ES2905100T3 - Activadores de piruvato quinasa para su uso en el tratamiento de trastornos sanguíneos - Google Patents

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Abstract

Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 es hidrógeno, un alquilo opcionalmente sustituido, un haloalquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, -ORo1, -C(=O)Rc1, o un grupo protector de nitrógeno; en donde: Ro1 es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; Rc1 es alquilo opcionalmente sustituido o -N(Rcn)2, en donde cada caso de Rcn es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, o un grupo protector de nitrógeno; R2 y Q son cada uno independientemente un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido; Ra y Rb son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3, un alquilo opcionalmente sustituido, -ORo3, -N(Rn1)2, -C(=O)N(Rn1)2, o -C(=O)Rc2; o alternativamente Ra y Rb pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterociclilo opcionalmente sustituido; en donde: cada caso de Rn1 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno; Ro3 es hidrógeno, un -alquilo C1 -C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; y Rc2 es un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y Rj y Rk son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -ORo7, -N(Rn5)2, -N(Rn5)C(=O)Rc5, - C(=O)N(Rn5)2, -C(=O)Rc5, -C(=O)ORo7, -SRjs, -S(=O)2Rjs, -S(=O)Rjs, o un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; o, alternativamente, Rj y Rk pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar C=O, un anillo de cicloalquilo monocíclico C1-C6 opcionalmente sustituido, o un anillo de heterociclilo monocíclico C3-C6 opcionalmente sustituido; en donde: cada caso de Rn5 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -ORo8, o un grupo protector de nitrógeno, en donde Ro8 es hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; cada caso de Ro7 es independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; cada caso de Rc5 es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y cada caso de Rjs es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, un arilo C6-12 opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de azufre.

Description

DESCRIPCIÓN
Activadores de piruvato quinasa para su uso en el tratamiento de trastornos sanguíneos
ANTECEDENTES
La deficiencia de piruvato quinasa (PKD) es una enfermedad de los glóbulos rojos provocada por una deficiencia de la enzima piruvato quinasa R (PKR) debido a mutaciones recesivas del gen PKLR (Wijk et al. Human Mutation, 2008, 30 (3) 446- 453). Los activadores de PKR pueden ser beneficiosos para tratar la PKD, talasemia (por ejemplo, Beta-talesemia), eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig, enfermedad de células falciformes, hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia (por ejemplo, anemias congénitas (por ejemplo, enzimopatías), anemia hemolítica (por ejemplo, anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia hemolítica adquirida, anemia hemolítica crónica provocada por deficiencia de fosfoglicerato quinasa, anemia de enfermedades crónicas, anemia hemolítica no esferocítica o esferocitosis hereditaria). La WO2012/151448A1 se refiere a métodos de uso de compuestos que activan la piruvato quinasa.
RESUMEN
En la presente se describen compuestos de fórmulas (I), (II), (III), (IV) y (V) (a las que se hace referencia colectivamente en la presente como "fórmulas (I)-(V)"), que activan la piruvato quinasa R (PKR), enzimas de tipo salvaje y/o mutantes (como las descritas en la presente) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una realización, la invención proporciona un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
Figure imgf000002_0001
en donde R1, R2, Ra, Rb, Rj, RkyQ son como se definen en la presente.
En una realización, el compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo se selecciona de los compuestos de la Tabla 1 o la Figura 1.
También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
La presente divulgación proporciona además un método para tratar la anemia en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la anemia es una anemia diseritropoyética como anemia diseritropoyética congénita tipo I, II, III o IV.
La presente divulgación proporciona además un método para tratar la enfermedad de células falciformes en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
La presente divulgación proporciona además un método para tratar la anemia hemolítica (por ejemplo, anemia hemolítica crónica provocada por deficiencia de fosfoglicerato quinasa, Blood Cells Mol Dis, 2011; 46(3):206) en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia congénita. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es hereditaria (por ejemplo, anemia hemolítica no esferocítica o esferocitosis hereditaria).
La presente divulgación proporciona además un método para tratar la talasemia (por ejemplo, betatalasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia (o síndrome de Bassen-Kornzweig), hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia hemolítica adquirida (por ejemplo, anemias congénitas (por ejemplo, enzimopatías)), enfermedad de células falciformes o anemia de enfermedades crónicas en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En una realización, la anemia hemolítica adquirida comprende anemias congénitas. En ciertas realizaciones, el método proporcionado es para tratar la talasemia. En ciertas realizaciones, la talasemia es beta-talasemia.
La presente divulgación proporciona además un método para tratar la deficiencia de piruvato quinasa (PKD) en un sujeto, el método comprendiendo administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la PKD es una deficiencia de PKR. En ciertas realizaciones, la deficiencia de PKR está asociada con una mutación R de piruvato quinasa.
Los compuestos y composiciones farmacéuticas descritos en la presente son activadores de PKR que tienen actividades más bajas en comparación con el tipo salvaje, por lo que son útiles para los métodos de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, la PKR es de tipo salvaje. En ciertas realizaciones, la PKR es un mutante. Tales mutaciones en PKR pueden afectar a la actividad enzimática (eficacia catalítica), las propiedades reguladoras (modulación por fructosa bisfosfato (FBP)/ATP) y/o la termoestabilidad de la enzima. Ejemplos de tales mutaciones se describen en Valentini et al, JBC 2002. Algunos ejemplos de los mutantes que son activados por los compuestos descritos en la presente incluyen G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486W, R532W, K410E, R510Q y R490W. Sin querer estar limitados por la teoría, en ciertas realizaciones, los compuestos descritos en la presente afectan a las actividades de los mutantes de PKR activando mutantes de PKR que no responden a FBP, restaurando la termoestabilidad para mutantes con estabilidad disminuida o restaurando la eficacia catalítica en mutantes deteriorados. La actividad activadora de los presentes compuestos contra mutantes de PKR puede probarse siguiendo un método descrito en los Ejemplos. En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en la presente también son activadores de PKR de tipo salvaje.
En una realización, la divulgación proporciona un método para activar la PKR en glóbulos rojos en un sujeto con necesidad de ello, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la PKR es de tipo salvaje. En ciertas realizaciones, la PKR es un mutante.
En una realización, la PKR mutante se selecciona de G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q y R490W. En ciertas realizaciones, la PKR mutante se selecciona de A468V, A495V, I90N, T408I y Q421Ky R498H. En ciertas realizaciones, la PKR mutante es R532W, K410E o R510Q.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 es una lista de las estructuras de compuestos ejemplares de la invención.
La Figura 2 muestra la síntesis de productos intermedios ejemplares usados en los Ejemplos 1-10.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
No se pretende que los detalles de construcción y la disposición de los componentes expuestos en la siguiente descripción o ilustrados en los dibujos sean limitativos. Las realizaciones pueden ponerse en práctica o llevarse a cabo de varias maneras. La fraseología y la terminología que se usan en la presente tienen propósitos descriptivos y no deben considerarse limitativos.
Definiciones
Los compuestos descritos en la presente pueden comprender uno o más centros asimétricos y, por tanto, pueden existir en varias formas estereoisoméricas, por ejemplo, enantiómeros y/o diastereómeros. Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente pueden estar en forma de un enantiómero, diastereoisómero o isómero geométrico individual, o pueden estar en forma de una mezcla de estereoisómeros, incluyendo mezclas racémicas y mezclas enriquecidas en uno o más estereoisómeros. Los isómeros pueden aislarse de mezclas mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen cromatografía líquida de alta presión (HPLC) quiral y la formación y cristalización de sales quirales; o los isómeros preferidos pueden prepararse mediante síntesis asimétrica. Ver, por ejemplo, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); y Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).
Los compuestos descritos en la presente también pueden representarse en múltiples formas tautoméricas, en tales casos, incluye expresamente todas las formas tautoméricas de los compuestos descritos en la presente, aunque solo pueda representarse una única forma tautomérica (por ejemplo, la alquilación de un sistema de anillo puede resultar en alquilación en múltiples sitios; todos estos productos de reacción se incluyen expresamente). Se incluyen expresamente todas estas formas isoméricas de tales compuestos. Si un tautómero de un compuesto es aromático, este compuesto es aromático. De manera similar, si un tautómero de un sustituyente es un heteroarilo, este sustituyente es heteroarilo.
El término "alquilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 10 átomos de carbono (" alquilo C1 -10 "). Ejemplos de grupos alquilo C1-6 incluyen metilo (C1), etilo (C2), propilo (C3) (por ejemplo, n-propilo, isopropilo), butilo (C4) (por ejemplo, n-butilo, ferc-butilo, sec-butilo, /so­ butilo), pentilo (C5) (por ejemplo, n-pentilo, 3-oxopentanil, amilo, neopentilo, 3-metil-2-butanilo, amilo terciario), y hexilo (C6) (por ejemplo, n-hexilo). A menos que se especifique lo contrario, cada caso de un grupo alquilo está independientemente no sustituido (un "alquilo no sustituido") o sustituido (un "alquilo sustituido") con uno o más sustituyentes (por ejemplo, halógeno, como F). En ciertas realizaciones, el grupo alquilo es alquilo C1-10 no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo alquilo es -alquilo C1-10 sustituido.
El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido, en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se reemplazan independientemente por un halógeno, por ejemplo, flúor, bromo, cloro o yodo e incluye fracciones alquilo en las que todos los hidrógenos han sido reemplazados por halo (por ejemplo, perfluoroalquilo). En algunas realizaciones, la fracción haloalquilo tiene de 1 a 8 átomos de carbono (" haloalquilo C1-8").
El término "alcoxi" o "alcoxilo" se refiere a un radical -O-alquilo. Por ejemplo, con entre 1 y 6 átomos de carbono.
El término "ariloxi" se refiere a un radical -O-arilo. En algunas realizaciones, el grupo ariloxi es fenoxi.
El término "alquenilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 10 átomos de carbono y uno o más enlaces dobles carbono-carbono (por ejemplo, 1, 2, 3 o 4 enlaces dobles). El uno o más enlaces dobles carbono-carbono pueden ser internos (como en 2-butenilo) o terminales (como en 1 -butenilo). Ejemplos de grupos -alquenilo C2-4 incluyen etenilo (C2), 1-propenilo (C3), 2-propenilo (C3), 1 -butenilo (C4), 2-butenilo (C4), butadienilo (C4), pentenilo (C5), pentadienilo (C5), hexenilo (C6), heptenilo (C7), Octenilo (C8), octatrienilo (C8), y similares. A menos que se especifique lo contrario, cada caso de un grupo alquenilo está independientemente no sustituido (un "alquenilo no sustituido") o sustituido (un "alquenilo sustituido") con uno o más sustituyentes. En ciertas realizaciones, el grupo alquenilo es un -alquenilo C2-10 no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo alquenilo es un -alquenilo C2-10 sustituido. En un grupo alquenilo, un enlace doble C=C puede ser un enlace doble (E) o (Z).
El término "alquinilo" se refiere a un radical de un grupo hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 10 átomos de carbono y uno o más enlaces triples carbono-carbono (por ejemplo, 1, 2, 3 o 4 enlaces triples) ("alquinilo C2-10"). Ejemplos de grupos alquinilo incluyen etinilo (C2), 1 -propinilo (C3), 2-propinilo (C3), 1-butinilo (C4), 2-butinilo (C4), pentinilo (C5), hexinilo (C6) heptinilo (C7), octinilo (C8), y similares. A menos que se especifique lo contrario, cada caso de un grupo alquinilo está independientemente no sustituido (un "alquinilo no sustituido") o sustituido (un "alquinilo sustituido") con uno o más sustituyentes. En ciertas realizaciones, el grupo alquinilo es un -alquinilo C2-10 no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo alquinilo es un -alquinilo C2-10 sustituido.
El término "carbociclilo" o "carbocíclico" se refiere a un radical de un sistema de anillos hidrocarbonados no aromático monocíclico, bicíclico o tricíclico o policíclico que tiene de 3 a 14 átomos de carbono en el anillo ("carbociclilo C3-14") y cero heteroátomos en el sistema de anillos no aromático. Los grupos carbociclilo incluyen sistemas de anillos completamente saturados (por ejemplo, cicloalquilos) y sistemas de anillos parcialmente saturados. En algunas realizaciones, un grupo carbociclilo tiene de 3 a 10 átomos de carbono en el anillo ("carbociclilo C3-10").
El término "cicloalquilo" como se emplea en la presente incluye grupos hidrocarbonados cíclicos, bicíclicos, tricíclicos o policíclicos saturados que tienen de 3 a 14 carbonos que contienen el número indicado de anillos y átomos de carbono (por ejemplo, un cicloalquilo C3-C14 monocíclico, C4-C14 bicíclico, C5-C14 tricíclico, o Ce-C14 policíclico). En algunas realizaciones, "cicloalquilo" es un cicloalquilo monocíclico. Los ejemplos de grupos cicloalquilo monocíclicos incluyen ciclopentilo (C5), ciclohexilo (C5), ciclopropilo (C3) ciclobutilo (C4), cicloheptilo (C7) y ciclooctilo (C8). En algunas realizaciones, "cicloalquilo" es un cicloalquilo bicíclico. Ejemplos de cicloalquilos bicíclicos incluyen biciclo[1.1.0]butano (C4), biciclo[1.1.1]pentano (C5), espiro[2.2]pentano (C5), biciclo[2.1.0]pentano (C5), biciclo[2.1.1]hexano (C6), biciclo[3.3.3]undecano (C11), decahidronaftaleno (C10), biciclo[4.3.2]undecano (C11), espiro[5.5]undecano (C11) y biciclo[4.3.3]dodecano (C12). En algunas realizaciones, "cicloalquilo" es un cicloalquilo tricíclico. Ejemplos de cicloalquilos tricíclicos incluyen adamantina (C12). A menos que se especifique lo contrario, cada caso de un grupo cicloalquilo está independientemente no sustituido (un "cicloalquilo no sustituido") o sustituido (un "cicloalquilo sustituido") con uno o más sustituyentes. En ciertas realizaciones, el grupo cicloalquilo es un cicloalquilo cc-14 no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo cicloalquilo es un cicloalquilo C3-14 sustituido.
El término "heterocidMo" o "heterocícNco" se refiere a un radical de un sistema de anillos no aromático de 3 a 14 miembros que tiene átomos de carbono en el anillo y de 1 a 4 heteroátomos en el anillo, en donde cada heteroátomo se selecciona independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre ("heterociclilo de 3-14 miembros"). En los grupos heterociclilo que contienen uno o más átomos de nitrógeno, el punto de unión puede ser un átomo de carbono o nitrógeno, según lo permita la valencia. Un grupo heterociclilo puede ser o monocíclico ("heterociclilo monocíclico") o policíclico (por ejemplo, un sistema de anillos fusionado, con puente o espiro como un sistema bicíclico ("heterociclilo bicíclico") o un sistema tricíclico ("heterociclilo tricíclico")), y puede estar saturado o puede contener uno o más enlaces dobles o triples carbono-carbono. Los sistemas de anillos policíclicos heterociclilo pueden incluir uno o más heteroátomos en uno o ambos anillos. "Heterociclilo" también incluye sistemas de anillos en los que el anillo de heterociclilo, como se ha definido anteriormente, está fusionado con uno o más grupos carbociclilo en los que el punto de unión está en el anillo de carbociclilo o heterociclilo, o sistemas de anillo en los que el anillo de heterociclilo, como se ha definido anteriormente, está fusionado con uno o más grupos arilo o heteroarilo, en donde el punto de unión está en el anillo heterociclilo y, en tales casos, el número de miembros del anillo continúa designando el número de miembros del anillo en el sistema de anillos heterociclilo. A menos que se especifique lo contrario, cada caso de heterociclilo está independientemente no sustituido (un "heterociclilo no sustituido") o sustituido (un "heterociclilo sustituido") con uno o más sustituyentes. En ciertas realizaciones, el grupo heterociclilo es un heterociclilo de 3-14 miembros no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo heterociclilo es un heterociclilo de 3-14 miembros sustituido. En algunas realizaciones, un grupo heterociclilo es un sistema de anillos no aromático de 5-10 miembros que tiene átomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroátomos en el anillo, en donde cada heteroátomo se selecciona independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre ("heterociclilo de 5-10 miembros"). Los grupos heterociclilo ejemplares incluyen aziridinilo, oxiranilo, tiranilo, zetidinilo, oxetanilo, tietanilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dihidrotiofenilo, pirrolidinilo, dihidropirrolilo, pirrolilo-2,5-dina, dioxolanilo, oxatiolanilo, ditiolanilo, triazolinilo, oxadiazolinilo, tiadiazolinilo,piperidinilo, tetrahidropiranilo, dihidropiridinilo, tianilo, piperazinilo, morfolinilo, ditianilo, dioxanilo, triazinanilo, azepanilo, oxepanilo, tiepanilo, azocanilo, oxecanilo, tiocanilo, indolinilo, isoindolinilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotienilo, tetrahidrobenzotienilo, tetrahidrobenzofuranilo, tetrahidroindolilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo, decahidroisoquinolinilo, octahidrochromenilo, octahidroisochromenilo, decahidronaftiridinilo, decahidro-1,8-naftiridinilo, octahidropirrolo[3,2-b]pirrolo, indolinilo, ftalimidilo, naftalimidilo, cromanilo, cromenilo, 1H-benzo[e][1,4]diazepinilo, 1,4,5,7-tetrahidropirano[3,4-b]pirrolilo, 5,6-dihidro-4H-furo[3,2-b]pirrolilo, 6,7-dihidro-5H-furo[3,2-b]piranilo, 5,7-dihidro-4H-tieno[2,3-c]piranilo, 2,3-dihidro-1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, 2,3-dihidrofuro[2,3-b]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidrofuro[3,2-c]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidrotieno[3,2-b]piridinilo, 1,2,3,4-tetrahidro-1,6-naftiridinilo, y similares
El término "arilo" se refiere a un radical de un sistema de anillos aromático 4n+2 monocíclico o policíclico (por ejemplo, bicíclico o tricíclico) (por ejemplo, que tiene 6, 10, o 14 electrones n compartidos en una matriz cíclica) que tiene 6-14 anillo átomos de carbono y cero heteroátomos proporcionados en el sistema de anillos aromático ("arilo C6-14"). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 6 átomos de carbono en el anillo ("arilo C6"; por ejemplo, fenilo). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 10 átomos de carbono en el anillo ("arilo C10"; por ejemplo, naftilo como 1-naftilo y 2-naftilo). En algunas realizaciones, un grupo arilo tiene 14 átomos de carbono en el anillo ("arilo C14"; por ejemplo, antracilo). "Arilo" también incluye sistemas de anillos en los que el anillo de arilo, como se ha definido anteriormente, está fusionado con uno o más grupos carbociclilo o heterociclilo en donde el radical o punto de unión está en el anillo de arilo y, en tales casos, el número de átomos de carbono continúa para designar el número de átomos de carbono en el sistema de anillos de arilo. A menos que se especifique lo contrario, cada caso de un grupo arilo está independientemente no sustituido (un "arilo no sustituido") o sustituido (un "arilo sustituido") con uno o más sustituyentes. En ciertas realizaciones, el grupo arilo es un arilo C6-14 no sustituido. En ciertas realizaciones, el grupo arilo es un arilo C6-14 sustituido.
