detergente al igual que la composicion detergente pueden comprender una o mas enzimas [adicional]es tal como una proteasa, lipasa, cutinasa, una amilasa, carbohidrasa, celulasa, pectinasa, mananasa, arabinasa, galactanasa, xilanasa, oxidasa, por ejemplo, una lacasa y/o peroxidasa.

[0621] En general las propiedades de la enzima(s) seleccionadas deberfan ser compatibles con el detergente seleccionado, (es decir, pH optimo, compatibilidad con otros ingredientes enzimaticos y no enzimaticos, etc.) y la enzima(s) deberfa estar presente en cantidades eficaces.

[0622] Celulasas: las celulasas adecuadas incluyen aquellas de origen bacteriano o fungico.

Los mutantes qufmicamente modificados o creados geneticamente de protefna se incluyen.

Las celulasas adecuadas incluyen celulasas de los generos Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, por ejemplo, las celulasas fungicas producidas de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila y Fusarium oxysporum descritas en la US 4,435,307, US 5,648,263, US 5,691,178, uS 5,776,757 y WO 89/09259.

[0623] Las celulasas adecuadas especialmente son las celulasas alcalinas o neutrales que tienen beneficios de cuidado de color.

Ejemplos de tales celulasas son celulasas descritas en la EP 0 495 257, EP 0 531 372, WO 96/11262, WO 96/29397, WO 98/08940.

Otros ejemplos son variantes de celulasa tales como las descritas en WO 94/07998, EP 0 531 315, US 5,457,046, US 5,686,593, US 5,763,254, WO 95/24471, WO 98/12307 y PCT/DK98/00299.

[0624] Los ejemplos de celulasas que muestran la actividad endo-beta-1,4-glucanasa (EC 3,2,1,4) son aquellos que se han descrito en la WO02/099091.

[0625] Otros ejemplos de celulasas incluyen las celulasas de familia 45 descritas en WO96/29397 y especialmente variantes de las mismas con sustitucion, insercion y/o delecion en una o mas posiciones correspondientes a las posiciones siguientes en la identidad de SEQ n° 8 de WO 02/099091: 2, 4, 7, 8, 10, 13, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 40, 42,42a, 43, 44, 48, 53, 54, 55, 58, 59, 63, 64, 65, 66, 67, 70, 72, 76, 79, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95,95d, 95h, 95j, 97, 100, 101, 102, 103, 113, 114, 117, 119, 121, 133, 136, 137, 138, 139,140a, 141,143a, 145, 146, 147,150e, 150j, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159,160c, 160e, 160k, 161, 162, 164, 165, 168, 170, 171, 172, 173, 175, 176, 178, 181, 183, 184, 185, 186, 188, 191, 192,

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195, 196, 200 y/o 20, preferiblemente seleccionada entre P19A, G20K, Q44K, N48E, Q119H o Q146 R.

[0626] Las celulasas disponibles comercialmente incluyen Celluzyme™ y Carezyme™ (Novozymes A/S), Clazinase™ y PURADAX HA™ (Genencor internacional Inc.), y KAC-500(B)™ (Kao Corporation).

[0627] Proteasas: la enzima adicional puede ser otra proteasa o variante de proteasa.

La proteasa puede ser de animal, vegetal u origen microbiano, incluyendo mutantes modificados qufmica o geneticamente.

Se prefiere el origen microbiano.

Puede ser una proteasa alcalina, tal como una proteasa serfnica o una metaloproteasa.

Una proteasa serinica puede por ejemplo ser de la S1 familia, tal como tripsina o la S8 familia tal como subtilisina.

Una proteasa de metaloproteasas puede ser por ejemplo una termolisina por ejemplo de la familia M4, M5, M7 o M8.

[0628] El termino "subtilasas" se refiere a un subgrupo de serina proteasa segun Siezen et al., Protein Engng. 4 (1991) 719-737 and Siezen et al. Protein Science 6 (1997) 501-523.

Las serina proteasas son un subgrupo de proteasas caracterizadas por el hecho de que tienen una serina en el sitio activo, que forma un aducto covalente con el sustrato.

Las subtilasas se pueden dividir en 6 sub-divisiones, es decir la familia de subtilisina, la familia de termitasa, la familia de proteinasa K, la familia de peptidasa lantibiotica, la familia kexina y la familia pirolisina.

En un aspecto de la invencion, la proteasa puede ser una subtilasa, tal como una subtilisina o una variante de estas.

Ademas, las subtilasas (y las serina proteasas) se caracterizan por tener dos residuos de aminoacidos de sitio activo aparte de la serina, es decir, una histidina y un residuo de acido aspartico.

[0629] Ejemplos de subtilisinas son aquellas derivadas de Bacillus tal como subtilisina lentus, Bacillus lentus, subtilisina Novo, subtilisina Carlsberg, Bacillus licheniformis, subtilisina BPN', subtilisina 309, subtilisina 147 y subtilisina 168 descrita en la WO 89/06279 y proteasa PD138 (WO 93/18140).

Ejemplos de proteasa de serina adicionales se describen en la WO 98/020115, WO 01/44452, WO 01/58275, WO 01/58276, WO 03/006602 y WO 04/099401.

Un ejemplo de unas variantes de subtilasa puede ser aquellas que tienen mutaciones en cualquiera de las posiciones: 3, 4, 9, 15, 27, 36, 68, 76, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 217, 218, 222, 232, 235, 236, 245, 248, 252 y 274 utilizando la BPN numeracion.

Mas preferidas las variantes de subtilasa pueden comprender las mutaciones: S3T, V4I, S9R, A15T, K27R, *36D, V68A, N76D, N87S,R, *97E, A98S, S99G,D,A, S99AD, S101G,M,R S103A, V104I,Y,N, S106A, G118V,R, H120D,N, N123S, S128L, P129Q, S130A, G160D, Y167A, R170S, A194P, G195E, V199M, V205I, L217D, N218D, M222S, A232V, K235L, Q236H, Q245R, N252K, T274A (usando la numeracion BPN').

Otra proteasa preferida es la proteasa alcalina de Bacillus lentus DSM 5483, como se describe por ejemplo en la WO 95/23221 y variantes de las mismas que se describen en la WO 92/21760, WO 95/23221, Ep 1921147 y EP 1921148.

[0630] Ejemplos de proteasas de tipo tripsina son tripsina (por ejemplo de origen porcino o bovino) y la proteasa de Fusarium descrita en laWO 89/06270 y la WO 94/25583.

Ejemplos de proteasas utiles son las variantes descritas en la WO 92/19729, WO 98/20115, WO 98/20116 y WO 98/34946, especialmente las variantes con sustituciones en una o mas de las siguientes posiciones: 27, 36, 57, 76, 87, 97, 101, 104, 120, 123, 167, 170, 194, 206, 218, 222, 224, 235, y 274.

[0631] Los ejemplos de metaloproteasas son la metaloproteasa neutral como se describe en la WO 07/044993.

[0632] Las enzimas proteasicas disponibles comercialmente preferidas incluyen Alcalase™, Coronase™, Duralase™, Durazym™, Esperase™, Everlase™, Kannase™, Liquanase™, Liquanase Ultra™, Ovozyme™, Polarzyme™, Primase™, Relase™, Savinase™ y Savinase Ultra™, (Novozymes A/S), Axapem™ (Gist-Brocases N.V.), BLAP y BLAP X (Henkel AG & Co.KGaA), Excellase™, FN2™, FN3™, FN4™, Maxaca™, Maxapem™, Maxatase™, Properase™, Purafast™, Purafect™, Purafect OxP™, Purafect Prime™ y Puramax™ (Genencor int.).

[0633] Lipasas y cutinasas: lipasas adecuadas y cutinasas incluyen aquellas de origen bacteriano o fungico.

Se incluyen las enzimas modificadas qufmicamente o mutantes modificadas de protefna.

Los ejemplos incluyen lipasa de Thermomyces, por ejemplo de T. Lanuginosus (llamadas previamente Humicola lanuginosa) como se describe en la EP258068 y EP305216, cutinasa de Humicola, por ejemplo H. Insolens (WO96/13580), lipasa de cepas de Pseudomonas (algunas de estas ahora renombradas como Burkholderia), por ejemplo P. alcaligenes o P. Pseudoalcaligenes (EP218272), P. Cepacia (EP331376), P. Sp. Cepa Sd705 (Wo95/06720 & WO96/27002), P. Wisconsinensis (WO96/12012), lipasas de Streptomyces GDSL-tipo (WO10/065455), cutinasa de Magnaporthe grisea (WO10/107560), cutinasa de Pseudomonas mendocina

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(US5,389,536), lipasa de Thermobifida fusca (WO11/084412), lipasa GeoBacillus stearothermophilus (WO11/084417) lipasa de Bacillus subtilis (WO11/084599) y lipasa de Streptomyces griseus (WO11/150157) y S. Pristinaespirales (WO12/137147).

[0634] Otros ejemplos son lipasas a veces referidas como aciltransferasas o perhidrolasas, por ejemplo aciltransferasas con homologfa a candida antarctica lipasa A (WO10/111143), aciltransferasa de Mycobacterium smegmatis (WO05/56782), perhidrolasas de la CE 7 familia (WO09/67279) y variantes de M. smegmatis Perhidrolasa en particular la S54V variante usada en el producto comercial Gentle Power Bleach de Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO10/100028).

[0635] Otros ejemplos son variantes de lipasa tales como las descritas en EP407225; WO92/05249;

WO94/01541; WO94/25578; WO95/14783; WO95/30744; WO95/35381; WO95/22615; WO96/00292;

WO97/04079; WO97/07202; WO00/34450; WO00/60063; WO01/92502; WO07/87508 y WO09/109500.

[0636] Productos de lipasa comercial preferida incluyen incluyen Lipolase™, Lipex™; Lipolex™ y Lipoclean™ (Novozymes A/S), Lumafast (originalmente de Genencor) y Lipomax (originalmente de Gist-Brocades).

Amilasas

[0637] La amilasa puede ser una alfa-amilasa, una beta-amilasa o una glucoamilasa y puede ser de origen bacteriano o fungico.

Se incluyen los mutantes qufmicamente modificados o creados geneticamente de protefna.

Las amilasas incluyen, por ejemplo, alfa-amilasas obtenidas de Bacillus, por ejemplo, una cepa especial de Bacillus licheniformis, descrita con mas detalle en la GB 1,296,839.

[0638] Los ejemplos de amilasas son aquellas que tienen SEQ ID NO: 3 en WO 95/10603 o variantes que tienen un 90% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 3 de las mismas.

Las variantes preferidas se describen en la WO 94/02597, WO 94/18314, WO 97/43424 y SEQ ID NO: 4 de WO 99/019467, tales como variantes con sustituciones en una o mas de las siguientes posiciones: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408 y 444 de SEQ ID NO: 3 en la WO 95/10603.

[0639] Otras amilasas que se pueden usar son amilasas con SEQ ID NO: 6 en WO 02/010355 o variantes de las mismas que tienen un 90% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 6.

Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 6 son aquellas que tienen una delecion en posiciones 181 y 182 y una sustitucion en la posicion 193.

[0640] Otros ejemplos de amilasa son alfa-amilasa hfbrida que comprenden residuos 1-33 de la alfa-amilasa derivada de B. amyloliquefaciens mostrada en SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y residuos 36-483 de la alfa- amilasa B. licheniformis mostrada en SEQ ID NO: 4 de WO 2006/066594 o variantes con un 90% de identidad de secuencia de las mismas.

Las variantes preferidas de esta alfa-amilasa hfbrida son aquellas con una sustitucion, una delecion o una insercion en una de mas de las siguientes posiciones: G48; T49; G107; H156; A181; N190; M197; I201; A209 y Q264.

Muchas variantes preferidas de la alfa-amilasa hfbrida que comprenden residuos 1-33 de la alfa-amilasa derivada de B. amyloliquefaciens mostrada en SEQ ID NO: 6 de WO 2006/066594 y residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 son aquellas con las sustituciones:

M197T;

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S; o G48+T49+G107+H156+A181+N190+1201+A209+Q264.

[0641] Otros ejemplos de amilasa son amilasas con SEQ ID NO: 6 en WO 99/019467 o variantes de las mismas con un 90% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 6.

Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 6 son aquellas que tienen una sustitucion, una delecion o una insercion en una o mas de las siguientes posiciones: R181; G182; H183; G184; N195; I206; E212; E216 y K269.

Las amilasas preferidas particularmente son aquellas que tienen delecion en posiciones G182 y H183 o posiciones H183 y G184.

[0642] Las amilasas adicionales son aquellas con la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 de WO 96/023873 o variantes de las mismas con un 90% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7.

Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 7 son aquellas que tienen una sustitucion, una delecion o una insercion en una o mas de las siguientes posiciones: 140, 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 243, 260, 269,304 y 476.

Las variantes mas preferidas son aquellas con una delecion en posiciones 182 y 183 o posiciones 183 y 184. Muchas variantes de amilasa preferidas de SEQ ID NO: 1, identidad de SEQ n° 2 o identidad de SEQ n° 7 son

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aquellas que tienen una delecion en posiciones 183 y 184 y una sustitucion en posiciones 140, 195, 206, 243, 260,304 y 476.

[0643] Otras amilasas que se pueden usar son amilasas con SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815, SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712 o variantes de las mismas con un 90% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2 de WO 08/153815 o 90% identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712.

Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 10 en WO 01/66712 son aquellas con una sustitucion, una delecion o una insercion en una de mas de las siguientes posiciones: 176, 177, 178, 179, 190, 201,207, 211 y 264.

[0644] Otras amilasas que se pueden usar son amilasas con SEQ ID NO: 2 de WO 09/061380 o variantes de las mismas con 90% identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas con una sustitucion, una delecion o una insercion en una de mas de las siguientes posiciones: Q87; Q98; S125; N128; T131; T165; K178; R180; S181; T182; G183; M201; F202; N225; S243; N272; N282; Y305; R309; D319; Q320; Q359; K444 y G475.

Variantes mas preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen la sustitucion en una de mas de las siguientes posiciones: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E,R, N272E,R, S243Q,A,E,D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E y G475K y/o delecion en la posicion R180 y/o S181.

Muchas variantes de amilasa preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen las sustituciones:

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; o

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K donde la variante opcionalmente comprende ademas una sustitucion en la posicion 243 y/o una delecion en la posicion 180 y/o posicion 181.

[0645] Otros ejemplos de amilasas son la alfa-amilasa con SEQ ID NO: 12 en WO01/66712 o una variante con al menos 90%, tal como al menos 95%, identidad de secuencia con SEQ ID NO: 12.

Las variantes de amilasa preferidas son aquellas que tienen una sustitucion, una delecion o una insercion en una de mas de las siguientes posiciones de SEQ ID NO: 12 en WO01/66712: R118; N174 G182; D183; G184; G186; W189; N195; M202; Y298; N299; K302; S303; N306; R310; N314 R320; H324; E345; Y396; R400; W439; R444; N445; K446; Q449; R458; N471; N484.

Las amilasas preferidas particulares incluyen variantes que tienen una delecion de D183 y G184 y que tienen las sustituciones R118K, N195F, R320K y R458K, y una variante que adicionalmente tienen sustituciones en una o mas posiciones seleccionadas del grupo: M9; g149; G182; G186; M202; T257; Y295; N299; M323; E345 y A339, la mayorfa prefirio una variante que adicionalmente tiene sustituciones en todas estas posiciones.

[0646] Las amilasas disponibles comercialmente son Duramyl™, Termamyl™, Fungamyl™, Stainzyme ™, Stainzyme Plus™, Natalase™ y BAN™ (Novozymes A/S), Rapidase™ y Purastar™ (de Genencor internacional Inc.).

[0647] Peroxidasas/oxidasas: peroxidasas/oxidasas adecuadas incluyen aquellas de origen de planta, bacteriano o fungico.

Ejemplos de peroxidasas utiles incluyen peroxidasas de Coprinus, por ejemplo, de C. Cinereus y variantes de las mismas como aquellas descritas en la WO 93/24618, WO 95/10602 y WO 98/15257.

[0648] Peroxidasas disponibles comercialmente incluyen Guardzyme™ (Novozymes A/S).

[0649] La enzima(s) detergente se puede incluir en una composicion detergente anadiendo aditivos separados que contienen una o mas enzimas, o anadiendo un aditivo combinado que comprende todas estas enzimas.

Un aditivo de detergente de la invencion, es decir, un aditivo separado o un aditivo combinado, puede ser formulado, por ejemplo, como un granulado, lfquido, lodo, etc. Formulaciones de aditivo de detergente preferidas son granulados, en particular granulados no pulverulentos, lfquidos, en particular lfquidos estabilizados o suspensiones acuosas.

[0650] Los granulados no pulverulentos se pueden producir, por ejemplo, como se describe en US 4,106,991 y 4,661,452 y pueden opcionalmente ser recubiertos por metodos conocidos en la tecnica. Los ejemplos de materiales de recubrimiento ceroso son productos de poli(etileno oxido) (polietilenoglicol; PEG) con pesos molares medios de 1000 a 20000; nonilfenoles etoxilados con de 16 a 50 unidades de oxido de etileno; alcoholes grasos etoxilados donde el alcohol contiene de 12 a 20 atomos de carbono y donde hay 15 a 80 unidades de oxido de etileno; alcoholes grasos; acidos grasos; y mono- y di- y trigliceridos de acidos grasos.

Ejemplos de materiales de recubrimiento que forman pelfculas adecuadas para aplicacion por tecnicas de lecho fluidizado se dan en GB 1483591.

Las preparaciones enzimaticas lfquidas pueden, por ejemplo, ser estabilizadas anadiendo un poliol tal como propilenglicol, un azucar o alcohol de azucar, acido lactico o acido borico segun metodos establecidos.

Las enzimas protegidas se pueden preparar segun el metodo descrito en la EP 238,216.

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Materiales complementarios

[0651] Cualquier componente detergente conocido en la tecnica para usar en los detergentes de la ropa tambien se puede utilizar.

Otros componentes detergentes opcionales incluyen agentes anticorrosivos, agentes anti-reductores, agentes antiredeposicion de suciedad, agentes antiarrugas, bactericidas, ligantes, inhibidores de corrosion, agentes de desintegrantes/desintegracion, colorantes, estabilizadores enzimaticos (incluyendo acido borico, boratos, CMC y/o polioles tal como propilenglicol), tejidos acondicionadores incluyendo arcillas, productos de relleno/tratamiento, abrillantadores agentes/opticos de blanqueamiento fluorescente, potenciadores de espuma, reguladores (agua de lavado) de espuma, perfumes, agentes suspensores de suciedad, suavizantes, supresores de espuma, inhibidores de decoloracion y agentes de mecha, bien solos o en combinacion.

Cualquier ingrediente conocido en la tecnica para usar en los detergentes de la ropa se puede utilizar.

La eleccion de tales ingredientes es claramente parte de la competencia del experto.

[0652] Dispersantes: las composiciones detergentes de la presente invencion tambien pueden contener dispersantes.

En particular, los detergentes en polvo pueden comprender dispersantes.

Los materiales organicos hidrosolubles adecuados incluyen los acidos homo- o co-polimericos o sus sales, donde el acido policarboxflico comprende al menos dos radicales de carboxilo separados entre si por no mas de dos atomos de carbono.

Los dispersantes adecuados por ejemplo se describen en Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc.

[0653] Los agentes de inhibicion de transferencia de tinte: las composiciones detergentes de la presente invencion pueden incluir tambien uno o mas agentes de inhibicion de transferencia de tinte.

Los agentes inhibidores de transferencia de tinte polimericos adecuados incluyen, pero de forma no limitativa, polfmeros de polivinilpirrolidona, polfmeros n-oxido de poliamina, copolfmeros de N-vinilpirrolidona y N- vinilimidazola, poliviniloxazolidonas y polivinilimidazolas o mezclas derivadas.

En caso de existir en una composicion objeto, los agentes de inhibicion de transferencia de tinte pueden estar presentes a niveles de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 10%, de aproximadamente 0.01% a aproximadamente 5% o incluso de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 3% en peso de la composicion.

[0654] Agente de blanqueamiento fluorescente: las composiciones detergentes de la presente invencion preferiblemente tambien contendra componentes adicionales que pueden tenir artfculos que se limpian, tales como agente de blanqueamiento fluorescente o blanqueadores opticos.

Donde esta presente el abrillantador es preferiblemente a un nivel de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 0,5%.. Cualquier agente de blanqueamiento fluorescente adecuado para usar en una composicion detergente para ropa se puede utilizar en la composicion de la presente invencion.

Los agentes de blanqueamiento fluorescente usados mas frecuentemente son aquellos de las clases de derivados de acido de diaminoestilbeno sulfonico, derivados de diarilpirazolina y derivados de bisfenil-distirilo. Ejemplos del tipo de derivado de acido de diaminoestilbeno sulfonico de agentes de blanqueamiento fluorescente incluyen las sales de sodio de: 4,4'-bis-(2-dietanolamino-4-anilino-s-triazina-6-ilamino) estilbeno-2,2'-disulfonato 4,4'-bis-(2,4-dianilino-s-triazina-6-ilamino) estilbeno-2,2'-disulfonato 4,4'-bis-(2-anilino-4(N-metil-N-2-hidroxi- etilamino)-s-triazina-6-ilamino) estilbeno-2,2'-disulfonato, 4,4'-bis-(4-fenil-2,1,3-triazol-2-il)etilbeno-2,2'-disulfonato 4,4'-bis-(2-anilino-4(1-metil-2-hidroxi-etilamino)-s-triazina-6-ilamino) estilbenp-2,2'-disulfonato y 2-(estilbil-4"- napto-1..2':4,5)-1,2,3-trizol-2"-sulfonato.

