RS62871B1 - Aktivatori piruvat kinaze za upotrebu u lečenju krvnih poremećaja - Google Patents

Aktivatori piruvat kinaze za upotrebu u lečenju krvnih poremećaja

Info

Publication number
RS62871B1
RS62871B1 RS20220003A RSP20220003A RS62871B1 RS 62871 B1 RS62871 B1 RS 62871B1 RS 20220003 A RS20220003 A RS 20220003A RS P20220003 A RSP20220003 A RS P20220003A RS 62871 B1 RS62871 B1 RS 62871B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
optionally substituted
pharmaceutically acceptable
methyl
compound
acceptable salt
Prior art date
Application number
RS20220003A
Other languages
English (en)
Inventor
Giovanni Cianchetta
Tao Liu
Anil Kumar Padyana
Zhihua Sui
Zhenwei Cai
Dawei Cui
Jingjing Ji
Original Assignee
Agios Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agios Pharmaceuticals Inc filed Critical Agios Pharmaceuticals Inc
Publication of RS62871B1 publication Critical patent/RS62871B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D513/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/36—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Opis
STANjE TEHNIKE
[0001] Deficijencija piruvat kinaze (PKD) je bolest crvenih krvnih zrnaca uzrokovana nedostatkom enzima piruvat kinaze R (PKR) usled recesivnih mutacije gena PKLR (Wijk et al. Human Mutation, 2008, 30 (3) 446-453). Aktivatori PKR mogu biti korisni za lečenje PKD, talasemije (npr. betatalesemije), nasledne eliptocitoze, abetalipoproteinemije ili Bassen-Kornzweig sindroma, bolesti srpastih ćelija, paroksizmalne noćne hemoglobinurije, kongenitalne anemije, hemoglobinurije, kongenitalne anemije (npr. nasledna i/ili kongenitalna hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija, hronična hemolitička anemija uzrokovana nedostatkom fosfoglicerat kinaze, anemija hroničnih bolesti, nesferocitna hemolitička anemija ili nasledna sferocitoza). WO2012/151448A1 se odnosi na metode za korišćenje jedinjenja koja aktiviraju piruvat kinazu.
REZIME
[0002] Ovde su opisana jedinjenja formula (I), (II), (III), (IV) i (V) (zajedno nazvana "Formule (I)-(V)"), koja aktiviraju piruvat kinazu R (PKR), enzimi divljeg tipa i/ili mutantni enzimi (kao što su oni koji su ovde opisani) i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0003] U jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
u kojoj su R<1>, R<2>, R<a>, R<b>, R<j>, R<k>i Q kako je ovde definisano.
[0004] U jednoj realizaciji, jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrano iz jedinjenja iz Tabele 1 ili sa Slike 1.
[0005] Takođe su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (I)-(V), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0006] Ovo otkriće dalje obezbeđuje metod lečenja anemije kod subjekta koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim realizacijama, anemija je diseritropoetska anemija kao što je kongenitalna diseritropoetska anemija tipa I, II, III ili IV.
[0007] Ovo otkriće dalje obezbeđuje metod za lečenje bolesti srpastih ćelija kod subjekta koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde otkrivenog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde otkriveno jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0008] Ovo otkriće dalje obezbeđuje metod za lečenje hemolitičke anemije (npr. hronične hemolitičke anemije izazvane nedostatkom fosfoglicerat kinaze, Blood Cells Mol Dis, 2011; 46(3):206) kod subjekta koji obuhvata administriranje subjektu efikasne količine (1) ovde otkrivenog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje je ovde otkriveno ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna i/ili urođena hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija ili anemija kao deo višesistemske bolesti. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je urođena anemija. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna (npr. ne-sferocitna hemolitička anemija ili nasledna sferocitoza).
[0009] Ovo otkriće dalje obezbeđuje metod za lečenje talasemije (npr. beta-talasemije), nasledne sferocitoze, nasledne eliptocitoze, abetalipoproteinemije (ili Bassen-Kornzweig sindroma), paroksizmalne noćne hemoglobinurije, stečene hemolitičke anemije (npr. kongenitalne anemije (npr. enzimopatije), bolest srpastih ćelija ili anemija hroničnih bolesti kod subjekta koji obuhvata administriranje subjektu efikasne količine (1) ovde otkrivenog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje je ovde otkriveno ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednoj realizaciji, stečena hemolitička anemija obuhvata kongenitalne anemije. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda je za lečenje talasemije. U određenim realizacijama, talasemija je beta-talasemija.
[0010] Ovo otkriće dalje obezbeđuje metod za lečenje nedostatka piruvat kinaze (PKD) kod subjekta, pri čemu metoda obuhvata administriranje subjektu efikasne količine (1) ovde otkrivenog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje je ovde otkriveno ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim realizacijama, PKD je deficijencija PKR. U određenim realizacijama, nedostatak deficijencija je povezana sa mutacijom piruvat kinaze R.
[0011] Ovde opisana jedinjenja i farmaceutske kompozicije su aktivatori PKR koji imaju niže aktivnosti u poređenju sa divljim tipom, pa su stoga korisni za metode iz ovog otkrića. U određenim realizacijama, PKR je divlji tip. U određenim realizacijama, PKR je mutant. Takve mutacije u PKR mogu uticati na aktivnost enzima (katalitička efikasnost), regulatorna svojstva (modulacija fruktoza bisfosfatom (FBP)/ATP) i/ili termostabilnost enzima. Primeri takvih mutacija su opisani u Valentini et al, JBC 2002. Neki primeri mutanata koji su aktivirani ovde opisanim jedinjenjima uključuju G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486V, R532W, K410E, R510Q i R490W. Bez vezivanja za teoriju, u određenim realizacijama, jedinjenja koja su ovde opisana utiču na aktivnosti PKR mutanata aktiviranjem PKR mutanata koji ne reaguju na FBP, vraćanjem termostabilnosti mutantima sa smanjenom stabilnošću ili vraćanjem katalitičke efikasnosti oštećenim mutantima. Aktivirajuća aktivnost ovih jedinjenja protiv PKR mutanata može biti testirana prema metodi opisanoj u Primerima. U određenim realizacijama, ovde opisana jedinjenja su takođe aktivatori divljeg tipa PKR.
[0012] U jednoj realizaciji, otkriće obezbeđuje metod za aktiviranje PKR u crvenim krvnim zrncima kod subjekta kome je to potrebno, koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde otkrivenog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje koje je ovde otkriveno ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim realizacijama, PKR je divlji tip. U određenim realizacijama, PKR je mutant.
[0013] U jednoj realizaciji, mutant PKR je izabran između G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q i R490W. U određenim realizacijama, mutantsk PKR je izabran između A468V, A495V, I90N, T408I i Q421K i R498H. U određenim realizacijama, mutantni PKR je R532W, K410E ili R510Q.
KRATAK OPIS SLIKA
[0014]
Slika 1 je listing struktura primernih jedinjenja iz ovog pronalaska.
Slika 2 prikazuje sintezu primera intermedijera korišćenih u Primerima 1-10.
DETALjAN OPIS PRONALASKA
[0015] Detalje konstrukcije i rasporeda komponenata iznete u sledećem opisu ili ilustrovane na crtežima ne treba smatrati ograničavajućim. Realizacije se mogu praktikovati ili izvesti na različite načine. Frazeologija i terminologija korišćena ovde služe za opis i ne treba ih smatrati ograničavajućim.
Definicije
[0016] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu da sadrže jedan ili više asimetričnih centara, i stoga mogu postojati u različitim stereoizomernim oblicima, npr., enantiomeri i/ili dijastereomeri. Na primer, ovde opisana jedinjenja mogu biti u obliku pojedinačnog enantiomera, dijastereomera ili geometrijskog izomera, ili mogu biti u obliku smeše stereoizomera, uključujući racemske smeše i smeše obogaćene sa jednim ili više stereoizomera. Izomeri se mogu izolovati iz smeša metodama poznatim stručnjacima, uključujući hiralnu tečnu hromatografiju visokog pritiska (HPLC) i formiranje i kristalizaciju hiralnih soli; ili se poželjni izomeri mogu dobiti asimetričnim sintezama. Vidi, na primer, Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); and Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).
[0017] Jedinjenja koja su ovde opisana takođe mogu biti predstavljena u višestrukim tautomernim oblicima, u takvim slučajevima, izričito obuhvataju sve tautomerne oblike ovde opisanih jedinjenja, iako samo jedan tautomerni oblik može biti predstavljen (npr. alkilacija prstenskog sistema može rezultirati alkilacijom na više mesta; svi takvi reakcioni produkti su izričito uključeni). Svi takvi izomerni oblici takvih jedinjenja su izričito uključeni. Ako je tautomer nekog jedinjenja aromatičan, ovo jedinjenje je aromatično. Slično, ako je tautomer supstituenta heteroaril, ovaj supstituent je heteroaril.
[0018] Termin "alkil" se odnosi na radikal zasićene ugljovodonične grupe sa ravnim ili razgranatim lancem koja ima od 1 do 10 atoma ugljenika ("C1-10alkil"). Primeri C1-6alkil grupa uključuju metil (C1), etil (C2), propil (C3) (npr. npr. n-propil, izopropil), butil (C4) (npr. n-butil, terc-butil, sek-butil, izo-butil), pentil (C5) (npr. n-pentil, 3-pentanil, amil , neopentil, 3-metil-2-butanil, tercijarni amil) i heksil (C6) (npr. n-heksil). Osim ako nije drugačije naznačeno, svaka primerna alkil grupa je nezavisno nesupstituisana („nesupstituisani alkil“) ili supstituisana („supstituisani alkil“) sa jednim ili više supstituenata (npr. halogen, kao što je F). U određenim realizacijama, alkil grupa je nesupstituisani -C1-10alkil. U određenim realizacijama, alkil grupa je supstituisani -C1-10alkil.
[0019] Termin "haloalkil" se odnosi na supstituisanu alkil grupu, u kojoj je jedan ili više atoma vodonika nezavisno zamenjeno halogenom, npr. fluoro, bromo, hloro, ili jodo i uključuje alkil delove u kojima su svi vodonici zamenjeni sa halo (npr. perfluoroalkil). U nekim realizacijama, haloalkil deo ima 1 do 8 atoma ugljenika („C1-8haloalkil“).
[0020] Termin "alkoksi" ili "alkoksil" se odnosi na -O-alkil radikal. Na primer, sa između 1 i 6 atoma ugljenika.
[0021] Termin "ariloksi" se odnosi na -O-aril radikal. U nekim realizacijama ariloksi grupa je fenoksi.
[0022] Termin "alkenil" se odnosi na radikal ugljovodonične grupe sa ravnim ili razgranatim lancem koja ima od 2 do 10 atoma ugljenika i jednu ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik (npr. 1, 2, 3 ili 4 dvostruke veze). Jedna ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik mogu biti unutrašnje (kao što je 2-butenil) ili terminalne (kao što je 1-butenil). Primeri -C2-4alkenil grupa uključuju etenil (C2), 1-propenil (C3), 2-propenil (C3), 1-butenil (C4), 2-butenil (C4), butadienil (C4), pentenil (C5), pentadienil (C5), heksenil (C6), heptenil (C7), oktenil (C8) , oktatrienil (C8) i slično. Osim ako nije drugačije naznačeno, svaka primerna alkenil grupa je nezavisno nesupstituisana („nesupstituisani alkenil“) ili supstituisana („supstituisani alkenil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim realizacijama, alkenil grupa je nesupstituisani -C2-10alkenil. U određenim realizacijama, alkenil grupa je supstituisani -C2-10alkenil. U alkenil grupi, C=C dvostruka veza može biti (E)- ili (Z)-dvostruka veza.
[0023] Termin "alkinil" se odnosi na radikal ugljovodonične grupe sa ravnim ili razgranatim lancem koja ima od 2 do 10 atoma ugljenika i jednu ili više trostrukih veza ugljenik-ugljenik (npr.1, 2, 3 ili 4 trostruke veze) ("C2-10alkinil"). Primeri alkinil grupa uključuju etinil (C2), 1-propinil (C3), 2-propinil (C3), 1-butinil (C4), 2-butinil (C4), pentinil (C5), heksinil (C6) heptinil (C7), oktinil (C8) i slično. Osim ako nije drugačije naznačeno, svaka primerna alkinil grupa je nezavisno nesupstituisana („nesupstituisani alkinil“) ili supstituisana („supstituisani alkinil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim realizacijama, alkinil grupa je nesupstituisani -C2-10alkinil. U određenim realizacijama, alkinil grupa je supstituisani -C2-10alkinil.
[0024] Termin "karbociklil" ili "karbociklični" se odnosi na radikal nearomatičnog monocikličnog, bicikličnog ili tricikličnog ili policikličnog ugljovodoničnog prstenskog sistema koji ima od 3 do 14 atoma ugljenika u prstenu ("C3-14karbociklil") i nula heteroatoma u nearomatičnom prstenskom sistemu. Karbociklil grupe uključuju potpuno zasićene prstenske sisteme (npr. cikloalkile) i delimično zasićene prstenske sisteme. U nekim realizacijama, karbociklil grupa ima 3 do 10 atoma ugljenika u prstenu („C3-10karbociklil“).
[0025] Termin "cikloalkil" kako se ovde koristi uključuje zasićene ciklične, biciklične, triciklične ili policiklične ugljovodonične grupe koje imaju 3 do 14 ugljenika koji sadrže naznačeni broj prstenova i atoma ugljenika (na primer C3-C14monociklični, C4-C14biciklični, C5-C14triciklični ili C6-C14policiklični cikloalkil). U nekim realizacijama "cikloalkil" je monociklični cikloalkil. Primeri monocikličnih cikloalkil grupa uključuju ciklopentil (C5), cikloheksil (C5). ciklopropil (C3) ciklobutil (C4), cikloheptil (C7) i ciklooktil (C8). U nekim realizacijama "cikloalkil" je biciklični cikloalkil. Primeri bicikličnih cikloalkila uključuju biciklo [1.1.0] butan (C4), biciklo [1.1.1] pentan (C5), spiro[2.2] pentan (C5), biciklo[2.1.0]pentan (C5), biciklo[2.1 .1]heksan (C6), biciklo[3.3.3]undekan (C11), dekahidronaftalen (C10), biciklo[4.3.2]undekan (C11), spiro[5.5]undekan (C11) i biciklo[4.3.3]dodekan (C12). U nekim realizacijama "cikloalkil" je triciklični cikloalkil. Primeri tricikličnih cikloalkila uključuju adamantin (C12). Osim ako nije drugačije naznačeno, svaka primerna cikloalkil grupa je nezavisno nesupstituisana („nesupstituisani cikloalkil“) ili supstituisana („supstituisani cikloalkil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim realizacijama, cikloalkil grupa je nesupstituisani C3-14cikloalkil. U određenim realizacijama, cikloalkil grupa je supstituisani C3-14cikloalkil.
[0026] Termin "heterociklil" ili "heterociklični" se odnosi na radikal 3- do 14-članog nearomatskog sistema prstena koji ima atome ugljenika u prstenu i 1 do 4 heteroatoma u prstenu, pri čemu je svaki heteroatom nezavisno izabran između azota, kiseonika i sumpora („3-14-člani heterociklil“). U heterociklil grupama koje sadrže jedan ili više atoma azota, tačka vezivanja može biti atom ugljenika ili azota, kako valencija dozvoljava. Heterociklična grupa može biti ili monociklična („monociklični heterociklil“) ili policiklična (npr. kondenzovani, premošćeni ili spiro prstenski sistem kao što je biciklični sistem („biciklični heterociklil“) ili triciklični sistem („triciklični heterociklil“)), i može biti zasićena ili može da sadrži jednu ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih ili trostrukih veza. Heterociklil policiklični prstenski sistemi mogu uključivati jedan ili više heteroatoma u jednom ili oba prstena. "Heterociklil" takođe uključuje sisteme prstena u kojima je heterociklil prsten, kao što je definisan gore, fuzionisan sa jednom ili više karbociklil grupa pri čemu je tačka vezivanja ili na karbociklilnom ili heterociklilnom prstenu, ili prstenske sisteme u kojima je heterociklil prsten, kako je gore definisano, kondenzovan sa jednom ili više aril ili heteroaril grupa, pri čemu je tačka vezivanja na heterociklil prstenu, i u takvim slučajevima, broj članova prstena nastavlja da označava broj članova prstena u sistemu heterociklil prstena. Osim ako nije drugačije naznačeno, u svakom pojavljivanju heterociklila je nezavisno nesupstituisan („nesupstituisani heterociklil“) ili supstituisan („supstituisani heterociklil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim realizacijama, heterociklil grupa je nesupstituisani 3-14-člani heterociklil. U određenim realizacijama, heterociklil grupa je supstituisani 3-14-člani heterociklil. U nekim realizacijama, heterociklil grupa je 5-10-člani nearomatski prstenski sistem koji ima atome ugljenika u prstenu i 1-4 heteroatoma u prstenu, pri čemu je svaki heteroatom nezavisno izabran između azota, kiseonika i sumpora ("5-10-člani heterociklil"). Primeri heterociklil grupa uključuju aziridinil, oksiranil, tiiranil, azetidinil, oksetanil, tietanil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotiofenil, dihidrothiophenil, pirolidinil, dihidropirolil, pirolil-2,5-dine, dioksolanil, oksatiolanil, ditiolanil, triazolinil, triazinanil, azepanil, oksepanil, tiepanil, azokanil, oksekanil, tiokanil, indolinil, izoindolil, dihidrobenzofuranil, dihidrobenzotienil, tetrahidrobenzothienil, tetrahidrobenzofuranil, tetrahidroindolil, tetrahidrohinolinil, tetrahidroizohinolinil, dekahidrohinolinil, dekahidroizohinolinil, octahidrohromenil, octahidroizohromenil, dekahidronafthiridinil, dekahidro-1,8-naftiridinil, oktahidropirolo[3,2-b]pirol, indolinil, ftalimidil, naftalimidil, hromanil, hromenil, 1H-benzo[e][1,4]diazepinil, 1,4,5,7-tetrahidropirano[3,4-b]pirolil, 5,6-dihidro-4H-furo[3,2-b]pirolil, 6,7-dihidro-5H-furo[3,2-b]piranil, 5,7-dihidro-4H-tieno[2,3-c]piranil, 2,3-dihidro-1H-pirolo[2,3-b]piridinil, 2,3-dihidrofuro[2,3-b]piridinil, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirolo[2,3-b]piridinil, 4,5,6,7-tetrahidrofuro[3,2-c]piridinil, 4,5,6,7-tetrahidrotieno [3,2-b]piridinil, 1,2,3,4-tetrahidro-1,6-naftiridinil i slično.
[0027] Termin "aril" se odnosi na radikal monocikličnog ili policikličnog (npr. bicikličnog ili tricikličnog) 4n+2 aromatičnog sistema prstena (npr. koji ima 6, 10 ili 14 π elektrona zajedničkih u cikličnom nizu) koji ima 6 -14 atoma ugljenika u prstenu i nula heteroatoma obezbeđenih u sistemu aromatičnog prstena („C6-14aril“). U nekim realizacijama, aril grupa ima 6 atoma ugljenika u prstenu ("C6aril"; npr. fenil). U nekim realizacijama, aril grupa ima 10 atoma ugljenika u prstenu ("C10aril"; npr. naftil kao što su 1-naftil i 2-naftil). U nekim realizacijama, aril grupa ima 14 atoma ugljenika u prstenu ("C14aril"; npr. antracil). "Aril" takođe uključuje sisteme prstenova u kojima je aril prsten, kako je definisan gore, je fuzionisan sa jednom ili više karbociklil ili heterociklil grupa pri čemu je radikal ili tačka vezivanja na aril prstenu, i u takvim slučajevima, broj atoma ugljenika nastavlja da označava broj atoma ugljenika u sistemu aril prstena. Osim ako nije drugačije naznačeno, u svakom pojavljivanju aril grupe je nezavisno nesupstituisan („nesupstituisani aril“) ili supstituisan („supstituisani aril“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim realizacijama, aril grupa je nesupstituisani C6-14aril. U određenim realizacijama, aril grupa je supstituisani C6-14aril.
[0028] Termin "heteroaril" se odnosi na radikal 5-14-članog monocikličnog ili policikličnog (npr. bicikličnog, tricikličnog) 4n+2 aromatičnog prstenskog sistema (npr. koji ima 6 π elektrona deljenih u cikličnom nizu) koji imaju atome ugljenika u prstenu i 1-4 heteroatoma u prstenu obezbeđena u aromatičnom prstenskom sistemu, pri čemu je svaki heteroatom nezavisno izabran između azota, kiseonika i sumpora („5-14-člani heteroaril“). U nekim realizacijama, heteroaril može biti 5- ili 6-člani monociklični heteroaril koji sadrži 1-4 heteroatoma. U nekim realizacijama heteroaril može biti 8-12-člani biciklični heteroaril koji ima 1-6 heteroatoma. "5- ili 6-člani monociklični heteroaril" ili "5-člani ili 6-člani monociklični heteroaril" se odnosi na 5- ili 6-člani monociklični i nefuzionisani 4n+2 aromatični prstenski sistem koji ima atome ugljenika u prstenu i 1-4 prstenska heteroatoma. Primeri monocikličnih 5-ili 6-članih heteroaril grupa uključuju pirolil, furanil, tiofenil, imidazolil, pirazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, triazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, tetrazolil, piridinil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, triazinil i tetrazinil. Kako se ovde koristi, ako je tautomer radikala heteroaril, ovaj radikal je heteroaril. Termin "tautomeri" ili "tautomerni" se odnosi na dva ili više interkonvertibilnih jedinjenja/supstituenata koji su rezultat najmanje jedne formalne migracije atoma vodonika i najmanje jedne promene valence (npr. jednostruka veza u dvostruku vezu, trostruka veza u jednostruku vezu, ili obrnuto). Tačan odnos tautomera zavisi od nekoliko faktora, uključujući temperaturu, rastvarač i pH. Tautomerizacije (tj. reakcija koja daje tautomerni par) može biti katalizovana kiselinom ili bazom. Primeri tautomerizacije uključuju tautomerizacije keto-u-enol, amid-u-imid, laktam-u-laktim, enamin-u-imin, i enamin-u-(drugačiji enamin).
[0029] Termin "zasićen" se odnosi na deo molekula koji ne sadrži dvostruku ili trostruku vezu, tj. deo koji sadrži samo jednostruke veze.
[0030] Termin "opciono supstituisan" odnosi se na to da je supstituisan ili nesupstituisan. Generalno, termin „supstituisan“ znači da je najmanje jedan vodonik prisutan u grupi zamenjen dozvoljenim supstituentom, npr. supstituentom koji nakon supstitucije rezultira stabilnim jedinjenjem, npr. rearanžiranjem, ciklizacijom, eliminacijom ili drugom reakcijom. Osim ako nije drugačije naznačeno, "supstituisana" grupa ima supstituent (npr. C1-6alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksil, C1-6haloalkil, C1-6haloalkoksi, C1-6acil, C3-6cikloalkil, C6-10aril, monociklični ili biciklični heteroaril, i monociklični ili biciklični heterociklil), na jednoj ili više zamenljivih pozicija grupe, i kada je više od jedne pozicije u bilo kojoj datoj strukturi supstituisano, supstituent je ili isti ili različit na svakoj poziciji. Termin "supstituisan" podrazumeva supstituciju sa svim dozvoljenim supstituentima organskih jedinjenja i uključuje bilo koji od ovde opisanih supstituenata koji rezultiraju formiranjem stabilnog jedinjenja. Ovaj pronalazak razmatra bilo koju i sve takve kombinacije da bi se došlo do stabilnog jedinjenja. Za potrebe ovog pronalaska, heteroatomi kao što je azot mogu imati vodonične supstituente i/ili bilo koji pogodan supstituent kao š to je ovde opisano koji zadovoljavaju valence heteroatoma i rezultiraju formiranjem stabilnog dela. Pronalazak nije namenjen da na bilo koji način bude ograničen ovde opisanim primerima supstituenata.
