ES3034089T3 - Vaccine against porcine parvovirus - Google Patents

Vaccine against porcine parvovirus

Info

Publication number
ES3034089T3
ES3034089T3 ES17801619T ES17801619T ES3034089T3 ES 3034089 T3 ES3034089 T3 ES 3034089T3 ES 17801619 T ES17801619 T ES 17801619T ES 17801619 T ES17801619 T ES 17801619T ES 3034089 T3 ES3034089 T3 ES 3034089T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
ppv
immunogenic composition
amino acid
subject
present
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES17801619T
Other languages
English (en)
Inventor
Eric Vaughn
Scott Bucklin
Troy Kaiser
Jeremy Kroll
Philip Utley
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH filed Critical Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Application granted granted Critical
Publication of ES3034089T3 publication Critical patent/ES3034089T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/23—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
    • C12N2750/14322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
    • C12N2750/14323—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
    • C12N2750/14334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
    • C12N2750/14371—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere, entre otros, a una proteína viral 2 (VP2) del parvovirus porcino (PPV) que presenta en la posición aminoacídica 228 un residuo de ácido glutámico o un residuo de glutamato, y/o en la posición aminoacídica 414 un residuo de serina, y/o en la posición aminoacídica 419 un residuo de glutamina, y/o en la posición aminoacídica 436 un residuo de treonina. Además, la presente invención se refiere a composiciones inmunogénicas que comprenden dicha proteína viral 2 (VP2) del PPV. Asimismo, la presente invención se refiere a métodos para inmunizar a un sujeto que comprenden la administración a dicho sujeto de la composición inmunogénica de la presente invención. Asimismo, la presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir los signos clínicos causados por la infección por PPV en un sujeto que lo necesite, comprendiendo dicho método la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición inmunogénica según la presente invención. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Vacuna contra parvovirus porcino
La presente solicitud contiene un listado de secuencias de acuerdo con 37 C.F.R. 1.821 - 1.825.
Antecedentes de la invención
El parvovirus porcino es un virus de replicación autónoma de la subfamilia Parvovirinae del géneroProtoparvovirusdentro de la familia Parvoviridae que contiene una molécula de ADN monocatenario de alrededor de 5100 nucleótidos (Cotmore et al., 2014: Arch Virol.: 159(5): 1239-1247; Molitor et al., 1984: Virology: 137(2):241-54.). Solo la cadena no codificante del ADN se empaqueta en viriones. El genoma del virus codifica tres proteínas de cápside (VP1, VP2, VP3) y una proteína no estructural (NS1). La cápside de parvovirus es de alrededor de 22-25 nanómetros de diámetro y está compuesta por las subunidades VP1 y VP2. Estas proteínas se derivan de versiones alternativamente empalmadas de la misma molécula de ARN y así se superponen en la secuencia. Asimismo, el parvovirus porcino exhibe un nivel alto de similitud de secuencia con el virus panleucopenia felina, los parvovirus caninos y el parvovirus de roedores (Ranz et al., 1989: J. gen. Virol: 70:2541-2553).
Si bien existen diferencias en las cepas de parvovirus porcino, dado que algunas son extremadamente patógenas y otras son menos patógenas o totalmente no patógenas, cuando el virus se establece o se vuelve endémico en un país, las cepas patógenas parecen circular en la población.
La infección por parvovirus porcino (PPV) es una causa común de insuficiencia reproductiva en cerdas de cría alrededor del mundo. Los estudios serológicos muestran que el parvovirus porcino se propagó en todas las regiones productoras de cerdos del mundo, en donde hasta 80 % de los animales muestran seroconversión.
El parvovirus porcino (PPV) causa insuficiencia reproductiva en cerdos, lo que da como resultado muerte y momificación fetal, mortinatalidad y otros tipos de insuficiencia reproductiva en cerdas primíparas preñadas. (Joo & Johnson. 1976. Veterinary Bulletin 46, 653-660; Mengeling. 1978. J. Am. Vet. Med. Assoc. 172, 1291-1294).
El PPV induce la insuficiencia reproductiva cuando las cerdas nulíparas y cerdas primíparas predispuestas (no inmunes) se infectan durante la preñez. Es en el único momento en el que el virus causa enfermedad. La infección en las cerdas ocurre tras la ingestión o inhalación del virus. Luego, el PPV circula por el torrente sanguíneo, y en la cerda preñada cruza la placenta e infecta a los embriones y fetos en desarrollo. Después de la infección natural, se desarrolla la inmunidad activa que probablemente dure toda la vida del cerdo. Si la inmunidad activa ocurre antes de la preñez, los lechones en desarrollo no se ven afectados. En el nacimiento, los lechones reciben la inmunidad materna en el calostro de la cerda primípara y esta inmunidad materna dura hasta 20 semanas de vida. Cuanto mayor sea el nivel de inmunidad activa en la cerda primípara, mayor inmunidad materna le transmite a sus lechones. De allí en adelante, puede ocurrir una infección natural por PPV.
La enfermedad causada por PPV en cerdas a menudo se denomina SMEDI (acrónimo en inglés correspondiente a mortinatalidad, momificación, muerte embrionaria e infertilidad). Si la infección ocurre en los días 0-30 de la preñez, puede tener lugar la mortalidad embrionaria, lo que produce la disminución del tamaño de la camada. La característica más evidente tras la infección en los días 30-70 de preñez es el nacimiento de lechones momificados. La momificación es el proceso de digestión estéril de los tejidos de los lechones que mueren en el útero luego de que el esqueleto comenzó a solidificarse. La infección por PPV también se asocia a la mortinatalidad y debilidad en los lechones nacidos si la infección ocurre en etapas tardías de la preñez. El aborto también puede ser el resultado de la infección por PPV, pero no es un indicio clínico común de esta enfermedad. En definitiva, la infección por PPV disminuye la cantidad de cerdos nacidos por cerda primípara por año.
Las vacunas contra PPV disponibles en la actualidad se producen mediante cultivo del virus nativo en células primarias de origen porcino o en líneas celulares establecidas. A continuación, el virus infeccioso se aísla y se inactiva con agentes químicos para obtener una vacuna de virus inactivado de célula entera. Sin embargo, tales procesos de cultivar virus infeccioso nativo son problemáticos para las consideraciones de bioseguridad y seguridad. Por lo tanto, existe la necesidad de obtener vacunas contra PPV recombinante.
Las vacunas subunitarias a base de proteínas recombinantes pueden tener inmunogenicidad deficiente debido al plegamiento incorrecto de la proteína diana o la presentación deficiente en el sistema inmunitario. Asimismo, las vacunas de célula entera inactivada de virus presentan todos los antígenos del virus nativo, mientras que una vacuna subunitaria se limita a una secuencia de aminoácidos específica.
Las vacunas contra PPV recombinante ya se describieron en el arte previo; sin embargo, hasta el momento solo se encuentran disponibles las vacunas inactivadas de célula entera. De este modo, es evidente que hasta ahora no se han desarrollado vacunas subunitarias contra PPV recombinante apropiadas que demostraran ser eficaces y seguras. Las vacunas subunitarias contra PPV recombinante descritas hasta el momento no se evaluaron en experimentos controlados de exposición en laboratorio. Las vacunas subunitarias contra PPV recombinante que se evaluaron no funcionaron tan bien como las vacunas de PPV inactivado de célula entera, o las vacunas subunitarias contra PPV recombinante no eran seguras (mostraron reacciones adversas). Por lo tanto, persiste la necesidad de vacunas subunitarias contra PPV recombinante que sean altamente eficaces y seguras.
Se identificaron aislados de campo de parvovirus porcino (PPV) que difieren genéticamente y antigénicamente de las cepas de vacuna. El virus p Pv de genotipo 2, PPV-27a, es altamente virulento en cerdas nulíparas preñadas después de la infección experimental, como se demostró mediante la alta mortalidad entre los fetos de las cerdas primíparas infectadas por PPV-27a (85 %) en comparación con las cerdas primíparas infectadas por otras cepas de PPV, por ejemplo, PPV-NADL-2. Sin embargo, las vacunas contra PPV disponibles en el comercio en la actualidad son a base de preparaciones de virus entero inactivado de cepas de PPV de genotipo 1 aisladas alrededor de 30 años atrás (Jozwik et al 2009; Journal of General Virology; 90; 2437-2441). De este modo, se necesitan vacunas nuevas para la protección contra nuevas cepas patógenas altamente virulentas de PPV que tengan mayor correspondencia con PPV en el campo.
Otros antecedentes son los siguientes:
EP 0551 449 A1 divulga un método para producir una vacuna subunitaria de VP2 contra parvovirus porcino.
Cadar D et al. (Infection, Genetics and Evolution 2012, 12: 1163-1171) describe la filogenia y genética evolutiva del parvovirus porcino en jabalíes salvajes.
Streck AF et al. (Journal of General Virology 2011, 92: 2628-2636) describe la alta tasa de evolución viral en la proteína de cápside del parvovirus porcino.
WO 88/02026 se refiere a vacunas de cápside viral vacía.
Martinez C et al. (Vaccine 1992, 10(10): 684-690), divulga la producción de cápsides vacías de parvovirus porcino con alta actividad inmunógena.
Xu F et al. (Applied and Environmental Microbiology 2007, 73(21): 7041-7047) describe la inducción de respuestas inmunitarias en ratones tras administración intragástrica deLactobacillus caseique produce la proteína VP2 de parvovirus porcino.
Además, se necesitan vacunas nuevas y mejores contra cepas extremadamente patógenas de PPV que brinden una protección más amplia contra cepas diferentes (heterólogas) de PPV (protección cruzada).