Agentes de blanqueamiento fluorescentes preferidos son Tinopal DMS y Tinopal CBS disponibles de Ciba-Geigy AG, Basilea, Suiza.

Tinopal DMS es la sal disodica de 4,4'-bis-(2-morfolino-4 anilino-s-triazina-6-ilamino) estilbeno disulfonato.

Tinopal CBS es la sal disodica de 2,2'-bis-(fenil-estiril) disulfonato.

Preferidos tambien son los agentes de blanqueamiento fluorescentes es el disponible comercialmente Parawhite, KX suministrado por Paramount Minerals and Chemicals, Mumbai, India.

Otro fluoreszador adecuado para usar en la invencion incluye las 1-3-diarilo pirazolinas y las 7- alquilaminocumarinas.

Los niveles de abrillantador fluorescentes adecuados incluyen niveles inferiores de aproximadamente 0.01, de 0.05, de aproximadamente 0.1 o incluso de aproximadamente 0.2 % en peso a niveles superiores de 0.5 o incluso 0.75 % en peso.

[0655] Los polfmeros de liberacion de suciedad: las composiciones detergentes de la presente invencion pueden tambien incluir uno o mas polfmeros de liberacion de suciedad que ayudan a la eliminacion de suciedad de tejidos tales como algodon y de base de poliester, en particular, la eliminacion de suciedad hidrofobica de tejidos a base de poliester.

Los polfmeros de liberacion de suciedad pueden por ejemplo ser polfmeros no ionicos o anionicos basados en tereftalato, polivinilo caprolactam y copolfmeros relativos, copolfmeros de injerto de vinilo, poliamidas de poliester ver por ejemplo capftulo 7 en Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc.

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Otro tipo de polfmeros de liberacion de suciedad son polfmeros anfifflicos de limpieza de grasa alcoxilada que comprenden una estructura de nucleo y una pluralidad de grupos de alcoxilato fijados a esa estructura de nucleo. La estructura de nucleo puede comprender una estructura de polialquilenimina o una estructura de polialcanolamina como se describe en detalle en la WO 2009/087523.

Ademas, los co-polimeros de injerto aleatorio son polfmeros de liberacion de suciedad adecuados. Los co- polimeros de injerto adecuados se describen con mas detalle en la WO 2007/138054, WO 2006/108856 y WO 2006/113314.

Otros polfmeros de liberacion de suciedad son estructuras de polisacaridos sustituidas especialmente estructuras celulosicas sustituidas tales como derivados de celulosa modificados tales como los descritos en la EP 1867808 o WO 2003/040279.

Los polfmeros celulosicos adecuados incluyen celulosa, eteres de celulosa, esteres de celulosa, amidas de celulosa y sus mezclas derivadas.

Los polfmeros celulosicos adecuados incluyen celulosa anionicamente modificada, celulosa modificada nonionicamente, celulosa modificada cationicalmente, celulosa zwitterionicamente modificada y sus mezclas derivadas.

Polfmeros celulosicos adecuados incluyen metilcelulosa, carboximetilcelulosa, etilcelulosa, etilcelulosa hidroxilo, metilcelulosa de propilo hidroxilo, ester de carboximetilcelulosa y sus mezclas derivadas.

[0656] Agentes de antireposicion: las composiciones detergentes de la presente invencion pueden tambien incluir uno o mas agentes de antireposicion tales como carboximetilcelulosa (CMC), alcohol polivinflico (PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno y/o polietilenoglicol (PEG), homopolfmeros de acido acrflico, copolfmeros de acido acrflico y acido maleico, y polietilenoiminas etoxiladas.

Los polfmeros basados en celulosa descritos bajo polfmeros de liberacion de suciedad de arriba tambien pueden funcionar como agentes de antireposicion.

[0657] Otros materiales complementarios adecuados incluyen, pero de forma no limitativa, agentes anti- reductores, agentes antiarrugas, bactericidas, ligantes, portadores, colorantes, estabilizadores enzimaticos, suavizantes, productos de relleno, reguladores de espuma, hidrotropos, perfumes, pigmentos, supresores de gleba, solventes y estructurantes para detergentes lfquidos y/o agentes de elastizacion de estructura.

Formulacion de productos de detergente

[0658] La composicion detergente de la invencion puede ser en cualquier forma conveniente, por ejemplo, una barra, un comprimido homogeneo, un comprimido con dos o mas capas, una bolsa con uno o mas compartimentos, un polvo regular o compacto, un granulo, una pasta, un gel, o un lfquido regular, compacto o concentrado.

Hay un numero de formas de formulacion detergente tales como capas (misma o fases diferentes), bolsas, al igual que formas para unidad de dosificacion de maquina.

[0659] Las bolsas se pueden configurar como unico o multicompartimentos.

Esto puede ser de cualquier modo, forma y material que sea adecuado para mantener la composicion, por ejemplo sin permitir la liberacion de la composicion de la bolsa antes del contacto de agua.

La bolsa esta hecha de pelfcula soluble en agua que incluye un volumen interno.

Dicho volumen interno se puede dividir en compartimentos de la bolsa.

Las pelfculas preferidas son materiales polimericos preferiblemente polfmeros que se forman en una pelfcula u hoja.

Los polfmeros preferidos, copolfmeros o derivados de los mismos son poliacrilatos seleccionados y copolfmeros de acrilato solubles en agua, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, dextrina de sodio, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, maltodextrina, poli metacrilato, de la forma mas preferible copolfmeros de alcohol polivinflico y, metilcelulosa de hidroxipropilo (HPMC).

Preferiblemente el nivel de polfmero en la pelfcula por ejemplo PVA es al menos aproximadamente 60%.

Peso molecular medio preferido tfpicamente sera aproximadamente 20,000 a aproximadamente 150,000.

Las pelfculas tambien pueden ser composiciones de mezcla que comprenden mezclas de polfmero degradable hidrolfticamente y soluble en agua tales como poliactida y alcohol polivinflico (conocidos bajo la referencia comercial M8630 como se ha vendido por Chris Craft In. Prod. De Gary, Ind., US) mas plastificadores como glicerol, glicerol de etileno, propilenglicol, sorbitol y sus mezclas derivadas.

Las bolsas pueden comprender una composicion de limpieza de lavanderfa solida o componentes de pieza y/o una composicion de limpieza de lfquido o componentes de pieza separados por la pelfcula soluble en agua.

El compartimento para componentes lfquidos puede ser diferente en la composicion que los compartimentos que contienen solidos. Ref: (US2009/0011970 A1).

[0660] Los ingredientes detergentes se pueden separar ffsicamente entre sf por compartimentos en bolsas disolubles en agua o en capas diferentes de comprimidos.

Asf, la interaccion de almacenamiento negativo entre componentes se puede evitar.

Los perfiles de disolucion diferentes de cada uno de los compartimentos tambien pueden dar lugar a disolucion retardada de componentes seleccionados en la solucion de lavado.

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[0661] Un liquido o detergente en gel, que no es una unidad dosificada, puede ser acuoso, que tfpicamente contiene al menos 20% en peso y hasta 95% agua, tal como hasta aproximadamente 70% agua, hasta aproximadamente 65% agua, hasta aproximadamente 55% agua, hasta aproximadamente 45% agua, hasta aproximadamente 35% agua.

Otros tipos de lfquidos, incluyendo sin limitacion, alcanoles, aminas, dioles, eteres y polioles se pueden incluir en un liquido acuoso o gel.

Un liquido acuoso o detergente en gel puede contener de 0-30% de solvente organico.

Un liquido o detergente en gel puede ser no acuoso.

Barras de jabon de la ropa

[0662] Las enzimas de la invencion se pueden anadir a barras de jabon de la ropa y usar para la ropa, tejidos y/o textiles de lavado a mano.

El termino barra de jabon de la ropa incluye barras de la ropa, barras de jabon, barras de combo, barras syndet y barras detergentes.

Los tipos de barra normalmente difieren en el tipo de tensioactivo que estos contienen y el termino barra de jabon de la ropa incluye aquellos jabones que contienen acidos grasos y/o jabones sinteticos.

La barra de jabon de la ropa tiene una forma ffsica que es solida y no un liquido, gel o un polvo a temperatura ambiente.

El termino solido se define como una forma ffsica que no significativamente cambia a lo largo del tiempo, es decir si un objeto solido (por ejemplo barra de jabon de la ropa) se coloca dentro de un contenedor, el objeto solido no cambia para llenar el contenedor que esta colocado en este.

La barra es un solido tfpicamente en forma de barra pero puede ser en otras formas solidas tales como circular u oval.

[0663] La barra de jabon de la ropa puede contener una o mas enzimas adicionales, inhibidores de proteasa tales como peptido aldehfdos (o aducto de hidrosulfito o aducto hemiacetal), acido borico, borato, borax y/o derivados de acido fenilboronico tal como acido 4-formilfenilboronico, uno o mas jabones o surfactantes sinteticos, polioles tal como glicerina, compuestos de control de pH tales como acidos grasos, acido cftrico, acido acetico y/o acido formico, y/o una sal de un cation monovalente y un anion organico donde el cation monovalente puede ser por ejemplo Na+, K+ o NH4+ y el anion organico puede ser por ejemplo formiato, acetato, citrato o lactato de manera que la sal de un cation monovalente y un anion organico puede ser, por ejemplo, formiato sodico.

[0664] La barra de jabon de la ropa tambien puede contener agentes complejantes como EDTA y HEDP, perfumes y/o tipo diferente de productos de relleno, surfactantes por ejemplo surfactantes sinteticos anionicos, constructores, agentes de liberacion de suciedad polimericos, queladores detergentes, agentes estabilizantes, productos de relleno, tintes, colorantes, inhibidores de transferencia de tinte, policarbonatos alcoxilados, supresores de espuma, estructurantes, ligantes, agentes de lixiviacion, activadores de blanqueo, agentes de eliminacion de suelo arcilloso, agentes de antireposicion, agentes de dispersion polimericos, abrillantadores, suavizantes, perfumes y/u otros compuestos conocidos en la tecnica.

[0665] La barra de jabon de la ropa se puede procesar en el equipo de fabricacion de barra de jabon de la ropa convencional tal como pero no limitado a: mezcladores, extrusoras, p. ej una extrusora de vacfo de doble etapa, extrusoras, cortadores, estampador de logo, tuneles de enfriamiento y envoltorios.

La invencion no esta limitada a preparar las barras de jabon de la ropa por cualquier metodo unico.

La premezcla de la invencion se puede anadir al jabon en diferentes etapas del proceso.

Por ejemplo, la premezcla con un jabon, una enzima, opcionalmente una o mas enzimas adicionales, un inhibidor de proteasa y una sal de un cation monovalente y un anion organico se puede preparar y la mezcla luego ser prensada.

La enzima y enzimas adicionales opcionales se pueden adicionar al mismo tiempo como el inhibidor de proteasa por ejemplo en forma lfquida.

Ademas, de la etapa de mezcla y la etapa de prensado, el proceso puede comprender ademas los pasos del fresado, extrusion, corte, estampado, enfriamiento y/o embalaje.

Formulaciones de detergente granuloso

[0666] Un detergente granuloso se puede formular como se describe en la WO09/092699; EP1705241; EP1382668; WO07/001262; US6472364; WO04/074419 o WO09/102854.

Otras formulaciones de detergente utiles se describen en WO09/124162; WO09/124163; WO09/117340; WO09/117341; WO09/117342; WO09/072069; WO09/063355; WO09/132870; WO09/121757; WO09/112296;

WO09/112298; WO09/103822; WO09/087033; WO09/050026; WO09/047125; WO09/047126; WO09/047127;

WO09/047128; WO09/021784; WO09/010375; WO09/000605; WO09/122125; WO09/095645; WO09/040544;

WO09/040545; WO09/024780; WO09/004295; WO09/004294; WO09/121725; WO09/115391; WO09/115392;

WO09/074398; WO09/074403; WO09/068501; WO09/065770; WO09/021813; WO09/030632 y WO09/015951.

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[0667] WO2011025615; WO2011016958; WO2011005803; WO2011005623; WO2011005730;

WO2011005904

WO2011005813

WO2010107635

WO2010033979

WO2010024470

WO2011005630

WO2010135238

WO2010090915

WO2010030540

WO2011005830

WO2010120863

WO2010033976

WO2010030541

WO2011005912

WO2010108002

WO2010033746

WO2010030539

WO2011005905

WO2010111365

WO2010033747

WO2010024467

WO2010025161; WO2010014395; WO2010044905,

WO2011005844

WO2011005910

WO2010108000

WO2010033897

WO2010024469

[0668] WO2010145887; WO2010142503; WO2010122051; WO2010102861; WO2010099997; WO2010084039; WO2010076292; WO2010069742; WO2010069718; WO2010069957; WO2010057784; WO2010054986; WO2010018043; WO2010003783; WO2010003792,

[0669] WO2011023716; WO2010142539; WO2010118959; WO2010115813; WO2010105942; WO2010105961 WO2010105962; WO2010094356; WO2010084203; WO2010078979; WO2010072456; WO2010069905

WO2010076165; WO2010072603; WO2010066486; WO2010066631; WO2010066632; WO2010063689

WO2010060821; WO2010049187; WO2010031607; WO2010000636,

Metodo para producir la composicion

[0670] La presente invencion tambien se refiere a metodos de la produccion de la composicion.

El metodo puede ser pertinente para la estabilidad (almacenamiento) de la composicion detergente: por ejemplo metodo de premezcla de barra de jabon WO2009155557.

Usos

[0671] La presente invencion tambien esta dirigida a metodos para utilizar sus composiciones.

Dicha invencion se puede utilizar por ejemplo en cualquier aplicacion que requiera la degredacion de goma xantana, tal como en detergentes y en la industria de aceite.

En la industria de aceite la goma xantana se usa para aumentar la viscosidad del fluido de perforacion, en particular el barro de perforacion.

En todos tales usos allf tambien estara la necesidad de reducir la viscosidad por la degradacion de la goma xantana y para este tipo de reduccion de viscosidad una composicion de la invencion que comprende una xantano liasa y una endoglucanasa GH 9 con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa puede ser adecuadamente usada.

Uso para degradar goma xantana

[0672] La goma xantana ha sido usada como un ingrediente en muchos productos de consumo incluyendo alimentos y cosmeticos y se ha descubierto su uso en la industria de aceite.

Por lo tanto, la degredacion de goma xantana puede resultar en procesos de limpieza mejorados, como la eliminacion mas facil de gomas que contienen manchas, tales como goma xantana, al igual que la degredacion de goma xantana que es frecuentemente usada en la industria de aceite y de perforacion.

Asf la presente invencion se refiere al uso de GH9 endoglucanasas de la invencion o composiciones de la misma para degradar goma xantana.

La presente invencion tambien esta dirigida al uso de xantano liasas de la invencion o composiciones de la misma para degradar goma xantana.

Una forma de realizacion es el uso de GH9 endoglucanasas de la invencion junto con xantano liasas de la invencion o composiciones de la misma para degradar goma xantana.

La degredacion de goma xantana puede preferiblemente ser medida utilizando el ensayo de reduccion de viscosidad (ViPr ensayo) como se describe en el ejemplo 6 o alternativamente el ensayo de extremidades de reduccion como se describe en el ejemplo 6 o el ensayo colorimetrico como se describe en los ejemplos 25 y 26.

[0673] En una forma de realizacion, la degredacion de goma xantana se puede medir utilizando el ensayo de reduccion de viscosidad como se describe en este caso en la goma xantana.

Una forma de realizacion preferida es el uso de goma xantana (0.25% o 0.5%) en el tampon o agua donde el descenso de viscosidad se mide despues de 5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 1.5 horas, 2 horas, 2.5 horas, 3 horas, 3.5 horas o 4 horas.

Una forma de realizacion mas preferida es el uso de goma xantana (0.25%) en el agua donde el descenso de viscosidad es medida despues de 3 horas.

La concentracion enzimatica preferida usada para la GH9 endoglucanasa y xantano liasa es 31.25 mg EP/L y 31.25 mg EP/L respectivamente.

[0674] El descenso de viscosidad para la degredacion de goma xantana es al menos 200 Pa cuando se usa el ensayo de reduccion de viscosidad.

El descenso de viscosidad para la degredacion de goma xantana es al menos 250 Pa cuando se usa el ensayo de reduccion de viscosidad.

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El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 300 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 350 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 400 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 450 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 500 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad de reduccion de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 550 Pa cuando se usa el ensayo

El descenso de viscosidad: para la degredacion de goma xantana es al menos 600 Pa cuando se usa el ensayo

de reduccion de viscosidad.

[0675] GH9 actividad de endoglucanasa puede alternativamente ser medida reduciendo extremidades en la goma xantana pretratada con xantano liasa utilizando el ensayo colorimetrico desarrollado por Lever (1972), Anal.Biochem. 47: 273-279, 1972.

Una forma de realizacion preferida es el uso de 0.1 % goma xantana pretratada con xantano liasa.

La degredacion de goma xantana pretratada con xantano liasa se puede determinar calculando la diferencia entre la forma preliminar y muestra donde una diferencia superior a 0.5 mAU, preferiblemente mas del 0.6 mAU, mas preferiblemente mas del 0.7 mAU o aun mas preferiblemente mas del 0.8 mAU muestra una degredacion de goma xantana pretratada con xantano liasa.

[0676] Actividad de xantano liasa puede alternativamente ser medida reduciendo las extremidades en la goma xantana utilizando el ensayo colorimetrico desarrollado por Lever (1972), Anal.Biochem. 47: 273-279, 1972.

Una forma de realizacion preferida es el uso de 0.1 % de goma xantana.

La degredacion de goma xantana se puede determinar calculando la diferencia de calculo entre la forma preliminar y muestra donde una diferencia superior a 0.1 mAU, preferiblemente mas del 0.15 mAU, mas preferiblemente mas del 0.2 mAU o aun mas preferiblemente mas del 0.25 mAU muestra la degredacion de goma xantana.

[0677] GH9 endoglucanasa y actividad de xantano liasa puede alternativamente ser medida reduciendo extremidades en la goma xantana utilizando el ensayo colorimetrico desarrollado por Lever (1972), Anal.Biochem. 47: 273-279, 1972.

Una forma de realizacion preferida es el uso de 0.1% de goma xantana.

La degredacion de goma xantana se puede determinar calculando la diferencia entre forma preliminar y muestra donde una diferencia superior a 0.4 mAU, preferiblemente mas del 0.5 mAU, mas preferiblemente mas del 0.6 mAU o aun mas preferiblemente mas del 0.8 mAU muestra la degredacion de goma xantana. La invencion tambien se refiere a metodos para la degradacion de goma xantana que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion a goma xantana.

La invencion se refiere ademas a metodos para la degradacion de goma xantana que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas xantano liasas de la invencion para goma xantana.

Una forma de realizacion es un metodo para la degradacion de goma xantana que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion junto con una o mas xantano liasas de la invencion para goma xantana.

Uso en detergentes.

[0678] La presente invencion se refiere al uso de GH9 endoglucanasas de la invencion o composiciones de la misma en procesos de limpieza tales como el lavado de textiles y tejidos (por ejemplo, lavado de lavanderfa de hogar y lavado de lavanderfa industrial), al igual limpieza de superficie dura industrial y de hogar, tal como lavavajillas.

Las GH9 endoglucanasas de la invencion se pueden anadir a una composicion detergente que comprende de uno o mas componentes detergentes.

[0679] La presente invencion tambien esta dirigida al uso de xantano liasas de la invencion o composiciones de la misma en los procesos de limpieza tal como el lavado de textiles y tejidos (por ejemplo lavado de lavanderfa de hogar y lavado de lavanderfa industrial), al igual que limpieza de superficie dura industrial y de hogar, tal como lavavajillas.

Las xantano liasas de la invencion se pueden adicionar a una composicion detergente que comprende de uno a mas componentes detergentes.

[0680] Una forma de realizacion es el uso de GH9 endoglucanasas de la invencion junto con xantano liasas de la invencion o composiciones de la misma en los procesos de limpieza tales como el lavado de textiles y tejidos (por ejemplo lavado de lavanderfa de hogar y lavado de lavanderfa industrial), al igual que limpieza de superficie

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[0681] Los polipeptidos de la presente invencion se pueden adicionar y asf se vuelven un componente de una composicion detergente.

La composicion detergente de la presente invencion puede ser formulada, por ejemplo, como una composicion detergente para colada a maquina o a mano tanto para limpieza de colada industrial como de hogar, incluyendo una composicion de aditivo de colada adecuada para el pretratamiento de tejidos manchados y una composicion suavizante de enjuague anadida al tejido, o ser formulada como una composicion detergente para usar en general en operaciones de limpieza de superficie dura industrial o de hogar, o ser formulada para (ambos de hogar e industrial) operaciones de lavavajillas a mano o maquina.

En un aspecto especffico, la presente invencion proporciona un aditivo de detergente que comprende un polipeptido de la presente invencion como se describe en este caso.

[0682] En una forma de realizacion, el Aint valor enzimatico se puede medir utilizando el AMSA como se describe en este caso en la goma xantana con muestras negras de carbono.

Una forma de realizacion preferida es el uso de goma xantana con muestras negras de carbono (DN31; DN31C o DN31 D) a 20°C o a 40°C.

Una forma de realizacion mas preferida es el uso de goma xantana con muestras negras de carbono (DN31C o DN31 D) a 40°C.

Una forma de realizacion aun mas preferida es el uso de goma xantana con muestras negras de carbono (DN31 D) a 40°C.

La concentracion enzimatica preferida usada para la GH9 endoglucanasa y xantano liasa es 0.5 mg EP/L y 1.0 mg EP/L respectivamente.

[0683] El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 3 unidades como se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 3.5 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 4 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 4.5 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 5 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 5.5 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 6 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 7 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 8 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 9 se ha determinado por AMSA.

El valor de intensidad delta para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 10 se ha determinado por AMSA.