El término "heteroarilo" se refiere a un radical de un sistema de anillos aromático 4n+2 monocíclico o policíclico (por ejemplo, bicíclico, tricíclico) de 5-14 miembros (por ejemplo, que tiene 6 electrones n compartidos en una matriz cíclica) que tiene átomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroátomos en el anillo proporcionados en el sistema de anillos aromático, en donde cada heteroátomo se selecciona independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre ("heteroarilo de 5-14 miembros"). En algunas realizaciones, el heteroarilo puede ser un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros que contiene 1-4 heteroátomos. En algunas realizaciones, el heteroarilo puede ser un heteroarilo bicíclico de 8-12 miembros que tiene 1-6 heteroátomos. Un "heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros" o "heteroarilo monocíclico de 5 miembros o 6 miembros" se refiere a un sistema de anillos aromático 4n+2 monocíclico y no fusionado de 5 o 6 miembros que tiene átomos de carbono en el anillo y 1-4 heteroátomosen el anillo. Los grupos heteroarilo monocíclicos de 5 o 6 miembros ejemplares incluyen pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo y tetrazinilo. Como se usa en la presente, si un tautómero de un radical es heteroarilo, este radical es heteroarilo. El término "tautómeros" o "tautomérico" se refiere a dos o más compuestos/sustituyentes interconvertibles que resultan de por lo menos una migración formal de un átomo de hidrógeno y por lo menos un cambio en la valencia (por ejemplo, un enlace simple a un enlace doble, un enlace triple a un enlace simple, o viceversa). La proporción exacta de tautómeros depende de varios factores, incluyendo la temperatura, el solvente y el pH. Las tautomerizaciones (es decir, la reacción que proporciona un par tautomérico) pueden ser catalizadas por un ácido o una base. Las tautomerizaciones ejemplares incluyen tautomerizaciones ceto a enol, amida a imida, lactama a lactima, enamina a imina, y enamina a (una amina diferente
El término "saturado" se refiere a una fracción que no contiene un enlace doble o triple, es decir, la fracción solo contiene enlaces simples.
El término "opcionalmente sustituido" se refiere a estar sustituido o no sustituido. En general, el término "sustituido" significa que por lo menos un hidrógeno presente en un grupo se reemplaza con un sustituyente permisible, por ejemplo, un sustituyente que tras la sustitución da como resultado un compuesto estable, por ejemplo, un compuesto que no experimenta espontáneamente una transformación como por reordenamiento, ciclación, eliminación u otra reacción. A menos que se indique lo contrario, un grupo "sustituido" tiene un sustituyente (por ejemplo, alquilo C1-6, halógeno, nitro, ciano, hidroxilo, haloalquilo C1-6 , haloalcoxi C1-6, acilo C1-6, cicloalquilo C3-6 , arilo C6-10, heteroarilo monocíclico o bicíclico y heterociclilo monocíclico o bicíclico), en una o más posiciones sustituibles del grupo, y cuando más de una posición en cualquier estructura dada está sustituida, el sustituyente es el mismo o diferente en cada posición. Se contempla que el término "sustituido" incluya la sustitución con todos los sustituyentes permisibles de compuestos orgánicos, e incluya cualquiera de los sustituyentes descritos en la presente que dé como resultado la formación de un compuesto estable. La presente invención contempla todas y cada una de estas combinaciones con el propósito de llegar a un compuesto estable. Para los propósitos de esta invención, los heteroátomos como nitrógeno pueden tener sustituyentes de hidrógeno y/o cualquier sustituyente adecuado como se describe en la presente que satisfaga las valencias de los heteroátomos y dé como resultado la formación de una fracción estable. No se pretende que la invención esté limitada de ninguna manera por los sustituyentes ejemplares descritos en la presente.
Un "átomo de carbono del anillo sustituible" se refiere a un átomo de carbono en un anillo arilo/heteroarilo/carbociclilo/heterociclilo con por lo menos un hidrógeno presente en el átomo de carbono que se reemplaza con un sustituyente permisible como se ha definido anteriormente. Un "átomo de nitrógeno del anillo sustituible" se refiere a un átomo de nitrógeno en un anillo heteroarilo-heterociclilo con por lo menos un hidrógeno presente en el átomo de nitrógeno que se reemplaza con un sustituyente permisible.
A menos que se indique lo contrario, un grupo "sustituido" tiene un sustituyente en una o más posiciones sustituibles del grupo, y cuando se sustituye más de una posición en cualquier estructura dada, el sustituyente es o el mismo o diferente en cada posición. Se contempla que el término "sustituido" incluya la sustitución con todos los sustituyentes permisibles de compuestos orgánicos, e incluya cualquiera de los sustituyentes descritos en la presente que dé como resultado la formación de un compuesto estable. La presente invención contempla todas y cada una de estas combinaciones con el propósito de llegar a un compuesto estable. Para los propósitos de esta invención, los heteroátomos como nitrógeno pueden tener sustituyentes de hidrógeno y/o cualquier sustituyente adecuado como se describe en la presente que satisfaga las valencias de los heteroátomos y dé como resultado la formación de una fracción estable. No se pretende que la invención esté limitada de ninguna manera por los sustituyentes ejemplares descritos en la presente.
El término "halo" o "halógeno" se refiere a fluoro, cloro, bromo o yodo.
El término "acilo" se refiere a un grupo que tiene la fórmula general -C(=O)RX1, -C(=O)ORX1, -C(=O)-O-C(=O)RX1, -C(=O)SRX1, -C(=O)N(RX1)2, -C(=S)RX1, -C(=S)N(RX1)2 , and -C(=S)S(RX1), -C(=NRX1)RX1, -C(=NRX1)ORX1, -C(=NRX1)SRX1, y -C(=NRX1)N(RX1)2 , donde RX1 es hidrógeno; halógeno; hidroxilo sustituido o no sustituido; tiol sustituido o no sustituido; amino sustituido o no sustituido; acilo sustituido o no sustituido, cíclico o acíclico, alquilo C1-10 ramificado o no ramificado sustituido o no sustituido,; alquenilo C2-10 cíclico o acíclico, sustituido o no sustituido, ramificado o no ramificado; alquinilo C2-10 sustituido o no sustituido; arilo C6-12 sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, cuando la valencia lo permita. Los grupos acilo ejemplares incluyen aldehídos (-CHO), ácidos carboxílicos (-CO2H), cetonas, haluros de acilo, ésteres, amidas, iminas, carbonatos, carbamatos y ureas.
En ciertas realizaciones, el sustituyente presente en un átomo de nitrógeno, en un átomo de oxígeno o en un átomo de azufre es un grupo protector de nitrógeno, un grupo protector de oxígeno o un grupo protector de azufre, respectivamente. Los grupos protectores de nitrógeno, oxígeno y azufre son bien conocidos en la técnica e incluyen los descritos en detalle en Protecting Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene y P.G.M. Wuts, 3a edición, John Wiley & Sons, 1999. Por ejemplo, los grupos protectores de nitrógeno incluyen, pero no se limitan a, formamida, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, fenilacetamida, carbamato de metilo, carbamato de etilo, carbamato de 9-fluorenilmetilo (Fmoc), carbamato de t-butilo (BOC o Boc), carbamato de 1-adamantilo (Adoc), carbamato de vinilo (Voc), carbamato de alilo (Alloc), 2-(trimetilsilil)etoxi]metil (SEM), ptoluenosulfonamida (Ts), bencenosulfonamida, 2,3,6-trimetil-4-metoxibencenosulfonamida (Mtr), 2,4,6-trimetoxibencenosulfonamida (Mtb), derivado de fenotiazinil-(10)-acilo, derivado de N'-p-toluenosulfonilaminoacilo, etc. Los grupos protectores de oxígeno ejemplares incluyen, pero no se limitan a, metilo, metoximetilo (MOM), metiltiometilo (MTM), t-butiltiometilo, (fenildimetilsilil) metoximetilo (SMOM), benciloximetilo (BOM), pmetoxibenciloximetilo (PMBM), (4-metoxifenoxi)metilo (p-AOM), tetrahidropiranilo (THP), metanosulfonato (mesilato), bencilsulfonato y tosilato (Ts).
El término "grupo saliente" tiene su significado habitual en la técnica de la química orgánica sintética y se refiere a un átomo o grupo capaz de ser desplazado por un nucleófilo. Los ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, halógeno (como F, Cl, Br o I (yodo)), alcoxicarboniloxi, ariloxicarboniloxi, alcanosulfoniloxi, arenosulfoniloxi, alquilcarboniloxi (por ejemplo, acetoxi), un éster de ácido sulfónico, como toluenosulfonato (tosilato, -OTs), metanosulfonato (mesilato, -OMs), p-bromobencenosulfoniloxi (brosilato, -OBs), -OS(=O)2(CF2)aCFa (nonaflato, -ONf), ortrifluorometanosulfonato (triflato, -OTf).
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuadas para su uso en contacto con tejidos de humanos y animales inferiores sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares indebidas, y son proporcionales con una relación beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, Berge et al. describen sales farmacéuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas y farmacéuticamente aceptables son las sales de un grupo amino formado con ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o usando otros métodos conocidos en la técnica como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato, y similares. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N+(alquilo C-m )4-. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen, cuando sea apropiado, cationes de amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos formados usando contraiones como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquilsulfonato inferior, y arilsulfonato.
Los términos "composición" y "formulación" se usan indistintamente.
Un "sujeto" para el que se contempla la administración se refiere a un humano (es decir, hombre o mujer de cualquier grupo de edad, por ejemplo, sujeto pediátrico (por ejemplo, lactante, niño o adolescente) o sujeto adulto (por ejemplo, adulto joven, adulto de mediana edad o adulto mayor)) o animal no humano. En ciertas realizaciones, el animal no humano es un mamífero (por ejemplo, primate (por ejemplo, mono cynomologus o mono rhesus), mamífero comercialmente relevante (por ejemplo, ganado, cerdo, caballo, oveja, cabra, gato o perro), o pájaro (por ejemplo, ave comercialmente relevante, como pollo, pato, ganso o pavo)). En ciertas realizaciones, el animal no humano es un pez, reptil o anfibio. El animal no humano puede ser macho o hembra en cualquier etapa de desarrollo. El animal no humano puede ser un animal transgénico o un animal genéticamente manipulado. En ciertas realizaciones, el sujeto es un paciente. El término "paciente" se refiere a un sujeto humano que necesita el tratamiento de una enfermedad. En ciertas realizaciones, el término "paciente" es un humano adulto mayor de 18 años que necesita el tratamiento de una enfermedad. En ciertas realizaciones, el término "paciente" es un niño humano de no más de 18 años que necesita el tratamiento de una enfermedad. En ciertas realizaciones, el paciente no recibe una transfusión regular (por ejemplo, haber tenido no más de 4 episodios de transfusión en el período de 12 meses). En ciertas realizaciones, el paciente se somete a una transfusión regular (por ejemplo, habiendo tenido por lo menos 4 episodios de transfusión en el período de 12 meses). En ciertas realizaciones, el sujeto se ha sometido a una esplenectomía. En ciertas realizaciones, el sujeto se ha sometido a una esplenectomía y está bajo transfusión regular. En ciertas realizaciones, el sujeto se ha sometido a una esplenectomía y no está bajo una transfusión regular.
El término "administrar", "administrando" o "administración" se refiere a implantar, absorber, ingerir, inyectar, inhalar o introducir de otra manera un compuesto divulgado en la presente, o una composición del mismo, en o sobre un sujeto.
Los términos "tratamiento", "tratar" y "tratando" se refieren a revertir, aliviar, retrasar el inicio o inhibir el progreso de una enfermedad descrita en la presente. En algunas realizaciones, el tratamiento puede administrarse después de que se hayan desarrollado u observado uno o más signos o síntomas de la enfermedad (es decir, tratamiento terapéutico). En otras realizaciones, el tratamiento puede administrarse en ausencia de signos o síntomas de la enfermedad. Por ejemplo, el tratamiento puede administrarse a un sujeto susceptible antes del inicio de los síntomas (es decir, tratamiento profiláctico) (por ejemplo, a la vista de un historial de síntomas y/o de exposición a un patógeno). El tratamiento también puede continuarse después de que los síntomas se hayan resuelto, por ejemplo, para retrasar o prevenir la recurrencia. En ciertas realizaciones, el tratamiento incluye retrasar la aparición de por lo menos un síntoma del trastorno durante un período de tiempo.
Los términos "afección", "enfermedad" y "trastorno" se usan indistintamente.
Una "cantidad eficaz" de un compuesto descrito en la presente se refiere a una cantidad suficiente para provocar la respuesta biológica deseada. Una cantidad eficaz de un compuesto descrito en la presente puede variar dependiendo de factores como el criterio de valoración biológico deseado, la farmacocinética del compuesto, la afección que se está tratando, el modo de administración y la edad y salud del sujeto. En ciertas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad terapéuticamente eficaz. En ciertas realizaciones, la cantidad eficaz es para generar una respuesta de hemoglobina de un sujeto de un aumento de >1,5 g/dl en la concentración de Hb desde el valor de referencia. La concentración de Hb basal del sujeto es la media de todas las concentraciones de Hb disponibles antes del tratamiento con el compuesto. En ciertas realizaciones, la cantidad eficaz es para generar una respuesta de hemoglobina de un sujeto de un aumento de >1,0 g/dl en la concentración de Hb desde el valor de referencia. En ciertas realizaciones, la cantidad eficaz es para generar una respuesta de hemoglobina de un sujeto de un aumento de >2,0 g/dl en la concentración de Hb desde el valor de referencia. En ciertas realizaciones, una cantidad eficaz es la cantidad de un compuesto descrito en la presente en una sola dosis. En ciertas realizaciones, una cantidad eficaz son las cantidades combinadas de un compuesto descrito en la presente en múltiples dosis. En ciertas realizaciones, la cantidad eficaz es una cantidad terapéuticamente eficaz.
Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto descrito en la presente es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en el tratamiento de una afección o para retrasar o minimizar uno o más síntomas asociados con la afección. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto significa una cantidad de agente terapéutico, solo o en combinación con otras terapias, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento de la afección. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" puede abarcar una cantidad que mejora la terapia global, reduce o evita los síntomas, signos o causas de la afección y/o mejora la eficacia terapéutica de otro agente terapéutico. En ciertas realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad suficiente para provocar una activación medible de PKR de tipo salvaje o mutante. En ciertas realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad suficiente para regular los niveles de 2,3-difosfoglicerato y/o ATP en la sangre con necesidad de ello o para tratar la deficiencia de piruvato quinasa (PKD), anemia hemolítica (por ejemplo, anemia hemolítica crónica, anemia no esferocítica hereditaria), enfermedad de células falciformes, talasemia (por ejemplo, beta-talasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia (o síndrome de Bassen-Kornzweig), hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia hemolítica adquirida (por ejemplo, anemias congénitas (por ejemplo, enzimopatías), anemia de enfermedades crónicas o tratamiento de enfermedades o afecciones que están asociadas con niveles aumentados de 2,3-difosfoglicerato (por ejemplo, enfermedades hepáticas). En ciertas realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz es una cantidad suficiente para provocar la activación medible de PKR de tipo salvaje o mutante y para regular los niveles de 2,3-difosfoglicerato en sangre con necesidad de ello o para tratar la deficiencia de piruvato quinasa (PKD), anemia hemolítica (por ejemplo, hemolítica crónica anemia, anemia hereditaria no esferocítica), enfermedad de células falciformes, talasemia (por ejemplo, beta-talasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia (o síndrome de Bassen-Kornzweig), hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia hemolítica adquirida (por ejemplo, anemias congénitas (por ejemplo, enzimopatías)), anemia de enfermedades crónicas o tratamiento de enfermedades o afecciones que están asociadas con niveles aumentados de 2,3-difosfoglicerato (por ejemplo, enfermedades hepáticas). En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad requerida para generar un aumento de la respuesta de hemoglobina de un sujeto de >1,0 g/dl (como >1,5 g/dl o >2,0 g/dl) en la concentración de Hb desde el valor de referencia. La concentración basal de Hb del sujeto es la media de todas las concentraciones de Hb disponibles en el plazo de por lo menos dos semanas (por ejemplo, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas) antes del tratamiento con un compuesto descrito en la presente. En ciertos aspectos, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad requerida para reducir la carga de transfusión del paciente. En un aspecto, la cantidad terapéuticamente eficaz está entre 0,01-100 mg/kg de peso corporal/día del compuesto proporcionado, como, por ejemplo, 0,1-100 mg/kg de peso corporal/día. En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz es para reducir la carga de transfusión del paciente.
Como se usa en la presente, la reducción en la carga de transfusión significa por lo menos una reducción del 20% en el número de unidades de glóbulos rojos transfundidas en el plazo de por lo menos 5 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, la reducción en la carga de transfusión es >33% de reducción en el número de unidades de glóbulos rojos transfundidas en el plazo de por lo menos 5 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, se observa una reducción de la carga de transfusión en por lo menos 10 semanas (por ejemplo, por lo menos 20 semanas o por lo menos 24 semanas) de tratamiento.
Como se usa en la presente, la enfermedad de células falciformes (SCD), la enfermedad de hemoglobina SS y la anemia de células falciformes se usan indistintamente. La enfermedad de células falciformes (SCD) describe un grupo de trastornos hereditarios de los glóbulos rojos. En ciertas realizaciones, los sujetos con SCD tienen hemoglobina anormal, denominada hemoglobina S o hemoglobina falciforme, en sus glóbulos rojos. En ciertas realizaciones, las personas que tienen SCD tienen por lo menos un gen anormal que hace que el cuerpo produzca hemoglobina S. En ciertas realizaciones, las personas que tienen SCD tienen dos genes de hemoglobina S, Hemoglobina SS.
La talasemia es un trastorno sanguíneo hereditario en el que el cuerpo produce una forma anormal de hemoglobina. En ciertas realizaciones, la forma anormal de hemoglobina da como resultado una deficiencia de alfa o beta globina. En ciertas realizaciones, el trastorno da como resultado la destrucción de un gran número de glóbulos rojos, lo que lleva a la anemia. En ciertas realizaciones, la talasemia es alfa talasemia. En ciertas realizaciones, la talasemia es beta talasemia.
El término "activador" como se usa en la presente significa un agente que aumenta (de manera medible) la actividad de la piruvato quinasa R de tipo salvaje (wt PKR) o hace que la actividad de la piruvato quinasa R de tipo salvaje (wt PKR) aumente a un nivel que es mayor que los niveles de actividad basales de wt PKR o un agente que aumenta (de manera medible) la actividad de una piruvato quinasa R mutante (mPKR) o hace que la actividad de la piruvato quinasa R mutante (mPKR) aumente a un nivel que es mayor que los niveles basales de actividad de esa PKR mutante, por ejemplo, a un nivel que es un 20%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 100% del de la actividad de PKR de tipo salvaje.
El término "glóbulos rojos concentrados" o PRBC, como se usa en la presente, se refiere a glóbulos rojos elaborados a partir de una unidad de sangre completa mediante centrifugación y eliminación de la mayor parte del plasma. En ciertas realizaciones, una unidad de PRBC tiene un hematocrito de por lo menos aproximadamente el 95%. En ciertas realizaciones, una unidad de PRBC tiene un hematocrito de por lo menos aproximadamente el 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% o 10%.
El término "ex vivo" en referencia a un método como se usa en la presente significa que el método tiene lugar fuera de un organismo. Por ejemplo, puede extraerse del organismo una célula (por ejemplo, glóbulos rojos), un tejido o sangre (que contiene por lo menos glóbulos rojos, plasma y hemoglobina) para que se ponga en contacto con uno o más compuestos proporcionados en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos o una composición farmacéutica de los mismos, opcionalmente en condiciones controladas artificialmente (por ejemplo, temperatura).
El término "in vitro" en referencia a un método como se usa en la presente significa que el método tiene lugar fuera de un organismo y está contenido dentro de un entorno artificial. Por ejemplo, puede extraerse del organismo una célula (por ejemplo, glóbulos rojos), un tejido o sangre (que contiene por lo menos glóbulos rojos, plasma y hemoglobina) para que se ponga en contacto con uno o más compuestos proporcionados en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos o una composición farmacéutica de los mismos, en un entorno artificial contenido (por ejemplo, un sistema de cultivo), como en un tubo de ensayo, en un cultivo, en un matraz, en una placa de microtitulación, en una placa de Petri y similares.