Descripción detallada de la invención
Antes de describir los aspectos de la presente invención, cabe destacar que, como se usa en la presente y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen la referencia al plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De este modo, por ejemplo, la referencia a “un antígeno” incluye varios antígenos, y la referencia a “virus” incluye la referencia a uno o más virus y equivalentes de estos conocidos por las personas del oficio de nivel medio, etc. A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos que se usan en la presente tienen el mismo significado que le otorga habitualmente una persona del oficio de nivel medio al cual pertenece la invención. Si bien los métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente pueden usarse en la práctica o en pruebas de la presente invención, a continuación se describen los métodos, dispositivos y materiales preferidos. Se hace referencia a todas las publicaciones que se mencionan en la presente a fin de describir las líneas celulares, los vectores y las metodologías indicadas en las publicaciones que se pueden usar en relación con la invención. La presente no debe interpretarse como un reconocimiento de que la invención no tiene derecho a preceder a esa descripción en virtud de la invención previa.
La presente invención soluciona los problemas inherentes del arte previo y proporciona un progreso notable en el estado de la técnica. En general, la presente invención proporciona una proteína viral 2 (VP2) de parvovirus porcino (PPV) como se expone en las reivindicaciones anexas.
De manera ventajosa, los datos experimentales proporcionados mediante la presente invención divulgan que la vacuna subunitaria de VP2 de PPV de la presente invención es segura y eficaz para prevenir la viremia e infección por PPV en fetos. Asimismo, los datos experimentales proporcionados mediante la presente invención divulgan que la vacuna de la presente invención tiene un amplio espectro de protección dado que la vacuna protege contra cepas de PPV europeo de exposición heteróloga así como también cepas de PPV norteamericano de exposición heteróloga.
De manera eficaz, los datos experimentales proporcionados mediante la presente invención divulgan que la vacuna subunitaria de VP2 de PPV de la presente invención es tan eficaz como el virus entero inactivado, lo que es un efecto sorprendente. Sin embargo, los procesos de inactivación extensiva (que son necesarios para inactivar PPV nativo al generar vacunas de virus entero inactivado) se pueden evitar mediante la utilización de una vacuna subunitaria recombinante compuesta por VP2 de PPV.
El término “parvovirus porcino” o “PPV” es conocido por la persona del oficio de nivel medio. Sin embargo, “parvovirus porcino” es un virus de replicación autónoma del género parvovirus dentro de la familia Parvoviridae que contiene una molécula de ADN monocatenario. El genoma del virus codifica tres proteínas de cápside (VP1, VP2, VP3) y una proteína no estructural (NS1). La enfermedad causada por PPV en cerdas a menudo se denomina SMEDI (acrónimo en inglés correspondiente a mortinatalidad, momificación, muerte embrionaria e infertilidad). La expresión “parvovirus porcino” comprende todas las cepas, genotipos, fenotipos y serotipos posibles del parvovirus porcino.
La expresión “proteína viral 2” o "VP2" se refiere a la proteína de cápside VP2 del parvovirus porcino. La expresión “proteína viral 2” o "VP2" es conocida por la persona del oficio de nivel medio.
Los términos “proteína”, “aminoácido” y “polipéptido” se usan de manera indistinta. El término “proteína” se refiere a una secuencia de aminoácidos compuesta por los aminoácidos naturales así como derivados de estos. Los aminoácidos naturales son conocidos en el estado de la técnica y se describen en libros de texto estándar de bioquímica. Dentro de la secuencia de aminoácidos, los residuos de aminoácidos están conectados por enlaces peptídicos. Asimismo, los dos extremos de la secuencia de aminoácidos se denominan terminal carboxilo (terminal C) y terminal amino (terminal N). El término “proteína” comprende proteínas esencialmente purificadas o preparaciones de proteínas que comprenden además otras proteínas. Asimismo, el término también se refiere a fragmentos de proteínas. Además, incluye proteínas modificadas químicamente. Tales modificaciones pueden ser modificaciones artificiales o modificaciones naturales tales como fosforilación, glucosilación, miristilación, y similares.
La expresión “en donde la numeración de las posiciones de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos de VP2 de PPV de tipo silvestre” hace referencia a la numeración de las posiciones de aminoácidos que se refiere a la secuencia de aminoácidos de proteína VP2 de PPV de tipo silvestre de longitud completa. Preferentemente, la numeración de las posiciones amino como se menciona en la presente corresponde a una secuencia de proteínas VP2 de PPV de tipo silvestre que tiene 579 residuos de aminoácidos, que incluyen un residuo de metionina en la posición de aminoácido 1 (terminal N). La expresión “en donde la numeración de las posiciones de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos de VP2 de PPV de tipo silvestre” comprende VP2 de PPV de tipo silvestre como se proporciona a modo de ejemplo en SEQ ID NO:1 (VP2 de PPV 27a).
En la presente invención, la VP2 de PPV es como se expone en las reivindicaciones anexas.
La numeración de las posiciones de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 1. Por lo tanto, la presente invención proporciona una proteína viral 2 (VP2) del parvovirus porcino (PPV) como se expone en las reivindicaciones anexas, en las que la numeración de las posiciones de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos de la VP2 del PPV tipo silvestre como se muestra en SEQ ID NO: 1.
En un aspecto de la presente invención, la VP2 de PPV es una VP2 de PPV recombinante.
Como se usa en la presente, el término "recombinante" se refiere particularmente a una molécula de proteína que se expresa de una molécula de ADN recombinante, tal como un polipéptido que se produce mediante técnicas de ADN recombinante. Un ejemplo de estas técnicas incluye el caso donde el ADN que codifica la proteína expresada (por ejemplo, VP2 de PPV) se inserta en un vector de expresión adecuado, preferentemente, un vector de expresión de baculovirus que, a su vez, se usa para transfectar o, en el caso de un vector de expresión de baculovirus, para infectar una célula huésped para producir la proteína o el polipéptido codificados por el ADN. Por lo tanto, como se usa en la presente, la expresión "VP2 de PPV recombinante” se refiere particularmente a una molécula de proteína que se expresa de una molécula de ADN recombinante.
En un aspecto de la presente invención, la VP2 de PPV es una VP2 de PPV recombinante expresada por baculovirus.
Las expresiones “baculovirus” o “sistema de baculovirus” son conocidas por la persona del oficio de nivel medio. Asimismo, el término “baculovirus” se especifica en mayor detalle a continuación.
En la presente invención, dicha VP2 de PPV es una proteína viral 2 (VP2) de parvovirus porcino (PPV) que comprende
- un residuo de isoleucina en la posición de aminoácido 25, y
- un residuo de serina en la posición de aminoácido 36, y
- un residuo de isoleucina en la posición de aminoácido 37, y
- un residuo de ácido glutámico o un residuo de glutamato en la posición de aminoácido 228, y
- un residuo de serina en la posición de aminoácido 414, y
- un residuo de glutamina en la posición de aminoácido 419, y
- un residuo de treonina en la posición de aminoácido 436,
en donde la numeración de la posición de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos de PPV VP2 tipo silvestre como se muestra en SEQ ID NO: 1.
SEQ ID NO:4 es una secuencia de nucleótidos de VP2 de PPV 27a optimizada por codones que se modificó adicionalmente para tener dos sitios de enzima de restricción ClaI (la posición de aminoácido 25 es un residuo de isoleucina, la posición de aminoácido 36 es un residuo de serina, la posición de aminoácido 37 es un residuo de isoleucina) de modo de flanquear la región codificante de VP2 compuesta por repeticiones de glicina. Sin embargo, los sitios de enzima de restricción ClaI se introdujeron de manera de no alterar la región codificante de VP2. SEQ ID NO:2 es la secuencia de proteína correspondiente a SEQ ID NO:4. SEQ ID NO:3 es una secuencia de nucleótidos de VP2 de PPV 27a optimizada por codones (sin sitios de enzima de restricción ClaI). SEQ ID NO:1 es la secuencia de proteína correspondiente a SEQ ID NO:3. SEQ ID NO: 5 a 16 divulga otras secuencias de proteína VP2 de PpV con (SEQ ID No : 5 a 10) o sin (SEQ ID NO: 11 a 16) sitios de enzima de restricción ClaI.
Las expresiones “ácido nucleico” o “secuencia de ácido nucleico” o “secuencia de nucleótidos” o “polinucleótido” se usan en la presente de manera indistinta y se refieren a polinucleótidos que incluyen moléculas de ADN, moléculas de ARN, moléculas de cADN o derivados. La expresión comprende polinucleótidos tanto monocatenarios como bicatenarios. El ácido nucleico de la presente invención comprende polinucleótidos aislados (es decir, aislados de su contexto natural) y formas modificadas genéticamente. Además, también comprende polinucleótidos modificados químicamente, que incluyen polinucleótidos modificados naturales tales como polinucleótidos glucosilados o metilados o uno modificado artificial tal como polinucleótidos biotinilados. Asimismo, las expresiones “ácido nucleico" y "polinucleótido" se usan de manera indistinta y se refieren a cualquier ácido nucleico. Las expresiones "ácido nucleico" y "polinucleótido" también incluyen específicamente ácidos nucleicos compuestos por bases distintas de las cinco bases biológicas (adenina, guanina, timina, citosina y uracilo).