[0684] En una forma de realizacion, el valor de enzima de ARem se puede medir utilizando el ensayo MiniLOM como se describe en este caso en la goma xantana con muestras negras de carbono.

Una forma de realizacion preferida es el uso de goma xantana con muestras de negro de carbon (DN31; DN31C o DN31 D) a 20°C o a 40°C.

Una forma de realizacion mas preferida es el uso de goma xantana con muestras de negro de carbon (DN31C o DN31 D) a 40°C.

Una forma de realizacion aun mas preferida es el uso de goma xantana con muestras de negro de carbon (DN31 D) a 40°C.

El valor de remision es preferiblemente medido a 460nm.

[0685] El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 1.5 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzim ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 1.75 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 2 unidades como se

unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como unidades como

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ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 2.25 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 2.5 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 2.75 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 3 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 3.5 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima de ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 4 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 4.5 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

El valor de enzima ARem para goma xantana con muestra de negro de carbon es al menos 5 unidades como se ha determinado por MiniLOM.

[0686] La invencion tambien se refiere a metodos para la degradacion de goma xantana en la superficie de una superficie textil o dura, tal como lavavajillas, que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion para goma xantana.

La invencion se refiere ademas a metodos para la degradacion de goma xantana en la superficie de una superficie textil o dura, tal como lavavajillas, que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas xantano liasas de la invencion para goma xantana.

Una forma de realizacion es un metodo para la degradacion de goma xantana en la superficie de una superficie textil o dura, tal como lavavajillas, que comprende la aplicacion de una composicion que comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion junto con una o mas xantano liasas de la invencion para goma xantana.

Una forma de realizacion es la composicion que comprende uno o mas componentes detergentes como se describe aquf. Uso de GH9 endoglucanasas con un beneficio de detergencia enzimatica

[0687] Se ha descubierto sorprendentemente que el uso de un GH9 solo da un beneficio de detergencia enzimatica, preferiblemente un beneficio de detergencia enzimatica en la goma xantana.

Esto es sorprendente ya que las endoglucanasas son incapaces de degradar significativamente el esqueleto de goma xantana a menos que la goma xantana haya sido pretratada con xantano liasa.

[0688] Asf otro aspecto de la invencion es el uso de una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes y una GH9 endoglucanasa aislada que tiene un beneficio de detergencia enzimatica seleccionado del grupo que consiste en

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2;

98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 12;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 14;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 48;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 52;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 56;

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98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 82;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 86;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 90;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 94;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 98;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 102;

(n) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 130;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 134;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 138;

(i) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1;

(ii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9;

(iii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 11;

(iv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 13;

(v) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47;

(vi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51;

(VII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55;

(VIII) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 81;

(ix) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85;

(x) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89;

(xi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93;

(xii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97;

(xiii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 101;

(xiv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129;

(xv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 133;

(xvi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137; o

(xvii) el complemento en toda su longitud de la misma de (i); (ii), (iii); (iv), (v); (vi), (VII); (VIII), (ix); (x), (xi); (xii), (xiii); (xiv), (xv) o (xvi);

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia

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codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9;

(t) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 11;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 13;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55;

(y) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 81;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 85;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 89;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 93;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 97;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 101;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 129;

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 133;

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(ag) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 137;

(ah) una variante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 134 o SEQ ID NO: 138 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion en una o mas posiciones (por ejemplo varias); y

(t) , (u); (v), (w); (x), (y); (z), (aa); (ab), (ac); (ad), (ae); (af), (ag) o (ah) que tiene actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

[0689] Una forma de realizacion es el uso de una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes y una GH9 endoglucanasa aislada que tiene un beneficio de detergencia enzimatica seleccionada el grupo que consiste en

(a) un polipeptido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2;

98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia al polipeptido maduro de SEQ ID NO: 10;

(g) un polipeptido codificado por un polinucleotido que hibrida bajo condiciones de astringencia medias, condiciones de astringencia medio altas, condiciones de astringencia altas o condiciones de astringencia muy altas con:

(i) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 1;

(ii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9;

(iii) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 13;

(iv) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 47;

(v) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 51;

(vi) la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 55;

(vii) el complemento en toda su longitud de la misma de (i); (ii), (iii); (iv), (v) o (vi);

(h) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

(i) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia a la secuencia codificante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 9;

(j) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

(k) un polipeptido codificado por un polinucleotido con al menos 80%, por ejemplo, al menos 81%, al menos

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(n) una variante del polipeptido maduro de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52 o SEQ ID NO: 56 que comprende una sustitucion, delecion y/o insercion a una o mas posiciones (por ejemplo diferentes); y

(o) un fragmento del polipeptido de (a); (b), (c); (d), (e); (f), (g); (h), (i); (j), (k); (l), (m) o (n) que tiene actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

[0690] Otra forma de realizacion es el uso de una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes y una GH9 endoglucanasa aislada de la invencion junto con una xantano liasa.

Una forma de realizacion preferida es el uso de una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes y una GH9 endoglucanasa aislada de la invencion junto con una xantano liasa de la invencion.

Uso en la fracturacion de una formacion subterranea (perforacion de aceite)

[0691] La disyuncion hidraulica se utiliza para crear fracturas subterraneas que se extienden desde la perforacion en la formacion de roca para aumentar el fndice en el que los fluidos se pueden producir por la formacion. Generalmente, un fluido de fracturacion de alta viscosidad se bombea en el orificio a una presion suficiente para fracturar la formacion subterranea.

Para mantener la exposicion aumentada a la formacion, un apuntalante solido se anade al fluido de fracturacion que se soporta en el fractura por la alta presion aplicada al fluido.

Una vez el fluido de fracturacion de alta viscosidad haya soportado el apuntalante en la formacion, los interruptores se utilizan para reducir la viscosidad del fluido que permite al apuntalante instalarse en el fractura y asf aumentar la exposicion de la formacion al orificio.

Los interruptores trabajan reduciendo el peso molecular de los polfmeros, asf 'descomponiendo' o degradando el polfmero.

La fractura luego se vuelve un conducto de permeabilidad alta para fluidos y gas para ser producido de nuevo al orificio.

Tales procesos estan ademas descritos en la US patente nos. 7,360,593, 5,806,597, 5,562,160, 5,201,370 y 5,067,566.

[0692] Asf la invencion se refiere al uso de GH9 endoglucanasas de la invencion como interruptores enzimaticos. La invencion tambien se refiere al uso de xantano liasas de la invencion como interruptores enzimaticos.

Una forma de realizacion de la invenxion es el uso de GH9 endoglucanasas de la invencion junto con xantano liasas de la invencion como interruptores enzimaticos.

[0693] Por consiguiente, la invencion proporciona un metodo para la rotura de goma xantana en una perforacion que comprende: mezclar (i) un fluido de fracturacion de geles que comprende el fluido acuoso, uno o mas polfmeros hidratables, agentes de reticulacion adecuados para la reticulacion del polfmero hidratable para formar un gel polimerico y una o mas enzimas de la invencion (es decir, el rompedor enzimatico); (ii) bombear el gel polimerico reticulado en el orificio bajo presion suficiente para fracturar la formacion circundante; y (iii) permitir al rompedor enzimatico degradar el polfmero reticulado para reducir la viscosidad del fluido de modo que el fluido se pueda bombear desde la formacion de nuevo a la superficie del orificio.

Como tal, las GH9 endoglucanasas de la invencion pueden utilizarse para controlar la viscosidad de fluidos de fracturacion.

Ademas, las xantano liasas de la invencion pueden utilizarse para controlar la viscosidad de fluidos de fracturacion.

En una forma de realizacion, una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion junto con una o mas xantano liasas de la invencion pueden utilizarse para controlar la viscosidad de fluidos de fracturacion.

[0694] El rompedor enzimatico de la presente invencion puede ser un ingrediente de un fluido de fracturacion o un complejo rompedor-reticulante-polfmero que comprende ademas un polfmero hidratable y un agente reticulante.

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El fluido o complejo de fracturacion puede ser un gel o puede ser gelificante.

El complejo es util en un metodo para usar el complejo en un fluido de fracturacion para fracturar una formacion subterranea que rodea una perforacion por el bombeo del fluido a una ubicacion deseada en la perforacion bajo presion suficiente para fracturar la formacion subterranea circundante.

El complejo se puede mantener en un estado no reactivo sustancialmente manteniendo condiciones especfficas de pH y temperatura, hasta el momento en el que el fluido este en el lugar de la perforacion y la fracturacion deseada este completada.

Una vez la fractura este completada, las condiciones especfficas en las que el complejo es inactivo no se mantienen mas tiempo.

Cuando las condiciones cambian suficientemente, el complejo se vuelve activo y el rompedor empieza a catalizar la degradacion polimerica obligando al fluido de fracturacion a hacerse suficientemente fluido para bombear desde la formacion subterranea a la superficie del orificio.

Otros usos

[0695] Los polipeptidos de la presente invencion pueden adicionalmente ser usados en otra aplicacion donde es beneficioso eliminar goma xantana.

Metodos

Metodo de la degradacion de goma xantana donde la goma xantana se usa en la fracturacion de una formacion subterranea perpetrada por una perforacion

[0696] Cuando un orificio se perfora, un fluido de perforacion de deposito (RDF) circula en el equipo de perforacion para enfriar y limpiar la cabeza de perforacion, eliminar las virutas de perforacion fuera de la perforacion, reducir la friccion entre la columna perforadora y los lados de la perforacion, y formar una torta filtrante para prevenir la filtracion del fluido en la formacion.

La fuerza de transmision para la formacion de la torta filtrante es la presion de perforacion mas alta aplicada para mantener la estabilidad del taladro.

Esta torta filtrante restringe la entrada de flujo de fluidos de deposito en la perforacion durante el proceso de perforacion y colocacion de la finalizacion.

Si el dano de torta filtrante que se crea durante el proceso de perforacion no se elimina antes de o durante la finalizacion del orificio, una gama de salidas puede surgir cuando se aplica la produccion del orificio, es decir, fallos de equipo de finalizacion y productividad de deposito deficiente.

[0697] Fluido de perforacion (barro), llamado tambien fluido de perforacion de deposito (RDF), puede ser de base sintetico/aceite o base de agua.

Para minimizar la invasion del fluido de perforacion en la formacion, ambos de base de aceite y torta filtrante de barro de base de agua tfpicamente contienen un agente de conexion o de pesaje, normalmente las partfculas de carbonato calcico, baritina o una mezcla de los dos, que conectan en las gargantas porosas de la formacion y forman asf una torta filtrante de permeabilidad relativamente baja.

Ambas tortas de filtro de barro a base de aceite y a base de agua tambien contienen recortes llamados solidos que han sido escogidos durante la perforacion, a diferencia de los agentes de conexion/pesaje que se agregan en la formulacion del fluido de perforacion.

Estos solidos pueden ser cuarzo (arena), limos y/o esquistos, dependiendo de la formacion de deposito al igual que las formaciones atravesadas por el camino de perforacion al deposito.

Ademas, los lodos de perforacion a base de aceite contienen gotitas de agua que se quedan retenidas en el espacio poroso de la torta filtrante, mientras las tortas de filtro de barro a base de agua contienen polfmeros, tales como el almidon y goma xantana, y otras sales inorganicas.

[0698] La formacion de una torta filtrante de barro es frecuentemente necesaria para la perforacion, particularmente en formaciones inconsolidadas con problemas de estabilidad de perforacion y permeabilidades tfpicamente altas.

La torta filtrante es luego tratada con varios productos qufmicos, tales como quelantes o acidos para disolver el componente de calcita; y/o enzimas u oxidantes para degradar el componente polimerico para la recuperacion de permeabilidad.

[0699] En un aspecto, la invencion proporciona un metodo para la degradacion de goma xantana donde la goma xantana se usa en la fracturacion de una formacion subterranea perpetrada por una perforacion aplicando una compoisicion que comprende una de mas enzimas de la invencion.

El metodo puede incluir los pasos de: (i) bombear un fluido de tratamiento que comprende una o mas enzimas de la invencion en la perforacion en el contacto con la torta filtrante para ser quitado para establecer una presion diferencial entre el fluido de tratamiento y la formacion adyacente a la torta filtrante y (ii) propagar el tratamiento uniformemente de la torta filtrante durante el perfodo de presion diferencial para retrasar de forma innovadora por el fluido de tratamiento.

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[0700] En una forma de realizacion, el metodo puede incluir el establecimiento de permeabilidad a traves de la torta filtrante tratada entre la formacion y la perforacion.

En otra forma de realizacion, la torta filtrante puede incluir solidos de perforacion y arcillas, y se puede formar a partir de un fluido de perforacion acuosa.

Si se desea, el fluido de tratamiento para tratar la torta filtrante de fluido de perforacion acuoso puede tambien incluir un oxidante y/o un quelante, o puede estar libre sustancialmente de quelantes y aditivos oxidantes.

En otro ejemplo, la torta filtrante se puede formar a partir de un aceite o fluido de perforacion de emulsion invertida.

Si se desea, el fluido de tratamiento para tratar el aceite o torta filtrante de fluido de perforacion de emulsion invertida puede tambien incluir un solvente mutuo, un agente de humidificacion de agua o una combinacion de los mismos para dispersar componentes hidrofobicos en la torta filtrante.

[0701] En una forma de realizacion, el fluido de tratamiento comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion.

En otra forma de realizacion, el fluido de tratamiento comprende una o mas xantano liasas de la invencion.

En una forma de realizacion preferida, el fluido de tratamiento comprende una o mas GH9 endoglucanasas y una o mas xantano liasas de la invencion.

Metodo de la degradacion de goma xantana donde la goma xantana es un componente en la torta filtrante de perforacion

[0702] En un aspecto, la invencion proporciona un metodo para limpiar la torta filtrante de perforacion, que comprende polfmeros, tal como goma xantana y solidos de fluido de perforacion una vez la torta filtrante ha sido bombeada a la superficie.

Barro de perforacion es bombeado de fosas de barro a la cabeza de perforacion y luego vuelve a la superficie, llevando entre otras cosas roca molida o cortada (recortes) en el proceso.

Los recortes se filtran y el barro vuelve a las fosas de barro donde los finos se pueden instalar y/o los productos qufmicos o enzimas (rompedores) se pueden anadir.

[0703] El metodo para la degradacion de goma xantana donde la goma xantana es un componente en la torta filtrante de perforacion puede incluir los pasos de (i) tratar la torta filtrante de perforacion con un fluido de tratamiento que comprende una o mas enzimas de la invencion y (ii) separar los solidos de los fluidos.

En una forma de realizacion, el fluido de tratamiento comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion.

En una forma de realizacion preferida, el fluido de tratamiento comprende una o mas GH9 endoglucanasas de la invencion y una o mas xantano liasas de la invencion.

[0704] La torta filtrante de perforacion se puede tratar en las fosas de barro con una o mas enzimas de la invencion y el fluido de perforacion se puede recircular.

Alternativamente, una vez la torta filtrante haya sido tratada con una o mas enzimas de la invencion, los solidos y fluido se separan utilizando procesos de separacion solido-lfquido, tal como centrifugacion.

[0705] La presente invencion es posteriormente descrita por los ejemplos siguientes que no deberfan ser interpretados como limitacion del ambito de la invencion.

Ejemplos

Medios y soluciones

[0706] YP+2% medio de glucosa se compuso por 1% de extracto de levadura, 2% peptona y 2% glucosa.

[0707] Las placas de agar PDA fueron compuestas por infusion de patata (la infusion de patata se realizo por ebullicion 300 g de patatas laminadas (lavadas pero no peladas) en el agua durante 30 minutos y luego decantando o presionando el caldo a traves de una estopilla.

El agua destilada fue luego anadida hasta que el volumen total de la suspension fue un litro, seguido de 20 g de dextrosa y 20 g de polvo de agar.

El medio se esterilizo por la autoclave de 15 psi durante 15 minutos (Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition, Revision A, 1998).

[0708] Las placas LB fueron compuestas por 10 g de bacto-triptona, 5 g de extracto de levadura, 10 g de cloruro sodico, 15 g de Bacto-agar y agua desionizada a 1 litro.

El medio fue esterilizado por la autoclave de a 15 psi durante 15 minutos (Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition, Revision A, 1998).

[0709] Las placas de sacarosa de COVE fueron compuestas por 342 g sacarosa (Sigma S-9378), 20 g polvo de

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Agar, 20 ml solucion salina de Cove (26 g MgSO4.7H2O, 26 g KCL, 26 g KH2PO4,50 ml solucion de metales traza de Cove y agua desionizada a 1 litro), y agua desionizada a 1 litro).

El medio fue esterilizado por la autoclave de 15 psi durante 15 minutos (Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition, Revision A, 1998).

El medio fue enfriado a 60°C y se le anadio 10 mM acetamida, 15 mM, CsCl Triton X-100 (50 pl/500 ml)).

[0710] La solucion de metal traza de Cove fue compuesta por 0.04 g Na2B4O7.10H2O, 0.4 g CuSO4.5H2O, 1.2 g FeSO4.7H2O, 0.7 g MnSO4.H2O, 0.8 g Na2MoO4.2H2O, 10 g ZnSO4.7H2O y agua desionizada a 1 litro.

[0711] El medio Dap-4C fue compuesto por 20 g dextrosa, 10 g maltosa, 11 g MgSO4.7H2O, 1 g KH2PO4, 2 g acido cftrico, 5.2 g K3PO4.H2O, 0.5 g extracto de levadura (Difco), 1 ml Dowfax 63N10 (Dow Chemical Company), 0.5 ml KU6 solucion de metales traza, 2.5 g CaCO3 y agua desionizada a 1 litro.

Antes del uso, al medio Dap-4C se anadido 3.5 ml esteril 50 % (NH4)2HPO4 y 5 ml esteril 20 % acido lactico por 150 ml medio.

[0712] KU6 solucion de metales traza fue compuesta por 0.13 g NiCl2,2.5 g CuSO4.5H2O, 13. 9 g FeSO4.7H2O, 8.45 g MnSO4.H2O, 6.8 g ZnCh,3g acido cftrico y agua desionizada a 1 litro.

Tabla 1: Composicion detergente modelo A

Ingredientes de detergente: % en peso

Acido alquilbencenesulfonico lineal (LAS) (Marlon AS3): 13

Sodio alkil(C12)eter sulfato (AEOS) (STEOL CS-370 E): 10

Jabon de coco (Radiacid 631): 2.75

Jabon de soja (Edenor SJ): 2.75

Alcohol etoxilato (AEO) (Bio-Soft N25-7): 11

Hidroxido sodico: 2

Etanol: 3

Propane-1,2-diol (MPG): 6

Glicerol: 2

Trietanolamina (TEA): 3

Formiato sodico: 1

Citrato sodico: 2

dietilenetriaminepentakis(acido metilenefosfonico) (DTMPA): 0.2

Polfmero de policarboxilato (PCA) (Sokalan CP-5): 0.2

Agua: Hasta 100

Ajuste Final de pH a pH 8 con NaOH o acido cftrico

Tabla 2: Composicion detergente lfquido modelo B

Ingredientes detergentes: % en peso

Acido alquilbencenesulfonico lineal (LAS): 7.2

Sodio alkil(C12)eter sulfato (AEOS) (SLES): 4.2

Jabon de coco (Radiacid 631): 2.75

Jabon de soja (Edenor SJ): 2.75

Alcohol etoxilato (AEO) (Bio-Soft N25-7): 6.6

Hidroxido sodico: 1.2

Etanol: 3

Propano-1,2-diol (MPG): 6

Glicerol: 2

Trietanolamina (TEA): 3

Formiato sodico: 1

Citrato sodico: 2

Dietilenetriaminepentakis(acido metilenefosfonico) (DTMPA): 0.2

Polfmero de policarboxilato (PCA) (Sokalan CP-5): 0.2

Agua: Hasta 100

Ensayos de lavado

Ensayo de tension mecanica automatica (AMSA) para colada

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0713] Para valorar el rendimiento de lavado en la colada, se han realizado experimentos de lavado utilizando el ensayo de tension mecanica automatica (AMSA).

Con el AMSA, se puede examinar el rendimiento de lavado de una gran cantidad de soluciones de detergente enzimatico de pequeno volumen.

La placa AMSA tiene un numero de orificios para soluciones de prueba y una tapa comprime firmemente la muestra de colada, el textil que se va a lavar frente a todas las aberturas de ranura.

Durante el tiempo de lavado, la placa, soluciones de prueba, textil y tapa se agitan energicamente a la temperatura controlada para llevar la solucion de prueba en contacto con el textil y aplicar la tension mecanica en una manera oscilante regular periodica.

Para otra descripcion ver WO02/42740 especialmente el parrafo "Special method embodiments" en la pagina 2324.

[0714] El rendimiento de lavado se mide como la luminosidad del color del textil lavado.

La luminosidad puede tambien ser expresada como la intensidad de la luz reflejada desde la muestra cuando esta illuminada con luz blanca.

Cuando la muestra se mancha, la intensidad de la luz reflejada es inferior, que la de una muestra limpia.

Por lo tanto, la intensidad de la luz reflejada puede utilizarse para medir el rendimiento de lavado.

[0715] Las mediciones de color han sido realizadas con un escaner de superficie plana profesional (Kodak iQsmart, Kodak, Midtager 29, DK-2605 Brondby, Denmark, or Epson Expression 10000XL, Epson Danmark, Transformervej 6, 2730 Herlev, Denmark), que se usa para capturar una imagen del textil lavado.

[0716] Para extraer un valor para la intensidad de luz desde las imagenes escaneadas, valores pixel de 24 bits desde la imagen se convierten en valores para rojo, (RGB) verde y azul.