Compuestos
En la presente se describen compuestos y composiciones que activan PKR de tipo salvaje y/o PKR mutantes como las descritas en la presente. En una realización, se proporciona un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una primera realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I):
Figure imgf000009_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
R1 es hidrógeno, un alquilo opcionalmente sustituido, un haloalquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, -ORDl, -C(=O)Rc1, o un grupo protector de nitrógeno; en donde:
Ro1 es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
Rc1 es alquilo opcionalmente sustituido o -N(Rcn)2, en donde cada caso de
Rcn es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, o un grupo protector de nitrógeno;
R2 y Q son cada uno independientemente un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido;
Ra y Rb son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3, un alquilo opcionalmente sustituido, -ORo3, -N(Rn1)2, -C(=O)N(Rn1)2, o -C(=O)Rc2; o alternativamente Ra y Rb pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterociclilo opcionalmente sustituido; en donde:
cada caso de Rn1 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
Ro3 es hidrógeno, un -alquilo C1 -C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; y
Rc2 es un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
Rj y Rk son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -ORo7, -N(Rn5)2, -N(Rn5)C(=O)Rc5, -C(=O)N(Rn5)2, -C(=O)Rc5, -C(=O)ORo7, -SRjs, -S(=O)2Rjs, -S(=O)Rjs, o un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; o, alternativamente, Rj y Rk pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar C=O, un anillo de cicloalquilo monocíclico C1-C6 opcionalmente sustituido, o un anillo de heterociclilo monocíclico C3-C6 opcionalmente sustituido; en donde:
cada caso de Rn5 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -ORo8, o un grupo protector de nitrógeno, en donde Ro8 es hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
cada caso de Ro7 es independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
cada caso de Rc5 es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
cada caso de Rjs es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, un arilo C6-12 opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de azufre.
En una segunda realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 está opcionalmente sustituido en cada átomo de carbono del anillo sustituible por Rp y opcionalmente sustituido en cada átomo de nitrógeno del anillo sustituible con Rn6; en donde:
cada caso de Rp es independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, -ORo6, -SRs2, -N(Rn3)2, -C(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)C(=O)Rc4, -C(=O)Rc4, -C(=O)ORo6, -OC(=O)Rc4, -S(=O)Rs2, -S(=O)2Rs2, -S(=O)ORo6, -OS(=O)Rc4, -S(=O)2ORo6, -OS(=O)2Rc4,-S(=O)N(Rn3)2, -S(=O)2N(Rn3)2,-N(Rn3)S(=O)Rs2, -N(Rn3)S(=O)2Rs2, -N(Rn3)C(=O)ORo6, -OC(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2, - N(Rn3)S(=O)ORo6, -N(Rn3)S(=O)2ORo6, -OS(=O)N(Rn3)2, o -OS(=O)2N(Rn3)2; o, alternativamente, dos casos de Rp unidos a los mismos átomos de carbono o unos adyacentes, pueden tomarse junto con el átomo o átomos de carbono a los que están unidos para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterocicloalquilo; en donde:
cada caso de Rn3 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
cada caso de Ro6 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; y
cada caso de Rc4 es un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
cada caso de Rs2 es independientemente un grupo protector de azufre o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
Rn6 es hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido6, o un grupo protector de nitrógeno;
en donde las variables restantes son como se definen en la primera realización.
En una tercera realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 se selecciona de uno de los siguientes:
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
en donde:
cada caso de Rnc y Rnd es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
p es 0, 1, 2, 3 o 4, según lo permita la valencia;
en donde las variables restantes son como se definen en la primera o la segunda realizaciones.
En una cuarta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 se selecciona de uno de los siguientes:
Figure imgf000012_0002
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda o la tercera realizaciones.
En una quinta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde rl heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 se selecciona de uno de los siguientes:
Figure imgf000012_0003
En donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera o la cuarta realizaciones.
En una sexta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (II):
Figure imgf000013_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta o la quinta realizaciones. En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto representado por una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000013_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una séptima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (III):
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta o la sexta realizaciones:
En una octava realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (IV):
Figure imgf000013_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta o la séptima realizaciones.
En una novena realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (V):
Figure imgf000014_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima o la octava realizaciones. En una décima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rn6 es hidrógeno o un -alquilo C1-4; en donde las variables restantes son como se definen en la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava o la novena realizaciones. En una undécima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada caso de Rpes independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C1-4 opcionalmente sustituido, -CN-NO2, -N3, -ORo4, -N(Rn2)2, -C(=O)N(Rn2)2,-C(=O)Rc3, o -C(=O)ORo4; en donde las variables restantes son como se definen en la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena o la décima realizaciones.
En una duodécima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado porQ se selecciona de los siguientes:
Figure imgf000014_0002
en donde:
cada caso de Rn es independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3 , un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, -ORo4, -SRs1, -N(Rn2)2, -C(=O)N(Rn2)2, - N(Rn2)C(=O)Rc3, -C(=O)Rc3, -C(=O)ORo4, -OC(=O)Rc3, -S(=O)Rs1, - S(=O)2Rs1, -S(=O)ORo4, -OS(=O)Rc3, -S(=O)2ORo4, -OS(=O)2Rc3, -S(=O)N(Rn2)2, -S(=O)2N(Rn2)2,-N(Rn2)S(=O)Rs1, -N(Rn2)S(=O)2Rs1, -N(Rn2)C(=O)ORo4, -OC(=O)N(Rn2)2, -N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2, -N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2, - N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2, - N(Rn2)S(=O)ORo4, -N(Rn2)S(=O)2ORo4, -OS(=O)N(Rn2)2, o -OS(=O)2N(Rn2)2; o dos casos de Rn unidos a los mismos átomos de carbono o unos adyacentes, tomados junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterocicloalquilo; en donde:
cada caso de Rn2 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
cada caso de Ro4 es independientemente hidrógeno, un -alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
cada caso de Rc3 es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
cada caso de Rs1 es independientemente un alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de azufre o;
n es 0, 1, 2 o 3, según lo permita la valencia; y
cada uno de Rna, Rnb y Rnd es independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno.
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima o la undécima realizaciones.
En una decimotercera realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado porQ se selecciona de los siguientes:
Figure imgf000015_0001
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima o la duodécima realizaciones.
En una decimocuarta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por Q se selecciona de los siguientes:
Figure imgf000015_0002
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima o la decimotercera realizaciones. En una decimoquinta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es
Figure imgf000016_0001
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera o la decimocuarta realizaciones. En realizaciones adicionales, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es
Figure imgf000016_0002
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera o la decimocuarta realizaciones.
En una decimosexta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es
Figure imgf000016_0003
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera o la decimocuarta realizaciones. En realizaciones adicionales, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Q es
Figure imgf000016_0004
en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera o la decimocuarta realizaciones. En ciertas realizaciones, R2yQ son iguales. En ciertas realizaciones, R2yQ son diferentes.
En una decimoséptima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rna es hidrógeno o -alquilo C1-4 ; en donde las variables restantes son la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta o la decimoquinta realizaciones.
En una decimoséptima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rnb es hidrógeno o -alquilo C1-4 ; en donde las variables restantes son como en la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta o la decimoquinta realizaciones.
En una decimoséptima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rnd es hidrógeno o -alquilo C1-4 ; en donde las variables restantes son como en la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta o la decimoquinta realizaciones.
En una decimoctava realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I) , (II), (III), (IV), o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada caso de Rn es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C-m opcionalmente sustituido, -CN, -NO2, -N3, -ORo4, -N(Rn2)2 , -C(=O)N(Rn2)2, -C(=O)Rc3, o -C(= O)ORo4; en donde las variables restantes son como se definen en la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta o la decimoséptima realizaciones.
En una decimonovena realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV), o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es hidrógeno o un -alquilo C1-C4; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima o la decimoctava realizaciones.
En una vigésima realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II) , (III), (IV), o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es metilo; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima o la decimoctava realizaciones.
En una vigesimoprimera realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rj y Rk son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -ORo7 o un alquilo C1-C4; o alternativamente, Rj y Rk se unen para formar =O en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima, la decimoctava, la decimonovena o la vigésima realizaciones.
En una vigesimosegunda realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Rj y Rk son cada uno hidrógeno; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima, la decimoctava, la decimonovena, la vigésima o la vigesimoprimera realizaciones.
En un vigesimotercera realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV), o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde Ra y Rb son cada uno hidrógeno; en donde las variables restantes son como se definen en la primera, la segunda, la tercera, la cuarta, la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima, la decimoctava, la decimonovena, la vigésima, la vigesimoprimera o la vigesimosegunda realización.
En una vigesimocuarta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0 o 1; en donde las variables restantes son como se definen en la quinta, la sexta, la séptima, la octava, la novena, la décima, la undécima, la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima, la decimoctava, la decimonovena, la vigésima, la vigesimoprimera, la vigesimosegunda o vigesimotercera realizaciones.
En una vigesimoquinta realización de la invención, se proporciona un compuesto representado por la Fórmula (I), (II), (III), (IV) o (V) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde n es 0 o 1.; en donde las variables restantes son como se definen en la duodécima, la decimotercera, la decimocuarta, la decimoquinta, la decimosexta, la decimoséptima, la decimoctava, la decimonovena, la vigésima, la vigesimoprimera, la vigesimosegunda, la vigesimotercera o la vigesimocuarta realizaciones.
En una realización, el compuesto de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se selecciona de los compuestos de Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1.
Los compuestos descritos en la presente son útiles como activadores de mutantes de PKR que tienen actividades más bajas en comparación con el tipo salvaje, por lo que son útiles para los métodos de la presente invención. Tales mutaciones en PKR pueden afectar a la actividad enzimática (eficacia catalítica), a las propiedades reguladoras (modulación por fructosa bisfosfato (FBP)/ATP) y/o a la termoestabilidad de la enzima. Ejemplos de tales mutaciones se describen en Valentini et al, JBC 2002. Algunos ejemplos de los mutantes que son activados por los compuestos descritos en la presente incluyen G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486W, R532W, K4l0E, R510Q y R490W. Sin pretender estar limitados por ninguna teoría, los compuestos descritos en la presente afectan a las actividades de los mutantes de PKR activando los mutantes de PKR que no responden a FBP, restaurando la termoestabilidad de los mutantes con estabilidad disminuida o restaurando la eficacia catalítica de los mutantes deteriorados. La actividad activadora de los presentes compuestos contra mutantes de PKR puede probarse siguiendo un método descrito en los Ejemplos 11-17. Los compuestos descritos en la presente también son útiles como activadores de PKR de tipo salvaje.
En una realización, para aumentar la vida útil de los glóbulos rojos, un compuesto, composición o composición farmacéutica descrita en la presente se añade directamente a sangre completa o glóbulos rojos concentrados extracorpóreamente o se proporciona al paciente directamente (por ejemplo, por vía i.p., i.v., i.m., oral, inhalación (administración en aerosol), transdérmica, sublingual y otras vías de administración). Sin pretender estar limitados por ninguna teoría, los compuestos descritos en la presente aumentan la vida útil de los glóbulos rojos, contrarrestando por tanto el envejecimiento de la sangre almacenada, al afectar el nivel de 2,3-DPG y/o ATP de la sangre. Una disminución en el nivel de concentración de 2,3-DPG induce un desplazamiento hacia la izquierda de la curva de disociación de oxígeno-hemoglobina y desplaza el equilibrio alostérico al estado R, u oxigenado, produciendo de este modo una inhibición terapéutica de la polimerización intracelular que subyace a la formación falciforme al aumentar la afinidad por el oxígeno debido al agotamiento de 2,3-DPG, estabilizando de este modo la oxihemoglobina más soluble. Por consiguiente, en una realización, los compuestos y composiciones farmacéuticas descritos en la presente son útiles como agentes anti-formación falciforme. En otra realización, para regular el 2,3-difosfoglicerato, un compuesto, composición o composición farmacéutica descrito en la presente se añade directamente a la sangre completa o glóbulos rojos concentrados extracorpóreamente o se proporciona al paciente directamente, por vía i.p., i.v., i.m., oral, inhalación (administración en aerosol), transdérmica, sublingual y otras vías de administración). En otra realización, un compuesto, composición o composición farmacéutica descrita en la presente puede aumentar el nivel de ATP y ayudar a proteger las células de especies reactivas de oxígeno (Mol Cell.
26 de octubre de 2012; 48(2):158-167).
En la Tabla 1, un compuesto descrito en la presente puede tener una AC50 de PKR de tipo salvaje, PKR K410E o PKR 510Q. "A" se refiere a una AC50 de menos de 0,300 M; "B" se refiere a una AC50 de 0,301 M a 0,800 M; y "C" se refiere a una AC50 de más de 0,800 pM. La AC50 de PKR de tipo salvaje para ciertos compuestos se determinó adicionalmente en un ensayo de ATP basado en células. "AA" se refiere a una AC50 de menos de igual a 1 |jM y "BB" se refiere a una AC50 de más de 1 j M.
T l 1. A iv i n PKR i lv m n r m m l r
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(continuación)
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(continuación)
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continuación
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continuación
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continuación
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continuación
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continuación
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(continuación)
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Los compuestos descritos en la presente pueden elaborarse usando una variedad de técnicas sintéticas como se expone en los Ejemplos. Las transformaciones de química sintética y las metodologías de grupos protectores (protección y desprotección) útiles para sintetizar los compuestos descritos en la presente son conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, las descritas en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); y L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), y ediciones posteriores de la misma.
Ciertos compuestos activadores útiles como activadores de PKR de tipo salvaje y/o mutantes son aquellos que demuestran especificidad y activación de la enzima PKR (tipo salvaje y/o una enzima mutante) en ausencia de FBP a un nivel mayor del 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 o 100% en presencia de FBP.
Síntesis de los compuestos de la invención.
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En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse usando métodos ilustrados en el Esquema 1. El aldehido de tiazolilo de fórmula S1 reacciona con azidoacetato de etilo en condiciones de adición nucleofílica (por ejemplo, una base) en un solvente apropiado (por ejemplo, etanol) para dar productos intermedios de fórmula S2. El grupo hidroxilo de fórmula S2 puede convertirse en un grupo saliente y someterse a eliminación para dar la fórmula S3. La ciclación y posterior funcionalización del grupo amino proporciona el compuesto bicíclico de fórmula S5, que experimenta un desplazamiento nucleofílico con metanotiolato de sodio, seguido de oxidación para dar la fórmula S7. La ciclación adicional de la fórmula S7 en presencia de hidracina, seguido de desplazamiento nucleofílico con LG1-CH2-Q1 en presencia de una base proporciona productos intermedios de fórmula S9. El grupo azufre en la fórmula S9 puede oxidarse a sulfinilo o sulfonilo para proporcionar la fórmula S10 o S11, que es un sustrato para un desplazamiento nucleofílico adicional para generar una fórmula general S12. Como se usa en la presente, X1 es un grupo saliente como se define en la presente. En ciertas realizaciones, X1 es halógeno, alcanosulfoniloxi, arenosulfoniloxi, diazonio, alquil diazenos, aril diazenos, alquil triazenos, aril triazenos, nitro, alquil nitrato, aril nitrato, alquil fosfato, aril fosfato, alquil carbonil oxi, aril carbonil oxi, alcoxiloxi oxi, arioxcarbonil oxi amoniaco, alquilaminas, arilaminas, grupo hidroxilo, grupo alquiloxi, grupo ariloxi; LG1 es un grupo saliente como se define en la presente; Q1 es cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido); y Nu1 es un nucleófilo como se ha definido en la presente (por ejemplo, heteroaril alquileno monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido). Nu1 del compuesto de fórmula S12 puede convertirse además a otras funcionalidades con transformaciones químicas estándar. R1 es como se define en la primera realización. En ciertas realizaciones, Q1 es heteroarilo opcionalmente sustituido.
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En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse usando los métodos mostrados en el Esquema 2. De manera similar al Esquema 1, la fórmula S21 puede prepararse a partir de tiazol aldehído de fórmula S13. La halogenación de la fórmula S21 da la fórmula S22, que puede experimentar una reacción de acoplamiento orgánico con un alquil metal, alquenil metal, alquinil metal, aril metal, heteroaril metal, heterociclil metal o cicloalquil metal para dar un compuesto de fórmula S23. Como se usa en la presente, X3 es un halógeno; R1 es como se define en la primera realización de la invención; LG2 es un grupo saliente como se define en la presente; Q2 es cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido); M1 es un metal (por ejemplo, Li, Na, K, Mg, Zn, Sn, B, Pd, Si, Cu, etc.), X4 es halógeno o un éster de ácido alquilsulfónico o un éster de ácido arilsulfónico; Rr1 es alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones, la reacción de acoplamiento orgánico es la reacción de Negishi; X3 es I; y M1 es Zn.
Los compuestos de fórmula S22 y S23 son productos intermedios útiles para introducir más funcionalidades en la posición X3 y/o Rr1 (Esquema 3). En ciertas realizaciones, el compuesto de fórmula 23-i puede oxidarse adicionalmente para formar la fórmula S24. La adición nucleofílica de S24 con un nucleófilo apropiado genera un compuesto de S25. En otra realización, los compuestos de fórmula S22 pueden acoplarse con metal vinílico para introducir el grupo vinilo en el anillo de tiazol. La oxidación del grupo vinilo seguido de la adición nucleofílica proporciona un compuesto de fórmula S28. Como se usa en la presente, Nu2 es un nucleófilo. En ciertas realizaciones, Rr1 es heteroarilalquileno monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido y Q2 es heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido.
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Como se usa en la presente, Rr2 es alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; y Q2 es como se define en el Esquema 2. En ciertas realizaciones, Rr2 y Q2 son cada uno independientemente heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido.
Como se usa en la presente, un nucleófilo es una especie química que dona un par de electrones a un electrófilo para formar un enlace químico con respecto a una reacción. Todas las moléculas o iones con un par de electrones libres o por lo menos un enlace pi pueden actuar como nucleófilos. Los nucleófilos ejemplares comprenden por lo menos un grupo que posee funcionalidad nucleofílica, por ejemplo, un carbono alfa (por ejemplo, el carbono adyacente a carbonilo, sulfonilo, sulfinilo, grupo arilo o heteroarilo), un grupo tiol, un grupo hidroxilo, un grupo de amina primaria, un grupo de amina secundaria, un haluro, cianuro, azida, alcóxido, metal orgánico o base inorgánica.
En algunas realizaciones, los compuestos como se describe en la presente pueden prepararse usando los métodos mostrados en el Esquema 4. El desplazamiento nucleofílico de las fórmulas S30 y S33 con una amina cíclica secundaria proporciona las fórmulas S31 y S34 respectivamente. Las reacciones de organoacoplamiento (por ejemplo, acoplamiento de Suzuki, acoplamiento de Stille, etc.) del compuesto S35 proporcionan un compuesto de las Fórmulas S36 (i)-(ii).
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representa un anillo A de heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros con un nitrógeno como un átomo del anillo. Como se usa en la presente,
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representa un anillo B de heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros con el punto de unión en el átomo de carbono del anillo.
R1 es como se define en la primera realización. X4 es halógeno o -OTf. M4 es un metal orgánico con ligandos apropiados si es necesario (orgánicos o inorgánicos) según lo permita la valencia. Ejemplificado M4 incluye, pero no se limita a Li orgánico, Sn, B (por ejemplo ácidos borónicos y ésteres borónicos), Zn, Mg, Si, Pd, y Cu. Métodos de tratamiento
En una realización, se proporciona un método para tratar una enfermedad, afección o trastorno como se describe en la presente (por ejemplo, tratar) que comprende administrar un compuesto, una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto o una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1.
Los compuestos y composiciones descritos en la presente pueden administrarse a células en cultivo, por ejemplo, in vitro o ex vivo, o a un sujeto, por ejemplo, in vivo, para tratar y/o diagnosticar una variedad de trastornos, incluyendo los descritos en la presente a continuación.
En una realización de la invención, se proporciona un método para aumentar la vida útil de los glóbulos rojos (RBC) con necesidad de ello, que comprende poner en contacto la sangre con una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos, y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
En una realización adicional, el compuesto o composición farmacéutica se añade directamente a sangre completa o glóbulos rojos concentrados (por ejemplo, extracorpóreamente). En otra realización, el compuesto o composición farmacéutica se administra a un sujeto con necesidad de ello.