Las expresiones “identidad” o “identidad de secuencia” son conocidas en el estado de la técnica y se refieren a una relación entre dos o más secuencias de polipéptidos o dos o más secuencias de polinucleótidos, a saber, una secuencia de referencia y una secuencia dada para compararla con la secuencia de referencia. La identidad de secuencia se determina comparando la secuencia dada con la secuencia de referencia después de que las secuencias se alinearon en forma óptima para obtener el mayor grado de similitud de secuencia, según se determina mediante la coincidencia de las cadenas de estas secuencias. Luego de la alineación, la identidad de secuencia se determina sobre la base de cada posición, por ejemplo, las secuencias son “idénticas” en una posición particular si, en esa posición, los nucleótidos o residuos de aminoácidos son idénticos. La cantidad total de esas identidades de posición luego se divide por la cantidad total de nucleótidos o residuos en la secuencia de referencia para obtener el % de identidad de secuencia. La identidad de secuencia se puede calcular fácilmente mediante los métodos conocidos, por ejemplo, los descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, Nueva York (1988), Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nueva York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, Nueva Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987); Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, Nueva York (1991); y Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Los métodos preferidos para determinar la identidad de secuencia están diseñados para obtener la mayor coincidencia entre las secuencias evaluadas. Los métodos para determinar la identidad de secuencia se encuentran codificados en programas informáticos disponibles al público, que determinan la identidad de secuencia entre las secuencias dadas. Los ejemplos de estos programas incluyen, entre otros, el paquete del programa GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN y FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990). El programa BLASTX está disponible al público de NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990). Estos programas alinean secuencias óptimamente usando ponderaciones de espacios predeterminados, a fin de lograr el mayor nivel de identidad de secuencia entre las secuencias dadas y las de referencia. A modo ilustrativo, un polinucleótido que tiene una secuencia de nucleótidos que tiene al menos, por ejemplo, 85 %, preferentemente, 90 %, con mayor preferencia, 95 % de “ identidad de secuencia” con respecto a una secuencia de nucleótidos de referencia significa que la secuencia de nucleótidos del polinucleótido dado es idéntica a la secuencia de referencia, excepto que la secuencia de polinucleótidos dada puede incluir hasta 15, preferentemente, hasta 10, con mayor preferencia, hasta 5 mutaciones puntuales por cada 100 nucleótidos de la secuencia de nucleótidos de referencia. En otras palabras, en un polinucleótido que tiene una secuencia de nucleótidos que tiene al menos 85 %, preferentemente, 90 %, aun con mayor preferencia, 95 % de identidad con la secuencia de nucleótidos de referencia, se puede eliminar o sustituir con otro nucleótido hasta 15 %, preferentemente, 10 %, aun con mayor preferencia, 5 % de los nucleótidos en la secuencia de referencia, o se pueden insertar en la secuencia de referencia varios nucleótidos hasta 15 %, preferentemente, 10 %, aun con mayor preferencia, 5 % del total de nucleótidos en la secuencia de referencia. Estas mutaciones de la secuencia de referencia pueden ocurrir en las posiciones del terminal 5' o 3' de la secuencia de nucleótidos de referencia o en cualquier lugar entre esas posiciones del terminal, intercaladas de manera individual entre los nucleótidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. De manera similar, un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos dada que tiene al menos, por ejemplo, 85 %, preferentemente, 90 %, con mayor preferencia, 95%de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos de referencia significa que la secuencia de aminoácidos dada del polipéptido es idéntica a la secuencia de referencia, excepto que la secuencia de polipéptidos dada puede incluir hasta 15, preferentemente, hasta 10, incluso con mayor preferencia, hasta 5 alteraciones de aminoácidos por cada 100 aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de referencia. En otras palabras, para obtener una secuencia de polipéptidos dada que tiene al menos 85 %, preferentemente, 90 %, con mayor preferencia, 95 % de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos de referencia, se pueden eliminar o sustituir con otro aminoácido hasta 15 %, preferentemente, hasta 10 %, con mayor preferencia, hasta 5 % de los residuos de aminoácidos en la secuencia de referencia o, en la secuencia de referencia, se pueden insertar varios aminoácidos hasta 15 %, preferentemente, hasta 10 %, con mayor preferencia, hasta 5 % de la cantidad total de residuos de aminoácidos en la secuencia de referencia. Estas alteraciones de la secuencia de referencia pueden ocurrir en las posiciones del terminal amino o carboxi de la secuencia de aminoácidos de referencia o en cualquier lugar entre esas posiciones del terminal, intercaladas de manera individual entre los residuos en la secuencia de referencia o en el uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. Preferentemente, las posiciones de residuos que no son idénticas difieren en las sustituciones conservadoras de aminoácidos. Sin embargo, las sustituciones conservadoras no se incluyen como coincidencias cuando se determina la identidad de secuencia.
Las expresiones “identidad”, "identidad de secuencia" y "porcentaje de identidad" se usan en la presente de manera indistinta. A los fines de la presente invención, se define en la presente que, para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos o dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean para lograr una comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir espacios en la secuencia de un primer aminoácido o ácido nucleico para lograr una alineación óptima con una segunda secuencia de aminoácidos o ácido nucleico). Luego se comparan los residuos de aminoácidos o nucleótidos en las posiciones de aminoácidos o nucleótidos correspondientes. Cuando una posición en la primera secuencia es ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente en la segunda secuencia, las moléculas son idénticas en esa posición. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función de la cantidad de posiciones idénticas compartidas por las secuencias [es decir, % de identidad= cantidad de posiciones idénticas/cantidad total de posiciones (por ejemplo, posiciones superpuestas) x 100]. Preferentemente, las dos secuencias son de la misma longitud.
Una comparación de secuencias se puede realizar sobre las longitudes completas de las dos secuencias que se comparan o sobre un fragmento de las dos secuencias. En general, la comparación se realiza sobre la longitud completa de las dos secuencias que se comparan. Sin embargo, la identidad de secuencia se puede realizar sobre una región de, por ejemplo, 20, 50, 100 o más residuos de aminoácidos contiguos.
La persona del oficio de nivel medio estará al tanto del hecho de que diversos programas de computadora se encuentran disponibles para determinar la homología entre dos secuencias. Por ejemplo, se puede lograr una comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias usando un algoritmo matemático. En una forma de realización preferida, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos o ácidos nucleicos se determina usando el algoritmo de Needleman y Wunsch (J. Mol. Biol. (48): 444 453 (1970)) que se ha incorporado en el programa GAP en el paquete de software GCG de Accelrys (disponible en http://www.accelrys.com/products/gcg/), usando una matriz Blosum 62 o una matriz PAM250, y un peso de espacio de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. La persona del oficio de nivel medio comprenderá que todos estos parámetros distintos arrojarán resultados ligeramente diferentes pero que el porcentaje de identidad general de dos secuencias no se modifica significativamente cuando se utilizan algoritmos diferentes.
Las secuencias de proteínas o las secuencias de ácidos nucleicos de la presente invención se pueden usar adicionalmente como una "secuencia de consulta" para realizar una búsqueda en bases de datos públicas con el fin de, por ejemplo, identificar otros miembros de la familia o secuencias relacionadas. Esas búsquedas se pueden realizar usando los programas BLASTN y BLASTP (versión 2.0) de Altschul, et al. 1990, J. Mol. Biol. 215:403-10. Las búsquedas de proteínas con BLAST pueden llevarse a cabo con el programa BLASTP, calificación=50, longitud de palabra=3, para obtener secuencias de aminoácidos homólogas a moléculas de la proteína de la invención. A fin de obtener alineaciones espaciadas para fines comparativos, se puede utilizar Gapped BLAST como se describe en Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402. Cuando se utilizan los programas BLAST y Gapped BLAST, se pueden usar los parámetros predeterminados de los respectivos programas (por ejemplo, BLASTP y BLASTN). Ver la página del National Center for Biotechnology Information en http://www.ncbi.nlm.nih.gov/.
Además, la presente invención proporciona una composición inmunógena que comprende la VP2 de PPV como se reivindica.
La expresión "composición inmunógena" se refiere a una composición que comprende al menos un antígeno, que provoca una respuesta inmunitaria en el huésped al que se le administra la composición inmunógena. La respuesta inmunitaria puede ser una respuesta inmunitaria celular y/o mediada por anticuerpos, a la composición inmunógena de la invención. Preferentemente, la composición inmunógena induce una respuesta inmunitaria y, con mayor preferencia, confiere inmunidad protectora contra uno o más de los signos clínicos de una infección por PPV. El huésped también se describe como “sujeto”. Preferentemente, cualquiera de los huéspedes o sujetos descritos o mencionados en la presente son cerdos.
En general, una "respuesta inmunitaria" incluye, por ejemplo, uno o más de los siguientes efectos: la producción o activación de anticuerpos, linfocitos B, linfocitos T colaboradores, linfocitos T supresores y/o linfocitos T citotóxicos y/o linfocitos T gamma-delta, dirigidos específicamente a un antígeno o antígenos incluidos en la composición inmunógena de la invención. Preferentemente, el huésped mostrará una respuesta inmunitaria protectora o una respuesta terapéutica.
Una “respuesta inmunitaria protectora” o “inmunidad protectora” se manifestará mediante una reducción o ausencia de los signos clínicos que generalmente exhibe un huésped infectado, un tiempo de recuperación más corto y/o una menor duración de la infectividad o un menor título de patógeno en los tejidos, fluidos corporales o excreciones del huésped infectado.
Cuando el huésped muestra una respuesta inmunitaria protectora tal que se mejora la resistencia a una nueva infección y/o se reduce la gravedad clínica de la enfermedad, la composición inmunógena se describe como una “vacuna”.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena se formula para la administración de una única dosis.
El volumen de una dosis única se define en otra parte en la presente.
La composición inmunógena se administra, preferentemente, por vía tópica o sistémica. Las vías de administración adecuadas que se usan habitualmente son las vías oral o parenteral, tales como las vías intranasal, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, y por inhalación. Sin embargo, según la naturaleza y el modo de acción de un compuesto, la composición inmunógena también se puede administrar por otras vías. Sin embargo, la composición inmunógena de máxima preferencia se administra por vía intramuscular.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena se administra por vía intramuscular.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es segura para cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas durante la preñez y la lactancia.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es segura para cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas de 30 días de gestación, preferentemente, de 40 días de gestación.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena también comprende un portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
La expresión "portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico" incluye cualquier solvente, medio de dispersión, recubrimiento, agente estabilizante, diluyente, conservante, agente antibacteriano y antifúngico, agente isotónico, agente de retraso de la adsorción, adyuvante, estimulante inmunitario y combinaciones de estos.