El valor de intensidad (int) se calcula anadiendo los valores de RGB juntos como vectores y luego tomando la longitud del vector resultante:

imagen2

Ensayo Mini Launder-O-Meter (MiniLOM)

[0717] El ensayo miniLOM es una version a escala pequena del Launder-O-Meter (LOM).

Este se puede usar para determinar el "beneficio de detergencia enzimatica".

Un miniLOM basicamente consiste en tubos de ensayo cerrados que se rotan en un armario de calentamiento en un tiempo y temperatura dados.

Cada probeta constituye una lavadora pequena y durante un experimento, cada una contendra una solucion de un sistema de detergente/enzima especifico que debe evaluarse junto con los tejidos sucios y limpios sobre los que se evalua.

La tension mecanica se consigue por los tubos que se rotan y mediante la inclusion de bolas metalicas en el tubo.

[0718] El sistema de lavado de modelo a pequena escala es principalmente usado en la prueba de detergentes y enzimas en condiciones de lavado europeas.

Evaluacion de manchas de mini-LOM

[0719] El rendimiento de lavado se expresa como un valor de remision (Rem).

Despues de lavar y aclarar las muestras se extienden hasta quedarse planas y se permiten secar al aire a temperatura ambiente durante la noche.

Todos los lavados son evaluados deben ser evaluados el dia 2 despues del lavado.

Las evaluaciones de reflectancia ligera de las muestras se hicieron utilizando un espectrofotometro de reflectancia Macbeth Color Eye 7000 con abertura muy pequena.

Las mediciones se hicieron sin UV en la luz incidente y la remision a 460 nm fue extraida.

Las mediciones se hicieron en muestras lavadas.

La muestra de prueba que se iba a medir fue colocada encima de otra muestra de mismo tipo y color (doble muestra).

Con solo una muestra de cada especie por vaso de precipitados, una muestra a partir de un lavado replicado fue usada de esta manera.

El rendimiento enzimatico se puede ver por la comparacion del valor de remision del uso de ninguna enzima con el valor de remision usando una o mas enzimas.

Cuanto mayor sea el mayor valle de remision, mejor sera el efecto de limpieza.

Ensayos de actividad

[0720] 0.8 mL 100 mM tampon HEPES, pH 6.0 fue mezclado con 0.2 mL goma xantana (5 mg/mL) disuelta en el agua en una cubeta de 1 mL 1 cm.

5 La cubeta fue insertada en un espectrofotometro (Agilent G1103A 8453A, CA, USA) con conjunto de regulacion de la temperatura a 40 °C.

La solucion fue preincubada durante 10 min y la muestra de 0.1 mL fue anadida y la solucion fue mezclada aspirando y dispensando la solucion al menos unas 5 veces utilizando una pipeta.

El volumen de reaccion total fue 1.1 mL.

10 La absorbancia a 235 nm fue recogida durante 10 min utilizando un intervalo de medida de 30 seg.

La actividad inicial fue calculada usando el software (UV-Visible Chemstation Rev A.10.01 [81], Agilent).

Ejemplo 1: identificacion del GH9 gen de xantanasa

15 [0721] Cuatro cepas bacterianas fueron aisladas de muestras de suciedad obtenidas de lugares diversos (ver

tabla 3 de abajo) usando goma xantana como unica fuente de carbono.

Tabla 3: Aislamiento de cepas bacterianas

Cepa: Numero de identificacion Fuente Pais

Paenibacillus sp: NN062047 Tierra de bosque China

Microbacterium sp: NN062149 Tierra de campo Espana

Microbacterium sp: NN062148 Arena de la playa Dinamarca

Microbacterium sp: NN062045 Tierra de jardin Dinamarca

20

[0722] El ADN cromosomico de cuatro cepas bacterianas fue aislado por el QIAamp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany). 2 ug de ADN cromosomico fue sometido a secuenciacion de genoma escopeta parcial, un servicio que esta disponible comercialmente en FASTERIS SA, Suiza.

La secuencia de genoma fue analizada para secuencias protefnicas que tienen dominios de hidrolasa de glicosil 25 (segun la definicion CAZY de arriba).

Un gen y secuencia de protefna correspondiente fue identificado de cada cepa bacteriana (SEQ ID NO: 1, 9, 11 y 13) y probado aquf de hecho por tener la actividad deseada en la goma xantana.

Ejemplo 2: clonacion y expresion de GH9 en el Bacillus subtilis con etiqueta His N-terminal 30

[0723] Los fragmentos del GH9 gen fueron amplificados de ADN cromosomico de las cuatro cepas bacterianas con cebadores especfficos D88F-directo y D89R-inverso para Paenibacillus sp NN062047 D124F-directo y D125R-inverso para Microbacterium sp NN062149 D126F-directo y D127R-inverso para Microbacterium sp NN062148 D128F-directo y D129R-inverso para Microbacterium sp NN062045 (ver tabla 4 para detalles de

35 secuencia).

Los cebadores contienen proyeccion para vector de clonacion, que es un derivado del plasmido C6221 (descrito en WO2012/025577), modificado introduciendo una etiqueta de poli histidina (HHHHHHPR) despues de la senal de secrecion.

40 Tabla 4: Cebadores usados para amplificacion de PCR

Amplificacion de GH9 gen: Cebador especffico directo Cebador especffico inverso

Paenibacillus sp NN062047: D88F: 5 ’T CACCAT CAT C CT AG GAT C G C AG G CGTGGTTCAAAGCGTGAATGTC 3’ D89R: 5 ’TT ATT GATT AAC G C GTTT AC G G AA CTGGAACAAGCTGAATGAAATC 3’

: (SEQ ID NO: 21) (SEQ ID NO: 22)

Microbacterium

Cebador especffico directo

Cebador especffico inverso

sp NN062149

D124F:

5'TCACCATCATCCTAGGGCGACGAT CGAACGCGTCGCCGTCA 3' (SEQ ID NO: 23)

D125R:

5'TT ATT GATT AAC GC GTT CAT C C G A CGACCACTCCGGTCACG 3' (SEQ ID NO: 24)

Microbacterium sp NN062148

D126F:

5'TCACCATCATCCTAGGGCGACGAT C AC AC AG GTCGCGGTGA 3' (SEQ ID NO: 25)

D127R:

5 'TT ATT GATT AAC GCGT CT ACT G AA CGACCACCCCCGTCGTG 3' (SEQ ID NO: 26)

Microbacterium sp NN062045

D128F:

5'TCACCATCATCCTAGGGCCACCAT CG AG GAAGTCACG GT G A 3' (SEQ ID NO: 27)

D129R:

5'TT ATT GATT AAC GCGTT CAGCCGA CGGCGACGCCGGACACC 3' (SEQ ID NO: 28)

[0724] Los fragmentos de la PCR fueron clonados en el plasmido digerido con AvrII y enzimas MIuI utilizando el equipo de clonacion de HD In-Fusion (numero de producto de Clontech 639648) siguiendo las instrucciones del fabricante (PT5162-1).

5

[0725] El GH9 polipeptido fue expresado con la senal de secrecion con la siguiente secuencia de aminoacidos (mKKPLGKIVAStAlLiSVAFSSSIASA, (SEQ ID NO: 29)) reemplazando la senal de secrecion nativa dando como resultado el gen recombinante y secuencia de protefna. (De este modo, los polipeptidos maduros fueron expresados con una etiqueta de poli histidina (HHHHHHPR (SEQ ID NO: 30)) operativamente enlazada a la GH9

10 xantanasa madura.

[0726] Las reacciones de In-Fusion se transformaron en E. coli y los transformantes resistentes a la ampicilina fueron seleccionados y cultivados para la preparacion posterior de plasmido de ADN. 7 Clones de cada construccion fueron analizados por la secuenciacion del aDn para verificar la secuencia de ADN correcta de los

15 constructos.

La secuencia de nucleotidos de los productos de fusion corresponde a SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 19.

La secuencia de protefna traducida corresponde a SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18 y SEQ ID NO: 20.

20

[0727] Un clon con la secuencia de genes recombinante correcta fue seleccionado y el plasmido correspondiente fue integrado por recombinacion homologa en el genoma de la celula huesped de Bacillus subtilis y la construccion de gen fue expresada bajo el control de un sistema de promotor triple como se describe en la WO99/43835.

25 El gen codificante para acetiltransferasa de cloranfenicol fue usado como una etiqueta (como se describe en Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30:312-315).

[0728] Los transformantes resistentes al cloranfenicol fueron analizados por PCR para verificar el tamano correcto del fragmento amplificado.

30 Un recombinante B. subtilis clon con el constructo de expresion integrado fue seleccionado y crecio en el cultivo

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

liquido.

El sobrenadante que contiene enzima fue cosechado y la enzima fue purificada como se describe en el ejemplo 5.

Ejemplo 3: identificacion, secuenciacion de genoma e identificacion del gen de xantano liasa

[0729] La cepa de Paenibacillus NN018054 fue aislada a partir de una muestra de tierra de Nueva Zelanda usando goma xantana solo como fuente de carbono.

ADN cromosomico de la cepa bacteriana Paenibacillus NN018054 fue aislado por QIAamp DNA Blood Mini Kit" (Qiagen, Hilden, Germany). 2ug de ADN cromosomico fue enviado para secuenciacion de genoma a FASTERIS SA, Suiza.

El genoma fue secuenciado por secuenciacion Illumina.

La secuencia de genoma fue analizada y la protefna XL fue identificada (SEQ ID NO: 3) por busquedas BLASTP. Ejemplo 4: clonacion y expresion de xantano liasa en el Bacillus subtilis con etiqueta His N-terminal

[0730] El gen de xantano liasa truncado fue amplificado de ADN cromosomico de la cepa de Paenibacillus

NN018054 con cebadores especfficos de gen (D117F: 5'

TCACCATCATCCTAGGGCGGAGGCGTCCGACATGTTCGACG 3' (SEQ ID NO: 31) (y D118R: 5'

TTATTGATTAACGCGTTTACGGCTGCTGCGCGCCGGTCAGG 3' (SEQ ID NO: 32)).

Los cebadores contienen la proyeccion para vector de clonacion, que es un derivado del plasmido C6221 (descrito en WO2012/025577), modificado introduciendo una etiqueta de poli histidina (HHHHHHPR (SEQ ID NO: 30)) despues de la senal de secrecion.

[0731] El fragmento de PCR fue clonado en el plasmido digerido con AvrII y enzimas MIuI utilizando el equipo de clonacion de HD In-Fusion (Clontech 639648) siguiendo las instrucciones del fabricante (PT5162-1).

[0732] La protefna de xantano liasa truncada fue expresada con la senal de secrecion con la siguiente secuencia de aminoacidos (MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA, (SEQ ID NO: 29)) reemplazando la senal de secrecion nativa resultante en el gen recombinante y secuencia de protefna SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 8.

De esta manera, el polipeptido maduro fue expresado con una etiqueta poli histidina (HHHHHHPR (SEQ ID NO: 30)) operativamente enlazada a la xantano liasa madura.

[0733] La reaccion de In-Fusion fue transformada en E.coli y los transformantes resistentes a la ampicilina fueron seleccionados y cultivados para la preparacion posterior de plasmido de ADN. 7 clones fueron analizados por la secuenciacion del ADN para verificar la secuencia de ADN correcta de la construccion.

La secuencia de nucleotidos del producto de fusion corresponde a SEQ ID NO: 7.

La secuencia de protefna traducida corresponde a SEQ ID NO: 8

[0734] Un clon con la secuencia de genes recombinante correcta fue seleccionado y el plasmido correspondiente fue integrado por recombinacion homologa en el genoma de la celula huesped de Bacillus subtilis.

La construccion de gen fue expresada bajo el control de un sistema de promotor triple (como se ha descrito en laWO99/43835).

El gen codificante para acetiltransferasa de cloranfenicol fue usado como una etiqueta (como se ha descrito en Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30:312-315)

[0735] Los transformantes resistentes al cloranfenicol fueron analizados por PCR para verificar el tamano correcto del fragmento amplificado.

Un clon recombinante B. subtilis con el constructo de expresion integrado fue seleccionado y crecido en el cultivo liquido.

Ejemplo 5: purificacion del GH9 y protefna de xantano liasa

[0736] Una cepa de Bacillus subtilis fue construida como se describe en los ejemplos 2 y 4 para expresar la protefna al medio de cultivo.

El caldo de cultivo fue centrifugado (17.696 x g, 30 min) y el sobrenadante fue cuidadosamente decantado del precipitado.

El sobrenadante fue filtrado a traves de una unidad de filtracion Nalgene 0.2pm para eliminar el resto de celulas huesped de Bacillus.

[0737] El volumen fue reducido utilizando un sistema de Filtron con 10K filtro de corte.

El volumen fue reducido a aprox 80 mL, seguido de adicion de tampon A: 50 mM TRIS + 10 mM pH de imidazol 8.0 a la muestra.

El pH en la muestra fue ajustado a 8 y aplicado a una columna de superflujo Ni-NTA (Qiagen) equilibrada en:

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

tampon A.

Despues de la carga, la columna se lava con tampon A para 3 volumenes de columna (CV).

Luego un paso gradiente a 100 % tampon B: tampon B: 50 mM MES + 10 mM pH de imidazol 7.0 se aplico y consecutivamente un segundo gradiente se aplica hasta 100 % tampon C: 50 mM MES + 1 M pH de imidazol 7.0 en 4 CV.

Todas las fracciones positivas siguen SDS-PAGE y las protefnas respectivas se identifican por las bandas.

Las fracciones que contienen XL o GH9 respectivamente fueron agrupadas y desaladas en el tampon Tris 20 mM pH 7.0.

[0738] Para otra purificacion, la piscina respectiva fue cargada en una Columna de intercambio ionico de q- Sepharose (GE Healthcare) equilibrada en 20mM Tris pH 7.0.

Despues de la carga, la protefna fue eluida utilizando el 20 0-100% mM Tris + 1 M NaCl, pH 7.0.

Las fracciones positivas siguieron un SDS-PAGE Gel y fueron desaladas en 20 mM Tris pH 7.0.

[0739] La concentracion de las protefnas purificadas fue determinada por absorbancia a 280 utilizando los coeficientes de extincion respectiva calculados de las secuencias de aminoacidos deducidos de las protefnas maduras.

Ejemplo 6: seleccion de actividad de xantano liasa y GH9 en la goma xantana Actividad de xantano liasa

[0740] Actividad de xantano liasa fue determinada como se ha descrito anteriormente en la protefna de xantano liasa purificada. Los datos se presentan en la tabla 5 de abajo.

Tabla 5: La actividad especffica de xantano liasa de la SEQ ID NO: 8

Conc xantano liasa en la cubeta (pg/ml): Actividad inicial (mAU/min) Actividad especffica (mAU/min/mg enzimatico)

0.291: 17.274 4907

0.582: 34.98 4969

1.455: 94.32 5359

[0741] Las muestras de datos que la xantano liasa tuvieron actividad en la goma xantana.

Extremidades de reduccion

[0742] El metodo usado para determinar la cantidad de extremidades de reduccion producidas fue el 2,2' ensayo de acido bicinconfnico (BCA) como se describe en Murphy et al., 2012, J. Biol.Chem. 287: 1252-1260 y adaptado de Zhang et al, 2005, Biomacromolecules 6: 1510-1515 y Dubois et al, 1956, Anal. Chem. 28: 350-356.

La cuantificacion de las extremidades de reduccicon fue basada en una curva estandar de glucosa.

El sustrato apropiado y controles enzimaticos fueron incluidos y corregidos en cada analisis.

Las diluciones apropiadas fueron usadas para asegurar que las muestras estaban en el rango de curva de calibracion de glucosa.

Los resultados se muestran en la tabla 7 de abajo.

Reduccion de viscosidad

[0743] Las mediciones de viscosidad fueron realizadas utilizando el ensayo de presion de viscosidad desarrollado por Novozymes descrito en la WO2011/107472. 100 pL de cada 1 mL hidrolisis o control fue el tamano de la muestra.

Los resultados presentados son el promedio de tres mediciones y se muestran en la tabla 6 de abajo.

Hidrolisis

[0744] Las condiciones de hidrolisis fueron de la siguiente manera: 40 °C, 0.25% Goma xantana (XG) en 50 mM tampon MES + 0.01% Triton x-100 pH 7.0.

La enzima fue anadida tras equilibrado termico.

Antes de su uso, a todas las enzimas se les cambio el tampon al tampon MES usando columnas NAP 5 (GE Healthcare).

Dosis enzimaticas

[0745] Las preparaciones enzimaticas purificadas del ejemplo 5 fueron usadas para el analisis en las concentraciones siguientes:

GH9 (SEQ ID NO: 6): 7.25 mg/L

5

10

15

20

25

30

35

40

Tabla 6: Mediciones de viscosidad del GH9 (SEQ ID NO: 6) y/o xantano liasa (SEQ ID NO: 8) en la goma

xantana

Perfodo de incubacion: 5 Min 30 Min 3 Horas

: Promedio (Pa) S.D. Promedio (Pa) S.D. Promedio (Pa) S.D.

Tampon (control): 586 49 508 15 541 17

Goma xantana (control): 1039 15 1012 38 971 26

Goma xantana + GH 9: 946 12 995 106 911 20

Goma xantana + xantano liasa: 1023 20 1048 110 884 25

Goma xantana + xantano liasa + GH 9: 940 30 795 20 577 84

Tabla 7: Los resultados de extremidades de reduccion usando GH9 (SEQ ID NO: 6) y/o xantano liasa (SEQ ID NO: 8)

Perfodo de incubacion: 3 Horas

Condiciones: pM equivalentes de glucosa

Goma xantana + GH 9: 20

Goma xantana + xantano liasa: 1312

Goma xantana + xantano liasa + GH 9: 2313

[0746] Los resultados anteriores de la tabla 5 muestran esa combinacion de xantano liasa y GH9 puede degradar Goma xantana reduciendo la viscosidad de los medios.

Estos resultados son de acuerdo con los resultados obtenidos del ensayo de extremidades de reduccion, mostrados en la tabla 6, que muestra que el numero de las extremidades de reduccion aumenta por la adicion de xantano liasa o xantano liasa + GH 9, ya que la goma xantana se degrada por las enzimas.

Ejemplo 7: demostracion de sinergia entre GH9 endoglucanasa y xantano liasa

[0747] Un metodo de uso de cromatograffa en fase lfquida se uso para demostrar el efecto de de-polimerizacion de gH9 endoglucanasa y xantano liasa, con la goma xantana.

Para este ejemplo la xantano liasa marcada con His con SEQ ID NO: 8 y la GH9 endoglucanasa marcada con His con SeQ ID NO: 6 fueron usadas.

Las enzimas fueron purificadas como se describe en el ejemplo 5.

[0748] La mezcla de sustrato consiste en 0.25 % (p/v) Goma xantana (Keltron) en el tampon de reaccion 100 mM tampon HEPES, pH 6.0 suplementado con 0.01 % (p/v) Triton-X fue mezclado con 0.02 mg/mL xantano liasa y las muestras 0.02 mg/mL GH9. 50 pL fueron retiradas a punto de tiempo fijo y las muestras fueron diluidas con un tampon HEPES de 150 pL, pH 6.0.

La muestra fue inyectada inmediatamente utilizando un bucle de muestra de 100 pL y separada en una columna 26 mL Superdex S200 (GE Heathcare, Uppsala, Suecia).

El sistema usado en este experimento fue un AKTA explorador (GE heathcare) colocado en una camara frfa (+4 °C).

La separacion de polisacaridos fue conducida a un caudal de 0.7 mL/min y utilizando 0.1 M, HEPES tampon de pH 7.0.

La absorbancia a 235 nm fue monitoreada para detectar el enlace doble del producto de reaccion de xantano liasa.

Dos maximos podrfan ser observados en la elucion de cromatogramas en volumenes de retencion 9 y 19 mL.

Una muestra de control consiste en 0.02 mg/mL xantano liasa y 0.25 % (p/v) goma xantana incubada durante 3 h en el tampon de reaccion solo dio lugar a un valor maximo con volumen de retencion de 9 mL.

Asf, el valor maximo que aparece en 9 mL correspondido para goma xantana tratada con xantano liasa.

A lo largo del tiempo el 9 mL valor maximo disminuyo mientras la elucion de valor maximo a 19 mL aumento en

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

tamano.

Los resultados se presentan en la tabla 8 de abajo.

Tabla 8: Resultados cromatograficos de GH9 (SEQ ID NO: 6) y xantano liasa (SEQ ID NO: 8) en la goma xantana

Tiempo (min): Altura de valor maximo 9 mL (MAU) Altura de valor maximo 19 mL (MAU)

3: 36 5

40: 20 15

85: 11 20

[0749] Los datos indicaron que la combinacion de xantano liasa y la GH9 endoglucanasa puede degradar goma xantana a oligosacaridos derivados de goma xantana menores.

Ejemplo 8: actividad especffica de goma xantana tratada de xantano liasa vs CMC

[0750] El metodo usado para determinar la actividad especffica para una GH9 endoglucanasa fue el metodo de acido p-hidroxibenzoico (PHBAH).

Para este ejemplo la GH9 endoglucanasa marcada con His derivada de Paenibacillus sp. y con la secuencia de SEQ ID NO: 6 fue usada.

[0751] La cuantificacion de las extremidades de reduccion se baso en una curva estandar de glucosa.

La actividad especffica en la celulosa de carboximetilo 7LF (Hercules) fue determinada usando una concentracion de sustrato de 1 % p/v.

La actividad especffica en la goma xantana tratada de xantano liasa (preparada segun Nankai et al. (1999) de la fuente Keltran) fue determinada usando una 0.25 % solucion de p/v.

El tampon de ensayo fue 0.1 M, HEPES pH 7.0. 1.5 mL sustrato disuelto en el tampon de ensayo fue precalentado en los tubos de vidrio durante 5 min. 0.5 mL dilucion de enzima apropiada fue anadida y la muestra fue mezclada por un vortice durante 10 seg.