En una realización de la invención, se proporciona un método para regular los niveles de 2,3-difosfoglicerato en sangre con necesidad de ello, poniendo en contacto la sangre con una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
En una realización de la invención, se proporciona un método para tratar la enfermedad de células falciformes que comprende administrar a un sujeto con necesidad de ello una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos, y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
Como se usa en la presente, la enfermedad de células falciformes (SCD), la enfermedad de la hemoglobina SS y la anemia de células falciformes se usan indistintamente. La enfermedad de células falciformes (SCD) describe un grupo de trastornos hereditarios de los glóbulos rojos. En ciertas realizaciones, los sujetos con SCD tienen hemoglobina anormal, denominada hemoglobina S o hemoglobina falciforme, en sus glóbulos rojos. En ciertas realizaciones, un sujeto que tiene SCD tiene por lo menos un gen anormal que hace que el cuerpo produzca hemoglobina S. En ciertas realizaciones, un sujeto que tiene SCD tiene dos genes S de hemoglobina, hemoglobina SS.
En una realización de la invención, se proporciona un método para tratar la deficiencia de piruvato quinasa (PKD) en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
Como se describe en la presente, la PKD es una deficiencia de PKR. En ciertas realizaciones, la deficiencia de PKR está asociada con una mutación de PKR. En ciertas realizaciones, PKD se refiere a la presencia de por lo menos 2 alelos mutantes en el gen PKLR. En ciertas realizaciones, por lo menos 1 de los por lo menos 2 alelos mutantes en el gen PKLR es una mutación de sentido erróneo. En ciertas realizaciones, un paciente con PKD tiene una concentración de Hb menor o igual a 10,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el paciente no recibe una transfusión regular (por ejemplo, no ha tenido más de 4 episodios de transfusión en el período de 12 meses). En ciertas realizaciones, el paciente se somete una transfusión regular (por ejemplo, haber tenido por lo menos 4 episodios de transfusión en el período de 12 meses). En ciertas realizaciones, el paciente se somete a una transfusión regular y tiene por lo menos 6 episodios de transfusión en el período de 12 meses; en ciertas realizaciones, el paciente que recibe una transfusión regular tiene <12,0 g/dl (si es hombre) o <11,0 g/dl (si es mujer) de hemoglobina (Hb), por ejemplo 15. En ciertas realizaciones, el paciente se ha sometido a una esplenectomía.
En una realización, la mutación de PKR se selecciona del grupo que consiste de A31V, A36G, G37Q, R40W, R40Q, L73P, S80P, P82H, R86P, I90N, T93I, G95R, M107T, G111R, A115P, S120F, H121Q, S130P, S130Y, V134D, R135D, A137T, G143S, I153T, A154T, L155P, G159V, R163C, R163L, T164N, G165V, L167M, G169G, E172Q, W201R, I219T, A221Y, D221N, G222A, I224T, G232C, N253D, G263R, G263W, E266K, V269F, L272V, L272P, G275R, G275R, E277K, V280G, D281N, F287V, F287L, V288L, D293N, D293V, A295I, A295V, I310N, I314T, E315K, N316K, V320L, V320M, S330R, D331N, D331G, D331E, G332S, V335M, A336S, R337W, R337P, R337Q, D339N, D339Q, G341A, G341D, I342F, K348N, A352D, I357T, G358R, G358E, R359C, R359H, C360Y, N361D, G364D, K365M, V368F, T371I, L374P, S376I, T384M, R385W, R385K, E387G, D390N, A392T, N393D, N393S, N393K, A394S, A394D, A394V, V395L, D397V, G398A, M403I, G406R, E407K, E407G, T408P, T408A, T4081, K410E, G411S, G411A, Q421K, A423A, A423A, R426W, R426Q, E427A, E427N, A431T, R449C, 1457V, G458D, A459V, V460M, A468V, A468G, A470D, T477A, R479C, R479H, S485F, R486W, R486L, R488Q, R490W, I494T, A495T, A495V, R498C, R498H, A503V, R504L, Q505E, V506I, R510Q, G511R, G511E, R518S, R531C, R532W, R532Q, E538D, G540R, D550V, V552M, G557A, R559G, R559P, N566K, M568V, R569Q, R569L, Q58X, E174X, W201X, E241X, R270X, E440X, R486X, Q501X, L508X, R510X, E538X, R559X. Estas mutaciones se describen en Canu et.al., Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, págs. 100-109. En una realización, la PKR mutante se selecciona de G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q, y R490W. En ciertas realizaciones, la PKR mutante se selecciona de A468V, A495V, I90N, T408I y Q421K y R498H. En ciertas realizaciones, la PKR mutante es R532W, K410E o R510Q.
En una realización de la invención, se proporciona un método para tratar la anemia en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos, y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la anemia es una anemia diseritropoyética como anemia diseritropoyética congénita de tipo I, II, III o IV. En ciertas realizaciones, la anemia es anemia hemolítica. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es una forma congénita y/o hereditaria de anemia hemolítica como PKD, enfermedad de células falciformes, talasemias (por ejemplo, alfa o beta), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria), hemoglobinuria paroxística nocturna, abeta-liproteinemia (síndrome de Bassen-Kornzweig). En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica adquirida, como anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica inducida por fármacos. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia como parte de una enfermedad multisistémica, como la anemia de púrpura eritropoyética congénita, Fanconi, Diamond-Blackfan.
Como se usa en la presente, el término "anemia" se refiere a una deficiencia de glóbulos rojos (RBC) y/o hemoglobina. Como se usa en la presente, la anemia incluye todos los tipos de anemia clínica, por ejemplo (pero no limitado a): anemia microcítica, anemia ferropénica, hemoglobinopatías, defecto de síntesis de hemo, defecto de síntesis de globina, defecto sideroblástico, anemia normocítica, anemia de enfermedad crónica, anemia aplásica anemia, anemia hemolítica, anemia macrocítica, anemia megaloblástica, anemia perniciosa, anemia dimórfica, anemia del prematuro, anemia de Fanconi, esferocitosis hereditaria, enfermedad de células falciformes, anemia hemolítica autoinmune caliente, anemia hemolítica por aglutininas frías, osteopetrosis, talasemia y síndrome mielodisplásico.
En ciertas realizaciones, la anemia puede diagnosticarse en un recuento sanguíneo completo. En ciertas realizaciones, la anemia puede diagnosticarse en base a la medición de uno o más marcadores de hemólisis (por ejemplo, recuento de RBC, hemoglobina, reticulocitos, esquistocitos, lactato deshidrogenasa (LDH), haptoglobina, bilirrubina y ferritina) y/o hemosiderinuria volumen corpuscular medio (MCV) y/o amplitud de distribución de glóbulos rojos (RDW). En el contexto de la presente invención, la anemia está presente si un individuo tiene una hemoglobina (Hb) menor que el nivel deseado, por ejemplo, la concentración de Hb es de menos de 14 g/dl, más preferiblemente de menos de 13 g/dl, más preferiblemente de menos de 12 g/dl, más preferiblemente de menos de 11 g/dl, o lo más preferiblemente de menos de 10 g/dl.
En ciertas realizaciones, se proporciona en la presente un método para aumentar la cantidad de hemoglobina en un sujeto en el mismo mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en la presente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de hemoglobina en el sujeto. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb a un nivel deseado, por ejemplo, por encima de 10 g/dl, más preferiblemente por encima de 11 g/dl, más preferiblemente por encima de 12 g/dl, más preferiblemente por encima de 13 g/dl, o más preferiblemente por encima de 14 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 0,5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 1,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 1,5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 2,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 2,5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 3,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 3,5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 4,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 4,5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 5,0 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 5. 5 g/dl. En ciertas realizaciones, el método proporcionado aumenta la concentración de Hb en por lo menos aproximadamente 6,0 g/dl.
En una realización de la invención, se proporciona un método para tratar la anemia hemolítica que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los ejemplos, y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
En una realización adicional, la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia congénita. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es hereditaria (por ejemplo, anemia hemolítica no esferocítica o esferocitosis hereditaria).
En una realización de la invención, se proporciona un método para tratar la talasemia; esferocitosis hereditaria; eliptocitosis hereditaria; abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig; hemoglobinuria paroxística nocturna; anemia hemolítica adquirida (por ejemplo, anemias congénitas (por ejemplo, enzimopatías)); enfermedad de células falciformes; o anemia de enfermedades crónicas que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En una realización, la anemia hemolítica adquirida
comprende anemias congénitas. En ciertas realizaciones, el método proporcionado es para tratar la talasemia. En
ciertas realizaciones, la talasemia es beta-talasemia.
Como se usa en la presente, la talasemia es un trastorno sanguíneo hereditario en el que el cuerpo produce
una forma anormal de hemoglobina. En ciertas realizaciones, el trastorno da como resultado la destrucción de un
gran número de glóbulos rojos, lo que lleva a la anemia. En ciertas realizaciones, la talasemia es alfa talasemia. En
ciertas realizaciones, la talasemia es beta talasemia.
En una realización de la invención, se proporciona un método para activar la PKR mutante en glóbulos rojos
que comprende administrara un sujeto con necesidad de ello una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la
presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un
compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador
farmacéuticamente aceptable. En una realización, el método es un método ex vivo. En otra realización, el método es
un método in vitro. En algunas realizaciones, la sangre o los glóbulos rojos se derivan o se obtienen de un sujeto que
padece o es susceptible a una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste de deficiencia de
piruvato quinasa (PKD), talasemia (por ejemplo, beta talasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria,
abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig, enfermedad de células falciformes, hemoglobinuria
paroxística nocturna, anemia (por ejemplo, anemia diseritropoyética), anemia hemolítica y anemia de enfermedades
crónicas. En algunas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia
hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica.
En una realización de la invención, se proporciona un método para activar la PKR de tipo salvaje en
glóbulos rojos que comprende administrar a un sujeto con necesidad de ello una cantidad eficaz de (1) un
compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y
la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable
que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un
portador farmacéuticamente aceptable. En una realización, el método es un método ex vivo . En otra realización, el
método es un método in vitro. En algunas realizaciones, la sangre o los glóbulos rojos se derivan o se obtienen de
un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste de
deficiencia de piruvato quinasa (PKD), talasemia (por ejemplo, beta talasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis
hereditaria, abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig, enfermedad de células falciformes,
hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia (por ejemplo, anemia diseritropoyética), anemia hemolítica y anemia de
enfermedades crónicas. En algunas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o
congénita, anemia hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un
compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador
farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para aumentar la vida útil de los glóbulos rojos
(RBC) con necesidad de ello.
En una realización adicional, el compuesto o composición farmacéutica se formula para añadirse
directamente a sangre completa o glóbulos rojos concentrados extracorpóreamente. En otra realización, el
compuesto o la composición farmacéutica se formula para ser administrado a un sujeto con necesidad de ello.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un
compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador
farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para regular los niveles de 2,3-difosfoglicerato
en sangre con necesidad de ello.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un
compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador
farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para tratar la anemia. En ciertas realizaciones,
la anemia es una anemia diseritropoyética como anemia diseritropoyética congénita de tipo I, II, III o IV. En ciertas
realizaciones, la anemia es anemia hemolítica. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es una forma
congénita y/o hereditaria de anemia hemolítica como PKD, enfermedad de células falciformes, talasemias (por
ejemplo, alfa o beta), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria), hemoglobinuria paroxística nocturna, abetaliproteinemia (síndrome de Bassen-Kornzweig). En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica adquirida, como anemia hemolítica autoinmune, anemia hemolítica inducida por fármacos. En ciertas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia como parte de una enfermedad multisistémica, como la anemia de púrpura eritropoyética congénita, Fanconi, Diamond-Blackfan.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para tratar la anemia hemolítica.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para tratar la enfermedad de células falciformes.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para tratar la deficiencia de piruvato quinasa (PKD) en un sujeto.
Como se describe en la presente, la PKD es una deficiencia de PKR. En ciertas realizaciones, la deficiencia de PKR está asociada con una mutación de PKR.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para tratar la talasemia; esferocitosis hereditaria; eliptocitosis hereditaria; abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig; hemoglobinuria paroxística nocturna; anemia hemolítica adquirida; o anemia de enfermedades crónicas.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para activar PKR mutante en glóbulos rojos.
En una realización de la invención, se proporciona un uso de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para activar PKR de tipo salvaje en glóbulos rojos.
En una realización de la invención, se proporciona un método para activar la piruvato quinasa R (PKR), que comprende poner en contacto la PKR con una cantidad eficaz de (1) un compuesto descrito en la presente (por ejemplo, un compuesto de las Fórmulas (I)-(V), en los Ejemplos y en la Tabla 1 y la Figura 1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (2) una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto descrito en la presente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador farmacéuticamente aceptable. En una realización, la PKR es una PKR de tipo salvaje. En otra realización, la PKR es una PKR mutante. En algunas realizaciones, la PKR se expresa en glóbulos rojos. En una realización, el método es un método ex vivo. En otra realización, el método es un método in vitro. En algunas realizaciones, la sangre o los glóbulos rojos se derivan o se obtienen de un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste de deficiencia de piruvato quinasa (PKD), talasemia (por ejemplo, beta talasemia), esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig, enfermedad de células falciformes, hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia (por ejemplo, anemia diseritropoyética), anemia hemolítica y anemia de enfermedades crónicas. En algunas realizaciones, la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica.
Como los compuestos y composiciones descritos en la presente actúan sobre la misma vía biológica y tienen un modo de acción similar al de los compuestos descritos en la WO2012/151451, los compuestos y composiciones presentados en la presente pueden activar los mutantes de PKR como se describe en la WO2012/151451.
Composiciones y vías de administración
Las composiciones delineadas en la presente incluyen los compuestos delineados en la presente (por ejemplo, un compuesto descrito en la presente), así como agentes terapéuticos adicionales si están presentes, en cantidades eficaces para lograr una modulación de la enfermedad o los síntomas de la enfermedad, incluyendo los descritos en la presente.
El término "portador o adyuvante farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador o adyuvante que puede administrarse a un paciente, junto con un compuesto proporcionado en la presente, y que no destruye la actividad farmacológica del mismo y no es tóxico cuando se administra en dosis suficientes para administrar una cantidad eficaz del compuesto.
Los portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas de administración de fármacos autoemulsionantes (SEDDS) como d-a-tocoferol polietilenglicol 1000 succinato, surfactantes usados en formas de dosificación farmacéuticas como Tweens u otras matrices de administración poliméricas similares, proteínas séricas, como albúmina de suero humano, sustancias tampón como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato potásico, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietilen-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana. Ciclodextrinas como a-, p- y Y-ciclodextrina, o también pueden usarse ventajosamente otros derivados solubilizados para mejorar la administración de los compuestos de la fórmulas descritas en la presente.
Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden administrarse por vía oral, parenteral, por espray de inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o mediante un depósito implantado, preferiblemente por administración oral o por inyección. Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden contener cualquier portador, adyuvante o vehículo convencional no tóxico farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas proporcionadas con la presente pueden administrarse por vía oral en cualquier forma de dosificación aceptable por vía oral, incluyendo pero no limitado a, cápsulas, comprimidos, emulsiones y suspensiones, dispersiones y soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los portadores que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden típicamente agentes lubricantes, como estearato de magnesio. Para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran suspensiones y/o emulsiones acuosas por vía oral, el ingrediente activo puede suspenderse o disolverse en una fase oleosa que se combina con agentes emulsionantes y/o de suspensión.
Cuando las composiciones proporcionadas en la presente comprenden una combinación de un compuesto de las fórmulas descritas en la presente y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes en niveles de dosificación de entre aproximadamente el 1 y el 100%, y más preferiblemente entre aproximadamente el 5 y el 95% de la dosis administrada normalmente en un régimen de monoterapia. Los agentes adicionales pueden administrarse por separado, como parte de un régimen de dosis múltiple, de los compuestos proporcionados en la presente. Alternativamente, esos agentes pueden ser parte de una forma de dosificación individual, mezclados juntos con los compuestos proporcionados en la presente en una composición individual.
Los compuestos descritos en la presente pueden administrarse, por ejemplo, mediante inyección, por vía intravenosa, intraarterial, subdérmica, intraperitoneal, intramuscular o subcutánea; o por vía oral, bucal, nasal, transmucosal, tópica, en una preparación oftálmica o por inhalación, con una dosificación que varía de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal, alternativamente dosificaciones entre 1 mg y 1000 mg/dosis, cada 4 a 120 horas, o de acuerdo con los requisitos del fármaco particular. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales portadores para producir una forma de dosificación individual variará dependiendo del huésped tratado y del modo particular de administración. Una preparación típica contendrá de aproximadamente un 5% a aproximadamente un 95% de compuesto activo (p/p). Alternativamente, tales preparaciones contienen de aproximadamente un 20% a aproximadamente un 80% de compuesto activo.
EXPERIMENTAL
Lista de abreviaturas:
Figure imgf000044_0001
Experimental general
En los siguientes ejemplos, los reactivos químicos se adquirieron de fuentes comerciales (como Alfa, Acros, Sigma Aldrich, TCI y Shanghai Chemical Reagent Company) y se usaron sin purificación adicional. La cromatografía ultrarrápida se realizó en un Ez Purifier III a través de una columna con partículas de gel de sílice de 200-300 esh. Las placas de cromatografía en capa fina (TLC) analíticas y preparativas fueron HSGF 254 (0,15-0,2 mm de espesor, Shanghai Anbang Company, China). Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) se registraron usando Brucker AMX-300 o AMX-400 RMN (Brucker, Suiza). Los cambios químicos se informaron en partes por millón (ppm, 8) etero(ESI) de un espectrómetro de masas Waters LCT TOF (Waters, USA). Los cromatógrafos de HPLC se registraron en cromatografía líquida Agilent 1200 (Agilent, USA, Columna: Ultimate 4,6 m x 50 mm, 5 M, fase móvil A: 0. ácido fórmico al 1% en agua; fase móvil B: acetonitrilo). Las reacciones de microondas se ejecutaron en un sintetizador de microondas Initiator 2.5 (Biotage, Suecia).
Las condiciones de HPLC usadas en los experimentos descritos en la presente son las siguientes:
Método 1:
Instrumento: Shimadzu LC-2010AHT
Columna: YMC-Triart C18, 50 x 4,6 mm, 5 pm
Fase móvil:
Solvente A: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1,
Solvente B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1
Caudal: 2,5 ml/min; Temperatura de la columna: 35° C; Longitud de onda: 220 nm/254 nm
Método 2:
Instrumento: Shimadzu LC-2010AHT
Columna: YMC-Triart C18, 50 x 4,6 mm, 5 |jm
Fase móvil:
Solvente A: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1,
Solvente B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1
Caudal: 2,5 ml/min; Temperatura de la columna: 35° C; Longitud de onda: 220 nm/254 nm
Las condiciones de HPLC preparativa usadas en los experimentos descritos en la presente son las siguientes: Instrumento: Waters 2545B/2767
Columna: YMC-Triart C18, 50 x 4,6 mm, 5 jm
Fase móvil:
Solvente A: H2O (01.% FA),
Solvente B: CH3OH o CH3CN
Caudal: 20 ml/min; Temperatura de la columna: 35° C; Longitud de onda: 220 nm/254 nm
Ejemplo 1. Síntesis de 6-(3-metoxibencM)-2,4-dimetN-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazm-5-ona.
Figure imgf000045_0001
Paso A. (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il)acrilato de etilo. A una solución de NaOEt (803 mg, 11,79 mmol) en EtOH (10 ml) entre aproximadamente -10° C y aproximadamente -5° C se le añadió gota a gota una solución de 2-metiltiazol-5-carbaldehído (500 mg, 3,93 mmol) y 2-azidoacetato de etilo (1,53 g, 11,79 mmol) en EtOH anhidro (3 ml). La mezcla de la reacción se agitó durante aproximadamente 1 hora mientras la temperatura se mantenía por debajo de 0° C, luego se calentó a ta y se agitó durante otras 2 horas. La mezcla resultante se vertió en NH4Cl acuoso saturado (50 ml) a 0° C y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para dar el producto deseado (500 mg) que se usó directamente en el paso siguiente sin ninguna purificación. LCMS:
m/z 239 (M+H)+.
