ES2954991T3 - Moduladores del transporte nuclear que contienen hidrazida y usos de los mismos - Google Patents

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Abstract

La invención se refiere generalmente a moduladores del transporte nuclear, por ejemplo, inhibidores de CRM1, y más particularmente a un compuesto representado por la fórmula estructural I: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde los valores y valores alternativos para las variables son como se definen y describen en el presente documento. La invención también incluye la síntesis y el uso de un compuesto de fórmula estructural I, o una sal o composición farmacéuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, en el tratamiento, modulación y/o prevención de condiciones fisiológicas asociadas con la actividad de CRM1. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Moduladores del transporte nuclear que contienen hidrazida y usos de los mismos
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Las células de la mayoría de las principales neoplasias malignas sólidas y hematológicas humanas muestran una localización celular anormal de una variedad de proteínas oncogénicas, proteínas supresoras de tumores y reguladores del ciclo celular (Cronshaw et al. 2004, Falini et al 2006). Por ejemplo, ciertas mutaciones de p53 conducen a su localización en el citoplasma en lugar de en el núcleo. El resultado es la pérdida de la regulación normal del crecimiento, a pesar de la función supresora de tumores intacta. En otros tumores, el p53 de tipo salvaje se secuestra en el citoplasma o se degrada rápidamente, lo que conduce de nuevo a la pérdida de su función supresora. La restauración de la localización nuclear adecuada de la proteína p53 funcional puede normalizar algunas propiedades de las células neoplásicas (Cai et al. 2008; Hoshino et al. 2008; Lain et al. 1999a; Lain et al. 1999b; Smart et al. 1999), puede restaurar la sensibilidad de las células cancerosas a los agentes que dañan el ADN (Cai et al. 2008), y puede provocar la regresión de tumores establecidos (Sharpless & DePinho 2007, Xue et al. 2007). Se han obtenido datos similares para otras proteínas supresoras de tumores como la cabeza de horquilla (Turner y Sullivan 2008) y c-Abl (Vignari y Wang 2001). Además, la localización anormal de varias proteínas supresoras de tumores y reguladoras del crecimiento puede estar implicada en la patogénesis de enfermedades autoinmunes (Davis 2007, Nakahara 2009). La inhibición de CRM1 puede tener una utilidad especialmente interesante en los síndromes de cáncer familiar (por ejemplo, el síndrome de Li-Fraumeni debido a la pérdida de un alelo de p53, los síndromes de cáncer BRCA1 o 2), en los que proteínas supresoras tumorales (TSP) específicas están suprimidas o son disfuncionales y en los que el aumento de los niveles de TSP mediante la administración sistémica (o local) de inhibidores de CRM1 podría ayudar a restaurar la función supresora tumoral normal.
Proteínas y ARN específicos son transportados dentro y fuera del núcleo por moléculas de transporte especializadas, que se clasifican como importinas si transportan moléculas al núcleo, y exportinas si transportan moléculas fuera del núcleo (Terry et al. 2007; Sorokin et al. 2007). Las proteínas que se transportan al núcleo o fuera de él contienen secuencias de importación/localización nuclear (NLS) o exportación (NES) que les permiten interactuar con los transportadores correspondientes. Chromosomal Region Maintenance 1 (Crm1 o CRM1), también llamada exportina-1 o Xpo1, es una exportina importante.
Se ha informado de la sobreexpresión de Crm1 en varios tumores, incluido el cáncer de ovario humano (Noske et al.
2008), cáncer de cuello de útero (van der Watt et al. 2009), cáncer de páncreas (Huang et al. 2009), carcinoma hepatocelular (Pascale et al. 2005) y osteosarcoma (Yao et al. 2009) y se correlaciona de forma independiente con malos resultados clínicos en estos tipos de tumores.
La inhibición de Crm1 bloquea el éxodo del núcleo de proteínas supresoras de tumores y/o reguladoras del crecimiento como p53, c-Abl, p21, p27, pRB, BRCA1, IkB, ICp27, E2F4, KLF5, YAP1, ZAP, KLF5, HDAC4, HDAC5 o proteínas cabeza de horquilla (p. ej., FOXO3a) que están asociadas con la expresión génica, la proliferación celular, la angiogénesis y la epigenética. Se ha demostrado que los inhibidores de la Crm1 inducen la apoptosis de las células cancerosas incluso en presencia de señales oncogénicas activadoras o estimuladoras del crecimiento, al tiempo que preservan las células normales (no transformadas). La mayoría de los estudios sobre la inhibición de Crm1 han utilizado el producto natural inhibidor de Crm1 Leptomicina B (LMB). El propio LMB es muy tóxico para las células neoplásicas, pero se tolera mal con una marcada toxicidad gastrointestinal en animales (Roberts et al. 1986) y humanos (Newlands et al. 1996). La derivatización del LMB para mejorar sus propiedades farmacológicas da lugar a compuestos que conservan la actividad antitumoral y son mejor tolerados en modelos tumorales animales (Yang et al.
2007, Yang et al. 2008, Mutka et al. 2009). Por lo tanto, los inhibidores de la exportación nuclear podrían tener efectos beneficiosos en los trastornos neoplásicos y otros trastornos proliferativos.
Además de las proteínas supresoras de tumores, Crm1 también exporta varias proteínas clave que están implicadas en muchos procesos inflamatorios. Entre ellos se incluyen IkB, NF-kB, Cox-2, RXRa, Commd1, HlF 1, HMGB 1, FOXO, FOXP y otros. La familia de activadores transcripcionales del factor nuclear kappa B (NF-kB/rel), denominada así por el descubrimiento de que impulsa la expresión del gen de la inmunoglobulina kappa, regula la expresión del ARNm de diversos genes implicados en la inflamación, la proliferación, la inmunidad y la supervivencia celular. En condiciones basales, una proteína inhibidora de NF-kB, denominada IkB, se une a NF-kB en el núcleo y el complejo IkB-NF-kB inactiva la función transcripcional de NF-kB. En respuesta a estímulos inflamatorios, IkB se disocia del complejo IkB-NF-kB, lo que libera NF-kB y desenmascara su potente actividad transcripcional. Muchas señales que activan el NF-kB lo hacen dirigiéndose al IkB para su proteólisis (la fosforilación del IkB lo "marca" para su ubiquitinación y posterior proteólisis). El complejo nuclear IkBa-NF-kB puede ser exportado al citoplasma por Crm1, donde se disocia y NF-kB puede reactivarse. El IkB biquitinizado también puede disociarse del complejo NF-kB, restaurando la actividad transcripcional NF-kB. La inhibición de la exportación inducida por Crm1 en neutrófilos humanos y células similares a macrófagos (U937) mediante LMB no sólo da lugar a la acumulación del complejo nuclear IkBa-NF-kB transcripcionalmente inactivo, sino que también impide la activación inicial de NF-kB incluso tras la estimulación celular (Ghosh 2008, Huang 2000). En otro estudio, el tratamiento con LMB inhibió la unión al ADN de NF-kB inducida por IL-1p (la primera etapa en la activación transcripcional de NF-kB), la expresión de IL-8 y la expresión de moléculas de adhesión intercelular en células endoteliales de la microvasculatura pulmonar (Walsh 2008). COMMD1 es otro inhibidor nuclear de la actividad transcripcional tanto de NF-kB como del factor 1 inducible por hipoxia (HIF1). El bloqueo de la exportación nuclear de C0MMD1 mediante la inhibición de Crm1 produce una mayor inhibición de la actividad transcripcional de NF-kB y HIF1 (Muller 2009).
Crm1 también media el transporte del receptor X retinoide a (RXRa). El RXRa está altamente expresado en el hígado y desempeña un papel central en la regulación del metabolismo y la homeostasis de los ácidos biliares, el colesterol, los ácidos grasos, los esteroides y los xenobióticos. Durante la inflamación hepática, los niveles nucleares de RXRa se reducen significativamente, principalmente debido a la exportación nuclear de RXRa mediada por la inflamación por Crm1. El LMB es capaz de prevenir el aumento citoplasmático de los niveles de RXRa inducido por la IL-1p en células derivadas del hígado humano (Zimmerman 2006).
El papel de la exportación nuclear mediada por Crm1 en la señalización de NF-kB, HIF-1 y RXRa sugiere que el bloqueo de la exportación nuclear puede ser potencialmente beneficioso en muchos procesos inflamatorios en múltiples tejidos y órganos, incluida la vasculatura (vasculitis, arteritis, polimialgia reumática, aterosclerosis), dermatológicos (véase más adelante), reumatológicos (artritis reumatoide y afines, artritis psoriásica, espondiloartropatías, artropatías cristalinas, lupus eritematoso sistémico, enfermedad mixta del tejido conectivo, síndromes de miositis, dermatomiositis, miositis por cuerpos de inclusión, enfermedad indiferenciada del tejido conectivo, síndrome de Sjogren, esclerodermia y síndromes de superposición, etc.).
La inhibición de CRM1 afecta a la expresión génica inhibiendo/activando una serie de factores de transcripción como ICp27, E2F4, KLF5, YAP1 y ZAP
La inhibición de Crm1 tiene efectos terapéuticos potenciales en muchos síndromes dermatológicos, incluyendo dermatosis inflamatorias (atopia, dermatitis alérgica, dermatitis química, psoriasis), daño solar (daño ultravioleta (UV)) e infecciones. La inhibición de CRM1, mejor estudiada con LMB, mostró efectos mínimos en queratinocitos normales, y ejerció actividad antiinflamatoria en queratinocitos sometidos a UV, TNFα u otros estímulos inflamatorios (Kobayashi & Shinkai 2005, Kannan & Jaiswal 2006). La inhibición de Crm1 también aumenta la actividad de NRF2 (factor nuclear eritroide 2), que protege a los queratinocitos (Schafer et al. 2010, Kannan & Jaiswal 2006) y otros tipos celulares (Wang et al. 2009) del daño oxidativo. El LMB induce la apoptosis en queratinocitos infectados con cepas oncogénicas del virus del papiloma humano (VPH), como el VPH16, pero no en queratinocitos no infectados (Jolly et al. 2009).
Crm1 también media el transporte de proteínas neuroprotectoras clave que pueden ser útiles en enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de Parkinson (EP), la enfermedad deAlzheimery la esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Por ejemplo, (1) forzando la retención nuclear de reguladores neuroprotectores clave como NRF2 (Wang 2009), FOXA2 (Kittappa et al. 2007), aparcando en las células neuronales, y/o (2) inhibiendo la actividad transcripcional de NFkB mediante el secuestro de IkB al núcleo en las células gliales, la inhibición de Crm1 podría ralentizar o prevenir la muerte de células neuronales encontrada en estos trastornos. También hay pruebas que relacionan la proliferación anormal de células gliales con anomalías en los niveles de CRM1 o función de CRM1 (Shen 2008).
La exportación nuclear intacta, mediada principalmente a través de CRM1, también es necesaria para la maduración intacta de muchos virus. Entre los virus en cuyo ciclo vital se ha implicado la exportación nuclear y/o el propio CRM1 se encuentran el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el adenovirus, el retrovirus simiesco de tipo 1, el virus de la enfermedad de Borna, la gripe (cepas habituales, así como las cepas H1N1 y H5N1 aviar), virus de la hepatitis B (VHB) y C (VHC), virus del papiloma humano (VPH), virus respiratorio sincitial (VRS), Dungee, coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo, virus de la fiebre amarilla, virus del Nilo Occidental, virus del herpes simple (VHS), citomegalovirus (CMV) y poliomavirus de células de Merkel (MCV). (Bhuvanakantham 2010, Cohen 2010, Whittaker 1998). Se prevé que en el futuro se descubran otras infecciones víricas que dependan de la exportación nuclear intacta.
La proteína Rev del VIH-1, que circula por el nucléolo y se desplaza entre el núcleo y el citoplasma, facilita la exportación de transcritos del VIH empalmados y no empalmados individualmente que contienen ARN de elementos de respuesta Rev (RRE) por la vía de exportación CRM1. La inhibición del transporte de ARN mediado por Rev mediante inhibidores de CRM1 como LMB o PKF050-638 puede detener el proceso transcripcional del VIH-1, inhibir la producción de nuevos viriones de VIH-1 y, por tanto, reducir los niveles de VIH-1 (Pollard 1998, Daelemans 2002).
El virus del dengue (DENV) es el agente causante de la enfermedad vírica común transmitida por artrópodos, la fiebre del dengue (FD), y de su más grave y potencialmente mortal fiebre hemorrágica del dengue (FHD). La FHD parece ser el resultado de una respuesta inflamatoria exuberante al DENV. La NS5 es la proteína más grande y conservada del DENV. CRM1 regula el transporte de NS5 del núcleo al citoplasma, donde se desarrollan la mayoría de las funciones de NS5. La inhibición de la exportación de NS5 mediada por CRM1 altera la cinética de producción del virus y reduce la inducción de la quimiocina inflamatoria interleucina-8 (IL-8), lo que abre una nueva vía para el tratamiento de las enfermedades causadas por el DENV y otros flavivirus de importancia médica, como el virus de la hepatitis C (Rawlinson 2009).
Otras proteínas de unión a ARN codificadas por virus que utilizan CRM1 para salir del núcleo incluyen la proteína del tegumento del VHS tipo 1 (VP13/14, o hUL47), la proteína pp65 del CMV humano, la proteína ORF 3b del coronavirus del SARS y la proteína de la matriz (M) del VRS (Williams 2008, Sanchez 2007, Freundt 2009, Ghildyal 2009).
Curiosamente, muchos de estos virus están asociados con tipos específicos de cáncer humano, incluyendo el carcinoma hepatocelular (CHC) debido a la infección crónica por VHB o VHC, el cáncer cervical debido al VPH y el carcinoma de células de Merkel asociado al VCM. Por lo tanto, los inhibidores de CRM1 podrían tener efectos beneficiosos tanto en el proceso infeccioso viral como en el proceso de transformación neoplásica debido a estos virus.
CRM1 controla la localización nuclear y, por tanto, la actividad de múltiples enzimas metabolizadoras del ADN, incluidas las histonas desacetilasas (HDAC), las histonas acetiltransferasas (HAT) y las histonas metiltransferasas (HMT). Se ha demostrado la supresión de la hipertrofia de cardiomiocitos con inhibidores irreversibles de CRM1 y se cree que está relacionada con la retención nuclear (y activación) de HDAC 5, una enzima conocida por suprimir un programa genético hipertrófico (Monovich et al. 2009). Así pues, la inhibición de CRM1 puede tener efectos beneficiosos en los síndromes hipertróficos, incluidas ciertas formas de insuficiencia cardíaca congestiva y miocardiopatías hipertróficas.
CRM1 también se ha relacionado con otros trastornos. El trastorno de Leber, un trastorno hereditario caracterizado por la degeneración de las células ganglionares de la retina y la pérdida visual, está asociado a la inacción del interruptor CRM1 (Gupta N 2008). También hay pruebas que relacionan los trastornos neurodegenerativos con anomalías en el transporte nuclear.
Sin embargo, hasta la fecha, los inhibidores de Crm1 similares a fármacos de molécula pequeña para uso in vitro e in vivo son poco comunes.
Van Neck et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry, Volumen 16, Número 21, 1 de noviembre de 2008, páginas 9487-9497divulga análogos estructurales de PKF50-638 y su evaluación como inhibidores del VIH.
Kau et al., Cancer Cell, vol. 4, n° 6, páginas 463-476 divulga nuevos inhibidores generales de exportación que reaccionan con CRM1, así como una serie de compuestos que inhiben la señalización PI3K/Akt.
Mutka et al., Cancer Research, vol. 69, n° 2, páginas 510-517 mutka et al., divulga derivados semisintéticos de Leptomicina B que son inhibidores de CRM1 y exhiben actividad anticancerígena in vivo.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere al compuesto definido en las reivindicaciones, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto veterinario que lo necesite. En el presente documento también se divulgan composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden compuestos divulgados en el presente documento, así como procedimientos de uso de dichos compuestos y composiciones en el tratamiento de diversos trastornos, como los asociados con respuestas celulares anormales desencadenadas por un transporte nuclear inadecuado.
Se divulgan en el presente documento compuestos representados por la fórmula I:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que los valores y valores alternativos para cada variable son los definidos y descritos en el presente documento.
Se divulga aquí una composición que comprende dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y un portador farmacéuticamente aceptable.
Se divulga aquí un procedimiento para tratar un trastorno asociado con la actividad de CRM1, el procedimiento comprende administrara un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición que comprende dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Se divulga aquí el uso de dichos compuestos para tratar un trastorno asociado con la actividad de CRM1 en un sujeto.
Se divulga aquí el uso de dichos compuestos para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno asociado con la actividad de CRM1 en un sujeto.
El modulador del transporte nuclear de la presente invención, y las sales y/o composiciones farmacéuticamente aceptables del mismo, proporcionan una excelente exposición in vivo medida por AUC en ratón, rata, perro y mono, a la vez que presentan bajos niveles de penetración cerebral. Por lo tanto, el compuesto definido en las reivindicaciones y otros compuestos divulgados aquí, y sales farmacéuticamente aceptables y/o composiciones de los mismos, son útiles para tratar el cáncer en un sujeto veterinario. Los compuestos aquí divulgados también son útiles para el estudio de la modulación del transporte nuclear en fenómenos biológicos y patológicos; el estudio de vías de transducción de señales intracelulares mediadas por quinasas; y la evaluación comparativa de moduladores del transporte nuclear.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
FIG. 1 es un gráfico del volumen tumoral en función del tiempo y muestra el efecto del compuesto de referencia 1-3 sobre el volumen tumoral en un modelo de xenoinjerto de ratón de cáncer de mama triple negativo (CMTN).
FIG. 2A es una imagen de transferencia Western que muestra el efecto de concentraciones crecientes del Compuesto de Referencia 1-3 sobre CRM1 y proteínas marcadoras de apoptosis en células TNBC MDA-MB-468.
FIG. 2B es una imagen de transferencia Western que muestra el efecto de concentraciones crecientes del Compuesto de Referencia I-3 sobre las proteínas CRM1 y marcadores de apoptosis en células DU4475 luminal BC.
FIG. 2C es una imagen de transferencia Western que muestra el efecto de concentraciones crecientes del Compuesto de Referencia I-3 sobre CRM1 y proteínas marcadoras de apoptosis en células TNBC HS578T. FIG. 3 son imágenes de transferencia Western que muestran el efecto de concentraciones crecientes del Compuesto de Referencia I-3 sobre la anti-apoptosis y las proteínas del ciclo celular en las líneas celulares MDA-MB-468 y HS578T TNBC.
FIG. 4 es un gráfico del peso corporal medio frente al tiempo durante los días 0 a 12 en ratones BALB/c macho artríticos inducidos por anticuerpos sometidos al tratamiento indicado.
FIG. 5 es un gráfico de las puntuaciones artríticas clínicas totales medias de las patas frente al tiempo durante los días 0 a 12 en ratones BALB/c macho con artritis inducida por anticuerpos sometidos al tratamiento indicado.
FIG. 6 es un gráfico de barras de la puntuación del grosor medio de la oreja, la descamación y el plegamiento determinados del día 0 al 7 en ratones BALB/c macho psoriásicos inducidos por PMA sometidos al tratamiento indicado.
FIG. 7 es un conjunto de gráficos que muestran la preferencia por los objetos de las ratas tratadas como se indica en el Modelo de Reconocimiento de Objetos Novedosos.
FIG. 8Aes un conjunto de gráficos que muestran la ingesta acumulativa y media de alimentos frente al tiempo en ratas Zucker obesas y delgadas tratadas como se indica.
FIG. 8B es un conjunto de gráficos que muestran el peso corporal medio y porcentual frente al tiempo en ratas Zucker obesas y delgadas tratadas como se indica.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Compuestos
Se divulgan en el presente documento compuestos representados por la fórmula I:
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:
R1 se selecciona entre hidrógeno y metilo;
R2 se selecciona entre piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirazin-2-ilo, quinoxalin-2-ilo, pirimidin-4-ilo, 1,1-dioxotetrahidrotiofen-3-ilo y ciclopropilo, donde R2 está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente entre metilo y halógeno; o
R1 y R2 se toman junto con sus átomos intermedios para formar 4-hidroxipiperidin-1ilo, pirrolidin-1ilo, azepan-1ilo, 4-bencilpiperazin-1ilo, 4-etilpiperazin-1ilo, 3-hidroxiazetidin-1ilo, o morfolin-4-il;
R3 se selecciona entre hidrógeno y halo; y '■A A representa un enlace sencillo en el que un doble enlace carbono-carbono unido al mismo se encuentra en una configuración (E)- o (Z)-.
Como se ha descrito anteriormente, R1 se selecciona entre hidrógeno y metilo. En algunos ejemplos, R1 es hidrógeno. En algunos ejemplos, R1 es metilo.
Como se ha descrito anteriormente, R2 se selecciona de piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirazin-2-ilo, quinoxalin-2-ilo, pirimidin-4-ilo, 1,1-dioxotetrahidrotiofeno-3-ilo y ciclopropilo, donde R2 está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de metilo y halógeno. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es piridin-2-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es piridin-3-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es piridin-4-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es pirazin-2-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es pirimidin-4-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 es quinoxalin-2-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 se selecciona entre piridin-2-ilo, piridin-3-ilo y piridin-4-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 se selecciona entre piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, piridin-4-ilo, pirazin-2-iloy pirimidin-4-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 se selecciona entre piridin-2-ilo, piridin-4-ilo, pirazin-2-ilo y pirimidin-4-ilo.
En algunos ejemplos, R2 se selecciona entre:
Figure imgf000006_0001
En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 está opcionalmente sustituido con un único sustituyente seleccionado entre metilo y cloro. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 está opcionalmente sustituido con un grupo metilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R2 está opcionalmente sustituido con un grupo cloro. En algunos ejemplos, R2 se selecciona entre:
Figure imgf000006_0002
En algunos ejemplos, R2 se selecciona entre:
Figure imgf000006_0003
En algunos ejemplos, R2 se selecciona entre:
Figure imgf000007_0001
En algunos ejemplos de la fórmula I, R1 y R2 se toman junto con sus átomos intermedios para formar 4-hidroxipiperidin-1ilo, pirrolidin-1ilo, azepan-1ilo, 4-bencilpiperazin-1ilo, 4-etilpiperazin-1ilo, 3-hidroxiazetidin-1ilo, o morfolin-4-ilo. En algunos ejemplos de la fórmula I, R1 y R2 se toman junto con sus átomos intermedios para formar 4-hidroxipiperidin-1 -ilo.
Como se ha descrito anteriormente, R3 se selecciona entre hidrógeno y halógeno. En algunos ejemplos, R3 es hidrógeno. En algunos ejemplos, R3 es halógeno (por ejemplo, cloro, bromo, yodo o fluoro). En algunos ejemplos, R3 es cloro.
Como se ha descrito anteriormente, el doble enlace carbono-carbono entre la molécula de triazol y la molécula de carbonilo está en una configuración (E) o en una configuración (Z). En algunos ejemplos, ese doble enlace está en una configuración (E). En algunos ejemplos, ese doble enlace está en una configuración (Z) y el compuesto está representado por la fórmula II:
Figure imgf000007_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1, R2 y R3 son como se definen anteriormente y se describen en el presente documento.
Se divulga en el presente documento un compuesto representado por la fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que los valores y valores alternativos para las variables son los definidos anteriormente para un compuesto de fórmula I.
En un primer ejemplo, R1 es como se ha definido anteriormente; y R2 se selecciona entre piridin-2ilo, piridin-4ilo, pirazin-2-il y pirimidin-4ilo, donde R2 está opcionalmente sustituido con un único sustituyente seleccionado entre metilo y cloro; o R1 y R2 se toman junto con sus átomos intermedios para formar 4-hidroxipiperidin-1-ilo.
En un aspecto específico del primer aspecto R3 es hidrógeno. Los valores y valores alternativos para las variables restantes son los descritos anteriormente para un compuesto de fórmula I, o en los ejemplos adicionales del mismo.
Los compuestos ejemplares de fórmula I se exponen en la Tabla 1.
Tabla 1. Compuesto ejemplar de fórmula I.
Figure imgf000007_0003
(continuación)
Figure imgf000008_0001
continuación
Figure imgf000009_0001
El compuesto de la invención es I-4.
La farmacocinética (PK) desempeña un papel cada vez más importante en el descubrimiento y desarrollo de fármacos. La farmacocinética es el estudio cuantitativo del curso temporal de la absorción, distribución, metabolismo y/o excreción de los fármacos. Cuando se administra un fármaco, se distribuye rápidamente desde el lugar de administración a la circulación sanguínea sistémica. Una medida del grado de distribución de un agente terapéutico es el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo (AUC), calculada hasta la última concentración medida (AUCt) y extrapolada hasta el infinito (AUCinf). El AUC es, por tanto, una métrica útil para cuantificar la exposición al fármaco.
Generalmente, cuanto mayor es la exposición de un agente terapéutico, mayores son los efectos del agente. Sin embargo, una exposición elevada a un agente terapéutico puede tener efectos nocivos en determinados tejidos, como el cerebro. Si bien la barrera hematoencefálica (BHE), una red protectora formada por uniones estrechas entre células endoteliales, restringe la difusión de moléculas hidrófilas y/o de gran tamaño, los fármacos con una AUC elevada siguen siendo capaces de penetrar la BHE y/o el líquido cefalorraquídeo. Esta penetración suele ser indeseable y puede provocar efectos secundarios no deseados. Los esfuerzos actuales de descubrimiento de fármacos se dirigen, en parte, a lograr un equilibrio entre la maximización de la exposición al fármaco (por ejemplo, AUC) y la minimización de la penetración cerebral.
La relación cerebro/plasma (B:P) es un procedimiento para cuantificar la distribución relativa de un agente terapéutico en el tejido cerebral con respecto al circulante y, como tal, proporciona una indicación de la penetración cerebral de un agente terapéutico determinado. Se prefiere una elevada proporción cerebro/plasma cuando se atacan enfermedades localizadas en el sistema nervioso central (SNC), incluidos el cerebro y el líquido cefalorraquídeo. Sin embargo, en el caso de los agentes terapéuticos no relacionados con el SNC, suele ser preferible una relación cerebro/plasma más baja para minimizar la penetración cerebral y evitar los posibles efectos secundarios causados por la acumulación no deseada de los agentes terapéuticos en el cerebro y el tejido del SNC.
Como se expone con más detalle en la Ejemplificación, el compuesto de la presente invención muestra un AUC más alto y/o un B:P más bajo en comparación con otros inhibidores del transporte nuclear, tales como los divulgados en la cotitularidad de la Solicitud de patente de EE.UU. n° 13/041,377, presentada el 5 de marzo de 2011 y publicada como US 2009/0275607 el 10 de noviembre de 2011. El compuesto de la presente invención tiene una actividad de exportación nuclear de menos de aproximadamente 1 ^M, unAUCinf de más de aproximadamente 3300 (por ejemplo, más de aproximadamente 3500), y una relación B:P de menos de aproximadamente 2,5 cuando se dosifica en un ratón a 10 mg/kg po.
Procedimientos sintéticos
Se proporciona un procedimiento de preparación de derivados (Z)-olefina de un compuesto de fórmula Z útil para preparar precursores del compuesto de la invención:
Figure imgf000010_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:
El anillo A es un anillo opcionalmente sustituido seleccionado entre fenilo, un anillo arilo bicíclico de 8-10 miembros, un anillo heteroarilo monocíclico de 5-6 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, y un anillo heteroarilo bicíclico de 8-10 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre;
Y es un enlace covalente o -L-;
L es un radical hidrocarbonado bivalente C1-8 saturado o insaturado, recto o ramificado, en el que una o dos unidades de metileno de L se sustituyen opcionalmente por -NR-, -N(R)C(O)-, -C(O)N(R)-, -O-, -C(O)-, -OC(O)-, -C(O)O-, -S-, -SO-, -SO2-, -C(S)-, -C(NOR)- o -C(NR)-;
cada R es independientemente hidrógeno o un grupo opcionalmente sustituido seleccionado entre C1-6 alifático, fenilo, un anillo carbocíclico saturado o parcialmente insaturado de 4-7 miembros, un anillo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado de 4-7 miembros con 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno oxígeno y azufre, un anillo heteroarílico monocíclico de 5-6 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, un anillo arílico bicíclico de 8-10 miembros y un anillo heteroarílico bicíclico de 8-10 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre; o
dos grupos R en el mismo nitrógeno se unen al átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado de 4-7 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, o un anillo heteroarilo de 5-6 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre;
cada uno de V1, V2 y V3 es independientemente C(Ry) o N;
cada Rx y Ry se selecciona independientemente entre -R, halógeno, -OR, -SR, -N(R)2, -CN, -NO2, -N3, -SOR, -SO2R, -SO2NR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)OR, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, - OC(O)R, -OC(O)N(R)2, -NRC(O)OR, -NRC(O)NR2 y -NRSO2 R;
cada R1 y R2 es independientemente hidrógeno, deuterio, tritio o halógeno;
W es -CN, haloalquilo, -NO2 o -C(=Z)R3;
Z es O, S o NR;
R3 se selecciona entre hidrógeno, -R, OR, -SR y -N(R4)2;
cada R4 es independientemente -R; o
dos R4 en el mismo nitrógeno se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado de 4-7 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, o un anillo heteroarílico de 5-6 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n;
cada R5 se selecciona independientemente entre -R, halógeno, -OR, -SR, -N(R)2, -CN, -NO2, -N3, -SOR, -SO2R, -SO2 NR, -C(O)R, -CO2 R, -C(O)OR, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, -OC(O)R, -OC(O)N(R)2, -NRC(O)OR, -NRC(O)NR2 y -NRSO2 R; y
cada m y n es independientemente un número entero seleccionado entre 0, 1,2, 3 y 4.