Los "diluyentes" pueden incluir agua, solución salina, dextrosa, etanol, glicerol y similares. Los agentes isotónicos pueden incluir cloruro de sodio, dextrosa, manitol, sorbitol y lactosa, entre otros. Los estabilizantes incluyen sales de albúmina y álcali de ácido etilendiamintetracético, entre otros.
En un aspecto de la presente invención, el portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico es un carbómero.
Preferentemente, la composición inmunógena además puede incluir uno o más agentes inmunomoduladores distintos tales como, por ejemplo, interleucinas, interferones, u otras citocinas. Las cantidades y concentraciones de adyuvantes y aditivos útiles en el contexto de la presente invención pueden ser determinadas fácilmente por una persona del oficio de nivel medio.
En algunos aspectos, la composición inmunógena de la presente invención contiene un adyuvante. Como se usa en la presente, el término “adyuvantes” puede incluir hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio, saponinas, por ejemplo, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), emulsiones de agua en aceite, emulsiones de aceite en agua y emulsiones de agua en aceite en agua. En particular, la emulsión puede ser a base de aceite ligero de parafina líquida (tipo farmacopea europea); aceite de isoprenoide, tal como escualano o escualeno; aceite obtenido de la oligomerización de alquenos, en particular, isobuteno o deceno, ésteres de ácidos o de alcoholes que contienen un grupo alquilo lineal, más en particular, aceites vegetales, oleato de etilo, propilenglicol di-(caprilato/caprato), gliceril tri-(caprilato/caprato) de glicerol o propilenglicol dioleato; ésteres de alcoholes o ácidos grasos ramificados, en particular, ésteres de ácido isoesteárico. El aceite se usa en combinación con emulgentes para formar la emulsión. Preferentemente, los emulgentes son tensioactivos no iónicos, en particular, ésteres de sorbitán, de manida (por ejemplo, oleato de anhidromanitol), de glicol, de poliglicerol, de propilenglicol y de ácido oleico, isosterárico, ricinoleico o hidroxiesteárico, que opcionalmente son etoxilados, y bloques de copolímeros de polioxipropileno-polioxietileno, en particular, los productos de Pluronic, en especial, L121. Ver Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.), JohnWiley and Sons, NY, pp51-94 (1995) y Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997). Los ejemplos de adyuvantes son la emulsión SPT descrita en la página 147 de “Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach” editado por M. Powell y M. Newman, Plenum Press, 1995, y la emulsión MF59 descrita en la página 183 del mismo libro.
Otro ejemplo de un adyuvante es un compuesto seleccionado de los polímeros de ácido acrílico o metacrílico y los copolímeros de anhídrido maleico y derivados de alquenilo. Los compuestos adyuvantes convenientes son los polímeros de ácido acrílico o metacrílico que se reticulan, en especial, con éteres de polialquenilo de azúcares o polialcoholes. Estos compuestos se conocen con el término carbómero (Phameuropa vol. 8, N.° 2, junio de 1996). Las personas del oficio de nivel medio también pueden remitirse a la patente estadounidense N.° 2.909.462, que describe dichos polímeros acrílicos reticulados con un compuesto polihidroxilado que tiene al menos 3 grupos hidroxilo, preferentemente, no más de 8; los átomos de hidrógeno de al menos 3 hidroxilos se reemplazan por radicales alifáticos insaturados que tienen al menos 2 átomos de carbono. Los radicales preferidos son los que contienen de 2 a 4 átomos de carbono, por ejemplo, vinilos, alilos y otros grupos etilénicamente insaturados. Los radicales insaturados pueden contener en sí mismos otros sustituyentes, tales como metilo. Son particularmente adecuados los productos comercializados con el nombre Carbopol; (BF Goodrich, Ohio, EEUU). Se reticulan con una sacarosa de alilo o con pentaeritritol de alilo. Entre ellos, se pueden mencionar Carbopol 974P, 934P y 971P Es de máxima preferencia el uso de Carbopol 971P. Entre los copolímeros de anhídrido maleico y derivados de alquenilo, se encuentran los copolímeros EMA (Monsanto), que son copolímeros de anhídrido maleico y etileno. La disolución de estos polímeros en agua genera una solución ácida que se neutraliza, preferentemente, a un pH fisiológico, a fin de obtener la solución adyuvante en la que se incorporará la composición inmunógena, inmunitaria o vacunal.
Otros adyuvantes adecuados incluyen, entre otros, el sistema de adyuvantes RIBI (Ribi Inc.), copolímero en bloque (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), lípido A monofosforilo, adyuvante de lípido-amina Avridine, enterotoxina termolábil deE. coli(recombinante u otra), toxina del cólera, IMS 1314 o dipéptido de muramilo, o citocinas naturales o recombinantes, o análogos de estas, o estimulantes de liberación de citocina endógena, entre muchos otros.
Se prevé la adición de un adyuvante en una cantidad de alrededor de 100 |jg a alrededor de 10 mg por dosis, preferentemente, en una cantidad de alrededor de 100 jg a alrededor de 10 mg por dosis, con mayor preferencia, en una cantidad de alrededor de 500 jg a alrededor de 5 mg por dosis, aún con mayor preferencia, en una cantidad de alrededor de 750 jg a alrededor de 2,5 mg por dosis y, con máxima preferencia, en una cantidad de alrededor de 1 mg por dosis. De manera alternativa, el adyuvante puede estar en una concentración de alrededor de 0,01 a 50 %, preferentemente, una concentración de alrededor de 2 % a 30 %, con mayor preferencia, una concentración de alrededor de 5 % a 25 %, aun con mayor preferencia, una concentración de alrededor de 7 % a 22 % y, con máxima preferencia, una concentración de 10 % a 20 % en volumen del producto final.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena comprende de 0,1 jg a 50 jg del antígeno VP2 de PPV. Preferentemente, la composición inmunógena comprende entre alrededor de 0,2 jg y 40 jg , con mayor preferencia, entre alrededor de 0,3 jg y 30 jg , con mayor preferencia, entre alrededor de 0,4 jg y 20 jg y, con aun mayor preferencia, entre alrededor de 0,5 jg y 10 jg con una cantidad de máxima preferencia de 0,5 jg , 0,75 jg , 1 jg , 1,25 jg , 1,5 jg , 2 j l , 2,5 jg , 3 jg , 3,5 jg , 4 jg , 4,5 jg , 5 jg , 5,5 jg , 6 jg , 6,5 jg , 7 jg , 7,5 jg , 8 jg , 8,5 jg , 9 jg , 9,5 jg o 10 jg del antígeno VP2 de PPV.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es una vacuna.
El término “vacuna” ya se describió en otra parte en la presente. Sin embargo, cuando el huésped muestra una respuesta inmunitaria protectora tal que se mejora la resistencia a una nueva infección y/o se reduce la gravedad clínica de la enfermedad, la composición inmunógena se describe como una “vacuna”.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena protege contra una exposición homóloga y/o heteróloga. De manera ventajosa, los datos experimentales proporcionados mediante la presente invención divulgan que la vacuna de la presente invención tiene un amplio espectro de protección dado que la vacuna protege contra cepas europeas de exposición heteróloga así como también cepas norteamericanas de exposición heteróloga.
Los términos “protege”, “profilaxis” y “prevención” se usan de manera indistinta en la presente solicitud. Estos términos se definen en otra parte en la presente.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena protege contra una exposición con aislados norteamericanos y/o europeos.
La expresión “aislados norteamericanos y europeos” es conocida por las personas del oficio de nivel medio. La expresión “aislados norteamericanos y europeos” comprende todos los aislados que se aislaron o se aislarán en América del Norte y Europa.
En un aspecto de la presente invención, la composición es de protección cruzada contra aislados norteamericanos y/o europeos.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es eficaz en el tratamiento y/o la profilaxis de signos clínicos causados por infección por PPV en un sujeto que lo necesita. Las expresiones “tratamiento y/o profilaxis”, “signos clínicos” y “que lo necesita” se definen en otra parte en la presente.
Asimismo, la presente invención proporciona un polinucleótido como se reivindica que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la VP2 de PPV como se describe en la presente.
Asimismo, la presente invención proporciona un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica para la VP2 de PPV como se reivindica.
Asimismo, la presente invención proporciona un polinucleótido que comprende o consiste en la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:4.
Asimismo, la presente invención proporciona un vector como se reivindica que comprende un polinucleótido como se reivindica.
En un aspecto de la presente invención, el vector es un vector de expresión.
En la presente invención, el vector es un vector de baculovirus.
El término “vector” es conocido por la persona del oficio de nivel medio. El término "vector", como se conoce en el estado de la técnica, se refiere a un constructo de polinucleótido, en general, un plásmido o un virus, que se usan para transmitir material genético a una célula huésped. Los vectores pueden ser, por ejemplo, virus, plásmidos, cósmidos o fagos. Un vector, como se usa en la presente, puede estar compuesto por ADN o ARN. En algunas formas de realización, un vector está compuesto por ADN. Un "vector de expresión” es un vector capaz de dirigir la expresión de una proteína codificada por uno o más genes transportados por el vector cuando está presente en el entorno adecuado. Preferentemente, los vectores son capaces de replicación autónoma. En general, un vector de expresión comprende un promotor de la transcripción, un gen y un terminador de la transcripción. La expresión génica se produce generalmente bajo el control de un promotor, y se dice que un gen está "ligado operativamente" al promotor.
Como se usa en la presente, la expresión "ligado operativamente" se usa para describir la conexión entre elementos reguladores y un gen o su región codificante. Generalmente, la expresión génica se controla mediante uno o más elementos reguladores, por ejemplo, promotores constitutivos o inducibles, elementos reguladores específicos de tejido y potenciadores, entre otros. Se dice que un gen o una región codificante están "ligados operativamente a" o "asociados operativamente a" los elementos reguladores, lo que significa que el gen o la región codificante son controlados o influenciados por el elemento regulador. Por ejemplo, un promotor está ligado operativamente a una secuencia codificante si el promotor realiza la transcripción o expresión de la secuencia codificante.