Paso B. 2-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. Se agitó una mezcla de (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il)acrilato de etilo (500 mg, 2,1 mmol) en o-xileno (5 ml) a 140° C durante 2 h. luego se enfrió a ta y luego se purificó directamente mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: pentano/EtOAc = 6/1 para dar el producto deseado (220 mg, 49,8% de rendimiento). LCMS: m/z 211 (M+H)+.
Paso C. 2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. A una solución de 2-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (160 mg, 0,76 mmol) en DMF (3 ml) a 0° C se le añadió NaH (36,5 mg, 1,52 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 0,5 h, seguido de la adición de CH3 I (47 pl, 0,76 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 0,5 h. luego se vertió en NH4Cl acuoso saturado a 0° C y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: pentano/acetato de etilo = 6/1) para dar el producto deseado (124 mg, 72,6% de rendimiento). LCMS: m/z 225 (M+H)+.
Paso D. 6-formil-2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. A una mezcla de 2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (100 mg, 0,446 mmol) en DMF (1 ml)) a 0° C se le añadió POCh (122,5 jL, 1,338 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 100°C durante 2 h. después se vertió en NaHCO3 acuoso saturado a 0° C y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: pentano/acetato de etilo = 5/1) para dar el producto deseado (57 mg, 50,7% de rendimiento). LCMS: m/z 253 (M+H)+.
Paso E. 2,4-Dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una mezcla de 6-formil-2,4-dimetil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (57 mg, 0,226 mmol) en 2-etoxietanol (2 ml) se le añadió N2H4.H2O (53,7 pl, 1,130 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante 1 hora. después se vertió en H2O y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera; se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: pentano/acetato de etilo = 5/1) para dar el producto deseado (49 mg, 98,4% de rendimiento). LCMS: m/z 221 (M+H)+.
Paso F. 6-(3-metoxibencil)-2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una mezcla de 2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5' 4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (49 mg, 0,223 mmol) en DMF (1 ml) a 0° C se le añadió t-BuOK (50,8 mg, 0,454 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 0,5 h, seguido de la adición de 1-(clorometil)-3-metoxibenceno (34,9 mg, 0,223 mmol). La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora. luego se vertió en una solución de NH4Cl acuosa saturada a 0° C y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: pentano/acetato de etilo = 3/1) para dar el producto deseado. LCMS: m/z 341 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de ) 88.56 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.92 - 6.72 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).
El ejemplo 1 proporciona una síntesis ejemplificada del compuesto E1-3. Se entiende que diferentes compuestos pueden ser sintetizados con el heteroaril-CH2-haluro apropiado.
Ejemplos 2. Preparación de compuestos de fórmula E2-vii con esquema E2
Figure imgf000046_0001
Donde X es un grupo saliente (por ejemplo, Cl, Br o I, OMs u OTs); M es un complejo de metal orgánico (por ejemplo, complejo de organoboro como ácido borónico o complejo de pinaco boro, complejo de organoestaño como -Sn(Bu')3 ; complejo de organozinc como -Zn(halógeno)); Q y R2son cada uno, independientemente, heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido. Similar a la síntesis de compuestos de Fórmula E1-v en el Ejemplo 1, el compuesto E2-iv puede sintetizarse a partir del tiazol aldehído E2-i con unas pocas modificaciones (por ejemplo, reacción del compuesto E2-ii con MsCl seguido de eliminación para dar el compuesto E2-iii; el sistema tricíclico puede formarse con AcOH cat. en 2-metoxietanol). La sustitución y yodación del compuesto E2-iv proporciona el compuesto E2-vi. El acoplamiento del compuesto E2-vi con el organometálico en presencia de un catalizador da el compuesto E2-vii.
Ejemplo 2A. Síntesis de 4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo-[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000046_0002
Paso A. 2-azido-3-hidroxi-3-(tiazol-5-il)propanoato de etilo. Se añadió lentamente sodio (12,2 g, 0,531 mol) a ta a una solución agitada de EtOH seco (300 ml). Luego, la mezcla de la reacción se enfrió a -20° C, seguido de la adición gota a gota de una solución de 2-azidoacetato de etilo (68,5 g, 0,531 mol) y tiazol-5-carbaldehído (20,0 g, 0,177 mol) en EtOH anhidro (100 ml) manteniendo la temperatura entre -20° C y -15° C. Después de la adición, la mezcla de la reacción se agitó a -20° C durante 1 hora adicional y luego se vertió en NH4Cl acuoso saturado (1 l). La mezcla resultante se saturó con NaCl y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando (eluyente: PE/EtOAc = 6/1 a 5/1 a 1/1) para proporcionar el producto deseado (34 g) pálido. LCMS: m/z = 243 (M+H)+.
Paso B. (Z)-2-azido-3-(tiazol-5-il)acrilato de etilo. A una mezcla agitada de 2-azido-3-hidroxi-3-(tiazol-5-il)propanoato de etilo (103 g, 0,426 mol) en DCM seco (1,5 l) a -35° C se le añadió MsCl (146 g, 1,28 mol), seguido de la adición gota a gota de TEA (301 g, 2,98 mol) manteniendo la temperatura entre -35° C y -30° C. Después de la adición, la mezcla de la reacción se agitó a -30° C durante otros 15 min y luego se vertió en NH4Cl acuoso saturado (1,5 l). La mezcla resultante se saturó con NaCl y se extrajo con dCm dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron en secuencia con HCl acuoso (1M) y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando (eluyente: PE/EtOAc = 5/1) para proporcionar el producto deseado (82,0 g, rendimiento del 86,3%). LCMS: m/z = 225 (M+H)+.
Pasos C-E para sintetizar 4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo, 4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5carboxilato de etilo y 6-formil-4-Metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato fueron similares a los procedimientos del Ejemplo 1.
Paso F. (E)-6-(hidrazonometil)-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. A una mezcla agitada de N2H4.H2O (2,0 g, 98%, 40 mmol) en 2-metoxietanol (50 ml) a ta se le añadió 6-formil-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (4,8 g, 20 mmol), seguido de la adición de 20 gotas de AcOH. La mezcla de la reacción se agitó a ta durante aproximadamente 30 min hasta que la mezcla se volvió transparente. La mezcla resultante se vertió en agua (100 ml) con agitación y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto deseado que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. LCMS: m/z = 253 (M+H)+.
Paso G. 4-MetN-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazm-5-ona. A una suspensión agitada de (E)-6-(hidrazonometil)-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (4,8 g, 0,19 mol) en 2-metoxietanol (50 ml) a ta se le añadió AcOH (20 gotas). La suspensión de la reacción se agitó a 105° C durante 3 h y luego se filtró. La torta de filtración se lavó con agua y se secó a vacío alto para obtener el primer lote del producto deseado. El filtrado se diluyó con agua y se extrajo con DCM dos veces. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar el segundo lote del producto deseado. Los dos lotes combinados del producto deseado (2,5 g) se usaron directamente en el paso siguiente sin purificación adicional. LCMS: m/z= 207 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 8 12.68(s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 4.30 (s, 3H)
Ejemplo 3. Síntesis de los compuestos E3-vii y E3-viii
Figure imgf000047_0001
en donde Hal es halógeno (por ejemplo, Cl, Br o I); LG es un grupo saliente (por ejemplo, Cl, Br, I, OM u OT); Q es heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido; y Q' es heteroarilo de 5 o 6 miembros funcionalizado adicionalmente. La reacción de sustitución aromática del compuesto E3-i con metanotiolato de sodio proporciona el compuesto E3-ii, que puede convertirse en el compuesto E3-v usando la síntesis del compuesto E1-iii en E1-vi. La oxidación del compuesto E3-v con mCPBA da el compuesto E3-vi y E3-vii respectivamente.
Ejemplo 3A. Síntesis de 4-metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000047_0002
Paso A: 4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. A una mezcla de 2-bromo-4-metil-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (500,0 mg, 1,73 mmol) en EtOH (10,0 ml) se le añadió NaSMe (240,0 mg, 3,5 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 25° C durante 3 h, luego se inactivó con agua con hielo y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para proporcionar el producto deseado (460 mg) que se usó directamente en el paso siguiente sin ninguna purificación. LC-MS: m/z 257 (M+H)+.
Paso B: 6-formil-4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo. A una solución de 4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (460,0 mg, 1,8 mmol) y N-metil-N-fenilformamida (490 mg, 3,6 mmol) en DCE (10 ml) se le añadió POCI3 (550,0 mg, 3,6 mmol). La mezcla resultante se agitó a 130° C durante 3 h. luego se inactivó con agua helada y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: PE/EtOAc = 8/1) para dar el producto deseado (320,0 mg, rendimiento del 63%). LC-MS: m/z 285 (M+H)+.
Paso C: 4-Metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una solución de 6 -formil-4-metil-2-(metiltio)-4H-pirrolo[2,3-d]tiazol-5-carboxilato de etilo (300,0 mg, 1,06 mmol) en EtOH (5,0 ml) se le añadió N2H4.H2O (2 ml, 98% en peso). La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 1 hora. luego se calentó a 60° C durante la noche y luego se enfrió. El sólido se recogió por filtración y se secó a vacío alto para proporcionar el producto deseado (180,0 mg, 67% de rendimiento). lC-MS: m/z 253 (M+H)+. 1H NMR (400 Mhz, DMSO-de ) 8 12.61 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 4.22 (s, 3H), 2.81 (s, 3H).
Ejemplo 3B. Síntesis de 6-((2-aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-5(6H)-ona
Figure imgf000048_0001
Paso A. 2-Bromo-4-(bromometil)piridina. Se agitó una mezcla de 2-bromo-4-metilpiridina (1 g, 5,81 mmol), NBS (1,1 g, 6,39 mmol) y una cantidad catalítica de AIBN (100 mg) en CCl4 (10 ml) a 8 0 ° C durante la noche. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: PE/EtOAc = 200/1) para dar el producto deseado E3-4 (500 mg, 34,28% de rendimiento).
Paso B. 6-((2-Bromopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Se agitó una mezcla de 4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona ( 1 00 mg, 0,40 mmol), y K2CO3 (164 mg, 1,19 mmol) en d Mf ( 8 ml) a 60° C durante 2 h, seguido de la adición de una solución de 2-bromo-4-(bromometil)piridina (199 mg, 0,80 mmol) en DMF (2 ml) y una cantidad catalítica de TBAB (13 mg). La mezcla se agitó a 60° C durante la noche, luego se inactivó con agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NH4Cl acuoso saturado, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: PE/EtOAc = 10/1) para dar el producto deseado (150 mg, rendimiento del 89,62%). LCMS: m/z 423 (M+H)+.
Paso C. (4-((4-metil-2-(metiltio)-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo. Se agitó una mezcla de 6-((2-bromopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0,24 mmol), carbamato de terc-butilo ( 83 mg, 0,71 mmol), K3PO4 (201 mg, 0,95 mmol), Pd2(dba)3 (18 mg, 0,02 mmol) y Xantphos (11 mg, 0,02 mmol) en dioxano (10 ml) a 100° C bajo nitrógeno durante la noche. La mezcla resultante se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: PE/EtOAc = 3/1) para dar el producto deseado (100 mg, 92,10% de rendimiento). LCMS: m/z 459 (M+H)+.
Paso D. (4-((4-metil-2-(metilsulfinil)-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo. A una mezcla de (4-((4-metil-2-(metiltio)-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,22 mmol) en DCM (5 ml) a 0° C, se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (38 mg, 0,22 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 0° C durante 1 h. luego se inactivó con agua y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para dar el producto deseado (100 mg, rendimiento del 96,63%) que se usó directamente en el paso siguiente sin ninguna purificación. LCMS: m/z 475 (M+H)+.
Paso E 6-((2-Aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Se agitó una mezcla de (4-((4-metil-2-(metilsulfinil)-5-oxo-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,21 mmol) en TFA (1 ml) y DCM (3 ml) a ta durante 1 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. Para dar el producto deseado (20 mg, rendimiento del 25,35%). LCMS: m/z 375 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe ) 88.67 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 6.30 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 5.24 - 5.03 (m, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.03 (s, 3H).
El procedimiento expuesto anteriormente se usó para producir los siguientes compuestos usando los materiales de partida apropiados. Puede usarse protección y desprotección estándar cuando sea necesario.
Figure imgf000049_0002
Ejemplo 3C. Síntesis de 6-((2-aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
Figure imgf000049_0001
Paso A-B. La 2-bromo-5-(bromometil)tiazoly6-((2-Bromotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona se sintetizó de manera similar al Ejemplo 3B.
Paso C. 6-((2-((2,4-dimetoxibencN)ammo)tiazol-5-N)metM)-4-metM-2-(metMtio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Se agitó una mezcla de 6-((2-bromotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (130 mg, 0,30 mmol) y DIPEA (0,1 ml) en NMP (0,1 ml) y (2,4-dimetoxifenil)metanamina (0,1 ml) a 150° C durante 4 h. Luego, la mezcla de la reacción se inactivó con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluido con PE/EtOAc = 5/1) para dar el producto deseado (60 mg, 38,4% de rendimiento). LC-MS: m/z 515 (M+H)+.
Paso D. 6-((2-((2,4-dimetoxibencil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una mezcla de 6-((2-((2,4-dimetoxibencil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,10 mmol) en THF (3 ml) a 0° C se le añadió oxona (61 mg, 0,10 mmol). La mezcla se agitó a 0° C durante 1 hora, luego se inactivó con una solución de Na2S2O3 acuosa saturada (5 ml) y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para dar el producto deseado (30 mg, rendimiento del 50,1%) que se usó directamente en el paso siguiente sin purificación adicional. LC-MS: m/z 531 (M+H)+.
Paso E La 6-((2-aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona se sintetizó de manera similar al Ejemplo 3B. LC-MS: m/z 381 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, d Ms O-cÍ6 ) 88.70 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).
El procedimiento expuesto anteriormente se usó para producir los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados. Cuando sea necesario puede usarse protección y desprotección estándar.
Figure imgf000050_0002
Ejemplos 4. Síntesisde6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
Ejemplo 4A. Síntesis de 3-((fenilsulfonil)metil)-l-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol
Figure imgf000050_0001
Paso A. 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo A 0° C bajo atmósfera de N2, a una solución agitada de 1H-pirazol-3-carboxilato de metilo (90 g, 0,72 mol) en THF (1 l) se le añadió NaH (20,7 g, 0,864 mol, 60%). La mezcla resultante se calentó lentamente a ta y se agitó durante 1 h. Luego, la mezcla de la reacción se enfrió de nuevo a 0° C y se añadió gota a gota SEMCl (151,5 ml, 0,842 mol). Se continuó la agitación durante otras 2 h antes de inactivarla con NH4Cl sat. y se extrajo con acetato de etilo (3 x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. Los solventes se eliminaron al vacío para proporcionar 210 g de producto crudo que se utilizó en el paso siguiente sin purificación.
Paso B. (1-((2-(trimetilsilil) etoxi) metil) -1H-pirazol-3-il) metanol A 0° C en atmósfera de N2, a la suspensión de LAH (16,9 g, 0,44 mol) en THF (760 ml) se le añadió el 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo bruto (76 g). La mezcla resultante se calentó lentamente a ta y se agitó durante 1 hora. La mezcla de la reacción se enfrió de nuevo a 0° C y se añadieron sucesivamente H2O (15,6 ml), NaOH al 10% (15,6 ml), H2O (15,6 ml). La mezcla resultante se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con MTBE (4x). Las fracciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4.. Los solventes se eliminaron a presión reducida para proporcionar 69,4 g de producto bruto que se usó en el paso siguiente sin purificación. LC-MS: m/z 229 (M+H)+.
Paso C. 3-(yodometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol A 0° C bajo atmósfera de N2, a una solución agitada de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol (61,5 g, teóricamente 0,262 mol) en THF (310 ml) se le añadió TEA (55,42 ml, 0,393 mol) seguido de MsCl (24 ml, 0,314 mol). La reacción se calentó a ta y se agitó durante 1 hora antes de la introducción de Nal (196,5 g, 1,31 mol, en 310 ml de DMF). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora más y se inactivó con agua con hielo, se extrajo con MTBE (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con Na2S2O3 sat. y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar 77,5 g de producto bruto usado en el paso siguiente sin purificación. LC-MS: m/z 339 (M+H)+. Paso D. 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol A 0° C bajo atmósfera de N2 , a una solución agitada de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol (77,5 g, teóricamente 0,229 mol) en DMF (600 ml) se le añadió bencenosulfinato de sodio (53,5 g, 0,32 mol) y se agitó durante 1 ha 0° C. Después de calentar a ta, la mezcla de la reacción se inactivó con agua con hielo y Na2S2O3 sat., se extrajo con acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 sat. y salmuera sucesivamente, se secaron sobre Na2SO4. Los solventes se eliminaron al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 20% ~ 70% de acetato de etilo en éter de petróleo) para proporcionar 56,7 g como un aceite amarillo claro. LCMS: [M H]+ 353. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 87.85-7.77 (m, 4H), 7.62 (dd, 2H), 6.19 (d, 1H), 5.35 (d, 2H), 4.70 (d, 2H), 3.44-3.38 (m, 2H), 0.88-0.77 (m, 2H), -0.01 (s, 9H).
Ejemplo 4B. Síntesis de 6-((1H-pirazol-3-N)metM)-2-((1H-pirazol-5-M)metN)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
Figure imgf000051_0001
Paso A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una solución de 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (1,8 g, 5,1 mmol) en THF seco (30 ml) a -40° C se le añadió gota a gota LiHMDS (7,5 ml, 7,5 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, seguido de la adición de una suspensión de 4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (580 mg, 2,7 mmol) en THF seco (30 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a ta durante 1 hora más y se vertió en NH4Cl acuoso saturado enfriado con hielo (20 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (60 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, metanol al 0 ~ 2,5% en diclorometano) para dar el producto deseado (800 mg, 6 6 %). LC-MS (ESI) encontrado: 557 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 8 12.78 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.67-7.59 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.48 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.88 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H).
Paso B. 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una mezcla de 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0,8 g, 1,41 mmol) en THF (5 ml) y MeoH (10 ml) bajo N2 se le añadió gota a gota Sml2 (0,1 M/THF, 45 ml) en un baño de hielo. Después de agitar durante 10 min, la reacción se inactivó con NH4Cl acuoso saturado (50 ml) y se extrajo con EAOAc (50 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (60 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, metanol al 0~3% en diclorometano) para dar el producto deseado (310 mg, 51,0%). LC-MS encontrado: 417 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 8 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
Paso C. 3-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsi|il)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo. A una mezcla de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 0,07 mmol) y K2CO3 (25 mg, 0,18 mmol) en DMF (5,0 ml) se burbujeó con argón y se agitó a 50° C durante 1 hora. Luego se añadió 3-(bromometil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (37 mg, 0,14 mmol). Después de agitar a 50° C durante la noche bajo argón, la mezcla de la reacción se enfrió a ta y se inactivó con NH4Cl acuoso saturado (20 ml) y se extrajo con EAOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (40 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante TLC-Prep (DCM:MeOH = 15:1) para dar el producto deseado (15 mg, 35,0%). LC-MS (ESI) encontrado: 597 (M+H)+.
Paso D. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una solución de 3-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (15 mg, 0,025 mmol) en DCM (5 ml) se le añadió TFA (1 ml). La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche antes de concentrarla y purificarla mediante Pre-TLC (DCM:MeOH = 15:1) para dar el producto deseado (5 mg, 50%). LC-MS, encontrado: 367(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 8 12.80 (s, 1H), 12.65 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.71 (brs, 1H), 7.60 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).
Ejemplo 5. Síntesis de 4-metil-2-(metilsulfinil)-4,6-dihidro:5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000052_0001
A una suspensión agitada de 4-metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (1.01 g, 4,0 mmol) en DCM (20 ml) se le añadió ácido 3-cloro-benzoperoxoico (0,77 g, 3,8 mmol) a ta. La mezcla se agitó a ta durante 2 h. Luego, la mezcla se filtró, se lavó con EtOAc y se trituró con MeOH. El sólido se secó al vacío para dar 4-metil-2-(metilsulfinil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (600 mg). LCMS: m/z 269 (M+H)+. 1H NMR(400 MHz, DMSO) 812.78(s,1H), 8.64 (s,1H), 4.28 (s,3H), 3.11 (s, 3H).