Las muestras fueron incubadas durante 20 min a 40 °C.

La reaccion enzimatica fue terminada anadiendo 1.0 mL reactivo de parada que consiste en 1.5 g PHBAH, 5 g tartrato K/Na disuelto en 100 mL 2 % p/v NaOH.

Las muestras fueron hervidas durante 10 min y 200 pL fueron transferidas de cada tubo a una placa de microtitulacion de 96 pocillos.

Absorbancia a 410 nm fue recogida.

Los valores de absorbancia fueron convertidos para UI usando la curva estandar de glucosa.

Una UI se define como la liberacion 1 pmol glucosa equivalente formada por min a 40 °C y pH 7.0.

Los resultados se muestran en la tabla 9 de abajo.

Tabla 9: Actividad especffica de la GH9 (SEQ ID NO: 6) en CMC en comparacion con goma xantana tratada de xantano liasa

Sustrato: Actividad especffica (UI/mg)

CMC: 2.1

Goma xantana tratada de xantano liasa: 41.5

[0752] Los resultados muestran que la GH9 endoglucanasa es mas activa en la goma xantana tratada de xantano liasa en comparacion con CMC.

Referencia

[0753] Nankai, H., Hashimoto, W., Miki, H., Kawai, S., Murata, K. (1999) "Microbial system for polysaccharide depolymerization: enzymatic route for xanthan depolymerization by Bacillus sp. Strain GL1", Applied and Environmental Microbiology, Vol 65(6), p. 2520-2526.

Ejemplo 9: AMSA rendimiento de lavado de xantano liasa (SEQ ID NO: 8) y/o GH9 (SEQ ID NO: 6)

[0754] Los experimentos fueron conducidos como se describe en el ensayo Automatic Mechanical Stress Assay (AMSA) para metodo de colada utilizando un procedimiento de lavado de 2 ciclos y las condiciones experimentales especfficas en tablas 10 y 11 de abajo: la enzima(s) como se ha declarado en tablas 12 y 13 de abajo se anadieron al ciclo 1.

Tabla 10: Condiciones para el ciclo 1

5

10

15

20

25

30

35

Solucion de prueba: Tampon (50 mM MES)

Volumen de solucion de prueba: 160 micro L

pH: Ajustado para pH 7

Tiempo de lavado: 30 Minutos

Temperatura: 20°C O 40°C

Dureza del agua: 15°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 4:1:7.5

Muestra: DN31: Goma xantana con negro de carbon

Tabla 11: Condiciones para ciclo 2

Solucion de prueba: 3.33 G/L modelo de detergente A

Volumen de solucion de prueba: 160 Micro L

PH: No-ajustado

Tiempo de lavado: 30 Minutos

Temperatura: 20°C o 40°C

Dureza del agua: 15°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 4:1:7.5

[0755] La dureza del agua fue ajustada por adicion de CaCl2, MgCh y NaHCO3 al sistema de prueba.

Despues del lavado los tejidos fueron enjuagados en agua corriente y secados al aire.

Las muestras fueron preparadas anadiendo goma xantana de Xanthomonas campestris (Sigma cat# C1253) mezcladas con negro de carbono a un tejido de algodon.

Tabla 12: Resultados de xantano liasa (SEQ ID NO: 8) y/o GH9 (SEQ ID NO: 6) a 20°C en el ensayo AMSA.

Enzima(s) adicionada (mg protefna enzimatica/L solucion de lavado): Intensidad (avg) s.d.

Ninguna enzima adicionada: 392.38 1.80

Xantano liasa (1.0 mg EP/L): 396.72 1.99

GH9 (0.25 mg EP/L): 398.46 1.51

Xantano liasa (1.0 mg EP/L) & GH9 (0.25 mg EP/L): 407.11 1.57

Tabla 13: Resultados de xantano liasa (SEQ ID NO: 8) y/o GH9 (SEQ ID NO: 6) a 40°C en ensayo AMSA

Enzima(s) adicionada: Intensidad (avg) s.d.

Ninguna enzima adicionada: 393.41 1.41

Xantano liasa (1.0 mg EP/L): 402.13 2.41

GH9 (0.25 mg EP/L): 401.56 1.24

Xantano liasa (1.0 mg EP/L) & GH9 (0.25 mg EP/L): 411.91 0.99

[0756] Estos resultados muestran que la combinacion de xantano liasa y GH9 tiene un efecto de lavado bajo las condiciones evaluadas.

Tambien GH9 sola actua bien, mientras que la xantano liasa sola solo tiene un efecto menor en este ensayo.

Ejemplo 10: actividad de degradacion de xantano de GH9 enzimas y xantano liasa por medicion de reduccion de viscosidad

Reduccion de viscosidad

[0757] Las mediciones de viscosidad fueron realizadas utilizando el ensayo de presion de viscosidad desarrollado por Novozymes descrito en la WO2011/107472. 400 pL fue el tamano de la muestra.

Los resultados presentados son el promedio de tres mediciones y se muestran en la tabla 14 de abajo.

Hidrolisis

[0758] Las condiciones de hidrolisis fueron de la siguiente manera: 30 °C, 0.25% goma xantana (XG) en 50 mM tampon MES + 0.01% Triton x-100 pH 7.0.

Enzima fue anadida tras equilibrado termico.

Antes del uso a todas las enzimas se les cambio el tampon al tampon MES usando columnas NAP 5 (GE Healthcare).

Dosis enzimaticas

[0759] Las preparaciones enzimaticas purificadas del ejemplo 5 fueron usadas para el analisis a 31.25 mg/L.

5 Las mezclas enzimaticas de xantano liasa (SEQ ID NO: 8) y GH9 endoglucanasas fueron evaluadas por duplicado.

Tabla 14: Mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (SEQ ID NOs: 6, 16,18 o 20) y/o xantano liasa (XL, SEQ ID NO: 8) en la goma xantana

Muestra: T= 0 minutos T= 30 minutos T= 1 hora T= 2 horas T= 3 horas T= 4 horas

Promedio (Pa): S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D

Goma xantana (control): 935 40 905 29 1065 206 845 35 765 6 755 32

Control de tampon: 542 26 572 110 555 15 498 57 482 104 435 71

Goma xantana + xantano liasa (XL): 962 40 898 21 952 114 832 17 862 106 815 51

Goma xantana + GH9 (SEQ ID NO: 6): 992 10 945 6 925 6 882 10 915 78 902 104

Goma xantana + GH9 (SEQ ID NO:16): 1042 10 985 15 1025 93 935 6 938 86 895 12

Goma xantana + GH9 (SEQ ID NO: 18): 1048 25 1062 130 985 21 955 21 932 53 908 38

Goma xantana+ GH9 (SEQ ID NO: 20): 1042 20 1028 31 1038 98 942 20 912 20 855 47

Goma xantana+ XL + GH9 (SEQ ID NO: 6): 925 45 578 42 572 62 515 21 482 44 412 70

Goma xantana + XL + GH9 (SEQ ID NO: 16): 975 97 628 12 625 75 502 30 418 21 408 71

Goma xantana + XL + GH9: 948 21 808 6 782 10 708 32 632 17 645 21

(SEQ ID NO: 18)

Goma xantana + XL + GH9 (SEQ ID NO: 20): 908 15 712 17 668 31 592 20 592 70 472 0

[0760] Los resultados presentados arriba muestran que la combinacion del diferente GH9 con xantano liasa puede degradar el xanano presente en los medios, asf conduciendo a reduccion de viscosidad.

5 Ejemplo 11: clonacion y expresion de GH9 en el Bacillus subtilis sin etiqueta His N-terminal

[0761] Los fragmentos de gen del GH9 gen fueron amplificados de ADN cromosomico de las cuatro cepas bacterianas con cebadores espedficos D158F-directo y D159R-inverso para Paenibacillus sp NN062047 D168F- directo y D169R-inverso para Microbacterium sp NN062149 D170F-directo y D170R-inverso para Microbacterium

10 sp NN062148 D171F-directo y D172R-inverso para Microbacterium sp NN062045 (ver tabla 15 para detalles de secuencia).

Los cebadores contienen la proyeccion para vector de clonacion, C6221 (descrito en WO2012/025577), despues de la senal de secrecion.

15 Tabla 15: Cebadores usados para amplificacion de PCR

Amplificacion de gen GH9 de: Cebador especffico directo Cebador especffico inverso

Paenibacillus sp NN062047: D158F:5' GCTTTTAGTTCATCGATCGCATCGGC TATCGCAGGCGTGGTTCAAAGCGTG A3' (SEQ ID NO: 33) D159R: 5' TT ATT GATT AAC GC GTTT AC G G A ACTGGAACAAGCTGAATGAAA 3' (SEQ ID NO: 34)

Microbacterium sp NN062149: D168F:5'GCTTTTAGTTCATCGATCGC ATCGGCTGCGACGATCGAACGCGTC GCCGTCA 3' (SEQ ID NO: 35) D169R: 5' TTATTGATTAACGCGTTCATCCG AC G ACC ACT CC G GT C AC G 3' (SEQ ID NO: 36)

Microbacterium sp NN062148: D170F: 5' GCTTTTAGTTCATCGATCGCATCGGC TGCGACGATCACACAGGTCGCGGTG A3' (SEQ ID NO: 37) D170R: 5' TTATTGATTAACGCGTCTACTGA ACGACCACCCCCGTCGTG 3' (SEQ ID NO: 38)

Microbacterium spNN062045: D171F: 5' G CTTTTAGTT CAT C G AT C GCAT C G G C TGCCACCAT C GAGGAAGT CAC G GTG A3' (SEQ ID NO: 39) D172R: 5' TT ATT GATT AAC GCGTTCAGCCG ACGGCGACGCCGGACACC 3' (SEQ ID NO: 40)

[0762] El fragmento de PCR fue clonado en el plasmido digerido con enzimas Clal y Mlul que utilizan el equipo de clonacion de HD In-Fusion (numero de producto de Clontech 639648) siguiendo las instrucciones del fabricante (PT5162-1).

5

[0763] La GH9 protefna fue expresada con la senal de secrecion con la siguiente secuencia del aminoacido (MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA (SEQ ID NO: 29)) reemplazando la senal de secrecion nativa dando como resultado el gen recombinante y secuencia de protefna.

10 [0764] La reaccion de In-Fusion se transformo en el E. coli y transformantes resistentes a la ampicilina fueron

seleccionados y cultivados para posterior preparacion de plasmido de ADN. 7 Clones fueron analizados por la secuenciacion del ADN para verificar la secuencia de ADN correcta de la construccion.

[0765] Un clon con la secuencia de genes recombinante correcta fue seleccionado y el plasmido correspondiente 15 fue integrado por recombinacion homologa en el genoma de la celula huesped de Bacillus subtilis y el constructo de gen fue expresado bajo control de un sistema de promotor triple como se describe en la WO99/43835.

El gen codificante para acetiltransferasa de cloranfenicol fue usado como una etiqueta (como se ha descrito en Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30:312-315).

20 [0766] Los transformantes resistentes al cloranfenicol fueron analizados por PCR para verificar el tamano

correcto del fragmento amplificado.

Ejemplo 12: clonacion y expresion de xantano liasa en el Bacillus subtilis sin etiqueta His N-terminal

25 [0767] El gen de xantano liasa truncado fue amplificado de ADN cromosomico de la cepa de Paenibacillus

NN018054 con cebadores especfficos de gen (D160F: 5'

GCTTTTAGTTCATCGATCGCATCGGCTGCGGAGGCGTCCGACATGTTCGACG 3' (SEQ ID NO: 41)) y D161R: 5' TTATTGATTAACGCGTTTACGGCTGCTGCGCGCCGGTCAGG 3' (SEQ ID NO: 42)).

Los cebadores contienen la proyeccion a vector de clonacion, C6221 (descrita en la WO2012/025577), despues 30 de la senal de secrecion.

[0768] El fragmento de PCR fue clonado en el plasmido digerido con enzimas Clal y Mlul que utilizan el equipo de clonacion de HD In-Fusion (Clontech 639648) siguiendo las instrucciones del fabricante (PT5162-1).

35 [0769] La protefna de xantano liasa fue expresada con la senal de secrecion con la siguiente secuencia de

aminoacido (MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA, (SEQ ID n° 29)) que remplaza la senal de secrecion nativa dando como resultado el gen recombinante y secuencia de protefna.

[0770] La reaccion In-Fusion fue transformada en el E. coli y los transformantes resistentes a la ampicilina fueron 40 seleccionados y cultivados para la posterior preparacion de plasmido de ADN. 7 Clones fueron analizados por la

secuenciacion del ADN para verificar la secuencia de ADN correcta del constructo.

[0771] Un clon con la secuencia de genes recombinante correcta fue seleccionado y el plasmido correspondiente fue integrado por recombinacion homologa en el genoma de la celula huesped de Bacillus subtilis y el constructo

45 de gen fue expresado bajo control un sistema de promotor triple como se describe en la WO99/43835.

[0772] Los transformantes resistentes al cloranfenicol fueron analizados por PCR para verificar el tamano

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

correcto del fragmento amplificado.

Ejemplo 13 construccion de un vector de expresion de Aspergillus oryzae con la secuencia codificante de un polipeptido de xantano liasa truncado C-terminal con actividad de xantanasa

[0773] Dos cebadores oligonucleotidos sinteticos mostrados a continuacion fueron disenados para PCR amplificar el gen de xantano liasa, con SEQ ID NO: 4, del ADN genomico obtenido a partir de Paenibacillus sp. NN018054.

Un equipo de clonacion de IN-FUSION™ (BD Biociencias, Palo Alto, CA, USA) fue usado para clonar el fragmento directamente en el vector de expresion pDau109 (WO 2005/042735).

F- C3AQX

5'- GGTGAAGCGTACGCGTGCGGAGGCGTCCGACATGTT -3 (SEQ ID NO: 43)

R- C3AQX

5'- AGATCTCGAGAAGCTTTTACGGCTGCTGCGCGCCGG -3 (SEQ ID NO: 44)

[0774] Las letras en negrita representan la secuencia genetica.

La secuencia subrayada es homologa a los sitios de insercion de pDau109.

[0775] Una MJ investigacion PTC-200 motor de ADN fue usada para realizar la reaccion PCR.

Un equipo PCR de alta fidelidad de Phusion® (Finnzymes Oy, Espoo, Finland) fue usado para la amplificacion de PCR.

La reaccion por PCR se compuso por 4 pl de 5X GC tampon (Finnzymes Oy, Espoo, Finland), 0.4 pl de dNTPs (10 mM), 0.2 pl de Polimerasa de DNA de Phusion® (0.2 unidades/pl) (Finnzymes Oy, Espoo, Finlandia), 1 pl de cebador F- c3aQX (10 pM), 1 pl de cebador R- C3AQX (10 pM), 0.5 pl de AdN genomico (100 ng/pl) y 12.9 pl de agua desionizada en un volumen total de 20 pl.

Las condiciones RCP fueron 1 ciclo a 98°C durante 1 minuto. 30 Ciclos cada uno a 98°C durante 10 segundos y 72°C durante 1.5 minutos; y 1 ciclo a 72°C durante 5 minutos.

La muestra luego se mantuvo a 10°C hasta retirarla de la maquina PCR.

[0776] Los productos reactivos fueron aislados por 1.0% electroforesis en gel de agarosa utilizando 40 mM Tris base, 20 mM acetato sodico, 1 mM tampon (TAE) de EDTA disodio donde una 2283 banda de producto de par de bases fue extirpada del gel y purificada utilizando un equipo de purificacion de banda de gel y ADN para PCR illustra GFX® (GE Healthcare Life Sciences, Brondby, Denmark) segun las instrucciones del fabricante.

El fragmento fue luego clonado en Mlu I y Hind III digerido pDau109 (WO 2005/042735) utilizando un equipo de clonacion IN-FUSION™ que da como resultado el plasmido pC3AQX.

La clonacion del gen C3AQX en Mlu I-Hind III digerida pDau109 resulto en la transcripcion del gen Paenibacillus sp-18054 C3AQX bajo el control de un promotor doble NA2-tpi.

La secuencia de nucleotidos y secuencia de aminoacidos deducida del Paenibacillus sp-18054 gen xantano liasa C3AQX se muestra en SEQ ID NO: 45 y SEQ ID NO: 46, respectivamente.

[0777] El protocolo de clonacion fue realizado segun las instrucciones de equipo de clonacion de IN-FUSION™ que generan un constructo C3AQX de xantano liasa.

Los plasmidos tratados e insertados fueron transformados en un Shot® TOP10F celulas de E. coli competentes qufmicamente (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) segun el protocolo del fabricante y colocadas en placas LB suplementadas con 0.1 mg de ampicilina por ml.

Despues de la incubacion a 37°C durante toda la noche, se vieron crecer las colonias bajo seleccion en las placas de ampicilina LB.

Dos colonias transformadas con la C3AQX construccion de xantano liasa fueron cultivadas en el medio LB suplementado con 0.1 mg de ampicilina por ml y el plasmido fue aislado con un QIAprep Spin Miniprep Kit (QIAGEN Inc., Valencia, CA, USA) segun el protocolo del fabricante.

[0778] Los plasmidos aislados fueron secuenciados con cebadores de vector y cebadores especfficos de gen C3AQX para determinar un clon de expresion de plasmido representativo que estaba libre de errores de PCR.

Ejemplo 14: expresion del Paenibacillus sp-18054 xantano liasa en el Aspergillus

[0779] El plasmido de expresion pC3AQX fue transformada en el Aspergillus oryzae MT3568.

Aspergillus oryzae MT3568 es un AMDS (acetamidasa) derivado interrumpido de JaL355 (WO 2002/40694) donde la auxotroffa pyrG fue restaurada en el proceso de eliminar el gen A, acetamidasa oryzae (amdS).

MT3568 Protoplastos se preparan segun el metodo de patente europea, EP0238023, paginas 14-15.

[0780] Los transformantes fueron purificados en las placas de seleccion de sacarosa de COVE a traves de conidias unicas antes de esporulacion de estos en placas PDA.

La produccion del Paenibacillus sp-18054 polipeptido de xantano liasa por los transformantes se analizo de sobrenadantes de cultivo de 0.75 ml cultivos fijos en 96 pocillos profundos a 30°C en YP+2% medio de glucosa.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0781] Para produccion a gran escala, las esporas Aspergillus oryzae XL-4 fueron extendidas sobre una placa PDA e incubadas durante cinco dfas a 37°C.

La placa de espora confluyente se lavo dos veces con 5 ml de 0.01% TWEEN® 20 para maximizar el numero de esporas recogidas.

La suspension de esporas fue luego usada para inocular siete matraces de 500 ml que contenfan 100 ml de medio Dap-4C.

El cultivo fue incubado a 30°C con agitacion constante a 100 r.p.m.

El quinto dfa post-inoculacion, el caldo de cultivo fue recogido por filtracion a traves de un filtro Bottle top MF75 Supor MachV 0.2 pm PES (Thermo Fisher Scientific, Roskilde, Denmark).

El caldo de cultivo fresco de este transformante produjo una banda de protefna de xantano liasa de aproximadamente 90 kDa.

Cepas

[0782] La cepa Aspergillus oryzae MT3568 se uso para la expresion del gen Acremonium alcalofilum que codifica el polipeptido con actividad de endoglucanasa.

A. Oryzae MT3568 es una amdS (acetamidasa) derivada de gen interrumpido de Aspergillus oryzae JaL355 (WO 2002/40694) donde la auxotroffa pyrG fue restaurada por la interrupcion del gen acetamidasa de A. Oryzae (amdS).

Ejemplo 15: seleccion de actividad de xantano liasa no marcada (SEQ ID NO: 4) expresada en el Aspergillus oryzae

[0783] Sobrenadante filtrado a partir de una fermentacion realizada como se describe en el ejemplo 14 fue concentrada diez veces por una columna por centrifugacion de Vivaspin® 20 (Sartorius Stedim biotech, product number VS2092).

La actividad de xantano liasa en la muestra concentrada fue medida por reduccion de viscosidad y extremidades de reduccion, como se describe en el ejemplo 6 para las enzimas marcadas con His purificadas.

Extremidades de reduccion

[0784] El metodo usado para determinar la cantidad de las extremidades de reduccion producidas fue el ensayo de acido bicinconfnico 2,2' (BCA) como se describe en el Murphy et al., 2012, J. Biol.Chem. 287: 1252-1260 y adaptado de Zhang et al, 2005, Biomacromolecules 6: 1510-1515 y Dubois et al, 1956, Anal.Chem. 28: 350-356. La cuantificacion de las extremidades de reduccion fue basada en una curva estandar de glucosa.

Las diluciones apropiadas fueron usadas para asegurar que las muestras se encontraban en la curva de calibracion de glucosa.

Los resultados se muestran en la tabla 17 de abajo Reduccion de viscosidad

[0785] Las mediciones de viscosidad fueron realizadas utilizando el ensayo de presion de viscosidad desarrollado por Novozymes descrito en WO2011/107472. 400 pL fue el tamano de la muestra.

Los resultados presentados son el promedio de dos mediciones y se muestran en la tabla 16 de abajo.

Hidrolisis

[0786] Las condiciones de hidrolisis fueron de la siguiente manera: 30 °C, 0.25% goma xantana (XG) en el medio TY.

La enzima se anadio tras el equilibrado termico.

Dosis enzimaticas

[0787] Las preparaciones enzimaticas purificadas del ejemplo 5 fueron usadas para el analisis en las siguientes concentraciones finales:

GH9 (SEQ ID NO: 6): 31.25 mg/L Xantano liasa (SEQ ID NO: 4): 31.25 mg/L

[0788] Se estimo que la concentracion de xantano liasa en el sobrenadante concentrado es aproximadamente similar a la enzima purificada basada en analisis SDS-PAGE.