Los vectores y los métodos para realizar y/o usar los vectores (o recombinantes) para la expresión pueden ser los métodos descritos a continuación o análogos a estos: patentes estadounidenses N.° 4.603.112, 4.769.330, 5.174.993, 5.505.941, 5.338.683, 5.494.807, 4.722.848, 5.942.235, 5.364.773, 5.762.938, 5.770.212, 5.942.235, 382.425, publicaciones PCT WO 94/16716, WO 96/39491, WO 95/30018; Paoletti, "Applications of pox virus vectors to vaccination: An update”, PNAS USA 93: 11349-11353, octubre de 1996; Moss, "Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression, vaccination, and safety", PNAS USA 93: 11341-11348, octubre de 1996; Smith et al., patente estadounidense N.° 4.745.051(baculovirus recombinante); Richardson, C. D. (Editor), Methods in Molecular Biology 39, "Baculovirus Expression Protocols" (1995 Humana Press Inc.); Smith et al., "Production of Human Beta Interferon in Insect Cells Infected with a Baculovirus Expression Vector", Molecular and Cellular Biology, diciembre de 1983, volumen 3, N.° 12, p. 2156-2165; Pennock et al., "Strong and Regulated Expression of Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus vector” Molecular and Cellular Biology, marzo de 1984, volumen. 4, N.° 3, p. 406; EPA0 370 573; solicitud estadounidense N.° 920.197, presentada el 16 de octubre de1986; publicación de patente EP N.° 0 265 785; patente estadounidense N.° 4.769.331 (virus del herpes recombinante); Roizman, "The function of herpes simplex virus genes: A primer for genetic engineering of novel vectors", PNAS USA 93:11307-11312, octubre de 1996; Andreansky et al., "The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors", PNAS USA 93: 11313-11318, octubre de 1996; Robertson et al., "Epstein-Barr virus vectors for gene delivery to B lymphocytes", PNAS USA 93: 11334-11340, octubre de 1996; Frolov et al., "Alphavirus-based expression vectors: Strategies and applications", PNAS USA 93: 11371-11377, octubre de 1996; Kitson et al., J. Virol. 65, 3068-3075, 1991; patentes estadounidenses N.os 5.591.439, 5.552.143; WO 98/00166; solicitud estadounidense otorgada actas N.os 08/675.556 y 08/675.566, ambas presentadas el 3 de julio de 1996 (adenovirus recombinante); Grunhaus et al., 1992, "Adenovirus as cloning vectors," Seminars in Virology (Vol. 3) p. 237-52, 1993; Ballay et al. EMBO Journal, volumen 4, p. 3861-65, Graham, Tibtech 8, 85-87, abril de 1990; Prevec et al., J. Gen Virol. 70, 42434; PCT WO 91/11525; Felgner et al. (1994), J. Biol. Chem. 269, 2550-2561, Science, 259: 1745-49, 1993; y McClements et al., "Immunization with DNA vaccines encoding glycoprotein D or glycoprotein B, alone or in combination, induces protective immunity in animal models of herpes simplex virus-2 disease", PNAS USA 93: 11414-11420, octubre de 1996; y patentes estadounidenses N.os 5.591.639, 5.589.466 y 5.580.859, así como WO 90/11092, WO 93/19183, WO 94/21797, WO 95/11307, WO 95/20660; Tang et al., Nature and Furth et al., Analytical Biochemistry, en referencia a vectores de expresión de ADN, entre otros. Ver también WO 98/33510; Ju et al., Diabetologia, 41: 736-739, 1998 (sistema de expresión lentiviral); Sanford et al., patente estadounidense N.° 4.945.050; Fischbachet al. (Intracel); WO 90/01543; Robinson et al., Seminars in Immunology volumen 9, pp. 271 283 (1997), (sistema de vectores de ADN); Szoka et al., patente estadounidense N.° 4.394.448 (método de inserción de ADN en células vivas); McCormick et al., patente estadounidense N.° 5.677.178 (uso de virus citopáticos); y patente estadounidense N.° 5.928.913 (vectores para administración de genes); así como otros documentos citados en la presente.
Las expresiones "elemento regulador" y "elemento de control de la expresión" se usan de manera indistinta y se refieren a las moléculas de ácido nucleico que pueden tener influencia en la expresión de una secuencia codificante ligada operativamente en un organismo huésped particular. Estos términos y expresiones se usan ampliamente y cubren todos los elementos que promueven o regulan la transcripción, que incluyen promotores, elementos del núcleo que se requieren para la interacción básica de la ARN polimerasa y los factores de transcripción, elementos corriente arriba, potenciadores y elementos de respuesta. Los ejemplos de elementos reguladores en procariotas incluyen promotores, secuencias operadoras y sitios de fijación de ribosoma. Los elementos reguladores que se usan en las células eucariotas pueden incluir, entre otros, las secuencias de control de la transcripción y la traducción, tales como promotores, potenciadores, señales de empalme, señales de poliadenilación, terminadores, señales de degradación de la proteína, elemento interno de entrada al ribosoma (IRES), secuencias 2A y similares, que mantienen y/o regulan la expresión de una secuencia codificante y/o la producción de un polipéptido codificado en una célula huésped.
Como se usa en la presente, el término "promotor” es una secuencia de nucleótidos que permite la fijación de ARN polimerasa y dirige la transcripción de un gen. En general, un promotor está ubicado en la región 5' no codificante de un gen, cerca del sitio de inicio de la transcripción del gen. En general, los elementos de la secuencia dentro de los promotores que participan en la iniciación de la transcripción se caracterizan por secuencias de nucleótidos de consenso. Los ejemplos de promotores incluyen, entre otros, promotores de virus, levadura, plantas, bacterias y mamíferos (que incluyen seres humanos). Un promotor puede ser inducible, reprimible y/o constitutivo. Los promotores inducibles inician el aumento de los niveles de transcripción del ADN bajo su control en respuesta a una modificación en las condiciones de cultivo, tal como un cambio en la temperatura.
Como se usa en la presente, el término "potenciador" se refiere a un tipo de elemento regulador que aumenta la eficacia de la transcripción, independientemente de la distancia u orientación del potenciador con respecto al sitio de inicio de la transcripción.
La generación de un vector viral se puede lograr con el uso de técnicas de ingeniería genética adecuadas conocidas en el estado de la técnica, que incluyen, entre otras, las técnicas estándares de digestión con endonucleasas de restricción, ligadura, transformación, purificación de plásmidos y secuenciación de ADN, por ejemplo, como se describe en Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y (1989)).
El término “baculovirus” es conocido por la persona del oficio de nivel medio. Sin embargo, como se usa en la presente, “baculovirus” significa, en particular, un sistema para producir una proteína deseada en una célula de insecto usando un vector de baculovirus recombinante diseñado para expresar dicha proteína. Un sistema de expresión de baculovirus generalmente comprende todos los elementos necesarios para lograr la expresión de proteínas recombinantes en células de insecto y, en general, implica la modificación por ingeniería genética de un vector de baculovirus para expresar una proteína deseada, la introducción del vector de baculovirus modificado por ingeniería genética en células de insecto, el cultivo de células de insecto que contienen el vector de baculovirus modificado por ingeniería genética en un medio de cultivo adecuado de modo que se exprese la proteína deseada, y la recuperación de la proteína. En general, la modificación por ingeniería genética de un vector de baculovirus implica la construcción y el aislamiento de baculovirus recombinantes en los que la secuencia de codificación para un gen elegido se inserta detrás del promotor para un gen viral no esencial, en donde la mayoría de los sistemas de expresión de baculovirus utilizados en la presente se basan en la secuencia del virus de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcMNPV) ((Virology 202 (2), 586-605 (1994), N.° de acceso de NCBI: NC_001623). Los sistemas de expresión de baculovirus se conocen en el estado de la técnica y se describieron, por ejemplo, en “Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual” de David R. O'Reilly, Lois Miller, Verne Luckow, pub. de Oxford Univ. Press (1994), “The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide” de Linda A. King, R. D.
Possee, publicado por Chapman & Hall (1992). Un ejemplo no limitativo de un sistema de baculovirus para producir una proteína recombinante se describe, por ejemplo, en WO 2006/072065 A2.
Los vectores de baculovirus preferidos incluyen baculovirus, tales como BaculoGold (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, Calif.) o DiamondBac (Sigma Aldrich), particularmente, si las células de producción son células de insecto. Aunque se prefiere el sistema de expresión de baculovirus, las personas del oficio de nivel medio comprenden que otros sistemas de expresión funcionarán para los fines de la presente invención.
Asimismo, la presente invención proporciona una célula como se reivindica que comprende el polinucleótido o el vector como se reivindica.
El término “célula” es conocido por la persona del oficio de nivel medio. El término “célula” comprende una célula eucariota tal como una célula animal, célula protista, célula vegetal o célula de un hongo. Preferentemente, la célula eucariota es una célula de mamífero, tal como CHO, BHK o COS, una célula de un hongo, tal comoSaccharomyces cerevisiae,o una célula de insecto, tal como Sf9.
En la presente invención, la célula es una célula de insecto como se reivindica.
Como se usa en la presente, “célula de insecto” significa una célula o un cultivo celular derivado de una especie de insecto. Las células de insecto derivadas de las especiesSpodoptera frugiperdayTrichoplusia nison de particular interés con respecto a la presente invención.
Preferentemente, la célula de insecto, como se mencionó en la presente, es una célula deSpodoptera frugiperda(Sf) o una célula de una línea celular derivada deSpodoptera frugiperday, con mayor preferencia, se selecciona del grupo que consiste en célula Sf9 y célula Sf+. Respectivamente, las células de insecto, como se mencionó en la presente, son preferentemente células deSpodoptera frugiperda(Sf) o células de una línea celular derivada deSpodoptera frugiperday, con mayor preferencia, se seleccionan del grupo que consiste en células Sf9 y células Sf+.