Ejemplo 6. Síntesis de 4-metil-2-(metilsulfonil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000052_0002
A un Matraz de tres bocas cargado con 4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona (30 g, 0,119 mol, 1,0 eq) en DCM (600 ml) se le añadió m-CPBA (61,5 g, 3 eq) a 20° C en tres porciones. La mezcla se agitó a 30° C durante la noche, la LC-MS indicó un consumo del 100% de material de partida, se formaron 20% de E4-2 y 80% de E6-1. La mezcla se enfrió a ta, se añadió otra porción de m-CPBA (1,0 eq). La mezcla de la reacción se agitó a 30° C durante 2 h, la LC-MS indicó E4-2 (LCMS: m/z 269 (M+H)+.) <8%. La mezcla se enfrió a ta y se filtró. La torta filtrada se suspendió en MeOH (500 ml) y se agitó a ta durante 1 hora. El sólido se recogió por filtración, se lavó con acetato de etilo, se secó al vacío para proporcionar 28 g de una mezcla de 5% de E4-2 y 95% de E6-1. La mezcla (28 g) se suspendió en DMSO (600 ml), se calentó a 120° C~130° C para formar una solución transparente. Luego se enfrió a ta, precipitó un sólido. La mezcla se filtró y se secó para proporcionar 23 g de E6-1 puro, LCMS: m/z 285 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 812.87 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 4.32 (s, 3H), 3.56 (s, 3H).
Ejemplo 7. Síntesis de los compuestos E7-v y E7-viii
Figure imgf000052_0003
La sustitución aromática nucleofílica entre el compuesto E7-i y el compuesto E4-2, y/o el compuesto E6-1, da el producto intermedio E7-ii. La reducción del grupo fenilsulfonilo del compuesto E7-ii proporciona el producto intermedio E7-iii. Usando la reacción de alquilación estándar de E7-iv y el compuesto E7-iii en presencia de una base (por ejemplo, K2CO3, K3PO4, t-BuOK o Cs2CO3) se obtiene el compuesto E7-vi, en donde Xa es un grupo saliente como Cl, Br, I, OMs, OTs; An y Ar2 son cada uno independientemente heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido. El compuesto E7-vi también puede sintetizarse a partir de la reacción de Mitsunobu del compuesto E7-iii con E7-v usando cianometileno-tributilfosforano (CMBP) en tolueno.
Ejemplo 7A. Síntesis de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5Htiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
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Paso A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona A una solución de 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol (26 g, 78,86 mmol, 2,1 eq) en THF anhidro (700 ml) se le añadió LiHMDS (81,2 ml, 81,2 mmol, 1 M en THF, 2,31 eq) a -40°C. La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Luego se añadió 4-metil-2-(metilsulfonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (10 g, 35,17 mmol, 1 eq.) a la mezcla a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante otras 0,5 horas a temperatura ambiente. La reacción se vertió en una solución saturada de cloruro de amonio (500 ml) a 0° C y se extrajo con acetato de etilo dos veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron y se concentraron para dar un residuo amarillo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (diclorometano: metanol = 100:1 a 30:1) para dar 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (13 g). LC-MS ESI M/Z = 557 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 812.81 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.66 (t, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.50 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.91 (dd, 2H), 0.02 (s, 9H).
Paso B. 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una solución de 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (8 g, 14,37 mmol, 1 eq) en Th F (500 ml) y MeOH (500 ml) se le añadió Sml2 (503 ml, 50,29 mmol, 0,1 M en THF, 3,5 eq) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 0,5 horas y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo: metanol = 75:25:0 a 20:20:1) para dar 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (4,3 g). LC-MS ESI M/Z = 417 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 88.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
Ejemplo 7B. Síntesis de 6-((1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-carbaldehído: Se lavó una muestra de NaH con hexano (2x10 ml) bajo N2. El matraz se cargó con DMF seca (20 ml) y se añadió 1H-imidazol-2-carbaldehído (500 mg, 5,2 mmol) en pequeñas porciones. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1,5 h, se añadió gota a gota SEMCl (864 mg, 5,2 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 30 min. La mezcla de la reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 , se concentró a presión reducida para proporcionar el 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-carbaldehído bruto (800 mg). LCMS: 227 (M+H)+.
Paso B. (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metanol: A una mezcla agitada de 1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-carbaldehído (1,6 g, 7 mmol) en THF (20 ml) se le añadió, NaBH4 (1,34 g, 35 mmol) a 0° C. La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 30 min. La mezcla de la reacción se vertió en NH4Cl ac. y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida para proporcionar el (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metanol bruto (1,3 g). Paso C. 2-(clorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol: A una mezcla agitada de (1-((2-(trimetbilsilil)etboxi)metbil)-1H-imidazol-2-il)metbanol (400 mg, 1,75 mmol) en DCM (20 ml) se añadieron NCS (466 mg, 3,5 mmol) y PPh3 (920 mg, 3,5 mmol) a ta. La mezcla se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de la reacción se vertió en agua y se extrajo con DCM. La mezcla se lavó con agua y la capa orgánica se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante Pre-TLC (PE: EtOAc = 1:1) para proporcionar 2- (clorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol. LCMS: 247 (M+H)+. A una mezcla agitada de 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,12 mmol) en DMF seca (5 ml) se le añadió K2CO3 (66 mg, 0,48 mmol) a 60° C bajo N2. Después de 20 min, se añadió el compuesto E7-2 (60 mg, 0,24 mmol) en DMF seca (2 ml) a 60°C bajo N2. La mezcla se agitó a 60° C durante 1,5 h bajo N2. La mezcla de la reacción se enfrió a ta y se ajustó a pH = 5-6 con HCl ac. 0,5 N. Luego, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida y se purificó por TLC-Prep (PE: EtOAc = 1:1,5) para proporcionar 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (25 mg). LCMS: 627 (M+H)+. Se agitó una mezcla de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (25 mg, 0,04 mmol) en Dc M/TfA (2 ml/2 ml) a ta durante 1 hora. La mezcla de la reacción se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar el producto deseado (1,3 mg). LCMS: 367 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.51 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 6.9 (s, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).
Los siguientes compuestos se sintetizaron de acuerdo con el Esquema E7 y el procedimiento del Ejemplo 7A-7B usando el material de partida apropiado. Cuando es necesario se usan métodos estándar de protección y desprotección.
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Ejemplo 8. Síntesis de los compuestos E8-v, E8-vi y E8-viii Esquema E8
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El compuesto E8 -i puede convertirse en el producto intermedio E8 -ii mediante alquilación o reacción de Mitsunobu similar al Ejemplo E7-iii a E7-vi (vere la ruta (i) en el Esquema E8 ). La oxidación de E8 -ii con mCPBA u oxona genera los compuestos E8 -v y/o E8 -vi. Ambos compuestos de E8 -v y E8 -vi también pueden formarse a partir de E8 -i mediante oxidación primero seguido de alquilación o reacción de Mitsumobu (ver la ruta (ii) en el Esquema E8 ). En donde Xa es un grupo saliente (por ejemplo, Cl, Br, I, OMs, OT); el compuesto E8 -vy/o E8 -vi puede convertirse en el producto intermedio E8 -vii mediante una reacción de sustitución aromática nucleofílica con el compuesto E8 -xi, usando o una base como LiHMDS o t-BuOK. El compuesto E8 -viii puede sintetizarse a partir del compuesto E8 -vii usando o Smh o Zn en AcOH, o TES en AlCh. Como se usa en la presente, Ar1 y Ar2 son cada uno independientemente, heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido.
Ejemplo 8A. Síntesis de 2-((1H-pirazol-3-N)metN)-6-((6-ammopiridm-2-N)metM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona y 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A N-[(terc-butoxi)carboml]-N-[6-({4-metanosulfoml-7-metN-9-oxo-3-tia-5,7,10,11-tetraazatriciclo[6.40,0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-M}metM)piridm-2-N]carbamato de terc-butilo Se agitó una mezcla de 4-metil-2-(metilsulfonilo)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (7,5 g, 26,4 mmol) y K3PO4 (8,3 g, 39,3 mmol) en MeCN anhidro (300 ml) a 70° C durante 1 hora bajo N2. A continuación, se añadió una solución de N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-(bromometil)piridin-2-il]carbamato de terc-butilo (11,2 g, 29,0 mmol) en MeCN (30 ml). Después se agitar a 70° C durante 2,5 horas bajo N2, la mezcla de la reacción se inactivó con NH4Cl sat. y se extrajo con EA (300 ml X 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y la fase orgánica se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 0~50% en éter de petróleo) para dar N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-({4-metanosulfonil-7-metil-9-oxo-3-tia-5,7,10,11-tetraazatriciclo[6.4.0.0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il}metil)piridin-2-il]carbamato de terc-butilo (5,5 g). LC-MS (ESI) encontrado: 591.1 (M+H)+.
Paso B. (6-((4-metN-5-oxo-2-((fenMsulfonM)(1-((2-(trimetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-M)metM)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo. A una mezcla agitada de 3-((fenilsulfonil)metil)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazol (11,9 g, 33,8 mmol) en THF anhidro (200 ml) se le añadió LiHMDS (50 ml, 1 M en THF) a -40° C bajo argón. Después de 10 min, la mezcla se calentó a 10° C y se agitó durante 1 h, luego se añadió N-[(terc-butoxi)carbonil]-N-[6-({4-metanosulfonil-7-metil-9-oxo-3-tia-5,7,10,11-tetraazatriciclo[6.4.0.0{2,6}]dodeca-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il}metil)piridin-2-il]carbamato de terc-butilo (9,1 g, 15,4 mmol en 35 ml de THF). La reacción se agitó a 10° C durante otros 30 min. La mezcla de la reacción se vertió en NH4Cl ac., se extrajo con EtOAc (200 ml X 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 0~50% en éter de petróleo) para dar (6-((4-metil-5-oxo-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (6 , 6 g). LC-MS (ESI) encontrado: 763.2 (M+H)+.
Paso C. (6-((4-metN-5-oxo-2-((1-((2-(trimetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-M)metM)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo Una solución de (6 -((4-metil-5-oxo-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (6,0 g, 7,86 mmol) en EtOH/AcOH (35 ml/50 ml) se calentó hasta 50° C con agitación vigorosa en presencia de Zn (2,55 g, 117,9 mmol) durante 40 min. Se añadió zinc adicional cada 40 min (2,55 g, dos veces, monitorizar la reacción por TLC/LC-MS para evitar el subproducto y el producto sobrereducido). La solución se filtró y la torta del filtro se lavó con DCM. El filtrado se evaporó parcialmente, se neutralizó con NaHCO3 saturado, se secó sobre MgSO4 y el solvente se eliminó al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, DCM: MeOH = 40:1) para dar (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metii)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (3,1 g). LC-MS (ESI) encontrado: 623.3 (M+H)+.
Paso D. 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil))etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (3,0 g, 4,8 mmol) en etanol (30 ml) se le añadió HCl (30 ml, 4 M en dioxano). La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 40 min. La mezcla de la reacción se enfrió a ta, se filtró y el sólido se recogió, se suspendió en agua y se neutralizó con NaHCO3 acuoso a 10° C. Se filtró para dar el compuesto deseado 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,5 g). LC-MS (ESl) encontrado: 393.2 (M+H)+. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) 8 12.78 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.72(s, 1H), 7.25 (dd, 1H), 6.33 -6.24 (m, 2H), 6.08 (d, 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).
Paso E. Síntesis de (6-((4-metil-5-oxo-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo A una solución de (6-((4-metil-5-oxo-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo ( 1 0 0 mg, 0,16 mmol) en DMF ( 2 ml) se le añadió K2CO3 ( 8 8 mg, 0,64 mmol). La mezcla se agitó a 70° C durante 8 h. La mezcla se vertió en agua, el precipitado se recogió por filtración y se purificó por pre-TLC (MeOH al 2% en DCM) para producir (6-((4-metil-5-oxo-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)carbamato de terc-butilo (20 mg). LC-MS (ESl): m/z 637 (M+H)+.
Paso F. Síntesis de 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una solución de (6-((4-metil-5-oxo-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-ilo)carbamato de terc-butilo (20 mg, 0,03 mmol) en EtOH (1 ml) se le añadió HCl (1 ml, 4 mol/l en dioxano). La mezcla se agitó a 80° C durante 1 hora y se enfrió. El precipitado se recogió por filtración y se neutralizó con NaHCO3 sat., se lavó con agua y se secó para proporcionar 5 mg de 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-carbonil)4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESl): m/z 407 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 8 : 8.75 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31-7.22 (m, 1H), 6.31 (d, 1H), 6.14 (d, 1H), 5.91 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).
Ejemplo 8B. Síntesis de 6-((1H-pirazol-3-M)metM)-2-((6-(dimetNammo)piridm-2-N)metN)-4-metM-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
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Ejemplo 9. Síntesis de los compuestos E9-vi y E9-vii
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El compuesto E9-iv puede sintetizarse mediante dos enfoques, (i) y (ii) en el Esquema 9. Para el enfoque (i), el compuesto E9-ii puede sintetizarse a partir del compuesto E9-i mediante una reacción de alquilación como se muestra en el Ejemplo 7 o en el Ejemplo 8. Como se usa en la presente, Xa es un grupo saliente. La reacción de formilación del compuesto E9-ii con LiHMDS y DMF proporciona el producto intermedio E9-iii. E9-iii reacciona con un agente reductor (por ejemplo, NaBH4) para proporcionar el compuesto E9-iv. Alternativamente, en el enfoque (ii), la halogenación del compuesto E9-i genera el compuesto E9-ix. El compuesto E9-ix experimenta una reacción de Stille, ozonólisis y reducción para producir el compuesto E9-x. El compuesto E9-x puede alquilarse con E9-viii para proporcionar el compuesto E9-iv. En el esquema 9, (iii), el compuesto E9-iv experimenta halogenación para dar el producto intermedio E9-v (Xb es halógeno como Cl o Br). Un acoplamiento catalizado por metal (por ejemplo, Pd o Cu) de E9-v con estaño orgánico, boro, zinc o magnesio proporciona el compuesto E9-vi. Como se usa en la presente, M es un complejo de metal orgánico (por ejemplo, complejo de organoboro como ácido borónico o complejo de pinaco-boro, complejo de organoestaño como -Sn(Bu%; complejo de organozinc como -Zn(halógeno)); El compuesto E9-v también puede reaccionar con algunos nucleófilos como el nitrógeno en un heterociclo para dar el producto E9-vii. Como se usa en la presente, An y Ar2 son cada uno de ellos opcionalmente heteroarilo de 5 o 6 miembros independientemente sustituido, Xa es un grupo saliente (por ejemplo, Br, I, OMs u OT); y Xb es halógeno.
Ejemplo 9A. Síntesis de 6-((1H-mdazol-4-M)metM)-4-metN-2-(tiazol-4-NmetN)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirroto[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. Síntesis de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2-(trimetNsilN)etoxi)metN)-1H-mdazol-4-N)metN)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído. A una mezcla de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (2,6 g, 5,57 mmol, 1 eq) en Th F seco (30 ml) se añadió LiHMDS (1 M, 11,14 ml, 2,0 eq) a -78° C. La mezcla se agitó a -78°C durante 2 h. Luego, se añadió gota a gota DMF (2,04 g, 27,86 mmol, 2,14 ml, 5,0 eq) a la mezcla anterior. La mezcla se agitó a -78° C durante 2 h. La TLC (PE:EA = 2: 1, UV = 254 nm) mostró que se había formado una nueva mancha principal. La mezcla se vertió enNH4Cl sat. frío (20 ml). Luego, la mezcla se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se extrajo con EtOAc (40 ml x 3). La capa orgánica se lavó con agua (20 ml x 3) y se concentró al vacío para dar el producto deseado (2,6 g, bruto). LCMS: m/z 495,2 [M+H]+
Paso B. Síntesis de 2- (hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una mezcla de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído (l,0 g, 2,o2 mmol, 1 eq) en THF (10 ml) y MeOH (10 ml) se le añadió NaBH4 (152,97 mg, 4,04 mmol, 2 eq). La mezcla se agitó a 30° C durante 14 h. La TLC (dCm : MeOH = 10: 1, UV = 254 nm) mostró que el material de partida se había consumido por completo y se formó una nueva mancha principal. La reacción se inactivó mediante la adición de agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml). La fase orgánica se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (ISCO®; columna ultrarrápida SepaFlash® de 40 g de sílice, eluyente de MeOH al 0-5%/DCM a 30 ml/min). El eluyente se concentró al vacío para dar el producto deseado (382 mg). LCMS: m/z 497.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 8.61 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.36 (t, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.68 (s, 2H), 4.89 (d, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.50 (t, 2H), 0.78 (t, 2H), -0.12 (s, 9H).
Paso C. Síntesis de 2-(dorometM)-4-metN-6-((1-((2-(trimetNsiMl)etoxi)metN)-1H-mdazol-4-M)metM)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una mezcla de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (150,0 mg, 302,02 umol, 1 eq) y Et3N (61,12 mg, 604,04 umol, 84,08 ul, 2,0 eq) en dCm (5 ml) se le añadió cloruro de 4-metilbencenosulfonilo (75,0 mg, 393,40 umol, 1,30 eq). La mezcla se agitó a 30°C durante 5 h. La TLC (PE:EA = 4:1, UV = 254 nm) mostró que el material de partida se había consumido por completo. Se añadió agua (10 ml) y DCM (20 ml) a la mezcla. Las capas orgánicas se concentraron al vacío para dar una goma amarilla (0,1 g). El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (ISCO®; columna ultrarrápida de sílice SepaFlash® de 4 g, eluyente de un gradiente de acetato de etilo al 0~20%/éter de petróleo a 30 ml/min). La fracción deseada se concentró al vacío para dar el producto deseado (40,0 mg, 76,88 umol). LCMS: m/z 515.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 8 ppm 8.27 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (dd, 1 H), 7.25 (s, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.40 (s, 3H), 3.50-3.57 (m, 2H), 0.84-0.90 (m, 2H), -0.09 to -0.06 (m, 9H).
Paso D. Síntesis de 4-metN-2-(tiazol-4-NmetM)-6-((1-((2-(trimetMsiMl)etoxi)metN)-1H-mdazol-4-M)metM)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una solución de 2-(clorometil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,97 mmol) y 4-(tributilestanil)tiazol (114 mg, 2,91 mmol) en tolueno (4 ml) se le añadió Pd(PPh3)4 (402 mg, 2,91 mmol). Luego, la mezcla se calentó en un reactor de MW a 120° C durante 30 min bajo N2. La solución se vertió en agua y se extrajo con EtOAc, se secó sobre Na2SO4anhidro. La capa orgánica se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 0~50% en éter de petróleo) para dar 4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-6-((1-((2-(trimetilsilil))etoxi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg). LCMS: 564 (M+H)+.
Paso E. Síntesis de 6-((1H-mdazol-4-M)metN)-4-metN-2-(tiazol-4-NmetM)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una mezcla de compuesto E9-4 (30 mg, 0,05 mmol) en DCM (3 ml) a ta bajo N2 se le añadió TFA (3 ml). La mezcla de la reacción se agitó a ta durante 1 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep (C18, 0~90% de acetonitrilo en H2O con 0,1% de ácido fórmico) para dar el producto deseado (3,9 mg,). lCm S: 434 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO) 8 13.12 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).