5

10

15

20

25

Tabla 16: Mediciones de viscosidad

Muestra: T= 0 minutos T= 30 min T= 1 hora aT= 2 horas

Promedio (Pa): S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D

H2O: 436 31 486 15 436 95 434 35

Goma xantana (control): 1293 30 1261 23 1220 43 1277 23

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 4) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1131 11 825 69 778 13 767 19

Goma xantana + cepa huesped (sobrenadante concentrado): 1200 71 1333 42 1141 68 1224 80

Goma xantana + cepa huesped (sobrenadante concentrado) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1125 36 1120 50 1071 53 1126 40

Goma xantana + xantano liasa (sobrenadante concentrado): 1225 80 1000 93 1040 5 1111 31

Goma xantana + xantano liasa (sobrenadante concentrado) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1120 41 841 48 761 29 722 19

Goma xantana + DAP-4C medios de crecimiento: 1185 53 1173 94 1180 66 1169 50

Tabla 17: Resultados de extremidades de reduccion

Perfodo de incubacion: 30 min

Condiciones: |jM equivalentes de glucosa

Goma xantana + sobrenadante concentrado de cepa de huesped de A. oryzae: 32

Goma xantana + sobrenadante concentrado que contiene xantano liasa: 1451

[0789] La produccion de xantano liasa en el Aspergillus oryzae muestra que la xantano liasa segregada es activa solo en la goma xantana, mientras las mediciones de viscosidad estable para el mismo sistema muestran que esta es una accion de exoenzima, con un efecto pequeno en la estructura del polfmero en masa.

Ejemplo 16: identificacion de nuevas GH9 xantanasas y XL genes

[0790] Dos Paenibacillus nuevos se aislaron de muestras de tierra (ver tabla 18) siguiendo el mismo procedimiento como se describe en ejemplos 1 y 3.

Tabla 18: Aislamiento de cepas bacterianas

Cepa: Numero de identificacion Fuente Pais

Paenibacillus sp: NN062253 Tierra de bosque Estados Unidos

Paenibacillus sp: NN062250 Tierra de bosque Estados Unidos

[0791] La extraccion de ADN cromosomico y secuenciacion de genoma de las dos cepas nuevas se hizo como se describe en ejemplos 1 y 3.

Los genes de las cepas bacterianas nuevas al igual que el aislamiento de una nueva xantano liasa y 2 genes truncados GH9 de Paenibacillus NN062047 y las secuencias protefnicas correspondientes fueron identificadas y se presentan en la tabla 19.

Tabla 19: Genes naturales y secuencias ID de polipeptido correspondientes

Amplificacion de gen de organismo: SEQ ID NO de gen SEQ ID NO de polipeptido

Paenibacillus NN062047: 47 48

Paenibacillus NN062047: 51 52

Paenibacillus NN062253: 55 56

Paenibacillus NN062250: 59 60

Paenibacillus NN062047: 63 64

10

Ejemplo 17: clonacion y expresion de GH9 y candidatos de xantano liasa en el Bacillus subtilis con etiqueta His N-terminal.

[0792] Los fragmentos de gen (con las protemas traducidas correspondientes) del ejemplo 16 fueron amplificados de ADN cromosomico de las cepas bacterianas con cebadores espedficos (ver tabla 20) y clonados y expresados en el Bacillus subtilis con etiqueta de poli-histidina N-terminal (HHHHHHPR-) despues de la senal de secrecion como se describe en el ejemplo 2 y 4.

Tabla 20: Cebadores usados para amplificacion de PCR

Amplificacion de gen de:

SEQ ID NO de

polipeptido

Cebador especffico directo

Cebador especffico inverso

Paenibacillus

NN062047

50

D244F

TCACCATCATCCTAGGGCAGGG ACCGTCAGCAAAATTTCCG (SEQ ID NO: 69)

D245R

3 TT ATT GATT AAC GCGTTTAGG GTGTTGTTGCGCTAACCGGA (SEQ ID NO: 70)

Paenibacillus

NN062047

54

D242F

TCACCATCATCCTAGGGCAGGG ACCGTCAGCAAAATTTCCG (SEQ ID NO: 71)

D243R

3 TTATTGATTAACGCGTTTAAG TCTGGTAGACCGCTGGTCCG (SEQ ID NO: 72)

Paenibacillus

NN062253

58

D271F

TCACCATCATCCTAGGAACGCA

D272R

TTATTGATTAACGCGTTTAAG

AGCCTGGTTCAAAGCGTGA (SEQ ID NO: 73)

GGGTCACGGAAACAAGCTGA (SEQ ID NO: 74)

Paenibacillus

NN062250

62

D289F

TCACCATCATCCTAGGGCGGA' GAATTCGACGGGATGCGGG (SEQ ID NO: 75)

D290R

TT ATTG ATT AAC GCGTTTACG GATT AC GT AC AAATTT G ACT (SEQ ID NO: 76)

Paenibacillus

NN062047

66

D293F

TCACCATCATCCTAGGGCGGAC G AGTTT G AC AC G CT AAG G G (SEQ ID NO: 77)

D294R

: TTATTGATTAACGCGTTTATG GGACCTTTACCAGCTTCACG (SEQ ID NO: 78)

Paenibacillus

NN018054

68

D332F

TCACCATCATCCTAGGGCGGAC: GCGTCCGACATGTTCGACG (SEQ ID NO: 79)

D333R

6 TTATT GATTAAC G C GTTC AGT C G AGCC AG AT GT AAT C AAG C (SEQ ID NO: 80)

Ejemplo 18: rendimiento de lavado AMSA de xantano liasa y GH9

[0793] Los experimentos fueron conducidos como se describe en el ensayo de tension mecanica automatica 5 (AMSA) para metodo de colada utilizando un procedimiento de lavado de ciclo unico y las condiciones experimentales especfficadas en la tabla 21 de abajo.

Los resultados se dan en tablas 22 y 23 y 6 GH9 endoglucanasas diferentes y 4 xantano liasas diferentes junto con controles donde la GH9 endoglucanasa y/o xantano liasa estan ausentes.

Los resultados se muestran como el Aint valor enzimatico.

10

Tabla 21: Condiciones experimentales para ciclo de lavado

Solucion de prueba: 3.33g/L modelo de detergente lfquido B

Volumen de solucion de prueba: 140 pL detergente por ranura; 20 pL enzima por pH de ranura

No-ajustado: Tiempo de lavado

20 Minutos: Temperatura

20°C O 40°C: Dosificacion enzimatica

Xantano liasa: 1 mg EP/L: GH9: 0.5 mg EP/L

Dureza del agua: 16°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 5:1:3

Muestra: DN31 D. Goma xantana con negro de carbon

[0794] La dureza del agua se ajusto por adicion de CaCl2, MgCh y NaHCO3 al sistema de prueba.

15 Despues del lavado, los tejidos fueron enjuagados en agua corriente y secados al aire.

Las muestras se prepararon anadiendo goma xantana de Xanthomonas campestris (Food Grade Keltrol T, Kelco) mezclados con negro de carbon a un tejido de algodon.

Tabla 22: datos de lavado AMSA compilados usando detergente lfquido modelo B a 40°C

Aint valor enzimatico: Xantano liasa

GH9: Ninguna XL SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 62 SEQ ID NO: 66 SEQ ID NO: 68

SEQ ID NO: 21: 9.6 17.8 ND2 ND2 ND2

Aint valor enzimatico: Xantano liasa

GH9: Ninguna XL SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 62 SEQ ID NO: 66 SEQ ID NO: 68

SEQ ID NO: 6: 13.8 25.5 22.8 30.1 22.0

SEQ ID NO: 16: 8.6 18.9 17.7 20.8 15.5

SEQ ID NO: 20: 7.9 13.5 13.7 13.2 13.2

SEQ ID NO: 50: 12.8 22.6 19.5 25.5 18.5

SEQ ID NO: 54: 4.6 14.6 12.3 18.1 13.3

SEQ ID NO: 58: 10.2 14.4 13.1 15.0 15.8

No GH9: 0 (Control) 1.7 0.5 3.8 -1.4

1: Cuantificacion de SEQ ID NO: 2 incierta debido a una segunda banda que se extiende de forma cercana presente en el gel SDS. : No determinado

Tabla 23: datos de lavado AMSA compilados usando detergente liquido modelo B a 20°C

Aint valor enzimatico: Xantano liasa

GH9: Ninguna XL SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 62 SEQ ID NO: 66 SEQ ID NO: 68

SEQ ID NO: 21: 4.7 7.0 ND2 ND2 ND2

SEQ ID NO: 6: 10.6 16.6 19.1 22.8 15.1

SEQ ID NO: 16: 5.0 14.6 14.5 15.0 9.5

SEQ ID NO: 20: 3.1 10.6 9.9 9.6 6.4

SEQ ID NO: 50: 8.6 16.9 15.2 17.2 11.0

SEQ ID NO: 54: 3.7 13.7 13.0 14.4 9.8

SEQ ID NO: 58: 8.8 14.1 13.3 12.7 10.2

No GH9: 0 (Control) 5.0 3.7 3.5 1.8

1: Cuantificacion de SEQ ID NO: 2 incierta debido a una segunda banda se extiende cercana presente en el gel SDS. 2: No determinado

5 [0795] Estos resultados muestran que las combinaciones diferentes de GH9 endoglucanasas y xantano liasas

dan un efecto de lavado sinergfstico en la goma xantana con manchas de negro de carbon tanto a 20°C como 40°C, indicando asf que este efecto sinergfstico se puede extrapolar a todas las xantano liasas y todas GH9 endoglucanasas.

10 Ejemplo 19: rendimiento de lavado MiniLOM de xantano liasa (SEQ ID n° 8) y/o GH9 (SEQ ID n° 6, 16, 50,54 o 58)

[0796] Las enzimas de la presente invencion fueron evaluadas utilizando el ensayo miniLOM para determinar el "efecto de detergencia enzimatica".

15 Los tubos de ensayo estan llenos de solucion de prueba, tejidos sucios y bolas de acero y rotan en un armario de calentamiento a una temperatura dada.

Los beneficios de limpieza se estudian cuando el lavado se realiza en un tampon o detergente liquido modelo A. Las condiciones experimentales para los experimentos se especffican en la tabla 24.

20 Tabla 24: Condiciones experimentales para miniLOM

Solucion de prueba: Detergente liquido modelo A

Volumen de solucion de prueba: 40 ML

pH: No aiustado

Tiempo de lavado: 30 minutos

Temperatura: 40°C

Dureza del agua: 16°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 5:1:3

Dosificacion enzimatica: Xantano liasa: 1 mg EP/L GH9: 0.5 mg EP/L

Muestras: Muestras Circulares 2cm de diametro

Manchas: 4 X manchas tecnicas con Goma xantana con negro de carbon (DN31D)

Lastre: 6 X wfk10A (100 % algodon tejido)

6 X wfk80A (100% algodon de punto)

Peso de lastre Total: Manchas tecnicas: 0.43g

Manchas de lastre: 0.53g pr tubo

Mecanicas: 4 Bolas de acero inoxidable, 6mm de diametro

[0797] La dureza del agua fue ajustada por adicion de CaCl2, MgCh y NaHCO3 al sistema de prueba.

Despues del lavado de los tejidos fueron enjuagados en agua del grifo y secados al aire.

Las muestras fueron preparadas anadiendo goma xantana de Xanthomonas campestris (Food Grade Keltrol T, 5 Kelco) mezclados con negro de carbon a un tejido de algodon.

[0798] El rendimiento de la enzima(s) se evalua por la medicion de la remision de las muestras textiles utilizando el ColorEye a 460nm.

10 Tabla 25: Resultados de lavado MimiLOM utilizando 5 diferentes GH9 y/o xantano liasa (SEQ ID NO: 8)

SEQ ID NO de GH9 endoglucanasa: Rem460

Ninguna enzima: XL GH9 XL+GH9

SEQ ID NO: 6: 40.4 ± 1.3 40.3 ± 1.3 48.1 ± 0.5 49.8 ± 0.5

SEQ ID NO: 16: 40.9 ± 3.2 40.2 ± 2.5 45.6 ± 0.4 47.9 ± 0.6

SEQ ID NO:50: 40.6 ± 2.3 40.4 ± 1.7 45.6 ± 0.7 47.8 ± 0.7

SEQ ID NO:54: 40.1 ± 2.0 40.8 ± 2.7 45.4 ± 1.3 47.0 ± 0.9

SEQ ID NO:58: 41.1 ± 0.6 40.8 ± 2.2 47.3 ± 0.4 46.6 ± 0.3

[0799] Estos resultados muestran que anadiendo la GH9 endoglucanasa (todas las cinco variantes) al lavado da un beneficio de limpieza significativa bajo las condiciones evaluadas.

15 Ademas, anadiendo la GH9 endoglucanasa (todas las cincas variantes) junto con XL produce un efecto de lavado adicional incluso aunque la xantano liasa por si sola no tenga efecto de aparato.

Ejemplo 20: identificacion de la GH9 xantanasa y genes de xantano liasa

20 [0800] Seis Paenibacillus nuevas sp fueron aisladas de muestras de tierra (ver tabla 26) despues del mismo

procedimiento como se describe en ejemplos 1 y 3.

Tabla 26: Identificacion de cepas bacterianas

Cepa: Numero de identificacion Fuente Pais

Paenibacillus sp: NN062046 Tierra de bosque China

Paenibacillus sp: NN062408 Tierra Dinamarca

Paenibacillus sp: NN062332 Tierra Estados Unidos

Paenibacillus sp: NN062147 arena de la playa Dinamarca

Paenibacillus sp: NN062193 Tierra de jardin Dinamarca

Microbacterium sp: NN062175 Tierra Dinamarca

25

[0801] Extraccion de ADN cromosomico y secuenciacion de genoma de las seis cepas nuevas se realizo como se describe en los ejemplos 1 y 3.

Los genes de las cepas bacterianas nuevas al igual que el aislamiento de 6 xantano liasas nuevas y 8 GH9 genes y las secuencias protefnicas correspondientes fueron identificadas y se presentan en la tabla 27.

30

Tabla 27: Genes naturales y secuencias ID de polipeptido correspondientes

Amplificacion de gen de organismo

SEQ ID NO de

gen

SEQ ID NO de polipeptido

Paenibacillus NN062046: 81 82

Paenibacillus NN018054: 85 86

Paenibacillus NN062408: 89 90

Paenibacillus NN018054: 93 94

Paenibacillus NN062332: 97 98

Paenibacillus NN062147: 105 106

Paenibacillus NN062193: 109 110

Paenibacillus NN062408: 113 114

Paenibacillus NN062332: 117 118

Paenibacillus NN062046: 121 122

Paenibacillus NN062253: 125 126

Microbacterium NN062175: 129 130

Paenibacillus NN062193: 133 134

Paenibacillus NN062193: 137 138

Ejemplo 21: clonacion y expresion de GH9 y candidatos de xantano liasa en el Bacillus subtilis con etiqueta His N-terminal.

5 [0802] Los fragmentos de gen (con las protemas traducidas correspondientes) del Ejemplo 20 fueron

amplificados de ADN cromosomico de las cepas bacterianas con cebadores espedficos (ver tabla 28) y clonados y expresados en el Bacillus subtilis con etiqueta de poli-histidina N-terminal (HHHHHHPR-) despues de la senal de secrecion como se describe en el ejemplo 2 y 4.

10 Tabla 28: Cebadores usados para amplificacion de PCR

SEQ ID NO de

Amplificacion

gen

de gen de:

recombinante

SEQ ID NO de

polipeptid

o

Cebador especifico directo

Cebador especifico inverso

Paenibacillus

NN062046

84

F-C597B

T C ACC AT CAT C CT AG G GC CG TAGCCCCGCTCCCC (SEQ ID NO: 141)

R-C597B

TTATTGATTAACGCGTTTA TGGCGTCGTTACGAGGAA (SEQ ID NO: 142)

Paenibacillus

NN018054

96

F-C5B9G

T CACCAT CAT CCTAGGG CTC CGGCTCCGCTGCCG (SEQ ID NO: 143)

R-C5B9G

TTATTGATTAACGCGTTTA GCCCCGCACCGTCACATC (SEQ ID NO: 144)

Paenibacillus

NN062332

SEQ ID NO de gen

recombinante

imagen3

Paenibacillus

NN062147

107

108

imagen4

Paenibacillus

NN062193

111

112

imagen5

Paenibacillus

NN062408

115

116

F-C59TM

TCACCATCATCCTAGGTCCG CGCGTATGATGCA (SEQ ID NO: 151)

R-C59TM f TT ATT GATTAAC G C G T CT A CT G GAT CAACTC AAACTT (SEQ ID NO: 152)

Paenibacillus

NN062332

119

120

imagen6

Paenibacillus

NN062046

123

124

o

SEQ ID NO de gen

recombinante

imagen7

R-C3AX4 TTATTGATTAACGCGTTTA TTCGCTGTAAATGGCCATT CCCA

(SEQ ID NO: 156)

Paenibacillus

NN062253

127

128

F-C4AKA TCACCATCATCCTAGGGCGC ACGAGTTCGACACGCTGCG G

(SEQ ID NO: 157)

R-C4AKA TT ATT GATTAAC G C G T CT A ATT CG CACT CGTCAGACG CAGA

(SEQ ID NO: 158)

Microbacteriu m NN062175

131

132

F-C3BXT T C ACC AT CAT CCT AG G G CG/

CGATCACACAGGTCGCGGTG

R-C3BXT TTATTGATTAACGCGTCTA 5 CTGAACGACCACCCCCGT

(SEQ ID NO: 159)

CGTG

(SEQ ID NO: 160)

Paenibacillus

NN062193

135

136

imagen8

R-C597E

TTATTGATTAACGCGTTTA GAAGGGAGTCACGCTAAT (SEQ ID NO: 162)

Paenibacillus

NN062193

139

140

imagen9

R-C597F

TTATTGATTAACGCGTTTA ATTCTCCAGCAGCAGCGC (SEQ ID NO: 164)

o

Ejemplo 22: clonacion y expresion de un GH9 gen de Microbacterium testaceum

[0803] Un gen que codifica un GH9 se descubrio en la base de datos publica (ADN ref EMBL:AP012052 5 SWISSPROT:E8N9Z4 SEQ ID NO:101 y SEQ ID NO 102 respectivamente).

Un gen sintetico fue amplificado utilizando los oligos especfficos (tabla 29) y clonado y expresado en el Bacillus subtilis con etiqueta de poli-histidina N-terminal (HHHHHHPR-) despues de la senal de secrecion como se describe en ejemplos 2 y 4.

La secuencia de nucleotidos del producto de fusion corresponde a SEQ ID NO: 103.

10 La secuencia de protefna traducida corresponde a SEQ ID NO: 104)

Tabla 29: Cebadores usados para amplificacion de PCR

SEQ ID NO de gen

recombinante

SEQ ID NO de

polipeptido

Cebador especffico directo

Cebador especffico inverso

103

104

F-C3FCE

TCACCATCATCCTAGGGCAAC AGT CAAACAAGTAGCAGT GT (SEQ ID NO: 165)

R-C3FCE

TTATTGATTAACGCGTTTATTG GACCAAAATGCCCGTCGTT (SEQ ID NO: 166)

15 Ejemplo 23: clonacion y expresion de 2 GH9 enzimas de Paenibacillus sp-18054 y Paenibacillus sp-62408 en el Bacillus subtilis

[0804] Un sistema de vector de integracion lineal fue usado para la clonacion de expresion del GH9 de Paenibacillus sp-18054 (SEQ ID NO: 85) y el GH9 de Paenibacillus sp-62408 (SEQ ID NO: 89).

20 La construccion de integracion lineal fue un producto de fusion PCR hecho por fusion del gen entre dos regiones cromosomicas homologas de Bacillus subtilis junto con un promotor fuerte y una etiqueta de resistencia de cloranfenicol.

La fusion fue hecha por SOE PCR (Horton, R.M., Hunt, H.D., Ho, S.N., Pullen, J.K. y Pease, L.R. (1989), "Engineering hybrid genes without the use of restriction enzymes, gene splicing by overlap extension", Gene 77: 25 61-68).

El metodo de SOE PCR tambien se describe en la solicitud de patente WO 2003095658.

El gen fue expresado bajo el control de un sistema de promotor triple (como se ha descrito en WO 99/43835), que consiste en los promotores de gen de alfa-amilasa Bacillus licheniformis (amyL), gen de alfa-amilasa de Bacillus amyloliquefaciens (amyQ) y el Promotor Bacillus thuringiensis crylllA que incluye la secuencia 30 estabilizante.

El gen codificante para acetiltransferasa de cloranfenicol fue usado como marcador (descrito en por ejemplo Diderichsen, B.; Poulsen,G.B.; Joergensen,S.T., (1993), "A useful cloning vector for Bacillus subtilis", Plasmid, 30:312).

Los constructos de gen finales fueron integrados en el cromosoma Bacillus por recombinacion homologa en el 35 locus de pectato liasa.

El gen que codifica el GH9 de Paenibacillus sp-18054 fue expresado como una version truncada (SEQ ID NO 87).

El GH9 de Paenibacillus sp-62408 fue expresado como un gen de longitud total (SEQ ID NO 91).

Los fragmentos de gen fueron amplificados de ADN cromosomico de las cepas correspondientes con cebadores 40 especfficos de gen que contienen la proyeccion a los dos fragmentos de vector flanqueante (las secuencias de cebador se enumeran en la tabla 30).

Ambos genes fueron expresados con una senal de secrecion Bacillus clausii (con la siguiente secuencia de aminoacido: MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA) reemplazando la senal de secrecion nativa y ambos genes fueron expresados con una etiqueta poli-histidina (HHHHHH) enlazada al C-terminal de la protefna.