[0031] "Zamenjivi atom ugljenika u prstenu" se odnosi na atom ugljenika na aril/heteroaril/karbociklil/heterociklil prstenu sa najmanje jednim vodonikom prisutnim na atomu ugljenika koji je zamenjen sa dozvoljenim supstituentom kao što je gore definisano. "Zamenjivi atom azota u prstenu" se odnosi na atom azota na heteroaril-heterociklil prstenu sa najmanje jednim vodonikom prisutnim na atomu azota koji je zamenjen sa dozvoljenim supstituentom.
[0032] Osim ako nije drugačije naznačeno, "supstituisana" grupa ima supstituent na jednoj ili više zamenljivih pozicija grupe, i kada je više od jednog položaja u bilo kojoj datoj strukturi supstituisano, supstituent je ili isti ili različit na svakoj poziciji. Termin "supstituisan" podrazumeva supstituciju sa svim dozvoljenim supstituentima organskih jedinjenja i uključuje bilo koji od ovde opisanih supstituenata koji rezultiraju formiranjem stabilnog jedinjenja. Ovaj pronalazak razmatra bilo koju i sve takve kombinacije da bi se došlo do stabilnog jedinjenja. Za potrebe ovog pronalaska, heteroatomi kao što je azot mogu imati supstituente vodonika i/ili bilo koji pogodan supstituent kao što je ovde opisano koji zadovoljavaju valence heteroatoma i rezultiraju formiranjem stabilnog dela molekula. Pronalazak nema nameru da bude ograničen na bilo koji način ovde opisanim primerima supstituenata.
[0033] Termin "halo" ili "halogen" se odnosi na fluor, hlor, brom ili jod.
[0034] Termin "acil" se odnosi na grupu koja ima opštu formulu -C(=O)R<X1>, -C(=O)OR<X1>, -C(=O)-OC(=O)R<X1>, -C(= O)SR<X1>, -C(=O)N(R<X1>)2, -C(=S)R<X1>, -C(=S)N(R<X1>)2i -C(=S)S(R<X1>), -C (=NR<X1>)R<X1>, -C(=NR<X1>)OR<X1>, -C(=NR<X1>)SR<X1>i -C(=NR<X1>)N(R<X1>)2, gde R<X1>je vodonik; halogen; supstituisani ili nesupstituisani hidroksil; supstituisani ili nesupstituisani tiol; supstituisani ili nesupstituisani amino; supstituisani ili nesupstituisani acil, ciklični ili aciklični, supstituisani ili nesupstituisani, razgranati ili nerazgranati C1-10alkil; ciklični ili aciklični, supstituisani ili nesupstituisani, razgranati ili nerazgranati C2-10alkenil; supstituisani ili nesupstituisani C2-10alkinil; supstituisani ili nesupstituisani C6-12aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, kada valencija dozvoljava. Primeri acil grupa uključuju aldehide (-CHO), karboksilne kiseline (-CO2H), ketone, acil halide, estre, amide, imine, karbonate, karbamate i uree.
[0035] U određenim realizacijama, supstituent prisutan na atomu azota, na atomu kiseonika ili na atomu sumpora je zaštitna grupa za azot, zaštitna grupa za kiseonik ili zaštitna grupa za sumpor, respektivno. Zaštitne grupe za azot, kiseonik i sumpor su dobro poznate u tehnici i uključuju one koje su detaljno opisane u Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene i P. G. M. Wuts, treće izdanje, John Wiley & Sons, 1999. Na primer, zaštitne grupe za azot uključuju, ali nisu ograničene na, formamid, acetamid, hloracetamid, trihloracetamid, trifluoracetamid, fenilacetamid, metil karbamat, etil karbamat, 9-fluorenilmetil karbamat (Fmoc), t-butil karbamat (BOC ili Boc), 1-adamantil karbamat (Adoc), vinil karbamat (Voc), alil karbamat (Alloc), 2-(trimetilsilil) etoksi]metil (SEM), p-toluensulfonamid (Ts), benzensulfonamid, 2,3 ,6-trimetil-4-metoksibenzensulfonamid (Mtr), 2,4,6-trimetoksibenzen-sulfonamid (Mtb), fenotiazinil-(10)-acil derivat, N'-p-toluensulfonilaminoacil derivat, itd. Primeri zaštitnih grupa za kiseonik uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, metoksimetil (MOM), metiltiometil (MTM), tbutiltiometil, (fenildimetilsilil) metoksimetil (SMOM), benziloksi metil (BOM), benziloksi metil (BOM), (PMBM), (4-metoksifenoksi)metil (p-AOM), tetrahidropiranil (THP), metansulfonat (mezilat), benzilsulfonat i tozilat (Ts).
[0036] Izrazu "odlazeća grupa" je dato njegovo uobičajeno značenje u tehnici sintetičke organske hemije i odnosi se na atom ili grupu koja može da bude zamenjena nukleofilom. Primeri pogodnih odlazećih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, halogen (kao što je F, Cl, Br, ili J (jod)), alkoksikarboniloksi, ariloksikarboniloksi, alkansulfoniloksi, arensulfoniloksi, alkil-karboniloksi (npr. acetoksi), estar sulfonske kiseline, kao što je toluensulfonat (tozilat, -OTs), metansulfonat (mezilat, -OMs), p-bromobenzensulfonil oksi (brozilat, -OBs), -OS(=O)2(CF2)3CF3(nonaflat, -ONf), ortrifluorometansulfonat (triflat, -OTf).
[0037] Termin "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na one soli koje su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja bez nepotrebne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, i srazmerne su razumnom odnosu koristi/rizik. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u tehnici. Na primer, Berge et al. detaljno opisuju farmaceutski prihvatljive soli u J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja iz ovog pronalaska uključuju one izvedene iz pogodnih neorganskih i organskih kiselina i baza. Primeri farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih kiselinskih adicijskih soli su soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama, kao š to su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, jantarna kiselina ili malonska kiselina ili korišćenjem drugih metoda poznatih u tehnici, kao što je jonska izmena. Druge farmaceutski prihvatljive soli uključuju adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dodecilsulfat, etansulfonat, format, fumarat, glukoheptonat, glicerofosfat, glukonat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, hidrojodid, 2-hidroksietansulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat omitoksatinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartarat, tiocijanat, ptoluensulfonat, undekanoat, valeratne soli i slično. Soli dobijene iz odgovarajućih baza uključuju soli alkalnih metala, zemnoalkalnih metala, amonijuma i N<+>(C1-4alkil)4<->soli. Reprezentativne soli alkalnih ili zemnoalkalnih metala uključuju natrijumove, litijumove, kalijumove, kalcijumove, magnezijumove i slične. Dalje farmaceutski prihvatljive soli uključuju, kada je prikladno, netoksični amonijum, kvaternarni amonijum i amin katjone formirane korišćenjem kontrajona kao što su halid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, niži alkil sulfonat i aril sulfonat.
[0038] Termini "kompozicija" i "formulacija" se koriste naizmenično.
[0039] "Subjekt" kome se administriranje razmatra se odnosi na čoveka (tj., muškarca ili ženu bilo koje starosne grupe, npr. pedijatrijskog subjekta (npr. novorođenče, dete ili adolescent) ili odraslog subjekta (npr. mlada odrasla osoba, odrasla osoba srednjih godina ili odrasla osoba starije životne dobi)) ili nehumanu životinju. U određenim realizacijama, ne-humana životinja je sisar (npr. primat (npr. cinomologus majmun ili rezus majmun), komercijalno relevantan sisar (npr. govedo, svinja, konj, ovca, koza, mačka ili pas) ili ptica (na primer, komercijalno relevantne ptice, kao što su pile, patka, guska ili ćurka)). U određenim realizacijama, ne-humana životinja je riba, gmizavac ili vodozemac. Ne-humana životinja može biti mužjak ili ženka u bilo kojoj fazi razvoja. Ne-humana ž ivotinja može biti transgena životinja ili genetski modifikovana ž ivotinja. U određenim realizacijama, subjekt je pacijent. Izraz "pacijent" se odnosi na humanog subjekta kome je potrebno lečenje bolesti. U određenim realizacijama, izraz "pacijent" je odrasla osoba starija od 18 godina kojoj je potrebno lečenje bolesti. U određenim realizacijama, izraz "pacijent" je dete ne starije od 18 godina kome je potrebno lečenje. U određenim realizacijama, pacijent nije pod redovnom transfuzijom (npr. nije imao više od 4 epizode transfuzije u periodu od 12 meseci). U određenim realizacijama, pacijent je pod redovnom transfuzijom (npr. imao je najmanje 4 epizode transfuzije u periodu od 12 meseci). U određenim realizacijama, subjekt je podvrgnut splenektomiji. U određenim realizacijama, subjekt je podvrgnut splenektomiji i pod redovnom je transfuzijom. U određenim realizacijama, subjekt je bio podvrgnut splenektomiji i nije pod redovnom transfuzijom.
[0040] Termin "administriranje" ili "administracija" se odnosi na implantaciju, apsorpciju, ingestiju, ubrizgavanje, inhalaciju ili drugačije uvođenje ovde opisanog jedinjenja, ili njegove kompozicije, u ili na subjekta.
[0041] Izrazi "tretman", "lečenje" i "lečiti" se odnose na vraćanje, ublažavanje, odlaganje početka ili inhibiranje napredovanja ovde opisane bolesti. U nekim realizacijama, lečenje se može primeniti nakon što se jedan ili više znakova ili simptoma bolesti razvio ili su uočeni (tj. terapijski tretman). U drugim realizacijama, lečenje se može primeniti u odsustvu znakova ili simptoma bolesti. Na primer, tretman se na osetljivog subjekta može primeniti pre pojave simptoma (tj. profilaktički tretman) (npr. u svetlu istorije simptoma i/ili u svetlu izloženosti patogenu). Lečenje se takođe može nastaviti nakon što simptomi nestanu, na primer, da bi se odložilo ili sprečila rekurencija. U određenim realizacijama, lečenje uključuje odlaganje pojave najmanje jednog simptoma poremećaja tokom određenog vremenskog perioda.
[0042] Termini "stanje", "bolest" i "poremećaj" se koriste naizmenično.
[0043] "Efikasna količina" ovde opisanog jedinjenja se odnosi na količinu dovoljnu da izazove željeni biološki odgovor. Efikasna količina ovde opisanog jedinjenja može da varira u zavisnosti od faktora kao što su željena biološka krajnja tačka, farmakokinetika jedinjenja, stanje koje se leči, način primene i starost i zdravlje subjekta. U određenim realizacijama, efikasna količina je terapeutski efikasna količina. U određenim realizacijama, efikasna količina je da generiše odgovor hemoglobina subjekta od ≥1.5 g/dL povećanja koncentracije Hb od početne vrednosti. Osnovna koncentracija Hb subjekta je prosek svih dostupnih koncentracija Hb pre tretmana ovim jedinjenjem. U određenim realizacijama, efektivna količina je ona koja generiše odgovor hemoglobina subjekta od ≥1,0 g/dL povećanja koncentracije Hb u odnosu na baznu vrednost. U određenim realizacijama, efikasna količina je ona koja generiše odgovor hemoglobina subjekta od ≥2.0 g/dL povećanja koncentracije Hb od bazne vrednosti. U određenim realizacijama, efikasna količina je količina ovde opisanog jedinjenja u jednoj dozi. U određenim realizacijama, efikasna količina su kombinovane količine ovde opisanog jedinjenja u više doza. U određenim realizacijama, efikasna količina je terapeutski efikasna količina.
[0044] "Terapeutski efikasna količina" ovde opisanog jedinjenja je količina dovoljna da obezbedi terapeutsku korist u lečenju nekog stanja ili da odloži ili minimizira jedan ili više simptoma povezanih sa stanjem. Terapijski efikasna količina jedinjenja označava količinu terapeutskog agensa, samostalno ili u kombinaciji sa drugim terapijama, koja pruža terapeutsku korist u lečenju stanja. Termin "terapeutski efikasna količina" može da obuhvati količinu koja poboljšava ukupnu terapiju, smanjuje ili uklanja simptome, znake ili uzroke stanja, i/ili poboljšava terapeutsku efikasnost drugog terapeutskog agensa. U određenim realizacijama, terapeutski efikasna količina je količina dovoljna za izazivanje merljive aktivacije divljeg tipa ili mutantnog PKR. U određenim realizacijama, terapeutski efikasna količina je količina dovoljna za regulisanje nivoa 2,3-difosfoglicerata i/ili ATP u krvi kojoj je to potrebno ili za lečenje deficijencije piruvat kinaze (PKD), hemolitičke anemije (npr. hronična hemolitička anemija, nasledna ne-sferocitna anemija), bolesti srpastih ćelija, talasemije (npr. beta-talasemija), nasledne sferocitoze, nasledne eliptocitoze, abetalipoproteinemije (ili Bassen-Kornzweig sindroma), paroksizmalne noćne hemoglobinurije, stečene hemolitičke anemije (npr. kongenitalne anemije (npr. enzimopatije)), anemije hroničnih bolesti ili lečenje bolesti ili stanja koja su povezana sa povećanim nivoima 2,3-difosfoglicerata (npr. bolesti jetre). U određenim realizacijama, terapeutski efikasna količina je količina dovoljna za izazivanje merljive aktivacije divljeg tipa ili mutantnog PKR i za regulisanje nivoa 2,3-difosfoglicerata u krvi kojoj je to potrebno ili za lečenje nedostatka piruvat kinaze (PKD), hemolitičke anemije (na primer, hronična hemolitička anemija, nasledna ne-sferocitna anemija), bolesti srpastih ćelija, talasemije (npr. beta-talasemija), nasledne sferocitoze, nasledne eliptocitoze abetalipoproteinemije (ili Bassen-Kornzweig sindroma, paroksizmalne noćne hemoglobinurije, stečene hemolitičke anemije (npr. kongenitalne anemije (npr. enzimopatije)), anemije hroničnih bolesti ili lečenje bolesti ili stanja koja su povezana sa povećanim nivoima 2,3-difosfoglicerata (npr. bolesti jetre). U jednom aspektu, terapeutski efikasna količina je količina potrebna da se generiše odgovor hemoglobina kod subjekta od ≥1.0 g/dL (kao što je ≥1.5 g/dL ili ≥2.0 g/dL) povećanje koncentracije Hb u odnosu na baznu vrednost. Bazna koncentracija Hb subjekta je prosek svih dostupnih koncentracija Hb u roku od najmanje dve nedelje (npr. 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili 6 nedelja) pre tretmana ovde opisanim jedinjenjem. U određenim aspektima, terapeutski efikasna količina je količina koja je potrebna da se smanji pacijentovo transfuziono opterećenje. U jednom aspektu, terapeutski efikasna količina je između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/dan jedinjenja koje je obezbeđeno, kao što je npr. 0,1 - 100 mg/kg telesne težine/dan. U određenim realizacijama, terapeutski efikasna količina je ona smanjuje pacijentovo transfuziono opterećenje.
[0045] Kako se ovde koristi, smanjenje transfuzionog opterećenja znači najmanje 20% smanjenje broja transfuziranih jedinica eritrocita u roku od najmanje 5 nedelja tretmana. U određenim realizacijama, smanjenje transfuzionog opterećenja je smanjenje od ≥33% u broju transfuziranih jedinica eritrocita u roku od najmanje 5 nedelja lečenja. U određenim realizacijama, smanjenje transfuzionog opterećenja je primećeno za najmanje 10 nedelja (npr. najmanje 20 nedelja ili najmanje 24 nedelje) lečenja.
[0046] Kako se ovde koristi, bolest srpastih ćelija (SCD), Hemoglobin SS bolest i anemija srpastih ćelija se koriste naizmenično. Bolest srpastih ćelija (SCD) opisuje grupu naslednih poremećaja crvenih krvnih zrnaca. U određenim realizacijama, subjekti sa SCD imaju abnormalni hemoglobin, nazvan hemoglobin S ili srpasti hemoglobin, u svojim crvenim krvnim zrncima. U određenim aspektima, ljudi koji imaju SCD imaju najmanje jedan abnormalni gen koji uzrokuje da telo proizvodi hemoglobin S. U određenim rešenjima, ljudi koji imaju SCD imaju dva gena za hemoglobin S, Hemoglobin SS.
[0047] Talasemija je nasledni poremećaj krvi u kome telo stvara abnormalni oblik hemoglobina. U određenim realizacijama, abnormalni oblik hemoglobina dovodi do nedostatka alfa ili beta globina. U određenim aspektima, poremećaj dovodi do uništenja velikog broja crvenih krvnih zrnaca, što dovodi do anemije. U određenim realizacijama, talasemija je alfa talasemija. U određenim realizacijama, talasemija je beta talasemija.
[0048] Termin "aktivator" kako se ovde koristi označava agens koji (merljivo) povećava aktivnost divljeg tipa piruvat kinaze R (wt PKR) ili izaziva povećanje aktivnosti divljeg tipa piruvat kinaze R (wt PKR) do nivoa koji je veći od bazalnih nivoa aktivnosti PKR ili agens koji (merljivo) povećava aktivnost mutantne piruvat kinaze R (mPKR) ili izaziva povećanje aktivnosti mutantne piruvat kinaze R (mPKR) do nivoa koji je veći od bazalnih nivoa aktivnosti mutantne PKR, na primer, do nivoa koji je 20%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% aktivnosti PKR divljeg tipa.
[0049] Termin "upakovana crvena krvna zrnca" ili PRBC, kako se ovde koristi, se odnosi na crvena krvna zrnca napravljena od jedinice pune krvi centrifugiranjem i uklanjanjem većeg dela plazme. U određenim realizacijama, PRBC jedinica ima hematokrit od najmanje oko 95%. U određenim realizacijama, PRBC jedinica ima hematokrit od najmanje oko 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% ili 10%.
[0050] Izraz "ex vivo" koji se odnosi na metod koji kako se ovde koristi znači da se postupak odvija van organizma. Na primer, ćelija (npr. crvena krvna zrnca), tkivo ili krv (koje sadrže bar crvena krvna zrnca, plazmu i hemoglobin) mogu biti ekstrahovani iz organizma koji će biti u kontaktu sa jednim ili više jedinjenja koja su ovde obezbeđena ili njihovom farmaceutski prihvatljivom soli ili njihovom farmaceutskom kompozicijom, opciono u veštački kontrolisanim uslovima (npr. temperatura).
[0051] Termin "in vitro" koji se odnosi na metod kako se ovde koristi znači da se postupak odvija van organizma i da je sadržan u veštačkoj sredini. Na primer, ćelija (npr. crvena krvna zrnca), tkivo ili krv (koje sadrže najmanje crvena krvna zrnca, plazmu i hemoglobin) mogu biti ekstrahovana iz organizma koji će biti u kontaktu sa jednim ili više jedinjenja koja su ovde obezbeđena ili njihovom farmaceutski prihvatljivom soli ili njihovom farmaceutskom kompozicijom, u zatvorenom, veštačkom okruženju (npr. system za kulturu), kao š to je u epruveti, u kulturi, u boci, u mikrotitarskoj ploči, na Petrijevoj šolji i slično.
Jedinjenja
[0052] Ovde su opisana jedinjenja i kompozicije koje aktiviraju divlji tip PKR i/ili mutantne PKR, kao što su one ovde opisane. U jednom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I)-(V), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (I)-(V), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0053] U prvoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kojoj:
R<1>je vodonik, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani haloalkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril, -ORol, -C(=O)Rcl, ili zaštitna grupa za azot; gde:
R<o1>je vodonik, opciono supstituisani alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik;
R<c1>je opciono supstituisani alkil ili -N(R<cn>)2, gde u svakom pojavljivanju
R<cn>je nezavisno vodonik, -C1-6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
R<2>i Q su svaki nezavisno opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril;
R<a>i R<b>su svaki nezavisno vodonik, halogen, -CN, -NO2, -N3, opciono supstituisani alkil, -OR<o3>, -N(R<n1>)2, -C(=O)N(R<n1>)2ili -C (=O)R<c2>; ili alternativno R<a>i R<b>mogu biti uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili opciono supstituisani heterociklil; pri čemu:
u svakom pojavljivanju R<n1>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
R<o3>je vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; i
R<c2>je opciono supstituisani -C1-C6alkil; i
R<j>i R<k>su svaki nezavisno vodonik, halogen, -CN, -OR<o7>, -N(R<n5>)2, -N(R<n5>)C(=O)R<c5>, -C(=O)N(R<n5>)2, -C(=O)R<c5>, -C(=O)OR<o7>, -SR<js>, -S(=O)2R<js>, -S(=O)R<js>, ili opciono supstituisani -C1-C6alkil; ili alternativno R<j>i R<k>mogu biti uzeti zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani da formiraju C=O, opciono supstituisani C1-C6monociklični cikloalkil prsten, ili opciono supstituisani C3-C6monociklični heterociklični prsten; pri čemu:
u svakom pojavljivanju R<n5>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, -OR<o8>ili zaštitna grupa za azot, pri čemu je R<o8>vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; u svakom pojavljivanju R<o7>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik;
u svakom pojavljivanju R<c5>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil; i
u svakom pojavljivanju R<js>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil, opciono supstituisani C6-12aril, opciono supstituisani heteroaril ili zaštitna grupa za sumpor.
[0054] U drugoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa R<2>opciono supstituisan na svakom zamenljivom atomu ugljenika u prstenu sa R<p>i opciono supstituisan na svakom zamenljivom atomu azota u prstenu sa R<n6>; gde:
u svakom pojavljivanju R<p>je nezavisno vodonik, halogen, -CN,-NO2,-N3, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani heteroaril, -OR<o6>, -SR<s2>, -N(R<n3>)2, -C(=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)C(=O)R<c4>, -C(=O)R<c4>, -C(=O)OR<o6>, -OC(=O) R<c4>, -S(=O)R<s2>, -S(=O)2R<s2>, -S(=O)OR<o6>, -OS(=O)R<c4>, -S(=O)2OR<o6>, -OS(=O)2R<c4>,-S(=O)N(R<n3>)2, -S=O)2N(R<n3>)2, -N(R<n3>))S(=O)R<s2>, -N(R<n3>)S(=O)2R<s2>, -N(R<n3>)C(=O)OR<o6>, -OC(=O) N(R<n3>)2, -N(R<n3>)C (=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S(=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S(=O)2N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S(=O)OR<o6>, -N(R<n3>)S(=O)2OR<o6>, -OS(=O)N(R<n3>)2ili -OS(=O)2N(R<n3>)2; ili alternativno dva primera R<p>vezana za iste ili susedne atome ugljenika, mogu biti uzeta zajedno sa atomom(ima) ugljenika za koje su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili heterocikloalkil; pri čemu:
u svakom pojavljivanju R<n3>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
u svakom pojavljivanju R<o6>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; i
u svakom pojavljivanju R<c4>je opciono supstituisani -C1-C6alkil;
u svakom pojavljivanju R<s2>je nezavisno opciono supstituisana -C1-C6 alkil ili zaštitna grupa za sumpora; i
R<n6>je vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj realizaciji.
[0055] U trećoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa R<2>izabran od jednog od sledećeg:
gde:
u svakom pojavljivanju R<nc>i R<nd>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
p je 0, 1, 2, 3 ili 4, kako valencija dozvoljava;
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj ili drugoj realizaciji.
[0056] U četvrtoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa R<2>izabran od jednog od sledećeg:
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj ili trećoj realizaciji.
[0057] U petoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa R<2>izabran od sledećeg:
Pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj ili četvrtoj realizaciji.
[0058] U šestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (II):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde q je 0, 1, 2 ili 3; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj ili petoj realizaciji. U određenim realizacijama, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno jednom od sledećih formula:
njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0059] U sedmoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (III):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde q je 0, 1, 2 ili 3; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvom, drugom, trećem, četvrtom, petom ili šestom aspektu:
[0060] U osmoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (IV):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde q je 0, 1, 2 ili 3; pri čemu su preostale varijable kako je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, ili sedmoj realizaciji.
[0061] U devetoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (V):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde q je 0, 1, 2 ili 3; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj ili osmoj realizaciji. U desetoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kojoj R<n6>je vodonik ili -C1-4alkil; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj ili devetoj realizaciji. U jedanaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu u svakom pojavljivanju R<p>je nezavisno vodonik, halogen, opciono supstituisani C1-4alkil, -CN-NO2, -N3, -OR<o4>, -N(R<n2>)2, -C(=O)N(R<n2>)2, -C(=O)R<c3>, ili -C(=O)OR<o4>; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj ili desetoj realizaciji.