Los compuestos de fórmula Z se han descrito, por ejemplo, en el documento Documento US 13/041,377, presentado el 5 de marzo de 2011 y en la Solicitud provisional de EE.UU. n° 61/513.428, presentada el 29 de julio de 2011 y 61/653.588, presentada el 1 de junio de 2012. Los compuestos de fórmula Z se sintetizan generalmente como una mezcla de isómeros de (E)- y (Z)-olefina, que deben separarse. La separación de los isómeros (E)- y (Z)-olefina requiere una cromatografía exhaustiva y da lugar a una pérdida del 50% del intermediario avanzado A, ya que el isómero no deseado no puede convertirse normalmente en el isómero deseado. Un rendimiento del 50% es ineficaz y costoso en cualquier etapa de una síntesis, pero estos rendimientos inaceptables son aún más problemáticos al final de una síntesis de varias etapas. Ahora se ha descubierto sorprendentemente que el uso de bases con impedimentos estéricos en una adición 1,4-nucleofílica puede efectuar la selectividad (Z) de la reacción, proporcionando así el isómero cis-olefina como producto principal o exclusivo. En consecuencia, la presente divulgación proporciona una síntesis (Z)-selectiva de compuestos de fórmula Z, y procedimientos de preparación de intermedios sintéticos útiles para preparar compuestos de fórmula Z. Una etapa clave en la síntesis de compuestos de fórmula Z se representa en el Esquema I.
En ciertos ejemplos, los compuestos de fórmula Z se preparan según el Esquema I, expuesto a continuación:
Figure imgf000011_0001
en el que LG es un grupo saliente y cada uno de los anillos A, Y, V1, V2, V3, Rx, R1, R2, W y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z y descrito en los ejemplos del presente documento.
En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, el intermedio A se acopla con el intermedio B mediante una reacción de adición/eliminación 1,4-nucleofílica. En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, LG es un grupo saliente adecuado. En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, LG es un halógeno. En algunos ejemplos, LG es yodo. En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, LG es bromo. En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, LG es un sulfonato. En algunos de estos ejemplos, LG es metanosulfonato (mesilato).
En algunos ejemplos de la etapa S-1.1, el intermedio A se acopla con el intermedio B en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida. Una persona con conocimientos ordinarios podrá seleccionar una base con impedimento estérico adecuada. Entre las bases nucleófilas con impedimento estérico adecuadas se incluyen el 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), el 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), el 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO), N,N-dicciclohexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina (PMP), 7-metil-1,5,7-triazabiciclo(4.4.0)dec-5-eno (MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina y triciclohexilfosfina.
En ciertos ejemplos, los compuestos de fórmula Y se preparan según el Esquema II, expuesto a continuación:
Figure imgf000011_0002
en el que LG es un grupo saliente y cada uno de Rx, Ry, R1, R2, W y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z y descrito en los ejemplos del presente documento.
En algunos ejemplos de la etapa S-2.1, el intermediario C se hace reaccionar con una sal de tiolato para proporcionar el intermediario D. En algunos ejemplos de la etapa S-2.1, la sal de tiolato es tiolato de sodio. En algunos ejemplos de la etapa S-2.1, la sal de tiolato es tiolato potásico.
En la etapa S-2.2, el intermedio D se hace reaccionar con un equivalente de hidracina para proporcionar el intermedio E.
En la etapa S-2.3, el intermedio E se acopla con el intermedio B para proporcionar un compuesto de fórmula Y. En algunos ejemplos de la etapa S-2.3, LG es un grupo saliente adecuado. En algunos ejemplos de la etapa S-2.3, LG es un halógeno. En algunos ejemplos, LG es yodo. En algunos ejemplos de la etapa S-2.3, LG es bromo. En algunos ejemplos de la etapa S-2.3, lG es un sulfonato. En algunos de estos ejemplos, LG es metanosulfonato (mesilato).
En algunos ejemplos de la etapa S-2.3, el intermedio E se acopla con el intermedio B en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida. Una persona con conocimientos ordinarios podrá seleccionar una base con impedimento estérico adecuada. Entre las bases nucleófilas con impedimento estérico adecuadas se incluyen el 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), el 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), el 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO), N,N-dicciclohexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina (PMP), 7-metil-1,5,7-triazabiciclo(4.4.0)dec-5-eno (MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina y triciclohexilfosfina.
Se divulga en el presente documento un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula Z:
Figure imgf000012_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de los anillos A, Y, V1, V2, V3, Rx, R, R1, R2, W y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula A:
Figure imgf000012_0002
donde cada uno de los anillos A, Rx, Y, V1, V2, V3 y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula Z; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula A con una olefina de fórmula B:
Figure imgf000012_0003
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CF3; y
cada uno de R, W, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula Z; en presencia de una base nucleófila estéricamente impedida para formar un compuesto de fórmula Z.
Como se ha descrito anteriormente, un compuesto de fórmula A se acopla con el intermedio B mediante una reacción de adición/eliminación 1,4-nucleofílica. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula Ase acopla con el intermedio B en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida. Entre las bases con impedimentos estéricos adecuadas se incluyen las bases de amina terciaria. En algunos ejemplos, las bases con impedimentos estéricos adecuadas incluyen bases de amina secundaria con impedimentos estéricos. En algunos ejemplos, la base nucleófila con impedimento estérico se selecciona entre 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO), N,N-dicciclohexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina (PMP), 7-metil-1,5,7-triazabiciclo(4.4.0)dec-5-eno (MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina y triciclohexilfosfina. En algunos ejemplos, la base nucleofílica estéricamente impedida es 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO). En algunos ejemplos, la base nucleofílica con impedimento estérico es 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU).
En algunos ejemplos, la base nucleofílica estéricamente impedida es una fosfina. En algunos ejemplos, la base nucleofílica con impedimento estérico es la trifenilfosfina.
En algunos ejemplos, la etapa (b) anterior se realiza a una temperatura comprendida entre 0 °C y 100 °C aproximadamente. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 0 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 25 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 50 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 100 °C.
Un experto reconocerá que la reacción de adición/eliminación 1,4-nucleofílica de un compuesto de fórmula A y el intermedio B requiere el uso de un disolvente orgánico aprótico polar. Los disolventes orgánicos apróticos polares adecuados incluyen éteres como el dioxano, el tetrahidrofurano y el metil tert-butil éter (MTBE), y amidas como la dimetilformamida (DMF) y la dimetilacetamida (DMA). Un experto puede seleccionar el disolvente adecuado para la temperatura de reacción deseada.
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula Y:
Figure imgf000013_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2, W y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000013_0002
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula Y; y (b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula E con una olefina de fórmula B:
Figure imgf000013_0003
donde:
LG es halógeno, -OSO2 Ro.OSO2CFs; y
cada uno de R, W, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula Y, en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida para formar un compuesto de fórmula Y
Como se ha descrito anteriormente, un compuesto de fórmula E se acopla con el intermedio B mediante una reacción de adición/eliminación 1,4-nucleofílica. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula E se acopla con el intermedio B en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida. Entre las bases con impedimentos estéricos adecuadas se incluyen las bases de amina terciaria. En algunos ejemplos, las bases con impedimentos estéricos adecuadas incluyen bases de amina secundaria con impedimentos estéricos. En algunos ejemplos, la base nucleófila con impedimento estérico se selecciona entre 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO), N,N-dicciclohexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina (PMP), 7-metil-1,5,7-triazabiciclo(4.4.0)dec-5-eno (MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina y triciclohexilfosfina. En algunos ejemplos, la base nucleofílica estéricamente impedida es 1,4-diazabiciclo(2.2.2)octano (DABCO). En algunos ejemplos, la base nucleofílica con impedimento estérico es 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU).
En algunos ejemplos, la base nucleofílica estéricamente impedida es una fosfina. En algunos ejemplos, la base nucleofílica con impedimento estérico es la trifenilfosfina.
En algunos ejemplos, la etapa (b) anterior se realiza a una temperatura comprendida entre 0 °C y 100 °C aproximadamente. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 0 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 25 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 50 °C. En algunos ejemplos, la etapa (b) se realiza a una temperatura de aproximadamente 100 °C.
Un experto reconocerá que la reacción de adición/eliminación 1,4-nucleofílica de un compuesto de fórmula E y el intermedio B requiere el uso de un disolvente orgánico aprótico polar. Los disolventes orgánicos apróticos polares adecuados incluyen éteres como el dioxano, el tetrahidrofurano y el metil tert-butil éter (MTBE), y amidas como la dimetilformamida (DMF) y la dimetilacetamida (DMA). Un experto puede seleccionar el disolvente adecuado para la temperatura de reacción deseada.
En algunos ejemplos de un compuesto de fórmula Y, W es -CN. En algunos ejemplos, W es haloalquilo. En algunos ejemplos, W es -CF3. En algunos ejemplos, W es -NO2.
En algunos ejemplos, W es -C(=Z)R3. En algunos ejemplos, Z es O. En algunos ejemplos, W es -C(O)R3, en el que R3 se selecciona de entre -OR, -SR o -N(R4)2. En algunos ejemplos, W es -C(O)OR. En algunos ejemplos, W es -C(O)OR, donde R se selecciona entre metilo, etilo, isopropilo, butilo, terc-butilo y sec-butilo. En algunos ejemplos, W es -C(O)OCH3. En algunos ejemplos, W es -C(O)OCH2CH3. En algunos ejemplos, W es -C(O)OCH(CH3)2.
En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2. En algunos ejemplos, W es -(O)NH(R4). En algunos ejemplos, W es -C(O)NH2. En algunos ejemplos, W es -C(=O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros con 1-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros con 1 -3 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n. En algunos ejemplos, W es - C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros con 1 - 2 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno o azufre, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-7 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n.
En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-6 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con -(R5)n. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4-5 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con - (R5)n. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está opcionalmente sustituido con - (R5)n. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está sustituido con al menos un flúor. En algunos ejemplos, W es -C(O)N(R4)2, en el que ambos grupos R4 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un anillo heterocíclico saturado de 4 miembros que tiene 1 átomo de nitrógeno, en el que el anillo así formado está sustituido con al menos dos fluorinas. En algunos ejemplos, W es
Figure imgf000014_0001
En algunos ejemplos, R1 es hidrógeno. En algunos ejemplos, R1 es deuterio. En algunos ejemplos, R2 es hidrógeno. En algunos ejemplos, R2 es deuterio. En algunos ejemplos, R1 y R2 son cada uno hidrógeno.
En algunos ejemplos, m es 1. En algunos ejemplos, m es 2. En algunos ejemplos, Rx es haloalquilo. En algunos ejemplos, Rx es -CF3.
En algunos ejemplos, Ry es hidrógeno.
En el presente documento se divulga un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000014_0002
donde Rx, Ry y m son los descritos para un compuesto de fórmula Z,
que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula D:
Figure imgf000015_0001
donde cada uno de Rx y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula E; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula D para formar un compuesto de fórmula E.
En algunos ejemplos, las condiciones eficaces para formar un compuesto de fórmula D incluyen un equivalente de hidracina. Así, en algunos ejemplos, la etapa (b) del procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula E incluye hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula D con un equivalente de hidracina para formar el compuesto de fórmula E. En algunos ejemplos, el intermediario D se hace reaccionar con hidrato de hidracina para proporcionar un compuesto de fórmula E. En algunos ejemplos, el intermediario D se hace reaccionar con una forma protegida de hidracina tal como hidracinocarboxilato de terc-butilo y posteriormente se desprotege para proporcionar el intermediario D.
Un experto reconocerá que la adición de hidracina al intermedio D requiere un disolvente orgánico aprótico polar. Los disolventes orgánicos apróticos polares adecuados incluyen éteres como el dioxano, el tetrahidrofurano y el metil tertbutil éter (MTBE), alcoholes como el alcohol isopropílico y amidas como la dimetilformamida (DMF) y la dimetilacetamida (DMA). Un experto puede seleccionar el disolvente adecuado para la temperatura de reacción deseada.
En el presente documento se describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula D:
Figure imgf000015_0002
en el que Rx ym son como se han definido anteriormente para un compuesto de fórmula Z,
que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula C:
Figure imgf000015_0003
donde cada uno de Rx y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula D; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula C para formar un compuesto de fórmula D.
Como se ha descrito anteriormente, en algunos ejemplos, el intermedio C se trata con una sal de tiolato para proporcionar el intermedio D. En algunos ejemplos, la sal de tiolato es tiolato de sodio. Un experto reconocerá que la reacción del intermediario C con una sal de tiolato requiere el uso de un disolvente aprótico polar. Los disolventes apróticos polares adecuados incluyen éteres como el dioxano, el tetrahidrofurano y el metil tert-butil éter (MTBE). En el presente documento se describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula B:
Figure imgf000015_0004
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CFs; y
cada uno de R, R1, R2 y Wson los definidos anteriormente para un compuesto de fórmula Z,
que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula F:
Figure imgf000016_0001
donde cada uno de R2 y W es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula B; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula F para formar un compuesto de fórmula B.
Como se ha descrito anteriormente, en algunos ejemplos de intermedio B, LG es un halógeno. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula F se trata con una sal de haluro. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula F se trata con un haluro de sodio. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula F se trata con yoduro sódico. En algunos ejemplos, el intermediario F se trata con una sal de haluro en presencia de un ácido. Los ácidos adecuados incluyen tanto ácidos minerales como orgánicos. En algunos ejemplos, el intermediario F se trata con una sal de haluro y un ácido orgánico como el ácido acético. En algunos ejemplos, el intermedio F se trata con yoduro sódico en presencia de ácido acético para proporcionar un compuesto de fórmula B.
Un experto reconocerá que la adición de una sal de haluro al intermedio F requiere un disolvente orgánico aprótico polar. Los disolventes orgánicos apróticos polares adecuados incluyen éteres como el dioxano, el tetrahidrofurano y el metil tert-butil éter (MTBE).
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula X:
Figure imgf000016_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2, R4 y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000016_0003
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula X; y (b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula E con una olefina de fórmula G:
Figure imgf000016_0004
donde:
LG es halógeno, -OSO2R o _OSO2CF3; y
cada uno de R, R1, R2 y R4 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula X, en presencia de una base nucleófila estéricamente impedida para formar un compuesto de fórmula X.
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula W:
Figure imgf000017_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2, R5, m y n es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000017_0002
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula W; y (b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula E con una olefina de fórmula H:
Figure imgf000017_0003
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro-OSO2CF3 ; y
cada uno de R, R1, R2, R5 y n es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula W,
en presencia de una base nucleófila estéricamente impedida para formar un compuesto de fórmula W.
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula V:
Figure imgf000017_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2y m e s como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000017_0005
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V; y (b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula E con una olefina de fórmula J:
Figure imgf000018_0001
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CF3; y
cada uno de R, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V, en presencia de una base nucleófila estéricamente impedida para formar un compuesto de fórmula V.
En el presente documento se describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula G:
Figure imgf000018_0002
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CF3; y
cada uno de R, R1, R2 y R4 es como se describe en el presente documento con respecto a un compuesto de fórmula Z,
que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula K:
Figure imgf000018_0003
donde cada uno de R2 y R4 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula K para formar un compuesto de fórmula G.
Como se ha descrito anteriormente, en algunos ejemplos de intermedio G, LG es un halógeno. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula K se trata con una sal de haluro. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula K se trata con un haluro de sodio. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula K se trata con yoduro sódico. En algunos ejemplos, el intermediario K se trata con una sal de haluro en presencia de un ácido. Los ácidos adecuados incluyen tanto ácidos minerales como orgánicos. En algunos ejemplos, el intermediario K se trata con una sal de haluro y un ácido orgánico como el ácido acético. En algunos ejemplos, el intermedio K se trata con yoduro sódico en presencia de ácido acético para proporcionar un compuesto de fórmula G.
En el presente documento se describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula K:
Figure imgf000018_0004
donde cada uno de R2 y R4 es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula L:
Figure imgf000018_0005
donde R2 es hidrógeno, deuterio, tritio o halógeno; y
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula L con HN(R4)2, en el que cada R4 es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula K, para formar un compuesto de fórmula K.
En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula L se trata con un agente de acoplamiento amida en presencia de HN(R4)2 para formar un compuesto de fórmula K. Los agentes de acoplamiento amida adecuados incluyen HOBt, HOAt, HAMDU, HAMTU, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HATU y T3P. Un experto reconocerá que el uso de tales reactivos de acoplamiento amida requiere el uso de una base. Las bases adecuadas incluyen bases orgánicas, como trietilamina, diisopropiletil amina, piridina, 4-dimetilpiridina (DMAP) y similares.
En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula Lse hace reaccionar con un agente clorante tal como cloruro de tionilo para formar un cloruro de acilo, que se hace reaccionar a continuación con HN(R4)2 para formar un compuesto de fórmula K.
En el presente documento se describe un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula G:
Figure imgf000019_0001
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CFs; y
cada uno de R, R1, R2 y R4 es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z,
que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un ácido propargílico de fórmula L:
Figure imgf000019_0002
donde R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G;
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula L con un alcohol de fórmula HO-R para formar un éster propargílico de fórmula M:
Figure imgf000019_0003
donde cada uno de R y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G;
(c) hacer reaccionar dicho éster propargílico de fórmula M para formar un compuesto de fórmula N:
Figure imgf000019_0004
donde cada uno de R, R1, R2 y LG es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G; (d) hidrolizar dicho compuesto de fórmula N para formar un compuesto de fórmula Q:
Figure imgf000019_0005
donde cada uno de R, R1, R2 y LG es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G; y (e) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula Q con HN(R4)2, donde cada R4 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula G, para formar un compuesto de fórmula G.
En algunos ejemplos, un ácido propargílico de fórmula L se trata con un alcohol para formar un éster propargílico de fórmula M. Los alcoholes adecuados incluyen metanol, etanol e isopropanol. Una persona con conocimientos ordinarios reconocerá que la esterificación de un ácido propargílico de fórmula L puede efectuarse mediante ácido catalítico. Así, en algunos ejemplos, un ácido propargílico de fórmula L se trata con metanol o etanol en presencia de ácido sulfúrico catalítico para proporcionar un éster propargílico de fórmula M.
Un experto reconocerá que dicha esterificación puede realizarse a temperaturas de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 100 °C, o hasta el punto de ebullición del alcohol. En algunos ejemplos, la esterificación de un ácido propargílico de fórmula L se calienta a reflujo (el punto de ebullición del alcohol).
Como se ha descrito anteriormente, en algunos ejemplos de un compuesto de fórmula N, LG es un halógeno. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con una sal de haluro. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con un haluro de sodio. En algunos de estos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con yoduro sódico. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con una sal de haluro en presencia de un ácido. Los ácidos adecuados incluyen tanto ácidos minerales como orgánicos. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con una sal de haluro y un ácido orgánico como el ácido acético. En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula M se trata con yoduro sódico en presencia de ácido acético para proporcionar un compuesto de fórmula N.
En algunos ejemplos, el éster de un compuesto de fórmula N se hidroliza al ácido acrílico. Las condiciones de hidrólisis adecuadas son conocidas por los expertos en la materia e incluyen hidróxido como hidróxido de litio, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio e hidróxido de cesio en presencia de agua. Un experto reconocerá que dicha hidrólisis puede realizarse a temperaturas de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 100 °C. En algunos ejemplos, la hidrólisis de un acrilato de fórmula N se calienta a reflujo.
En algunos ejemplos, un ácido acrílico de fórmula Q se hace reaccionar con HN(R4)2 para formar un compuesto de fórmula G. En algunos ejemplos, un ácido acrílico de fórmula Q se trata con un agente de acoplamiento amida en presencia de HN(R4)2 para formar un compuesto de fórmula G. Los agentes de acoplamiento amida adecuados incluyen HOBt, HOAt, Ha MDU, HAMTU, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HATU y T3P. Un experto reconocerá que el uso de tales reactivos de acoplamiento amida requiere el uso de una base. Las bases adecuadas incluyen bases orgánicas como trietilamina, diisopropiletil amina, piridina, 4-dimetilpiridina (DMAP) y similares.
En algunos ejemplos, un compuesto de fórmula Q se hace reaccionar con un agente clorante tal como cloruro de tionilo para formar un cloruro de acilo, que se hace reaccionar a continuación con HN(R4)2 para formar un compuesto de fórmula G.
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula V:
Figure imgf000020_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2 y m es como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula L:
Figure imgf000020_0002
donde R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V;
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula L con
Figure imgf000020_0003
para formar un compuesto de fórmula R:
Figure imgf000021_0001
donde R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V;
(c) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula R para obtener un compuesto de fórmula J:
Figure imgf000021_0002
donde:
LG es halógeno, -OSO2Ro.OSO2CF3; y
cada uno de R, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V; y (d) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula J con un compuesto de fórmula E:
1.
Figure imgf000021_0003
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V,
en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida para proporcionar un compuesto de fórmula V.
En el presente documento se describe un procedimiento para proporcionar un compuesto de fórmula V:
Figure imgf000021_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada uno de R, Rx, Ry, R1, R2y m e s como se ha definido anteriormente con respecto a un compuesto de fórmula Z, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un compuesto de fórmula L:
Figure imgf000021_0005
donde R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V;
(b) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula L con un alcohol de fórmula HO-R para formar un compuesto de fórmula M:
OR
R-
2- = H
O (M),
donde cada uno de R y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V,
(c) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula M para obtener un compuesto de fórmula N:
Figure imgf000022_0001
donde:
LG es halógeno, -OSO2R o -OSO2CF3; y
cada uno de R, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V; (d) hidrolizar dicho compuesto de fórmula N para formar un compuesto de fórmula Q:
Figure imgf000022_0002
donde cada uno de R1, R2 y LG es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V;
(e) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula Q con
Figure imgf000022_0003
para formar un compuesto de fórmula J:
Figure imgf000022_0004
donde:
LG es halógeno, -OSO2R o -OSO2CF3; y
cada uno de R, R1 y R2 es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V; y (f) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula J con un compuesto de fórmula E:
Figure imgf000022_0005
donde cada uno de Rx, Ry y m es como se ha definido anteriormente para un compuesto de fórmula V,
en presencia de una base nucleofílica estéricamente impedida para proporcionar un compuesto de fórmula V.
Definiciones
El compuesto de esta invención es como se define en las reivindicaciones. A menos que se indique lo contrario, se aplicarán las siguientes definiciones. A efectos de la presente invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Manual de Química y Física, 75a Ed. Además, los principios generales de la química orgánica se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999 y "March's Advanced Organic Chemistry", 5 a Ed: Smith, M.B. y March, J., John Wiley & Sons, Nueva York: 2001.
A menos que se especifique lo contrario dentro de esta especificación, la nomenclatura utilizada en esta especificación sigue generalmente los ejemplos y reglas establecidos en Nomenclatura de Química Orgánica, Secciones A, B, C, D, E, F, y H, Pergamon Press, Oxford, 1979 a la que se hace referencia en el presente documento por sus ejemplos de nombres de estructuras químicas y reglas para nombrar estructuras químicas. Opcionalmente, el nombre de un compuesto puede generarse utilizando un programa de nomenclatura química: ACD/ChemSketch, Versión 5.09/Septiembre 2001, Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Canadá.
Los compuestos aquí divulgados pueden tener centros asimétricos, ejes quirales y planos quirales (por ejemplo, como se describe en: E. L. Eliel y S. H. Wilen, Stereo-chemistry of Carbon Compounds, John Wiley & Sons, Nueva York, 1994, páginas 1119-1190), y se presentan como racematos, mezclas racémicas y como diastereómeros o enantiómeros individuales.
El término "alifático" o "grupo alifático", tal como se utiliza aquí, denota un radical hidrocarburo monovalente que es de cadena recta (es decir, no ramificado), ramificado o cíclico (incluidos los policíclicos fusionados, puenteados y espirofusionados). Un grupo alifático puede ser saturado o contener una o más unidades de insaturación, pero no es aromático. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alifáticos contienen de 1 a 6 átomos de carbono. Sin embargo, en algunos ejemplos, un grupo alifático contiene 1-10 o 2-8 átomos de carbono. En algunos ejemplos, los grupos alifáticos contienen 1-4 átomos de carbono y, en otros ejemplos, los grupos alifáticos contienen 1-3 átomos de carbono. Los grupos alifáticos adecuados incluyen, entre otros, grupos alquilo, alquenilo y alquinilo, lineales o ramificados, e híbridos de los mismos, como (cicloalquilo)alquilo, (cicloalquenilo)alquilo o (cicloalquilo)alquenilo.
El término "alquilo", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alifático saturado, de cadena recta o ramificada. En un aspecto, un grupo alquilo contiene 1-10 o 2-8 átomos de carbono. Los alquilos incluyen, entre otros, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, t-butilo y similares.
El término "alquenilo", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alifático ramificado o de cadena recta que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono (es decir, -CH=CH-). En un aspecto, un grupo alquenilo tiene de dos a ocho átomos de carbono, e incluye, por ejemplo, y sin estar limitado a ello, etenilo, 1-propenilo, 1 -butenilo y similares. El término "alquenilo" engloba radicales que tienen dobles enlaces carbono-carbono en las configuraciones "cis" y "trans" o, alternativamente, "E" y "Z". Si un grupo alquenilo incluye más de un doble enlace carbono-carbono, cada doble enlace carbono-carbono es independientemente un doble enlace cis o trans, o una mezcla de los mismos.
El término "alquinilo", tal como se utiliza aquí, significa un radical alifático ramificado o de cadena recta que tiene uno o más enlaces triples carbono-carbono (es decir, -C=C-). En un aspecto, un grupo alquilo tiene de dos a ocho átomos de carbono, e incluye, por ejemplo, y sin estar limitado a ello, 1 -propinilo (propargilo), 1 -butinilo y similares.
Los términos "cicloalifático", "carbociclilo", "carbociclo" y "carbocíclico", utilizados solos o como parte de una fracción mayor, se refieren a un sistema de anillos monocíclicos o bicíclicos alifáticos cíclicos saturados o parcialmente insaturados, tal como se describe en el presente documento, que tiene de 3 a 10 miembros, en los que el sistema de anillos alifáticos está opcionalmente sustituido tal como se define anteriormente y se describe en el presente documento. Los grupos cicloalifáticos incluyen, sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, cicloheptenilo, ciclooctilo, ciclooctenilo y ciclooctadienilo. Los términos "cicloalifático", "carbociclilo", "carbociclo" y "carbocíclico" también incluyen anillos alifáticos fusionados a uno o más anillos aromáticos o no aromáticos, como el decahidronaftilo, el tetrahidronaftilo, la decalina o el biciclo[2.2.2]octano.
El término "cicloalquilo", tal como se utiliza aquí, significa un sistema de anillos alifáticos cíclicos saturados, monocíclicos o bicíclicos, que tiene de 3 a 10 miembros. Un cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido como se describe en el presente documento. En algunos ejemplos, un cicloalquilo tiene de 3 a 6 carbonos.
El término "heterocicloalquilo", tal como se utiliza en el presente documento, significa un sistema de anillos alifáticos saturados o insaturados en los que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo seleccionado entre N, S y O. Un heterocicloalquilo puede contener uno o más anillos, que pueden estar unidos de forma colgante o fusionados. En un aspecto, un heterocicloalquilo es un sistema de anillos de tres a siete miembros e incluye, por ejemplo, y sin estar limitado a ello, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, tetrahidrofururanilo y similares.
El término "heteroátomo" significa uno o más de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo o silicio, e incluye cualquier forma oxidada de nitrógeno, azufre, fósforo o silicio; la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico; y un nitrógeno sustituible de un anillo heterocíclico, por ejemplo N (como en 3,4-dihidro-2H-pirrolilo), NH (como en pirrolidinilo) o NR+ (como en pirrolidinilo N-sustituido).
El término "insaturado", tal como se utiliza aquí, significa que una fracción tiene una o más unidades de insaturación.
El término "halo" o "halógeno", tal como se utiliza en el presente documento, significa halógeno e incluye, por ejemplo, y sin limitarse a ello, fluoro, cloro, bromo, yodo y similares, tanto en formas radiactivas como no radiactivas.