Ejemplo 9B. Síntesis de 4-metN-2-(piridm-2-NmetM)-6-(piridm-3-NmetN)-4H-tiazolo[5',4:4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. Síntesis de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazoto[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A -78° C, a una mezcla de 4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (640 mg, 2,15 mmol) en THF (10 ml) se le añadió LiHMDS (4,3 ml, 1 M en t Hf ). Después de 30 min, se añadió DMF seco (0,84 ml, 10,8 mmol) a la mezcla. Después del consumo completo del material de partida, se añadió una mezcla de NaBH4 (164 mg, 4,3 mmol) en EtOH (4 ml) y se agitó durante 5 min. Luego, la mezcla se vertió en NH4Cl sat., se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, MeOH al 0-5% en DCM) para proprocionar 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (220 mg). LC-MS (ESI): m/z 328 (M+H)+.
Paso B. Síntesis de 2-(clorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona ( 1 0 0 mg, 0,31 mmol) en DCM (5 ml) se le añadieron Et3N (0,43 ml, 3,1 mmol) y MsCl (0 , 12 ml, 1,5 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Luego, la mezcla se lavó con NH4Cl sat. (ac.), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 0-50% en PE) para proporcionar 65 mg de 2-(clorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4Htiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 346 (M+H)+.
Paso C. Síntesis de 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Bajo nitrógeno, a una mezcla de 2-(dorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0,14 mmol) y 2-(tributilestanii)piridina (0,14 ml, 0,43 mmol) en tolueno (3 ml) se le añadió Pd(PPh3)4 (17 mg, 0,014 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante la noche. Luego, la mezcla se enfrió, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por TLC-Prep (eluyente: MeOH al 10% en DCM) para proporcionar 2 mg de 4-metM-2-(piridin-2-MmetM)-6-(piridin-3-MmetM)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 389 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 8 8.56 (m, 3H), 8.48 (dd, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.25 (s, 3H).
Ejemplo 9C. Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazoM-M)metN)-6-((1H-pirazol-3-N)metM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona y 6-((1H-pirazol-3-N)metN)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-M)metN)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. Síntesis de 1-((2-(trimetNsNN)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbaldehído. A una suspensión de 1H-pirazol-3-carbaldehído (10,0 g, 104,07 mmol, 1 eq) y DIp Ea (33,63 g, 260,18 mmol, 45,32 ml, 2,5 eq) en DCM (500 ml) se añadió gota a gota 2-(dorometoxi)etN-trimetN-silano (26,03 g, 156,11 mmol, 27,63 ml, 1,5 eq) a -40° C. Luego, la mezcla de la reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 5:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo y se formaron dos nuevas manchas. La mezcla de la reacción se concentró al vacío. El residuo se combinó con otros 2 lotes (10,0 g cada uno) y se purificó mediante Combiflash (del 100% de éter de petróleo al 40% de EtOAc en éter de petróleo) para dar el producto deseado 60,0 g. (nota: mezcla de 2 regioisómeros con una relación ~5/4). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 8 ppm 10.06 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.56 (s, 2H), 3.61-3.67 (m, 4H), 0.91-1.01 (m, 4H), -0.09-0.05 (m, 18H).
Paso B. Síntesis de (1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanol. A una solución de 1-((2-(trimetNsNN)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-carbaldehído (30 g, 132,54 mmol, 1 eq, mezcla de 2 regioisómeros con una relación -5/4) en Th F (200 ml)/MeOH (100 ml) se añadió NaBH4 (7,52 g, 198,81 mmol, 1,50 eq) en porciones a 0° C, la mezcla de la reacción se agitó a 0° C a temperatura ambiente durante 18 hr. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 2:1) mostró que los materiales de partida se habían consumido por completo y se formaron dos nuevas manchas. El solvente se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante Combiflash (100% de éter de petróleo al 100% de EtOAc) para dar 25 g del producto deseado. (Nota: mezcla de 2 regioisómeros relación ~3/2). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 8 ppm 7.55 (d, 1H), 7.47 (brs, 1H), 6.36 (d, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.74-4.76 (m, 4H), 3.55-3.60 (m, 4H), 0.85-0.96 (m, 4H), 0.00-0.06 (m, 18H).
Paso C. Síntesis de 3-(bromometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol. A una solución de (1-((2-(trimetNsNN)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-N)metanol (23 g, 100,72 mmol, 1 eq, mezcla de 2 regioisómeros relación -3/2) y PPh3 (36,98 g, 141,00 mmol, 1,4 eq) en Dc M (200 ml) se le añadió CBr4 (46,76 g, 141,00 mmol, 1,4 eq) a 0°C y la mezcla de la reacción se agitó a 0°C durante 3 h. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 5:1) mostró que los materiales de partida se habían consumido por completo y se formó una nueva mancha. La mezcla de la reacción se concentró al vacío. El residuo se combinó con otro lote (2,0 g) y se purificó mediante Combiflash (del 100% de éter de petróleo al 50% de EtOAc en éter de petróleo) para dar el producto deseado 22,0 g (75,53 mmol). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 8 ppm 7.51 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.52­ 3.57 (m, 2H), 0.86-0.96 (m, 2H), - 0.03-0.02 (m, 9H).
Paso D. Síntesis de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Se agitó una suspensión de 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona(1,0g,4,85mmol,1eq),3-(bromometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)1H-pirazol (2,12 g, 7,27 mmol, 1,5 eq), K3PO4 (2,57 g, 12,12 mmol, 2,5 eq) y Nal (218,05 mg, 1,45 mmol, 0,3 eq) en DMF (15 ml) a 60° C durante 18 h bajo N2. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo y se formó una nueva mancha. La mezcla de la reacción se combinó con otros 3 lotes (1,0 g cada uno) y se vertió en agua con hielo (250 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (120 ml x 2), salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El solvente se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante combiflash (del 100% de éter de petróleo al 80% de EtOA en éter de petróleo) para dar el producto deseado (3,6 g). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 6 ppm 8.91 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.40 (m, 2H), 4.45 (s, 3 H), 3.52-3.58 (m, 2H), 0.85-0.90 (m, 2H), -0.05 (s, 9H).
Paso E. Síntesis de 4-metM-5-oxo-6-((1-((2-(tnmetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-M)metM)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído. Bajo argón, a una solución de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,7 g, 4,09 mmol, 1 eq) en THF (30 ml) se le añadió lentamente LiHMDS (1,0 M, 8,18 ml, 2 eq) a -78°C, la mezcla de la reacción se agitó a -70° C durante 1 hora. Luego se añadió gota a gota a la mezcla una solución de DMF (1,49 g, 20,45 mmol, 1,57 ml, 5 eq) en THF (3 ml). La mezcla resultante se agitó a -70° C durante 1 h. La TLC (éter de petróleo:EtOAc =1:1) mostró que se había formado una nueva mancha. La mezcla de la reacción se añadió gota a gota a NH4Cl ac. (50 ml) a 0°C, luego la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El solvente se eliminó al vacío para proporcionar el producto deseado en bruto (1,8 g) que se usó para el paso siguiente sin purificación adicional. Paso F. Síntesis de 2-(hidroximetM)-4-metN-6-((1-((2-(tnmetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-M)metM)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una solución de 4-metil-5-oxo-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído (1 , 8 g, 3,24 mmol, 1 eq) en THF (20 ml) MeOH (10 ml) se le añadió NaBH4 (245,08 mg, 6,48 mmol, 2 eq) a 0° C y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:2) mostró que el material de partida se había consumido por completo y se formó una nueva mancha. La mezcla de la reacción se concentró al vacío, el residuo se purificó mediante combiflash (del 100% de DCM al 5% de MeOH en DCM). Se obtuvo el producto deseado (1,1 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 6 ppm 8.63 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 6.44 (t, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.40-5.42 (m, 4H), 4.98 (d, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.55-3.61 (m, 2H), 0.86-0.91 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
Paso G. Síntesis de metanosulfonato de (4-metN-5-oxo-6-((1-((2-(tnmetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-2-il)metilo. A una solución de 2-(hidroximetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (700 mg, 1,57 mmol, 1 eq) y EtsN (317,21 mg, 3,13 mmol, 436,33 ul, 2,0 eq) en DCM (15 ml) se le añadió gota a gota MsCl (269,32 mg, 2,35 mmol, 181,97 ul, 1,5 eq) a 0° C y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:1) mostró que el material de partida se había consumido por completo y se había formado una nueva mancha. La mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc (80 ml) y se lavó con agua (30 ml x 4), salmuera (40 ml) y se secó sobre Na2SO4. El solvente se eliminó al vacío para proporcionar un producto bruto (700 mg). LCMS: (m/z 525.5(M+H).
Paso H. Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-M)metN)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]pirídazin-5(6H)-ona y 2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Se agitó una mezcla de metanosulfonato de (4-metil-5-oxo-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-2-il)metilo (150 mg, 285,88 umol, 1 eq) 1H-1,2,4-triazol (197,45 mg, 2,86 mmol, 10 eq) y CsF (86,85 mg, 571,77 umol, 21,08 ul, 2 eq) en MeCN (8 ml) a 60° C bajo N2 durante 18 h. La LCMS mostró que el material de partida se había consumido por completo y se formaron dos nuevos picos. La mezcla de la reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante Combiflash (del 100% de DCM al 8% de MeOH en DCM). Se obtuvieron el producto 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (55 mg) y 2-((4h-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg).
Paso I. Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una suspensión de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (55 mg, 110,52 umol, 1 eq) y HCl/dioxano (4 M, 1 ml, 36,19 eq) en DCM (3 ml) se le añadió H2O (1,99 mg, 110,52 umol, 0,05 ml, 1 eq) y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La LCMS mostró que el material de partida se había consumido por completo y se encontró el 84% del producto deseado. La mezcla de la reacción se concentró al vacío , y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para dar el producto deseado (24,1 mg, 65,60 umol, 59,35% de rendimiento). Columna: Xtimate C18 150*25 mm*5 um, fase móvil:
[agua (0,225% FA) -ACN]; B%: 13% -43%, 11,2 min. LCMS: m/z 367.9(M+H)+ 1H NMR (400 MHz, METANOL-d 4) 6 ppm 8.72 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.52 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.30 (s, 3H).
Paso J. Síntesis de 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una suspensión de 2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 60,28 umol, 1 eq) y HCl/dioxano (4 M, 1 ml, 66,35 eq) en DCM (3 ml) se le añadió H2O (50,00 mg, 2,78 mmol, 0,05 ml, 46,04 eq) y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La LCMS mostró que el material de partida se había consumido por completo, se encontró el producto deseado. La mezcla de la reacción se concentró al vacío, y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para dar el producto deseado (2,1 mg, 5,72 umol). Columna: Xtimate C18 150*25 mm*5um; fase móvil: [agua (0,225% FA)-ACN]; B%: 13% -43%, 11,2 min. LCMS: m/z 368.0(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) 8 ppm 8.74 (s, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.31 (s, 3H).
Los siguientes compuestos se sintetizaron de acuerdo con el Esquema E9 y el procedimiento de los Ejemplos 9A-9B usando el material de partida apropiado. Cuando sea necesario puede usarse protección y desprotección estándar.
Figure imgf000089_0001
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Ejemplo 9D Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazoM-M)metM)-6-((2-ammopirimidm-4-N)metM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. Síntesis de 2-cloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (3 g, 14,5 mmol) en THF seco (80 ml) se le añadió LiHMDS (30,5 ml) a -65° C gota a gota. Después de agitar durante 1 hora, se añadió una solución de hexacloroetano (1,8 ml, 16 mmol) en THF seco (20 ml). La mezcla de la reacción se elevó a -20° C durante 3 horas. Luego, la mezcla se inactivó con NH4Cl sat. y se agitó a ta durante 20 min. El precipitado se recogió por filtración y se lavó con EtOAc para dar 3,5 g de 2-cloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 241 (M+H)+.
Paso B. Síntesis de 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Bajo nitrógeno, a una mezcla de 2-cloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1,5 g, 6,2 mmol) y tributil(etenil)estannano (5,5 ml, 18,7 mmol) en Dm F (30 ml) se le añadió Pd(PPh3)4 (0,36 g, 0,31 mmol). La mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante 2 h. Luego, la mezcla se enfrió y se diluyó con EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, MeOH al 0~10% en DCM) para dar 1,4 g de 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 233 (M+H)+.
Paso C. Síntesis de 4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído Por debajo de -60° C, una mezcla de 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (500 mg, 2,15 mmol) en DCM/MeCN (500 ml, 1:1 en volumen) se purgó con O3 durante 20 min. Luego, la reacción se inactivó con dimetilsolfano y se concentró para dar 500 mg de 4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d].piridazina-2-carbaldehído. LC-MS (ESI): m/z 235 (M+H)+.
Paso D. Síntesis de 2-(hidroximetN)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazm-5(6H)-ona A una mezcla de 4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbaldehído (500 mg, 2,13 mmol) en EtOH (3 ml) se añadió NaBH4 (81 mg, 2,13 mmol) a 0° C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. Luego, la mezcla se vertió en NH4Cl sat., se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, MeOH al 0~8% en DCM) para dar 120 mg de 2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 237 (M+H)+.
Paso E. Síntesis de 6-((2-cloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de 2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona ( 20 0 mg, 0,85 mmol) en DMF ( 8 ml) se le añadió K2CO3 (351 mg, 2,54 mmol). Después de agitar a 60°C durante 30 min, se añadió una solución de 2-cloro-4-(clorometil)pirimidina (276 mg, 1,7 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla de la reacción se agitó durante otras 4 horas y se vertió en NH4Cl sat., se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, MeOH al 0~8% en DCM) para dar 160 mg de 6-((2-cloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 363 (M+H)+.
Paso F. Síntesis de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencM)ammo)pirimidm-4-M)metM)-2-(hidroximetM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de 6-((2-cloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (160 mg, 0,44 mmol) en MeCN (5 ml) se le añadió bis(2,4-dimetoxibencil)amina (280 mg, 0,88 mmol) y AcOH (1 gota). La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante la noche. La mezcla de la reacción se evaporó y el residuo se purificó mediante TLC-Prep (eluyente: MeOH al 5% en DCM) para dar 75 mg de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-ilo)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 644 (M+H)+.
Paso G. Síntesis de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(dorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Por debajo de 0° C, a una solución de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hidroximetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (75 mg, 0 , 12 mmol) en DCM (5 ml) se le añadió Et3N (0,16 ml, 1,16 mmol) y MsCl (0,05 ml, 0,58 mmol). La mezcla se agitó a ta durante la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con DCM, se lavó con NH4Cl sat. y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró para dar 70 mg de producto bruto de 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(clorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 662 (M+H)+.
Paso H. Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazoM-M)metN)-6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencM)ammo)pirimidm-4-M)metMo)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Se agitó una mezcla de 4H-1,2,4-triazol (39 mg, 0,57 mmol) y K2CO3 (78 mg, 0,57 mmol) en DMF (3 ml) a 60° C durante 30 min. Se añadió 6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(clorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (75 mg, 0,11 mmol) y se agitó durante otros 30 min. La suspensión se vertió en NH4Cl sat., se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, DCM al 0~10% en MeOH) para dar 60 mg de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 695 (M+H)+.
Paso G. Síntesis de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona A una mezcla de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis(2,4-dimetoxibencil)amino)pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 0,043 mmol) en EtOH (2 ml) se le añadió HCl (0,5 ml, 4 M en dioxano). La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante la noche. Luego, la mezcla se enfrió y se vertió en NaHCO3 sat., se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para dar 8 mg de 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) 6 8.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.12-8.10 (m, 2H), 6.60 (s, 2H), 6.19 (d, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).
Figure imgf000091_0001
Ejemplo 10. Síntesis de compuestos E10-ii
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La reacción de E10-i con LiHMDS y un aldehido genera el compuesto E10-ii, que puede separarse con HPLC quiral o SFC para dar dos enantiómeros. Como se usa en la presente, An y Ar2 son cada uno independientemente heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido.
Ejemplo 10A. Síntesis de (R)-6-((1H-pirazol-3-M)metM)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-M)metM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona y (S)-6-((1H-pirazol-3-M)metN)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-M)metM)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
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Paso A. Síntesis de 2-(hidroxi(1-((2-(trimetNsilM)etoxi)metM)-1H-pirazol-3-M)metM)-4-metN-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5,4:4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Bajo argón, a una solución de 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0,5 g, 1,20 mmol, 1 eq) en THF (10 ml) se le añadió lentamente LiHMDS (1,0 M, 2,41 ml, 2 eq) a -78° C, y la mezcla de la reacción se agitó a -70° C durante 1 hora. Luego, se añadió a la mezcla de la reacción una solución de 1 -(2-trimetilsiiiietoximetil) pirazol-3-carbaldehído (816,97 mg, 3,61 mmol, 3 eq) en THF (1 ml). La mezcla resultante se agitó a -70° C durante 1 hora. La TLC (éter de petróleo:EtOAc = 1:1) mostró que se habían formado dos nuevas manchas. La mezcla de la reacción se inactivó con NH4Cl ac. (5 ml) a -70° C, y luego se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc ( 8 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El solvente se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante Combiflash (del 100% de éter de petróleo al 100% de EtOAc) para dar un producto bruto (130 mg) en forma de goma de color marrón pálido, que se usó para la paso siguiente sin purificación adicional. LCMS: m/z 643,2 [M+H]+
Paso B. Síntesis de 6-((1H-pirazol-3-N)metM)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-M)metM)-4-metN-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. A una solución de 2-(hidroxi(1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil))etoxi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0,13 g, 202,20 umol, 1 eq) en DCM ( 8 ml) se le añadió TFA (4,62 g, 40,52 mmol, 3 ml, 200,38 eq), seguido de H2O (500,00 mg, 27,75 mmol, 0,5 ml, 137,26 eq), luego la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, luego se calentó a 40° C durante 18 h. La LCMS mostró que el material de partida se había consumido por completo. La mezcla de la reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante Prep-HPLC para dar el producto deseado (20,5 mg). LCMS: m/z 382.9 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 ppm 12.72 (brs, 1H), 12.61 (brs, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.56-7.62 (m, 2H), 6.82 (brs, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.99-6.09 (m, 2H), 5.24-5.32 (m, 2H), 4.19 (s; 3H).
Paso C. Síntesis de (R) -6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona y (S)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H)-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. El compuesto 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona se separó por SFC. Condición de SFC: la columna es DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250 mm*30 mm, 5um); fase móvil: A: 55% de CO2; B: 45% [0,1% de NH3H2O en EtOH]/min. La separación de SFC proporcionó 2-[(R)-hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona y 2-[(S)-hidroxi(1H-pirazol-3-il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona. Un isómero (4,4 mg): LCMS: m/z 383 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) 8 ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (brs, 1H), 7.55 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.25 (brs, 1H), 6.18 (brs, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H). Otro isómero (4,1 mg): LCMS: m/z 383 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) 8 ppm 8.40 (s, 1H), 7.59 (brs, 1H), 7.54 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.26 (brs, 1 H), 6.19 (brs, 1 H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H).
empo : n ess e - -prazo- - me - - uoro -prazo- - me - -me - , - ro- -tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000093_0001
Paso A. 3- (6-((1-(N,N-dimetNsulfamoN)-1H-pirazol-3-M)metN)-4-metN-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A una mezcla de 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)(hidroxi)metil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 83,80 umol, elaborado de manera similar a E10-1) en DCM (1,5 ml) se le añadió MnO2 (72.85 mg, 838,00 umol) y la mezcla se agitó a 15° C durante 1,5 horas. La mezcla de la reacción se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto bruto (60 mg, bruto). LCMS: m/z 595.1 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 6 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.49 (s, 3H), 3.10 (s, 6 H) 2.93 (s, 6 H).
Paso B. 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)difluorometil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A una solución de 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (240 mg, 403,60 umol) en DCE (4 ml) se le añadió bAsT (1,34 g, 6,05 mmol, 1,33 ml) y la mezcla se agitó a 50° C durante 12 h. La mezcla de la reacción se diluyó con diclorometano ( 20 ml) y se lavó con NaHCO3 saturado ( 10 ml x 2 ), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto bruto (300 mg, bruto) que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. LCMS: m/z 617,1 (M+H)+.