En la presente invención, la célula de insecto se selecciona del grupo que consiste en células Sf9 y células Sf+.
Asimismo, la presente invención proporciona una partícula tipo virus que comprende la VP2 de PPV como se reivindica.
La expresión “partícula tipo virus” (VLP) comprende una cápsula vírica vacía que no se replica de un virus. En general, las<v>L<p>están compuestas por una o más proteínas virales, tales como, entre otras, aquellas proteínas denominadas proteínas de cápside, recubrimiento, cápsula, superficie y/o envoltura, o polipéptidos formadores de partículas derivados de estas proteínas. Las VLP se pueden formar de manera espontánea tras expresión recombinante de la proteína en un sistema de expresión apropiado. La presencia de VLP tras expresión recombinante de proteínas virales se puede detectar mediante técnicas convencionales conocidas en el estado de la técnica, tales como microscopía de electrones, cristalografía de rayos X, y similares. Ver, por ejemplo, Baker et al. , Biophys. J. (1991) 60 :1445-1456; Hagensee et al. , J. Virol . (1994) 68:4503-4505. Por ejemplo, la microscopía de crioelectrones se puede llevar a cabo en muestras acuosas vitrificadas de la preparación de VLP en cuestión, e imágenes registradas en condiciones de exposición apropiadas.
La expresión “partícula tipo virus” (VLP) también comprende VLP que están compuestas por una pluralidad de VP2 de PPV.
En un aspecto de la presente invención, la partícula tipo virus está compuesta por una pluralidad de la VP2 de PPV como se describe en la presente.
Asimismo, la presente invención proporciona un método para producir la VP2 de PPV como se reivindica, que comprende transfectar una célula con el vector como se reivindica.
Asimismo, la presente invención proporciona un método para producir la VP2 de PPV como se reivindica, que comprende infectar una célula de insecto como se reivindica, con el vector de baculovirus como se reivindica.
Si se desea, las composiciones se pueden presentar en un envase o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas de dosis unitarias que contienen el ingrediente activo. Por ejemplo, el envase puede comprender una lámina de metal o de plástico, tal como un blíster. El envase o el dispositivo dispensador pueden tener instrucciones para la administración, preferentemente, para la administración a animales, en especial, cerdos. Asociado al recipiente puede haber un aviso prescrito por una agencia gubernamental que regula la fabricación, el uso o la venta de productos farmacéuticos o biológicos, en donde el aviso contiene la aprobación de la agencia de fabricar, usar o vender para la administración en seres humanos.
De este modo, se describe en la presente un kit que comprende la VP2 de PPV o la composición inmunógena como se describe en la presente.
Opcionalmente, el kit también comprende una carta con instrucciones para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades de cerdos.
Opcionalmente, el kit también comprende una carta con instrucciones para el tratamiento y/o la profilaxis de infecciones por PPV.
En otro aspecto de la presente invención, se inactivó el virus PPV lo que produjo un virus entero inactivado con una proteína viral 2 (VP2) como se reivindica.
De este modo, la presente invención también se refiere a un parvovirus porcino (PPV) inactivado que tiene una proteína viral 2 (VP2) que comprende
- un residuo de isoleucina en la posición aminoácida 25, y
- un residuo de serina en la posición 36 del aminoácido, y
- un residuo de isoleucina en la posición 37 del aminoácido, y
- un residuo de ácido glutámico o un residuo de glutamato en la posición 228 del aminoácido, y
- un residuo de serina en la posición 414 del aminoácido, y
- un residuo de glutamina en la posición 419 del aminoácido, y
- un residuo de treonina en la posición 436 del aminoácido,
en donde la numeración de la posición del aminoácido se refiere a la secuencia del aminoácido del VP2 del PPV tipo silvestre como se muestra en SEQ ID NO: 1.
Asimismo, la presente invención también se refiere a un parvovirus porcino (PPV) inactivado que tiene una proteína viral 2 (VP2) que comprende
- un residuo de isoleucina en la posición aminoácida 25, y
- un residuo de serina en la posición 36 del aminoácido, y
- un residuo de isoleucina en la posición 37 del aminoácido, y
- un residuo de ácido glutámico o un residuo de glutamato en la posición 228 del aminoácido, y
- un residuo de serina en la posición 414 del aminoácido, y
- un residuo de glutamina en la posición 419 del aminoácido, y
- un residuo de treonina en la posición 436 del aminoácido,
en donde la numeración de la posición del aminoácido se refiere a la secuencia del aminoácido del VP2 del PPV tipo silvestre como se muestra en SEQ ID NO: 1.
Asimismo, la presente invención también se refiere a una composición inmunógena que comprende un parvovirus porcino (PPV) inactivado que tiene una proteína viral 2 (VP2) como se describe en la presente.
A los fines de la presente invención, se puede usar cualquier método de "inactivación" convencional. Por ello, la inactivación se puede llevar a cabo mediante tratamientos químicos y/o físicos conocidos por los expertos en el arte. Los métodos de inactivación preferidos incluyen la adición de etilenimina binaria ciclizada (BEI), que incluye la adición de una solución de bromhidrato de 2-bromoetilenamina (BEA), que se ciclizó en etilenimina binaria (BEI). Otros agentes de inactivación química preferidos comprenden, entre otros, Triton X-100, desoxicolato de sodio, bromuro de cetiltrimetilamonio, p-propiolactona, timerosal, fenol y formaldehído (formalina). Sin embargo, la inactivación también puede comprender una etapa de neutralización. Los agentes de neutralización preferidos incluyen, entre otros, tiosulfato de sodio, bisulfito de sodio y similares.
Las condiciones de inactivación de formalina preferidas incluyen una concentración de formalina de alrededor de 0,02% (v/v) - 2,0% (v/v), con mayor preferencia, alrededor de 0,1% (v/v) - 1,0% (v/v), aun con mayor preferencia, alrededor de 0,15% (v/v) - 0,8% (v/v), aun con mayor preferencia, alrededor de 0,16% (v/v) - 0,6% (v/v) y, con máxima preferencia, alrededor de 0,2% (v/v) - 0,4% (v/v). El tiempo de incubación depende de la resistencia del PPV. En general, el proceso de inacción se realiza hasta que ya no se detecte el crecimiento de PPV en un sistema de cultivo adecuado.
Preferentemente, el PPV inactivado de la presente invención es inactivado con formalina, preferentemente, usando las concentraciones descritas en la presente con anterioridad.
El PPV inactivado de la invención se puede incorporar en los liposomas usando la tecnología conocida, por ejemplo, como se describe en Nature, 1974, 252, 252-254 o Journal of Immunology, 1978, 120, 1109-13. En otra forma de realización de la invención, el PPV inactivado de la invención se puede conjugar con compuestos biológicos adecuados, tales como polisacáridos, péptidos, proteínas o similares, o una combinación de estos.
La presente invención también se refiere al uso de:
- la VP2 de PPV como se reivindica,
- la composición inmunógena como se reivindica,
- el polinucleótido como se reivindica,
- el vector como se reivindica,
- la célula como se reivindica,
- el vector de baculovirus como se reivindica, y/o
- las partículas tipo virus como se reivindica,
para la preparación de un medicamento, preferentemente, de una vacuna.
La presente invención también se refiere al uso de la VP2 de PPV como se reivindica o la composición inmunógena como se reivindica para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de una infección por PPV, la reducción, la prevención y/o el tratamiento de signos clínicos causados por una infección por PPV y/o para el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad causada por una infección por PPV.
La presente invención también proporciona usos en un método para inmunizar un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una composición inmunógena como se reivindica.
El término "inmunizar" se refiere a la inmunización activa mediante la administración de una composición inmunógena a un sujeto que se inmunizará, lo cual genera una respuesta inmunitaria contra el antígeno incluido en la composición inmunógena.
Preferentemente, la inmunización provoca una disminución de la incidencia de la infección por PPV particular en una manada y/o una reducción de la gravedad de los signos clínicos causados por la infección por<p>P<v>particular o asociados a esta.
Además, la inmunización de un sujeto que lo necesita, con las composiciones inmunógenas provistas en la presente, da como resultado la prevención de la infección por PPV en un sujeto. Aun con mayor preferencia, la inmunización provoca una respuesta inmunológica duradera y eficaz contra la infección por PpV. Cabe destacar que este período durará más de 1 mes, preferentemente, más de 2 meses, preferentemente, más de 3 meses, con mayor preferencia, más de 4 meses, con mayor preferencia, más de 5 meses, con mayor preferencia, más de 6 meses. Cabe destacar que la inmunización puede no ser eficaz en todos los sujetos inmunizados. Sin embargo, el término requiere que una porción considerable de sujetos de una manada sean inmunizados eficazmente.
Con preferencia, en este contexto, se prevé una manada de sujetos que normalmente, es decir, sin inmunización, desarrollará signos clínicos causados por una infección por PPV o asociados a esta. Una persona del oficio de nivel medio puede determinar fácilmente si los sujetos de una manada están eficazmente inmunizados. Preferentemente, la inmunización será eficaz si la incidencia o gravedad de los signos clínicos en al menos 33 %, al menos 50 %, al menos 60 %, al menos 70 %, al menos 80 %, al menos 90 %, aun con mayor preferencia, al menos 95 % y, con máxima preferencia, 100 % de los sujetos de una manada determinada disminuyen en al menos 10 %, con mayor preferencia, al menos 20 %, aun con mayor preferencia, al menos 30 %, aun con mayor preferencia, al menos 40 %, aun con mayor preferencia, al menos 50 %, aun con mayor preferencia, al menos 60 %, aun con mayor preferencia, al menos 70 %, aun con mayor preferencia, al menos 80 %, aun con mayor preferencia, al menos 90 %, aun con mayor preferencia, al menos 95 % y, con máxima preferencia, 100 % en comparación con los sujetos no inmunizados o inmunizados con una composición inmunógena que estaba disponible antes de la presente invención, pero que posteriormente fueron infectados por el PPV particular.