45 Un mapa de plasmido del vector lineal con inserto de gen se muestra en la figura 1.

Tabla 30: Cebadores usados para amplificacion de PCR

Amplificacion de GH9 gen: SEQ ID NO de gen recombinante SEQ ID NO de polipeptido Cebador especffico directo Cebador especffico inverso

Amplificacion de GH9 gen: SEQ ID NO de gen recombinante SEQ ID NO de polipeptido Cebador especifico directo Cebador especifico inverso

Paenibacillus sp-18054: 87 88 D14KMG GTTCATCGATCGCATCGGC TGCTCCGGCTCCGCTGC (SEQ ID NO: 167) D14KMH TTAGTGGTGATGGTGATGATGGTC GTCGAAGAACAGTGTTTGGGC (SEQ ID NO: 168)

Paenibacillus sp-62408: 91 92 D14N38 GTTCATCGATCGCATCGGC TGCCACTCCCCCCTTGCC (SEQ ID NO: 169) D14N39 TTAGTGGTGATGGTGATGATGGTC GGTT ACCACT ACGTCGT CAAAGA (SEQ ID NO: 170)

[0805] Los 2 fragmentos de vector y el fragmento de gen fueron sometidos a un empalme por extension de superposicion PCR (SOE) por reaccion para ensamblar los 3 fragmentos en un constructo de vector lineal.

Esto se realizo independientemente para cada uno de los dos genes.

5 Una parte allcuota de cada uno de los dos productos PCR fue transformada en Bacillus subtilis.

Los transformantes fueron seleccionados en placas LB suplementadas con 6 pg de cloranfenicol por ml.

Para cada constructo un clon de Bacillus subtilis recombinante con el constructo de expresion integrado crecio en el cultivo llquido.

Los sobrenadantes que contienen la enzima fueron cosechados y las enzimas purificadas como se describe en el 10 ejemplo 5.

Ejemplo 24: actividad de degradacion de xantano de GH9 enzimas y xantano liasas por medicion de reduccion de viscosidad

15 [0806] Las mediciones de viscosidad fueron efectuadas utilizando combinaciones diferentes de xantano liasas y

GH9 endoglucanasas como se describe en el ejemplo 10.

La concentracion de las preparaciones enzimaticas purificadas usadas para el analisis fue 31.25 mg/L.

Los resultados presentados son el promedio de tres mediciones.

20 Tabla 31: Las mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (identidad de SEQ n° 6, 84, 88, 92, 136,140) y xantano liasas (identidad de SEQ n° 8, 108, 112,116) en la goma xantana

Muestra: T=0 min T=30 min T=90 min T=2 h 30 min T=3 h 30 min

Promedio (Pa): S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D Promedio (Pa) S.D

Agua: 423 15 406 70 354 85 387 44 418 66

Goma xantana 0.25% (control): 1140 69 1099 32 1011 98 1020 51 951 40

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 857 67 463 30 441 87 510 21 358 30

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 84): 960 36 533 131 368 31 490 25 455 115

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 88): 1040 40 496 6 411 35 487 26 401 45

Goma xantana+: 1013 71 659 25 458 46 490 23 361 38

Muestra: T=0 min T=30 min T=90 min T=2 h 30 min T=3 h 30 min

Xantano liasa(SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 92)

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 108) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1060 20 549 12 451 44 434 25 408 36

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 112) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1150 30 689 57 541 30 497 26 478 26

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 116) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1073 59 583 96 468 59 484 31 391 51

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 136): 930 0 609 133 401 46 444 55 405 15

Goma xantama + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 140): 1083 61 739 32 524 117 484 6 401 55

Tabla 32: Mediciones de viscosidad de un GH9 (SEQ ID NO: 88) y una xantano liasa (SEQ ID NO: 120) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=3 horas

Agua: 496 60 606 32 457 29 459 123 423 67

Goma xantana 0.25% (control): 1092 101 1112 76 1137 76 1089 32 1123 29

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 120) + GH9 (SEQ ID NO: 88): 946 61 626 45 587 45 486 17 430 40

5

Tabla 33: Mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (identidad de SEQ n° 96,100) y una xantano liasa (identidad de SEQ n° 68) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=1hora T=2horas T=3horas T=4horas

Promedio (Pa): S.D. Promedio (Pa) S.D. Promedio (Pa) S.D. Promedio (Pa) S.D. Promedio (Pa) S.D.

Agua: 471 133 422 51 411 68 431 134 422 32

Goma xantana 0.5% (control): 2048 151 2029 123 2098 121 2111 64 2076 55

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ: 1891 65 1465 76 1138 58 1078 59 989 52

Muestra: T=0 T=1hora T=2horas T=3horas T=4horas

ID NO: 68) + GH9 (SEQ ID NO: 96)

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 68) + GH9 (SEQ ID NO: 100): 1685 81 602 29 538 25 548 45 579 104

Tabla 34: Mediciones de viscosidad de un GH9 (identidad de SEQ n° 88) y dos xantano liasas (identidad de SEQ n° 124,128) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=4 horas

Agua: 408 127 465 105 484 25 423 21 365 32

Goma xantana 0.5% (control): 1848 86 1788 25 1780 78 1726 26 1825 55

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 124) + GH9 (SEQ ID NO: 88): 2105 104 1691 21 1364 25 1246 135 779 17

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 128) + GH9 (SEQ ID NO: 88): 1515 191 678 70 520 6 469 76 572 32

5

Tabla 35: Mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (identidad de SEQ n° 6, 58, 104,132) y xantano liasas (identidad de SEQ n° 8, 66, 124,128) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=3 horas

Agua: 444 40 474 125 377 56 520 52 423 75

Goma xantana 0,25%: 1374 31 1214 57 1217 62 1233 40 1280 25

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 124) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1231 78 871 75 687 0 720 26 720 93

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 128) + GH9 (SEQ ID NO: 6): 1124 75 721 92 633 118 693 146 563 26

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 124) + GH9 (SEQ ID NO: 58): 1128 12 698 92 547 36 640 66 550 91

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 128) + GH9: 1088 81 758 17 553 35 340 52 596 49

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=3 horas

(SEQ ID NO: 58)

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 104): 1184 57 921 67 877 79 683 45 713 40

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 132): 1211 61 784 64 623 32 767 6 580 12

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 104): 1278 120 924 21 917 10 770 72 733 106

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 132): 1238 40 818 46 623 12 807 172 613 82

Tabla 36: Mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (identidad de SEQ n° 136,140) y una xantano liasa (identidad de SEQ n° 68) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=1 hora T=2 horas T=3 horas T=4 horas

Agua: 471 133 422 51 411 68 431 134 422 32

Goma xantana 0.5% (control): 2048 151 2029 123 2098 121 2111 64 2076 55

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 68) + GH9 (SEQ ID NO: 136): 1955 40 1242 29 911 35 771 32 609 70

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 68) + GH9 (SEQ ID NO: 140): 1761 61 1375 50 931 29 775 10 699 36

5

Tabla 37: Mediciones de viscosidad de diferentes GH9 (identidad de SEQ n° 96,100) y xantano liasas diferentes (identidad de SEQ n° 8,66) en la goma xantana

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=4 horas

Agua: 420 55 415 15 490 62 384 20 409 55

Goma xantana 0,25%: 1320 125 1230 93 1195 46 1204 26 1174 42

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 96): 1184 56 695 110 575 107 739 138 549 6

5

10

15

20

25

30

35

40

Muestra: T=0 T=30 min T=1 hora T=2 horas T=4 horas

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 100): 1240 65 615 56 570 70 669 104 599 75

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ: 1244 111 610 178 680 82 704 131 654 20

ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 96)

Goma xantana+ xantano liasa (SEQ ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 100): 1249 35 560 165 765 81 534 46 739 144

[0807] Los resultados presentados arriba muestran que todas las combinaciones de las diferentes GH9 y xantano liasas evaluadas pueden degradar el xantano presente en los medios, asf conduciendo a la reduccion de viscosidad.

Ejemplo 25: ensayo colorimetrico de GH9 endoglucanasas en la goma xantana pretratada

[0808] GH9 actividad de endoglucanasa se determino por reducir extremidades en la goma xantana pretratada con xantano liasa utilizando el ensayo colorimetrico desarrollado por Lever (1972), Anal.Biochem. 47: 273-279, 1972.

Cualquier extremidades de reduccion que son producidas reaccionaran con PAHBAH generando un aumento de color que es proporcional a la actividad enzimatica bajo las condiciones usadas en el ensayo.

La tabla 38 de abajo muestra la actividad de GH9 medido por la absorbancia respectiva en comparacion con aquella del sustrato solo.

Materiales y productos qmmicos

[0809]

0.1 % sustrato: 6 ml (5 mg/ml) goma xantana pretratada con xantano liasa en 24 ml Milli-Q agua.

Tampon de actividad: 100 mM acetato sodico, 100 mM MES, 1 mM CaCl2, en 0.01% Triton X100, pH 7. Ka-Na-tartrato/NaOH tampon: disolver Ka-Na-tartrato (50 g) y NaOH (20 g) en agua a un volumen total de 1 litro.

Deposito a 4°C.

Solucion de parada: disolver PAHBAH (Sigma H-9882) en Ka-Na-tartrato/NaOH solucion para una concentracion de 15 mg/ml (por ejemplo, disolver 500 mg PAHBAH en 33 ml Ka-Na-tartrato/NaOH solucion)

Preparacion de la muestra:

[0810] Las muestras enzimaticas fueron diluidas a 0.1 mg/ml en el tampon de actividad en tiras Costar utilizando un robot de manipulador de lfquido BioMek. 50pl de sustrato y 50pl de cada muestra diluida fue transferida a una PCR-MTP de 96 pocillos, 50pl tampon de actividad se anadio a cada muestra y las soluciones se mezclaron.

La placa PCR sellada fue incubada en una maquina PCR a 37°C durante 15 min. Luego, se enfrio inmediatamente a 10 °C. 75 pl de la solucion de parada se anadio a cada muestra, la mezcla fue agitada y 75 pl de cada muestra fue descartada.

Las muestras fueron incubadas durante 10 min. a 95°C, luego 1 min. 10°C. 150pl de cada muestra fue transferida a un nuevo PCR-MTP de 96 pocillos y la absorbancia a 405nm fue medida.

Tabla 38: Ensayo de extremidades de reduccion colorimetrica de diferentes GH9 en la goma xantana pretratada con xantano liasa

GH9 endoglucanasa: mAU (pH 7)

Blanco: 0.21

SEQ ID NO: 6: 1.25

SEQ ID NO: 58: 1.26

SEQ ID NO: 92: 1.09

SEQ ID NO: 100: 1.18

10

15

20

25

30

35

[0811] Los datos muestran que la reaccion de goma xantana pretratada con xantano liasa con una GH9 endoglucanasa produce una respuesta colorimetrica mas fuerte.

Ya que la respuesta colorimetrica es proporcional a la cantidad de extremidades de reduccion producida, luego se puede ver claramente que las gH9 endoglucanasas tienen actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa.

Ejemplo 26: ensayo colorimetrico de xantano liasas en la Goma xantana

[0812] La actividad de xantano liasa se determino por las extremidades de reduccion como se describe en el ejemplo 25, excepto que 0.1 % de la goma xantana se uso como sustrato.

Los resultados se presentan en la tabla 39 de abajo.

Tabla 39: Ensayo de extremidades de reduccion colorimetrica de diferentes xantano liasas en la goma xantana.

Xantano liasa: mAU (pH 7)

Blanco: 0.21

SEQ ID NO: 8: 0.65

SEQ ID NO: 120: 0.46

SEQ ID NO: 68: 0.63

SEQ ID NO: 116: 0.65

SEQ ID NO: 112: 0.66

SEQ ID NO: 108: 0.48

SEQ ID NO: 66: 0.44

[0813] Los datos muestran que la reaccion de goma xantana con una xantano liasa produce una respuesta colorimetrica mas fuerte y por lo tanto las xantano liasas tienen actividad en la goma xantana.

Ejemplo 27: ensayo colorimetrico de xantano liasas y GH9 engoglucanasas en la goma xantana

[0814] Actividad de xantano liasa sola y junto con una GH9 endoglucanasa se determino por las extremidades de reduccion como se describe en el ejemplo 25, excepto que 0.1 % de goma xantana fue usado como sustrato. Los resultados se presentan en tablas 40 y 41 de abajo.

Tabla 40: Ensayo de extremidades de reduccion colorimetrica de diferentes xantano liasas solo o en combinacion con una GH9 endoglucanasa en la goma xantana

xantano liasa: mAU (pH 7) de xantano liasa mAU (pH 7) de xantano liasa + GH9

: sola endoglucanasa (SEQ ID NO: 6)

Blanco: 0.14 0.15

Xantano liasa (SEQ ID NO: 8): 0.61 2.06

Xantano liasa (SEQ ID NO: 112): 0.51 1.91

Xantano liasa (SEQ ID NO: 124): 0.42 1.91

Xantano liasa (SEQ ID NO: 128): 0.43 1.85

Tabla 40: Respuesta relativa de ensayo de extremidades de reduccion colorimetrico de diferentes xantano liasas solas o en combinacion con una GH9 endoglucanasa en la Goma xantana

Xantano liasa: Respuesta relativa de xantano liasa sola Respuesta relativa de xantano liasa + GH9 endoglucanasa (SEQ ID NO: 6)

Blanco: 23 25

Xantano liasa (SEQ ID NO: 8): 100 337

Xantano liasa (SEQ ID NO: 112): 84 312

Xantano liasa (SEQ ID NO: 124): 69 312

Xantano liasa (SEQ ID NO: 128): 71 302

[0815] Las respuestas se fijan relativamente a la respuesta de xantano liasa de SEQ ID NO: 8 que es establecen en 100.

[0816] Los datos muestran que la reaccion de goma xantana con una xantano liasa produce una respuesta colorimetrica mas fuerte significativamente y por lo tanto las xantano liasas solo tienen actividad significativa en la goma xantana.

Ademas, la adicion de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 resulta en al menos un aumento de 3-4 pliegues en la respuesta colorimetrica sobre el uso de la xantano liasa solo, que muestra que el uso de las dos enzimas

5

10

15

20

25

30

35

40

juntas produce una degredacion sinergfstica de goma xantana.

Ejemplo 28: rendimiento de lavado miniLOM de xantano liasa (SEQ ID NO:) y/o GH9 (identidad de SEQ NO:)

[0817] Las enzimas de la presente invencion fueron evaluadas utilizando el ensayo miniLOM para determinar el "efecto de detergencia enzimatica".

Los tubos de ensayo estan llenos de solucion de prueba, tejidos sucios y bolas de acero y rotados en un armario de calentamiento a una temperature dada.

Los beneficios de limpieza se estudian cuando se lava en el detergente lfquido modelo A.

Las condiciones experimentales para los experimentos se especffican en la tabla 41.

Tabla 41: Condiciones experimentales para miniLOM

Solucion de prueba: Detergente modelo A

Volumen de solucion de prueba: 40 mL

pH: No aiustado

Tiempo de lavado: 30 minutos

Temperatura: 40°C

Dureza del agua: 16°dH

Dosificacion enzimatica: Xantano liasa: 1 mg EP/L GH9: 0.5 mg EP/L

Ca2+:Mg2+:CO32' proporcion: 5:1:3

Muestras: Muestras Circulares de 2 cm de diametro

Manchas: 4 X DN31C (cantidad media de goma xantana/negro de carbon); 4 X DN31D (goma xantana/negro de carbon)

Lastre: 4 X wfk10A (100 % algodon tejido) 4 X wfk80A (100% algodon de punto)

Mecanicas: 5 bolas de acero inoxidable, 6 mm de diametro

[0818] La dureza del agua se ajusto por adicion de CaCl2, MgCh, y NaHCO3 al sistema de prueba.

Despues del lavado, los tejidos fueron enjuagados en agua corriente y secados al aire.

Las muestras fueron preparadas anadiendo goma xantana de Xanthomonas campestris (Food Grade Keltrol T, Kelco) mezclada con negro de carbon a un tejido de algodon.

La DN31C muestra se prepara con la mitad de la cantidad de goma xantana; de otro modo es identica a la DN31 D muestra.

Sin embargo, esto tiene el efecto de reducir la ventana de medicion para efectos enzimaticos, en el hecho de que la cantidad de goma xantana que se puede quitar se reduce.

Hasta ahora, esto lleva a un aumento menor en la intensidad cuando se compara con los efectos solos de detergente, pero no deberfa ser interpretado como un efecto enzimatico inferior.

[0819] El rendimiento de la enzima(s) se evalua por la medicion de la remision de las muestras textiles utilizando el ColorEye a 460nm.

Los resultados que usan la muestra C se presentan en las tablas 42 y 43, mientras los resultados que usan la muestra D se presentan en las tablas 44 y 45.

Remision medida antes del lavado:

Muestra DN31C: 28.87±0.37 Muestra DN31D: 29.34±0.66

Remision medida utilizando solo detergente:

Muestra DN31C: 35.37±1.00 Muestra DN31D: 39.79±1.28

Tabla 42: valores de remision (460nm) de lavado MimiLOM utilizando 6 GH9 endoglucanasas diferentes y 6 xantano liasas diferentes en la muestra DN31C

Rem460: Xantano Liasa

GH9 endoglucanasa: SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 66 SEQ ID NO: 108 SEQ ID NO: 112 SEQ ID NO: 116 SEQ ID NO: 120

SEQ ID NO: 6: 42.17 43.07 41.70 43.00 42.05 42.39

SEQ ID NO: 84: 37.06 39.06 38.19 38.48 37.56 -

Rem460: Xantano Liasa

SEQ ID NO: 88: 37.29 39.46 38.18 38.80 39.62 37.00

SEQ ID NO: 92: 38.90 40.21 39.27 40.01 38.89 -

SEQ ID NO: 96: 37.00 38.68 36.92 37.32 - -

SEQ ID NO: 100: 36.33 38.45 37.63 37.60 36.39 36.91

Tabla 43: desviacion tfpica de resultados MimiLOM en la muestra DN31C

Desviacion tfpica: Xantano Liasa

SEQ ID NO: 6: 0.80 0.49 0.64 0.30 0.43 0.61

SEQ ID NO: 84: 0.79 0.55 0.98 0.91 1.06 -

SEQ ID NO: 88: 0.73 0.53 0.91 0.49 0.30 0.62

SEQ ID NO: 92: 0.85 0.50 0.84 0.72 0.61 -

SEQ ID NO: 96: 1.20 1.48 0.69 0.96 - -

SEQ ID NO: 100: 0.70 0.51 0.83 0.90 0.70 0.74

5 [0820] Los resultados muestran que las GH9 endoglucanasas de SEQ ID n° 6, 84,88 y 92 dan un rendimiento de

lavado significativo estadfsticamente segun la prueba ANOVA tukey en la muestra DN31C con las xantano liasas de SEQ ID NO: 8, 66, 108, 112,116 y 120 en cualquier caso.

Ademas, las GH9 endoglucanasas de SEQ ID NO: 100 mostraron un rendimiento de lavado significativo estadfsticamente con las xantano liasas de identidad de SEQ n° 66, 108,112 y 120 y al menos un rendimiento de 10 lavado mejorado numericamente con las xantano liasas de identidad de SEQ n° 8 y 116.

Tabla 44: valores de remision (460nm) de MimiLOM lavado utilizando 6 diferentes GH9 endoglucanasas y 6 xantano liasas diferentes en la muestra DN31D

Rem460: Xantano Liasa

SEQ ID NO: 6: 48.79 49.36 47.72 49.02 48.28 48.78

SEQ ID NO: 84: 41.98 42.66 43.01 43.16 42.24 -

SEQ ID NO: 88: 41.72 43.67 42.56 42.94 43.25 42.65

SEQ ID NO: 92: 43.59 44.15 44.20 44.88 43.84 -

SEQ ID NO: 96: 40.98 41.25 41.49 41.17 - -

SEQ ID NO: 100: 40.88 42.13 41.83 42.28 41.46 41.43

Tabla 45: Desviacion tfpica de resultados MimiLOM en la muestra DN31D

Desviacion tfpica: Xantano Liasa

SEQ ID NO: 6: 1.14 0.66 0.60 0.44 0.29 0.41

5

10

15

20

25

Desviacion tfpica: Xantano Liasa

SEQ ID NO: 84: 1.18 0.68 1.55 1.65 1.79 -

SEQ ID NO: 88: 1.28 0.49 1.93 1.85 0.33 1.75

SEQ ID NO: 92: 1.66 0.30 1.23 1.50 1.13 -

SEQ ID NO: 96: 1.45 1.26 1.02 1.67 - -

SEQ ID NO: 100: 1.08 0.74 1.46 1.42 1.47 0.73

[0821] Los resultados muestran que las GH9 endoglucanasas de SEQ ID NO: 6,84 y 92 mostraron un rendimiento de lavado significativo estadfsticamente segun la prueba ANOVA tukey en la muestra DN31D con las xantano liasas de SEQ ID NO: 8, 66, 108, 112,116 y 120 en cualquier caso.

Ademas, la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 88 mostro un rendimiento de lavado significativo estadfsticamente con las xantano liasas de SEQ ID NO: 66, 108, 112,116 y 120 y un rendimiento de lavado mejorado numericamente con la xantano liasa de SEQ ID NO: 8.

La GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 100 mostro un rendimiento de lavado significativo estadfsticamente con las xantano liasas de SEQ ID NO: 66,108 y 112 y un rendimiento de lavado mejorado numericamente con las otras 3 xantano liasas.

Las GH9 endoglucanasas de SEQ ID NO: 96 mostraron un rendimiento de lavado mejorado numericamente junto con todas las xantano liasas evaluadas.