Paso C. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(difluoro(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una mezcla de 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)difluorometil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (240 mg, 163,47 umol) en DCM (2 ml) se le añadió TFA (2,07 g, 18,15 mmol, 1,34 ml) y la mezcla se calentó a 50° C durante 5 h. La reacción de la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Agela ASB 150*25 mm*5 um; fase móvil: [agua (0,05% de HCl) -ACN]; B%: 30%-60%, 8 min) para dar el producto deseado (3,9 mg, 5,45% de rendimiento, 92% de pureza) como un sólido blanco. LCMS: m/z 403.1 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.67 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.28 (s, 3H).
Ejemplo 10C: Síntesis de 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000093_0002
Paso A: 3-((2-(1-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)-1-hidroxietil)-4-metil-5-oxo-4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida. A una solución de 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (160 mg, 269,07 umol) en THF (3 ml) se le añadió CH3MgBr (3 M, 179,38 ul) y la mezcla de la reacción se agitó a 0° C durante 3 h. La mezcla de la reacción se vertió en NH4Cl saturado (10 ml) a 0° C, se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (ISCO®; columna ultrarrápida de sílice SepaFlash® de 12 g, eluyente de gradiente de acetato de etilo al 0~90%/éter de petróleo a 40 ml/min) para dar el producto deseado (50 mg, 81,87 umol). LCMS: m/z 611,1 (M+H)+.
Paso B: 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona. A una mezcla de 3-((2-(1-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)-1-hidroxietil)-4-metil-5-oxo 4,5-dihidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 81,87 umol) en DCE (0,5 ml) se le añadió Et3SiH (19,o4 mg, 163,75 umol, 26,15 ul) a 0° C, seguido de TFA (1,54 g, 13,51 mmol, 1 ml, 164,96 eq) y se agitó a 0° C durante 1 h. La mezcla se calentó hasta 50° C durante otra hora. La reacción de la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna: Agela ASB 150*25 mm*5 um; fase móvil: [agua (HCl al 0,05%)-ACN]; B%: 25% -55%, 7 min) para dar 7,0 mg de producto deseado. LCMS: m/z 381.2 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8.46 (s, 1H), 8.15 (d, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.33 (s, 3H), 1.94 (d, 3H).
Ejemplo 10D: Síntesis de 6-((1H-pirazol-3-M)metN)-4-metN-2-(1H-pirazol-3-carbonN)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazin-5-ona
Figure imgf000094_0001
Paso A. 4-metM-2-(1H-pirazol-3-carbonM)-6-(1H-pirazol-3-MmetM)tiazolo[3,4]pirrolo[1,3-d]piridazin-5-ona. A una solución de 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-oxo-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirrolo[2,3-d]piridazina-2-carbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 84,08 umol) en DCE (1,5 ml) se le añadió TFA (2,31 g, 20,26 mmol, 1,5 ml) y la mezcla de la reacción se calentó hasta 50° C durante 12 h. La mezcla de la reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para dar 6,0 mg del producto deseado. LCMS: m/z 381.1 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 8.72 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).
Ejemplo 11. Ensayo de mutantes de PKR
Procedimiento:
La PKR o solución de enzima mutante de PKR se diluyó en una mezcla de la reacción, que contiene 1x tampón (KCl 100 mM, Tris 50 mM pH 7,5, MgCh 5mM) así como PEP (la concentración depende de la enzima), Na Dh 18 0 |j M, 0,5 unidades de Ld H, DTT 1 mM, BSA al 0,03%; se indican las concentraciones finales del ensayo después de una dilución de 1 , 11 veces.
Primero se añadieron 2 j l del compuesto de prueba a los pocillos y luego se añadieron 180 j l de la mezcla de la reacción.
Se ensambló la mezcla de la reacción con el compuesto de prueba excepto para ADP, y las placas se almacenaron durante 60 minutos a temperatura ambiente.
Se añadieron 20 ul de ADP para iniciar la reacción a temperatura ambiente y se midió el progreso de la reacción como cambios en la absorbancia a una longitud de onda de 340 nm a temperatura ambiente.
Preparación del compuesto de prueba:
El compuesto de prueba se preparó a una concentración 100x en DMSO al 100% (10 mM) se hicieron de 1 a 3 diluciones para 11 puntos (es decir, 50 j l de la primera concentración se añadieron a 100 j l de DMSO al 100% para producir3,33 mM, 50 j l de esto se añadieron a 100 j l de DMSO para producir 1,11 mM, etc.)
• La dilución de 1 a 100 en el ensayo (2 j l en 200 jl) produjo una concentración inicial de 100 jM, disminuyendo 3 veces para 11 puntos.
Tampón de ensayo: KCl 100 mM, Tris 7.550mM, MgCl25mM, DTT 1 mM, BSA al 0,03%
Mezcla de la reacción: Enzima mutante PKR: 40-400 ng/pocillo; ADP: 0,2-1,65 mM; PEP: 0,1-0,5 mM; NADH: 180 jM; LDH: 0,5 unidades (Sigma N° 59023); DTT: 1 mM; BSA: 0,03%.
Ejemplo 12. Ensayo de activación porcentual de un solo punto de PKR WT
Un compuesto descrito en la presente se diluyó con DMSO y se probó a una concentración de 1 jM. La enzima se diluyó en una solución enzimática, que contenía tampón 1x (KCl 100 mM, Tris 50 mM pH 7,5, MgCh 5 mM) así como PEP (la concentración depende de la enzima), NADH 180 jM, 0,5 unidades de LDH, DTT 1 mM, BSA al 0,03%; Se indican las concentraciones finales del ensayo después de una dilución de 1,11 veces.
Primero se añadieron 2 |jl de solución de compuesto a los pocilios y luego se añadieron 180 |jl de solución enzimática. Los ensayos se ensamblaron excepto para ADP, y las placas se almacenaron durante 60 minutos a TA. Se añadieron 20 j l de ADP para iniciar el ensayo y se evaluó el resultado del ensayo usando OD340. El ensayo se realizó a temperatura ambiente.
Concentración final: PKR wt (100 ng/pocillo), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCh (5 mM), ADP (0,48 mM), PEP (0,15 mM), NADH (180 jM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) y BSA (0,03%).
Ejemplo 13. Ensayo de activación porcentual de un solo punto de PKR R510Q
Se diluyó un compuesto descrito en la presente con DMSO y se probó a una concentración de 1 jM. La enzima se diluyó en una solución enzimática, que contenía tampón 1x (KCl 100 mM, Tris 50 mM pH 7,5, MgCl2 5 mM) así como PEP (la concentración depende de la enzima), NADH 180 jM, 0,5 unidades de LDH, 1 mM DTT, BSA al 0,03%; se indican las concentraciones finales del ensayo después de una dilución de 1,11 veces.
Primero se añadieron 2 j l de solución de compuesto a los pocillos y luego se añadieron 180 j l de solución enzimática. Los ensayos se ensamblaron excepto para ADP, y las placas se almacenaron durante 60 minutos a TA. Se añadieron 20 j l de ADP para iniciar el ensayo y se evaluó el resultado del ensayo usando OD340. El ensayo se realizó a temperatura ambiente.
Concentración final: PKR R510Q (40 ng/pocillo), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl 2 (5 mM), ADP (0,2 mM), PEP (0,11 mM), NADH (180 jM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) y BSA (0,03%).
Ejemplo 14. Ensayo de activación porcentual de un solo punto de PKR R532W
Un compuesto descrito en la presente se diluyó con DMSO y se probó a una concentración de 1 jM. La enzima se diluyó en una solución enzimática, que contenía tampón 1x (KCl 100 mM, Tris 50 mM pH 7,5, MgCl2 5 mM) así como PEP (la concentración depende de la enzima), NADH 180 jM, 0,5 unidades de LDH, DTT 1 mM, BSA al 0,03%; se indican las concentraciones finales del ensayo después de una dilución de 1,11 veces.
Primero se añadieron 2 j l de solución de compuesto a los pocillos y luego se añadieron 180 j l de solución enzimática. Los ensayos se ensamblaron excepto para ADP, y las placas se almacenaron durante 60 minutos a TA. Se añadieron 20 j l de ADP para iniciar el ensayo y se evaluó el resultado del ensayo usando OD340. El ensayo se realizó a temperatura ambiente.
Concentración final: PKR R532W (100 ng/pocillo), Tris pH 7,5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0,36 mM), PEP (0,1 mM), NADH (180 jM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) y BSA (0,03%).
Ejemplo 15. Ensayo de activación porcentual de un solo punto de PKRT384M
Un compuesto descrito en la presente se diluyó con DMSO y se probó a una concentración de 1 jM. La enzima se diluyó en una solución enzimática, que contenía tampón 1x (KCl 100 mM, Tris 50 mM pH 7,5, MgCl2 5 mM) así como PEP (la concentración depende de la enzima), NADH 180 jM, 0,5 unidades de LDH, DTT 1 mM, BSA al 0,03%; se indican las concentraciones finales del ensayo después de una dilución de 1,11 veces.
Primero se añadieron 2 j l de solución de compuesto a los pocillos y luego se añadieron 180 j l de solución enzimática. Los ensayos se ensamblaron excepto para ADP, y las placas se almacenaron durante 60 minutos a TA. Se añadieron 20 j l de ADP para iniciar el ensayo y se evaluó el resultado del ensayo usando OD340. El ensayo se realizó a temperatura ambiente.
Concentración final: PKR T384M soluble (300 ng/pocillo), Tris pH 7.5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2 (5 mM), ADP (0.08 mM), PEP (0.23 mM), NADH (180 jM), LDH (0,5 unidades, Sigma 59023), DTT (1 mM) y BSA (0,03%).
Ejemplo 16. Purificación de glóbulos rojos (RBC)
Se recogió sangre fresca extraída de voluntarios sanos en tubos K2EDTA. La sangre completa se sedimentó centrifugando a 500 g durante 10 minutos. Se cortó el puerto de la bolsa de transfusión del neofiltro de reducción de leucocitos Purecell (Fisher NC0267633) una (1) pulgada por encima del filtro. Se conectó un cilindro de jeringuilla de 10 ml al tubo cortado restante conectado al neofiltro. La capa de plasma se eliminó del sedimento de la sangre completa y el sedimento se volvió suspender en 2 veces el volumen de solución salina tamponada con fosfato (PBS). Se transfirió el sedimento de células sanguíneas resuspendido de 9 ml a la jeringuilla preparada de 10 ml que se conectó al neofiltro. Se dejó que la sangre entera fluyese por gravedad a través del filtro hasta que todo el líquido pasó a través del tubo superior hacia el disco del filtro. Se añadió el émbolo a la jeringuilla, se retiró la jeringuilla de la abrazadera y se invirtió el filtro, luego se sumergió aire a través del sistema de filtro de la jeringuilla. Con una jeringuilla nueva de 5 ml, se retiraron los glóbulos rojos filtrados de la bolsa por el puerto de la jeringuilla y se transfirieron los glóbulos rojos purificados a un tubo de 5 ml con tapón a presión que se había incubado en hielo. Se giró el tubo de 5 ml con tapón a presión a 500 g durante 10 minutos a 15° C, se aspiró el sobrenadante y se resuspendió en AGAM (1x PBS, glucosa al 1%, 170 mg/l de adenina, 5,25 g/l de manitol) a una densidad de 4x109 células/ml.
Ejemplo 17. Ensayo de ATP basado en células
Para los ensayos de ATP basados en células, el compuesto que se describe en la presente se preparó en DMSO al 100% como una solución madre 10 mM. Se realizaron diluciones en serie (1:4) en una placa de almacenamiento de fondo en V de 96 pocillos y luego se añadieron 1:100 a placas de fondo en V de 96 pocillos que contenían AGAM. Los glóbulos rojos se diluyeron en medios AGAM a una densidad de 1x107 células/ml antes de añadir 90 l/pocillo a placas de ensayo de fondo transparente negras (concentración final de compuesto a una concentración de DMSO del 0,1%). Las placas de ensayo se sellaron usando sellos de papel de aluminio y se incubaron durante la noche a 37° C en una cámara humidificada. Los niveles de ATP se leyeron usando Cell-Titer-Glo (Promega).

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000097_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
    R1 es hidrógeno, un alquilo opcionalmente sustituido, un haloalquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, -ORo1, -C(=O)Rc1, o un grupo protector de nitrógeno; en donde:
    Ro1 es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
    Rc1 es alquilo opcionalmente sustituido o -N(Rcn)2, en donde cada caso de Rcn es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, o un grupo protector de nitrógeno;
    R2 y Q son cada uno independientemente un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido;
    Ra y Rb son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3, un alquilo opcionalmente sustituido, -ORo3, -N(Rn1)2, -C(=O)N(Rn1)2, o -C(=O)Rc2; o alternativamente Ra y Rb pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterociclilo opcionalmente sustituido; en donde:
    cada caso de Rn1 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
    Ro3 es hidrógeno, un -alquilo C1 -C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; y
    Rc2 es un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
    Rj y Rk son cada uno independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -ORo7, -N(Rn5)2 , -N(Rn5)C(=O)Rc5, -C(=O)N(Rn5)2, -C(=O)Rc5, -C(=O)ORo7, -SRjs, -S(=O)2Rjs, -S(=O)Rjs, o un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; o, alternativamente, Rj y Rk pueden tomarse junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar C=O, un anillo de cicloalquilo monocíclico C1-C6 opcionalmente sustituido, o un anillo de heterociclilo monocíclico C3-C6 opcionalmente sustituido; en donde:
    cada caso de Rn5 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -ORo8, o un grupo protector de nitrógeno, en donde Ro8 es hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
    cada caso de Ro7 es independientemente hidrógeno, un alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
    cada caso de Rc5 es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
    cada caso de Rjs es independientemente un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, un arilo C6-12 opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo protector de azufre.
    2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 está opcionalmente sustituido en cada átomo de carbono del anillo sustituible por Rp y opcionalmente sustituido en cada átomo de nitrógeno del anillo sustituible por Rn6; en donde:
    cada caso de Rp es independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3 , un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, -ORo6, -SRs2, -N(Rn3)2 , -C(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)C(=O)Rc4, -C(=O)Rc4, -C(=O)ORo6, -OC(=O)Rc4, -S(=O)Rs2, -S(=O)2Rs2, -S(=O)ORo6, -OS(=O)Rc4, -S(=O)2ORo6, -OS(=O)2Rc4,-S(=O)N(Rn3)2, -S(=O)2N(Rn3)2,-N(Rn3)S(=O)Rs2, -N(Rn3)S(=O)2Rs2, -N(Rn3)C(=O)ORo6, -OC(=O)N(Rn3)2, N(Rn3)C(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)S(=O)N(Rn3)2, -N(Rn3)S(=O)2N(Rn3)2, - N(Rn3)S(=O)ORo6, -N(Rn3)S(=O)2ORo6, -OS(=O)N(Rn3)2, o -OS(=O)2N(Rn3)2; o, alternativamente, dos casos de Rp unidos a los mismos átomos de carbono o unos adyacentes, pueden tomarse junto con el átomo o átomos de carbono a los que están unidos para formar un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterocicloalquilo; en donde:
    cada caso de Rn3 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
    cada caso de Ro6 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno; y
    cada caso de Rc4 es un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
    cada caso de Rs2 es independientemente un grupo protector de azufre o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; y
    Rn6 es hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, o un grupo protector de nitrógeno.
    3. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por R2 se selecciona de uno de los siguientes:
    Figure imgf000098_0001
    en donde:
    cada caso de Rnc y Rnd es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno; y
    p es 0, 1, 2, 3 o 4, según lo permita la valencia.
    4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que
    (a) el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000098_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; o
    (b) el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000099_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3.
    5. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde
    (a) el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000099_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde q es 0, 1, 2 o 3; o
    (b) el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000099_0003
    6. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-4 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada caso de Rp es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C1-4 opcionalmente sustituido, -CN, -NO2 , -Na,-OR° 6, -N(Rn3)2, -C(=O)N(Rn3)2, -C(=O)Rc4, o -C(=O)Oo6
    7. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde
    (a) el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por Q se selecciona de los siguientes:
    Figure imgf000100_0001
    en donde:
    cada caso de Rn es independientemente hidrógeno, un halógeno, -CN, -NO2, -N3 , un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heterociclilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, -ORo4, -SRs1, -N(Rn2)2, -C(=O)N(Rn2)2, - N(Rn2)C(=O)Rc3, -C(=O)Rc3, -C(=O)ORo4, -OC(=O)Rc3, -S(=O)Rs1, - S(=O)2Rs1, -S(=O)ORo4, -OS(=O)Rc3, -S(=O)2ORo4, -OS(=O)2Rc3, -S(=O)N(Rn2)2, -S(=O)2N(Rn2)2, -N(Rn2)S(=O)Rs1, -N(Rn2)S(=O)2Rs1, -N(Rn2)C(=O)ORo4, -OC(=O)N(Rn2)2, -N(Rn2)C(=O)N(Rn2)2, -N(Rn2)S(=O)N(Rn2)2, - N(Rn2)S(=O)2N(Rn2)2, - N(Rn2)S(=O)ORo4, -N(Rn2)S(=O)2ORo4, -OS(=O)N(Rn2)2, o -OS(=O)2N(Rn2)2; o dos casos de Rn unidos a los mismos átomos de carbono o unos adyacentes, tomados junto con los átomos de carbono a los que están unidos forman un cicloalquilo opcionalmente sustituido o un heterocicloalquilo; en donde:
    cada caso de Rn2 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
    cada caso de Ro4 es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o un grupo protector de oxígeno;
    cada caso de Rc3 es independientemente un -alquilo -C1-C6 opcionalmente sustituido;
    cada caso de Rs1 es independientemente un grupo protector de azufre o -alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
    n es 0, 1, 2 o 3, según lo permita la valencia; y
    cada uno de Rna, Rnb y Rnd es independientemente hidrógeno, un -alquilo C1-C6} opcionalmente sustituido o un grupo protector de nitrógeno;
    o
    (b) el heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros representado por Q es
    Figure imgf000100_0002
    8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada caso de Rn es independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo C1-4 opcionalmente sustituido, -CN, -NO2, -N3, -ORo4, -N(Rn2)2, -C(=O)N(Rn2)2, -C(=O)Rc3, o -C(=O)ORo4
    9. El compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es hidrógeno o un -alquilo C1-C4; y/o
    en donde Rj y Rk son cada uno hidrógeno; y/o
    en donde Ra y Rb son cada uno hidrógeno.
    10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5 o cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9 cuando dependen de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde q es 0 o 1.
    11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecciona de los siguientes compuestos:
    Figure imgf000102_0001
    Figure imgf000103_0001
    Figure imgf000104_0001
    Figure imgf000105_0001
    Figure imgf000106_0001
    Figure imgf000107_0001
    Figure imgf000108_0001
    12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0001
    13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0002
    14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0003
    15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0004
    16. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0005
    17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000109_0006
    18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0001
    19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0002
    20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0003
    21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0004
    22. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0005
    23. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0006
    24. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000110_0007
    25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0001
    26. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0002
    27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0003
    28. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0004
    29. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0005
    30. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0006
    31. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000111_0007
    32. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000112_0001
    33. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto está representado por la siguiente fórmula estructural:
    Figure imgf000112_0002
    34. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 33 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
    35. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34 para su uso en un método de tratamiento de la anemia; en donde el método comprende administrar una cantidad eficaz del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34, a un sujeto.
    36. El compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 35, en donde la anemia es anemia diseritropoyética.
    37. El compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable o la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 35, en donde la anemia es anemia hemolítica; opcionalmente en donde la anemia hemolítica es anemia hemolítica hereditaria y/o congénita, anemia hemolítica adquirida o anemia como parte de una enfermedad multisistémica.
    38. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de células falciformes; en donde el método comprende administrar una cantidad eficaz del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34, a un sujeto.
    39. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34 para su uso en un método de tratamiento de talasemia, preferiblemente beta-talasemia, esferocitosis hereditaria, eliptocitosis hereditaria, abetalipoproteinemia o síndrome de Bassen-Kornzweig, enfermedad de células falciformes, hemoglobinuria paroxística nocturna, anemia hemolítica adquirida o anemia de enfermedades crónicas; en donde el método comprende administrar una cantidad eficaz del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-33 o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 34, a un sujeto.
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