Además, la presente invención proporciona usos en un método para tratar y/o prevenir signos clínicos causados por infección por PPV en un sujeto que lo necesita, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición inmunógena como se reivindica.
De manera ventajosa, como se muestra en la sección Ejemplos de la presente, se demostró que la composición inmunógena que se proporciona en la presente es eficaz para tratar y/o prevenir los signos clínicos causados por infección por PPV en un sujeto que lo necesita.
La expresión "tratamiento y/o profilaxis” se refiere a disminuir la incidencia de la infección por PPV particular en una manada y/o a reducir la gravedad de los signos clínicos causados por la infección por PPV particular o asociados a esta. Por ello, la expresión "tratamiento y/o profilaxis” también se refiere a la reducción de la cantidad de animales en una manada infectados por PPV particular (= disminución de la incidencia de la infección por PPV particular) y/o la reducción de la gravedad de los signos clínicos generalmente asociados a o causados por una infección por PPV en un grupo de animales que recibió una cantidad eficaz de la composición inmunógena provista en la presente en comparación con un grupo de animales que no recibió la composición inmunógena.
En general, “tratamiento y/o profilaxis” incluye la administración de una cantidad eficaz de la composición inmunógena de la presente invención a un sujeto o una manada de sujetos que la necesita o que podría beneficiarse del tratamiento/profilaxis. El término “tratamiento” se refiere a la administración de una cantidad eficaz de la composición inmunógena una vez que el sujeto o al menos algunos animales de la manada ya están infectados por PPV, y en donde estos animales ya muestran algunos signos clínicos causados por o asociados a la infección por PPV. El término “profilaxis” se refiere a la administración de un sujeto antes de que sea infectado por PPV o al menos cuando el animal o ninguno de los animales en un grupo animales muestra signos clínicos causados por o asociados a la infección por dicho PPV. Los términos “profilaxis” y “prevención” se usan de manera indistinta en la presente solicitud.
Como se usa en la presente, la expresión "una cantidad eficaz" significa, por ejemplo, una cantidad de antígeno que provoca o es capaz de provocar una respuesta inmunitaria en un sujeto. La cantidad eficaz puede disminuir la incidencia de la infección por PPV particular en una manada y/o reducir la gravedad de los signos clínicos de la infección por PPV particular.
Preferentemente, la incidencia o gravedad de los signos clínicos disminuyen en al menos 10 %, con mayor preferencia, al menos 20 %, aun con mayor preferencia, al menos 30 %, aun con mayor preferencia, al menos 40 %, aun con mayor preferencia, al menos 50 %, aun con mayor preferencia, al menos 60 %, aun con mayor preferencia, al menos 70 %, aun con mayor preferencia, al menos 80 %, aun con mayor preferencia, al menos 90 %, aun con mayor preferencia, al menos 95 % y con máxima preferencia 100 %, en comparación con los sujetos no tratados o tratados con una composición inmunógena que estaba disponible antes de la presente invención, pero que posteriormente fueron infectados por PPV particular.
Como se usa en la presente, la expresión “signos clínicos” se refiere a signos de una infección en un sujeto causada por PPV. Los signos clínicos de la infección dependen del patógeno seleccionado. Los ejemplos de dichos signos clínicos incluyen, entre otros, leucopenia transitoria e insuficiencia reproductiva caracterizadas por muerte e infección embrionaria y/o fetal, o combinaciones de estas. Los ejemplos de signos clínicos que se pueden observar directamente incluyen menor tamaño de la camada, aumento de momificaciones en embrión o feto por camada, embrión o feto autolisado, peso reducido del embrión o feto y similares, o combinaciones de estos. Otros ejemplos de dichos signos clínicos incluyen, entre otros, viremia aumentada, mayor carga viral en tejidos diana y sangre, mayor propagación de transmisión/diseminación de PPV entre los cerdos de la jaula y similares, y combinaciones de estos.
Preferentemente, los signos clínicos que se redujeron en incidencia o gravedad en un sujeto tratado en comparación con sujetos no tratados o tratados con una composición inmunógena que estuvo disponible antes de la presente invención, pero infectados posteriormente por PPV particular, se refieren a leucopenia transitoria e insuficiencia reproductiva caracterizadas por muerte e infección embrionaria y/o fetal, o combinaciones de estas.
Como se usa en la presente, la expresión “que lo necesita” significa que la administración o tratamiento está asociado al refuerzo o a la mejora de la salud o los signos clínicos o cualquier otro efecto medicinal positivo en la salud de los animales (incluidos sus embriones o fetos) que reciben la composición inmunógena de acuerdo con la presente invención.
Los términos “reducir” o “reducido” o “reducción” o “menor” se usan de manera indistinta en esta solicitud. El término “reducción” significa que los signos clínicos se reducen en al menos 10 %, con mayor preferencia, en al menos 20 %, aun con mayor preferencia, en al menos 30 %, incluso con mayor preferencia, en al menos 40 %, aun con mayor preferencia, en al menos 50 %, incluso con mayor preferencia, en al menos 60 %, aun con mayor preferencia, en al menos 70 %, incluso con mayor preferencia, en al menos 80 %, incluso con mayor preferencia, en al menos 90 %, aun con mayor preferencia, en al menos 95 %, con máxima preferencia en 100 %, en comparación con los sujetos no tratados (no inmunizados) pero infectados posteriormente por el PPV particular.
Además, las composiciones imunogénicas de la presente invención se pueden usar en un método para reducir la insuficiencia reproductiva en un sujeto, en comparación con un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición inmunógena como se reivindica.
De manera ventajosa, como se muestra en la sección Ejemplos de la presente, se demostró que la composición inmunógena que se proporciona en la presente es eficaz para reducir la insuficiencia reproductiva.
Además, las composiciones inmunogénicas de la presente invención se pueden usar en un método para reducir la muerte embrionaria y fetal en un sujeto, en comparación con un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición inmunógena como se reivindica.
De manera ventajosa, como se muestra en la sección Ejemplos de la presente, se demostró que la composición inmunógena que se proporciona en la presente es eficaz para reducir la muerte embrionaria y fetal.
Además, las composiciones inmunogénicas de la presente invención se pueden usar en un método para la inmunización activa de cerdas de cría (cerdas primíparas y cerdas nulíparas) para la protección de embriones y fetos contra la infección por parvovirus porcino, en donde el método comprende administrar a dichas cerdas (cerdas primíparas y cerdas nulíparas) una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición inmunógena como se reivindica.
En un aspecto de la presente invención, dicho sujeto se selecciona de un grupo que consiste en cerdos, ganado vacuno, gatos y perros.
Preferentemente, dicho sujeto es un cerdo. Cabe destacar que el término “cerdos” comprende animales hembra y macho. El semen puede contener PPV y, por ese motivo, los animales de cría hembra y macho se incluyen en el término “cerdos”. De este modo, el término “cerdos” comprende animales tales como jabalíes así como animales hembra, tales como, cerdas primíparas y cerdas nulíparas.
La expresión “cerda nulípara”, como se usa en la presente, se refiere a un porcino, preferentemente, una cerda, antes y durante la preñez/gestación. En contraposición, la expresión “cerda primípara”, como se usa en la presente, se refiere a un porcino, preferentemente, una cerda, después del primer parto, como resultado positivo de su primera preñez/gestación.
En un aspecto de la presente invención dicho sujeto es un cerdo, preferentemente, una cerda nulípara y/o cerda primípara.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena se administra una sola vez.
Se entiende que una dosis única se administra una sola vez.
El volumen de dosis por sujeto depende de la vía de vacunación y de la edad del sujeto. Preferentemente, la dosis única tiene un volumen total de alrededor de 0,2 ml a 2,5 ml, con mayor preferencia, de alrededor de 0,2 ml a 2,0 ml, aun con mayor preferencia, de alrededor de 0,2 ml a 1,75 ml, aun con mayor preferencia, de alrededor de 0,2 ml a 1,5 ml, aun con mayor preferencia, de alrededor de 0,4 ml a 1,25 ml, aun con mayor preferencia, de alrededor de 0,4 ml a 1,0 ml, y con máxima preferencia, una dosis única de 1,0 ml. Con máxima preferencia, la dosis única tiene un volumen total de 0,5 ml, 1 ml, 1,5 ml o 2 ml.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena se administra en dos o más dosis.
Como se indica en la sección Ejemplos de la presente, la composición inmunógena proporcionada en la presente demostró ser eficaz después de la administración de dos dosis a un sujeto que lo necesita.
Sin embargo, la composición inmunógena se puede administrar en dos o más dosis; la primera dosis se administra antes de una segunda dosis (refuerzo). Preferentemente, la segunda dosis se administra al menos 15 días después de la primera dosis. Con mayor preferencia, la segunda dosis se administra de 15 días a 40 días después de la primera dosis. Aun con mayor preferencia, la segunda dosis se administra al menos 17 días después de la primera dosis. Aun con mayor preferencia, la segunda dosis se administra de 17 días a 30 días después de la primera dosis. Aun con mayor preferencia, la segunda dosis se administra al menos 19 días después de la primera dosis. Aun con mayor preferencia, la segunda dosis se administra de 19 días a 25 días después de la primera dosis. Con máxima preferencia, la segunda dosis se administra al menos 21 días después de la primera dosis. Aun con mayor preferencia, la segunda dosis se administra alrededor de 21 días después de la primera dosis o 21 días después de la primera dosis. En un aspecto preferido del régimen de administración de dos veces, la primera y la segunda dosis de la composición inmunógena se administran en la misma cantidad. Preferentemente, cada dosis se encuentra en las cantidades preferidas especificadas anteriormente; con máxima preferencia, la primera y la segunda dosis son de 1 ml o 2 ml. Además del régimen con una primera y segunda dosis, una forma de realización alternativa también comprende dosis posteriores. Por ejemplo, en estos aspectos, se puede administrar una tercera, una cuarta o una quinta dosis. Preferentemente, los regímenes con una tercera, cuarta y quinta dosis posteriores se administran en la misma cantidad que la primera dosis; el lapso de tiempo entre las dosis debe ser coherente con el tiempo que transcurre entre la primera y la segunda dosis mencionadas anteriormente.