[0062] U dvanaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa Q se bira između sledećeg:
gde:
u svakom pojavljivanju R<n>je nezavisno vodonik, halogen, -CN,-NO2,-N3, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani heteroaril, -OR<o4>, -SR<s1>, -N(R<n2>)2, -C(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)C(=O)R<c3>, -C(=O)R<c3>, -C(=O)OR<o4>, -OC(=O)R<c3>, -S(=O)R<s1>, -S(=O)2R<s1>, -S(=O)ORo4, -OS(=O)R<c3>, -S(=O)2OR<o4>, -OS(=O)2R<c3>, -S(=O)N(R<n2>)2, -S(=O)2N(R<n2>)2,-N(R<n2>)S(=O)R<s1>, -N(R<n2>)S(=O)2R<s1>, -N(R<n2>)C(=O)OR<o4>, -OC(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)C(=O )N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)2N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)OR<o4>, -N(R<n2>)S(=O)2OR<o4>, -OS(=O)N (R<n2>)2, ili -OS(=O)2N(R<n2>)2; ili dva primera R<n>vezana za iste ili susedne atome ugljenika, uzeta zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili heterocikloalkil; pri čemu:
u svakom pojavljivanju R<n2>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot;
u svakom pojavljivanju R<o4>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik;
u svakom pojavljivanju R<c3>je nezavisno opciono supstituisan -C1-C6alkil;
u svakom pojavljivanju R<s1>je nezavisno opciono supstituisana -C1-C6alkil ili zaštitna grupa za sumpor;
n je 0, 1, 2 ili 3, kako valencija dozvoljava; i
svaki od R<na>, R<nb>i R<nd>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot.
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj ili jedanaestoj realizaciji.
[0063] U trinaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa Q je izabran od sledećeg:
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, ili dvanaestoj realizaciji.
[0064] U četrnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa Q je izabran od sledećeg:
pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj ili trinaestoj realizaciji.
[0065] U petnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV), ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kojoj je Q
gde su preostale varijable definisane u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj ili četrnaestoj realizaciji. U daljim realizacijama, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je Q
pri čemu su ostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj ili četrnaestoj realizaciji.
[0066] U šesnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je Q
pri čemu su ostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj ili četrnaestoj realizaciji. U daljim realizacijama, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je Q
pri čemu su ostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj ili četrnaestoj realizaciji. U određenim realizacijama, R<2>i Q su isti. U određenim realizacijama, R<2>i Q su različiti.
[0067] U sedamnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je Rna vodonik ili -C1-4alkil; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, ili petnaestoj realizaciji.
[0068] U sedamnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<nb>je vodonik ili -C1-4alkil; pri čemu su preostale varijable kao dvanaesta, trinaesta, četrnaesta ili petnaesta realizacija.
[0069] U sedamnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<nd>je vodonik ili -C1-4alkil; pri čemu su preostale varijable kao dvanaesta, trinaesta, četrnaesta ili petnaesta realizacija.
[0070] U osamnaestom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je u svakom pojavljivanju R<n>nezavisno vodonik, halogen, opciono supstituisani C1-4alkil, -CN, -NO2, -N3, -ORo4, -N(Rn2)2, -C(=O)N(R<n2>)2, - C(=O)R<c3>, ili -C(=O)OR<o4>; pri čemu su preostale varijable kao što je definisano u dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj ili sedamnaestoj realizaciji.
[0071] U devetnaestoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R1 vodonik ili -C1-C4alkil; pri čemu su preostale varijable kao što su definisane u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, č etrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj ili osamnaestoj realizaciji.
[0072] U dvadesetoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<1>metil; pri čemu su ostale varijable kao što su definisane u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, š estoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj ili osamnaestoj realizaciji.
[0073] U dvadeset i prvoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<j>i R<k>su svaki nezavisno vodonik, halogen, -OR<o7>ili -C1-C4alkil; ili alternativno R<j>i R<k>su spojeni zajedno da formiraju =O pri čemu su ostale varijable kao što je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj, osamnaestoj, devetnaestoj ili dvadesetoj realizaciji.
[0074] U dvadeset drugoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<j>i R<k>su svaki vodonik; pri čemu su ostale varijable kako je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj, osamnaestoj, devetnaestoj dvadesetoj ili dvadeset prvoj realizaciji.
[0075] U dvadeset trećoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde R<a>i R<b>su svaki vodonik; pri čemu su ostale varijable kako je definisano u prvoj, drugoj, trećoj, četvrtoj, petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj, osamnaestoj, devetnaestoj, dvadesetoj, dvadeset prvoj ili dvadeset drugoj realizaciji.
[0076] U dvadeset četvrtoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde q je 0 ili 1; pri čemu su ostale varijable kako je definisano u petoj, šestoj, sedmoj, osmoj, devetoj, desetoj, jedanaestoj, dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj, osamnaestoj, devetnaestoj, dvadesetoj, dvadeset prvoj, dvadeset drugoj ili dvadeset trećoj realizaciji.
[0077] U dvadeset petoj realizaciji pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje predstavljeno Formulom (I), (II), (III), (IV) ili (V) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde n je 0 ili 1; pri čemu su ostale varijable definisane u dvanaestoj, trinaestoj, četrnaestoj, petnaestoj, šesnaestoj, sedamnaestoj, osamnaestoj, devetnaestoj, dvadesetoj, dvadeset prvoj, dvadeset drugoj, dvadeset trećoj ili dvadeset četvrtoj realizaciji.
[0078] U jednoj realizaciji, jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrana između jedinjenja Formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1.
[0079] Ovde opisana jedinjenja su korisna kao aktivatori PKR mutanata koji imaju nižu aktivnost u poređenju sa divljim tipom, stoga su korisna za metode iz ovog pronalaska. Takve mutacije u PKR mogu uticati na aktivnost enzima (katalitičku efikasnost), regulatorna svojstva (modulacija pomoću fruktoza bisfosfata (FBP)/ATP), i/ili termostabilnost enzima. Primeri takvih mutacija su opisani u Valentini et al, JBC 2002. Neki primeri mutanata koji su aktivirani ovde opisanim jedinjenjima uključuju G332S, G364D, T384M, R479H, R479K, R486W, R532W, K410E, R510Q, i R490W. Ne ograničavajući se teorijom, jedinjenja koja su ovde opisana utiču na aktivnosti PKR mutanata aktiviranjem PKR mutanata koji ne reaguju na FBP, vraćanjem termostabilnosti mutantima sa smanjenom stabilnošću ili vraćanjem katalitičke efikasnosti oštećenim mutantima. Aktivirajuća aktivnost ovih jedinjenja protiv PKR mutanata može biti testirana prema metodi opisanoj u Primerima 11-17. Ovde opisana jedinjenja su takođe korisna kao aktivatori divljeg tipa PKR.
[0080] U jednoj realizaciji, da bi se produžio životni vek crvenih krvnih zrnaca, jedinjenje, kompozicija ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se dodaje direktno celoj krvi ili upakovanim crvenim krvnim zrncima ekstrakorporalno ili se direktno daje pacijentu (npr. ip, iv, im, oralno, inhalacija (aerosolizovana isporuka), transdermalno, sublingvalno i drugim putevima za isporuku). Ne ograničavajući se teorijom, jedinjenja koja su ovde opisana produžavaju životni vek eritrocita, čime se suprotstavljaju starenju uskladištene krvi, utičući na nivo 2,3-DPG i/ili ATP iz krvi. Smanjenje nivoa koncentracije 2,3-DPG indukuje pomeranje u levo krive disocijacije kiseonik-hemoglobin i pomera alosteričku ravnotežu u R, ili stanje oksigenacije, čime se proizvodi terapeutska inhibicija intracelularne polimerizacije koja leži u osnovi srpanja povećanjem afiniteta prema kiseoniku usled smanjenja 2,3-DPG, čime se stabilizuje rastvorljiviji oksi-hemoglobin. Prema tome, u jednoj realizaciji, ovde opisana jedinjenja i farmaceutske kompozicije su korisne kao agensi protiv srpanja. U drugom aspektu, da bi se regulisao 2,3-difosfoglicerat, jedinjenje, kompozicija ili farmaceutska kompozicija koja je ovde opisana se dodaje direktno celoj krvi ili upakovanim crvenim krvnim zrncima ekstrakorporalno ili se daje pacijentu direktno (npr. putem ip, iv, im, oralno, inhalacijom (aerosolizovano), transdermalno, sublingvalno i drugim putevi isporuke). U drugoj realizaciji, ovde opisano jedinjenje, kompozicija ili farmaceutska kompozicija može povećati nivo ATP-a i pomoći u zaštiti ćelija od reaktivnih vrsta kiseonika (Mol Cell.2012 Oct 26; 48(2): 158-167).
[0081] U Tabeli 1, ovde opisano jedinjenje može imati AC50divljeg tipa PKR, PKR K410E ili PKR 510Q. "A" se odnosi na AC50manji od 0.300 µM; "B" se odnosi na AC50 od 0.301 µM do 0.800 µM; i "C" se odnosi na AC50veći od 0.800 µM. AC50divljeg tipa PKR za određena jedinjenja je dodatno određen u ćelijskom ATP testu. „AA“ se odnosi na AC50manji ili jednak 1 µM, a „BB“ se odnosi na AC50veći od 1 µM.
Tabela 1. Aktivaci a divl e ti a i mutantno PKR omoću rimernih edin en a
[0082] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti napravljena korišćenjem različitih tehnika sinteze kako je navedeno u Primerima. Transformacije hemijske sinteze i metodologije zaštitnih grupa (zaštita i deprotekcija) korisne u sintezi ovde opisanih jedinjenja su poznate u tehnici i uključuju, na primer, one kao što su opisane u R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); TW Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); i L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), i njihova naredna izdanja.
[0083] Određena aktivatorska jedinjenja korisna kao PKR divljeg tipa i/ili mutantni aktivatori su ona koja pokazuju specifičnost i aktivaciju PKR enzima (divljeg tipa i/ili mutantnog enzima) u odsustvu FBP do nivoa većeg od 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 ili 100% u prisustvu FBP.
Sinteza jedinjenja iz pronalaska
[0084]
Šema 1
[0085] U nekim realizacijama, jedinjenja Formule (I) se mogu pripremiti korišćenjem metoda ilustrovanih u Šemi 1. Tiazolil aldehid formule S1 reaguje sa etil azidoacetatom u uslovima nukleofilne adicije (npr. baza) u odgovarajućem rastvaraču (npr. etanolu) dajući intermedijere formule S2. Hidroksilna grupa formule S2 se može konvertovati u odlazeću grupu i podvrgnuti eliminaciji da se dobije formula S3. Ciklizacija i naknadna funkcionalizacija amino grupe daje biciklično jedinjenje formule S5, koje je podvrgnuto nukleofilnom premeštanju sa natrijum metanetiolatom, nakon čega sledi oksidacija da bi se dobila formula S7. Dalja ciklizacija formule S7 u prisustvu hidrazina, praćena nukleofilnim premeštanjem sa LG<1>-CH2-Q<1>u prisustvu baze daje intermedijere formule S9. Grupa sumpora u formuli S9 može biti oksidovana u sulfinil ili sulfonil da bi se dobila formula S10 ili S11, koji je supstrat za dalje nukleofilno premeštanje da bi se dobila opšta formula S12. Kako se ovde koristi, X<1>je odlazeća grupa kako je ovde definisano. U određenim realizacijama, X<1>je halogen, alkansulfoniloksi, arensulfoniloksi, diazonijum, alkil diazen, aril diazen, alkil triazen, aril triazen, nitro, alkil nitrat, aril nitrat, alkil fosfat, aril fosfat, alkil karboniloksi, aril karbonil oksi, alkoksikarbonil oksi, ariokskarbonil oksi amonijak, alkil amini, aril amini, hidroksilna grupa, alkiloksi grupa, ariloksi grupa; LG<1>je odlazeća grupa kao što je ovde definisano; Q<1>je opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisani heteroaril (npr. opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril); i Nu<1>je nukleofil kako je ovde definisano (npr opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril alkilen). Nu<l>jedinjenja formule S12 se dalje može konvertovati u druge funkcionalnosti standardnim hemijskim transformacijama. R<1>je kao što je definisano u prvoj realizaciji. U određenim realizacijama, Q<1>je opciono supstituisani heteroaril.
Šema 2
[0086] U nekim realizacijama, jedinjenja Formule (I) se mogu pripremiti korišćenjem metoda prikazanih na Šemi 2. Slično Šemi 1, formula S21 se može dobiti od tiazol aldehida formule S13. Halogenacija formule S21 daje formulu S22, koja može da prođe reakciju organo kuplovanja sa alkil metalom, alkenil metalom, alkinil metalom, aril metalom, heteroaril metalom, heterociklil metalom ili cikloalkil metalom da bi se dobilo jedinjenje formule S23. Kako se ovde koristi, X<3>je halogen; R<1>je kao što je definisano u prvoj realizaciji pronalaska; LG<2>je odlazeća grupa kao što je ovde definisano; Q<2>je opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril, ili opciono supstituisani heteroaril (npr. opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril); M<1>je metal (npr. Li, Na, K, Mg, Zn, Sn, B, Pd, Si, Cu itd.), X<4>je halogen ili estar alkil sulfonske kiseline ili estar aril sulfonske kiseline; R<r1>je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril, ili opciono supstituisani heteroaril. U određenim realizacijama, reakcija organskog kuplovanja je Negišijeva reakcija; X<3>je I; a M<1>je Zn.
[0087] Jedinjenja formule S22 i S23 su korisni intermedijeri za uvođenje više funkcionalnosti na X<3>i/ili R<r1>poziciji (Šema 3). U određenim realizacijama, jedinjenje formule 23-i se može dalje oksidovati da bi se formirala formula S24. Nukleofilno adicija S24 sa odgovarajućim nukleofilom generiše jedinjenje S25. U sledećoj realizaciji, jedinjenja formule S22 mogu biti kuploovana sa vinil metalom da bi se vinil grupa uvela u prsten tiazola. Oksidacija vinil grupe praćena nukleofilnim adicijom daje jedinjenje formule S28. Kako se ovde koristi, Nu<2>je nukleofil. U određenim realizacijama, R<r1>je opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroarilalkilen i Q<2>je opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril.
Šema 3
[0088] Kako se ovde koristi, R<r2>je opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril, ili opciono supstituisani heteroaril; i Q<2>je kao što je definisano u Šemi 2. U određenim realizacijama, R<r2>i Q<2>su svaki nezavisno opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril.
[0089] Kako se ovde koristi, nukleofil je hemijska vrsta koja donira elektronski par elektrofilu da bi formirala hemijsku vezu u vezi sa reakcijom. Svi molekuli ili joni sa slobodnim parom elektrona ili bar jednom pi vezom mogu delovati kao nukleofili. Primeri nukleofila obuhvataju najmanje jednu grupu koja poseduje nukleofilnu funkcionalnost, na primer, alfa ugljenik (npr. ugljenik pored karbonila, sulfonila, sulfinila, aril grupe ili heteroarila), tiol grupu, hidroksil grupu, primarnu aminsku grupu, sekundarnu aminsku grupu, halid, cijanid, azid, alkoksid, organski metal ili neorgansku bazu.
[0090] U nekim realizacijama, jedinjenja kao što su ovde opisana mogu da se pripreme korišćenjem metoda prikazanih na Šemi 4. Nukleofilno zamenjivanje formula S30 i S33 sa sekundarnim cikličnim aminom daje formule S31 i S34 respektivno. Reakcije organskog kuplovanja (npr. Suzuki kuplovanje, Stillecoupling itd.) jedinjenja S35 daju jedinjenje formule S36(i)-(ii).
[0091] Kako se ovde koristi,
predstavlja 5- ili 6-člani monociklični heteroaril prsten A sa azotom kao atomom u prstenu. Kako se ovde koristi,
predstavlja 5- ili 6-člani monociklični heteroaril prsten B sa tačkom vezivanja na atomu ugljenika u prstenu.
[0092] R<1>je kao što je definisano u prvoj realizaciji. X<4>je halogen ili -OTf. M<4>je organski metal sa odgovarajućim ligandima ako je potrebno (organskim ili neorganskim) kako valenca dozvoljava. Primer M<4>uključuje, ali nije ograničen na organski Li, Sn, B (npr. boronske kiseline i boronski estri), Zn, Mg, Si, Pd i Cu.
Metode lečenja
[0093] U jednoj realizaciji, obezbeđen je postupak za lečenje bolesti, stanja ili poremećaja kao što je ovde opisano (npr. lečenje) koji se sastoji od administriranja jedinjenja, farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje (npr. jedinjenje Formule (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1.
[0094] Ovde opisana jedinjenja i kompozicije mogu biti administrirana ćelijama u kulturi, npr. in vitro ili ex vivo ili subjektu, na primer, in vivo, za lečenje i/ili dijagnostikovanje raznih poremećaja, uključujući one opisane u nastavku.
[0095] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđen metod za produženje ž ivotnog veka crvenih krvnih zrnaca (RBC) kojima je to potrebno, koji obuhvata dovođenje krvi u kontakt sa efikasnom količinom (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. Formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0096] U daljoj realizaciji jedinjenje ili farmaceutska kompozicija se dodaje direktno u punu krv ili upakovana crvena krvna zrnca (npr. ekstrakorporalno). U drugoj realizaciji, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija se administrira subjektu kome je to potrebno.
[0097] U jednoj varijanti pronalaska je obezbeđen metod za regulisanje nivoa 2,3-difosfoglicerata u krvi kojoj je to potrebno dovodeći u kontakt krv sa efikasnom količinom (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja F Formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0098] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđen metod za lečenje bolesti srpastih ćelija koji se sastoji od administriranja subjektu kome je to potrebno efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja formule (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0099] Kako se ovde koristi, bolest srpastih ćelija (SCD), Hemoglobin SS bolest i anemija srpastih ćelija se koriste naizmenično. Bolest srpastih ćelija (SCD) opisuje grupu naslednih poremećaja crvenih krvnih zrnaca. U određenim realizacijama, subjekti sa SCD imaju abnormalan hemoglobin, nazvan hemoglobin S ili srpasti hemoglobin, u svojim crvenim krvnim zrncima. U određenim realizacijama, subjekt koji ima SCD ima najmanje jedan abnormalan gen koji uzrokuje da telo proizvodi hemoglobin S. U određenim realizacijama, subjekt koji ima SCD ima dva gena za hemoglobin S, Hemoglobin SS.
[0100] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđen metod lečenja deficijencije piruvat kinaze (PKD) kod subjekta koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0101] Kao što je ovde opisano, PKD je deficijencija PKR. U određenim realizacijama, deficijencija PKR je povezana sa PKR mutacijom. U određenim realizacijama, PKD se odnosi na prisustvo najmanje 2 mutantna alela u PKLR genu. U određenim realizacijama, najmanje 1 od najmanje 2 mutantna alela u PKLR genu je misens mutacija. U određenim realizacijama, pacijent sa PKD ima koncentraciju Hb manju ili jednaku 10.0 g/dL. U određenim realizacijama, pacijent nije pod redovnom transfuzijom (npr. nije imao više od 4 epizode transfuzije u periodu od 12 meseci). U određenim realizacijama, pacijent je pod redovnom transfuzijom (npr. imao je najmanje 4 epizode transfuzije u periodu od 12 meseci). U određenim realizacijama, pacijent je pod redovnom transfuzijom i ima najmanje 6 epizoda transfuzije u periodu od 12 meseci. U određenim rešenjima, pacijent pod redovnom transfuzijom ima hemoglobin (Hb) ≤12.0 g/dL (ako je muškarac) ili ≤11.0 g/dL (ako je žensko). primer 15 U određenim realizacijama, pacijent je podvrgnut splenektomiji.
[0102] U jednoj realizaciji, PKR mutacija je izabrana iz grupe koju čine A31V, A36G, G37Q, R40W, R40Q, L73P, S80P, P82H, R86P, I90N, T93I, G95R, M107T, G111R, A115P, S120F, H121Q, S130P, S130Y, V134D, R135D, A137T, G143S, I153T, A154T, L155P, G159V, R163C, R163L, T164N, G165V, L167M, G169G, E172Q, W201R, I219T, A221Y, D221N, G222A, I224T, G232C, N253D, G263R, G263W, E266K, V269F, L272V, L272P, G275R, G275R, E277K, V280G, D281N, F287V, F287L, V288L, D293N, D293V, A295I, A295V, I310N, I314T, E315K, N316K, V320L, V320M, S330R, D331N, D331G, D331E, G332S, V335M, A336S, R337W, R337P, R337Q, D339N, D339Q, G341A, G341D, I342F, K348N, A352D, I357T, G358R, G358E, R359C, R359H, C360Y, N361D, G364D, K365M, V368F, T371I, L374P, S376I, T384M, R385W, R385K, E387G, D390N, A392T, N393D, N393S, N393K, A394S, A394D, A394V, V395L, D397V, G398A, M403I, G406R, E407K, E407G, T408P, T408A, T4081, K410E, G411S, G411A, Q421K, A423A, A423A, R426W, R426Q, E427A, E427N, A431T, R449C, 1457V, G458D, A459V, V460M, A468V, A468G, A470D, T477A, R479C, R479H, S485F, R486W, R486L, R488Q, R490W, I494T, A495T, A495V, R498C, R498H, A503V, R504L, Q505E, V506I, R510Q, G511R, G511E, R518S, R531C, R532W, R532Q, E538D, G540R, D550V, V552M, G557A, R559G, R559P, N566K, M568V, R569Q, R569L, Q58X, E174X, W201X, E241X, R270X, E440X, R486X, Q501X, L508X, R510X, E538X, R559X. Ove mutacije su opisane u Canu et.al., Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, str. 100-109. U jednoj realizaciji, mutantni PKR je izabran između G332S, G364D, T384M, K410E, R479H, R479K, R486W, R532W, R510Q, i R490W. U određenim realizacijama, mutantni PKR je izabran između A468V, A495V, I90N, T408I, i Q421K, i R498H. U određenim realizacijama, mutantni PKR je R532W, K410E ili R510Q.
[0103] U jednoj realizaciji pronalaska dobezbeđen je metod lečenja anemije kod subjekta koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim realizacijama, anemija je diseritropoetska anemija kao što je kongenitalna diseritropoetska anemija tipa I, II, III ili IV. U određenim realizacijama, anemija je hemolitička anemija. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je urođeni i/ili nasledni oblik hemolitičke anemije kao što je PKD, bolest srpastih ćelija, talasemije (npr alfa ili beta), nasledna sferocitoza, nasledna eliptocitoza), paroksizmalna noćna hemoglobinurija, beta-liproteinemija (Basen-Kornzweig sindrom). U određenim realizacijama, hemolitička anemija je stečena hemolitička anemija, kao što je autoimuna hemolitička anemija, hemolitička anemija izazvana lekovima. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je anemija kao deo višesistemske bolesti, kao što je anemija Kongenitalne Eritropoetske Purpure, Fankonijeva, Diamond-Blackfan anemija.
[0104] Kako se ovde koristi, termin "anemija" se odnosi na deficijenciju crvenih krvnih zrnaca (RBC) i/ili hemoglobina. Kako se ovde koristi, anemija uključuje sve vrste kliničkih anemija, na primer (ali ne ograničavajući se na): mikrocitnu anemiju, anemiju zbog nedostatka gvožđa, hemoglobinopatije, defekt sinteze hema, defekt sinteze globina, sideroblastični defekt, normocitnu anemiju, anemije hronične bolesti, aplastična anemija, hemolitička anemija, makrocitna anemija, megaloblastična anemija, perniciozna anemija, dimorfna anemija, anemija nedonoščadi, Fankonijeva anemija, hereditarna sferocitoza, bolest srpastih ćelija, autoimuna hemolitička anemija sa toplim antitelima, hemolitička anemija hladnih aglutinina, osteopetroza, talasemija i mijelodisplastični sindrom.