El término "haloalquilo", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alifático que está sustituido con uno o más átomos de halógeno. En algunos ejemplos, haloalquilo se refiere a un grupo alifático perhalogenado. En algunos ejemplos, haloalquilo se refiere a un grupo alquilo que está sustituido con uno o más átomos de halógeno. Los grupos haloalquilo ejemplares incluyen -CF3, -CCl3 , -CF2CH3, -CH2CF3 , -CH2(CF3)2 , -CF2(CF3)2 , y similares.
El término "arilo", solo o en combinación, tal como se utiliza aquí, significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno o más anillos, que pueden estar unidos de forma colgante o fusionados. En ejemplos particulares, arilo es uno, dos o tres anillos. En un aspecto, el arilo tiene de cinco a doce átomos de anillo. El término "arilo" engloba radicales aromáticos como el fenilo, el naftilo, el tetrahidronaftilo, el indanilo, el bifenilo, el fenantrilo, el antrilo y el acenaftilo. Un grupo "arilo" puede tener de 1 a 4 sustituyentes, como alquilo inferior, hidroxilo, halo, haloalquilo, nitro, ciano, alcoxi, alquilamino inferior y similares.
El término "heteroarilo", solo o en combinación, tal como se utiliza en el presente documento, significa un sistema aromático en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo seleccionado entre N, S y O. Un heteroarilo puede contener uno o más anillos, que pueden estar unidos de forma colgante o pueden estar fusionados. En ejemplos particulares, los heteroarilos son uno, dos o tres anillos. En un aspecto, el heteroarilo tiene de cinco a doce átomos de anillo. El término "heteroarilo" abarca grupos heteroaromáticos como triazolilo, imidazolilo, pirrolilo, pirazolilo, tetrazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, indolilo, furilo, benzofurilo, tienilo, benzotienilo, quinolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo y similares. Un grupo "heteroarilo" puede tener de 1 a 4 sustituyentes, como alquilo inferior, hidroxilo, halo, haloalquilo, nitro, ciano, alcoxi, alquilamino inferior y similares.
Se entiende que los sustituyentes y los patrones de sustitución en los compuestos descritos en el presente documento pueden ser seleccionados por un experto en la materia para proporcionar compuestos que sean químicamente estables y que puedan sintetizarse fácilmente mediante técnicas conocidas en la materia, así como mediante los procedimientos descritos a continuación. En general, el término "sustituido", tanto si va precedido del término "opcionalmente" como si no, significa que uno o más hidrógenos de la fracción designada se sustituyen por un sustituyente adecuado. A menos que se indique lo contrario, un grupo "opcionalmente sustituido" puede tener un sustituyente adecuado en cada posición sustituible del grupo y, cuando más de una posición en cualquier estructura dada pueda sustituirse con más de un sustituyente seleccionado de un grupo especificado, el sustituyente puede ser el mismo o diferente en cada posición. Alternativamente, un grupo "opcionalmente sustituido" puede no estar sustituido.
Las combinaciones de sustituyentes previstas en la presente divulgación son preferentemente aquellas que dan lugar a la formación de compuestos estables o químicamente viables. Si un sustituyente está a su vez sustituido con más de un grupo, se entiende que estos grupos múltiples pueden estar en el mismo átomo de carbono o en átomos de carbono diferentes, siempre que resulte una estructura estable. El término "estable", tal como se utiliza aquí, se refiere a compuestos que no se alteran sustancialmente cuando se someten a condiciones que permiten su producción, detección y, en ciertos ejemplos, su recuperación, purificación y uso para uno o más de los fines aquí descritos.
Los sustituyentes monovalentes adecuados en un átomo de carbono sustituible de un grupo "opcionalmente sustituido" son independientemente halógeno; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4R°, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2 ; -(CH2)0-4SR °; -(CH2)0-4Ph, que puede estar sustituido con R°; -(CH2)0-4O(CH2)0--iPh, que puede estar sustituido con R°; -CH=CHPh, que puede estar sustituido con R°; -(CH2)0-4O(CH2)0-1-piridilo, que puede estar sustituido con R°; -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2-(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; - N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°- -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°- -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-40C(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; - C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; - N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(o R°)2 ; SiR°3; -(C1-4 alquileno recto o ramificado)O-N(R°)2 ; o -(C1-4 alquileno recto o ramificado)C(O)O-N(R°)2, donde cada R° puede estar sustituido como se define a continuación y es independientemente hidrógeno, C1-6 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(anillo heteroarilo de 5-6 miembros), o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros con 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno, o, no obstante la definición anterior, dos apariciones independientes de R°, junto con su(s) átomo(s) intermedio(s), forman un anillo monocíclico o bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arílico de 3-12 miembros con 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, que puede estar sustituido como se define a continuación.
Los sustituyentes monovalentes adecuados en R° (o el anillo formado tomando dos apariciones independientes de R° junto con sus átomos intermedios), son independientemente halógeno, -(CH2)0-2R ,^ -(haloR^), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR^, -(CH2)0-2CH(OR^)2 ; -O(haloR●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R^, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR^, -(CH2)0-2SR^, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2 , -(CH2)0-2NHR^, -(CH2)0-2NR% - NO2, -SiRv¡, -OSiRv¡, -C(O)SR^, -(C1-4 alquileno recto o ramificado)C(O)OR^, o -SSR^ en el que cada R ^ está sin sustituir o cuando está precedido por "halo" está sustituido sólo con uno o más halógenos, y se selecciona independientemente de C1-4 alifático, --CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los sustituyentes divalentes adecuados en un átomo de carbono saturado de R° incluyen =O y =S.
Los sustituyentes divalentes adecuados en un átomo de carbono saturado de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen los siguientes: =O, =S, =NNR*2 , =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R*2))2-3O. , y -S(C(R*2))2-3S-, donde cada ocurrencia independiente de R* se selecciona entre hidrógeno, C1-6 alifáticos que pueden estar sustituidos como se define a continuación, o un anillo no sustituido de 5-6 miembros saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los sustituyentes divalentes adecuados que se unen a los carbonos sustituibles vicinales de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen: -O(CR*2)2-3O., donde cada ocurrencia independiente de R* se selecciona entre hidrógeno, C1-6 alifático que puede estar sustituido como se define a continuación, o un anillo no sustituido de 5­ 6 miembros saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre.
Los sustituyentes adecuados en el grupo alifático de R* incluyen halógeno, -R^, -(haloR^), -OH, -OR^, -O(haloR^), -CN, -C(O)OH , -C(O)OR^, -NH2, -NHR^, -NR^2 , y -NO2, donde cada R êstá sin sustituir o donde precedido por "halo" está sustituido sólo con uno o más halógenos, y es independientemente C1-4 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros con 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre.
Los sustituyentes adecuados en un nitrógeno sustituible de un grupo "opcionalmente sustituido" incluyen -R1",'NRt2, -C (O R 'C(O)ORt ’ 'C(O)C(O)Rt ’ ■C(O)CH2C(O>Rt , ^ (O ^R ^ 'S(O)2NRt2, -C(S)NRt2, -C(NH)NRt2,y -N<Rt>S(O)2Rt; donde cada Rt es independientemente hidrógeno, C1-6 alifático que puede estar sustituido como se define a continuación, -OPh no sustituido, o un anillo de 5-6 miembros saturado, parcialmente insaturado o arilo que tiene 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre, o, no obstante la definición anterior, dos apariciones independientes de Rt , junto con su(s) átomo(s) intermedio(s), forman un anillo monocíclico o bicíclico saturado, parcialmente insaturado o arílico de 3-12 miembros no sustituido con 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre.
Los sustituyentes adecuados en el grupo alifático de Rt son independientemente halógeno, - R ,^ -(haloR^), -OH, -OR^, -O(haloR^), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR*, -NH2 , -NHR', -NR^2 , o -NO2 , donde cada R êstá sin sustituir o donde precedido por "halo" está sustituido sólo con uno o más halógenos, y es independientemente C1-1 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, o un anillo saturado, parcialmente insaturado o arilo de 5-6 miembros con 0-4 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, oxígeno y azufre.
Tal como se utiliza en el presente documento, "equivalente de hidracina" significa un reactivo químico que puede utilizarse para introducir una fracción -N-N- en una molécula. Los equivalentes de la hidracina incluyen el hidrato de hidracina, así como formas protegidas de la hidracina, como el carboxilato de terc-butil hidracina.
Tal como se utiliza en el presente documento, "grupo saliente" se refiere a un grupo funcional que se desplaza de una molécula durante una reacción química. Los grupos salientes incluyen halógenos, así como grupos sulfonato, como tosilato y mesilato.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que son, dentro del ámbito del buen juicio médico, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares, y son proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al., describen en detalle las sales farmacéuticamente aceptables en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de esta invención incluyen sales derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados que son compatibles con el tratamiento de los pacientes.
Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y no tóxicas son las sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico, el ácido bromhídrico, el ácido fosfórico, el ácido sulfúrico y el ácido perclórico o con ácidos orgánicos como el ácido acético, el ácido oxálico, el ácido maleico, el ácido tartárico, el ácido cítrico, el ácido succínico o el ácido malónico o mediante otros procedimientos utilizados en la técnica como el intercambio iónico. Otras sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables incluyen adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforosulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, sales de valerato y similares.
En algunos ejemplos, los ácidos inorgánicos ejemplares que forman sales adecuadas incluyen, pero no se limitan a ellos, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico y sales metálicas ácidas tales como ortofosfato monohidrógeno de sodio y sulfato ácido de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos que forman sales adecuadas incluyen los ácidos mono-, d i-y tricarboxílicos. Ilustrativos de tales ácidos son, por ejemplo, acético, glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, hidroximaleico, benzoico, hidroxibenzoico, fenilacético, cinámico, salicílico, 2-fenoxibenzoico, p-toluenosulfónico y otros ácidos sulfónicos como el metanosulfónico y el 2-hidroxietanosulfónico. Pueden formarse sales mono o diácidas, y dichas sales pueden existir en forma hidratada, solvatada o sustancialmente anhidra. En general, las sales de adición ácida de estos compuestos son más solubles en agua y en diversos disolventes orgánicos hidrófilos, y suelen presentar puntos de fusión más elevados en comparación con sus formas de base libre.
En algunos ejemplos, las sales de adición ácida de los compuestos de fórmula I se forman más adecuadamente a partir de ácidos farmacéuticamente aceptables, e incluyen, por ejemplo, las formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo , ácido clorhídrico, sulfúrico o fosfórico y ácidos orgánicos, por ejemplo, ácido succínico, maleico, acético o fumárico.
Otras sales no farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, oxalatos pueden utilizarse, por ejemplo, en el aislamiento de compuestos de fórmula I para uso en laboratorio, o para su posterior conversión a una sal de adición ácida farmacéuticamente aceptable. También se incluyen en el ámbito de la invención las sales de adición de base (como las sales de sodio, potasio y amonio), los solvatos y los hidratos del compuesto de la invención. La conversión de una sal compuesta dada en una sal compuesta deseada se consigue aplicando técnicas estándar, bien conocidas por los expertos en la materia.
Una "sal de adición básica farmacéuticamente aceptable" es cualquier sal de adición básica orgánica o inorgánica no tóxica de los compuestos ácidos representados por la fórmula I, o cualquiera de sus intermedios. Las bases inorgánicas ilustrativas que forman sales adecuadas incluyen, entre otros, hidróxidos de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio o bario. Las bases orgánicas ilustrativas que forman sales adecuadas incluyen aminas orgánicas alifáticas, alicíclicas o aromáticas como la metilamina, la trimetilamina y la picolina o el amoníaco. La selección de la sal adecuada puede ser importante para que no se hidrolice una funcionalidad de éster, si existe, en otra parte de la molécula. Los criterios de selección de la sal adecuada serán conocidos por los expertos en la materia.
Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N+(Ci-4alkil)4. Las sales representativas de metales alcalinos o alcalinotérreos incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen, en su caso, amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes de amina formados mediante contraiones como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior y sulfonato de arilo.
A menos que se indique lo contrario, las estructuras aquí representadas también incluyen todas las formas isoméricas (p. ej., enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, los isómeros de doble enlace Z y E, y los isómeros conformacionales Z y E. Por lo tanto, los isómeros estereoquímicos simples, así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) del presente compuesto están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique lo contrario, todas las formas tautoméricas del compuesto de la invención están dentro del alcance de la invención.
Además, a menos que se indique lo contrario, las estructuras aquí representadas también incluyen compuestos que difieren únicamente en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos producidos por la sustitución de un hidrógeno por deuterio o tritio, o de un carbono por un carbono enriquecido con 13C o 14C están dentro del alcance de esta invención. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas, como sondas en ensayos biológicos, o como agentes terapéuticos de acuerdo con la presente invención.
El término "estereoisómeros" es un término general para todos los isómeros de una molécula individual que difieren sólo en la orientación de sus átomos en el espacio. Incluye isómeros de imagen especular (enantiómeros), isómeros geométricos (cis/trans) e isómeros de compuestos con más de un centro quiral que no son imágenes especulares entre sí (diastereómeros).
El término "tratar'' o "tratamiento" significa aliviar uno o más síntomas, eliminar la causalidad de uno o más síntomas, ya sea de forma temporal o permanente, o prevenir o retrasar la aparición de uno o más síntomas asociados con un trastorno o afección.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto que es eficaz para tratar o disminuir la gravedad de uno o más síntomas de un trastorno o afección.
El término "portador farmacéuticamente aceptable" significa un disolvente no tóxico, dispersante, excipiente, adyuvante u otro material que se mezcla con el principio activo para permitir la formación de una composición farmacéutica, es decir, una forma de dosificación capaz de ser administrada a un paciente. Un ejemplo de tal portador es el aceite farmacéuticamente aceptable utilizado típicamente para la administración parenteral. Los portadores farmacéuticamente aceptables son bien conocidos en la técnica.
Al introducir elementos divulgados en el presente documento, los artículos "un", "uno, una", "el, la" y "dicho" pretenden significar que hay uno o más de los elementos. Los términos "que comprenda", "que tenga" y "que incluya" son términos abiertos y significan que puede haber otros elementos además de los enumerados.
Formulación y administración
Composiciones farmacéuticamente aceptables
Se divulga aquí una composición que comprende el compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. La cantidad de compuesto en una composición es una cantidad que es eficaz para inhibir mensurablemente CRM1 en una muestra biológica o en un paciente. En ciertos ejemplos, se formula una composición para su administración a un paciente que necesita la composición. El término "paciente", tal como se utiliza aquí, significa un paciente veterinario (es decir, un paciente mamífero no humano). En algunas realizaciones, el paciente es un perro.
La frase "portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador, adyuvante o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica del compuesto con el que se formula. Los portadores, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden utilizarse en las composiciones aquí divulgadas incluyen, entre otros, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, como albúmina sérica humana, sustancias tampón como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato potásico, mezclas parciales de glicéridos de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato potásico, cloruro sódico, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.
Las composiciones aquí divulgadas pueden administrarse por vía oral, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), por pulverización inhalatoria, tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o a través de un reservorio implantado. En algunas realizaciones, los compuestos o composiciones proporcionados son administrables por vía intravenosa y/o intraperitoneal.
El término "parenteral", tal como se utiliza aquí, incluye las técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraocular, intravítrea, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intraperitoneal, intralesional e intracraneal. Preferentemente, las composiciones se administran por vía oral, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa. Las formas inyectables estériles de las composiciones aquí divulgadas pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden formularse según técnicas conocidas en la materia utilizando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico aceptable para los padres, por ejemplo, una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, la solución de Ringery la solución isotónica de cloruro sódico. Además, los aceites fijos estériles se emplean convencionalmente como disolvente o medio de suspensión.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables aquí divulgadas pueden administrarse por vía oral en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable, incluidas, entre otras, cápsulas, comprimidos, suspensiones acuosas y soluciones. En el caso de los comprimidos para uso oral, los soportes utilizados habitualmente son la lactosa y el almidón de maíz. También suelen añadirse agentes lubricantes, como estearato de magnesio. Para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se requieren suspensiones acuosas para uso oral, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también pueden añadirse determinados agentes edulcorantes, aromatizantes o colorantes. En algunas realizaciones, una formulación oral proporcionada está formulada para liberación inmediata o liberación sostenida/retardada. En algunas realizaciones, la composición es adecuada para la administración bucal o sublingual, incluyendo comprimidos, pastillas y pastillas. Un compuesto proporcionado también puede estar en forma microencapsulada.
Alternativamente, las composiciones farmacéuticamente aceptables aquí divulgadas pueden administrarse en forma de supositorios para administración rectal. Las composiciones farmacéuticamente aceptables aquí divulgadas también pueden administrarse por vía tópica, especialmente cuando el objetivo del tratamiento incluye zonas u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación tópica, incluidas enfermedades oculares, cutáneas o del tracto intestinal inferior. Se preparan fácilmente formulaciones tópicas adecuadas para cada una de estas zonas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior puede efectuarse en una formulación de supositorio rectal (véase más arriba) o en una formulación de enema adecuada. También pueden utilizarse parches tópicos transdérmicos.
Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden formularse como suspensiones micronizadas o en una pomada como la vaselina.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables aquí divulgadas también pueden administrarse por aerosol o inhalación nasal.
En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticamente aceptables aquí divulgadas se formulan para administración intraperitoneal.
La cantidad del compuesto de la presente invención que puede combinarse con los materiales portadores para producir una composición en una sola forma de dosificación variará dependiendo del huésped tratado y del modo particular de administración. En un ejemplo, una composición se formula de modo que pueda administrarse una dosis de entre 0,01-100 mg/kg de peso corporal/día del inhibidor a un paciente que reciba la composición. En otro ejemplo, la dosis es de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal, o entre 1 mg y 1000 mg/dosis, cada 4 a 120 horas, o según los requisitos del compuesto de la invención. Típicamente, las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas se administrarán de 1 a 6 veces al día.
También debe entenderse que una dosis específica y un régimen de tratamiento para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, el juicio del médico tratante y la gravedad de la enfermedad particular que se está tratando.
En algunos ejemplos, la composición incluye además uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales. Cuando las composiciones aquí divulgadas comprenden una combinación de un compuesto de las fórmulas aquí descritas y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes a niveles de dosificación de entre aproximadamente el 1 y el 100%, y más preferentemente entre aproximadamente el 5 y el 95% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia. Los agentes adicionales pueden administrarse por separado, como parte de un régimen de dosis múltiples, de los compuestos aquí divulgados. Alternativamente, los agentes adicionales pueden formar parte de una única forma de dosificación, mezclados junto con un compuesto aquí divulgado en una única composición.
Tras la mejoría de la condición del paciente, puede administrarse una dosis de mantenimiento de un compuesto, composición o combinación aquí divulgada, si es necesario. Posteriormente, la dosis o la frecuencia de administración, o ambas, pueden reducirse, en función de los síntomas, hasta un nivel en el que se conserve el estado mejorado cuando los síntomas se hayan aliviado hasta el nivel deseado. Sin embargo, los pacientes pueden requerir un tratamiento intermitente a largo plazo en caso de reaparición de los síntomas de la enfermedad
Usos de los compuestos y composiciones farmacéuticamente aceptables
Los compuestos y composiciones aquí descritos son generalmente útiles para la inhibición de CRM1 y son, por lo tanto, útiles para tratar el cáncer en un sujeto veterinario. Por lo tanto, se divulga aquí un procedimiento para tratar el cáncer en un sujeto veterinario que comprende la etapa de administrar a un sujeto veterinario que lo necesite el compuesto de la presente invención, o una sal o composición farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos y composiciones aquí descritos también pueden administrarse a células en cultivo, p. ej. , in vitro o ex vivo, o a un sujeto, p . ej., in vivo, para tratar, prevenir y/o diagnosticar diversos trastornos, incluidos los descritos a continuación.
La actividad del compuesto utilizado en esta invención como inhibidor de CRM1 puede ensayarse in vitro, in vivo o en una línea celular. Las condiciones detalladas para ensayar el compuesto utilizado en esta invención como inhibidor de CRM1 se exponen en la Ejemplificación.
Como se usa aquí, el término "trastorno o condición mediada por CRM1" o "trastorno o condición asociada con la actividad de CRM1" significa cualquier enfermedad u otra condición deletérea en la que CRM1 juega un papel. En consecuencia, otro ejemplo se relaciona con el tratamiento o la disminución de la gravedad de una o más enfermedades en las que CRM1 desempeña un papel. En algunos ejemplos, la presente invención proporciona procedimientos para tratar una enfermedad asociada con la expresión o actividad de p53, p73, p21, pRB, p27, IkB, NTkB, c-Abl, proteínas FOXO, COX-2 en un sujeto que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito en el presente documento. Se divulga en el presente documento un procedimiento para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad o afección seleccionada entre un trastorno proliferativo (por ejemplo, cáncer), un trastorno inflamatorio, un trastorno autoinmune, una infección vírica, un trastorno oftalmológico o un trastorno neurodegenerativo, comprendiendo el procedimiento administrar a un paciente que lo necesite un compuesto o composición según la presente divulgación. La presente invención se refiere al compuesto definido en las reivindicaciones para su uso en el tratamiento o disminución de la gravedad del cáncer en un sujeto veterinario. A continuación se detallan ejemplos específicos de los trastornos mencionados.
Los cánceres tratables por el compuesto de esta invención incluyen, pero no se limitan a, neoplasias hematológicas (leucemias, linfomas, mielomas, síndromes mielodisplásicos y mieloproliferativos) y tumores sólidos (carcinomas como los de próstata, mama, pulmón, colon, páncreas, renales, ováricos, así como de tejidos blandos y osteosarcomas, y tumores estromales). El cáncer de mama (CM) puede incluir el cáncer de mama de tipo basal (CMBC), el cáncer de mama triple negativo (CMTN) y el cáncer de mama que es a la vez CMBC y CMTN. Además, el cáncer de mama puede incluir el carcinoma ductal o lobulillar invasivo o no invasivo, el carcinoma tubular, medular, mucinoso, papilar, cribiforme de mama, el cáncer de mama masculino, el cáncer de mama recurrente o metastásico, el tumor filoides de mama, la enfermedad de Paget del pezón.
Los trastornos inflamatorios tratables por los compuestos aquí divulgados incluyen, pero no se limitan a, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, enfermedad articular degenerativa, lupus sistémico, esclerosis sistémica, síndromes de vasculitis (de pequeño, mediano y gran vaso), aterosclerosis, enfermedad inflamatoria intestinal, síndrome del intestino irritable, Enfermedad de Crohn, colitis mucosa, colitis ulcerosa, gastritis, sepsis, psoriasis y otros trastornos inflamatorios dermatológicos (como eczema, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, urticaria, esclerodermia, psoriasis y dermatosis con componentes inflamatorios agudos, pénfigo, penfigoide, dermatitis alérgica), y síndromes urticariales. En algunos ejemplos, el trastorno o afección asociado a la actividad de CRM1 es la esclerosis múltiple, el síndrome del intestino irritable, la artritis reumatoide, la psoriasis u otros trastornos inflamatorios dermatológicos.
Las enfermedades víricas tratables con los compuestos aquí descritos incluyen, entre otras, la faringitis febril aguda, la fiebre faringoconjuntival, la queratoconjuntivitis epidémica, la gastroenteritis infantil, las infecciones por Coxsackie, la mononucleosis infecciosa, el linfoma de Burkitt, la hepatitis aguda, la hepatitis crónica, la cirrosis hepática, el carcinoma hepatocelular, la infección primaria por VHS-1 (por ej, gingivoestomatitis en niños, amigdalitis y faringitis en adultos, queratoconjuntivitis), infección latente por VHS-1 (p. ej., herpes labial y herpes labial), infección primaria por VHS-2, infección latente por VHS-2, meningitis aséptica, mononucleosis infecciosa, enfermedad de inclusión citomegálica, sarcoma de Kaposi, enfermedad de Castleman multicéntrica, linfoma de efusión primaria, SIDA, gripe, síndrome de Reye, sarampión, encefalomielitis postinfecciosa, parotiditis, lesiones epiteliales hiperplásicas (por ejemplo, verrugas comunes, planas, plantares y anogenitales, papilomas laríngeos, epidermodisplasia verruciforme), carcinoma cervical, carcinomas de células escamosas, crup, neumonía, bronquiolitis, resfriado común, poliomielitis, rabia, síndrome gripal, bronquiolitis grave con neumonía, sarampión alemán, rubéola congénita, varicela y herpes zóster. Las enfermedades víricas tratables mediante los compuestos aquí descritos también incluyen infecciones víricas crónicas, como la hepatitis B y la hepatitis C.
Trastornos oftalmológicos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, edema macular (edema macular diabético y no diabético), degeneración macular relacionada con la edad (formas húmedas y secas), degeneración macular disciforme envejecida, edema macular cistoide, edema palpebral, edema de retina, retinopatía diabética, coriorretinopatía, maculopatía neovascular, glaucoma neovascular, uveítis, iritis, vasculitis retiniana, endoftalmitis, panoftalmitis, oftalmia metastásica, coroiditis, epiteliitis pigmentaria retiniana, conjuntivitis, ciclitis, escleritis, epiescleritis, neuritis óptica, neuritis óptica retrobulbar, queratitis, blefaritis, desprendimiento de retina exudativo, úlcera corneal, úlcera conjuntival, queratitis numular crónica, enfermedad oftálmica asociada a hipoxia o isquemia, retinopatía del prematuro, retinopatía diabética proliferativa, vasculopatía coroidea polipoidea, proliferación angiomatosa retiniana, oclusión arterial retiniana, oclusión venosa retiniana, enfermedad de Coats, vitreorretinopatía exudativa familiar, enfermedad sin pulso (enfermedad de Takayasu), enfermedad de Eales, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, retinopatía leucémica, síndrome de hiperviscosidad sanguínea, macroglobulinemia, retinopatía asociada al interferón, retinopatía hipertensiva, retinopatía por radiación, deficiencia de células madre epiteliales corneales o catarata.
Las enfermedades neurodegenerativas tratables por un compuesto aquí divulgado incluyen, pero no se limitan a, Parkinson, Alzheimer y Huntington, y esclerosis lateral amiotrófica (ELNEnfermedad de Lou Gehrig). En algunos ejemplos, el trastorno o afección asociado a la actividad de CRM1 es la ELA.
Los compuestos y composiciones aquí descritos también pueden usarse para tratar trastornos de crecimiento tisular anormal y fibrosis, incluyendo cardiomiopatía dilatativa, cardiomiopatía hipertrófica, cardiomiopatía restrictiva, fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, glomerulonefritis y otros trastornos renales.
Los compuestos y composiciones aquí descritos también pueden utilizarse para tratar trastornos relacionados con la ingesta de alimentos, como la obesidad y la hiperfagia. En algunos ejemplos, el trastorno o afección asociado a la actividad de CRM1 es la obesidad.
En algunos ejemplos, el trastorno o afección asociado con la actividad de CRM1 es distrofia muscular, artritis, por ejemplo, osteoartritis y artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, lesión cerebral traumática, lesión medular, sepsis, enfermedad reumática, aterosclerosis cancerosa, diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2, enfermedad renal leptospiriosis, glaucoma, enfermedad retiniana, envejecimiento, cefalea, dolor, síndrome de dolor regional complejo, hipertrofia cardiaca, desgaste muscular, trastornos catabólicos, obesidad, retraso del crecimiento fetal, hipercolesterolemia, cardiopatía, insuficiencia cardiaca crónica, isquemia/reperfusión, apoplejía, aneurisma cerebral, angina de pecho, enfermedad pulmonar, fibrosis quística, lesión pulmonar inducida por ácido, hipertensión pulmonar, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, síndrome de Sjogren, enfermedad de la membrana hialina, enfermedad renal, enfermedad glomerular, enfermedad hepática alcohólica, enfermedades intestinales, endometriosis peritoneal, enfermedades cutáneas, sinusitis nasal, mesotelioma, displasia ecodérmica anhidrótica-ID, enfermedad de behcet, incontinentia pigmenti, tuberculosis, asma, enfermedad de Crohn, colitis, alergia ocular, apendicitis, enfermedad de Paget, pancreatitis, periodonitis, endometriosis, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad inflamatoria pulmonar, enfermedades inducidas por sílice, apnea del sueño, sida, VIH-1, enfermedades autoinmunes, síndrome antifosfolípido, lupus, nefritis lúpica, fiebre mediterránea familiar, síndrome de fiebre periódica hereditaria, enfermedades por estrés psicosocial, enfermedades neuropatológicas, polineuropatía amiloidótica familiar, neuropatía inflamatoria, enfermedad de parkinson, esclerosis múltiple, enfermedad de alzheimer, esclerosis lateral amiotrópica, enfermedad de huntington, cataratas o pérdida de audición.