Ejemplo 29: actividad de degradacion de xantano de GH9 endoglucanasas y xantano liasas por medicion de reduccion de viscosidad

[0822] Las mediciones de viscosidad fueron soportadas como se describe en el ejemplo 10 en dos lotes diferentes de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 y un lote unico de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 junto con dos xantano liasas diferentes (SEQ ID NO: 8 y 66).

SEQ ID NO: 6 es identica a SEQ ID NO: 2 excepto en que esta contiene una etiqueta His (es decir -RPHHHHH) fijada al N-terminal del polipeptido maduro.

Los resultados presentados son el promedio de tres mediciones y se muestran en la tabla 46 de abajo.

Tabla 46: Mediciones de viscosidad del mismo GH9 con y sin etiqueta His (SEQ ID NO: 2,6) y dos xantano liasas diferentes (SEQ ID NO: 8,66) en la goma xantana

Muestra: T=0 min T=30 min T=1 hora T=2 horas T=3 horas

Agua: 400 10 441 44 420 21 410 0 518 124

Goma xantana 0.5% (control): 1106 81 1144 50 1196 55 1123 58 1075 40

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 6)*: 890 26 624 85 543 56 567 38 561 35

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 2): 986 55 577 40 586 75 523 23 525 46

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 8) + GH9 (SEQ ID NO: 6)**: 1030 72 644 75 626 175 547 21 565 72

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID: 986 108 604 80 563 62 650 72 525 61

5

10

15

20

25

Muestra: T=0 min T=30 min T=1 hora T=2 horas T=3 horas

NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 6)*

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 2): 1093 95 611 75 606 98 593 50 601 21

Goma xantana + xantano liasa (SEQ ID NO: 66) + GH9 (SEQ ID NO: 6)**: 1080 56 557 31 580 40 597 90 628 108

*: lote 1; ** - lote 2

[0823] Los resultados de la tabla 46 muestran que no hay diferencia significativa en el descenso en la viscosidad entre los dos lotes de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 que tiene una etiqueta His y la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2 que es sin la etiqueta His junto con cualquier xantano liasa.

Por lo tanto, esto puede concluir en que la etiqueta His no altere las propiedades de degradacion de goma xantana de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 2.

Ejemplo 30: ensayo colorimetrico de GH9 endoglucanasas y xantano liasas en la goma xantana

[0824] La actividad de GH9 endoglucanasas solas y en combinacion con xantano liasas diferentes en la goma xantana se determino por extremidades de reduccion como se describe en el ejemplo 25, excepto que 0.1% goma xantana fue usada como sustrato. Los resultados se presentan en la tabla 47 de abajo.

Tabla 47: Ensayo de extremidades de reduccion colorimetrica de diferentes GH9s endoglucanasas (SEQ ID NO: 2, 6, 16, 58, 84, 92,96 y 100) y xantano liasas (SEQ ID NO: 8, 66, 68,120) en la goma xantana.

mAU (pH 7): GH9 endoglucanasa

Xantano Liasa: SEQ ID NO: 6* SEQ ID NO: 6** SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 58 SEQ ID NO: 84 SEQ ID NO: 88 SEQ ID NO: 92 SEQ ID NO: 96 SEQ ID NO: 100

SEQ ID NO: 8: 1.75 1.53 1.62 1.54 2.28 2.22 1.70 1.84 1.45 1.86

SEQ ID NO: 66: 1.78 1.58 1.84 1.69 1.88 2.16 1.86 1.77 1.46 1.96

SEQ ID NO: 68: 2.08 1.92 1.87 1.93 2.22 2.10 2.02 1.79 1.53 1.88

SEQ ID NO: 120: 1.04 1.05 1.08 0.91 1.62 1.73 1.40 1.35 0.95 1.42

Ninguna: 0.47 0.42 0.45 0.25 0.77 0.66 0.26 0.24 0.27 0.30

*: lote 1; ** - lote 2

[0825] Los resultados demuestran que todas las GH9 endoglucanasas junto con todas las xantano liasas evaluadas dan un aumento significativo en la respuesta colorimetrica que muestra que la combinacion de estas GH9 endoglucansas y xantano liasas tiene actividad significativa en la degradacion de goma xantana.

Los resultados muestran ademas que no hay diferencia significativa entre los dos lotes de la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 evaluados, ni que la etiqueta His que esta presente en la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 produce cualquier cambio significativo en el rendimiento sobre la correspondiente GH9 endoglucanasa sin etiqueta His (SEQ ID NO: 2).

Ejemplo 31: rendimiento de lavado AMSA de xantano liasas y GH9 endoglucanasas

[0826] Los experimentos fueron conducidos como se describe en el ensayo de tension mecanica automatica (AMSA) para metodo de colada utilizando un procedimiento de lavado de ciclo unico y las condiciones experimentales en la tabla especffica 48 de abajo.

Los resultados se dan en tablas 49 y 50 usando 3 diferentes GH9 endoglucanasas y 6 xantano liasas diferentes 5 junto con controles donde la GH9 endoglucanasa y/o xantano liasa estan ausentes.

Los resultados se muestran como el Aint valor enzimatico.

Tabla 48: Condiciones experimentales para ciclo de lavado

Solucion de prueba: 3.33g/L Detergente lfquido modelo B

No-ajustado: Tiempo de lavado

20 Minutos: Temperatura

20°C o 40°C: Dosificacion enzimatica

Xantano liasa: 1 mg EP/L: GH9: 0.5 mg EP/L

Dureza del agua: 15°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 5:1:3

Muestra: DN31C (cantidad media de goma xantana con negro de carbon)

10

[0827] La dureza del agua fue ajustada por adicion de CaCl2, MgCh y NaHCO3 al sistema de prueba.

Despues del lavado de los tejidos fueron enjuagados en agua corriente y secados al aire.

Las muestras fueron preparadas anadiendo goma xantana de Xanthomonas campestris (Food Grade Keltrol T, Kelco) mezcladas con negro de carbon a un tejido de algodon.

15 La DN31C muestra se prepara con la mitad de la cantidad de goma xantana; de otro modo es identica a la DN31 D muestra.

Sin embargo, esto tiene efecto en la reduccion de la ventana de medicion para efectos enzimaticos, en que la cantidad de goma xantana que se puede quitar se reduce.

En efecto, esto lleva a un aumento menor en la intensidad cuando se compara con los efectos solo detergentes, 20 pero no deberfa ser interpretado como un efecto enzimatico inferior.

Tabla 49: datos de lavado AMSA usando detergente lfquido modelo B a 20°C en la muestra DN31C

AInt valor enzimatico: GH9 endoglucanasa

Xantano Liasa: Control SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 88 SEQ ID NO: 100

Control: 0.0 5.9 2.9 2.0

SEQ ID NO: 8: 5.0 16.3 6.4 0.9

SEQ ID NO: 66: 2.5 14.4 6.6 3.5

SEQ ID NO: 108: -0.2 10.8 - -

SEQ ID NO: 116: 5.6 12.0 - -

SEQ ID NO: 124: -0.4 8.5 - -

SEQ ID NO: 128: 4.6 13.1 - -

25 Tabla 50: datos de lavado AMSA usando detergente lfquido modelo B a 40°C en la muestra DN31C

AInt valor enzimatico: GH9 endoglucanasa

Xantano Liasa: Control SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 88 SEQ ID NO: 100

Control: 0.0 7.3 3.3 3.7

SEQ ID NO: 8: 4.8 16.1 8.0 3.0

SEQ ID NO: 66: 2.2 16.2 9.3 6.1

SEQ ID NO: 108: -3.7 9.7 - -

SEQ ID NO: 116: 6.2 12.0 - -

5

10

15

20

25

30

Aint valor enzimatico: GH9 endoglucanasa

Xantano Liasa: Control SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 88 SEQ ID NO: 100

SEQ ID NO: 124: 1.0 10.1 - -

SEQ ID NO: 128: 6.8 13.3 - -

[0828] Los datos muestran que la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 6 da un efecto de lavado significativo con todas las xantano liasas (es decir, SEQ ID NO: 8, 66, 108, 116,124 y 128) evaluadas tanto a 20°C como a 40°C. Ademas, la GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 88 da un efecto de lavado significativo con ambas xantano liasas evaluadas y un efecto sinergfstico significativo con la xantano liasa de SEQ ID NO: 66.

La GH9 endoglucanasa de SEQ ID NO: 100 muestra un efecto de lavado significativo con la xantano liasa de SEQ ID NO: 66 tanto a 20°C como a 40°C.

Ejemplo 32: rendimiento de lavado miniLOM de GH9 endoglucanasa

[0829] Las GH9 endoglucanasas fueron evaluadas utilizando el ensayo miniLOM para determinar el beneficio de detergencia enzimatica de la GH9 endoglucanasa.

El beneficio de detergencia enzimatica fue estudiado por la comparacion del efecto de lavado en la goma xantana con manchas de negro de carbon con y sin una GH9 endoglucanasa bien en el tampon (2-(N- morfolino)acido etanosulfonico, MES) o detergente modelo A utilizando las condiciones descritas en la tabla 51. Los resultados para mancha DN31C se dan en las tablas 52 y 53 y para la mancha DN31 D se dan en tablas 54 y 55.

Tabla 51: Condiciones de lavado miniLOM

Solucion de prueba: Tampon (50 mM MES) o detergente modelo A (3.33g/L)

Volumen de solucion de prueba: 40 ML

pH: Ajustado a pH 7.0 (tampon) o pH 7.2 (detergente modelo A) antes de lavado

Tiempo de lavado: 30 Minutos

Temperatura: 40°C

Dureza del agua: 16°dH

Ca2+:Mg2+:CO32- proporcion: 5:1:3

Muestras: Muestras Circulares 2cm de diametro

Manchas: 8 X manchas tecnicas con goma xantana con negro de carbon. La mancha DN31 D tiene 2x goma xantana en comparacion con DN31C.

Peso de lastre Total: Manchas tecnicas: 0.43g por tubo

: Manchas lastre: 0.53g por tubo

Mecanicas: 5 Bolas de acero inoxidable, 6mm de diametro

[0830] La dureza del agua fue ajustada por adicion de CaCl2, MgCh y NaHCO3 al sistema de prueba.

Las muestras fueron preparadas aplicando una mezcla de negro de carbon (0.05-0.06 g) y goma xantana (1.2 - 1.4 g para DN31C, 2.4 - 2.6 g para DN31 D, Xanthomonas campestris (Food Grade Keltrol T, Kelco) por metro cuadrado de tejido de algodon.

El beneficio de detergencia enzimatica de la enzima(s) fue evaluado por la medicion de la remision de las muestras textiles utilizando el ColorEye a 460nm como se describe en la evaluacion de manchas.

Tabla 52: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) en la goma xantana/manchas de negro de carbon (DN31C)

GH9 (mg/L): Tampon (50 mM MES) Detergente modelo A

REM (460nm): s.d. REM (460nm) s.d.

0: 34.5 0.6 36.8 2.9

0.2: 40.3 0.2 41.1 0.3

0.4: 39.6 0.3 41.1 0.7

0.8: 40.4 0.4 41.0 0.4

Tabla 53: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) en la goma xantana/manchas de negro de carbon (DN31C)

GH9 (mg/L): Tampon (50 mM MES) Detergente modelo A

REM (460nm): s.d. REM (460nm) s.d.

0: 35.4 0.5 36.7 0.3

0.05: 39.6 0.9 39.1 2.8

0.1: 39.3 1.0 40.6 0.5

0.2: 39.8 0.4 40.9 0.3

0.5: 40.0 0.3 40.9 0.4

0.5 ppm BSA1: 35.4 0.2 35.8 0.1

1 BSA - albumina de suero bovino adicionada en vez de GH9 endoglucanasa

5

Tabla 54: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) goma xantana/manchas de negro de carbon (DN31D)

GH9 (mg/L)

GH9 (mg/L): Tampon (50 mM MES) Detergente modelo A

REM (460nm): s.d. REM (460nm) s.d.

0: 39.8 0.7 40.9 1.7

0.2: 47.2 0.3 47.6 0.4

0.4: 46.5 0.4 47.6
0.4

0.8: 46.8 0.4 48.0 0.6

10

Tabla 55: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) en la goma xantana/manchas de negro de carbon (DN31D)

GH9 (mg/L): Tampon (50 mM MES) Detergente modelo A

REM (460nm): s.d. REM (460nm) s.d.

0: 40.2 0.9 41.6 0.4

0.05: 46.2 0.8 45.3 4.1

0.1: 45.8 0.7 47.3 0.9

0.2: 46.4 0.4 47.8 0.8

0.5: 46.6 1.0 48.0 1.1

0.5 ppm BSA1: 39.4 0.3 41.4 0.8

1 BSA - Albumina de suero bovino adicionada en vez de GH9 endoglucanasa

15 [0831] Los resultados mostraron que hubo detergencia enzimatica significativa, eliminacion de mancha y

beneficios de limpieza cuando la gH9 endoglucanasa (SEQ ID NO: 6) fue adicionada a la solucion de lavado utilizando bien un tampon (50 mM MES) o con un detergente modelo A.

Las tablas 52 y 54 muestran que el mismo beneficio de detergencia enzimatica fue observado cuando se uso entre 0.2 y 0.8 mg protefna enzimatica por L solucion de lavado, lo que indica que un nivel de meseta se puede 20 haber alcanzado ya cuando la dosificacion esta por encima de 0.2 mg EP/L.

[0832] La repeticion del experimento usando cantidades inferiores de endoglucanasa (SEQ ID NO: 6) (tablas 53 y 55) mostro que el beneficio de detergencia de enzima significativa fue aparente incluso a 0.05 mg protefna enzimatica por L solucion de lavado.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

La adicion de 0.5 ppm albumina de suero de bovino ppm en vez de la GH9 endoglucanasa mostro que el beneficio de detergencia enzimatica no era debido a un efecto de protefna no especffico.

[0833] El efecto mas grande se puede ver en la mancha DN31 D donde los beneficios de hasta 7 delta unidades REM se descubrieron cuando se usa bien un tampon (50 mM MES) o con un detergente modelo A.

Ejemplo 33: efectos de GH9 endoglucanasa en la goma xantana (pretratada) como se ha determinado por reduccion de viscosidad

[0834] La 0.5% goma xantana pretratada fue preparada por el tratamiento previo de la goma xantana con xantano liasa como se describe en "Microbial system for polysaccharide depolymerization: Enzymatic route for xanthan depolymerization by bacillus sp strain gl1", Applied and Environmental Microbiology 65, 2520-2526.

Antes de su uso, se les cambio a todas las enzimas el tampon por el tampon MES usando columnas NAP 5 (GE Healthcare).

[0835] Las muestras fueron hidrolizadas utilizando las condiciones siguientes: 0.25% goma xantana o 0.5% goma xantana pretratada en 50 mM tampon MES + 0.01% Triton x-100 a pH 7.0 y 40°C.

[0836] La viscosidad inicial fue medida tras equilibrado termico y antes de la adicion de enzima utilizando el ensayo ViPr.

Despues del equilibrado termico, la GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) (20 mg/L), si era apropiada se anadio y la viscosidad luego se midio en varios puntos temporales.

Los datos se presentan en tabla 56 de abajo.

Tabla 56: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) en la goma xantana y goma xantana pretratada como se ha determinado por reduccion de viscosidad

Perfodo de incubacion: 0 min 5 min 15 min 30 min 3 horas

Mediciones: Medio s.d. Medio s.d. Medio s.d. Medio s.d. Medio s.d.

Condiciones: Pa ± Pa ± Pa ± Pa ± Pa ±

Tampon (control, ninguna enzima): 515 15 558 15 524 82 560 68 517 42

Goma xantana (control, ninguna enzima): 1148 32 1146 32 1174 10 1136 12 1077 45

Goma xantana + GH 9 (SEQ ID NO: 6): 1042 17 903 17 867 6 846 38 837 55

Goma xantana pretatada (control, ninguna enzima): 1135 120 1206 120 1314 0 1223 71 1247 46

Goma xantana pretatada+ GH 9 (SEQ ID NO: 6): 1025 15 629 15 661 70 553 49 544 30

[0837] El control del tampon representa la viscosidad representativa de hidrolisis completa.

A este punto hay pocas a ninguna interaccion de polfmero de solvente que llevarfa a un aumento en la viscosidad de solvente.

Los controles de goma xantana y goma xantana modificada permanecen constantes a traves de la incubacion visualizando la robustez del ensayo.

La GH9 endoglucanasa (SEQ ID NO: 6) se ha visto para reducir el sustrato de goma xantana sobre el curso de las 3 h de incubacion pero la viscosidad no alcanza la viscosidad del control.

La goma xantana pretratada de xantano liasa se reduce a la viscosidad de tampon casi inmediatamente bajo estas condiciones por la GH9 endoglucanasa (SEQ ID NO: 6).

Ejemplo 34: efectos de GH9 endoglucanasa en la goma xantana (pretratada) como se determina por extremidades de reduccion

[0838] 0.25% de goma xantana pretratada fue preparada por el tratamiento previo de la goma xantana con xantano liasa como se describe en el ejemplo 33.

Las muestras fueron hidrolizadas utilizando las condiciones siguientes: 0.25% goma xantana o 0.25% goma xantana pretratada en 50 mM tampon MES + 0.01% Triton x-100 a pH 7.0 y 30 °C.

[0839] Despues del equilibrado termico, la GH9 endoglucanasa (SEQ ID NO: 6) (62 mg/L), si era apropiado, fue anadida y las extremidades de reduccion producidas se midieron en el punto final utilizando el ensayo de

5 Tabla 57: Resultados de GH9 endoglucansa (SEQ ID NO: 6) en la goma xantana y goma xantana pretratada como se ha determinado por las extremidades de reduccion

Perfodo de incubacion: BCA a 30 min

Mediciones: Promedio Desviacion tfpica

Condiciones: |jM equivalentes de glucosa ±

Tampon (control, ninguna enzima): 0 0

Goma xantana (control, ninguna enzima): 173 5

Goma xantana + GH 9 (SEQ ID NO: 6): 177 5

Goma xantana pretratada (control, ninguna enzima): 534 21

Goma xantana pretratada + GH 9 (SEQ ID NO: 6): 2367 455

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

REIVINDICACIONES

1. Composicion que incluye una GH9 endoglucanasa aislada con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa, donde dicha GH9 endoglucanasa aislada es un polipeptido con al menos un 80% de identidad de secuencia al polipeptido maduro seleccionado del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94 y SEQ ID NO: 98; donde la composicion comprende ademas un polipeptido aislado con actividad de xantano liasa.
2. Composicion segun la reivindicacion 1, donde el polipeptido con actividad de xantano liasa es cualquiera de:

(i) un polipeptido con al menos un 80% de identidad de secuencia al polipeptido maduro seleccionado del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 126; o

(ii) un fragmento del polipeptido de (i) aquel que tiene actividad de xantano liasa.
3. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, donde el polipeptido maduro de la GH9 endoglucanasa aislada es aminoacidos 1 a 1055 de la SEQ ID NO: 2, aminoacidos 1 a 1007 de la SEQ ID NO: 48, aminoacidos 1 a 915 de la SEQ ID NO: 52, aminoacidos 1 a 1056 de la SEQ ID NO: 56, aminoacidos 1 a 1371 de la SEQ ID NO: 82, aminoacidos 1 a 1203 de la SEQ ID NO: 86, aminoacidos 1 a 1379 de la SEQ ID NO: 90, aminoacidos 1 a 1371 de la SEQ ID NO: 94 o aminoacidos 1 a 1372 de la SEQ ID NO: 98.
4. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3 que es una composicion detergente que comprende uno o mas componentes detergentes.
5. Uso de una composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para la degradacion de goma xantana.
6. Uso segun la reivindicacion 5 para controlar la viscosidad de fluidos de perforacion.
7. Uso segun la reivindicacion 4 para el lavado o limpieza de un textil y/o una superficie dura tal como lavavajillas.
8. Endoglucanasa aislada GH9 con actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa, donde dicha GH9 endoglucanasa aislada es cualquiera de:

(i) un polipeptido con al menos un 80% de identidad de secuencia al polipeptido maduro seleccionado del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 98 o

(ii) un fragmento del polipeptido de (i) que tiene actividad en la goma xantana pretratada con xantano liasa, actividad de degradacion de xantano y/o actividad endo-p-1,4-glucanasa.
9. GH9 endoglucanasa aislada segun la reivindicacion 8, donde el polipeptido maduro es aminoacidos 1 a 1055 de la SEQ ID NO: 2, aminoacidos 1 a 1007 de la SEQ ID NO: 48, aminoacidos 1 a 915 de la SEQ ID NO: 52, aminoacidos 1 a 1056 de la SEQ ID NO: 56, aminoacidos 1 a 1371 de la SEQ ID NO: 82, aminoacidos 1 a 1203 de la SEQ ID NO: 86, aminoacidos 1 a 1379 de la SEQ ID NO: 90, aminoacidos 1 a 1371 de la SEQ ID NO: 94, aminoacidos 1 a 1372 de la SEQ ID NO: 98.
10. Polinucleotido aislado que codifica la GH9 endoglucanasa aislada segun cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9.
11. Constructo de acidos nucleicos o vector de expresion que comprende el polinucleotido segun la reivindicacion 10 operativamente enlazado a una o mas secuencias de control que dirigen la produccion del polipeptido en un huesped de expresion.
12. Celula huesped bacteriana que comprende el polinucleotido segun la reivindicacion 10, operativamente enlazada a una o mas secuencias de control que dirigen la produccion del polipeptido, donde dicha celula huesped bacteriana es una celula huesped de Bacillus, preferiblemente dicha celula huesped de Bacillus es una celula huesped de Bacillus subtilis.
13. Metodo para producir el polipeptido segun cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9, que comprende:

(a) cultivo de una celula, segun la reivindicacion 12, bajo condiciones conductivas para la produccion del polipeptido; y

(b) recuperacion del polipeptido.