[0105] U određenim realizacijama, anemija se može dijagnostikovati na osnovu kompletne krvne slike. U određenim realizacijama, anemija se može dijagnostikovati na osnovu merenja jednog ili više markera hemolize (npr. broj eritrocita, hemoglobin, retikulociti, šistociti, laktat Dehidrogenaza (LDH), haptoglobin, bilirubin i feritin) i/ili hemosiderinurija srednje zapremine eritrocita (MCV) i/ili širina distribucije crvenih krvnih zrnaca (RDW). U kontekstu ovog pronalaska, anemija je prisutna ako pojedinac ima hemoglobin (Hb) manji od željenog nivoa, na primer, koncentraciju Hb manju od 14 g/dL, poželjnije manju od 13 g/dL, poželjnije manju od 12 g/dl dL, poželjnije manju od 11 g/dL, ili najpoželjnije manju od 10 g/dL.
[0106] U određenim realizacijama, ovde je obezbeđen metod povećanja količine hemoglobina kod subjekta u njemu administriranjem efikasne količine jedinjenja kako je ovde opisano, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili njegove farmaceutski prihvatljive kompozicije. U određenim realizacijama, obezbeđeni postupak povećava koncentraciju hemoglobina kod subjekta. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb do željenog nivoa, na primer, iznad 10 g/dL, poželjnije iznad 11 g/dL, poželjnije iznad 12 g/dL, poželjnije iznad 13 g/dL, ili najpoželjnije iznad 14 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 0.5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 1.0 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 1.5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 2.0 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 2.5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 3.0 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 3.5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 4.0 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 4.5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 5.0 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 5,5 g/dL. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda povećava koncentraciju Hb za najmanje oko 6.0 g/dL.
[0107] U jednoj realizaciji pronalaska obezbeđen je metod za lečenje hemolitičke anemije koji se sastoji od administriranja subjektu efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0108] U sledećoj realizaciji, hemolitička anemija je nasledna i/ili kongenitalna hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija ili anemija kao deo multisistemske bolesti. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je urođena anemija. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna (npr. ne-sferocitna hemolitička anemija ili nasledna sferocitoza).
[0109] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđen metod lečenja talasemije; nasledne sferocitoze; nasledne eliptocitoze; abetalipoproteinemije ili Bassen-Kornzweig sindroma; paroksizmalne noćne hemoglobinurije; stečene hemolitičke anemije (npr. kongenitalne anemije (npr. enzimopatije)); bolesti srpastih ćelija; ili anemije hroničnih bolesti koja obuhvata administriranje subjektu efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja formule (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednoj realizaciji, stečena hemolitička anemija obuhvata kongenitalne anemije. U određenim realizacijama, obezbeđena metoda je za lečenje talasemije. U određenim realizacijama, talasemija je beta-talasemija.
[0110] Kako se ovde koristi, talasemija je nasledni poremećaj krvi u kome telo pravi abnormalni oblik hemoglobina. U određenim realizacijama, poremećaj dovodi do uništenja velikog broja crvenih krvnih zrnaca, što dovodi do anemije. U određenim realizacijama, talasemija je alfa talasemija. U određenim realizacijama, talasemija je beta talasemija.
[0111] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđen metod za aktiviranje mutantnog PKR u crvenim krvnim zrncima koji se sastoji od administriranja subjektu kome je to potrebno efikasne količine (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja formule (I) -(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednoj realizaciji, metoda je ex vivo metoda. U drugoj realizaciji, metoda je in vitro metoda. U nekim realizacijama, krv ili crvena krvna zrnca su izvedena ili dobijena od subjekta koji pati ili je podložan bolesti ili poremećaju izabranom iz grupe koju čine deficijencija piruvat kinaze (PKD), talasemija (npr. beta talasemija), nasledna sferocitoza, nasledna eliptocitoza, abetalipoproteinemija ili Bassen-Kornzweig sindrom, bolest srpastih ćelija, paroksizmalna noćna hemoglobinurija, anemija (npr. diseritropoetska anemija), hemolitička anemija i anemija hroničnih bolesti. U nekim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna i/ili kongenitalna hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija, ili anemija kao deo višesistemske bolesti.
[0112] U jednom aspektu pronalaska dat je postupak za aktiviranje divljeg tipa PKR u crvenim krvnim zrncima koji se sastoji od davanja subjektu kome je to potrebno efektivne količine (1) jedinjenja opisanog ovde (npr. jedinjenja formule ( I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljivog sastava koji sadrži jedinjenje opisano ovde ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač U jednom aspektu, metoda je ex vivo metoda. U drugom aspektu, metoda je in vitro metoda. U nekim realizacijama, krv ili crvena krvna zrnca su izvedena ili dobijena od subjekta koji boluje ili je podložan bolesti ili poremećaj izabran iz grupe koju čine nedostatak piruvat kinaze (PKD), talasemija (npr. beta talasemija), nasledna sferocitoza, nasledna eliptocitoza, abetalipoproteinemija ili Bassen-Kornzweig sindrom, bolest srpastih ć elija, paroksizmalna noćna hemoglobinurija, anemija (npr. diseritropoetska anemija), hemolitička anemija i anemija hroničnih bolesti. U nekim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna i/ili kongenitalna hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija ili anemija kao deo višesistemske bolesti.
[0113] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđena upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja sa Formulama (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za povećanje životnog veka crvenih krvnih zrnaca (RBC) kojima je to potrebno.
[0114] U narednoj realizaciji jedinjenje ili farmaceutska kompozicija je formulisana da se dodaje direktno celoj krvi ili upakovanim crvenim krvnim zrncima ekstrakorporalno. U drugom aspektu, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija je formulisana da se administrira subjektu kome je to potrebno.
[0115] U jednoj realizaciji pronalaska je data upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formula (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za regulisanje nivoa 2,3-difosfoglicerata u krvi kojoj je to potrebno.
[0116] U jednoj realizaciji pronalaska je data upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formula (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za lečenje anemije. U određenim realizacijama, anemija je diseritropoetska anemija kao takva kao kongenitalna diseritropoetska anemija tipa I, II, III ili IV. U određenim realizacijama, anemija je hemolitička anemija. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je urođeni i/ili nasledni oblik hemolitičke anemije kao što je PKD, bolest srpastih ćelija, talasemije (npr. alfa ili beta), nasledna sferocitoza, nasledna eliptocitoza), paroksizmalna noćna hemoglobinurija, abeta-liproteinemija. (Basen-Korncvajg sindrom). U određenim realizacijama, hemolitička anemija je stečena hemolitička anemija, kao što je autoimuna hemolitička anemija, hemolitička anemija izazvana lekovima. U određenim realizacijama, hemolitička anemija je anemija kao deo multisistemske bolesti, kao što je anemija Kongenitalne Eritropoetske Purpure, Fankoni, Diamond-Blackfana.
[0117] U jednoj realizaciji pronalaska je data upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formula (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za lečenje hemolitičke anemije.
[0118] U jednoj realizaciji pronalaska je data upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja sa formulama (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za lečenje bolesti srpastih ćelija.
[0119]U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđena upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formula (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za lečenje deficijencije piruvat kinaze (PKD) kod subjekta.
[0120] Kao što je ovde opisano, PKD je deficijencija PKR. U određenim realizacijama, nedostatak PKR je povezan sa PKR mutacijom.
[0121] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđena upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja sa Formulama (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za lečenje talasemije; nasledne sferocitoze; nasledne eliptocitoze; abetalipoproteinemije ili Bassen-Kornzveig sindroma; paroksizmalne noćne hemoglobinurije; stečene hemolitičke anemije; ili anemije hroničnih bolesti.
[0122] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđena upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formule (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za aktiviranje mutantnog PKR u crvenim krvnim zrncima.
[0123] U jednoj realizaciji pronalaska je obezbeđena upotreba (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja sa Formulama (I)-(V), u Primerima i Tabeli 1 i Slici 1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač za pripremu leka za aktiviranje divljeg tipa PKR u crvenim krvnim zrncima.
[0124] U jednoj realizaciji pronalaska, obezbeđen je metod aktiviranja piruvat kinaze R (PKR), koji obuhvata dovođenje u kontakt PKR sa efikasnom količinom (1) ovde opisanog jedinjenja (npr. jedinjenja Formule (I)-(V), u Primerima, i u Tabeli 1 i Slici 1), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli; ili (2) farmaceutski prihvatljive kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U jednoj realizaciji, PKR je PKR divljeg tipa. U drugoj realizaciji, PKR je mutantni PKR. U nekim realizacijama, PKR je eksprimiran u crvenim krvnim zrncima. U jednoj realizaciji, postupak je ex vivo metod. U drugoj realizaciji, postupak je in vitro metod. U nekim realizacijama, krv ili crvena krvna zrnca su izvedena ili dobijena od subjekta koji pati ili je podložan bolesti ili poremećaju izabranom iz grupe koju čine deficijencija piruvat kinaze (PKD), talasemija (npr. beta talasemija), nasledna sferocitoza, nasledna eliptocitoza, abetalipoproteinemija ili Bassen-Kornzveig sindrom, bolest srpastih ćelija, paroksizmalna noćna hemoglobinurija, anemija (npr. diseritropoetska anemija), hemolitička anemija i anemija hroničnih bolesti. U nekim realizacijama, hemolitička anemija je nasledna i/ili kongenitalna hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija, ili anemija kao deo višesistemske bolesti.
[0125] Pošto ovde opisana jedinjenja i kompozicije deluju na isti biološki put i imaju sličan način delovanja kao jedinjenja opisana u WO2012/151451, jedinjenja i kompozicije koja su predstavljene ovde mogu da aktiviraju PKR mutante kao što je opisano u WO2012/151451.
Kompozicije i putevi administracije
[0126] Ovde opisane kompozicije uključuju ovde opisana jedinjenja (npr. ovde opisano jedinjenje), kao i dodatne terapeutske agense ako su prisutni, u količinama efikasnim za postizanje modulacije bolesti ili simptoma bolesti, uključujući one ovde opisane.
[0127] Termin "farmaceutski prihvatljiv nosač ili ađuvans" se odnosi na nosač ili pomoćno sredstvo koje se može administrirati pacijentu, zajedno sa jedinjenjem koje je ovde obezbeđeno, i koje ne uništava njegovu farmakološku aktivnost i nije toksično kada se daje u dozama dovoljnim da isporuči efikasnu količinu jedinjenja.
[0128] Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi i nosači koji se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama koje su ovde date uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, glinicu, aluminijum stearat, lecitin, samoemulgujuće sisteme za isporuku leka (SEDDS) kao š to je d-α-tokoferol polietilenglikol 1000 sukcinat, surfaktanti koji se koriste u farmaceutskim doznim oblicima kao što su Tweens ili druge slične polimerne matrice za isporuku, serumski proteini, kao što je albumin humanog seruma, puferske supstance kao š to su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične mešavine glicerida zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidna silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilen blok polimeri, polietilen glikol i vunena mast. Ciklodekstrini kao što su a-, b- i g-ciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što su hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropil-b-ciklodekstrin, ili drugi rastvoreni derivati takođe se mogu korisno koristiti za poboljšanje isporuke jedinjenja ovde opisane formule.
[0129] Farmaceutske kompozicije date ovde mogu se administrirati oralno, parenteralno, sprejom za inhalaciju, lokalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara, poželjno oralnom administracijom ili administracijom injekcijom. Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene mogu sadržati bilo koje konvencionalne netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvanse ili nosače.
[0130] Farmaceutske kompozicije koje su ovde obezbeđene se mogu oralno administrirati u bilo kom oralno prihvatljivom doznom obliku uključujući, ali ne ograničavajući se na, kapsule, tablete, emulzije i vodene suspenzije, disperzije i rastvore. U slučaju tableta za oralnu primenu, nosači koji se obično koriste uključuju laktozu i kukuruzni skrob. Lubrikanti, kao što je magnezijum stearat, takođe se obično dodaju.
Za oralnu administraciju u obliku kapsula, korisni diluenti uključuju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada se vodene suspenzije i/ili emulzije administriraju oralno, aktivni sastojak može biti suspendovan ili rastvoren u uljnoj fazi kombinovanoj sa agensima za emulgovanje i/ili suspendovanje.
[0131] Kada kompozicije koje su ovde obezbeđene sadrže kombinaciju jedinjenja sa formulama koje su ovde opisane i jedan ili više dodatnih terapeutskih ili profilaktičkih agenasa, i jedinjenje i dodatni agens treba da budu prisutni u nivoima doza između oko 1 do 100%, i poželjnije između oko 5 do 95% doze koja se normalno primenjuje u režimu monoterapije. Dodatni agensi se mogu administrirati odvojeno, kao deo režima višestrukih doza, od jedinjenja koja su ovde obezbeđena. Alternativno, ti agensi mogu biti deo pojedinačnog doznog oblika, pomešani zajedno sa jedinjenjima koja su ovde obezbeđena u jednoj kompoziciji.
[0132] Ovde opisana jedinjenja se mogu, na primer, administrirati injekcijom, intravenozno, intraarterijski, subdermalno, intraperitonealno, intramuskularno ili subkutano; ili oralno, bukalno, nazalno, transmukozno, lokalno, u oftalmološkom preparatu, ili inhalacijom, sa dozom u rasponu od oko 0.5 do oko 100 mg/kg telesne težine, alternativno doze između 1 mg i 1000 mg/dozi, svaka 4 do 120 sati, ili prema zahtevima određenog leka. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalima nosača da bi se dobio jedan dozni oblik će varirati u zavisnosti od domaćina koji se leči i konkretnog načina administracije. Tipičan preparat će sadržati od oko 5% do oko 95% aktivnog jedinjenja (tež/tež). Alternativno, takvi preparati sadrže od oko 20% do oko 80% aktivnog jedinjenja.
EKSPERIMENTI
Lista skraćenica:
[0133]
Opšti eksperimentalni deo
[0134] U sledećim primerima, hemijski reagensi su nabavljeni iz komercijalnih izvora (kao što su Alfa, Acros, Sigma Aldrich, TCI i Shanghai Chemical Reagent Company), i korišćeni su bez daljeg prečišćavanja. Fleš hromatografija je izvedena na Ez Purifier III preko kolone sa česticama silika gela od 200-300 esh. Ploče za analitičku i preparativnu tankoslojnu hromatografiju (TLC) su bile HSGF 254 (debljina 0.15-0.2 mm, Shanghay Anbang Company, Kina). Spektri nuklearne magnetne rezonance (NMR) su snimljeni korišćenjem Brucker AMX-300 ili AMX-400 NMR (Brucker, Švajcarska). Hemijski pomaci su prijavljeni u delovima na milion (ppm, δ ) etero(ESI) sa Waters LCT TOF masenog spektrometra (Waters, SAD). HPLC hromatografi su snimljeni na Agilent 1200 Tečnom Hromatografu (Agilent, SAD, kolona: Ultimate 4.6 m x 50mm, 5 M, mobilna faza A: 0.1% mravlja kiselina u vodi; mobilna faza B: acetonitril). Mikrotalasne reakcije su izvedene na Initiator 2.5 Microwave Synthesizer (Biotage, Švedska).
[0135] HPLC uslovi koji su korišćeni u ovde opisanim eksperimentima su sledeći:
Metod 1:
[0136]
Instrument: Shimadzu LC-2010AHT
Kolona: YMC-Triart C18, 50 X 4.6 mm, 5 µm
Mobilna faza:
Solvent A: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1,
Solvent B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1
Brzina protoka: 2.5 mL/ min; Temperatura kolone: 35°C; Talasna dužina: 220 nm/254 nm
Metod 2:
[0137]
Instrument: Shimadzu LC-2010AHT
Kolona: IMC-Triart C18, 50 X 4.6 mm, 5 µm
Mobilna faza:
Rastvarač A: H2O/CH3OH/TFA= 90/10/0.1
Rastvarač B: H2O/CH3OH/TFA = 90/10/0.1
Brzina protoka: 2.5 mL/min; Temperatura kolone: 35°C; Talasna dužina: 220nm/254nm
[0138] Uslovi Prep-HPLC korišćeni u ovde opisanim eksperimentima su: Instrument:Waters 2545B/2767
Kolona: IMC-Triart C18, 50 X 4.6 mm, 5 mm
Mobilna faza:
Rastvarač A: H2O 01.% FA),
Rastvarač B: CH3OH ili CH3CN
Brzina protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 35°C; Talasna dužina: 220 nm/254 nm
Primer 1. Sinteza 6-(3-metoksibenzil)-2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5-ona.
[0139]
Korak A. Etil (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il) akrilat. U rastvor NaOEt (803 mg, 11.79 mmol) u EtOH (10 mL) između oko -10 °C i oko -5 °C dodat je u kapima rastvor 2-metiltiazol-5-karbaldehida (500 mg, 3.93 mmol) i etil 2-azidoacetata (1.53 g, 11.79 mmol) u anhidrovanom EtOH (3 mL). Reakciona smeša je mešana oko 1 h pri čemu je temperatura održavana ispod 0 °C, zatim zagrejana do sobne temperature i mešana još 2 sata. Dobijena smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4CI (50 mL) na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (500 mg) koji je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS: m/z 239 (M+H)<+>.
Korak B. Etil 2-metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat. Smeša etil (Z)-2-azido-3-(2-metiltiazol-5-il) akrilata (500 mg, 2.1 mmol) u o-ksilenu (5 mL) je mešana na 140 °C tokom 2 sata. zatim ohlađena do sobne temperature a zatim direktno prečišćena hromatografijom na koloni sa silika gelom (eluent: pentan/EtOAc = 6/1 da se dobije željeni proizvod (220 mg, prinos 49.8 %). LCMS: m/z 211 (M+H)<+>.
Korak C. Etil 2,4-dimetil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat. U rastvor etil 2-metil-4H-pirolo[2,3-d] tiazol-5-karboksilata (160 mg, 0.76 mmol) u DMF (3 mL) na 0 °C dodat je NaH (36.5 mg, 1.52 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h, nakon čega je usledilo dodavanje CH3J (47 µL, 0.76 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h a zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4Cl na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: pentan/etil acetat = 6/1) da bi se dobio željeni proizvod (124 mg, prinos 72.6 %). LCMS: m/z 225 (M+H)<+>.
Korak D. Etil 6-formil-2,4-dimetil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat. U smešu etil 2,4-dimetil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (100 mg, 0.446 mmol) u DMF (1 mL)) na 0 °C dodat je POCl3(122.5 mL).1.338 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 h, a zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NaHCO3na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: pentan/etil acetat = 5/1) da bi se dobio željeni proizvod (57 mg, 50.7 % prinos). LCMS: m/z 253 (M+H)<+>.
Korak E. 2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U smešu etil 6-formil-2,4-dimetil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (57 mg, 0.226 mmol) u 2-etoksietanolu (2 mL) je dodat N2H4.H2O (53.7 mL, 1.130 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 1 h, a zatim sipana u H2O i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom; osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: pentan/etil acetat = 5/1) da bi se dobio željeni proizvod (49 mg, 98.4 % prinos). LCMS: m/z 221 (M+H)<+>.
Korak F. 6-(3-metoksibenzil)-2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U smešu 2,4-dimetil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona (49 mg, 0.223 mmol) u DMF (1 mL) na 0 °C je dodat t-BuOK (50.8 mg, 0.454 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h, nakon čega je usledilo dodavanje 1-(hlorometil)-3-metoksibenzena (34.9 mg, 0.223 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, a zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4Cl na 0 °C i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: pentan/etil acetat = 3/1) da bi se dobio željeni proizvod. LCMS: m/z 341 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (s, 1H), 7.23 (t, 1H), 6.92 - 6.72 (m, 3H), 5.32 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).
[0140] Primer 1 daje primer sinteze jedinjenja E1-3. Podrazumeva se da različita jedinjenja mogu da se sintetišu sa odgovarajućim heteroaril-CH2-halidom.
Primeri 2. Priprema jedinjenja formule E2-vii sa Šemom E2
[0141]
Šema E2
u kojoj X je odlazeća grupa (npr. Cl, Br ili J, OMs, ili OTs); M je organski metalni kompleks (npr organoboronski kompleks kao što je boronska kiselina ili pinako boronski kompleks, organotin kompleks kao što je -Sn(Bu')3; kompleks organocinka kao što je -Zn(halogen)); Q i R<2>su svaki nezavisno opciono supstituisani 5-člani ili 6-člani heteroaril. Slično sintezi jedinjenja Formule E1-v u Primeru 1, jedinjenje E2-iv se može sintetizovati iz tiazol aldehida E2-i uz nekoliko modifikacija (npr. reakcija jedinjenja E2-ii sa MsCl nakon čega sledi eliminacija da bi se dobilo jedinjenje E2-iii; triciklični sistem se može formirati sa kat. AcOH u 2-metoksietanolu). Supstitucija i jodinacija jedinjenja E2-iv daje jedinjenje E2-vi. Kuplovanje jedinjenja E2-vi sa organometalom u prisustvu katalizatora daje jedinjenje E2-vii.
Primer 2A. Sinteza 4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo-[2,3-d]piridazin-5-ona
[0142]
Korak A. Etil 2-azido-3-hidroksi-3-(tiazol-5-il) propanoat. Natrijum (12.2 g, 0.531 mol) je polako dodat na sobnoj temperaturi u mešani rastvor suvog EtOH (300 mL). Reakciona smeša je zatim ohlađena na -20°C, a zatim je u kapima dodavan rastvor etil 2-azidoacetata (68.5 g, 0.531 mol) i tiazol-5-karbaldehida (20.0 g, 0.177 mol) u anhidrovanom EtOH (100 mL) uz održavanje temperature između -20°C do -15°C. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana na -20°C još 1 sat, a zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (1L). Dobijena smeša je zasićena sa NaCl i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovana organska faza je isprana slanim rastvorom, osušena preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu korišćenjem (eluent: PE/EtOAc= 6/1 do 5/1 do 1/1) da bi se dobio željeni proizvod (34 g) blede boje. LCMS: m/z = 243 (M+H)<+>.
Korak B. Etil (Z)-2-azido-3-(tiazol-5-il)akrilat. U mešanu smešu etil 2-azido-3-hidroksi-3-(tiazol-5-il) propanoata (103 g, 0.426 mol) u suvom DCM (1.5 L) na -35°C dodat je MsCl (146 g, 1.28 mol), nakon čega sledi dodavanje TEA u kapima (301 g, 2.98 mol) uz održavanje temperature između -35°C do -30°C. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana na -30°C još 15 min, a zatim sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4CI (1.5 L). Dobijena smeša je zasićena sa NaCl i ekstrahovana sa DCM dva puta. Kombinovani organski slojevi su isprani redom sa vodenim rastvorom HCl (1 M) i slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu korišćenjem (eluent: PE/EtOAc= 5/1) da bi se dobio željeni proizvod (82.0 g, 86.3% prinos). LCMS: m/z = 225 (M+H)<+>.
Koraci CE za sintezu etil 4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata, etil 4-metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata i etil 6-formil-4- metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat su bili slični procedurama u Primeru 1.
Korak F. Etil (E)-6-(hidrazonometil)-4-metil-4H-pirolo[2, 3-d]tiazol-5-karboksilat. U mešanu smešu N2H4.H2O (2.0 g, 98%, 40 mmol) u 2-metoksietanolu (50 mL) na sobnoj temperaturi dodat je etil 6-formil-4-metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat (4.8 g, 20 mmol), nakon čega je dodato 20 kapi AcOH. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi oko 30 min dok nije postala bistra. Dobijena smeša je sipana u vodu (100 mL) uz mešanje i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su sušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS: m/z = 253 (M+H)<+>.