En otros ejemplos, el trastorno o afección asociado con la actividad CRM1 es una lesión craneal, uveítis, dolor inflamatorio, asma inducida por alérgenos, asma no inducida por alérgenos, nefritis glomerular, colitis ulcerosa, enterocolitis necrotizante, hiperinmunoglobulinemia D con fiebre recurrente (HIDS), Síndrome periódico asociado al receptor del TNF (TRAPS), síndromes periódicos asociados a la criopirina, síndrome de Muckle-Wells (urticaria sordera amiloidosis), urticaria familiar por frío, enfermedad inflamatoria multisistémica de aparición neonatal (NOMID), fiebre periódica, estomatitis aftosa, faringitis y adenitis (síndrome PFAPA), síndrome de Blau, artritis estéril piógena, pioderma gangrenoso, acné (PAPA), deficiencia del antagonista del receptor de interleucina-1 (DIRA), hemorragia subaracnoidea, poliquistosis renal, trasplante, trasplante de órganos, trasplante de tejidos, síndrome mielodisplásico, inflamación inducida por irritantes, inflamación inducida por irritantes vegetales, inflamación inducida por hiedra venenosa/aceite de urushiol, inflamación inducida por irritantes químicos, inflamación inducida por picaduras de abeja, inflamación inducida por picaduras de insectos, quemaduras solares, quemaduras, dermatitis, endotoxemia, lesión pulmonar, síndrome de dificultad respiratoria aguda, hepatitis alcohólica o lesión renal causada por infecciones parasitarias.
En otro ejemplo, un compuesto o composición descrito en el presente documento puede usarse para tratar o prevenir alergias y trastornos respiratorios, incluyendo asma, bronquitis, fibrosis pulmonar, rinitis alérgica, toxicidad del oxígeno, enfisema, bronquitis crónica, síndrome de dificultad respiratoria aguda y cualquier enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).
En el presente documento se divulga el uso de un compuesto de fórmula I en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o afección asociado con la actividad de CRM1. En otros ejemplos, se divulga en el presente documento un uso de un compuesto de fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada con la expresión o actividad de las proteínas p53, p73, p21, pRB, p27, IxB, NTkB, c-Abl, FOXO o COX-2 en un sujeto. La presente invención proporciona un uso del compuesto definido en las reivindicaciones en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de cáncer y / o trastornos neoplásicos en un sujeto veterinario. También se divulga aquí el uso de un compuesto de fórmula I en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de angiogénesis, trastornos autoinmunes, trastornos y/o enfermedades inflamatorias, epigenética, trastornos y/o enfermedades hormonales, enfermedades víricas, trastornos y/o enfermedades neurodegenerativas y trastornos oftalmológicos.
En el presente documento se describe un procedimiento para inhibir CRM1 en una muestra biológica o en un paciente que comprende poner en contacto la muestra biológica con, o administrar al paciente, una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula I, o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo.
Trastornos neoplásicos
Un compuesto o composición descrito en el presente documento puede utilizarse para tratar un trastorno neoplásico. Un "trastorno neoplásico" es una enfermedad o trastorno caracterizado por células que tienen capacidad de crecimiento o replicación autónomos, por ejemplo, un estado o afección anormal caracterizado por un crecimiento celular proliferativo, benigno o maligno. Los trastornos neoplásicos ejemplares incluyen: carcinoma, sarcoma (por ejemplo, de tejidos blandos), osteosarcoma, trastornos metastásicos (por ejemplo, tumores de origen prostático, cerebral, óseo, gastrointestinal, pulmonar, mamario, ovárico, cervical, pancreático, renal, de cabeza y cuello, y hepático), trastornos neoplásicos hematopoyéticos (por ejemplo, leucemias, linfomas, mieloma y otros trastornos malignos de células plasmáticas) y tumores metastásicos. En una realización, el cáncer a tratar se selecciona entre cáncer de mama, ovario, cuello uterino, gastrointestinal, próstata, colon, pulmón, renal, cerebro, hígado y páncreas. El tratamiento con el compuesto puede ser en una cantidad eficaz para mejorar al menos un síntoma del trastorno neoplásico, por ejemplo, reducción de la proliferación celular, reducción de la masa tumoral, etc.
En una realización, el trastorno neoplásico es un cáncer de mama de tipo basal (BLBC). Los BLBC representan hasta el 15% de los cánceres de mama (CM) y suelen ser cáncer de mama triple negativo (CMTN), caracterizado por la ausencia de RE, receptor de progesterona PR y amplificación de HER-2. En una realización específica, el cáncer de mama es TNBC. Además, la mayoría de los BC asociados a BRCA1 son BLBC y TNBC, y expresan citoqueratinas basales y EGFR. El BLBC se caracteriza por un fenotipo agresivo, alto grado histológico y malos resultados clínicos con altas tasas de recurrencia y metástasis.
Terapias combinadas
En algunas realizaciones, el compuesto definido en las reivindicaciones puede administrarse junto con un "segundo" agente terapéutico o tratamiento adicional. La elección del segundo agente terapéutico puede realizarse a partir de cualquier agente que se utilice habitualmente en monoterapia para tratar la enfermedad o afección indicada. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "administrados conjuntamente" y términos relacionados se refiere a la administración simultánea o secuencial de agentes terapéuticos de acuerdo con esta invención. Por ejemplo, el compuesto de la presente invención puede administrarse con otro agente terapéutico simultánea o secuencialmente en formas farmacéuticas unitarias separadas o juntas en una única forma farmacéutica unitaria. En consecuencia, se divulga en el presente documento una forma de dosificación unitaria que comprende el compuesto definido en las reivindicaciones, un agente terapéutico adicional y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
En una realización de la invención, en la que se administra un segundo agente terapéutico a un sujeto, la cantidad eficaz del compuesto de la invención es inferior a la que sería su cantidad eficaz si no se administrara el segundo agente terapéutico. En otra realización, la cantidad efectiva del segundo agente terapéutico es menor que la que sería efectiva si no se administrara el compuesto de la invención. De este modo, se pueden minimizar los efectos secundarios no deseados asociados a dosis elevadas de cualquiera de los agentes. Otras ventajas potenciales (incluyendo, sin limitación, la mejora de los regímenes de dosificación y/o la reducción del coste del fármaco) serán evidentes para los expertos en la materia.
Los tratamientos adicionales ejemplares contra el cáncer incluyen, por ejemplo: quimioterapia, terapias dirigidas como terapias con anticuerpos, inhibidores de quinasas, inmunoterapia y terapia hormonal, terapia epigenética, inhibidores de proteosomas y terapias antiangiogénicas. A continuación se ofrecen ejemplos de cada uno de estos tratamientos.
Ejemplos de agentes quimioterapéuticos utilizados en la terapia del cáncer incluyen, por ejemplo, antimetabolitos (por ejemplo, ácido fólico, derivados de purina y pirimidina) y agentes alquilantes (por ejemplo, mostazas nitrogenadas, nitrosoureas, platino, alquil sulfonatos, hidrazinas, triazenos, aziridinas, veneno fusiforme, agentes citotóxicos, inhibidores de topoisomerasa y otros). Los agentes ejemplares incluyen aclarubicina, actinomicina, alitretinoína, altretamina, aminopterina, ácido aminolevulínico, amrubicina, amsacrina, anagrelida, trióxido de arsénico, asparaginasa, atrasentan, belotecán, bexaroteno, bendamustina, bleomicina, bortezomib, busulfán, camptotecina, capecitabina, carboplatino, carboquona, carmofur, carmustina, celecoxib, clorambucil, clormetina, cisplatino, cladribina, clofarabina, crisantaspasa, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorrubicina, decitabina, demecolcina, docetaxel, doxorrubicina, efaproxiral, elesclomol, elsamitrucin, enocitabina, epirrubicina, estramustina, etoglucid, etopósido, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo (5FU), fotemustina, gemcitabina, implantes gliadel, hidroxicarbamida, hidroxiurea, idarubicina, ifosfamida, irinotecán, irofulven, ixabepilona, larotaxel, leucovorina, doxorrubicina liposomal, daunorrubicina liposomal, lonidamina, lomustina, lucantona, mannosulfán, masoprocol, melfalán, mercaptopurina, mesna, metotrexato, aminolevulinato de metilo, mitobronitol, mitoguazona, mitotano, mitomicina, mitoxantrona, nedaplatino, nimustina, oblimersen, omacetaxina, ortataxel, oxaliplatino, paclitaxel, pegaspargasa, pemetrexed, pentostatina, pirarubicina, pixantrona, plicamicina, porfimer sódico, prednimustina, procarbazina, raltitrexed, ranimustina, rubitecan, sapacitabina, semustina, sitimagene ceradenovec, strataplatin, streptozocin, talaporfin, tegafur-uracil, temoporfin, temozolomide, teniposide, tesetaxel, testolactona, tetranitrato, thiotepa, tiazofurina, tioguanina, tipifarnib, topotecan, trabectedin, triaziquone, trietilenmelamina, triplatino, tretinαna, treosulfán, trofosfamida, uramustina, valrubicina, verteporfina, vinblastina, vincristina, vindesina, vinflunina, vinorelbina, vorinostat, zorubicina y otros agentes citostáticos o citotóxicos descritos en el presente documento.
Dado que algunos fármacos actúan mejor juntos que solos, a menudo se administran dos o más fármacos al mismo tiempo. A menudo, se utilizan dos o más agentes quimioterápicos como quimioterapia combinada. En algunos ejemplos, los agentes quimioterapéuticos (incluida la quimioterapia combinada) pueden utilizarse en combinación con un compuesto descrito en el presente documento.
La terapia dirigida constituye el uso de agentes específicos para las proteínas desreguladas de las células cancerosas. Los fármacos de moléculas pequeñas para terapias dirigidas suelen ser inhibidores de dominios enzimáticos de proteínas mutadas, sobreexpresadas o críticas en una célula cancerosa. Ejemplos destacados son los inhibidores de la tirosina quinasa, como axitinib, bosutinib, cediranib, desatinib, erolotinib, imatinib, gefitinib, lapatinib, lestaurtinib, nilotinib, semaxanib, sorafenib, sunitinib y vandetanib, y también los inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina, como alvocidib y seliciclib. La terapia con anticuerpos monoclonales es otra estrategia en la que el agente terapéutico es un anticuerpo que se une específicamente a una proteína de la superficie de las células cancerosas. Algunos ejemplos son el anticuerpo anti-HER2/neu trastuzumab (Herceptin®), utilizado habitualmente en el cáncer de mama, y los anticuerpos anti-CD20 rituximab y tositumomab, utilizados habitualmente en diversas neoplasias de células B. Otros anticuerpos ejemplares incluyen cetuximab, panitumumab, trastuzumab, alemtuzumab, bevacizumab, edrecolomab y gemtuzumab. Algunos ejemplos de proteínas de fusión son el aflibercept y la denileucina diftitox. En algunos ejemplos, la terapia dirigida puede utilizarse en combinación con un compuesto descrito en el presente documento, por ejemplo, Gleevec (Vignari y Wang 2001).
La terapia dirigida también puede implicar pequeños péptidos como "dispositivos de búsqueda" que pueden unirse a receptores de la superficie celular o a la matriz extracelular afectada que rodea a un tumor. Los radionucleidos que se unen a estos péptidos (por ejemplo, los RGD) acaban matando a la célula cancerosa si el nucleido decae en las proximidades de la célula. Un ejemplo de este tipo de terapia es BEXXAR®.
La terapia antiangiogénica puede incluir inhibidores de la quinasa dirigidos al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), como sunitinib, sorafenib, o anticuerpos monoclonales o "señuelos" del receptor del VEGF o del receptor del VEGF, incluidos bevacizumab o VEGF-Trap, o talidomida o sus análogos (lenalidomida, pomalidomida), o agentes dirigidos a dianas angiogénicas no VEGF, como el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), angiopoyetinas, o angiostatina o endostatina.
Las terapias epigenéticas incluyen inhibidores de las enzimas que controlan las modificaciones epigenéticas, específicamente las ADN metiltransferasas y las histonas desacetilasas, que han mostrado efectos antitumorigénicos prometedores para algunas neoplasias malignas, así como oligonucleótidos antisentido y ARNsi.
La inmunoterapia del cáncer se refiere a un conjunto diverso de estrategias terapéuticas diseñadas para inducir al propio sistema inmunitario del paciente a luchar contra el tumor. Entre los procedimientos contemporáneos para generar una respuesta inmunitaria contra los tumores figuran la inmunoterapia BCG intravesicular para el cáncer superficial de vejiga, la vacuna Provenge contra el cáncer de próstata y el uso de interferones y otras citoquinas para inducir una respuesta inmunitaria en pacientes con carcinoma de células renales y melanoma.
El trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas puede considerarse una forma de inmunoterapia, ya que las células inmunitarias del donante suelen atacar al tumor en un efecto de injerto contra tumor En algunos ejemplos, los agentes de inmunoterapia pueden utilizarse en combinación con un compuesto descrito en el presente documento. Los agentes de terapia hormonal incluyen la administración de agonistas hormonales o antagonistas hormonales e incluyen retinoides/ácido retinoico, compuestos que inhiben el estrógeno o la testosterona, así como la administración de progestágenos.
La divulgación anterior describe de forma general la presente invención. Se puede obtener una comprensión más completa haciendo referencia a los siguientes Ejemplos específicos. Estos Ejemplos se describen únicamente con fines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención. Aunque en el presente documento se emplean términos específicos, éstos tienen un sentido descriptivo y no limitativo.
EJEMPLIFICACIÓN
Abreviaturas
atm Atmósfera
aq. Acuoso
BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo
Boc terc-butoxicarbonilo
CDI N,N'-Carbonildiimidazol
CH2Cl2 Diclorometano
DCC N,N-Diciclohexilcarbodiimida
DCM Diclorometano
DBU Diaza(1,3)biciclo[5.4.0]undecano
DIC N,N'-Diisopropilcarbodiimida
DIPEA N,N-Diisopropiletilamina
DMAP N,N-Dimetil-4-aminopiridina
DMF N,N-Dimetilformamida
DMSO Dimetilsulfóxido
DPPF Difenilfosfinoferroceno
EA Acetato de etilo
EDCI Clorhidrato de N-[3-(dimetilamino)propil]-N'-etilcarbodiimida
EDC 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
eq. equivalente(s)
Et2O Dietiléter
EtOAc Acetato de etilo
EtOH Etanol
EtI Yodoetano
Et Etilo
Fmoc 9-fluorenilmetiloxicarbonilo
GC Cromatografía de gases
h hora(s)
HetAr Heteroarilo
HOBt N-hidroxibenzotriazol
HBTU Hexafluorofosfato de O-(Benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HPLC Cromatografía líquida de alta resolución
LAH Hidruro de litio y aluminio
LCMS Cromatografía líquida Espectrometría de masas
MCPBA ácido m-cloroperbenzoico
MeCN Acetonitrilo
MeOH Metanol
min Minutos
Mel Yodometano
MeMgCl Cloruro de metil magnesio
Me Metilo
NaOAc Acetato de sodio
RMN Resonancia magnética nuclear
NMP N-metilpirrolidinona
o.n. Durante la noche
RT Temperatura ambiente o tiempo de retención
T3P Anhídrido propilfosfónico
TEA Trietilamina
THF Tetrahidrofurano
TLC Cromatografía en capa fina
A lo largo de la siguiente descripción de los procesos debe entenderse que, cuando proceda, se añadirán grupos protectores adecuados a los diversos reactivos e intermedios, y posteriormente se eliminarán de los mismos, de una manera que comprenderá fácilmente un experto en el arte de la síntesis orgánica. Los procedimientos convencionales para utilizar dichos grupos protectores, así como ejemplos de grupos protectores adecuados, se describen, por ejemplo, en "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W. Green, P.G.M. Wuts, Wiley -Interscience, Nueva York, (1999). También debe entenderse que la transformación de un grupo o sustituyente en otro grupo o sustituyente mediante manipulación química puede llevarse a cabo en cualquier producto intermedio o final en el camino sintético hacia el producto final, en el que el posible tipo de transformación está limitado únicamente por la incompatibilidad inherente de otras funcionalidades portadas por la molécula en esa etapa a las condiciones o reactivos empleados en la transformación. Los expertos en el arte de la síntesis orgánica comprenderán fácilmente estas incompatibilidades inherentes y las formas de eludirlas llevando a cabo las transformaciones y las etapas sintéticas apropiadas en un orden adecuado. A continuación se dan ejemplos de transformaciones, y debe entenderse que las transformaciones descritas no se limitan únicamente a los grupos o sustituyentes genéricos para los que se ejemplifican las transformaciones. En "Comprehensive Organic Transformations - A Guide to Functional Group Preparations" R. C. Larock, VHC Publishers, Inc. (1989). Las referencias y descripciones de otras reacciones adecuadas se describen en los libros de texto de química orgánica, por ejemplo, "Advanced Organic Chemistry", March, 4a ed., McGraw Hill (1992). McGraw Hill (1992) o, "Organic Synthesis", Smith, McGraw Hill, (1994). Las técnicas de purificación de los productos intermedios y finales incluyen, por ejemplo, la cromatografía en fase normal y en fase inversa en columna o en plato giratorio, la recristalización, la destilación y la extracción líquido-líquido o sólido-líquido, que serán fácilmente comprendidas por el experto en la materia. Las definiciones de sustituyentes y grupos son las descritas para la fórmula I, salvo que se definan de forma diferente. Los términos "temperatura ambiente" y "temperatura ambiente" significarán, salvo indicación contraria, una temperatura comprendida entre 16 y 25 °C. El término "reflujo" significará, salvo indicación contraria, en referencia a un disolvente, una temperatura igual o superior al punto de ebullición del disolvente.
Ejemplo 1: Síntesis del intermedio ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico.
Figure imgf000034_0001
Síntesis de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida:
Figure imgf000034_0002
Se cargó un matraz de 2 L, 3 cuellos y fondo redondo con una solución de 3,5-bis(trifluorometil)benzonitrilo (200 g) en DMF (1 L). A continuación, la solución se trató con NaSH (123,7 g, 2,0 eq.) y MgCh (186,7 g, 1,0 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a RT durante 3 horas. La mezcla se vertió en una suspensión de hielo y agua (10 L) y el compuesto se extrajo con EtOAc (3 x 1 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera acuosa saturada (3 x 100 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener 205 g de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida cruda deseada (rendimiento: 90 %), que se utilizó sin purificaren la etapa siguiente.
Síntesis de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol:
Figure imgf000034_0003
Se cargó un matraz de 5 L, 3 cuellos y fondo redondo con una solución de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida (205,65 g) en DMF (1,03 L). Se añadió gota a gota hidrato de hidracina (73,2 mL, 2,0 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a RT durante 1 h. Se añadió gota a gota HCOOH (1,03 L) y la mezcla de reacción se sometió a reflujo a 90 °C durante 3 horas. Tras dejar enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (7 L) y se extrajo con EtOAc (3 x 1 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera acuosa saturada (3 x 500 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (35°C, 20 mmHg) para obtener 180 g de compuesto crudo. Este material crudo se agitó con éter de petróleo (3 x 500 mL), se filtró y se secó para obtener 160 g. de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol obtenido como sólido amarillo pálido (rendimiento: 75%).
Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato:
Figure imgf000035_0001
Se cargó un matraz de 2 L, 3 cuellos y fondo redondo con una solución de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (160 g) en DMF (960 mL). La solución se trató con DABCO (127,74 g, 2 eq.) y se agitó durante 30 min antes de añadir (Z)-isopropil 3-yodoacrilato (150,32 g, 1,1 eq.) gota a gota. Tras aprox. 1 hora, la mezcla de reacción se vertió en una mezcla de hielo y agua (5 l) y se extrajo con EtOAc (3 x 1 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera acuosa saturada (3 x 100 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 250 g de compuesto crudo que se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice 60/120) usando un gradiente de acetato de etilo/n-hexano (la columna se empaquetó en hexano y el compuesto deseado empezó a eluir a partir de EtOAC/n-hexano al 2%). Las fracciones que contenían los compuestos deseados se combinaron para obtener 138 g del compuesto deseado puro (rendimiento: 61%).
Síntesis del ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-N)acríNco:
Figure imgf000035_0002
En un matraz de 5 L, 3 cuellos y fondo redondo, se disolvió 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo (130 g, 1,0 eq.) en THF (1,3 L). Se añadió gota a gota a la solución una disolución de LiOH (69,3 g, 5,0 eq.) en agua (1,3 L) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h antes de enfriarla con 400 mL de suspensión de agua helada y hacerla ácida (pH = 2-3) con HCl acuoso diluido. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 1 l) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener 110 g del ácido carboxílico deseado (rendimiento: 94 %) (contenido cis = 90,0 %, contenido trans = 8,2 % por LCMS).
Ejemplo de referencia 2: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(pirazm-2-il)acrilohidrazida (I-3).
Figure imgf000035_0003
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 50 mL con una suspensión de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,200 g) en CH2Cl2 1:1. AcOEt (25 mL). se añadió 2-hidrazinopirazina (0,062 g) a -40 °C seguida de T3P (50%) (0,432 g) y DIPEA (0,147 g). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C antes de concentrarla a presión reducida (35 °C, 20 mmHg). El aceite crudo se purificó mediante TLC preparativa utilizando MeOH al 5% en CH2Cl2 como fase móvil (bajo atmósfera de amoníaco) para obtener 40 mg (rendimiento: 16%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ,10,53 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,06-8,07 (m, 1H), 7.92-7,93 (d, J=2,8 Hz, 1H), 7,51-7,53 (d, J=10,4 Hz, 1H), 6,07-6,10 (d, J=10,4 Hz, 1H); LCMS para C ^H 12F6N7O[M+H]+ predicho: 444.31, encontrado: 444.49 (RT 2,70 min, pureza: 95.78%).
Ejemplo 3: Síntesis del clorhidrato de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida (I-4).
Figure imgf000036_0001
Se cargó un matraz de 500 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una suspensión de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (10 g, 1,0 eq.) en 1:1 CH2Cl2:AcOEt (200 mL). se añadió 2-hidrazinopiridina (3,11 g) a -40 °C. Se añadió gota a gota t 3p (50% en etilacetato) (21,75 g) seguido de DIPEA (7,36 g) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C antes de concentrarse a presión reducida (35 °C, 20 mm Hg) para obtener un aceite marrón crudo que se purificó mediante cromatografía en columna (el compuesto eluyó con 1,3% de MeOH en CH2Cl2). Las fracciones que contenían el compuesto deseado se combinaron para obtener 6,0 g (rendimiento: 48%) (Z)-3-(3-(3,5-bis-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6)5,10,41(s, 1H), 9,66 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,06-8,08 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7,48-7,53 (m, 1H), 7,49-7,52 (d, J=10,4, 1H), 6,71-6,75 (m, 1H), 6,66-6,68 (d, J=8,4Hz, 1H), 6,07-6,09 (d, J=10,4, 1H). LCMS para C18H12F6N6O [M+H]+ predicho: 443.33, encontrado: 443.44 (RT 2,45 min, pureza: 100%).
Síntesis de clorhidrato de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(piridm-2-il)acrilohidrazida:
Figure imgf000036_0002
Se cargó un matraz de 500 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida (5,5 g) en Et2O (250 mL). La solución se enfrió a 5 °C, se trató con HCl en 1,4-dioxano, se dejó calentar a RT y se agitó hasta la terminación, como muestra el análisis TLC (aproximadamente 1 h). Los sólidos se filtraron en un embudo Büchner, se lavaron con Et2Oy se secaron al vacío para obtener 5,5 g (rendimiento: 92%) Clorhidrato de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ,11,26 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,03-8,07 (m, 2H), 7,62-7,59 (d, J=10.4 Hz, 1H), 7,21-7,24 (m, 1H), 7,05-7,09 (m, 1H), 6,16-6,19 (d, J=10,4Hz, 1H), LCMS para C i8Hi3F6N6O [M+H]+ 443,33; encontrado 443,44 (RT 3,54 min, pureza: 99.0%).
Ejemplo de referencia 4: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-N)-1-(4-hidroxipiperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (I-5).
Figure imgf000036_0003
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 50 mL con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,20 g) en CH2Cl2 (10 mL). Se añadió piperidin-4-ol (0,07 g, 1,2 eq.) y la solución se enfrió a -60 °C para añadir T3P (anhídrido fosfónico de propilo) (0,40 mL, 1,2 eq.) y DIPEA(0,19 mL, 2,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min antes de verterla en agua (50 mL) y extraerla con Ch2Cl2 (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera acuosa saturada (50 mL), se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25 °C, 20 mmHg). Purificación mediante cromatografía en columna utilizando sílice 60/120 y MeOH:CH2Cl2 como fase móvil. (compuesto deseado iniciado eluyendo con 3,0% de MeOH/CH2Ch) se obtuvieron 0,025 g (rendimiento: 10%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1 -(4-hidroxipiperidin-1 -il)prop-2-en-1-ona. 1HRMN (400 MHz, CDCl3) 5 ,8,75 (s, 1H), 8,58 (s, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,08-7,11 (d, J=10,4 Hz, 1H) ,6,01-6,04 (d, J=10,4Hz, 1H), 4,02-4,14 (m, 1H), 3,98-4.01 (m, 1H), 3,78-3,85 (m, 1H), 3,47-3,52 (s, 1H), 3,32-3,38 (s, 1H), 1,96 (s, 1H), 1,83 (s, 1H), 1,27 (s, 1H), 0,90 (s, 1H); LCMS para fórmula química: C18H17F6 N4O2 [M+H]+ 435,34; encontrado 435,24 (RT 2,408 min, pureza: 89.6%).
Ejemplo de referencia 5: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenM)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N-(pirroNdm-1-il)acrilamida (I-6).
Figure imgf000037_0001
Una solución fría (-40 °C) de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,35 g) en 1:1 CH2Cl2:EtOAc (200 mL) se trató con 1-aminopirrolidina HCl (0,134 g). A continuación, la mezcla se trató con T3P (50% en EtOAc; 0,77 ml, 1,3 eq.) seguido de la adición lenta de DIPEA (0,51 ml, 3,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C antes de inactivarla con agua helada y extraerla con EtOAc (3 * 20 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera acuosa saturada, se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,275 g de sólido crudo. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (tamaño de malla 60-120) usando MeOH en CH2Q 2 como fase móvil proporcionó la (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N-(pirrolidin-1-il)acrilamida pura deseada (7,0 mg de rendimiento: 1.7%): 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 5 ,9,49 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 7,4-7,38 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,87­ 5.84 (d, J=10,4 Hz, 1H), 2,86-2,81 (m, 4H), 1,74-1,73 (m, 4H); LCMS para C17H16F6N5O [M+H]+ 420,33; encontrado 420,13 (RT 7,76 min, pureza: 92.4%).
Ejemplo de referencia 6: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida (I-7).
Figure imgf000037_0002
Síntesis de 2-(1-metilhidrazinil)piridina:
Figure imgf000037_0003
Se cargó un matraz de 25 mL, 3 cuellos y fondo redondo con 2-bromopiridina (0,31 g) y metilhidrazina (5,09 g, 34,2 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno y la mezcla se agitó y calentó a reflujo a 80-85°C durante 1 hr. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener un aceite amarillo que se trató con Na2CO3 acuoso al 10% p/vy se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera acuosa saturada, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener un aceite amarillo (0,40 g), que se utilizó como tal en la etapa siguiente.
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrílico (0,43 g), 2-(1-metilhidrazinil)piridina (0,15 g, 1 ,0 eq.) en EtoAc ( 10 mL). Se añadieron T3P (50% en EtOAc; 1,1 g, 1,5 eq.) y DIPeA (0,40 g, 2,5 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a -60°C y se monitorizó el progreso de la reacción mediante TlC (usando MeOH:CH2Cl2 al 10 % como fase móvil y visualización con luz UV). La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 0,65 g de sólido crudo. La purificación se realizó en cromatografía en columna Combi-Flash en CH2Cl2 y MeOH (el compuesto deseado empezó a eluir al 3,3% de MeOH en CH2Cl2). Las fracciones que contenían el compuesto deseado se combinaron y concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mm Hg) para obtener 90,0 mg (rendimiento: 18%) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(piridin-2-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 59,89 (s, 1H), 9,79 (brs, 1H), 8,57­ 8,62 (d, 2H), 7,92-7,94 (d, J=11,2Hz, 1H), 7,59-7,64 (m, 1H), 7,19-7.25 (q, 1H), 6,75-6,89 (m, 2H), 5,85-5,88 (d, J=10,8 Hz, 1H), 3,46 (d, 3H); LCMS para C19H15F6N6O [M+H]+ 457,35; encontrado 456,26 (RT 2,52 min, pureza: 100.0%).
Ejemplo de referencia 7: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-metil-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida (I-8).
Figure imgf000038_0001
Síntesis de 2-(1-metilhidrazinil)pirazina:
Figure imgf000038_0002
En un matraz de 25 mL, de 3 cuellos y fondo redondo, se disolvió 2-cloropirazina (0,5 g) en metilhidracina (0,5 g, 1,5 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Se añadió K2CO3 sólido (0,9 g, 1,5 eq.) y la mezcla de reacción se agitó y calentó a reflujo a 80-85 °C durante 1,0 h. La mezcla de reacción se dejó enfriara RT y se concentró a presión reducida (40 °C, 2 0 mmHg) para obtener un residuo aceitoso amarillo que se trató con Na2C o 3 acuoso al 10% p/vy se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener 0,43 g de un aceite amarillo que se utilizó como tal en la etapa siguiente.