Korak G. 4-Metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U mešanu suspenziju etil (E)-6-(hidrazonometil)-4-metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (4.8 g, 0.19 mol) u 2-metoksietanolu (50 mL) na sobnoj temperaturi je dodat AcOH (20 kapi). Reakciona suspenzija je mešana na 105°C tokom 3 h. a zatim filtrirana. Filterski kolač je ispran vodom i osušen pod visokim vakuumom da bi se dobila prva serija željenog proizvoda. Filtrat je razblažen vodom i ekstrahovan sa DCM dva puta. Organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobila druga serija željenog proizvoda. Kombinovane dve serije željenog proizvoda (2.5 g) su direktno korišćene u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS: m/z = 207 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.68 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 4.30 (s, 3H)
Primer 3. Sinteza jedinjenja E3-vii i E3-viii
[0143]
Šema E3
u kojoj Hal je halogen (npr. Cl, Br ili I); LG je odlazeća grupa (npr. Cl, Br, I, OMs ili OTs); Q je opciono supstituisani 5-člani ili 6-člani heteroaril; i Q' je dalje funkcionalizovan 5-člani ili 6-člani heteroaril. Reakcija aromatične supstitucije jedinjenja E3-i sa natrijum metanetiolatom daje jedinjenje E3-ii, koje se može konvertovati u jedinjenje E3-v korišćenjem sinteze jedinjenja E1-iii u E1-vi. Oksidacija jedinjenja E3-v sa mCPBA daje jedinjenje E3-vi i E3-vii respektivno.
Primer 3A. Sinteza 4-metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0144]
Korak A: Etil 4-metil-2-(metiltio)-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilat. U smešu etil 2-bromo-4-metil-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (500.0 mg, 1.73 mmol) u EtOH (10.0 mL) dodat je NaSMe (240.0 mg, 3.5 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 3 sata, zatim ugašena ledenom vodom i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (460 mg) koji je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: m/z 257 (M+H)<+>.
Korak B: Etil 6-formil-4-metil-2-(metiltio)-4H-pirolo[2, 3-d]tiazol-5-karboksilat. U rastvor etil 4-metil-2-(metiltio)-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (460.0 mg, 1.8 mmol) i N-metil-N-fenilformamida (490 mg, 3.6 mmol) u DCE (10 mL) je dodat POCl3(550.0 mg, 3.6 mmol). Dobijena smeša je mešana na 130°C tokom 3 h. zatim ugašen sa ledenom vodom i ekstrahovan sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (eluent: PE/EtOAc = 8/1) da bi se dobio željeni proizvod (320,0 mg, 63% prinos). LC-MS: m/z 285 (M+H)<+>.
Korak C: 4-metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U rastvor etil 6-formil-4-metil-2-(metiltio)-4H-pirolo[2,3-d]tiazol-5-karboksilata (300.0 mg, 1.06 mmol) u EtOH (5. 0 mL) je dodat N2H4.H20 (2 mL, 98% tež.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, a zatim zagrevana na 60 °C preko noći, a zatim ohlađena. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio željeni proizvod (180.0 mg, 67% prinos). LC-MS: m/z 253 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.61 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 4.22 (s, 3H), 2.81 (s, 3H).
Primer 3B. Sinteza 6-((2-aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazina -5(6H)-ona
[0145]
Korak A. 2-bromo-4-(bromometil) piridin. Mešavina 2-bromo-4-metilpiridina (1 g, 5.81 mmol), NBS (1.1 g, 6.39 mmol) i katalitičke količine AIBN (100 mg) u CCl4(10 mL) je mešana na 80°C preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: PE/EtOAc = 200/1) da bi se dobio željeni proizvod E3-4 (500 mg, 34.28% prinos).
Korak B. 6-((2-bromopiridin-4-il) metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on. Smeša 4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0.40 mmol), i K2CO3(164 mg, 1.19 mmol) u DMF (8 mL) je mešana na 60 °C tokom 2 sata, nakon čega je dodat rastvor 2-bromo-4-(bromometil) piridina (199 mg, 0.80 mmol) u DMF (2 mL) i katalitička količina TBAB (13 mg). Smeša je mešana na 60 °C preko noći, zatim ugašena vodom (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (eluent: PE/EtOAc = 10/1) da bi se dobio željeni proizvod (150 mg, prinos 89.62 %). LCMS: m/z 423 (M+H)<+>.
Korak C. Terc-butil (4-((4-metil-2-(metiltio)-5-okso-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-6) (5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat. Smeša 6-((2-bromopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0.24 mmol), terc-butil karbamata (83 mg, 0.71 mmol), K3PO4(201 mg, 0.95 mmol), Pd2(dba)3(18 mg, 0.02 mmol) i Ksanfos (11 mg, 0.02 mmol) u dioksanu (10 mL) je mešana na 100 °C pod azotom preko noći. Dobijena smeša je ugašena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluent: PE/EtOAc = 3/1) da bi se dobio željeni proizvod (100 mg, prinos 92.10 %). LCMS: m/z 459 (M+H)<+>.
Korak D. Terc-butil(4-((4-metil-2-(metilsulfinil)-5-okso-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-6)(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat. U smešu terc-butil(4-((4-metil-2-(metiltio)-5-okso-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamata (100 mg, 0.22 mmol) u DCM (5 mL) na 0 °C dodata je 3-hlorperoksibenzojeva kiselina (38 mg, 0.22 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h, zatim ugašena vodom i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (100 mg, prinos 96.63%) koji je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS: m/z 475 (M+H)<+>.
Korak E. 6-((2-Aminopiridin-4-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on. Smeša terc-butil (4-((4-metil-2-(metilsulfinil)-5-okso-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-6) (5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamata (100 mg, 0.21 mmol) u TFA (1 mL) i DCM (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobio željeni proizvod (20 mg, 25.35 % prinos). LCMS: m/z 375 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 6.30 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 5.24 – 5.03 (m, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.03 (s, 3H).
[0146] Gore navedena procedura je korišćena za proizvodnju sledećih jedinjenja korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala. Standardna zaštita i deprotekcija se mogu koristiti kada je potrebno.
Primer 3C. Sinteza 6-((2-aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metil sulfinil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-on
[0147]
Korak A-B. 2-Bromo-5-(bromometil)tiazol i 6-((2-bromotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on su sintetizovani slično Primeru 3B.
Korak C. 6-((2-((2,4-dimetoksibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on. Smeša 6-((2-bromotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo [2,3- d]piridazin-5(6H)-ona (130 mg, 0.30 mmol) i DIPEA (0.1 mL) u NMP (0.1 mL) i (2,4-dimetoksifenil)metanaminu (0.1 mL) je mešana na 150 °C tokom 4 sata. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (10 mL), ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran sa PE/EtOAc = 5/1) da bi se dobio željeni proizvod (60 mg, prinos 38.4%). LC-MS: m/z 515 (M+H)<+>.
Korak D. 6-((2-((2,4-dimetoksibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on. U smešu 6-((2-((2,4-dimetoksibenzil)amino)tiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metiltio)-4H-tiazolo [5',4':4 ,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0.10 mmol) u THF (3 mL) na 0 °C je dodat okson (61 mg, 0.10 mmol). Smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata, zatim ugašena zasićenim vodenim rastvorom Na2S2O3(5 mL) i ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod (30 mg, 50. 1% prinos) koji je korišćen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LC-MS: m/z 531 (M+H)<+>.
Korak E. 6-((2-Aminotiazol-5-il)metil)-4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on je sintetizovan slično Primeru 3B. LC-MS: m/z 381 (M+H)+.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.11 (s, 3H).
[0148] Gore navedeni postupak je korišćen za proizvodnju sledećih jedinjenja korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala. Standardna zaštita i deprotekcija se mogu koristiti kada je potrebno.
Primer 4. Sinteza 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
Primer 4A. Sinteza 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazola
[0149]
Korak A. Metil 1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-karboksilat Na 0 °C u atmosferi N2, u mešani rastvor metil 1H-pirazol-3-karboksilata (90 g, 0.72 mol) u THF (1 L) je dodat NaH (20.7 g, 0.864 mol, 60 %). Dobijena smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana 1 h. Reakciona smeša je zatim ponovo ohlađena do 0°C i u kapima je dodat SEMCl (151.5 mL, 0.842 mol). Mešanje je nastavljeno još 2 sata pre nego što je ugašena sa zas. NH4CI i ekstrahovana sa etil acetatom (3 x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom i osušeni preko Na2SO4. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod od 210 g koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.
Korak B. (1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metanol Na 0 °C u atmosferi N2, u suspenziju LAH (16.9 g, 0. 44 mol) u THF (760 mL) je dodat sirovi metil 1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-karboksilat (76 g). Dobijena smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana 1 sat. Reakciona smeša je ponovo ohlađena do 0°C i sukcesivno su dodavani H2O (15.6 mL), 10 % NaOH (15.6 mL), H2O (15.6 mL). Dobijena smeša je filtrirana kroz jastučić celita i isprana sa MTBE (4 x). Kombinovane organske frakcije su osušene preko Na2SO4. Rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod 69.4 g koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: m/z 229 (M+H)<+>.
Korak C. 3-(jodometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol Na 0 °C u atmosferi N2, u mešani rastvor (1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metanola (61.5 g, teoretski 0.262 mol) u THF (310 mL) je dodat TEA (55.42 mL, 0.393 mol), a zatim MsCl (24 mL, 0.314 mol). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana 1 sat pre uvođenja NaJ (196.5 g, 1.31 mol, u 310 mL DMF). Dobijena smeša je mešana još 1 sat i ugašena ledenom vodom, ekstrahovana sa MTBE (3 x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zas. Na2S2O3i slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani da bi se dobilo 77.5 g sirovog proizvoda koji je u sledećem koraku korišćen bez prečišćavanja. LC-MS: m/z 339 (M+H)<+>.
Korak D. 3-((fenilsulfonil) metil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol Na 0 °C u atmosferi N2, u mešani rastvor (1-((2-(trimetilsilil)etoksi) )metil)-lH-pirazol-3-il)metanola (77.5 g, teoretski 0.229 mol) u DMF (600 mL) je dodat natrijum benzensulfinat (53,5 g, 0,32 mol) i mešan je 1 sat na 0°C. Nakon zagrevanja do sobne temperature, reakciona smeša je ugašena ledenom vodom i zas. Na2S2O3, i ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zas. NaHCO3i slanim rastvorom sukcesivno, osušeni preko Na2SO4. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom, a ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 20% ~ 70% etil acetat u petroletru) da bi se dobilo 56.7 g kao svetlo žuto ulje. LCMS: [M H]<+>353.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.85-7.77 (m, 4H), 7.62 (dd, 2H), 6.19 (d, 1H), 5.35 (d, 2H), 4.70 (d, 2H), 3.44-3.38 (m, 2H), 0.88-0.77 (m, 2H), -0.01 (s, 9H)
Primer 4B. Sinteza 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona
[0150]
Korak A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol -5-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on. U rastvor 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazola (1.8 g, 5.1 mmol) u suvom THF (30 mL) na -40 °C je u kapima dodat LiHMDS (7.5 mL, 7.5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min, a zatim je dodata suspenzija 4-metil-2-(metilsulfinil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (580 mg, 2.7 mmol) u suvom THF (30 mL) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na ST još 1 sat i sipana u ledom hlađen zasićeni vodeni rastvor NH4CI (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (60 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 2.5 % metanol u dihlorometanu) da bi se dobio željeni proizvod (800 mg, 66 %). LC-MS (ESI) nađeno: 557 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.67-7.59 (m, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.48 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.88 (dd, 2H), 0.00 (s, 9H).
Korak B.4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-on. U smešu 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0.8 g, 1.41 mmol) u THF (5 mL) i MeOH (10 mL) pod N2u kapima je dodat SmJ2(0.1 M/THF, 45 mL) u ledenom kupatilu. Posle mešanja tokom 10 min, reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (50 mL) i ekstrahovana sa EAOAc (50 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (60 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 3 % metanola u dihlorometanu) da bi se dobio željeni proizvod (310 mg, 51.0 %). LC-MS pronađeno: 417 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H) , 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
Korak C. terc-butil 3-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsi|il)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il) metil)-4H)-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il) metil)-1H-pirazol-1-karboksilat. Smeša 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5 (6H)-ona (30 mg, 0.07 mmol) i K2CO3(25 mg, 0.18 mmol) u DMF-u (5.0 mL) je barbotirana argonom i mešana na 50°C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 3-(bromometil)-1H-pirazol-1-karboksilat (37 mg, 0.14 mmol). Posle mešanja na 50°C preko noći pod argonom, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (20 mL) i ekstrahovana sa EAOAc (30 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (40 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-TLC (DCM:MeOH = 15:1) da bi se dobio željeni proizvod (15 mg, 35.0 %). LC-MS (ESI) pronađeno: 597 (M+H)<+>.
Korak D. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((1H-pirazol-5-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-on. U rastvor terc-butil 3-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1Hpirazol-5-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)-1H-pirazol-1-karboksilat (15 mg, 0.025 mmol) u DCM (5 mL) dodata je TFA (1 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći pre nego što je koncentrovana i prečišćena Pre-TLC (DCM:MeOH = 15:1) da bi se dobio željeni proizvod (5 mg, 50 %). LC-MS, nađeno: 367 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.80 (s, 1H), 12.65 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.71 (brs, 1H), 7.60 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).
Primer 5. Sinteza 4-metil-2-(metilsulfinil)-4,6-dihidro:5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0151]
[0152] U mešanu suspenziju 4-metil-2-(metiltio)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5 -ona (1.01 g, 4.0 mmol) u DCM (20 mL) na sobnoj temperaturi je dodata 3-hloro-benzoperoksoična kiselina (0.77 g, 3.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Zatim je smeša filtrirana, isprana sa EtOAc i triturisana sa MeOH. Čvrsta supstanca je osušena u vakuumu da bi se dobio 4-metil-2-(metilsulfinil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5- jedan (600 mg). LC-MS: m/z 269 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78(s,1H), 8.64 (s,1H), 4.28 (s,3H), 3.11 (s, 3H).
Primer 6. Sinteza 4-metil-2-(metilsulfonil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0153]
[0154] U balon sa tri grla napunjen 4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-onom (30 g, 0.119 mol, 1.0 ekv) u DCM (600 mL) je dodat m-CPBA (61.5 g, 3 eq) na 20 °C u tri porcije. Smeša je mešana na 30 °C preko noći, LC-MS je pokazala 100 % potrošnju polaznog materijala, formirano je 20 % E4-2 i 80 % E6-1. Smeša je ohlađena do sobne temperature, dodat je još jedan deo m-CPBA (1.0 ekv.). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 2 sata, LC-MS je pokazao E4-2 (LCMS: m/z 269 (M+H)<+>.) < 8%. Smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filterski kolač je suspendovan u MeOH (500 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 1 sat. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana etilacetatom, osušena u vakuumu da bi se dobilo 28 g smeše od 5% E4-2 i 95% E6-1. Smeša (28 g) je suspendovana u DMSO (600 mL), zagrejana na 120 °C ~ 130 °C da bi se formirao bistar rastvor. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i istaložena je č vrsta supstanca. Smeša je filtrirana i osušena da bi se dobilo 23 g čistog E6-1, LCMS: m/z 285 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.87 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 4.32 (s, 3H), 3.56 (s, 3H).
Primer 7. Sinteza jedinjenja E7-v i E7-viii
[0155]
Šema E7
[0156] Nukleofilna aromatična supstitucija između jedinjenja E7-i i jedinjenja E4-2, i/ili jedinjenja E6-1, daje intermedijer E7-ii. Redukcija fenilsulfonil grupe jedinjenja E7-ii daje intermedijer E7-iii. Korišćenjem standardne reakcije alkilacije E7-iv i jedinjenja E7-iii u prisustvu baze (npr. K2CO3, K3PO4, t-BuOK ili Cs2CO3) dobija se jedinjenje E7-vi, gde X<a>je odlazeća grupa kao što su Cl, Br, J , OMs, OTs; Arli Ar2su svaki nezavisno opciono supstituisani 5-člani ili 6-člani monociklični heteroaril. Jedinjenje E7-vi se takođe može sintetizovati iz Mitsunobu reakcije jedinjenja E7-iii sa E7-v korišćenjem cijanometilen-tributilfosforana (CMBP) u toluenu.
Primer 7A. Sinteza 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4' :4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0157]
Korak A. 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5-on U rastvor 3-((fenilsulfonil) metil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazola (26 g, 78.86 mmol, 2.1 ekv.) u anhidrovanom THF (700 mL) je dodat LiHMDS (81.2 mL, 81 mmol, 1 M u THF, 2.31 ekv.) na -40 °C. Reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana 1 sat. Zatim je u smešu na sobnoj temperaturi dodat 4-metil-2-(metilsulfonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (10 g, 35.17 mmol, 1 ekv). Reakcija je mešana još 0.5 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je sipana u zasićeni rastvor amonijum hlorida (500 mL) na 0 °C i ekstrahovana etil acetatom dva puta. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni i koncentrovani da bi se dobio žuti ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (dihlorometan:metanol = 100:1 do 30:1) da bi se dobio 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (13 g). LC-MS ESI M/Z = 557 (M+H)<+. 1H NMR (400 MHz,>DMSO) δ 12.81 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.84-7.78 (m, 3H), 7.66 (t, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.72 (d, 1H), 5.50 (d, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.56 (dd, 2H), 0.91 (dd, 2H), 0.02 (s, 9H).
Korak B. 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U rastvor 4-metil-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (8 g, 14.37 mmol, 1 ekv) u THF (500 mL) i MeOH (500 mL) je dodat SmJ2(503 mL, 50.29). mmol, 0.1 M u THF, 3.5 ekv) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana 0.5 h i koncentrovana. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (petroletar : etil acetat : metanol = 75 : 25 : 0 do 20 : 20 : 1) da se dobije 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5 ] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-on (4.3 g). LC-MS ESI M/Z = 417 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.31 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.43 (s, 3H), 3.62 (t, 2H), 0.95 (t, 2H), 0.0 (s, 9H).
Primer 7B. Sinteza 6-((1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4': 4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on
[0158]
Korak A. 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karbaldehid: Uzorak NaH je ispran sa heksanom (2 x 10 mL) pod N2. Balon je napunjen suvim DMF-om (20 mL) i dodat je 1H-imidazol-2-karbaldehid (500 mg, 5.2 mmol) u malim porcijama. Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h, u kapima je dodat SEMCl (864 mg, 5.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Reakciona smeša je sipana u vodu, ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-lH-imidazol-2-karbaldehid (800 mg). LCMS: 227 (M+H)<+>.
Korak B. (1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-il)metanol: U mešanu smešu 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H -imidazol-2-karbaldehida (1.6 g, 7 mmol) u THF (20 mL) je dodat NaBH4(1.34 g, 35 mmol) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Reakciona smeša je sipana u vod. NH4Cl i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi (1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-lH-imidazol-2-il)metanol (1.3g).
Korak C. 2-(hlorometil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi )metil)-1H-imidazol: U mešanu smešu (1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1 H-imidazol-2-il)metanola su na sobnoj temperaturi dodati NCS (466 mg, 3.5 mmol) i PPh3(920 mg, 3.5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM. Smeša je isprana vodom i organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pre-TLC (PE: EtOAc=1:1) da bi se dobio 2-(hlorometil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-imidazol. LCMS: 247 (M+H)<+>. U mešanu smešu 4-metil-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0.12 mmol) u suvom DMF (5 mL) je dodat K2CO3(66 mg, 0.48 mmol) na 60° C pod N2. Posle 20 min je dodato jedinjenje E7-2 (60 mg, 0.24 mmol), u suvom DMF (2 mL) na 60 °C pod N2. Smeša je mešana na 60 °C tokom 1.5 h pod N2. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podešena na pH= 5-6 sa 0.5N aq HCl. Zatim je smeša ekstrahovana sa EtOAc, isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću Prep-TLC (PE: EtOAc=1:1.5) da bi se dobio 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi))metil)-1H-imidazol-2-il)metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5', 4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (25 mg). LCMS: 627 (M+H)<+>. Smeša 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-imidazol-2-il) metil)-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (25 mg, 0.04 mmol) u DCM/TFA (2 mL/2 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen prep-HPLC da bi se dobio željeni proizvod (1,3 mg). LCMS: 367 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 6.9 (s, 2H), 6.27 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 4.27 (s, 3H).
[0159] Sledeća jedinjenja su sintetisana u skladu sa Šemom E7 i procedurom iz Primera 7A-7B korišćenjem odgovarajućeg polaznog materijala. Standardne metode zaštite i deprotekcije se koriste kada je potrebno.
Primer 8. Sinteza jedinjenja E8-v, E8-vi i E8-viii
[0160]
Šema E8
[0161] Jedinjenje E8-i može biti konvertovano u intermedijer E8-ii ili akilacijom ili Mitsunobu reakcijom sličnom Primeru E7-iii do E7-vi (vidi put (i) u Šemi E8). Oksidacija E8-ii sa mCPBA ili oksonom generiše jedinjenja E8-v i/ili E8-vi. Oba jedinjenja E8-v i E8-vi takođe mogu da se formiraju od E8-i oksidacijom koja prvo sledi alkilacijom ili Micumobu reakcijom (videti put (ii) u Šemi E8) u kojoj X<a>je odlazeća grupa (npr. Cl, Br, J, OMs, OTs); Jedinjenje E8-v i/ili E8-vi može biti konvertovano u intermedijer E8-vii reakcijom nukleofilne aromatične supstitucije sa jedinjenjem E8-xi, korišćenjem baze kao što je LiHMDS ili t-BuOK. Jedinjenje E8-viii može biti sintetisano iz jedinjenja E8-vii korišćenjem ili SmI2, ili Zn u AcOH, ili TES u AlCl3. Kako se ovde koristi, Arl i Ar2 su svaki nezavisno opciono supstituisani 5-člani ili 6-člani heteroaril.
Primer 8A. Sinteza 2-((lH-pirazol-3-il) metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazo[5',4':4, 5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona i 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-karbonil)- 4H-tiazolo[5',4':4, 5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[0162]
Korak A terc-butil N-[(terc-butoksi) karbonil]-N-[6-({4-metansulfonil-7-metil-9-okso-3-tia-5,7,10, 11-tetraazatriciklo [6.4.0.0{2,6}] dodeka-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il} metil) piridin-2-il] karbamat Smeša 4-metil-2-(metilsulfonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (7.5 g, 26.4 mmol) i K3PO4(8.3 g, 39.3 mmol) u anhidrovanom MeCN (300 mL) je mešana na 70 °C tokom 1 sata pod N2. Zatim je dodat rastvor terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-[6-(bromometil)piridin-2-il] karbamata (11.2 g, 29.0 mmol) u MeCN (30 mL). Posle mešanja na 70 °C tokom 2.5 sata pod N2, reakciona smeša je ugašena sa zas. NH4Cl i ekstrahovana sa EA (300 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i organska faza je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 50 % etil acetata u petrol etru) da bi se dobio terc-butil N-[(terc-butoksi) karbonil]-N-[6-({4-metansulfonil-7-metil-9-okso-3-tia-5,7,10,11-tetraaza-triciklo[6.4.0.0{2,6}]dodeka-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il}metil)piridin-2-il] karbamat (5.5 g). LC-MS (ESI) nađeno: 591.1 (M+H)<+>.
Korak B. terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil))-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il) karbamat. U smešu 3-((fenilsulfonil)metil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazola (11.9 g, 33.8 mmol) u bezvodnom THF (200 mL) dodat je uz mešanje LiHMDS (50 mL, 1 M u THF) na -40 °C pod argonom. Posle 10 min, smeša je zagrejana do 10°C i mešana 1 sat, zatim je dodat terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-[6-({4-metansulfonil-7-metil-9-okso-3-tia-5,7,10,11-tetraazatri-ciklo [6.4.0.0{2,6}]dodeka-1(8),2(6),4,11-tetraen-10-il}metil)piridin-2-il]karbamat (9.1 g, 15.4 mmol u 35 mL THF). Reakcija je mešana na 10°C još 30 min. Reakciona smeša je sipana u vod. NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc (200 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 50 % etil acetat u petrol etru) da bi se dobio terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2, 3-d]piridazin-6 (5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat (6.6 g). LC-MS (ESI) nađeno: 763.2 (M+H)<+>.