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 50 mL con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,3 g), 2-(1-metilhidrazinil)pirazina (0,12 g, 1,1 eq.) y CH2Cl2 (10 mL). Se añadieron T3P (50% en EtOAc; 0,38 g, 1,5 eq.) y DIPEA(0,50 g, 3,5 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a -60°C. Controlando el progreso de la reacción por TLC (usando MeOH:CH2Cl2 al 10% como fase móvil y visualizando bajo luz UV). La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (25 °C, 2 0 mmHg) para obtener 0,265 g de sólido crudo. La purificación mediante cromatografía en columna Combi-Flash con CH2Cl2:MeOH como eluyente (el compuesto deseado empezó a eluir al 1,5% de MeOH en CH2Cl2) proporcionó 75,0 mg de compuesto puro (rendimiento del 23%); (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida: 1H RMN (400 MHz, DMsO-d6 ) 5 10,77 (s, 1H), 9,40-9,36 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,29-8,27 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 7,925-7,92 (d, 1H), 7,56-7,54 (d, J=10,4 Hz, 1H), 6,13-6,10 (d, J=10,4 Hz, 1H), 3,43 (d, 3H).54 (d, J=10,4 Hz, 1H), 6,13-6,10 (d, J=10,4 Hz, 1H), 3,43 (d, 3H); LCMS para C18H14F6N7O [M+H]+ 458,34; encontrado 458,24 (r T 2,83 min; pureza: 96.31%).
Ejemplo de referencia 8: Síntesis (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(3-metilpiridin-2-il)acrilohidrazida (I-9).
Figure imgf000038_0003
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,25 g) en EtOAc (20 mL). La solución se enfrió a -70 °Cy se trató consecutivamente con 3-metil-2-(1-metilhidrazinil)piridina (0,135 g, 1,0 eq.), T3P (50% en EtOAc; 1,4 mL, 4 eq.) y DIPEA (0,6 mL, 6 eq.). La mezcla de reacción transparente se agitó a -60 °C durante 4 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC utilizando MeOH al 2,5% en CH2Cl2 como fase móvil y visualizando bajo UV. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (25 °C, 20 mm Hg) para obtener un compuesto crudo que se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2 malla 60/120 y eluyendo con un gradiente de MeOH:CH2Cl2). El compuesto deseado comenzó a eluircon 0,3-0,4% de MeOH en diclorometano. Las fracciones que contenían el material deseado se combinaron para obtener 0,21 g (rendimiento: 40%) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(3-metilpiridin-2-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6 ) 5 = 10,73 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,45-8,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,97-7,99 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,48-7.50 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,01-7,05 (m, 1H), 5,86-5,88 (d, J = 10 Hz, 1H), 3,26 (s, 3H); LCMS para C20H14F9N6O [M+H]+ 525,35; encontrado 525,19 (RT 3,31 min, pureza 99,40%).
Ejemplo de referencia 9: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(5-metilpiridm-2-il)acrilohidrazida (I-10).
Figure imgf000039_0001
Un matraz de fondo redondo de 50 mL y 3 cuellos, cargado con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,25 g) en EtOAc (10 mL) se trató con 2-hidrazinil-5-metilpiridina (0,97 g, 1,1 eq.). La mezcla se enfrió a -60 °C y se trató con T3P (anhídrido fosfónico de propilo; 0,85 mL, 2,0 eq.) y DlPEA (0,5 mL, 4,0 eq.). La mezcla se agitó durante 30 min y después se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener un compuesto crudo que se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, malla 60/120, MeOH:CH2Cl2 como fase móvil). El compuesto deseado comenzó a eluir con 2,5% MeOH:CH2Cl2. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se combinaron y concentraron a presión reducida para obtener 0,130 g( rendimiento: 40%) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(5-metilpiridin-2-il)acrilohidrazida. 1HRMN (400 MHz, CDCl3) 5 ,10,38 (s, intercambiable, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,54 (s, 2H), 8,40 (s, intercambiable, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,48-7,51 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 7,33-7.36 (dd, J= 2 Hz, J= 6 Hz, 1H), 6,61-6,63 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,20-6,23 (d, J= 10,4Hz, 1H), 2,15 (s, 3H); LCMS para C19H15F6N6O [M+H]+ 457,35; encontrado 457,24 (RT 2,61 min, pureza: 99.13%).
Ejemplo de referencia 10: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-metil-N'-(piridin-3-il)acrilohidrazida (I-11).
Figure imgf000039_0002
Un matraz de fondo redondo de 50 mL y 3 cuellos cargado con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,25) en CH2Cl2 (12 mL) se trató con 3-(1-metilhidrazinil)piridina (0,105 g, 1,2 eq.). La mezcla se enfrió a -60 °C y se trató con T3P (anhídrido fosfónico de propilo; 0,50 mL, 1,2 eq.) y DlPEA(0,24 mL, 2 , 0 eq.) y se agitó durante 1 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC utilizando MeOH:CH2Cl2 al 10% como fase móvil y visualizando bajo luz UV. A continuación, la mezcla de reacción se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre MgsO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25 °C, 20 mmHg) para obtener el compuesto crudo, que se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, malla 60/120, MeOH:CH2Cl2 como fase móvil). El compuesto deseado comenzó a eluir en 3,0% MeOH:CH2Cl2. Las fracciones que contenían el compuesto se recogieron y concentraron a presión reducida para obtener 140 mg (rendimiento:43 %) de (Z)-3-(3-(3,5-bis (trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-metil-N'-(piridin-3-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 5 ,10,55 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 9,15 (s, 2H), 8,58 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,51-7,54 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 7,18-7,22 (m, 2H), 6,05-6,07 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H); LCMS para C19H15F6 N6O [M+H]+ 457,35; encontrado 457,19 (RT 2,43 min, pureza: 83.48%).
Ejemplo de referencia 11: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(6-cloropirimidin-4-il)acrilohidrazida (I-12).
Figure imgf000040_0001
Se cargó un matraz de 25 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,5 g) y 4-doro-6-hidrazinopirimidina (0,20 g, 1,0 eq.) en EtOAc (5,0 mL). La mezcla se enfrió a -40 °C y se trató con t 3p (2,3 mL, 2,5 eq.) y DIPEA (0,98 mL, 4,0 eq.). El análisis por TlC (utilizando MeOH-CH2Cl2 al 5% como eluyente) mostró que el material de partida se había consumido al cabo de 30 min. A continuación, la mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 , se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener material crudo que se sometió a purificación preparativa por TLC usando MeOH-CH2Cl2 al 5% como fase móvil. Se obtuvieron 250 mg (rendimiento: 36.74%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(6-cloropirimidin-4-il-)acrilohidrazida. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6), 5= 10,59 (brs, intercambiable, 1H), 9,85 (brs, intercambiable, 1H), 9,52 (s, 1H), 8.50 (s, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,52-7,55 (d, 1H, J= 10,4 Hz), 6,69 (s, 1H), 6,05-6,08 (d, 1H, J= 10,4 Hz); LCMS: Calculado para C17HnClF6 N7O(M+H)+ 478,76; encontrado: 478.09 (RT 2,79 min, pureza: 97.51%).
Ejemplo de referencia 12: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(piridm-3-il)acrilohidrazida (I-13).
Figure imgf000040_0002
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrílico (0,25 g) y 3-hidrazinopiridina (0,077 g, 1 ,0 eq.) en EtOAc ( 10 mL). Se añadieron T3P (50% en EtOAc; 0,52 g, 1,2 eq.) y DlPEA (0,27 g, 2,0 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a -55 a -60 °C. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis de TLC usando MeOH al 10%:CH2Cl2 como fase móvil y visualización bajo luz UV. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 0,475 g de sólido crudo. La purificación se realizó mediante cromatografía en columna Combi-Flash (con MeOH:CH2Cl2). El compuesto deseado empezó a eluir al 2,3% de MeOH en CH2Cl2. Las fracciones que contenían el compuesto se combinaron y concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 2 0 , 0 mg (rendimiento: 6 %) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-3-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 510,35 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,93-7,95 (m, 1H),7,52-7.54 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 7,09 -7,15 (m, 2H), 6,04-6,07 (d, J= 10,4 Hz, 1H), LCMS para C18H13F6 N6O [M+H]+ 443,33 encontrado 443,19 (RT 2,19 min, pureza: 99.60%).
Ejemplo de referencia 13: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(qumoxaNn-2-il)acrilohidrazida (I-14).
Figure imgf000040_0003
Síntesis de la 2-hidrazinilquinoxalina:
Figure imgf000041_0001
En un tubo sellado de 30 mL, se disolvió 2-cloroquinoxalina (1,0 g) en etanol ( 8 mL) y se añadió hidrato de hidracina ( 8 mL) bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla se agitó y se calentó a temperatura de reflujo (80 °C) durante 1 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis por TLC utilizando MeOH:CH2Cl2 al 10 % como fase móvil y visualización bajo luz UV y/o con ninhidrina. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener 240 mg de un sólido blanco, que se utilizó como tal en la etapa siguiente.
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 50 mL con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,25 g) y 2-hidrocinilquinoxalina (0,14 g, 1,2 eq.) en EtOAc. Se añadieron T3P (50% en EtOAc; 0,83 mL, 2 , 0 eq.) y DIPEA (0,5 mL, 4,0 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a -55 a -60 °C y la mezcla de reacción se agitó durante 2 h antes de concentrarse a presión reducida (25 °C, 20 mmHg) para obtener 0,150 g de sólido crudo. La purificación mediante cromatografía en columna Combi-Flash (eluyendo con MeOH:CH2Cl2 ; el compuesto deseado empezó a eluir al 5% de MeOH en CH2Ch) proporcionó 60 mg (rendimiento: 20%) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(quinoxalin-2-il)acrilohidrazida. 1H Rm N (400 MHz, DMSO-d6 ) 5= 10,851 (s, 1H), 9,89-9,87 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,49-8,54 (m, 3H), 8,26 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,86-7.88 (d, J= 8 Hz, 1H), 7,45 - 7,66 (m, 4H), 6,17-6,20 (d, J = 10,4 Hz, 1H); LCMS para C21H14F6 N7O [M+H]+ 494,37; encontrado 494,19 (Rt 2 , 8 8 min, pureza: 1 0 0 %).
Ejemplo de referencia 14: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(1,1-dioxotetrahidrotiofen-3il)acrilohidrazida (I-15).
Figure imgf000041_0002
Se cargó un matraz de 50 mL, 3 cuellos, de fondo redondo con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,5 g) en EtOAc (20,0 mL) y se trató con 2-(1,1-dioxotetrahidrotiofen-3-il)hidracina (0,3 g, 1,2 eq.). La mezcla se enfrió a -60 °C y se trató simultáneamente con T3P (50% en EtOAc; 2,0 mL, 2 eq.) y DIPEA (1 mL, 4 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -60 °C antes de concentrarla a presión reducida (35 °C, 2 0 mmHg) para obtener 0,60 g de residuo sólido. La purificación mediante cromatografía en columna (SiO2; elución con MeOH:CH2Ch; el compuesto deseado eluyó al 5% de MeOH en CH2Ch) proporcionó 100 mg (rendimiento= 15 %) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(tetrahidrotiofen-1-1-dióxido-3-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 = 9,57 (s, 1H), 8,64 (s, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,34-7,36 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,89-5,92 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,04- 3,26 (m, 4H), 2,27- 2,34 (m, 2H). LCMS para C i7Hi5F6N5O3S[M+H]+ 484,40; encontrado 483,39 (Rt 2,63 min, pureza: 66.39%).
Ejemplo de referencia 15: Síntesis de (Z)-N-(azepan-1-N)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-il)acrilamida (I-16).
Figure imgf000041_0003
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 500 mL con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,3 g) en CH2Cl2:EtOAc (1:1, 200 mL) y se trató la solución con azepan-1-amina (0,137 g) a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió a -60 °C y se trató primero con T3P (50% en EtOAc, 0,78 ml) y después con DIPEA (0,58 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -60 °C antes de inactivarla con agua helada y extraerla con EtoAc (3 x 20 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,57 g de sólido. La purificación mediante cromatografía en columna (SiO2, MeOH:CH2Cl2 como fase móvil; el compuesto comenzó eluyendo con 0,1% de MeOH en CH2Ch) proporcionó 90 mg (rendimiento: 24%) (Z)-N-(azepan-1-il)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilamida. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6 ) 5 ,9,61 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 7,39-7,97 (d, J=10 Hz, 1H), 6,52-6,49 (d, J=10.4 Hz, 1H), 5,86-5,83 (d, J=10,4Hz, 1H), 3,00-2,97 (m, 4H), 1,58-1,54 (m, 8 H) LCMS para C19H19F6 N5O [M+H]+ 448,39; encontrado 448,30 a Rt 3,22 min pureza (96,48%).
Ejemplo de referencia 16: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(2,6-dimetilpirimidin-4-il)acrilohidrazida (I-17).
Figure imgf000042_0001
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,20 g.) disuelto en acetato de etilo (15 mL). La solución se enfrió a -40 °C y se trató con 4-hidrazinil-2,6-dimetilpirimidina (0,078 g, 1 eq.). A continuación se añadieron simultáneamente T3P (50% en EtOAc; 0,7 g, 3,0 eq.) y DIPEA (0,367 g, 4,0 eq.) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,340 g de compuesto crudo aceitoso que se purificó por combi-flash usando MeOH:CH2Cl2 como fase móvil (el compuesto deseado se eluyó con MeOH al 7-8% en CH2Ch) para obtener 50 mg (rendimiento: 18%) (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(2,6-dimetilpirimidin-4-il)acrilohidrazida. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) 5,10,54 (s, 1H),9,19(b, 1H), 8,54 (s, 2H), 8,30 (s, 1H), 7,52-7,55 (d, J=10,4, 1H), 6,29 (s, 1H), 6.06­ 6,08 (d, J=10,4, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), LCMS para C19H1aF6 N7O[M+H]+ 472,37; encontrado 472,24 (RT 2,88 min, pureza: 99.59%).
Ejemplo de referencia 17: Síntesis de (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida
Figure imgf000043_0001
Síntesis de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida:
Figure imgf000043_0002
Un matraz de 2 L, 3 cuellos y fondo redondo, cargado con una solución de 3,5-bis(trifluorometil)benzonitrilo (200 g) en DMF (1 L), se trató con NaSH (123,7 g, 2,0 eq.) y MgCl2 (186,7 g, 1 eq.). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 3 h antes de verterse en una mezcla de hielo y agua (10 L) y se extrajo con EtOAc (3 x 1 L). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 100 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 205 g de compuesto crudo (rendimiento: 90 %), que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Síntesis de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol:
Figure imgf000043_0003
Un matraz de 5 L, 3 cuellos y fondo redondo, cargado con una solución de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida (205,65 g) en DMF (1,03 L) se trató con hidrato de hidrazina (73,16 mL, 2,0 eq.) añadido gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h antes de tratarla con HCOOH (1,028 L) añadido gota a gota. La mezcla de reacción se sometió a reflujo a 90°C durante 3 h, después se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en solución acuosa saturada de NaHCOs (7 L) y se extrajo con EtOAc (3 x 1L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3 x 500 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (35°C, 20 mmHg) para obtener 180 g de sólido. El sólido se suspendió en éter de petróleo y la suspensión se agitó, filtró y secó para obtener el triazol deseado como un sólido amarillo pálido (160 g, rendimiento: 75%).
Síntesis de 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo y 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (E)-isopropilo:
Figure imgf000044_0001
Un matraz de 2 L, 3 cuellos y fondo redondo, cargado con una disolución de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (160 g,) en DMF (0,96 L, 6 V), se trató con DABCO (127,74 g, 2 eq.) y se agitó durante 30 min. se añadió gota a gota 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo (150,32 g, 1,1 eq.) a la mezcla de reacción anterior y se agitó durante 1 h antes de verter en una mezcla de hielo y agua (5 L) y extraer con EtOAc (3 x 1 L). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 100 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (35°C, 20 mmHg) para obtener 250 g de compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía en columna (SiO2, malla 60/120, elución con gradiente EtOAc:hexanos; los compuestos deseados empezaron a eluir en 2-2,5 % EtOAc en hexanos) proporcionó éstercis puro (138 g, rendimiento: 61.6%) y éstertrans puro (11,6 g, rendimiento: 5.2%).
Síntesis del ácido (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico:
Figure imgf000044_0002
Se cargó un matraz de 500 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución de 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (E)-isopropilo (5,0 g) en THF (50 mL). La solución se trató con una solución de LiOH (2,66 g, 5,0 eq.) en agua (50 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. antes de diluirse con 40 mL de agua, acidificarse (pH = 2-3) con HCl acuoso diluido y extraerse con EtOAc (3 x 100 mL). El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener 2,75 g del ácido carboxílico insaturado deseado (rendimiento: 61.6 %, pureza: 99.0 % por LCMS).
Síntesis de (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida:
Figure imgf000044_0003
A una solución de ácido (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,75 g,) en EtOAc (25 mL) y THF (12,5 mL) se añadió una solución de 2-hidrazinopirazina (0,23 g) en 12 mL de THF a temperatura ambiente. Se añadieron gota a gota y simultáneamente T3P (50% en acetato de etilo, 1,52 mL) y DIPEA (1,46 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente antes de enfriarse con agua helada y extraerse con EtOAc (3 x 25 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida (35°C, 20 mmHg), obteniéndose 0,698 g de sólido crudo. Triturando primero con éter de petróleo y luego con Et2O se obtuvieron 275 mg (rendimiento: 29%) (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil) fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 5 ,10,3 (s, 1H), 9,15 (s, 2H), 8,59 (s, 2H), 8,30­ 8,26 (d, J= 14,8 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 8.06-8,07 (m, 1H), 6,98-6,95 (d, J= 13,4 Hz, 1H); LCMS para C17H12F6N7O [M+H]+ 443,31; encontrado 444,19 (RT 2,625 min, pureza: 99.06%).
Ejemplo de referencia 18: Síntesis del clorhidrato de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(piridin-4-il)acrilohidrazida (I-19).
Figure imgf000045_0001
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenM)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrílico (0,25 g) y EtOAc (10,0 mL). se añadió clorhidrato de 4-hidrazinilpiridina (0,16 g, 1,2 eq.) a -40 °C seguido de la adición simultánea de T3P (50% en EtOAc, 0,85 mL, 2,0 eq.) y DIPeA (0,49 mL, 4,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C antes de concentrarla a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,35 g de material crudo. La purificación mediante cromatografía en columna utilizando MeOH:CH2Cl2 como fase móvil (el compuesto se eluyó con MeOH al 4% en CH2Ch) permitió obtener 80 mg (rendimiento: 29.85%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N’-(piridin-4-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ,10,53 (sbdr, NH intercambiable, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,88 (sbdr, NH intercambiable, 1H), 8,84 (s, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,09-8.11 (d, 2H), 7,52-7,54 (d, J=10,4 Hz, 1H), 6,66-6,69 (m, 2H), 6,06-6,10 (d, J= 14,4 Hz, H); LCMS para C18H13F6 N6O [M+H]+ 443,33; encontrado 443,24 (RT 2,241 min, pureza: 90.17%).
Se cargó un matraz de 25 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con una solución fría (0°C) de (Z)-3-(3-(3, 5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-4-il)acrilohidrazida (0,08 g) en CH2Cl2 (5,0 mL) y se trató con HCl 4N en dioxano (0,5 mL). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 4 h antes de concentrarla a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,05 g (rendimiento: 40.81 %) sal (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(piridin-4-il)acrilohidrazida-HCl. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 13,67 (brs, intercambiable, 1H), 10,67 (s, intercambiable, 1H), 9,43 (s, 1H), 8,58 (s, 2H), 8,35-8,38 (m, 4H), 7,60-7.62 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 6,92-6,96 (m, 2H), 611-6,13 (d, J= 10,4 Hz, 1H); LCMS para C18H13F6N6O [M+H]+ 443,33; encontrado 443,24 (RT 3,00 min, pureza: 90.97%).
Ejemplo de referencia 19: Síntesis de (Z)-N-(4-bencNpiperazm-1-N)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilamida (I-20).
Figure imgf000045_0002
Síntesis de 4-bencilpiperazin-1-amina.
Figure imgf000045_0003
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con HCl conc. y agua, y se enfrió la solución a 0-5 °C para añadir NaNO2 y bencil piperazina (5,0 g) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 2,5 h a 0-5°C antes de diluirse con agua y extraerse con EtOAc (3 * 100mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener 4,40 g de un sólido incoloro. La purificación mediante cromatografía combi-flash (elución con 25,5% EtOAc:hexano) proporcionó 2,0 g del compuesto deseado (rendimiento: 34.3%).
Una solución fría (-70 °C) de 1-bencil-4-nitroso-4-piperizina (0,8 g) en THF se trató con exceso de LAH bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó 1,0 h antes de inactivarla con agua y extraerla con EtOAc (3 * 10mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (40 °C, 20 mmHg) para obtener 0,70 g de 4-bencilpiperazin-1-amina como sólido incoloro.
Síntesis de (Z)-N-(4-bencilpiperazin-1 -il)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrilamida.
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 50 mL con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,220 g, 1,2 eq.), 4-bencilpiperazin-1-amina (0,10 g, 1,0 eq.), 4-bencilpiperazin-1-amina (0,10 g, 1,0 eq.) y ácido acrílico (0,220 g, 1,2 eq.).) y EtOAc (15 ml). Se añadieron T3P (50% en EtOAc 0,99 g, 3,0 eq.) y DIPEA (0,27 mg, 4,0 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno a la solución fría (-60 °C). El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC (SiO2, 15% MeOH:CH2Cl2 como fase móvil, visualización bajo luz UV). La mezcla de reacción se inactivó en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25 °C, 20 mmHg) para obtener 0,35 g de sólido crudo. La purificación en Combi-flash (eluyendo con 10% de MeOH/CH2Cl2) proporcionó 20 mg (rendimiento: 6%) de (Z)-N-(4-bencilpiperazin-1 -il)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrilamida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 9,44-9,48 (t, 3H), 9,10 (s, 1H), 8,51 (s, 2H), 7,23-7,41 (m, 6H), 6,46-6,49 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 5,83-5.86 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 3,47 (s, 2H), 2,81 (s, 4H), 2,23-2,33 (d, 2H) LCMS para C24H2sF6N6O[M+H]+ 525,47; encontrado 525,20 (RT 9,87 min, pureza: 100%).
Ejemplo de referencia 20: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N-(4-etilpiperazin-1-il)acrilamida (I-21).
Figure imgf000046_0001
Una solución fría (-40 °C) de ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,25 g) en EtOAc (20 mL) se trató con 4-etilpiperazin-1-amina (0,12 g). Se añadieron simultáneamente T3P (50% en EtOAc, 0,84 mL) y DlPEA (0,24 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -40 °C antes de enfriarse con agua helada y extraerse con EtOAc (3 x 20 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida (35 °C, 20 mmHg) para obtener 0,280 g de compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía flash combinada (eluyendo con MeOH al 2% en CH2Cl2) seguida de purificación en una placa de TLC preparativa (eluyendo con MeOH al 10% en CH2Ch) proporcionó 6 0 mg de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N-(4-etilpiperazin-1-il)acrilamida. 1h Rm N (400 MHz, CF3COOD) 5: 10.75 (s, 1H), 8,31-8,29 (d, J=10,2 H), 7,98 (s, 1H), 7,21-7,23 (d, 1H), 6,08-6,10 (d, 1H), 3,52-3,54 (m, 3H), 3.36 (s, 1H), 3,11 (m, 8 H), 1,19-1,22 (m, 3H) ; LCMS para C19H21F6N6O [M+H]+ 463,40; encontrado 463,23 (RT 2,43 min, pureza: 98.63%).
Ejemplo de referencia 21: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N-morfolinoacrilamida (I-22).
Figure imgf000046_0002
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,250 g), morfolin-4-amina (0,072 g, 1,0 eq.) y EtOAc (10 mL). La solución se enfrió a -60 °C y se trató con T3P (50% en EtOAc; 0,63 mL, 1,5 eq.) y DIp Ea (0,24 mL, 2,0 eq.) bajo atmósfera de nitrógeno. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC utilizando MeOH:CH2Cl2 al 10% como fase móvil y visualización bajo luz UV. Una vez completada, la mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc (3 x 15 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25 °C, 20 mmHg) para obtener 0,35 g de sólido crudo. La purificación (Combi-flash, elución con 3 % MeOH:CH2Cl2) proporcionó 100 mg (rendimiento: 33 %) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N-morfolinoacrilamida. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) 5= 9,52 (s, intercambio NH, 1H), 8,51 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 7,38­ 7,42 (m, 1H), 6,50-6,53 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 5.84-5,86 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,63 (s, 4H), 2,87 (s, 4H); LCMS para C i 7Hi6F6N5O2 [M+H]+ 436,33; encontrado 436,18 (rT 2,64 min, pureza: 100%).
Ejemplo de referencia 22: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N'-(pirimidm-4-il)acrilohidrazida (I-23).
Figure imgf000047_0001
Síntesis de 4-hidrazinilpirimidina:
Figure imgf000047_0002
Una solución de 2,4-didoropirimidina (2,0 g) en EtOH (25 mL) se enfrió a 0-20 °C y se trató con hidracina (2,8 mL). El progreso de la reacción se siguió por TLC utilizando MeOH:CH2Cl2 al 10% como fase móvil y visualizando bajo luz UV. La mezcla se concentró a presión reducida para obtener 3,1 g de 2-cloro-4-hidrazinilpirimidina bruta (rendimiento= 94,8%).
A una solución de 2-cloro-4-hidrazinil-pirimidina (200 mg) disuelta en MeOH (10 mL) se añadió Pd/C al 10% (200 mg) y la suspensión se agitó bajo atmósfera de hidrógeno hasta que se demostró que estaba completa mediante análisis por TLC (usando MeOH:CH2Cl2 al 10% como fase móvil y visualizando bajo luz UV). La mezcla se filtró a través de Celite® y se concentró a presión reducida para obtener 250 mg de 4-hidrazinilpirimidina.
Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirimidin-4-il)acrilohidrazida.
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (250 mg, 1,0 eq.) y EtOAc (20,0 mL). se añadió 4-hidrazinilpirimidina (231 mg, 3 eq.) a -60 °C seguido de la adición simultánea de T3P (50% en EtOAc; 0,84 mL, 2,0 eq.) y DIPEA (0,24 mL, 2,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -60 °C antes de concentrarla a presión reducida (35 °C, 20 mm Hg) para obtener 0,20 g de sólido. La purificación mediante cromatografía en columna (eluyendo con MeOH al 5% en CH2Ch) proporcionó 75 mg de material que se purificó mediante TLC preparativa (usando MeOH:CH2Cl2 como fase móvil) para proporcionar 13 mg (rendimiento= 5%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirimidin-4-il)acrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5= 10,59 (s, 1H), 9,68 (s, intercambio NH, 1H), 9,47 (s, intercambio NH, 1H), 8,53-8,59 (t, 2H), 8,30 (s, 1H), 8,19-8,20 (d, 1H), 7.53-7,56 (d, J= 11,2 Hz, 1H), 6,66-6,67 (d, 1H), 6,06-6,09 (d, J= 10,4 Hz, 1H); LCMS para C ^H 12F6N7O[M+H]+ 444,31; encontrado 444,19 (RT 2,39 min, pureza: 94.97%). Ejemplo de referencia 23: Síntesis de (Z)-3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida (I-24).
Figure imgf000048_0001
Una solución de 4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)benzonitrilo (1,0 g) en DMSO (10 mL) se trató conK2CO3 sólido (0,55 g, 1,1 eq.) y H2O2 (30% v/v, 1,0 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h antes de verterla en agua helada (20 mL). El precipitado se filtró y se lavó con éter de petróleo para obtener 1,0 g de amida primaria cruda deseada (rendimiento: 90 %).
Síntesis de 4-doro-3,5-bis(trifluorometil)benzotioamida:
Figure imgf000048_0002
A una solución de 4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)benzamida (1,2 g) en tolueno (20 mL) se añadió el reactivo de Lawesson (3,32 g, 2,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante 8 h antes de enfriarse a temperatura ambiente y filtrarse. El filtrado se vertió en agua y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 50 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 2 g de compuesto crudo. El compuesto crudo se purificó por cromatografía combi-flash (eluyendo con 7% EtOAc:hexano) para obtener 1,0 g del compuesto deseado (rendimiento: 79%).
Síntesis de 3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol:
Figure imgf000049_0001
Una solución de 4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida (1 g) en DMF (10 mL) se trató con hidrato de hidracina (0,32 g, 2,0 eq.) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h antes de añadir ácido fórmico (3 mL). La mezcla de reacción se sometió a reflujo a 90 °C durante 3 h y después se enfrió a temperatura ambiente, se vertió en NaHCO3 acuoso saturado (lentamente, manteniendo la temperatura 25-30 °C) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 50 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 1,5 g de compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía en columna (eluyendo con 40% EtOAc en hexano) proporcionó 0,50 g del compuesto deseado (rendimiento: 36 %).
Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato:
Figure imgf000049_0002
Una solución de 3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (2,1 g) en DMF (20 mL) se trató con DABCO (1,5 g, 2 eq.) y la mezcla se agitó durante 30 min antes de añadir 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo (1,76 g, 1,1 eq.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y después se vertió en agua helada (50 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 15 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera ( 3x10 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener 3,0 g de compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía en columna utilizando (SiO2 demalla 60/120, elución con 1­ 1,2% MeOH en CH2Cl2) proporcionó el éster insaturado deseado (1,33 g, rendimiento: 52%).
Síntesis del ácido (Z)-3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico:
Figure imgf000049_0003
Se cargó un matraz de 25 mL, 3 cuellos y fondo redondo con una solución de 3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo (1,33 g) en 1:1 THF:agua (26 mL). La solución se trató con LiOH sólido (0,53 g, 4 eq.) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h antes de diluirse con 400 ml de agua, acidificarse a pH = 2-3 con HCl acuoso diluido y extraerse con EtOAc (3 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener 0,8 g de compuesto crudo (rendimiento: 66 %).
Síntesis de (Z)-3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida:
Figure imgf000050_0001
En un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo, cargado con una solución de ácido (Z)-3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,8 g) en 1:1 EtOAc:THF (20 mL). La solución se enfrió a -70 °C y se trató secuencialmente con 2-hidrazinopirazina (0,275 g, 1,2 eq.), T3P (50% en EtOAc; 2,5 mL, 2,0 eq.) y DIPEA (1,44 mL, 4,0 eq.), añadidos gota a gota. La mezcla de reacción clara se agitó a -60°C durante 1 h antes de concentrarla a presión reducida (25 °C, 20 mm Hg) para obtener el compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía en columna utilizando (SiO2 de malla 60/120, elución con 3-4% MeOH en CH2Ch) permitió obtener 0,30 g (rendimiento: 30%) (Z)-3-(3-(4-cloro-3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-(pirazin-2-il)acrilohidrazida. 1Hr MN (400 MHz, DMSO-d6 ) 5 = 10,53 (s, 1H), 9,58 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8 ,13 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7,52-7,55 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,08-6,11 (d, J = 10,4 Hz, 1H); LCMS para C17H11C F 6N7O [M+H]+ 478,76 encontrado 478,1 (RT 2,64 min, pureza: 1 0 0 %).
Ejemplo de referencia 24: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-cidopropilacrilohidrazida (I-25).
Figure imgf000050_0002
Se cargó un matraz de fondo redondo y 3 cuellos de 100 mL con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (0,50 g.) y CH2Cl2 (25 mL). Se añadió DCC (0,29 g, 1,0 eq.) y la mezcla se enfrió a 0 °C para la adición secuencial de clorhidrato de ciclopropilhidrazina (0,15 g, 1,0 eq.) y DiPEa (0,24 mL, 1,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h antes de verterla en agua (50 mL) y extraerla con CH2Cl2 (2 * 50 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida (25°C, 20 mmHg) para obtener el compuesto crudo. La purificación mediante cromatografía flash combinada (elución con 1,5-2,5% de MeOH en CH2Ch) seguida de purificación adicional en una placa de TLC preparativa (eluyendo con 70% de EtOAc en hexano) proporcionó 15 mg (rendimiento: 2.6%) de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'-ciclopropilacrilohidrazida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6 ) 5 ,9,16 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,23-7,26 (d, J= 10,4 Hz, 1H) ,6,40-6,43 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 3,18-3,20 (m, 1H), 0,83-0,87 (m, 2H), 0,65-0,69 (m, 2H); LCMS para Fórmula química: C16H14F6N5O [M+H]+ 406.31 encontrado 406.19 (RT 2.74 min, pureza: 98.85%).
Ejemplo de referencia 25: Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenN)-1H-1,2,4-triazoM-N)-N-(3-hidroxiazetidin-1-il)acrilamida (I-26).
Figure imgf000050_0003
Síntesis de 1-aminoazetidin-3-ol:
Figure imgf000051_0001
Una solución enfriada (15-20 °C) de clorhidrato de azetidin-3-ol (2,0 g) en agua (20 ml) se trató con NaOH (0,8 g en 10 mL de agua) y la mezcla se agitó a 15-20 °C durante 1 h. A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se trató secuencialmente con una solución de NaNO2 (1,89 g en 10 mL de agua) y ácido acético (1,3 mL). Tras agitar durante 2 h a 0-5 °C, la mezcla de reacción se vertió en agua (20 mL), se acidificó a pH = 2-3 con HCl acuoso diluido y se extrajo con EtOAc (3 x 25 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a presión reducida para obtener 0,26 g del compuesto deseado, que se utilizó como tal en la siguiente etapa (pureza LCMS: 59.84%).
Una solución de 1-nitrosoazetidin-3-ol (0,25 g) en MeOH (15 mL) se enfrió a -75 °C y se trató con HCl acuoso diluido (1,5 mL). A continuación, se añadió zinc en polvo (1,35 g) por partes y la mezcla de reacción se agitó a aproximadamente -70 °C durante 3 h antes de filtrarla a través de Celite® y concentrarla a presión reducida para obtener 90 mg de 1-aminoazetidin-3-ol, que se utilizó como tal en la etapa siguiente.
Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-N-(3-hidroxiazetidin-1 -il)acrilamida.
Se cargó un matraz de 50 mL, de 3 cuellos y fondo redondo con ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrílico (200 mg) y THF (20,0 mL). La solución se enfrió a -60 °C y se trató con una solución de 1-aminoazetidin-3-ol (65 mg, 1,3 eq.) en THF. Se añadieron simultáneamente T3P (50% en EtOAc; 0,67 mL, 2,0 eq.) y DIPEA (0,51 mL, 2,0 eq.) y la mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -60 °C antes de dejar que se calentara a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida (35 °C, 20 mmHg), obteniéndose 100 mg de sólido. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con 3% de MeOH en CH2Cl2) proporcionó 20 mg de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N-(3-hidroxiazetidin-1-il)acrilamida. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 59,60 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,32-7,35 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 6,40 (d, intercambiable, 1H), 5,78-5.81 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,14-4,15 (d, 1H), 3,82 (m, 2H), 3,71 (m, 2H); LCMS para fórmula química C i6Hi4F6N5O2 [M+H]+ 422,31 encontrado; 422,19 (RT 2,46 min, pureza: 91.49%).
EJEMPLOS DE REFERENCIA 26-31: Los Ejemplos de Referencia 26-31 describen procedimientos sintéticos novedosos útiles en la preparación de los compuestos aquí divulgados, incluyendo el compuesto de la invención (por ejemplo, como precursores de dichos compuestos, tales como los compuestos descritos por la Fórmula Z anterior).
Ejemplo de referencia 26.
Figure imgf000051_0002
Síntesis de propiolato de isopropilo:
Figure imgf000051_0003
Un matraz de 20 L, cuatro cuellos, fondo redondo, equipado con embudo de adición, toma de termómetro y un agitador mecánico se cargó con ácido propiólico (1000 g, 1 equiv.) e IPA ( 8 L, 8 Vol.). Se añadió lentamente eterato de BF3 (4,54 kg, 2,0 equiv.) desde un embudo de adición a 25 °C durante 30 minutos. La temperatura de la mezcla de reacción se aumentó gradualmente hasta 90 °C y la masa de reacción se mantuvo a esa temperatura durante 3 horas. La monitorización GC después de 3 h mostró la finalización de la reacción. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se inactivó con 20 Lde agua DM helada y se agitó durante 30 minutos. se añadieron 10 Lde diclorometano a la mezcla de reacción y la masa de reacción se agitó durante otros 30 minutos. La capa orgánica se separó y la acuosa se reextractó con 5 L de diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con 10 L de salmuera saturada, se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron al vacío entre 35 °C y 40 °C (el producto es volátil) para obtener el producto como líquido marrón (1,32 kg, 81,25 %). Pureza 89,67 % (GC); 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 5: 1.22 (d, 6H, J = 6,6 Hz), 2,85 (s, 1H), 4,98-5,05 (m, 1H).
Síntesis de 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo:
Figure imgf000052_0001
Un matraz de 20 L, de cuatro cuellos y fondo redondo, equipado con embudo de adición, toma para termómetro y agitador mecánico, se cargó con éster propiólico isopropílico (1000 g, 1 equiv.) y ácido acético (3,7 L, 3,7 Vol.) a 25 °C y la masa de reacción se agitó durante 10 minutos. Se añadió yoduro sódico (2,138 Kg, 1,6 Vol.) y se agitó la mezcla de reacción (se observó un color marrón oscuro). La temperatura se aumentó a 110 °C y la reacción se mantuvo a esa temperatura durante 1,5 horas. La monitorización porGC mostró la finalización de la reacción después de 1,5 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se inactivó con agua DM helada (18,75 L, 18,75 V) y se agitó durante 30 minutos. Se añadió MTBE (5 L) a la masa de reacción y se agitó durante otros 30 minutos. La capa orgánica se separó y la acuosa se reextractó con MTBE (5 L). La capa orgánica combinada se lavó con NaHCOs ( 2 x 10 L), NaHSO3 (2 x 5 L), solución saturada de salmuera (5,2 L, 5,2 V), se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío a 35 °C para obtener 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo como líquido marrón (1,49 kg, 70 %). Pureza 87,34 % (GC); 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 5: 1.28 (d, 6H, J = 6,3 Hz), 5,08-5,131 (m, 1H), 6,83 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,7 Hz).
Síntesis de 3,5-bis(trifluorometil)benzotiamida:
Figure imgf000052_0002
Se cargó un matraz de 20 L, de varios cuellos, equipado con un agitador superior, y una toma de termómetro con bis(trifluorometil)benzonitrilo (1,25 kg, 1,0 equiv.) y d Mf (6,25 L, 5V), y la mezcla resultante se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente (28 ° C). La mezcla de reacción se enfrió a 10 °C y se añadieron 0,775 g de NaSH.H2O (2 equiv.) durante 10 min. Tras agitar durante 15 minutos, se añadióMgCl2.6H2O (1,169 kg, 1,1 equiv.) por partes durante 15 minutos y la reacción se agitó durante otros 35 minutos. El progreso de la reacción (solución de color verde) se monitorizó mediante HPLC que mostró un 99,6% de producto y un 0,03% de benzonitrilo. La mezcla de reacción se enfrió a 0-5 °C y se diluyó al 30%. Se añadió gota a gota HCl (3,75 L) para ajustar el pH a 2-3. La masa resultante se extrajo con MTBE (5 L x 1). Se separaron las capas y se añadió 1 L de agua DM a la capa acuosa, que se volvió a extraer con MTBE (2,5 L x 1). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (4,5 L x 3), se secaron y se concentraron al vacío. Se añadió hexano al sólido obtenido, se persiguió y se aisló el producto como sólido amarillo (1,400 Kg, 98,0 %). Pureza: 99.28% (HPLC). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 5: 8.27 (s, 1H), 8,53(s, 2H), 10,0 (s, 1H), 10,38 (s, 1H).
Síntesis de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol:
Figure imgf000052_0003
Se cargó un matraz de cuello múltiple de 20 L equipado con un agitador superior y un zócalo para termómetro con tioamida (1378 g, 1 equiv.) y DMF (6,89 L, 5 V), y se agitó la mezcla bajo nitrógeno a temperatura ambiente (28 °C). La masa de reacción se enfrió a 10 °C y se añadió hidrato de hidracina (505,4 g, 2,0 equiv.) gota a gota durante 2 horas con agitación. La masa de reacción se enfrió de 0 °C a 5 °C y se añadió ácido fórmico durante 1 hora (6,89 L, 5V) (se observó exoterma y la temperatura aumentó a 20 °C). A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 95­ 100 °C durante otras 12 horas. El progreso de la reacción se controló mediante HPLC, que mostró la formación de un 99,5% de producto. La masa de reacción se enfrió a 35-40 °C, se añadió a 20,6 L de agua DM previamente enfriada (10-15 °C) y se agitó durante 30 minutos. La masa de reacción se extrajo con MTBE (8,26 L). La capa acuosa se extrajo de nuevo con MTBE (5,512 L) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico al 10% (6,89 L, 2V), salmuera (6,89 L x 3), se secaron con sulfato sódico y se concentraron al vacío. Se añadió diclorometano (2V) al sólido amarillo obtenido y se agitó de 0 a 5 °C durante 1 hora, con lo que, tras filtración, se obtuvo el producto como sólido amarillo (1156 g, 82,2 %). Pureza: 99.7 % (HPLC); 1HRMN (300 MHz, DMSO) 5: 8.15 (s, 1H), 8,55 (s, 2H), 8,79 (s, 1H), 14,5 (s, 1H, NH).
Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato:
Figure imgf000053_0001
Se cargó un matraz de 10 L, cuatro cuellos y fondo redondo, equipado con embudo de adición, toma para termómetro, agitador mecánico y tapón, con 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (600 g, 1,0 eq.), DABc O (480 g, 2,0 eq.) y DMF (3,0 L). La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos. Después de 30 minutos, se añadió gota a gota una solución de ésterdeyodo (1024,8 g, 2,0 eq) en DMF (1200 mL) durante 1 hora. El progreso de la reacción se monitorizó mediante HPLC y mostró 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo: 62.36% y 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol: 15.1%. Después de 1 hora más, se añadió un equivalente de DABCO (258 g) y la reacción se mantuvo durante otra hora. El análisis HPLC mostró la conversión como 75,63% de (Z)-isopropil 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato y 2% de 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol. La mezcla de reacción se inactivó con agua DM fría (12 L), se agitó durante 15 minutos y se extrajo con acetato de etilo ( 2 x 6 L). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución saturada de salmuera (30%, 2 x 3 L), se secaron sobre sulfato sódico anhidro (100 g) y se concentraron. La masa bruta (840 g) se llevó a un matraz de fondo redondo de 10 L y se añadió metanol (1200 mL). La solución se mantuvo a 0-5 °C y se agitó durante 30 minutos. El sólido obtenido se filtró y se lavó con metanol (200 mL), con lo que se obtuvo el producto como sólido blanco (550 g, 65,0 %). Pureza: 87.34 % (HPLC); 1HRMN (300 MHz, CDCls) 5: 1.30 (d, 6H, J = 6,0 Hz), 5,12 (m, 1H), 5,73 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,91 (s, 1H), 8,58 (s, 2H), 9,70 (s, 1H). Cis-isómero: La proporción de isómeros trans es de 83:8.
Síntesis del ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico:
Figure imgf000053_0002
Se cargó un matraz de 5 L, cuatro cuellos, fondo redondo, equipado con embudo de adición, toma para termómetro, agitador mecánico y tapón con THF (1,25 L) y 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo (125 g, 1 eq.) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C. A la solución agitada se añadió solución helada de hidróxido de litio (66,58 g en 1,25 L de agua) durante 30 minutos a través de un embudo de adición. La temperatura de reacción se elevó lentamente a 25 °C y la masa de reacción se mantuvo a esa temperatura durante 2 horas. El control por HPLC mostró el siguiente estado: ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico: 87.66%; ácido (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico: 9.91%, (Z)-isopropil 3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato 2%. La reacción se continuó durante otros 30 minutos y se sometió a control por HPLC de ácido ((Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico: 88.20%; ácido (E)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico: 11.03%. Una vez completada la reacción, la mezcla se inactivó con agua helada (385 mL) y se agitó durante 30 minutos. El pH se ajustó a 1-2 con ácido clorhídrico diluido (30%, 400 mL) y la masa de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 625 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución saturada de salmuera (30%, 650 mL), se secaron sobre sulfato sódico anhidro (12,5 g) y se concentraron a presión reducida a 30-35 °C. Se añadió hexano al material crudo y se agitó durante 30 minutos. Se añadió hexano al material crudo y se agitó durante 30 minutos. Los sólidos obtenidos se filtraron a través de un embudo Buchnery se lavaron con hexano (250 mL). El sólido obtenido se secó durante 30 minutos al vacío y a temperatura ambiente durante 3-4 horas. El producto se aisló como polvo blanco (92,8 g, 84,36%). Pureza: 93% (HPLC); 1HRMN (300 MHz, DMSO-d6) 5: 5.98 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 8,2 (s, 1H), 8,50-8,54 (m, 2H), 9,39 (s, 1H).
Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1-(3,3-difluoroazetidin-1-il)prop-2-en-1-ona:
Figure imgf000054_0001
A un matraz de fondo redondo de 3 L y cuatro cuellos equipado con entrada de nitrógeno, embudo de adición, toma de termómetro y agitador mecánico se añadió ácido (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrílico (100 g, 1,0 eq.) en DCM (1,8 L, 18 V). La mezcla de reacción se enfrió a -10 °C. A la solución enfriada se añadieron HOBT (4,4 g, 0,1 eq.), EDC-HCl (80,6 g, 1,5 eq.) y clorhidrato de 3,3-difluoroazetidina (44 g, 1,2 eq.). A la mezcla resultante a -10 °C, se añadió DIPEA (72 mL, 1,5 eq) gota a gota durante 1,5 horas. El progreso de la reacción se monitorizó mediante análisis HPLC que mostró la finalización de la reacción al final de la adición de DIPEA. La temperatura de reacción se elevó lentamente de 15 °C a 20 °C (~ 2h). La mezcla de reacción se inactivó con 1 L de suspensión de hielo y agua. La capa orgánica se separó y la acuosa se extrajo con DCM (400 mL x 2). La capa orgánica se lavó con solución saturada de salmuera (2 x 500 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro (10 g)y se concentró a presión reducida (~35 °C) para obtener el compuesto crudo. El compuesto crudo así obtenido se disolvió en 5 vol. de DIPE, se agitó a rt durante 30 min. y se filtró. El peso crudo fue de 100 g (rendimiento = 82,39 %) [Cis-85,07% por HPLC, Trans-14,36% por HPLC].
El compuesto crudo así obtenido se purificó adicionalmente por recristalización con acetato de etilo según el procedimiento siguiente. A un matraz de 500 ml, cuatro cuellos, fondo redondo, equipado con agitador mecánico, termómetro y tapón, se añadieron 100 g de (Z)-3 -(3 -(3,5 -bi s(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)-1 -(3,3 -difluoroazetidin-1 - il)prop-2-en-1-ona. A este compuesto a rt se le añadió acetato de etilo (7 volúmenes) bajo agitación. Sin embargo, el compuesto no era completamente soluble. Por lo tanto, la solución resultante se calentó a 60 oC para obtener una solución clara y luego se enfrió lentamente a -30 oC. A -30 oC, la solución se agitó durante 20 min. y se filtró bajo succión. El compuesto obtenido se secó al vacío a 40-45 °C durante 3 h - 4 h para obtener el producto como un sólido blanco. (Cis-98.9% por HPLC); (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1-(3,3-difluoroazetidin-1-il)prop-2-en-1-ona. 1HRMN (300 MHz, CDCls) 59,57(s, 1H), 8,56(s, 2H), 7,90 (s, 1H), 7,18-7,21 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,61-5,65 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,39-4,45(m, 4H).
Ejemplo de referencia 27.
Síntesis del ácido (Z)-3-yodoacrílico:
O
Figure imgf000054_0002
o
En un matraz de 250 mL, de tres cuellos y fondo redondo, equipado con entrada de nitrógeno, se añadió ácido propiólico (7,0 g, 1,0 eq) disuelto en ácido acético (70 mL, 10V) y yoduro sódico (29,96 g, 2,0 eq). La mezcla de reacción se sometió a reflujo a 1000 C durante 2-3 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC sobre gel de sílice con MeOH:DCM al 10% como fase móvil. SM Rf =0,3 y Producto Rf = 0,5. La mezcla de reacción se vertió en agua helada (700 mL) y se neutralizó con solución saturada de bicarbonato sódico. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de salmuera (3 x 100 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron por evaporación rotatoria (25 °C, 20 mmHg) para obtener 12,0 g de compuesto crudo que se purificó por cromatografía en columna utilizando sílice 60/120 con MeOH:DCM como fase móvil. La columna ( 5x10 cm) se empaquetó en DCM y comenzó a eluiren MeOH en gradiente comenzando con la recogida de fracciones (fracciones de 50 ml) de 2% a 5% de MeOH en DCM. El compuesto comenzó a eluir con MeOH al 2% en DCM. Las fracciones que contenían dicho perfil de TLC se combinaron para obtener 8,0 gm del compuesto deseado (rendimiento 40,44%).
Síntesis de (Z)-1-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-3-yiiodoprop-2-en-1-ona:
Figure imgf000054_0003
En un matraz de 25 mL, de tres cuellos y fondo redondo, equipado con entrada de nitrógeno y septo de goma, se disolvió ácido (Z)-3-yodoacrílico (0,250 g, 1,0 eq.) en DCM (10 mL,40 V). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadieron DIPEA (0,168 g, 1,1 eq), HATU (0,494 g, 1,1 eq) y clorhidrato de 3,3-difluoroazetidina (0,179 g, 1,1). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2-3 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC sobre gel de sílice con acetato de etilo al 40% en hexano. La mezcla de reacción se filtró y se concentró por evaporación rotatoria (25 °C, 20 mmHg) para obtener 0,3 g de compuesto crudo que se purificó por cromatografía en columna utilizando sílice 60/120 con acetato de etilo al 40% en hexano como fase móvil. La columna ( 5x10 cm) se empaquetó en acetato de etilo al 5% en hexano y se empezó a eluir en acetato de etilo en gradiente empezando con la recogida de fracciones (fracciones de 50 ml) del 20% al 30% de acetato de etilo en hexano. El compuesto comenzó a eluir con acetato de etilo al 20% en hexano. Las fracciones que contenían dicho perfil de TLC se combinaron para obtener 0,18 g del compuesto deseado (rendimiento 52,33%). Masa:[M+H]+ :273,8.
Síntesis de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-1-(3,3-difluoroazetidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona:
Figure imgf000055_0001
En un matraz de 25 mL, de tres cuellos y fondo redondo equipado con entrada de nitrógeno, se disolvió 3-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (0,18 g, 1,0 eq.) se disolvió en DMF (5,0 mL, 27,0 V), y se añadieron Da BCo (0,143 g, 2,0 eq) y (Z)-1-(3,3-difluoroazetidin-1-il)-3-iodoprop-2-en-1-ona (0,192 g,1,1 eq). La mezcla de reacción se agitó a RT durante 2-3 h. El progreso de la reacción se siguió mediante análisis TLC sobre gel de sílice con acetato de etilo-hexano al 80% como fase móvil, SM Rf =0,60 y Producto Rf = 0,4. La mezcla de reacción se vertió en agua helada (50 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 25 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución de salmuera (3 x 25 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron por evaporación rotatoria (25 °C, 20 mmHg) para obtener 0,3 g de compuesto crudo que se purificó por cromatografía en columna usando sílice 60/120 utilizando acetato de etilo:hexano como fase móvil. La columna ( 5 x 10 cm) se empaquetó en hexano y se comenzó a eluir en acetato de etilo en gradiente comenzando con la recogida de fracciones (fracciones de 50 ml) de 40% a 45% de acetato de etilo en hexano. El compuesto comenzó a eluir con acetato de etilo al 40% en hexano. Las fracciones que contenían dicho perfil de TLC se combinaron para obtener 70 mg del compuesto deseado (rendimiento 25,64%).
Ejemplo de referencia 28. Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(3-isopropoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato:
Figure imgf000055_0002
Síntesis de propiolato de isopropilo. A una mezcla de ácido propiólico (500 g, 7,1 moles) en isopropanol (4000 mL) se añadió éterato de BF3 (2015 g ,14,2 moles) a 10 °C. Después de agitar durante 10 minutos, la mezcla de reacción se calentó a 90 °C y se agitó durante 2 horas. La finalización de la reacción se controló mediante TLC. La mezcla de reacción se redujo a 25-30 °C y se inactivó con hielo picado, tras lo cual se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con agua y después con solución de salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío para dar propiolato de isopropilo (440 g; 55%). El producto se confirmó por 1H RMN.
Síntesis de 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo. A una mezcla de propiolato de isopropilo (350 g, 3,1 moles ) en AcOH (1300 mL) se añadió Nal (930 g, 6,2 moles) a 25 °C. La mezcla de reacción se calentó a 115 °C y se agitó durante 1,5 h. La mezcla de reacción se enfrió a 25-30 °C y se inactivó con agua seguida de extracción con MTBE. La capa orgánica se lavó con bicarbonato saturado, bisulfito y solución de salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío para dar el producto 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo (626 g; 83,5%). El producto se confirmó por 1H RMN.
Síntesis de 3-isopropoxi-5-(trifluorometil)benzonitrilo:
Figure imgf000056_0001
A una mezcla de propan-2-ol (102,96 g, 1,76 moles) en DMF (3200 mL, 8 V) a 5 °C se añadió NaH (122 g, 5,08 moles). La mezcla se agitó durante 2 horas. A esta mezcla se añadió gota a gota 3-fluoro-5-(trifluorometil)benzonitiilo (400, 2,1 moles). La temperatura de la masa se aumentó a 25-30 °C y se mantuvo a la misma temperatura durante 1 hora. La reacción se controló por HPLC. Una vez completada, la mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa de acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío para dar 530 g (2,31 moles; 110 %) de 3-isopropoxi-5-(trifluorometil)benzonitrilo, que se tomó como tal para la etapa siguiente sin purificación adicional. Pureza HPLC - 96,5 % por área (a/a).
Síntesis de 3-isopropoxi-5-(trifluorometil)benzotioamida:
Figure imgf000056_0002
Se disolvió 3-Isopropoxi-5-(trifluorometil)benzonitrilo (1000 g, 4,3 moles) en DMF (4000 mL) y se añadió hidrato de hidrogensulfuro de sodio (636 g;8,6 moles) seguido de cloruro de magnesio hexahidratado (960,2 g, 4,7 moles). La mezcla de reacción se agitó durante 1 h entre 25 y 30 °C. La finalización de la reacción se monitorizó mediante TLC usando acetato de etilo:hexano (2:8) como fase móvil. La mezcla de reacción se inactivó en una suspensión de hielo y agua (250 mL) y el pH se ajustó a 5 por adición de HCl acuoso al 10%. La mezcla de reacción se extrajo con MTBE y se lavó con una solución de salmuera al 20%. La capa orgánica se concentró al vacío para dar 1136 g (4,3 moles; 100%) del compuesto del título, que se tomó como tal para la etapa siguiente. Pureza HPLC - 97,37 % a/a.
Síntesis de 3-(3-isopropoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol:
Figure imgf000056_0003
3-Isopropoxi-5-(trifluorometil)benzotiamida (646 g; 2,74 moles) se combinó con hidrato de hidrazina (140 g; 4,4 moles) y DMF (3200 mL; 5V). La mezcla se agitó durante 30 minutos y se enfrió a 10 °C. A esta mezcla de reacción se añadió ácido fórmico (3200 mL) gota a gota. La mezcla de reacción se calentó hasta 90-100 °C y se mantuvo durante 12 horas. Una vez completada la reacción por HPLC, la masa de reacción se enfrió hasta 25-30 °C y se inactivó con agua helada. La mezcla se extrajo en MTBE. La capa orgánica se lavó con salmuera seguida de bicarbonato sódico acuoso, y se concentró al vacío. El residuo se eliminó con hexano, el residuo resultante se tamizó a 10 °C durante 1 hora. El sólido obtenido se filtró y se secó durante 12 horas entre 25 y 30 °C para obtener 550 g (2,26 moles: 82 %) del producto 3-(3-metoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol. Pureza HPLC - 95,24 % a/a.
Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(3-isopropoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato:
Figure imgf000057_0001
Una mezcla de 3-(3-metoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (500 g,1,8 moles) y DABCO (417,6 g; 3,6 moles) en DMF (1200 mL) se agitó durante 30 minutos. A esta mezcla se añadió (Z)-isopropil 3-yodoacrilato (864 g; 3,6 moles) en d Mf (1200 mL) lentamente a 25-30 °C y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. Tras 1 hora, se añadió DABCO (208 g; 1 eq) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. El análisis por HPLC mostró 3-(3-metoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol 9,59%, 3-(3-(3-isopropoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato de (Z)-isopropilo: 73.76%, (E)-isopropil 3-(3-(3-isopropoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)acrilato: 6.6 6 %. La masa de reacción se inactivó con agua, se extrajo con diclorometano y se concentró al vacío para obtener el producto crudo. El producto crudo se sometió a cromatografía utilizando un sistema de acetato de etilo-hexano en gel de sílice 60-120 para dar 310 g (0,8 moles; 44%). Pureza HPLC - 99% a/a.
Ejemplo de referencia 29. Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(3-metoxi-5-(trifluorometil)feml)-1H-1,2,4-triazoM-il)acrilato:
Figure imgf000057_0002
A una solución de 3-(3-metoxi-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol (0,50g) (preparada según el Ejemplo 3) en DMF (1,5 mL) se añadió DABCO (2 equiv). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y, a continuación, se añadió 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo (2,0 equiv; preparado según el Ejemplo 3). La mezcla resultante se agitó a rt durante 3 horas. La mezcla de reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con acetato de etilo (3 veces). Las capas orgánicas se separaron y la capa orgánica combinada se secó sobre sulfato sódico anhidro. Los análisis LC-MS y HPLC revelaron un 62% de isómero cis y un 36% de isómero trans. 1HRMN (400 MHz, CDCls) 5: 9.72(s, 1H), 8,02(s, 1H), 7,86(s, 1H), 7,30(s, 1H), 7,28(d, J =8 ,8 Hz, 1H), 5,71-5,73(d, J =10,8Hz, 1H), 5,12-5,18(m, 1H), 3,94(s, 3H), 1,34(d, 6 H ): LCMS para C16H16F3N3O3 [M+1]+ 355.31 encontrado 355.92 a 4.317 min (LCMS 99.82%).
Ejemplo de referencia 30. Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(2-cloro-6-isopropoxipiridm-4-N)-1H-1,2,4-triazoM-il)acrilato:
Figure imgf000057_0003
A 2-cloro-6-isopropoxi-4-(1H-1,2,4-triazol-3-il)piridina (0,5 g) (preparada como en el Ejemplo 3) en 3 mL de DMF, se añadió DABCO (0,467 g, 2 equiv) y la mezcla resultante se agitó durante 30 min. Se añadió una solución de 3­ yodoacrilato de (Z)-isopropilo (0,990 g, 2 equiv) (preparada como en el Ejemplo 3) a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se elaboró como en el Ejemplo 3, para obtener un 53% de isómero cis y un 34% de isómero trans.
Ejemplo de referencia 31. Síntesis de (Z)-isopropil 3-(3-(ciclobutilamino)-5-(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1 -il)acrilato:
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A N-cidobutil-3-(1H-1,2,4-triazol-3-il)-5-(trifluorometil)anilina (0,5g) (preparada como en el Ejemplo 3) en 1,5 mL de DMF, se añadió DABCO (0,188g) y la mezcla resultante se agitó durante 30 min. Se añadió una solución de 3-yodoacrilato de (Z)-isopropilo (0,404 g) (preparada como en el Ejemplo 3) a la mezcla de reacción, y la mezcla resultante se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se elaboró como en el Ejemplo 3, para obtener un 44% de isómero cis y un 20% de isómero trans.
Ejemplo 32: Ensayos. Los compuestos ejemplares aquí divulgados, incluido el compuesto de la invención, se probaron en paralelo con los compuestos de referencia X-1, X2 y X-3 (representados en la Tabla 2), en diversos ensayos. Los resultados figuran en la Tabla 2.
Inhibición de la exportación nuclear
La capacidad de los compuestos ejemplares aquí descritos para inhibir la exportación nuclear mediada por CRM1 se evaluó en un ensayo RevGFP. Rev es una proteína del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y contiene una señal de exportación nuclear (NES) en su dominio C-terminal y una señal de localización nuclear (NLS) en su dominio N-terminal. La exportación nuclear de la proteína Rev depende de la vía clásica NES/CRM1 (Neville et al.
1997). La acumulación nuclear de Rev puede observarse en células tratadas con inhibidores específicos de CRM1, como LMB (Kau et al. 2003).
En este ensayo, las células U2OS-RevGFP se sembraron en placas de fondo transparente, negras, de 384 pocillos el día anterior al experimento. Los compuestos se diluyeron en serie 1:2 en DMEM, a partir de 40 μM en una placa separada de 384 pocillos, y luego se transfirieron a las células. Las células se incubaron con el compuesto durante aproximadamente 1 hora antes de la fijación con formaldehído al 3,7% y la tinción de los núcleos con Hoechst 33258. Se midió la cantidad de GFP en los núcleos celulares y se determinó la IC5o de cada compuesto (Kau et al. 2003). Los compuestos descritos en el presente documento se consideran activos en el ensayo Rev-GFP descrito anteriormente si tienen una IC50 de menos de aproximadamente 10 μM, siendo los compuestos más preferidos los que tienen una IC50 de menos de aproximadamente 1 μM. Los resultados del ensayo RevGFP aparecen en la Tabla 2.
Ensayo de proliferación celular
Se utilizó el ensayo de proliferación celular CellTiter96® AQueous One Solution (Promega) en MM. 1S línea celular de mieloma múltiple para estudiar las propiedades citotóxicas y citostáticas de los compuestos. El ensayo se basa en la escisión de la sal de tetrazolio, MTS, en presencia de un reactivo de acoplamiento de electrones PES (etosulfato de fenazina). Las células biorreducen el compuesto de tetrazolio MTS en un producto de formazán coloreado que es soluble en el medio de cultivo tisular. Esta conversión se realiza presumiblemente mediante NADPH o NADH producidos por enzimas deshidrogenasas en células metabólicamente activas. Los ensayos se realizan añadiendo una pequeña cantidad del reactivo CellTiter96® AQueous One solution directamente a los pocillos de cultivo, incubando durante 1-4 horas y registrando a continuación la absorbancia a 490 nm con un lector de placas de 96 pocillos. La absorbancia revelada se correlaciona directamente con el número de células y su actividad metabólica.
Las células se sembraron a razón de 5x103 a 1.5x104 células en cada pocillo de una placa de 96 pocillos en 100 μL de medio de cultivo fresco y se dejó que las células adherentes se fijaran durante la noche. Las soluciones madre de los compuestos se diluyeron en medio de cultivo celular para obtener ocho concentraciones de cada fármaco, que oscilaban entre 1 nM y 30 μM, y se utilizó DMSO a menos del 1% v/vcomo control negativo. Las soluciones de fármaco resultantes se transfirieron a las células. Tras 72 h de tratamiento, se añadieron 20 μl de reactivo CellTiter96® AQueous en cada pocillo de las placas de ensayo de 96 pocillos y se incubó la placa a 37°C durante 1-4 horas en una atmósfera humidificada con un 5% de CO2. A continuación, se registró la absorbancia de cada pocillo a 490 nm utilizando un lector de placas de 96 pocillos. En la mayoría de los casos, el ensayo se realizó por triplicado y los resultados se presentaron como media concentración máxima inhibitoria (IC50). La densidad óptica frente a la concentración del compuesto se trazó y analizó mediante ecuaciones de regresión no lineal (IDBS XLfit) y se calculó la IC50 para cada compuesto.
Ensayo farmacocinético (PK) y determinación de la relación cerebro:plasma
AUC. Se recogió sangre de ratones (N = 3) para contribuir al total de 10 puntos temporales (predosis, 5 min, 15 min, 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas postdosis). Los ratones fueron sangrados de forma rotatoria, contribuyendo cada ratón con 3 puntos temporales a la extracción de sangre. En los puntos temporales designados, se anestesió a los animales con isoflurano y se recogieron aproximadamente 110 μl de sangre por punto temporal mediante punción retroorbital en tubos de K2e DtA (anticoagulante) previamente enfriados. Las muestras de sangre se colocaron en hielo húm edo y se centrifugaron (2000 g, 5 min a 4 °C) para obtener plasm a en los 30 minutos siguientes a la recogida de la m uestra. Todas las m uestras se alm acenaron congeladas a aproxim adam ente -80 °C hasta su análisis. Antes del análisis, las m uestras se m ezclaron con el patrón interno (dexam etasona) en acetonitrilo, se agitaron en vórtex, se centrifugaron y se inyectó el sobrenadante para el análisis. La concentración de com puestos en plasm a se determ inó m ediante instrumentación L C -M S -M S (API 4000, Triple Q uadruple con ionización por electrospray; colum na de crom atografía líquida Acuity Ultra Perform ance C18, con M eO H y ácido fórmico como disolventes orgánicos). Los valores A U C se calcularon utilizando el paquete informático W inNonlin Professional 6.2, modelo farm acocinético no com partim ental N C A 200.
Relación cerebro a plasma (B:P). Se administró una dosis a otro grupo de ratones (N = 3) (P O a 10 m g/kg) y se sacrificaron en el m om ento de m áxim a concentración plasm ática (Tmáx estim ada a las 2 horas tras la dosis), mom ento en el que se recogió plasm a term inal y tejido cerebral. Tras la recogida, el tejido cerebral se enjuagó con solución salina fría, se secó en papel de filtro, se pesó y se congeló inm ediatam ente colocándolo en hielo seco. Todas las m uestras se alm acenaron congeladas a aproxim adam ente -80 °C hasta su análisis. En el m om ento del análisis, el tejido cerebral se hom ogeneizó (solución hom ogeneizante PBS, pH 7,4), se m ezcló con el patrón interno (dexam etasona) en acetonitrilo, se agitó en vórtex, se centrifugó y se inyectó el sobrenadante para analizar la concentración de com puestos m ediante la m etodología L C -M S -M S (API 4000, Triple Q uadruple con ionización por electrospray; colum na de crom atografía líquida Acuity Ultra Perform ance C18, con M eO H y ácido fórmico como disolventes orgánicos). Las m uestras de plasm a se trataron con el mismo procedimiento (excepto la etapa de hom ogeneización) y la concentración del com puesto en cada m atriz se calculó a partir de las curvas estándar generadas. Los resultados del ensayo P K y de la determ inación de la relación B:P se presentan en la Tabla 2.
Tabla 2. Resultados de ensayo para com puestos de fórmula I y sus com paradores (A = valor IC 5o de <=1 ^M; B = valor IC50 de 1-10 ^M; C = valor IC50 de >10 ^M; Nt = no ensayado).
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continuación
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continuación
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continuación
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La AUCInf para el compuesto X-1 estuvo por debajo del límite de detección cuando se dosificó en ratones a 10 mg/kg po. Cuando se dosificó a 5 mg/kg iv, el compuesto X-1 mostró una exposición mínima, como indica la baja AUCInfde 209 hr-ng/mL. No se determinó la relación cerebro/plasma para el compuesto X-1 debido a sus niveles de exposición insignificantes cuando se dosifica po.
El AUCinf para el compuesto X-2 se calculó en 68.3 hr-ng/mL cuando se dosificó en ratas a 10 mg/kg po. Tales niveles de exposición son excesivamente bajos en comparación con el compuesto X-3 y el compuesto de la presente invención. Sin embargo, el compuesto X-2 presenta una relación cerebro/plasma moderada. La baja AUCInf junto con una relación cerebro/plasma no despreciable sugiere que el compuesto X-2 puede atravesar la BBB a pesar de los bajos niveles de exposición. Se cree que el compuesto X-2 tendría una relación cerebro/plasma significativamente mayor si se aumentara su AUCinf.
El AUCinf para el compuesto X-3 se calculó en 12300 hr-ng/mL cuando se dosificó en ratas a 10 mg/kg po, lo que indica una buena exposición. Sin embargo, el compuesto X-3 mostró una elevada relación B:P de 5,0.
Los compuestos de Fórmula I se caracterizan por una AUCInf superior a aproximadamente 3300 hr-ng/mL, en la mayoría de los casos superior a aproximadamente 3500 hr-ng/mL, y una relación B:P relativamente baja (<2,5). En general, los mayores niveles de exposición a un agente terapéutico aumentan la probabilidad de penetración cerebral. Por lo tanto, resulta sorprendente e inesperado que los compuestos de fórmula I presenten niveles elevados de AUCinf y proporciones relativamente bajas de cerebro a plasma.
Actividad in vivo e in vitro de compuestos contra el cáncer de mama
Los cánceres de mama de tipo basal (BLBC) componen hasta el 15% de los cánceres de mama (BC) y suelen ser cáncer de mama triple negativo (TNBC) y se caracterizan por la ausencia de ER, receptor de progesterona PR y amplificación de h Er -2. Además, la mayoría de los BC asociados a BRCA1 son BLBC y TNBC, y expresan citoqueratinas basales y EGFR. El BLBC se caracteriza por un fenotipo agresivo, alto grado histológico y malos resultados clínicos con altas tasas de recurrencia y metástasis. Se necesitan terapias adicionales. La actividad de los compuestos aquí divulgados, por ejemplo, el Compuesto de Referencia 1-3 se evaluó en varias líneas celulares de cáncer de mama tanto in vitro como in vivo.
Inhibición de xenoinjertos de TNBC (cáncer de mama triple negativo) in vivo
Las células de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-468 (ATCC#HTB-132) se obtuvieron de ATCC. Estas células se cultivaron en medio L-15 de Leibovitz suplementado con 10% de suero fetal de ternera (FCS), 1% de penicilina y estreptomicina, y 2mM de L-glutamina. Las células se subcultivaron por dilución en una proporción de 1:3. Se utilizaron cincuenta (50) ratones SCID hembra (Charles River Labs), de 5 a 6 semanas de edad, con un peso corporal medio antes del tratamiento de 19,2 gramos. Los ratones SCID fueron inoculados s.c. en el flanco izquierdo con 5 x 106 células MDA-MB-468. Cuando los tumores alcanzaron un tamaño medio de entre 100 y 200mm3, los ratones se dividieron de forma aleatoria y prospectiva en un grupo de control con vehículo de diez (10) ratones y cinco grupos de tratamiento de ocho (8) ratones por grupo. Los grupos eran los siguientes:
Vehículo (1% Pluronic, 1% PVP en agua destilada)
5 FU 50mg/kg
Referencia Compuesto I-35mg/kg Lunes (M), Miércoles (W), Viernes (F)
Compuesto de referencia I-315 mg/kg, M, W, F
Compuesto de referencia I-325 mg/kg M, W, F
Compuesto de referencia 1-325 mg/kg M, jueves (Th).
Todas las administraciones se realizaron por vía oral. Los animales fueron alimentados con pienso estéril para roedores Labdiet® 5053 (preesterilizado) y se les suministró agua estéril ad libitum. Los tumores se midieron una vez cada dos días con microcalibradores, y el volumen tumoral se calculó como (longitud * anchura * anchura)/2. Todos los animales fueron pesados cada día para evaluar las diferencias de peso entre los grupos de tratamiento y controlar el bienestar de los animales. Todos los animales que presentaban una pérdida superior al 20% del peso inicial durante el transcurso del estudio fueron sometidos a eutanasia. Los animales con un tumor de más de 1.500 mm3 de volumen también fueron sometidos a eutanasia. La supervivencia se registró diariamente. Las soluciones dosificadoras se prepararon frescas cada día. El compuesto de referencia I-3 se suministró en forma de polvo liofilizado que contenía un 67,8% de producto farmacológico y el resto estaba compuesto por Pluronic F-68 y PVP K29/32. Se preparó disolviendo el polvo liofilizado a razón de 6,64 mg/90 μL en agua estéril, y diluyendo según fuera necesario en vehículo (1% Pluronic F-68 y 1% PVP K29/32) en agua estéril. Todas las soluciones de dosificación del Compuesto de Referencia I-3 se dosificaron a 0,1 mL/10 g. Las diferencias estadísticas entre los grupos de tratamiento se determinaron mediante las pruebas de Mann-Whitney Rank Sum o ANOVA con un valor crítico de 0,05.
En el día 33 post inoculación, los tumores fueron extirpados. FIG. 1 es un gráfico del volumen tumoral en función del tiempo y muestra que el Compuesto de Referencia I-3 mostró eficacia de forma dependiente de la dosis, inhibiendo desde aproximadamente el 60% (5 mg/kg lunes, miércoles, viernes) hasta casi el 100% del crecimiento tumoral (para el régimen de 25 mg/kg lunes, jueves) en comparación con los animales tratados con vehículo. Además, el Compuesto de Referencia I-3 fue bien tolerado.
Tras la escisión, los tumores también fueron teñidos para las proteínas supresoras de tumores (TSPs) FOXO3a, IkB, y p27, y la localización nuclear de las TSPs fue confirmada por inmunohistoquímica.
Inhibición de la proliferación y la citotoxicidad en las líneas celulares TNBC y Luminal BC
Se utilizó el ensayo de proliferación celular CellTiter 96® AQueous One Solution (Promega) para estudiar las propiedades citotóxicas y citostáticas del Compuesto de Referencia I-3 en varias líneas celulares TNBC y luminal BC.
Las células se sembraron DE 5*103 a 1.5*104 células (dependiendo del tipo de célula) en cada pocillo de una placa de 96 pocillos en 100 μL de medio de cultivo fresco y se dejó que las células adherentes se fijaran durante la noche. Las soluciones madre de los compuestos se diluyeron en medio de cultivo celular para obtener ocho concentraciones de cada fármaco, que oscilaban entre 1 nM y 30 μM, y se utilizó DMSO a menos del 1% v/v como control negativo. Las soluciones de fármaco resultantes se transfirieron a las células. Tras 72 h de tratamiento, se añadieron 20 μl de reactivo CellTiter96® AQueous en cada pocillo de las placas de ensayo de 96 pocillos y se incubó la placa a 37°C durante 1-4 horas en una atmósfera humidificada con un 5% de CO2 . A continuación, se registró la absorbancia de cada pocillo a 490 nm utilizando un lector de placas de 96 pocillos. En la mayoría de los casos, el ensayo se realizó por triplicado y los resultados se presentaron como media concentración máxima inhibitoria (IC50). Se trazó y analizó la densidad óptica frente a la concentración del compuesto mediante ecuaciones de regresión no lineal (Excel Fit) y se calculó la IC50 de cada línea celular frente al CompuestoI-3.
Los resultados del ensayo de proliferación celular se muestran en la Tabla 3. Los resultados demuestran la potente citotoxicidad del compuesto de referencia I-3 sobre nueve de las quince líneas celulares de BC ensayadas. El compuesto se consideró potente en una línea celular si tenía un valor IC50 inferior a 1,0 μM aproximadamente. Las líneas celulares en las que el Compuesto de Referencia I-3 tenía un valor IC50 inferior a 1,0 μM se consideraron líneas celulares sensibles, mientras que las líneas celulares en las que el Compuesto de Referencia I-3 tenía un valor IC50 superior a 1,0 μM se consideraron líneas celulares resistentes. Siete de las nueve líneas celulares sensibles eran TNBC. Los análisis genómicos de todas las líneas de BC indicaron que los estados de p53, PI3K/AKT y BRCA1 o 2 no afectaban a la citotoxicidad.
Tabla 3. Valores IC50 para el Compuesto de Referencia I-3 en varias líneas celulares de cáncer de mama.
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El compuesto de referencia 1-3 induce la apoptosis e inhibe el crecimiento del BC a largo plazo
Se evaluó la capacidad del Com puesto de Referencia I-3 para inducir apoptosis e inhibir el crecimiento a largo plazo de líneas celulares de BC seleccionadas.
Las células M D A -M B -468 TN B C , D U 4475 y H S 578 T T N B C se expusieron a concentraciones del Com puesto de Referencia I-3 que oscilaban entre 0 y 10 μM durante 24 horas. Después de 24 horas, los extractos celulares de proteínas enteras se corrieron en inm unotransferencias y se expusieron a anticuerpos contra las proteínas indicadas en las F IG S. 2A-2C .
Las F IG S. 2A -2C son im ágenes de inm unotransferencias obtenidas de algunas de las líneas celulares de cáncer de m am a m ás resistentes y m ás sensibles descritas anteriorm ente, incluyendo M D A -M B -468 TN B C , D U 4475 y H S 578T TN B C . El estudio muestra que el Com puesto de R eferencia I-3 induce la apoptosis en las líneas celulares TN B C sensible y BC luminal (M D A -M B -468 y D U 4475, respectivam ente) después de 24 horas, como indica la disminución de PARP y caspasa 3, dos m arcadores de apoptosis, y el aum ento de PARP escindida y caspasa 3 escindida. Por el contrario, sólo se observó un aum ento insignificante de PARP escindida y caspasa 3 escindida cuando se trató una línea celular resistente, HS578T, con el Com puesto de Referencia I-3.
Tam bién se realizaron ensayos de crecimiento a largo plazo, en los que las células M D A -M B -468, M D A -M B -231 y H S 578 T se trataron con 1 μM del Com puesto de Referencia I-3 y se incubaron durante 7 (H S 578 T ) o 10 (M D A -M B -468 y M D A -M B -231) días. Al final del ensayo, se retiró el medio de las células y las células restantes se tiñeron con violeta cristal. El estudio dem ostró que el com puesto de referencia I-3 inhibía el crecimiento a largo plazo de las tres líneas celulares, incluidas las líneas celulares de BC sensibles (M D A -M B -468 y M D A -M B -231) y resistentes (H S 578T ). El compuesto de referencia 1-3 aumenta FOXO3a nuclear e IkB en líneas celulares TNBC
Las células M D A -M B -468 TN B C Basal A y BT-20 TN B C Basal B fueron expuestas a D M S O o 1 μM de Com puesto de Referencia I-3 durante 24 horas y luego teñidas para F O X O 3 a o IkB con o sin tinción nuclear DAPI. S e exam inó la localización nuclear de las células teñidas. Tras el tratam iento con el com puesto de referencia I-3, tanto F O X O 3a como IkB se localizaron en el núcleo celular, m ientras que en las células tratadas con D M S O , tanto F O X O 3 a como IkB se localizaron en el citoplasma.
Efecto del compuesto de referencia 1-3 sobre la antiapoptosis y las proteínas del ciclo celular en dos líneas de TNBC
Se exam inó el efecto de concentraciones crecientes del Com puesto de R eferencia I-3 en células M D A -M B -468 y H S 578 T Las células M D A -M B -468 y H S 578 T se expusieron a concentraciones crecientes del Com puesto de Referencia I-3 durante 24 horas y los niveles totales de proteínas celulares de varias proteínas se sondearon con anticuerpos contra las proteínas indicadas en la FIG . 3.
La FIG. 3 muestra que, a pesar de la diferencia de aproxim adam ente 100 veces en la IC 50 del Com puesto de Referencia I-3 en las dos líneas celulares después de 72 horas (10nM frente a 1,5μM ), se observa una reducción de M CL-1 en am bas líneas celulares en respuesta a concentraciones crecientes del Com puesto de R eferencia I-3. Los experim entos descritos en el Ejem plo 32 indican que la inhibición de la exportación nuclear m ediada por CRM 1 por el Com puesto de R eferencia I-3, induce la localización nuclear y la activación de proteínas de genes supresores de tum ores, resultando en apoptosis selectiva, citotoxicidad de células cancerosas e inhibición del crecimiento tumoral.
EJEMPLO 33: ARTRITIS INDUCIDA POR ANTICUERPOS MONOCLONALES (CAIA)
Los ratones BalbC fueron asignados aleatoriam ente a jaulas el D ía de llegada (-1 ) y cada grupo (n=8) fue asignado a los grupos de tratam iento mostrados a continuación con el siguiente régimen:
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Se exam inó el estado de salud de los anim ales a su llegada. Sólo los anim ales en buen estado de salud se aclimataron a las condiciones de laboratorio y se utilizaron en el estudio. Los anim ales recibieron ad libitum una dieta comercial para roedores y libre acceso a agua potable, sum inistrada a cada jaula a través de botellas de polietileno con tubos de acero inoxidable. Las condiciones am bientales controladas autom áticam ente se establecieron para m antener la tem peratura entre 20 y 24 °C con una hum edad relativa (H R ) del 30 -70% , un ciclo de luz:oscuridad de 12:12 horas y 10-30 cam bios de aire/hora en la sala de estudio La tem peratura, la HR y el ciclo de luz se monitorizaron diariam ente m ediante el ordenador de control. Los anim ales recibieron un núm ero de identificación único y el día 0 del estudio se les inyectó en la vena de la cola un cóctel de anticuerpos (200 uL de 10 m g/mL). El cóctel de anticuerpos fue suministrado por MD Biosciences (Catálogo #: CIA-MAB-50). El día 3, tras la administración del mAb único, todos los animales fueron sometidos a la administración de LPS (200 uL de 0,5 mg/mL) mediante una única inyección intraperitoneal (IP). El LPS fue suministrado por MD Biosciences (Catálogo #: MDLPS.5). Se examinaron los ratones en busca de signos de respuesta artritogénica en las articulaciones periféricas el día 0. Desde el inicio de la enfermedad, se examinará la respuesta artritogénica en los días 3-8, 10 y 12 del estudio. Las reacciones artríticas se notifican para cada pata según una escala de 0-4 en orden ascendente de gravedad.
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Los animales encontrados en una condición moribunda, los animales con piel rota en una pata artrítica, o con una disminución mayor al 20% en el peso corporal y los animales mostrando dolor severo y signos de angustia severa fueron sometidos a eutanasia humanitariamente. El dolor o la angustia graves fueron evaluados caso por caso por técnicos experimentados en animales. Sin embargo, en resumen, las evaluaciones buscaban vocalizaciones anormales, aislamiento de otros animales, falta de voluntad para utilizar las extremidades, respuesta anormal a la manipulación, temblores y postura. Los animales fueron sometidos a eutanasia por inhalación de CO2 seguida de dislocación cervical. La evaluación se basa principalmente en los valores medios de la puntuación de artritis y las mediciones del grosor de la pata. También se realizó un análisis estadístico del peso corporal. En su caso, se aplicó el análisis de los datos mediante ANOVA con análisis post hoc de Tukey para determinar la significación de los efectos de los tratamientos.
Como parte de este modelo, los animales pierden peso rápidamente durante los primeros 5-8 días y lentamente comienzan a ganar/perder peso dependiendo de la progresión de la enfermedad. I-4 aumentó la tasa de aumento de peso en comparación con los grupos de tratamiento con vehículo o dexametasona. La FIG. 4 es un gráfico del peso corporal medio frente al tiempo durante los días 0 a 12 en los ratones BALB/c machos con artritis inducida por anticuerpos sometidos al modelo.
Además, los animales sometidos al modelo CAIA típicamente comienzan a mostrar signos de artritis alrededor del Día 4 y a medida que la enfermedad progresa las puntuaciones totales de artritis aumentan en función del tiempo. El tratamiento con el compuesto I-4 redujo significativamente la puntuación total en comparación con el vehículo y mostró un efecto dependiente de la dosis. La FIG. 5 es un gráfico de las puntuaciones artríticas clínicas totales medias de las patas en función del tiempo durante los días 0-12 en ratones BALB/c macho con artritis inducida por anticuerpos sometidos al tratamiento indicado.
EJEMPLO 34: MODELO DE PSORIASIS INDUCIDA POR PMA
Los ratones BALB/c fueron alojados en jaulas ventiladas individualmente en un ambiente controlado (temperatura 22 ± 1°C, humedad 70 ± 5%, y ciclo de 12 h luz/12 h oscuridad) en el animalario. Los ratones tenían acceso ad libituma a pellas de pienso comercial y a agua potable tratada con UV. se alojaron 4 ratones por jaula ventilada individualmente. Cada animal de la jaula se identificaba con una cola. 8 ratones por grupo Los ratones se distribuyeron aleatoriamente en diferentes grupos de tratamiento en función del peso corporal. Tras la aleatorización, el peso corporal medio de todos los grupos fue equivalente. El diseño del estudio fue de Grupo 1: Naive, vehículo DMSO al 1% (10-30 ul, tópico una vez al día), Grupo 2: PMA, vehículo DMSO al 1% (10-30 ul, tópico una vez al día), Grupo 3: PMA, I-4 10 mg/kg en PVP/Plurónicos (oral, L-V-V; Día 1-Día 3-Día 5-Día 7), Grupo 4: PMA, betametasona al 0,1% - 25 mg (norma de referencia) (tópica una vez al día)
4 ug de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) en 20 uL de acetona fue aplicado cada día en las orejas de los ratones. A partir del día 2, la inducción por PMA de la inflamación/psoriasis dérmica se manifestó con aumentos del índice de actividad clínica de la enfermedad asociados a un mayor grosor de la oreja, descamación de la piel de la oreja y pliegues de la piel de la oreja. Se evaluaron los siguientes parámetros: (i) el grosor de la oreja, (ii) la descamación de la piel de la oreja. Se basará en un índice de puntuación: 0, sin descamación; 1, descamación leve; 2, descamación moderada; 3, descamación grave. (iii) pliegues en la piel de la oreja. Esto se basará en un índice de puntuación: 0, sin pliegue; 1, pliegue leve; 2, pliegue moderado; 3, pliegue grave, (iv) el peso de la oreja (el día del sacrificio).
La FIG. 6 es un gráfico de barras que proporciona la puntuación del grosor de la oreja, la descam ación de la piel de la oreja y el pliegue de la piel de la oreja. Los resultados m uestran que la administración oral del com puesto I-4 a 10 mg/kg redujo el grosor medio de las orejas de form a estadísticam ente significativa en com paración con el vehículo. La eficacia obtenida con I-4 fue com parable a la del control positivo betam etasona. Adem ás, el com puesto I-4 fue bien tolerado.