Korak C. terc-Butil (6-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-lH-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat Rastvor terc-butil (6-((4)-metil-5-okso-2-((fenilsulfonil)(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazoalo [5' ,4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamata (6.0 g, 7.86 mmol) u EtOH/AcOH (35 mL/50 mL) je zagrevan na 50°C uz snažno mešanje u prisustvu Zn (2.55 g, 117.9 mmol) tokom 40 min. Dodatni cink je dodavan svakih 40 minuta (2.55 g, dva puta, reakcija je praćena pomoću TLC/LC-MS da bi se izbegao nusproizvod i prekomerno redukovani proizvod). Rastvor je filtriran i filterski kolač je ispran sa DCM. Filtrat je delimično uparen, neutralizovan zasićenim rastvorom NaHCO3, osušen preko MgSO4i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, DCM : MeOH= 40:1) da se dobije terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil) piridin-2-il) karbamat (3.1 g). LC-MS (ESI) nađeno: 623.3 (M+H)<+>.
Korak D. 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-on U smešu terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat (3.0 g, 4.8 mmol) u etanolu (30 mL) je dodat HCl (30 mL, 4 M u dioksanu). Reakciona smeša je mešana na 80°C 40 min. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, filtrirana i čvrsta supstanca je sakupljena, suspendovana u vodi i neutralizovana vodenim rastvorom NaHCO3na 10°C. Filtrirana je da bi se dobilo željeno jedinjenje 2-((1H-pirazol-3-il)metil)-6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (1.5 g). LC-MS (ESI) nađeno: 393.2 (M+H)<+>.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.78 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.25 (dd, 1H), 6.33 – 6.24 (m, 2H), 6.08 (d, 1H), 5.90 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).
Korak E. Sinteza terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-3-karbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-6(5H)-il) metil) piridin-2-il) karbamat U rastvor terc-butil(6-((4-metil-5-okso-2-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazoalo [5',4': 4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamata (100 mg, 0.16 mmol) u DMF (2 mL) je dodat K2CO3(88 mg, 0.64 mmol). Smeša je mešana na 70°C tokom 8 h. Smeša je sipana u vodu, talog je sakupljen filtracijom i prečišćen pomoću pre-TLC (2% MeOH u DCM) da bi se dobio terc-butil (6-((4-metil-5-okso-2-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-karbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-6(5H)-il)metil)piridin-2-il)karbamat (20 mg). LC-MS (ESI): m/z 637 (M+H)<+>.
Korak F. Sinteza 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(lH-pirazol-3-karbonil)-4H-tiazo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on U rastvor terc-butil(6-((4-metil-5-okso-2-(1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil))-1H-pirazol-3-karbonil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-6 (5H)-il) metil) piridin-2-il) karbamata (20 mg, 0.03 mmol) u EtOH (1 mL) je dodata HCl (1 mL, 4 mol/L u dioksanu). Smeša je mešana na 80 °C tokom 1 sata i ohlađena. Talog je sakupljen filtracijom i neutralizovan sa zas. NaHCO3ispran vodom i osušen da bi se dobilo 5 mg 6-((6-aminopiridin-2-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-karbonil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on. LC-MS (ESI): m/z 407 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.75 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31-7.22 (m, 1H), 6.31 (d, 1H), 6.14 (d, 1H), 5.91 (s, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).
Primer 8B. Sinteza 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazol [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0163]
Korak A. (6-(dimetilamino)piridin-2-il)metanol. U rastvor (6-hloropiridin-2-il)metanola (500 mg, 2.67 mmol) u dimetilaminu u THF (35 mL) je dodat Pd(OAc)2(78 mg, 0.35 mmol), Xantphos (170 mg, 0.29 mmol) i t-BuONa (385 mg, 4.01 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 35 % etil acetat u petrol etru) da bi se dobio (6-(dimetilamino) piridin-2-il) metanol (180 mg). LCMS: 153 (M+H)<+>.
Korak B. 6-(hlorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amin. U mešanu smešu (6-(dimetilamino)piridin-2-il) metanola (170 mg, 1.1 mmol) u DCM (10 mL) je dodat SOCl2(665 mg, 5.6 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je podešena na pH= 7-8 sa vod. NaHCO3. Zatim je smeša ekstrahovana sa DCM, isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 6-(hlorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amin (70 mg). LCMS: 171 (M+H)<+>.
Korak C. N,N-dimetil-6-((fenilsulfonil)metil)piridin-2-amin. U mešanu smešu 6-(hlorometil)-N,N-dimetilpiridin-2-amina (500 mg, 2.94 mmol) u DMSO (10 mL) je dodat PhSO2Na (1.44 g, 8.82 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana 18h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa DCM. Smeša je isprana vodom i organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 20 % etil acetat u petrol etru) da bi se dobio N,N-dimetil-6-((fenilsulfonil)metil) piridin-2-amin (380 mg). LCMS: 277 (M+H)<+>.
Korak D. 2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)(fenilsulfonil)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on. U mešanu smešu 4-metil-2-(metilsulfonil)-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H2tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-on (180 mg, 0.36 mmol), koji je sintetisan slično jedinjenju E8-1 u Primeru 8A, u suvom THF (10 mL) je dodat N,N-dimetil-6-((fenilsulfonil)metil)piridin-2-amin (120 mg, 0.44 mmol) i t-BuOK (122 mg, 1.1 mmol) na 60°C pod N2. Smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h pod N2. Zatim je smeša sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc, isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću Prep-TLC (PE: EtOAc=1:1,5) da bi se dobio 2-((6-(dimetilamino) piridin-2-il) (fenilsulfonil) metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-on (50 mg). LCMS: 691 (M+H)<+>.
Korak E. 2-((6-(dimetilamino) piridin-2-il) metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on. U smešu 2-((6-(dimetilamino) piridin-2-il)(fenilsulfonil)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0.07 mmol) u THF-u (5 mL) i MeOH (5 mL) na sobnoj temperaturi pod N2je dodat SmJ2(5 mL, 0.1 M u THF) na -40 °C. Reakciona smeša je mešana na -40 °C 10 min, a zatim ugašena vodom. Zatim je smeša dva puta ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-TLC (PE/EtOAc = 1/1.5) da bi se dobio željeni proizvod (10 mg). LCMS: m/z 551 (M+H)<+>.
Korak F. 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-4H-tiazo [5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-on. Smeša 2-((6-(dimetilamino)piridin-2-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5 (6H)-ona (10 mg, 0.018 mmol) u DCM/TFA (2 mL/2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC da bi se dobio željeni proizvod (1.4 mg). LCMS: 421 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.51 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.48 (dd, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.05 (s, 6H). Sledeća jedinjenja su sintetisana prema Šemi E8 i Primeru 8C korišćenjem odgovarajućeg polaznog materijala. Standardna zaštita i deprotekcija se mogu koristiti kada je potrebno.
Primer 9. Sinteza jedinjenja E9-vi i E9-vii
[0164]
Šema E9
[0165] Jedinjenje E9-iv se može sintetizovati pomoću dva pristupa, (i) i (ii) u Šemi 9. Za pristup (i), jedinjenje E9-ii se može sintetizovati iz jedinjenja E9-i reakcijom alkilacije kao što je prikazano u Primeru 7 ili Primeru 8. Kako se ovde koristi, X<a>je odlazeća grupa. Reakcija formilacije jedinjenja E9-ii sa LiHMDS i DMF daje intermedijer E9-iii. E9-iii reaguje sa redukcionim agensom (npr. NaBH4) da bi se dobilo jedinjenje E9-iv. Alternativno, u pristupu (ii), haloagenacija jedinjenja E9-i stvara jedinjenje E9-ix.
Jedinjenje E9-ix prolazi kroz Stilleovu reakciju, ozonolizu i redukciju da bi se dobilo jedinjenje E9-x. Jedinjenje E9-x može biti alkilovano sa E9-viii da bi se dobilo jedinjenje E9-iv. U Šemi 9, (iii), jedinjenje E9-iv se podvrgava halogenaciji da bi se dobio intermedijer E9-v (X<b>je halogen kao što su Cl ili Br). Metalom (npr. Pd ili Cu) katalizovano kuplovanje E9-v sa organskim kalajem, borom, cinkom ili magnezijumom daje jedinjenje E9-vi. Kako se ovde koristi, M je organski metalni kompleks (npr. organobor kompleks kao što je borna kiselina ili pinako boronski kompleks, organokalajni kompleks kao što je -Sn(Bu<t>)3); kompleks organocinka kao što je -Zn(halogen)); Jedinjenje E9-v takođe može da reaguje sa nekim nukleofilima kao što je azot u heterociklu da bi se dobio proizvod E9-vii. Kako se ovde koristi, Arli Ar2su svaki nezavisno opciono supstituisani 5-člani ili 6-člani heteroaril, X<a>je odlazeća grupa (npr. Br, J, OMs, ili OTs); a X<b>je halogen.
Primer 9A. Sinteza 6-((1H-indazol-4-il)metil)-4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]piroto [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[0166]
Korak A. Sinteza 4-metil-5-okso-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazola -4-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbaldehida. U smešu 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (2.6 g, 5.57 mmol, 1 ekv) u suvom THF (30 mL) je u gornju smešu ukapavanjem dodat LiHMDS (1 M, 11.14 mL, 2.0 ekv) na -78 °C. Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 sata. Zatim je dodat DMF (2.04 g, 27.86 mmol, 2.14 mL, 5.0 ekv.). Smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. TLC (PE: EA=2:1, UV=254 nm) je pokazala da je formirana jedna nova glavna tačka. Smeša je sipana u hladan zas. NH4CI (20 mL). Zatim je smeša zagrejana do sobne temperature. Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (40 mL x 3). Organski sloj je ispran vodom (20 mL x 3) i koncentrovan in vacuo da bi se dobio željeni proizvod (2.6 g, sirov). LCMS: m/z 495.2 [M+H]<+>
Korak B. Sinteza 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-indazol-4 -il) metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. U smešu sirovog 4-metil-5-okso-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-indazol-4-il) metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-2-karbaldehid (1.0 g, 2.02 mmol, 1 ekv.) u THF (10 mL) i MeOH (10 mL) je dodat NaBH4(152.97 mg, 4.04 mmol, 2 ekv.). Smeša je mešana na 30°C tokom 14 h. TLC (DCM:MeOH=10:1, UV=254 nm) je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen i da je formirana jedna glavna nova mrlja. Reakcija je ugašena dodavanjem vode (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (30 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (20 mL). Organska faza je koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silikatna Fleš Kolona, eluent od 0-5% MeOH/DCM @ 30 mL/min). Eluent je koncentrovan in vacuo da bi se dobio željeni proizvod (382 mg). LCMS: m/z 497.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.61 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.36 (t, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.68 (s, 2H), 4.89 (d, 2H), 4.26 (s, 3H), 3.50 (t, 2H), 0.78 (t, 2H), -0.12 (s, 9H).
Korak C. Sinteza 2-(hlorometil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-indazol-4-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. U smešu 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-indazol-4-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (150.0 mg, 302.02 umol, 1 ekv.) i Et3N (61.12 mg, 604.04 umol, 84.08 uL, 2.0 ekv.) u DCM (5 mL) je dodat 4-metilbenzensulfonil hlorid (75.0 mg, 393.40 umol, 1.30 ekv.). Smeša je mešana na 30 °C tokom 5 h. TLC (PE: EA=4:1, UV=254 nm) je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen. U smešu su dodati voda (10 mL) i DCM (20 mL). Organski slojevi su koncentrovani in vacuo da bi se dobila žuta guma (0.1 g). Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (ISCO®; 4 g SepaFlash® silikatna fleš kolona, eluent od 0-20% etil acetat/petrol etar gradijent @ 30 mL/min). Željena frakcija je koncentrovana in vacuo da bi se dobio željeni proizvod (40.0 mg, 76.88 umol). LCMS: m/z 515.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 8.27 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (dd, 1 H), 7.25 (s, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.40 (s, 3H), 3.50-3.57 (m, 2H), 0.84-0.90 (m, 2H), -0.09 to -0.06 (m, 9H).
Korak D. Sinteza 4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1 H-indazol-4-il) metil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-onA. U rastvor 2-(hlorometil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5 (6H)-onA (50 mg, 0.97 mmol) i 4-(tributilstanil)tiazola (114 mg, 2.91 mmol) u toluenu (4 mL) je dodat Pd(PPh3)4(402 mg, 2.91 mmol). Smeša je zatim zagrevana u MV reaktoru na 120 °C tokom 30 minuta pod N2. Rastvor je sipan u vodu i ekstrahovan sa EtOAc, osušen preko anhidrovanog Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 50% etil acetata u petrol etru) da bi se dobio 4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-indazol-4-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (30 mg). LCMS: 564 (M+H)<+>.
Korak E. Sinteza 6-((lH-indazol-4-il)metil)-4-metil-2-(tiazol-4-ilmetil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5-ona. U smešu jedinjenja E9-4 (30 mg, 0.05 mmol) u DCM (3 mL) na sobnoj temperaturi pod N2je dodat TFA (3 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (C18, 0 ~ 90 % acetonitrila u H2O sa 0.1 % mravlje kiseline) da bi se dobio željeni proizvod (3.9 mg). LCMS: 434 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.12 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (s, 3H)
Primer 9B. Sinteza 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4:4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[0167]
Korak A. Sinteza 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazoto[5',4':4,5]piroto[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona Na -78 °C, u smešu 4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (640 mg, 2.15 mmol) u THF (10 mL) je dodat LiHMDS (4.3 mL, 1 M u THF). Posle 30 min, smeši je dodat suv DMF (0.84 mL, 10.8 mmol). Nakon potpunog utroška polaznog materijala, dodata je smeša NaBH4(164 mg, 4.3 mmol) u EtOH (4 mL) i mešana 5 min. Zatim je smeša sipana u zas. NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0-5% MeOH u DCM) da bi se dobio 2-(hidroksimetil)-4metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on (220 mg). LC-MS (ESI): m/z 328 (M+H)<+>.
Korak B. Sinteza 2-(hlorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5 (6H)-ona U smešu 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (100 mg, 0.31 mmol) u DCM (5 mL) su dodati Et3N (0.43 mL, 3.1 mmol) i MsCl (0.12 mL, 1.5 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 6 h. Zatim je smeša isprana sa zas. NH4Cl (vod.), osušena preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0-50% EtOAc u PE) da bi se dobilo 65 mg 2-(hlorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 346 (M+H)<+>.
Korak C. Sinteza 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona Pod azotom, u smešu 2-(hlorometil)-4-metil-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (50 mg, 0.14 mmol) i 2-(tributilstanil)piridina (0.14 mL, 0.43 mmol) u toluenu (3 mL) je dodat Pd(PPh3)4(17 mg, 0.014 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100 °C preko noći. Zatim je smeša ohlađena, koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen prep-TLC (eluent: 10% MeOH u DCM) da bi se dobilo 2 mg 4-metil-2-(piridin-2-ilmetil)-6-(piridin-3-ilmetil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 389 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (m, 3H), 8.48 (dd, 1H), 7.81 (td, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.25 (s, 3H).
Primer 9C. Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona i 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il) metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[0168]
Korak A Sinteza 1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-karbaldehida. U suspenziju 1H-pirazol-3-karbaldehida (10.0 g, 104.07 mmol, 1 ekv.) i DIPEA (33.63 g, 260.18 mmol, 45.32 mL, 2.5 ekv.) u DCM (500 mL) je dodat u kapima (500 mL) hlorometoksi) etil-trimetil-silan (26.03 g, 156.11 mmol, 27.63 mL, 1.5 ekv.) na -40°C. Zatim je reakciona smeša zagrejana do sobne temperature i mešana 16 h. TLC (petrol etar:EtOAc = 5:1) je pokazao da je polazni materijal u potpunosti potrošen i da su formirane dve nove tačke. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je kombinovan sa još 2 šarže (10.0 g svaka) i prečišćen pomoću Combflash-a (od 100% petrol etra do 40% EtOAc u petrol etru) da bi se dobio željeni proizvod 60.0 g. (napomena: mešavina 2 regioizomera sa odnosom ∼5/4).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 10.06 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.56 (s, 2H), 3.61-3.67 (m, 4H), 0.91-1.01 (m, 4H), -0.09-0.05 (m, 18H).
Korak B. Sinteza (1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metanola. U rastvor 1-((2-(trifmetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-karbaldehida (30 g, 132.54 mmol, 1 ekv., smeša 2 regioizomera sa odnosom ∼5/4) u THF (200 mL)/MeOH (100 mL) je dodat NaBH4(7.52 g, 198.81 mmol, 1.50 ekv.) u porcijama na 0°C, reakciona smeša je mešana na 0°C do sobne temperature 18 h. TLC (petrol etar:EtOAc = 2:1) je pokazao da su polazni materijali u potpunosti potrošeni i da su formirane dve nove tačke. Rastvarač je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću Combiflash-a (100% petrol etra do 100% EtOAc) da bi se dobilo 25 g ž eljenog proizvoda. (Napomena: odnos mešavine 2 regioizomera -3/2).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 7.55 (d, 1H), 7.47 (brs, 1H), 6.36 (d, 1H), 6.34 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.74-4.76 (m, 4H), 3.55-3.60 (m, 4H), 0.85-0.96 (m, 4H), 0.00-0.06 (m, 18H).
Korak C. Sinteza 3-(bromometil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-pirazola. U rastvor (1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metanola (23 g, 100.72 mmol, 1 ekv., mešavina 2 regioizomera u odnosu -3/2) i PPh3(36.98 g, 141.00 mmol, 1.4 ekv) u DCM (200 mL) je dodat CBr4(46.76 g, 141.00 mmol, 1.4 ekv) na 0°C i reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 3 sata. TLC (petrol etar:EtOAc = 5:1) je pokazao da su polazni materijali u potpunosti potrošeni i formirana je nova mrlja. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Ostatak je kombinovan sa drugom šaržom (2.0 g) i prečišćen pomoću Combiflash-a (od 100% petrol etra do 50% EtOAc u petrol etru) da bi se dobio željeni proizvod 22.0 g (75.53 mmol).<1>H NMR (400 MHz, HLORFORM-d) δ ppm 7.51 (d, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.52-3.57 (m, 2H), 0.86-0.96 (m, 2H), -0.03-0.02 (m, 9H).
Korak D. Sinteza 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Suspenzija 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5 (6H)-ona (1.0 g, 4.85 mmol, 1 ekv.), 3-(bromometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2.12 g, 7.27 mmol, 1.5 ekv.), K3PO4(2.57 g, 12.12 mmol, 2.5 ekv.) i NaJ (218.05 mg 1.45 mmol, 0.3 ekv.) u DMF (15 mL) je mešana na 60°C tokom 18 h pod N2. TLC (petrol etar:EtOAc = 1:1) je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen i formirano je nova mrlja. Reakciona smeša je kombinovana sa još 3 serije (svaka po 1.0 g) i sipana u ledenu vodu (250 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc (150 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (120 mL x 2), slanim rastvorom (120 mL), i osušeni preko Na2SO4. Rastvarač je koncentrovan in vacuo. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću combiflash-a (od 100% petrol etra do 80% EtOA u petrol etru) da bi se dobio željeni proizvod (3.6 g).<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 8.91 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.40 (m, 2H), 4.45 (s, 3 H), 3.52-3.58 (m, 2H), 0.85-0.90 (m, 2H), -0.05 (s, 9H).
Korak E. Sinteza 4-metil-5-okso-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-difhidro- 4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbaldehida. Pod argonom, u rastvor 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (1.7 g, 4.09 mmol, 1 ekv.) u THF (30 mL) je polako dodat LiHMDS (1.0 M, 8.18 mL, 2 ekv.) na -78°C, reakciona smeša je mešana na -70°C tokom 1 h. Zatim je u smešu u kapima dodat rastvor DMF (1.49 g, 20.45 mmol, 1.57 mL, 5 ekv.) u THF (3 mL). Dobijena smeša je mešana na -70°C 1 h. TLC (petrol etar: EtOAc = 1:1) je pokazala da je formirana nova tačka. Reakciona smeša je u kapima dodata u vod. NH4Cl (50 mL) na 0°C, a zatim je smeša ekstrahovana sa EtOAc (30 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (40 mL) i osušeni preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio sirovi željeni proizvod (1.8 g) koji je u sledećem koraku korišćen bez daljeg prečišćavanja.
Korak F. Sinteza 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. U rastvor 4-metil-5-okso-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-2-karbaldehida (1.8 g, 3.24 mmol, 1 ekv.) u THF (20 mL) MeOH (10 mL) je dodat NaBH4(245.08 mg, 6.48 mmol, 2 ekv.) na 0°C i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 h. TLC (petrol etar:EtOAc = 1:2) je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen i formirana je nova mrlja. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, ostatak je prečišćen pomoću combiflash-a (od 100% DCM do 5% MeOH u DCM). Dobijen je željeni proizvod (1.1 g).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.63 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 6.44 (t, 1H), 6.27 (d, 1H), 5.40-5.42 (m, 4H), 4.98 (d, 2H), 4.34 (s, 3H), 3.55-3.61 (m, 2H), 0.86-0.91 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
Korak G. Sinteza (4-metil-5-okso-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d] piridazin-2-il) metil metansulfonata. U rastvor 2-(hidroksimetil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il) metil)-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (700 mg, 1.57 mmol, 1 ekv.) i Et3N (317.21 mg, 3.13 mmol, 436.33 uL, 2.0 ekv.) u DCM (15 mL) u kapima je dodat MsCl (269.32 mg, 2.35 mmol, 181.97 uL, 1.5 ekv) na 0°C i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. TLC (petrol etar:EtOAc = 1:1) je pokazao da je polazni materijal u potpunosti potrošen i formirano je nova mrlja. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (80 mL) i isprana vodom (30 mL x 4), slanim rastvorom (40 mL) i osušena preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod (700 mg). LCMS: (m/z 525.5 (M+H).
Korak H. Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona i 2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Smeša (4-metil-5- okso-6-((1-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-2-il) metil metansulfonata (150 mg, 285.88 umol, 1 ekv.) 1H-1,2,4-triazola (197.45 mg, 2.86 mmol, 10 ekv.) i CsF (86.85 mg, 571.77 umol, 21.08 uL, 2 ekv.) u MeCN (8 mL) je mešana na 60°C pod N2tokom 18 sati. LCMS je pokazao da je polazni materijal u potpunosti potrošen i formirana su dva nova pika. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a ostatak je prečišćen pomoću Combiflash-a (od 100% DCM do 8% MeOH u DCM). Dobijeni su proizvodi 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il )metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (55 mg) i 2-((4H-1,2,4) -triazol-4-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5 (6H)-on (30 mg).
Korak I. Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona. U suspenziju 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (55 mg, 110.52 umol, 1 ekv.) i HCl/dioksan (4 M, 1 mL, 36.19 ekv.) u DCM (3 mL) dodata je H2O (1.99 mg, 110.52 umol, 0.05 mL, 1 ekv.) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 h. LCMS je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen i pronađeno je 84% željenog proizvoda. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobio željeni proizvod (24.1 mg, 65.60 umol, 59.35% prinos). Kolona: Xtimate C18 150*25mm*5um, mobilna faza: [voda(0.225%FA)-ACN]; B%: 13% - 43%, 11.2 min. LCMS: m/z 367.9(M+H)<+ 1>H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.72 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.52 (brs, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.92 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.30 (s, 3H).
Korak J. Sinteza 6-((lH-pirazol-3-il)metil)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolil [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. U suspenziju 2-((4H-1,2,4-triazol-4-il) metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (30 mg, 60.28 umol, 1 ekv.) i HCl/dioksan (4 M, 1 mL, 66.35 ekv) u DCM (3 mL) je dodata H2O (50.00 mg, 2.78 mmol, 0.05 mL, 46.04 ekv) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. LCMS je pokazao da je polazni materijal u potpunosti potrošen, pronađen je željeni proizvod. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobio željeni proizvod (2.1 mg, 5.72 umol). Kolona: Xtimate C18 150*25mm*5um; mobilna faza: [voda (0.225% FA)-ACN]; B%: 13%-43%, 11.2min. LCMS: m/z 368.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8.74 (s, 2H), 8.38 (s, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.26 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.31 (s, 3H).
[0169] Sledeća jedinjenja su sintetisana u skladu sa Šemom E9 i procedurom iz Primera 9A-9B korišćenjem odgovarajućeg polaznog materijala. Standardna zaštita i deprotekcija se mogu koristiti kada je potrebno.