EJEMPLO 35: NUEVO RECONOCIMIENTO DE OBJETOS NOVEDOSOS
Para la prueba de reconocimiento de objetos novedosos, se colocaron ratas Zucker en una cám ara de prueba (dim ensión 26" x 18" x 18"; L * A * A). No se permitió el consumo de alim entos ni agua durante la prueba. La prueba constó de 3 fases: a) Fase de familiarización: Las ratas fueron colocadas individualm ente en la cám ara de pruebas y se les permitió explorar librem ente durante 60 minutos. La distancia recorrida por el anim al durante esta fase se registró m ediante un software de seguim iento (sistem a A nyM aze). El objetivo de esta fase era fam iliarizar a los anim ales con el aparato de ensayo. Esta fase de prueba se realizó el día 1. B) Fase de muestra: El d ía 2, se colocó a las ratas solas en la cám ara de pruebas durante 3 minutos y se les permitió explorar librem ente la zona de pruebas, que contenía 2 objetos novedosos idénticos (por ejemplo, un cubo metálico y un cilindro de plástico) situados en 2 esquinas de la cám ara de pruebas. La distancia recorrida por el anim al durante esta fase de m uestreo se registró autom áticam ente, así como el tiem po em pleado por el anim al en interactuar con los objetos novedosos, m ediante un sistem a de software de seguim iento y observación visual. La interacción con el objeto se definió como la interacción activa con el hocico de los anim ales en contacto o proximidad inm ediata con el objeto. C ) Fase de prueba: una hora después de la fase de m uestreo, las ratas fueron devueltas a la cám ara de pruebas durante 3 minutos y se les permitió explorar libremente la zona de pruebas, que contenía 2 objetos, uno de los cuales era el objeto presentado durante la fase de muestreo y el segundo un objeto novedos que era exclusivo de la fase de pruebas. Los 2 objetos se colocaron en las m ism as 2 esquinas de la cám ara de pruebas que se utilizaron para la fase de muestra. Se registró autom áticam ente la distancia recorrida por el anim al durante la fase de prueba, así como el tiem po que pasó interactuando con los objetos novedosos y fam iliares, m ediante un sistem a de software de seguim iento y observación visual. Las puntuaciones de interacción con los objetos durante la fase de muestra y la de prueba fueron registradas de form a independiente por 2 observadores. La puntuación final representa la puntuación de diferencia entre cada lectura. Las puntuaciones de preferencia de objeto se presentan como D1 (es decir, tiem po dedicado a explorar el objeto novedos - tiem po dedicado a explorar el objeto familiar; por tanto, una puntuación positiva representa la preferencia por el objeto novedos) y D2 (es decir, D 1 /a b; puntuación D1 dividida por el tiem po total de exploración del objeto).
La FIG. 7 proporciona un conjunto de gráficos que m uestran la preferencia por objetos de ratas Zucker no tratadas y tratadas con I-4. De la FIG . 7 puede observarse que el com puesto I-4 adm inistrado por v ía oral a dosis de 0 ,625, 1,25 y 2 ,5 mg/kg indujo tendencias de mejora del reconocimiento de objetos novedosos en ratas Zucker y que I-4 fue bien tolerado.
EJEMPLO 36: ESTUDIO DE ALIMENTACIÓN EN RATAS ZUCKER OBESAS
R atas Zucker m acho (fa /fa) y ratas Zucker macho delgadas (am bas de Charles River) a las 10 sem anas de edad - un punto de tiem po en el cual las ratas Zucker fa/fa deberían mostrar una ingesta de alimentos elevada, m asa corporal y perfil de lípidos plasm áticos elevado en relación con sus contrapartes "delgadas" fueron alojadas individualm ente en jaulas con fondo de plástico y se les dio 14 días de habituación. Durante este período, se registraron diariam ente el peso corporal de los anim ales y la ingesta de alim entos y agua. Durante todo el estudio, todos los anim ales tuvieron acceso ilimitado a com ida de laboratorio estándar y agua. Una vez recogidos los datos de la ingesta basal de 14 días, las ratas obesas Zucker se asignaron a los grupos de tratam iento basándose en datos basales equivalentes, es decir, todas las ratas obesas Zucker ten ían ingestas diarias de com ida/agua y pesos corporales equivalentes. Durante esta fase, las ratas tam bién recibieron dos adm inistraciones de vehículo como fam iliarización con el procedimiento de dosificación. Inm ediatam ente después de la fase de referencia, com enzó la fase de tratam iento. El artículo de ensayo y el vehículo se administraron aproxim adam ente 1 h antes del inicio del ciclo de oscuridad. La program ación de las dosis varió según el grupo: la dosificación 5x sem anal fue de lunes a viernes El diseño del estudio fue el siguiente: Grupo A = ratas macho delgadas Zucker, tratam iento con vehículo 5x sem ana, oral, n=6, Grupo B = ratas macho obesas Zucker, tratam iento con vehículo 5x sem ana, oral, n=6, Grupo C = ratas m acho obesas Zucker, I-4 2 ,5 mg/kg 5x sem ana, oral, n=6.
El peso corporal diario y la ingesta de com ida y agua se midieron aproxim adam ente a la m ism a hora del día. En el día -1 y en el d ía 7 de la fase de tratam iento.
La FIG. 8A proporciona la ingesta acum ulativa y m edia de alim entos en ratas Zucker obesas y delgadas (W /O indica período de lavado). La administración oral del com puesto I-4 a 2 ,5 mg/kg 5 veces por sem ana redujo la ingesta m edia y acum ulativa de alimentos en ratas Zucker obesas (fa/fa). El com puesto I-4 fue bien tolerado.
La Figura 8B muestra el peso corporal promedio y porcentual en ratas Zucker obesas y delgadas (W /O indica período de lavado). La administración oral de I-4 a 2 ,5 mg/kg 5 veces por sem ana redujo significativam ente el aum ento de peso en com paración con los controles Zucker fa/fa. en la fase de lavado de 2 días, el aum ento de peso corporal siguió reduciéndose en com paración con los controles Zucker fa/fa. La I-4 fue bien tolerada.
Bibliografía
C ronshaw JM y Matunis MJ. 2004. The nuclear pore complex: disease associations and functional correlations T R E N D S Endocrin M etab. 15:34-39
Falini B et al. 2006. Both carboxy-term inus N E S motif and m utated tryptophan(s) are crucial for aberrant nuclear export of nucleophosmin leukem ic mutants in N P M c+ A M L Blood. 107 :4514-4523.
Cai X y Liu X. 2008. nhibition of Thr-55 phosphorylation restores p53 nuclear localization and sensitizes cancer cells to D N A d a m a g e.P N A S . 105 :16958 -16963.
D aelem ans D, Afonina E, Nilsson J 2002 A synthetic HIV-1 R ev inhibitor interfering with the C R M 1-m ediated nuclear export. Proc N atlA cad Sci U S A 99 (22 ):14440 -5.98052 -2517.
Davis JR et al. 2007. Controlling protein com partm entalization to overcom e disease Pharm aceut Res. 24:17-27. Freundt E, Yu L, Park E, et al 2009 M olecular determ inants for subcellular localization of the severe acute respiratory syndrom e coronavirus open reading fram e 3b protein. J Virol 83 (13 ):6631 -40.
Ghildyal R, Ho A, Dias M, et al 2009 La proteína matriz del virus respiratorio sincitial posee un m ecanism o de exportación nuclear m ediado p orC rm 1. J Virol 83 (11 ):5353-62.
Ghosh C C et al 2008 Analysis of nucleocytoplasm ic shuttling of NF kappa B proteins in hum an leukocytes.Methods Mol Biol. 457 :279-92.
G upta N et al 2008 Retinal tau pathology in hum an glaucom as. Can J Ophthalm ol. 2008 Feb ;43 (1 ):53 -60.
HoshinoL et al. 2008. Com bined effects of p53 gene therapy and leptomycin B in human esophageal squam ous cell carcinoma. Oncology. 75:113-119.
Lain S et al. 1999a An inhibitor of nuclear export activates the p53 response and induces the localization of H D M 2 and p53 to U1A-positive nuclear bodies associated with the P O D s Exp Cell Res. 248 :457 -472.
Lain S et al. 1999b. Accum ulating active p53 in the nucleus by inhibition of nuclear export: a novel strategy to promote the p53 tum or suppressor function Exp Cell Res. 253:315.
M uller P A et al. 2009 Nuclear-cytosolictransport of C O M M D 1 regulates N F-kappaB and HIF-1 activity. Traffic 10 (5 ):514 -27.
M utka S 2007 Nuclear Export Inhibitors (N E Is ) as novel cancer therapies A A C R Annual Meeting. Cartel 5609.
M utka S, Yang W, Dong S, et al. 2009. Identification of nuclear export inhibitors with potent anticancer activity in vivo. C ancer Res. 69: 510-7.
N akahara J et al. 2009. Abnorm al expression o fT IP 30 and arrested nucleocytoplasm ic transport within oligodendrocyte precursor cells in multiple sclerosis J Clin Invest. 119:169-181.
Noske A et al. 2008. Expression of the nuclear export protein chrom osom al region m aintenance/exportin 1/Xpo1 is a prognostic factor in hum an ovarian cancer. Cancer. 112:1733-1743.
Pollard V & M alim M. 1998 The HIV-1 R ev protein Annu R ev Microbiol 52 :491-532.
Rawlinson S, Pryor M, W right P, Jans D 2009 C R M 1-m ediated nuclear export of dengue virus R N A polym erase N S5 m odulates interleukin-8 induction and virus production. J Biol C hem 284 (23 ):15589 -97.
S anchez V, M ahr J, O razio N, et al 2007 Nuclear export of the hum an cytomegalovirus tegum ent protein pp65 requires cyclin-dependent kinase activity and the Crm1 exporter. J Virol 81 (21 ):11730-6.
Sorokin AV et al. 2007. Nucleocytoplasm ic transport of proteins . Biochemistry 72 :1439 -1457.
Terry LJ et al. 2007. Crossing the nuclear envelope: hierarchical regulation of nucleocytoplasm ic transport. Science 318 :1412 -1416.
Van der W att PJ et al. 2008. The Karyopherin proteins, Crm1 and Karyopherin beta1, are overexpressed in cervical cancer and are critical for cancer cell survival and proliferation. Int J Canc. 124 :1829-1840.
W alsh M D et al. 2008 Exportin 1 inhibition attenuates nuclear factor-kappaB -dependent gene expression. Shock 29 :160 -166.
W illiam s P, Verhagen J, Elliott G 2008 Characterization of a C R M I-d e p e n d e n t nuclear export signal in the C term inus of herpes sim plex virus type 1 tegum ent protein UL47. J Virol 82 (21 ):10946 -52.
Yang W 2007 Anti-tum or activity of novel nuclear export inhibitors (N E Is) in multiple murine leukem ia models. A A C R Annual M eeting. Cartel 5597.
Yao Y et al. 2009. he expression of CRM 1 is associated with prognosis in human osteosarcom a. Oncol Rep. 21 :229 -35.
Z im m erm an TL et al 2006 Nuclear export of retinoid X receptor alpha in response to interleukin-1beta-m ediated cell signaling: roles for JN K and S E R 260. J Biol C h em 281 :15434-15440.

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural:
Figure imgf000070_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto veterinario que lo necesite.
2. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el sujeto veterinario es un perro.
3. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el cánceres linfoma.
4. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el cáncer es osteosarcoma.
5. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el cánceres leucemia.
6. El compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el cánceres mieloma.
7. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el tratamiento comprende dosificar desde aproximadamente 0,5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal del sujeto veterinario cada 4-120 horas.
8. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la dosificación es de 10 mg/kg de peso corporal del sujeto veterinario por administración oral.
9. El compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el tratamiento comprende la administración oral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular o intradérmica.
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Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103002742B (zh) 2010-03-05 2016-07-13 卡尔约药物治疗公司 核转运调节剂及其应用
JP6106605B2 (ja) 2011-01-17 2017-04-05 カリオファーム セラピューティクス，インコーポレイテッド オレフィン含有核輸送調節剤およびその使用
SMT201800171T1 (it) * 2011-07-29 2018-07-17 Karyopharm Therapeutics Inc Modulatori di trasporto nucleare contenenti idrazide e loro usi
US9428490B2 (en) * 2011-07-29 2016-08-30 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2013109057A1 (ko) 2012-01-18 2013-07-25 (주)바이오니아 자성나노입자-samirna 복합체 및 그 제조방법
CA2872190C (en) 2012-05-09 2024-06-25 Karyopharm Therapeutics, Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
JO3407B1 (ar) 2012-05-31 2019-10-20 Eisai R&D Man Co Ltd مركبات رباعي هيدرو بيرازولو بيريميدين
CN105073728A (zh) 2013-03-15 2015-11-18 全球血液疗法股份有限公司 化合物及其用于调节血红蛋白的用途
US10202366B2 (en) * 2013-03-15 2019-02-12 Karyopharm Therapeutics Inc. Methods of promoting wound healing using CRM1 inhibitors
WO2014205393A1 (en) * 2013-06-21 2014-12-24 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
DK3492455T3 (da) 2013-06-21 2023-08-14 Karyopharm Therapeutics Inc 1,2,4-triazoler som nukleare transportmodulatorer og anvendelse til behandling af specifikke former for cancer
US9695421B2 (en) 2013-07-05 2017-07-04 Bioneer Corporation Dengue virus-specific siRNA, double helix oligo-RNA structure comprising siRNA, and composition for suppressing proliferation of dengue virus comprising RNA structure
CN105705638B (zh) 2013-07-05 2019-11-26 柏业公司 改善的具有高效能的纳米颗粒型寡核苷酸结构及其制备方法
KR20150006743A (ko) * 2013-07-09 2015-01-19 (주)바이오니아 간암 연관 유전자 특이적 siRNA, 그러한 siRNA를 포함하는 이중나선 올리고 RNA 구조체 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물
EA201992707A1 (ru) 2013-11-18 2020-06-30 Глобал Блад Терапьютикс, Инк. Соединения и их применения для модуляции гемоглобина
US9861615B2 (en) * 2013-11-28 2018-01-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of beta-thalassemias
CN106459974A (zh) 2014-04-04 2017-02-22 柏业公司 新颖的双链寡rna和包含它的用于预防或治疗纤维化或呼吸系统疾病的药物组合物
CN111484483B (zh) * 2014-08-15 2023-05-26 卡尔约药物治疗公司 赛灵克斯的多晶型物
US10526295B2 (en) 2015-12-31 2020-01-07 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2017117535A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2017118940A1 (en) * 2016-01-08 2017-07-13 Dr. Reddy's Laboratories Limited Solid forms of selinexor and process for their preparation
EP3241830A1 (de) 2016-05-04 2017-11-08 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Kondensierte bicyclische heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
US11065230B2 (en) 2016-09-16 2021-07-20 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of systemic mastocytosis
US11602530B2 (en) 2016-11-28 2023-03-14 Biogen Ma Inc. CRM1 inhibitors for treating epilepsy
WO2018129227A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Watson Laboratories Inc. Novel crystalline forms of selinexor and process for their preparation
CN106831731B (zh) * 2017-01-17 2019-11-08 广州市闻皓生物科技有限公司 一种Selinexor原料药的合成方法
CN106831617A (zh) * 2017-01-17 2017-06-13 广州市闻皓生物科技有限公司 一种Selinexor中间体的合成工艺
WO2018191707A2 (en) * 2017-04-13 2018-10-18 Brown University Nucleocytoplasmic regulator of autophagy-associated transcription factors
WO2019232724A1 (en) 2018-06-06 2019-12-12 Xw Laboratories, Inc. Compounds as nuclear transport modulators and uses thereof
CN108947982A (zh) * 2018-08-16 2018-12-07 刘璐 治疗非酒精性脂肪肝病的吡嗪衍生物、组合物和应用
WO2020092965A1 (en) * 2018-11-01 2020-05-07 Karyopharm Therapeutics Inc. E2f1 as a biomarker for treatments using xpo1 inhibitors
CN111606890A (zh) * 2019-02-26 2020-09-01 微境生物医药科技(上海)有限公司 含丙烯酰基的核转运调节剂及其用途
CA3130107A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Johnson Matthey Public Limited Company Co-crystal forms of selinexor
GB201905721D0 (en) 2019-04-24 2019-06-05 Univ Dundee Compounds
KR20220004142A (ko) 2019-05-01 2022-01-11 카리오팜 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Xp01 억제제 및 xp01 억제제의 제조에 사용하기 위한 중간체의 제조 방법
EP3808742A1 (en) 2019-10-16 2021-04-21 Sandoz AG Polymorph of selinexor
WO2021163338A1 (en) 2020-02-11 2021-08-19 Karyopharm Therapeutics Inc. Xpo1 inhibitors for use in treating cancer
US11180473B2 (en) 2020-03-27 2021-11-23 Landos Biopharma, Inc. PLXDC2 ligands
WO2021202745A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Karyopharm Therapeutics Inc. Treatment of covid-19 with a sine compound
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
WO2021252905A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Karyopharm Therapeutics Inc. Biomarkers for response to exportin-1 inhibitors in diffuse large b-cell lymphoma patients
WO2021252900A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Karyopharm Therapeutics Inc. Biomarkers for response to exportin-1 inhibitors in multiple myeloma patients
WO2021252874A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Karyopharm Therapeutics Inc. Xpo1 inhibitors for use in treating cancer
WO2022087218A1 (en) 2020-10-21 2022-04-28 Karyopharm Therapeutics Inc. Crystalline form of selinexor
CN112679477B (zh) * 2020-12-17 2021-10-26 佛山奕安赛医药科技有限公司 塞利尼索及其中间体的制备方法
WO2022143779A1 (zh) * 2020-12-29 2022-07-07 南京明德新药研发有限公司 含烯基类化合物及其应用
WO2022232417A1 (en) 2021-04-28 2022-11-03 Karyopharm Therapeutics Inc. Biomarkers for response to exportin-1 inhibitors in multiple myeloma patients
WO2022246065A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 Karyopharm Therapeutics Inc. Calb1 biomarker in the treatment of de-differentiated liposarcoma using xpo1 inhibitors, such as selinexor
WO2023172855A2 (en) * 2022-03-07 2023-09-14 Kaohsiung Medical University Methods for treating hepatitis b virus infection
CN116625976B (zh) * 2023-04-10 2025-11-21 南京农业大学 一种微生物浓度的监测系统及方法
CN116514773B (zh) * 2023-04-24 2024-12-03 重庆汉佩生物科技有限公司 一种Verdinexor(KPT-335)及其盐酸盐的合成方法
GB2643430A (en) * 2024-08-14 2026-02-18 Univ Cape Town Nuclear transport inhibitors for anti-cancer combination therapy

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1017398A (en) 1911-01-16 1912-02-13 John E Folsom Telegraph-key.
JPS5661360A (en) * 1979-10-25 1981-05-26 Teijin Ltd 1-substituted imidazole derivative and its preparation
CS229934B2 (en) 1981-07-07 1984-07-16 Pfizer Production method subst.indolylacryte acid derivative
KR840000529A (ko) 1981-07-07 1984-02-25 콘스탄틴 루이스 클레멘트 인돌 유도체의 제조방법
US4778796A (en) 1985-07-19 1988-10-18 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. ω-(3-pyridyl)alkenamide derivatives and anti-allergenic pharmaceutical compositions containing same
IL97249A (en) * 1990-02-23 1995-01-24 Takeda Chemical Industries Ltd Compounds of 7,6,5,4-tetrahydrothiazole] B-5,4 [pyridine and compounds of 5,6-dihydro-H4-pyrrolo] D-3,2 [thiazole, their manufacture, and pharmaceutical compositions including or
JP3111321B2 (ja) 1990-02-23 2000-11-20 武田薬品工業株式会社 縮合チアゾール化合物
US5541213A (en) 1993-06-24 1996-07-30 Eisai Co., Ltd. Propenoic acid derivatives diazole propenoic acid compounds which have useful pharmaceutical utility
US5468353A (en) 1994-05-05 1995-11-21 Minnesota Mining And Manufacturing Company Mist suppressant for solvent extraction metal electrowinning
AU4368996A (en) 1994-11-23 1996-06-17 Neurogen Corporation Certain 4-aminomethyl-2-substituted imidazole derivatives and 2-aminomethyl-4-substituted imidazole derivatives; new classes of dopamine receptor subtype specific ligands
US20030018025A1 (en) 1995-06-07 2003-01-23 Neurogen Corporation, Corporation Of The State Of Delaware Certain 4-aminomethyl-2-substituted imidazole derivatives and 2-aminomethyl-4-substituted imidazole derivatives: new classes of dopamine receptor subtype specific ligands
EP0858457A1 (de) 1995-10-20 1998-08-19 Dr. Karl Thomae GmbH 5-gliedrige heterocyclen, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung sowie verfahren zu ihrer herstellung
CA2250002C (en) 1996-04-04 2008-03-25 Shionogi & Co., Ltd. Cephem compounds and drugs containing the compounds
EP0913392B1 (en) 1996-04-25 2003-07-02 Nissan Chemical Industries, Limited Ethylene derivatives and pest controlling agents
JP4054992B2 (ja) 1996-04-25 2008-03-05 日産化学工業株式会社 エチレン誘導体および有害生物防除剤
DE19624659A1 (de) 1996-06-20 1998-01-08 Klinge Co Chem Pharm Fab Neue Pyridylalken- und Pyridylalkinsäureamide
US5994398A (en) 1996-12-11 1999-11-30 Elan Pharmaceuticals, Inc. Arylsulfonamides as phospholipase A2 inhibitors
JP4416198B2 (ja) 1997-12-19 2010-02-17 武田薬品工業株式会社 アニリド誘導体、その製造法および用途
WO1999050264A1 (en) 1998-03-30 1999-10-07 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Quinazoline derivatives
US6743585B2 (en) 1999-09-16 2004-06-01 Agilent Technologies, Inc. Methods for preparing conjugates
AR029803A1 (es) 2000-02-21 2003-07-16 Smithkline Beecham Plc Imidazoles sustituidos con piridilo y composiciones farmaceuticas que las comprenden
EP1335898B1 (en) 2000-09-29 2005-11-23 TopoTarget UK Limited Carbamic acid compounds comprising an amide linkage as hdac inhibitors
EP1429765A2 (en) 2001-09-14 2004-06-23 Methylgene, Inc. Inhibitors of histone deacetylase
AU2003287965A1 (en) 2002-10-24 2004-05-13 Carex Sa Modulation of peroxisome proliferator activated receptors activity
DE10250743A1 (de) 2002-10-31 2004-05-19 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Neue Amid-Verbindungen mit MCH-antagonistischer Wirkung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel
NZ540381A (en) 2002-11-01 2007-11-30 Takeda Pharmaceutical 5-membered aromatic heterocycle derivatives as prophylactic and therapeutic agents for treating neuropathy
JP4145230B2 (ja) 2002-11-01 2008-09-03 武田薬品工業株式会社 神経障害の予防・治療剤
ATE552253T1 (de) 2002-11-08 2012-04-15 Novartis Int Pharm Ltd 3-substituierte-6-aryl- pyridin derivate als liganden für c5a-rezeptoren
EP1599447A1 (en) 2003-02-28 2005-11-30 Galderma Research & Development, S.N.C. Ligands that modulate lxr-type receptors
MY149038A (en) 2004-05-26 2013-07-15 Eisai R&D Man Co Ltd Cinnamide compound
MX2007001634A (es) 2004-08-11 2007-04-23 Kyorin Seiyaku Kk Nuevo derivado de acido amino benzoico ciclico.
WO2006019020A1 (ja) 2004-08-16 2006-02-23 Sankyo Company, Limited 置換されたウレア化合物
EP1849465A4 (en) 2005-02-18 2008-12-24 Takeda Pharmaceutical AGENS TO CONTROL THE FUNCTION OF THE GPR34 RECEPTOR
US8637559B2 (en) 2005-11-15 2014-01-28 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Oxazole compound and pharmaceutical composition
JP2007210929A (ja) 2006-02-09 2007-08-23 Sankyo Co Ltd ウレア化合物を含有する医薬
AR059955A1 (es) 2006-03-09 2008-05-14 Eisai R&D Man Co Ltd Compuestos policiclicos no peptidicos, medicamentos que los contienen, y usos para prevenir o tratar enfermedades causadas por la produccion de beta amiloide
KR101495611B1 (ko) 2006-04-07 2015-02-25 메틸진 인코포레이티드 히스톤 데아세틸라아제의 억제제
CN101466687B (zh) 2006-04-18 2012-04-11 日本化学医药株式会社 过氧化物酶体增殖剂激活受体δ的激活剂
DE102006024024A1 (de) * 2006-05-23 2007-11-29 Bayer Healthcare Aktiengesellschaft Substituierte Arylimidazolone und -triazolone sowie ihre Verwendung
KR101130380B1 (ko) 2006-06-13 2012-04-23 상하이 인스티튜트 오브 마테리아 메디카 차이니즈 아카데미 오브 싸이언시즈 헤테로시클릭 비뉴클레오시드 화합물, 그의 제조방법, 약학적 조성물 및 항바이러스성 약제로서의 용도
CN100503571C (zh) 2006-07-12 2009-06-24 中国药科大学 四氢异喹啉类衍生物、其制备方法及其医药用途
PL2054411T3 (pl) 2006-07-27 2015-02-27 Amorepacific Corp Nowe związki, ich izomery lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole jako antagoniści receptora waniloidowego oraz zawierające je kompozycje farmaceutyczne
AU2007292155B2 (en) 2006-09-05 2012-11-01 Kyowa Kirin Co., Ltd. Imidazole derivative
EP1942104A1 (en) 2006-12-20 2008-07-09 sanofi-aventis Heteroarylcyclopropanecarboxamides and their use as pharmaceuticals
EP1939180A1 (en) 2006-12-20 2008-07-02 sanofi-aventis Heteroarylacrylamides and their use as pharmaceuticals for the stimulation of the expression of endothelial NO synthase
US7795457B2 (en) 2007-02-26 2010-09-14 Kosan Biosciences Incorporated Carbamate compounds
EP2003118A1 (de) 2007-06-13 2008-12-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Zimtsäurederivate als Modulatoren des EP2-Rezeptors
US8106083B2 (en) 2008-08-08 2012-01-31 Synta Pharmaceuticals Corp. Triazole compounds that modulate HSP90 activity
CN102480969A (zh) 2009-07-09 2012-05-30 科锐医疗有限公司 伤口愈合和瘢痕调制方法
US8518968B2 (en) 2009-12-04 2013-08-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hydrazone and diacyl hydrazine compounds and methods of use
CN103002742B (zh) 2010-03-05 2016-07-13 卡尔约药物治疗公司 核转运调节剂及其应用
JP6106605B2 (ja) 2011-01-17 2017-04-05 カリオファーム セラピューティクス，インコーポレイテッド オレフィン含有核輸送調節剤およびその使用
SMT201800171T1 (it) 2011-07-29 2018-07-17 Karyopharm Therapeutics Inc Modulatori di trasporto nucleare contenenti idrazide e loro usi
US9428490B2 (en) 2011-07-29 2016-08-30 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2013020024A2 (en) 2011-08-03 2013-02-07 Karyopharm Therapeutics, Inc. Maleimide compounds and methods of treatment
CA2872190C (en) 2012-05-09 2024-06-25 Karyopharm Therapeutics, Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
US10202366B2 (en) 2013-03-15 2019-02-12 Karyopharm Therapeutics Inc. Methods of promoting wound healing using CRM1 inhibitors
US20160016916A1 (en) 2013-03-15 2016-01-21 Karyopharm Therapeutics Inc. Exo Olefin-Containing Nuclear Transport Modulators and Uses Thereof
DK3492455T3 (da) 2013-06-21 2023-08-14 Karyopharm Therapeutics Inc 1,2,4-triazoler som nukleare transportmodulatorer og anvendelse til behandling af specifikke former for cancer
WO2014205393A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2015073908A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Method for selecting cancer treatment regimen
KR20170032244A (ko) 2014-07-26 2017-03-22 선샤인 레이크 파르마 컴퍼니 리미티드 Cdk 저해제로서 2-아미노-피리도[2,3-d]피리미딘-7(8h)-온 유도체 및 그 용도
CN111484483B (zh) 2014-08-15 2023-05-26 卡尔约药物治疗公司 赛灵克斯的多晶型物
US10526295B2 (en) 2015-12-31 2020-01-07 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2017117535A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2017118940A1 (en) 2016-01-08 2017-07-13 Dr. Reddy's Laboratories Limited Solid forms of selinexor and process for their preparation
JP6765198B2 (ja) 2016-03-10 2020-10-07 パナソニック株式会社 潜熱蓄熱材及びそれを用いる蓄熱システム
US11602530B2 (en) 2016-11-28 2023-03-14 Biogen Ma Inc. CRM1 inhibitors for treating epilepsy
WO2018129227A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Watson Laboratories Inc. Novel crystalline forms of selinexor and process for their preparation
EP3808742A1 (en) 2019-10-16 2021-04-21 Sandoz AG Polymorph of selinexor
WO2022087218A1 (en) 2020-10-21 2022-04-28 Karyopharm Therapeutics Inc. Crystalline form of selinexor

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Publication number Publication date
CA2842362A1 (en) 2013-02-07
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SMT201800171T1 (it) 2018-07-17
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EA201490407A1 (ru) 2014-05-30
LT2736887T (lt) 2018-02-12
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