Primer 9D Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[ 5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on
[0170]
Korak A. Sinteza 2-hloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4' :4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona U smešu 4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d] piridazin-5(6H)-on (3 g, 14.5 mmol) u suvom THF (80 mL) je u kapima dodat LiHMDS (30.5 mL,) na -65 °C. Posle mešanja tokom 1 sata, dodat je rastvor heksahloroetana (1.8 mL, 16 mmol) u suvom THF (20 mL). Reakciona smeša je podignuta na -20 °C tokom 3 sata. Zatim je smeša ugašena zas. NH4CI i mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Talog je sakupljen filtracijom i ispran sa EtOAc da bi se dobilo 3.5 g 2-hloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 241 (M+H)<+>.
Korak B. Sinteza 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Pod azotom, u smešu 2-hloro-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (1.5 g, 6.2 mmol) i tributil (etenil) stanana (5.5 mL, 18.7 mmol) u DMF (30 mL) je dodat Pd(PPh3)4(0.36 g, 0.31 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 2 h. Zatim je smeša ohlađena i razblažena sa EtOAc, isprana sa vodom i slanim rastvorom, osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 10% MeOH u DCM) da bi se dobilo 1.4 g 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2, 3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 233 (M+H)<+>.
Korak C. Sinteza 4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbaldehida Na ispod -60 °C, smeša 4-metil-2-vinil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (500 mg, 2.15 mmol) u DCM/MeCN (500 mL, zapremina 1:1) je produvavana sa O3tokom 20 minuta. Zatim je reakcija ugašena dimetilsolfanom i koncentrovana da bi se dobilo 500 mg 4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3- d]piridazin-2-karbaldehida. LC-MS (ESI): m/z 235 (M+H)<+>.
Korak D. Sinteza 2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona U smešu 4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbaldehida (500 mg, 2.13 mmol) u EtOH (3 mL) je dodat NaBH4(81 mg, 2.13 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 5 min. Zatim je smeša sipana u zas. NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc.
Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog. Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 8% MeOH u DCM) da bi se dobilo 120 mg 2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[ 2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 237 (M+H)<+>.
Korak E. Sinteza 6-((2-hloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-ona U smešu 2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (200 mg, 0.85 mmol) u DMF (8 mL) je dodat K2CO3(351 mg, 2.54 mmol). Posle mešanja na 60 °C tokom 30 minuta, dodat je rastvor 2-hloro-4-(hlorometil)pirimidina (276 mg, 1.7 mmol) u DMF (2 mL). Reakciona smeša je mešana još 4 h, sipana u zas. NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog. Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 8% MeOH u DCM) da bi se dobilo 160 mg 6-((2-hloropirimidin-4-il) metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-5(6H)-on. LC-MS (ESI): m/z 363 (M+H)<+>.
Korak F. Sinteza 6-((2-(bis(2,4-dimetoksibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona U smešu 6-((2-hloropirimidin-4-il)metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (160 mg, 0.44 mmol) u MeCN (5 mL) je dodat bis(2 ,4-dimetoksibenzil)amin (280 mg, 0.88 mmol) i AcOH (1 kap). Reakciona smeša je mešana na 80 °C preko noći. Reakciona smeša je uparena i ostatak je prečišćen prep-TLC (eluent: 5% MeOH u DCM) da bi se dobilo 75 mg 6-((2-(bis(2, 4-dimetoksibenzil)amino)pirimidin-4-il) metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 644 (M+H)<+>.
Korak G. Sinteza 6-((2-(bis(2,4-dimetoksibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hlorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona Na 0 °C, u rastvor 6-((2-(bis(2,4-dimetoksibenzil) amino)) pirimidin-4-il) metil)-2-(hidroksimetil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona (75 mg, 0.12 mmol) u DCM (5 mL) je dodat Et3N (0.16 mL, 1.16 mmol) i MsCl (0.05 mL, 0.58 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa DCM, isprana sa zas. NH4CI i slanim rastvorom, osušena preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana da bi se dobilo 70 mg sirovog proizvoda 6-((2-(bis(2, 4-dimetoksibenzil)amino) pirimidin-4-il)metil)-2-(hlorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 662 (M+H)<+>.
Korak H. Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis(2,4-dimetoksibenzil) amino) pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Smeša 4H-1,2 ,4-triazola (39 mg, 0.57 mmol) i K2CO3(78 mg, 0.57 mmol) u DMF (3 mL) je mešana na 60 °C tokom 30 min. Dodat je 6-((2-(bis(2,4-dimetoksibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-2-(hlorometil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-on (75 mg, 0.11 mmol) i mešano je još 30 min. Suspenzija je sipana u zas. NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (silika gel, 0 ~ 10% DCM u MeOH) da bi se dobilo 60 mg 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2)-(bis(2,4-dimetoksibenzil)amino)pirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 695 (M+H)<+>.
Korak G. Sinteza 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolil[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona U smešu 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-6-((2-(bis (2,4-dimetoksibenzil) amino) pirimidin-4-il) metil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-(6H) -ona (30 mg, 0.043 mmol) u EtOH (2 mL) je dodat HCl (0.5 mL, 4 M u dioksanu). Reakciona smeša je mešana na 80 °C preko noći. Zatim je smeša ohlađena i sipana u zas. NaHC03, ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog. Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen prep-HPLC da bi se dobilo 8 mg 2-((1H-1,2,4-triazol-1-il) metil)-6-((2-aminopirimidin-4-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. LC-MS (ESI): m/z 395 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.12-8.10 (m, 2H), 6.60 (s, 2H), 6.19 (d, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.26 (s, 3H).
Primer 10. Sinteza jedinjenja E10-ii
[0171]
Šema 10
[0172] Reakcija E10-i sa LiHMDS i aldehidom daje jedinjenje E10-ii, koje može biti razdvojeno hiralnom HPLC ili SFC da bi se dobila dva enantiomera. Kako se ovde koristi, Arl i Ar2 su svaki nezavisno opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril.
Primer 10A. Sinteza (R)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-ona i (S)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil)-4- metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona
[0173]
Korak A. Sinteza 2-(hidroksi(1-((2)) -(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5,4:4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Pod argonom, u rastvor 4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazolo[5',4': 4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0.5 g, 1.20 mmol, 1 ekv.) u THF (10 mL) je polako dodat LiHMDS (1.0 M, 2.41 mL, 2 ekv.) na -78°C, i reakciona smeša je mešana na -70°C tokom 1 h. Zatim je u reakcionu smešu dodat rastvor 1-(2-trimetilsililetoksimetil) pirazol-3-karbaldehida (816.97 mg, 3.61 mmol, 3 ekv.) u THF (1 mL). Dobijena smeša je mešana na -70°C 1 h. TLC (petrol etar:EtOAc = 1:1) je pokazala da su formirane dve nove mrlje. Reakciona smeša je ugašena vodenim rastvorom NH4CI (5 mL) na -70°C, a zatim zagrejana do sobne temperature. Smeša je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (8 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL) i osušeni preko Na2SO4. Rastvarač je koncentrovan in vacuo. Ostatak je prečišćen pomoću Combiflash-a (od 100% petrol etra do 100% EtOAc) da bi se dobio sirovi proizvod (130 mg) kao bledo smeđa guma, koja je korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LCMS: m/z 643.2 [M+H]<+>
Korak B. Sinteza 6-((lH-pirazol-3-il) metil)-2-(hidroksi (1H-pirazol-3-il) metil)-4-metil-4H-tiazo [5',4':4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. U rastvor 2-(hidroksi(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-6-((1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4H-tiazoalo [5',4':4, 5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona (0.13 g, 202.20 umol, 1 ekv.) u DCM (8 mL) je dodat TFA (4.62 g, 40.52 mmol, 3 mL, 200.38 ekv), a zatim H2O (500.00 mg, 27.75 mmol, 0.5 mL, 137.26 eq), a zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 18 h, zatim zagrevana na 40°C 18 h. LCMS je pokazala da je polazni materijal u potpunosti potrošen. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobio željeni proizvod (20.5 mg). LCMS: m/z 382.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.72 (brs, 1H), 12.61 (brs, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.56-7.62 (m, 2H), 6.82 (brs, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.99-6.09 (m, 2H), 5.24-5.32 (m, 2H), 4.19 (s; 3H).
Korak C. Sinteza (R)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona i (S)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5(6H)-ona. Jedinjenje 6-((1H-pirazol-3-il)metil)-2-(hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4H-tiazolo[5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-5(6H)-on je odvojeno pomoću SFC. SFC uslovi: Kolona je DAICEL CHIRALCEL OJ-H (250mm*30mm, 5um); mobilna faza: A: 55% CO2; B: 45% [0.1% NH3H2O u EtOH]/min. Odvajanjem pomoću SFC je dobijen 2-[(R)-hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirolo[1,3-d]piridazin-5-on i 2-[(S)-hidroksi(1H-pirazol-3-il)metil]-4-metil-6-(1H-pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirolo[1,3-d]piridazin-5-on. Jedan izomer (4.4 mg): LCMS: m/z 383 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ ppm 8.39 (s, 1H), 7.61 (brs, 1H), 7.55 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.25 (brs, 1H), 6.18 (brs, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H). Drugi izomer (4.1 mg): LCMS: m/z 383 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.40 (s, 1H), 7.59 (brs, 1H), 7.54 (brs, 1H), 6.34 (brs, 1H), 6.26 (brs, 1 H), 6.19 (brs, 1 H), 5.44 (s, 2H), 4.29 (s, 3H).
Primer 10B: Sinteza 6-((lH-pirazol-3-il)metil)-2-(difluoro(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0174]
Korak A. 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H- pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamid. U Smešu 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)(hidroksi)metil)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-6H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 83.80 umol, napravljen slično kao E10-1) u DCM (1.5 mL) je dodat je MnO2(72.85 mg, 838.00 umol) i smeša je mešana na 15 °C tokom 1.5 sata. Reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (60 mg, sirov). LCMS: m/z 595.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.54 (s, 2H), 4.49 (s, 3H), 3.10 (s, 6H) 2.93 (s, 6H).
Korak B. 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)difluorometil)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-6H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-6-il) metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamid. U rastvor 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazo [5',4': 4,5] pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (240 mg, 403.60 umol) u DCE (4 mL) je dodat BAST (1.34 g, 6.05 mmol, 1.33 mL) i smeša je mešana na 50 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena dihlorometanom (20 mL) i isprana zasićenim NaHCO3(10 mL *2), osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (300 mg, sirovog) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS: m/z 617.1 (M+H)<+>.
Korak C. 6-((lH-pirazol-3-il)metil)-2-(difluoro(1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U smešu 3-((2-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il) difluorometil)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-6H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (240 mg, 163.47 umol) u DCM (2 mL) je dodat TFA (2.07 g, 18.15 mmol, 1.34 mL) i smeša je zagrevana do 50 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Agela ASB 150*25mm*5um; mobilna faza: [voda (0.05%HCl)-ACN]; B%: 30%-60%, 8 min) da bi se dobio željeni proizvod (3.9 mg, 5 prinos 45%, 92% čistoća) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/z 403.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 4.28 (s, 3H).
Primer 10C: Sinteza 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-ona
[0175]
Korak A: 3-((2-(1-(1-(N,N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)-1-hidroksietil)-4-metil-5-okso-4,5-di-hidro-6H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-6-il)metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamid. U rastvor 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-2-karbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (160 mg, 269.07 umol) u THF (3 mL) je dodat CH3MgBr (3 M, 179.38 uL) i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je sipana u zasićeni NH4CI (10 mL) na 0 °C, ekstrahovana etil acetatom (20 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 mL), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Kolona, Eluent od 0-90% etil acetat/petrol etar gradijent @ 40 mL/min) da bi se dobio željeni proizvod (50 mg, 81.87 umol). LCMS: m/z 611.1 (M+H)<+>.
Korak B: 2-(1-(1H-pirazol-3-il)etil)-6-((1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-4,6-dihidro-5H-tiazolo [5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-5-on. U smešu 3-((2-(1-(1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)-1-hidroksietil)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-6H-tiazolo [5',4':4,5] pirolo [2,3-d] piridazin-6-il) metil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 81.87 umol) u DCE (0.5 mL) je dodat Et3SiH (19.04 mg, 163.75 umol, 26.15 uL) na 0 °C, a zatim TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL, 163.75 umol, 26.15 uL) na 0 °C, a zatim TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL, 164 °C). C tokom 1 h. Smeša je zagrevana do 50 °C još 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (kolona: Agela ASB 150*25mm*5um; mobilna faza: [voda (0.05% HCl)-ACN]; B%: 25% -55%, 7 min) da bi se dobilo 7.0 mg željenog proizvoda. LCMS: m/z 381.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.46 (s, 1H), 8.15 (d, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.33 (s, 3H), 1.94 (d, 3H).
Primer 10D: Sinteza 6-((lH-pirazol-3-il)metil)-4-metil-2-(1H-pirazol-3-karbonil)-4,6-dihidro-5H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo [2,3-d]piridazin-5-ona
[0176]
[0177] Korak A. 4-metil-2-(1H-pirazol-3-karbonil)-6-(1H -pirazol-3-ilmetil)tiazolo[3,4]pirolo[1,3-d] piridazin-5-on. U rastvor 3-(6-((1-(N,N-dimetilsulfamoil)-1H-pirazol-3-il)metil)-4-metil-5-okso-5,6-dihidro-4H-tiazolo[5',4':4,5]pirolo[2,3-d]piridazin-2-karbonil)-N,N-dimetil-1H-pirazol-1-sulfonamida (50 mg, 84.08 umol) u DCE (1.5 mL ) je dodat TFA (2.31 g, 20.26 mmol, 1.5 mL) i reakciona smeša je zagrevana do 50 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen prep-HPLC da bi se dobilo 6.0 mg željenog proizvoda. LCMS: m/z 381.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.38 (s, 3H).
Primer 11. Test PKR Mutanta:
Procedura
[0178] Enzimski rastvor PKR ili PKR mutanta je razblažen u reakcionoj smeši, koja sadrži 1x pufer (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2) kao i PEP (konc. zavisi od enzima), 180 µM NADH, 0.5 jedinica LDH, 1 mM DTT, 0.03% BSA; naznačene su finalne koncentracije testa nakon razblaženja od 1.11 puta.
[0179] 2 µL test jedinjenja je prvo dodato u otvore, a zatim je dodato 180 µL reakcione smeše.
[0180] Reakciona smeša sa test jedinjenjem je kompletirana osim za ADP, i ploče su čuvane 60 minuta na sobnoj temperaturi.
[0181] 20 uL ADP je dodato da se započne reakcija na sobnoj temperaturi i napredovanje reakcije je mereno kao promena apsorpcije na talasnoj dužini od 340 nm na sobnoj temperaturi.
Priprema test jedinjenja:
[0182] Štok ispitnog jedinjenja je napravljen u koncentraciji od 100x u 100% DMSO (10mM) 1 do 3 razblaženja su napravljena za 11 tačaka (tj. 50 µl prve koncentracije je dodato u 100 µl 100% DMSO da bi se dobilo 3.33mM, 50 µl ovoga je dodato u 100 µl DMSO da bi se dobilo 1.11 mM, i tako dalje) • razblaženje 1 prema 100 u testu (2 µl u 200 µl) je dalo početnu koncentraciju od 100 µM, smanjujući 3 puta za 11 tačaka.
[0183] Pufer za analizu: 100 mM KCl, 50 mM Tris 7.5, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.03% BSA [0184] Reakciona smeša: PKR mutant enzim: 40-400 ng/otvoru; ADP: 0.2-1.65 mM; PEP: 0.1-0.5 mM; NADH:180 µM; LDH: 0.5 jedinica (Sigma# 59023); DTT: 1 mM; BSA: 0.03%.
Primer 12. PKR WT Test Procenta Aktivacije u Jednoj tački
[0185] Ovde opisano jedinjenje je razblaženo sa DMSO i testirano pri koncentraciji od 1 µM. Enzim je razblažen u enzimskom rastvoru, koji sadrži 1 x pufer (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2) kao i PEP (konc. zavisi od enzima), 180 mM NADH, 0.5 jedinica LDH, 1 mM DTT, 0.03% BSA; naznačene su finalne koncentracije testa nakon razblaženja od 1.11 puta.
[0186] 2 µL rastvora jedinjenja je prvo dodato u otvore, a zatim je dodato 180 mL enzimskog rastvora. Testovi su kompletirani osim za ADP, a ploče su držane 60 minuta na sobnoj temperaturi. Dodato je 20 mL ADP da bi test započeo, a rezultat testa je procenjen korišćenjem OD340. Test je izveden na sobnoj temperaturi.
Finalna koncentracija: PKR tež. (100 ng/otvor), Tris pH 7.5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2(5 mM), ADP (0.48 mM), PEP (0.15 mM), NADH (180 µM), LDH (0.5 jedinica, Sigma 59023), DTT (1 mM) i BSA (0.03%).
Primer 13. PKR R510Q Test Procenta Aktivacije u Jednoj Tački
[0187] Ovde opisano jedinjenje je razblaženo sa DMSO i testirano na koncentraciji od 1 mM. Enzim je razblažen u enzimskom rastvoru, koji sadrži 1x pufer (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2) kao i PEP (konc. zavisi od enzima), 180 µM NADH, 0.5 jedinica LDH, 1 mM DTT, 0.03% BSA; naznačene su finalne koncentracije testa nakon razblaženja od 1.11 puta.
[0188] 2 µL rastvora jedinjenja je prvo dodato u otvore, a zatim je dodato 180 µL enzimskog rastvora. Testovi su kompletirani osim za ADP, a ploče su čuvane 60 minuta na sobnoj temperaturi. Dodato je 20 µL ADP da bi test započeo, a rezultat testa je procenjen korišćenjem OD340. Test je izveden na sobnoj temperaturi. Finalna koncentracija: PKR R510Q (40 ng/otvor), Tris pH 7.5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2(5 mM), ADP (0.2 mM), PEP (0.11 mM), NADH (180 µM), LDH (0.5 jedinica, Sigma 59023), DTT (1 mM) i BSA (0.03%).
Primer 14. PKR R532V Test Procenta Aktivacije u Jednoj Tački
[0189] Ovde opisano jedinjenje je razblaženo sa DMSO i testirano pri koncentraciji od 1 µM. Enzim je razblažen u enzimskom rastvoru, koji sadrži 1x pufer (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2) kao i PEP (konc. zavisi od enzima), 180 µM NADH, 0.5 jedinica LDH, 1 mM DTT, 0.03% BSA; naznačene su finalne koncentracije testa nakon razblaženja od 1.11 puta.
[0190] 2 µL rastvora jedinjenja je prvo dodato u otvore, a zatim je dodato 180 µL enzimskog rastvora. Testovi su kompletirani osim za ADP, i ploče su držane 60 minuta na sobnoj temperaturi. Dodato je 20 µL ADP-a da bi test započeo, a rezultat testa je procenjen korišćenjem OD340. Test je izveden na sobnoj temperaturi.
Finalna koncentracija: PKR R532W (100 ng/otvoru), Tris pH 7.5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2(5 mM), ADP (0.36 mM), PEP (0.1 mM), NADH (180 µM), LDH (0.5 jedinica, Sigma 59023), DTT (1 mM) i BSA (0.03%).
Primer 15. PKR T384M Test Procenta Aktivacije u Jednoj Tački
[0191] Ovde opisano jedinjenje je razblaženo sa DMSO i testirano pri koncentraciji od 1 µM. Enzim je razblažen u enzimskom rastvoru, koji sadrži 1x pufer (100 mM KCl, 50 mM Tris pH 7.5, 5 mM MgCl2) kao i PEP (konc. zavisi od enzima), 180 µM NADH, 0.5 jedinica LDH, 1 mM DTT, 0.03% BSA; naznačene su finalne koncentracije testa nakon razblaženja od 1.11 puta.
[0192] 2 µL rastvora jedinjenja je prvo dodato u otvore, a zatim je dodato 180 µL enzimskog rastvora. Testovi su kompletirani osim za ADP, a ploče su držane 60 minuta na sobnoj temperaturi. Dodato je 20 µL ADP da bi test započeo, a rezultat testa je procenjen korišćenjem OD340. Test je izveden na sobnoj temperaturi.
Finalna koncentracija: PKR T384M rastvorljiv (300 ng/otvoru), Tris pH 7.5 (50 mM), KCl (100 mM), MgCl2(5 mM), ADP (0.08 mM), PEP (0.23 mM), NADH (180 µM), LDH (0.5 jedinica, Sigma 59023), DTT (1 mM) i BSA (0.03%).
Primer 16. Prečišćavanje Crvenih Krvnih Zrnaca (RBC)
[0193] Sakupljena je sveža krv od zdravih dobrovoljaca u K2EDTA epruvete. Cela krv je peletirana centrifugiranjem na 500 g tokom 10 minuta. Odsećicite otvor vreće za transfuziju sa Purecell neofilterom za redukciju leukocita (Fisher NC0267633) jedan (1) inč iznad filtera. Pričvrstite cev šprica od 10 ml na ostatak isečene cevi koja je pričvršćena za neofilter. Sloj plazme je uklonjen sa peleta pune krvi i talog je resuspendovan u 2x zapremini fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Prenesite 9 ml resuspendovane pelete krvnih zrnaca u pripremljeni špric od 10 ml koji je pričvršćen za neofilter. Pustite da cela krv pod uticajem gravitacije teče kroz filter sve dok sva tečnost ne prođe kroz gornje cevi u disk filtera. Dodajte klip u špric, uklonite špric iz stezaljke i okrenite filter, a zatim uvucite vazduh kroz filterski sistem šprica. Koristeći novi špric od 5 ml, uklonite filtrirane eritrocite iz kese preko priključka za špric i prenesite prečišćene eritrocite u epruvetu sa zatvaračem od 5 ml koja je inkubirana na ledu. Centrifugirajte epruvetu od 5 ml na 500 g tokom 10 minuta na 15C, aspirirajte supernatant i resuspendujte u AGAM-u (1x PBS, 1% glukoza, 170 mg/L adenin, 5.25 g/L manitol) pri gustini od 4x10<9>ćelija/mL.
Primer 17. Ćelijski ATP test
[0194] Za ćelijske ATP testove je pripremljeno jedinjenje kako je ovde opisano u 100% DMSO kao štok 10 mM. Serijska razblaženja (1:4) su izvedena na ploči za skladištenje sa V-dnom i 96 otvora, a zatim dodata 1:100 u ploče sa 96 otvora i V-dnom, koje su sadržale AGAM. RBC su razblažena u AGAM medijumu do gustine od 1x10<7>ćelija/mL pre dodavanja 90 µL/otvoru u testne ploče sa crnim prozirnim dnom (finalna koncentracija jedinjenja pri koncentraciji od 0.1% DMSO). Ploče za ispitivanje su zaptivene korišćenjem zaptivki od aluminijumske folije i inkubirane preko noći na 37°C u vlažnoj komori. Nivoi ATP-a su očitani korišćenjem Cell-Titer-Glo (Promega).

Claims (39)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<1>je vodonik, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani haloalkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani aril, -OR<o1>, -C(=O)R<cl>, ili zaštitna grupa za azot; pri čemu: R<o1>je vodonik, opciono supstituisani alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; R<c1>je opciono supstituisani alkil ili -N(R<cn>)2, gde u svakom pojavljivanju R<cn>je nezavisno vodonik, -C1-6alkil ili zaštitna grupa za azot; R<2>i Q su svaki nezavisno opciono supstituisani 5- ili 6-člani monociklični heteroaril; R<a>i R<b>svaki nezavisno su vodonik, halogen, -CN, -NO2, -N3, opciono supstituisani alkil, -OR<o3>, -N(R<n1>)2, -C(=O)N(R<n1>)2ili -C(=O)R<c2>; ili alternativno R<a>i R<b>mogu biti uzeto zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili opciono supstituisani heterociklil; pri čemu: u svakom pojavljivanju R<n1>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot; R<o3>je vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; i R<c2>je opciono supstituisani -C1-C6alkil; i R<j>i R<k>su svaki nezavisno vodonik, halogen, -CN, -OR<o7>, -N(R<n5>)2, -N(R<n5>)C(=O)R<c5>, -C(=O) N(R<n5>)2, -C(=O)R<c5>, -C(=O)OR<o7>, -SR<js>, -S(=O)2R<js>, -S(=O)R<js>, ili opciono supstituisani -C1-C6alkil; ili alternativno R<j>i R<k>mogu biti uzeto zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani da formiraju C=O, opciono supstituisani -C1-C6monociklični cikloalkil prsten, ili opciono supstituisani C3-C6monociklični heterociklil prsten; pri čemu: u svakom pojavljivanju R<n5>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, -O R<o8>ili zaštitna grupa za azot, pri čemu R<o8>je vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; u svakom pojavljivanju R<o7>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; u svakom pojavljivanju R<c5>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil; i u svakom pojavljivanju R<js>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil, opciono supstituisani C6-12aril, opciono supstituisani heteroaril ili zaštitna grupa za sumpor.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu 5- ili 6-točlani monociklični heteroaril predstavljen sa R2je opciono supstituisan na svakom izmenjivom atomu ugljenika u prstenu, sa R<p>i opciono je supstituisan na svakom izmenjivom atomu azota u prstenu sa R<n6>; pri čemu: u svakom pojavljivanju R<p>je nezavisno vodonik, halogen, -CN,-NO2,-N3, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani heteroaril, -O R<o6>, -SR<s2>, -N(R<n3>)2, -C(=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)C(=O)R<c4>, -C(=O) R<c4>, -C(=O)OR<o6>, -OC(=O)R<c4>, -S (=O)R<s2>, -S(=O)2R<s2>, -S(=O)OR<o6>, -OS(=O)R<c4>, -S(=O)2OR<o6>, -OS(=O)2R<c4>, -S(=O)N(R<n3>)2, -S (=O)2N(R<n3>)2,-N(R<n3>)S(=O) R<s2>,-N(R<n3>)S(=O)2R<s2>,-N(R<n3>)C(=O)OR<o6>, -OC(=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>) C (=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S(=O)N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S (=O)2N(R<n3>)2, -N(R<n3>)S(=O)OR<o6>, -N(R<n3>)S(=O)2OR<o6>, -OS(=O)N(R<n3>)2, ili -OS(=O)2N (R<n3>)2; ili alternativno u dva pojavljivanja R<p>vezan za iste ili susedne atome ugljenika, mogu biti uzeti zajedno sa atomom(ima) ugljenika za koje su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili heterocikloalkil; pri čemu: u svakom pojavljivanju R<n3>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot; u svakom pojavljivanju R<o6>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za kiseonik; i u svakom pojavljivanju R<c4>je opciono supstituisani -C1-C6alkil; u svakom pojavljivanju R<s2>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil ili zaštitna grupa za sumpor; i R<n6>je vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot.
  3. 3. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 2 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa R<2>je izabran od jednog od sledećeg:
    pri čemu: u svakom pojavljivanju R<nc>i R<nd>je nezavisno vodonik opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot; i p je 0, 1, 2, 3 ili 4, zavisno od valence.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu (a) jedinjenje je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu q je 0, 1, 2 ili 3; ili (b) jedinjenje je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kojoj q je 0, 1, 2 ili 3.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-3, pri čemu (a) jedinjenje je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu q je 0, 1, 2 ili 3; ili (b) jedinjenje je predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu q je 0, 1, 2 ili 3.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 2-4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu u svakom pojavljivanju R<p>je nezavisno vodonik, halogen, opciono supstituisani C1-4alkil, -CN, -NO<2>, -N<3>, -OR<o6>, -N(R<n3>)2, -C(=O)N(R<n3>)2, -C(=O)R<c4>, ili -C(=O)OR<o6>.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu (a) 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa Q je izabran od sledećeg:
    pri čemu: u svakom pojavljivanju R<n>je nezavisno vodonik, halogen, -CN,-NO2,-N3, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani alkenil, opciono supstituisani alkinil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani heteroaril, -OR<o4>, -SR<s1>, -N(R<n2>)2, -C (=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)C(=O)R<c3>, -C(=O)R<c3>, -C(=O)OR<o4>, -OC(=O)R<c3>, -S(=O)R<s1>, -S(=O)2R<s1>, -S(=O) OR<o4>, -OS(=O)R<c3>, -S(=O)2OR<o4>, -OS(=O)2R<c3>, -S(=O)N(R<n2>)2, -S(=O)2N(R<n2>)2, -N(R<n2>) S(=O)R<s1>, -N(R<n2>)S(=O)2R<s1>, -N(R<n2>)C(=O)OR<o4>, -OC(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)C(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)2N(R<n2>)2, -N(R<n2>)S(=O)OR<o4>, -N(R<n2>)S (=O)2OR<o4>, -OS(=O)N(R<n2>)2, ili -OS(=O)2N (R<n2>)2; ili u dva pojavljivanja R<n>vezanih za iste ili susedne atome ugljenika, uzeto zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani da formiraju opciono supstituisani cikloalkil ili heterocikloalkil; pri čemu: u svakom pojavljivanju R<n2>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot; u svakom pojavljivanju R<o4>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil ili zaštitna grupa za kiseonik; u svakom pojavljivanju R<c3>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil; u svakom pojavljivanju R<s1>je nezavisno opciono supstituisani -C1-C6alkil ili zaštitna grupa za sumpor; n je 0, 1, 2 ili 3, zavisno od valence; i svaki od R<na>, R<nb>i R<nd>je nezavisno vodonik, opciono supstituisani -C1-C6alkil, ili zaštitna grupa za azot; ili (b) 5- ili 6-člani monociklični heteroaril predstavljen sa Q je
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu u svakom pojavljivanju R<n>je nezavisno vodonik, halogen, opciono supstituisani C1-4alkil, -CN, -NO2, -N3, -OR<o4>, -N(R<n2>)2, -C(=O)N(R<n2>)2, -C(=O)R<c3>ili -C(=O)OR<o4>.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R<1>je vodonik ili -C1-C4alkil; i/ili pri čemu R<j>i R<k>su svaki vodonik; i/ili pri čemu R<a>i R<b>su svaki vodonik.
  10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4 ili patentnom zahtevu 5 ili bilo kojem od patentnih zahteva 6-9 kada su zavisni od patentnih zahteva 4 ili 5, pri čemu q je 0 ili 1.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje odabrano od sledećih jedinjenja:
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  16. 16. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  17. 17. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  18. 18. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  19. 19. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  20. 20. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  21. 21. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  22. 22. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  23. 23. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  24. 24. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  25. 25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  26. 26. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  27. 27. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  28. 28. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  29. 29. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom
  30. 30. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  31. 31. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  32. 32. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  33. 33. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom:
  34. 34. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
  35. 35. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 34 za upotrebu u postupku lečenja anemije; pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu efikasne količine jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili farmaceutske kompozicije prema patentnom zahtevu 34.
  36. 36. Jedinjenje, farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 35, pri čemu anemija je diseritropoetska anemija.
  37. 37. Jedinjenje, farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 35, pri čemu anemija je hemolitička anemija; opciono pri čemu je hemolitička anemija nasledna i/ili urođena hemolitička anemija, stečena hemolitička anemija ili anemija kao deo multisistemske bolesti.
  38. 38. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 34, za upotrebu u postupku lečenja bolesti srpastih ćelija; pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu efikasne količine jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-3 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili farmaceutske kompozicije prema patentnom zahtevu 34.
  39. 39. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 34 za upotrebu u postupku lečenja talasemije, poželjno beta-talasemije, nasledne sferocitoze, nasledne eliptocitoze, abetalipoproteinemije ili Bassen-Kornzweig sindroma, bolesti srpastih ćelija, paroksizmalne noćne hemoglobinurije ili stečene hemolitičke anemije ili anemije hroničnih bolesti; pri čemu postupak obuhvata administriranje subjektu efikasne količine jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-33 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili farmaceutske kompozicije prema patentnom zahtevu 34.
RS20220003A 2017-08-15 2018-08-15 Aktivatori piruvat kinaze za upotrebu u lečenju krvnih poremećaja RS62871B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2017097496 2017-08-15
US201862673533P 2018-05-18 2018-05-18
US201862673526P 2018-05-18 2018-05-18
EP18779068.8A EP3668513B1 (en) 2017-08-15 2018-08-15 Pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
PCT/US2018/000128 WO2019035864A1 (en) 2017-08-15 2018-08-15 PYRUVATE KINASE ACTIVATORS FOR USE IN THE TREATMENT OF BLOOD DISORDERS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62871B1 true RS62871B1 (sr) 2022-02-28

Family

ID=63524352

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220003A RS62871B1 (sr) 2017-08-15 2018-08-15 Aktivatori piruvat kinaze za upotrebu u lečenju krvnih poremećaja
RS20230354A RS64221B1 (sr) 2017-08-15 2018-08-15 Modulatori piruvat kinaze i njihova upotreba

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230354A RS64221B1 (sr) 2017-08-15 2018-08-15 Modulatori piruvat kinaze i njihova upotreba

Country Status (34)

Country Link
US (8) US11590132B2 (sr)
EP (4) EP4026838A1 (sr)
JP (5) JP7275107B2 (sr)
KR (3) KR102717594B1 (sr)
CN (3) CN117186119A (sr)
AU (4) AU2018316588B2 (sr)
BR (1) BR112020003254A2 (sr)
CA (1) CA3072455A1 (sr)
CL (1) CL2020000375A1 (sr)
CO (2) CO2020002961A2 (sr)
CR (1) CR20200123A (sr)
CY (1) CY1124953T1 (sr)
DK (2) DK3668513T3 (sr)
EC (1) ECSP20018487A (sr)
ES (3) ES2966825T3 (sr)
FI (1) FI3668512T3 (sr)
HR (2) HRP20220039T1 (sr)
HU (2) HUE057178T2 (sr)
IL (3) IL272599B (sr)
LT (2) LT3668512T (sr)
MD (1) MD3668513T2 (sr)
MX (2) MX2020001832A (sr)
MY (1) MY204421A (sr)
PE (1) PE20200724A1 (sr)
PH (1) PH12020500343B1 (sr)
PL (2) PL3668512T3 (sr)
PT (2) PT3668513T (sr)
RS (2) RS62871B1 (sr)
SG (2) SG11202001262QA (sr)
SI (2) SI3668512T1 (sr)
SM (2) SMT202300146T1 (sr)
TW (3) TWI796353B (sr)
UA (1) UA126292C2 (sr)
WO (3) WO2019035865A1 (sr)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3448859T (pt) 2017-03-20 2019-10-25 Forma Therapeutics Inc Composições de pirrolopirrole como ativadores de piruvato quinase (pkr).
SG11202001262QA (en) 2017-08-15 2020-03-30 Agios Pharmaceuticals Inc Pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
US12233063B2 (en) 2017-10-20 2025-02-25 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating eye disorders
ES2989438T3 (es) 2018-09-19 2024-11-26 Novo Nordisk Healthcare Ag Activación de la piruvato cinasa R
US12053458B2 (en) 2018-09-19 2024-08-06 Novo Nordisk Health Care Ag Treating sickle cell disease with a pyruvate kinase R activating compound
SG11202108744WA (en) * 2019-02-13 2021-09-29 Agios Pharmaceuticals Inc Thieno[3,2-b] pyrrole[3,2-d]pyridazinone derivatives and their use as pkm2 derivatives for the treatment of cancer, obesity and diabetes related disorders
WO2020262419A1 (ja) * 2019-06-26 2020-12-30 日産化学株式会社 電荷輸送性ワニス
CN114615977B (zh) 2019-09-19 2025-01-14 诺沃挪第克健康护理股份公司 丙酮酸激酶r(pkr)活化组合物
EP4185293A4 (en) * 2020-07-21 2025-01-15 The Regents of The University of Michigan COMPOSITIONS AND METHODS FOR ACTIVATING PYRUVATE KINASE
CN112490502B (zh) * 2020-12-04 2022-01-21 广州天赐高新材料股份有限公司 一种电解液及锂二次电池
WO2022170200A1 (en) 2021-02-08 2022-08-11 Global Blood Therapeutics, Inc. 1-(2-sulfonyl-2,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-5(4h)-yl]-ethanone derivatives as pyruvate kinase (pkr) and pkm2 activators for the treatment of sickle cell disease
US12128035B2 (en) 2021-03-19 2024-10-29 Novo Nordisk Health Care Ag Activating pyruvate kinase R
CA3231728A1 (en) * 2021-09-30 2023-04-06 Sitryx Therapeutics Limited Novel compounds
IL312679A (en) * 2021-11-16 2024-07-01 Agios Pharmaceuticals Inc Compounds for the treatment of anemia associated with MDS and other conditions
CN116159061A (zh) * 2023-03-09 2023-05-26 上海市第十人民医院 丙酮酸激酶m2激活剂在制备预防或治疗心力衰竭的药物中的应用
EP4671102A1 (en) 2023-03-28 2025-12-31 Honda Motor Co., Ltd. METHOD FOR PROVIDING INFORMATION, PROGRAM FOR PROVIDING INFORMATION, STORAGE MEDIA AND INFORMATION PROCESSING APPARATUS
TW202509043A (zh) 2023-05-15 2025-03-01 美商阿吉歐斯製藥公司 ２－（（１ｈ－吡唑－３－基）甲基）－６－（（６－胺基吡啶－２－基）甲基）－４－甲基－４，６－二氫－５ｈ－噻唑基［５＇，４＇：４，５］吡咯并［２，３－ｄ］嗒𠯤－５－酮之結晶形式
CN121443584A (zh) * 2023-07-05 2026-01-30 安吉奥斯医药品有限公司 丙酮酸激酶活化剂的合成
WO2025207563A1 (en) 2024-03-27 2025-10-02 Agios Pharmaceuticals, Inc. Use of a pk activator in the treatment of sickle cell disease

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4405635A (en) 1979-06-18 1983-09-20 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. 4-Aroylimidazol-2-ones and their use as pharmaceuticals
US4883914A (en) 1987-08-17 1989-11-28 American Cyanamid Company Benzenesulfonyl carboxamide compounds useful as herbicidal agents
AU6388900A (en) 1999-07-30 2001-02-19 Abbott Gmbh & Co. Kg 2-pyrazolin-5-ones
BR0013694A (pt) 1999-09-04 2002-05-21 Astrazeneca Ab Composto, processo para a preparação de um composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto
EP1972629A1 (en) * 2007-03-23 2008-09-24 Mutabilis SA New imidazolo-heteroaryl derivatives with antibacterial properties
FR2933983B1 (fr) * 2008-07-15 2010-08-27 Servier Lab Nouveaux derives tricycliques,leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
KR20110033299A (ko) * 2008-07-23 2011-03-30 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 트리-사이클릭 피라졸로피리딘 키나제 억제제
WO2010025202A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Amgen Inc. PYRIDO[3,2-d]PYRIDAZINE-2(1H)-ONE COMPOUNDS AS P38 MODULATORS AND METHODS OF USE THEREOF
JP5632379B2 (ja) * 2008-10-09 2014-11-26 アメリカ合衆国 ヒトピルビン酸キナーゼ活性化剤
EP2417123A2 (en) * 2009-04-06 2012-02-15 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions and related methods of use
CR20170071A (es) 2009-06-29 2017-03-28 Agios Pharmaceuticals Inc Compuestos terapeuticos y composiciones
CA2797694A1 (en) 2010-04-29 2011-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Departmen T Of Health And Human Services Activators of human pyruvate kinase
JP5886310B2 (ja) 2010-12-06 2016-03-16 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｌｐ−ＰＬＡ２により媒介される疾患または状態の処置における使用のためのピリミジノン化合物
TWI549947B (zh) 2010-12-29 2016-09-21 阿吉歐斯製藥公司 治療化合物及組成物
ME03074B (me) * 2011-05-03 2019-01-20 Agios Pharmaceuticals Inc Akтivatori piruvat kinaze za upotrebu u terapiji
CA2834692A1 (en) * 2011-05-03 2012-11-08 Agios Pharmaceuticals, Inc. Pyruvate kinase activators for use in therapy
EP3372230B1 (en) 2011-05-03 2020-08-12 Agios Pharmaceuticals, Inc. Pyruvate kinase activators for use for increasing lifetime of the red blood cells and treating anemia
US9388164B2 (en) 2011-05-03 2016-07-12 Agios Pharmaceuticals, Inc Methods of using pyruvate kinase activators
CN103930422A (zh) * 2011-07-19 2014-07-16 无限药品股份有限公司 杂环化合物及其用途
WO2013056153A1 (en) * 2011-10-13 2013-04-18 Kung Charles Activators of pyruvate kinase m2 and methods of treating disease
US9921221B2 (en) 2012-07-26 2018-03-20 Joslin Diabetes Center, Inc. Predicting and treating diabetic complications
WO2014074848A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compounds and compositions and their use as pkm2 modulators
EP2951181A1 (en) * 2013-01-30 2015-12-09 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Amidoimidazopyridazines as mknk-1 kinase inhibitors
US9783529B2 (en) 2013-03-13 2017-10-10 Flatley Discovery Lab, Llc Pyridazinone compounds and methods for the treatment of cystic fibrosis
WO2014139144A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Agios Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compounds and compositions
AR097543A1 (es) * 2013-09-06 2016-03-23 Lexicon Pharmaceuticals Inc COMPUESTOS BASADOS EN IMIDAZO[1,2-b]PIRIDAZINA, COMPOSICIONES QUE LOS COMPRENDEN Y SUS MÉTODOS DE USO
HRP20220195T1 (hr) 2017-07-07 2022-04-15 Inflazome Limited Novi spojevi sulfonamid karboksamida
SG11202001262QA (en) 2017-08-15 2020-03-30 Agios Pharmaceuticals Inc Pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
AR112475A1 (es) 2017-08-15 2019-10-30 Agios Pharmaceuticals Inc Moduladores de piruvato quinasas y uso de los mismos
KR20200041942A (ko) 2017-08-15 2020-04-22 애브비 인코포레이티드 거대환식 mcl-1 저해제 및 이의 용도
PE20200758A1 (es) 2017-08-15 2020-07-27 Inflazome Ltd Sulfonilureas y sulfoniltioureas como inhibidores de nlrp3
SG11202108744WA (en) * 2019-02-13 2021-09-29 Agios Pharmaceuticals Inc Thieno[3,2-b] pyrrole[3,2-d]pyridazinone derivatives and their use as pkm2 derivatives for the treatment of cancer, obesity and diabetes related disorders

Also Published As

Publication number Publication date
US20220233541A1 (en) 2022-07-28
US11590132B2 (en) 2023-02-28
CR20200123A (es) 2020-06-29
EP3668513A1 (en) 2020-06-24
HUE057178T2 (hu) 2022-04-28
ES2966825T3 (es) 2024-04-24
JP7301040B2 (ja) 2023-06-30
IL272597B (en) 2022-06-01
WO2019035863A8 (en) 2019-03-28
TWI796353B (zh) 2023-03-21
KR102717594B1 (ko) 2024-10-14
PT3668513T (pt) 2022-01-21
TWI823580B (zh) 2023-11-21
CA3071993A1 (en) 2019-02-21
PT3668512T (pt) 2023-05-22
US20230226055A1 (en) 2023-07-20
SMT202200023T1 (it) 2022-03-21
TWI790271B (zh) 2023-01-21
WO2019035863A1 (en) 2019-02-21
JP7275107B2 (ja) 2023-05-17
US20220395503A1 (en) 2022-12-15
JP2023027276A (ja) 2023-03-01
WO2019035864A1 (en) 2019-02-21
RU2020110573A3 (sr) 2021-12-24
UA126292C2 (uk) 2022-09-14
EP4026838A1 (en) 2022-07-13
HRP20230452T1 (hr) 2023-07-21
KR20200054200A (ko) 2020-05-19
CO2020002959A2 (es) 2020-04-13
JP7530453B2 (ja) 2024-08-07
TW201919631A (zh) 2019-06-01
TW202323258A (zh) 2023-06-16
SG11202001262QA (en) 2020-03-30
AU2018316587B2 (en) 2023-05-11
CN111032045B (zh) 2023-08-15
PH12020500343B1 (en) 2024-02-21
US11957680B2 (en) 2024-04-16
EP3668512A1 (en) 2020-06-24
CN111032046B (zh) 2023-09-26
US20250144093A1 (en) 2025-05-08
US11364240B2 (en) 2022-06-21
RS64221B1 (sr) 2023-06-30
SI3668513T1 (sl) 2022-04-29
HRP20220039T1 (hr) 2022-04-15
CL2020000375A1 (es) 2020-12-11
AU2024205818A1 (en) 2024-09-05
PL3668512T3 (pl) 2023-06-19
DK3668513T3 (da) 2022-01-10
CN117186119A (zh) 2023-12-08
JP2020531432A (ja) 2020-11-05
EP3668881B1 (en) 2023-10-04
US11872225B2 (en) 2024-01-16
JP2023052478A (ja) 2023-04-11
ES2944545T3 (es) 2023-06-22
HUE061910T2 (hu) 2023-08-28
DK3668512T3 (da) 2023-05-22
CO2020002961A2 (es) 2020-04-13
KR20200054199A (ko) 2020-05-19
KR102642408B1 (ko) 2024-02-28
KR20230127364A (ko) 2023-08-31
MX2020001833A (es) 2020-07-22
US20200206225A1 (en) 2020-07-02
MY204421A (en) 2024-08-28
CA3072455A1 (en) 2019-02-21
US11464775B2 (en) 2022-10-11
WO2019035864A8 (en) 2019-03-28
AU2018316588B2 (en) 2023-02-02
IL292530A (en) 2022-06-01
SG11202001353PA (en) 2020-03-30
SMT202300146T1 (it) 2023-07-20
US12133853B2 (en) 2024-11-05
JP2024147805A (ja) 2024-10-16
CY1124953T1 (el) 2023-01-05
IL272599A (en) 2020-03-31
AU2023202772B2 (en) 2024-05-16
SI3668512T1 (sl) 2023-06-30
BR112020003254A2 (pt) 2020-10-27
FI3668512T3 (fi) 2023-05-12
PH12020500343A1 (en) 2021-02-08
US20200207785A1 (en) 2020-07-02
AU2018316588A1 (en) 2020-02-20
US20210130371A1 (en) 2021-05-06
PE20200724A1 (es) 2020-07-21
EP3668513B1 (en) 2021-11-10
US11040036B2 (en) 2021-06-22
WO2019035865A8 (en) 2019-03-28
BR112020003262A2 (pt) 2020-09-01
LT3668512T (lt) 2023-06-12
IL292530B2 (en) 2023-06-01
JP2020531443A (ja) 2020-11-05
ES2905100T3 (es) 2022-04-07
WO2019035865A1 (en) 2019-02-21
CN111032046A (zh) 2020-04-17
EP3668512B1 (en) 2023-02-15
IL272599B (en) 2022-08-01
ECSP20018487A (es) 2020-05-29
RU2020110573A (ru) 2021-09-16
TW201920203A (zh) 2019-06-01
IL272597A (en) 2020-03-31
MD3668513T2 (ro) 2022-04-30
AU2018316587A1 (en) 2020-02-20
MX2020001832A (es) 2020-07-22
AU2023202772A1 (en) 2023-05-18
US20210077490A1 (en) 2021-03-18
EP3668881A1 (en) 2020-06-24
PL3668513T3 (pl) 2022-03-21
LT3668513T (lt) 2022-03-25
KR102764124B1 (ko) 2025-02-05
CN111032045A (zh) 2020-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102717594B1 (ko) 혈액 장애의 치료에 사용하기 위한 피루브산 키나아제 활성화제
HK40077435A (en) Pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
CA3071993C (en) Thiazolo(5&#39;,4&#39;:4,5)pyrrolo(2,3-d)pyridazine-5-one derivatives and pharmaceutical compositions thereof useful as pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
HK40030323B (en) Pyruvate kinase activators for use in treating blood disorders
BR112020003262B1 (pt) Composto, composição farmacêutica e usos do referido composto e da referida composição no tratamento de distúrbios do sangue
EA042084B1 (ru) Активаторы пируваткиназы для применения в лечении нарушений со стороны крови
EA046698B1 (ru) Активаторы пируваткиназы для применения в лечении нарушений со стороны крови