El volumen de dosis por sujeto depende de la vía de vacunación y de la edad del sujeto. Preferentemente, el volumen total es de alrededor de 0,2 ml y 5 ml, con mayor preferencia, de alrededor de 0,5 ml a 3,0 ml, incluso con mayor preferencia de alrededor de 1,0 ml a 2,5 ml, incluso con mayor preferencia, de alrededor de 1,0 ml a 2,0 ml. Con máxima preferencia, el volumen es 1 ml, 1,5 ml, 2 ml o 2,5 ml por dosis.
La composición inmunógena se administra, preferentemente, por vía tópica o sistémica. Las vías de administración adecuadas que se usan habitualmente son las vías oral o parenteral, tales como las vías intranasal, intravenosa, intradérmica, transdérmica, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, y por inhalación. Sin embargo, según la naturaleza y el modo de acción de un compuesto, la composición inmunógena también se puede administrar por otras vías. Por ejemplo, estas otras vías incluyen la vía intracutánea, intravenosa, intravascular, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intratraqueal, intracutánea, intracardíaca, intralobulillar, intralobar, intramedular, intrapulmonar, intratecal e intravaginal. Sin embargo, la composición inmunógena de mayor preferencia se administra por vía subcutánea o intramuscular. La composición inmunógena de máxima preferencia se administra por vía intramuscular.
En un aspecto de la presente invención, dicha composición inmunógena se administra por vía intramuscular.
En un aspecto de la presente invención, dicha composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas.
Preferentemente, la composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas de al menos 3 meses de edad, con mayor preferencia, al menos 4 meses de edad, con máxima preferencia, al menos 5 meses de edad.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas de al menos 3 meses de edad.
En un aspecto de la presente invención, dicha composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas antes de la preñez.
En un régimen de 2 inyecciones, la segunda dosis de dicha composición inmunógena se administra, preferentemente, a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas 2, 3, 4 o 5 semanas antes del apareamiento/inseminación, con máxima preferencia, alrededor de 3 semanas antes del apareamiento/inseminación. Preferentemente, la primera dosis de dicha composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas 2, 3, 4, 5 o 6 semanas antes de administrar la segunda dosis, con máxima preferencia, alrededor de 3 semanas antes de administrar la segunda dosis. Sin embargo, después de la aplicación de un régimen de 2 inyecciones las cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas se vuelven a vacunar, preferentemente, cada 3, 4, 5, 6, 7 o 8 meses, con máxima preferencia, cada 6 meses.
En un aspecto de la presente invención, dicha composición inmunógena se administra a cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas durante la preñez y lactancia.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es segura para cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas durante la preñez y lactancia.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena es segura para cerdas nulíparas y/o cerdas primíparas de 30 días de gestación, preferentemente, de 40 días de gestación.
Preferentemente, la composición inmunógena de la presente invención comprende de 0,1 |jg a 50 |jg, preferentemente, de 0,25 jg a 25 jg , con mayor preferencia, de 0,5 jg a 12,5 jg , incluso con mayor preferencia, de 0,5 jg a 5 jg , con máxima preferencia, de 0,5 jg a 2 jg del antígeno VP2 de PPV Con mayor preferencia, la composición inmunógena de la presente invención comprende el antígeno VP2 de PPV de la presente invención en cantidades de alrededor de 0,25 jg , 0,5 jg , 0,75 jg , 1 jg , 1,25 jg , 1,5 jg , 1,75 jg , 2 jg , 2,25 jg , 2,5 jg , 2,75 jg , 3 jg , 3,5 jg , 4 jg , 4,5 jg o 5 jg .
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena comprende de 0,1 jg a 50 jg del antígeno VP2 de PPV, preferentemente, de 0,5 jg a 10 jg del antígeno VP2 de PPV.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena protege contra una exposición homóloga y/o heteróloga.
En un aspecto de la presente invención, la composición inmunógena protege contra una exposición con aislados norteamericanos y/o europeos.
En un aspecto de la presente invención, la composición es de protección cruzada contra aislados norteamericanos y/o europeos.
En un aspecto de la presente invención, dicho método genera una mejora en un parámetro de eficacia seleccionado del grupo que consiste en: insuficiencia reproductiva y leucopenia transitoria reducida que se caracterizan por infección y muerte embrionaria y/o fetal, o combinaciones de estas, en comparación con un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie.
En un aspecto de la presente invención, dicho método genera una mejora en un parámetro de eficacia seleccionado del grupo que consiste en: menor tamaño de la camada, aumento de momificaciones en embrión o feto por camada, embrión o feto autolisado, tamaño reducido del embrión o feto, peso reducido del embrión o feto, viremia aumentada, mayor carga viral en tejidos diana y sangre, mayor propagación de transmisión/diseminación de PPV entre los cerdos de la jaula, o combinaciones de estos, a un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se indican a continuación para ilustrar formas de realización específicas de la presente invención. Estos ejemplos son meramente ilustrativos y no limitan el alcance o los principios fundamentales de la presente invención.
Ejemplo 1:
Preparación de vacuna subunitaria contra PPV
El antígeno VP2 de PPV se seleccionó para expresarse en células de insecto infectadas con baculovirus a base del aislado PPV 27a alemán. La secuencia de nucleótidos de VP2 de parvovirus porcino (PPV) 27a se obtuvo del acceso Genbank AY684871.1. La región codificante de VP2 de PPV 27a se tradujo en el sentido inverso y se optimizó mediante codones para Drosophila (SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:3). El gen VP2 de PPV 27a optimizado mediante codones se sintetizó químicamente en Integrated DNA Technologies. El gen de PPV 27a se subclonó luego en el vector de transferencia de baculovirus pVL1393, y se cotransfectó con la estructura DiamondBac® de baculovirus linearizado en células de insecto Sf9 para generar baculovirus recombinante que contenía el gen VP2 de PPV 27a bajo el control del promotor de poliedro.
Cuando se expresó en células de insecto Sf9, la VP2 de PPV se autoensambló en una VLP sin envoltura (no se muestran los datos).
El antígeno VP2 de PPV se administró junto con un carbómero (Carbopol).
Ejemplo 2:
Estudio de prueba de concepto de la vacuna contra PPV
En todos los estudios en animales, los animales se encontraron en buen estado general y nutricional antes del comienzo del estudio. Antes del procedimiento de aleatorización, se llevó a cabo un examen de salud. Se usó pienso sin medicamento durante todo el estudio. Las raciones de pienso fueron adecuadas para la edad, la afección y la especie de animal de prueba de acuerdo con los procedimientos operativos estándares de las instalaciones. Se proporcionó agua a voluntad durante el estudio.
El objetivo de este estudio de vacunación-exposición era establecer una prueba de concepto sobre la eficacia de determinación de dosis para una vacuna subunitaria de parvovirus porcino (PPV) antes de la cruza (ver Ejemplo 1). Las cerdas nulíparas se vacunaron y se cruzaron antes de una exposición con aislado de PPV virulento vivo (PPV 002346-5; cepa norteamericana) a aproximadamente 40 días de gestación (dG). Se evaluaron los fetos para determinar infección por PPV a aproximadamente 90 dG.
El diseño del estudio se describe en la Tabla 1.
Tabla 1: Diseño del estudio
NTX = control no tratado/no expuesto; IN = intranasal; IM = intramuscular; dG = días de gestación.
Se usaron 67 cerdas nulíparas originadas de una manada cuya prueba había dado resultado negativo para PPV sin antecedentes de enfermedad reproductiva o vacunación contra PPV. Las cerdas nulíparas se aleatorizaron en 6 grupos de tratamiento (T) de n=9 dispuestos en 3 jaulas que recibieron vacunación el D0 y un refuerzo el D21:
T1NC (control negativo de agua para inyección),T210 |jg de PPV,T3PC (control positivo; parvovirus porcino (PPV)Erysipelothrix rhusiopathiae, Leptospira canicola, L.grippotyphosa, L. hardjo, L. icterohaemorrhagiae, y L. Pomonainactivados, enteros; disponibles en el comercio; usados de acuerdo con el manual del fabricante). Se incluyeron 3 cerdas nulíparas de control no tratado (NTX), una por jaula. Después de la vacunación, las cerdas nulíparas se sincronizaron (a través de administración de Matrix®; Altrenogest, Intervet Schering-Plough Animal Health; por etiqueta durante 14 días consecutivos, D18 a D31) y luego se cruzaron entre el D35 y el D42. 44 de 67 cerdas nulíparas se preñaron. El D80 (aproximadamente 40 dG), cerdas nulíparas de NTX se sometieron a autopsia, y las cerdas nulíparas restantes se inocularon con 6 ml de cepa PPV002346-5 de PPV (cepa norteamericana) a 4,25 log-i0TCID50 por dosis (2 ml por vía intramuscular y 2 ml por vía intranasal a través de las fosas nasales). Se extrajo sangre a las cerdas nulíparas cada semana excepto durante la sincronización y cruza (D35 - D70). La serología se llevó a cabo en el suero de D0, D7, D14, D21, D28 y D73; la serología y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (como se describe en Jozwik et al. 2009; Journal of General Virology, 90, 2437 2441) para viremia se llevó a cabo en el suero de D80, D87, D94, D101, D108, D115, D122, y D128. Las cerdas nulíparas se sometieron a autopsia el D129 o D130 (aproximadamente 90 dG). En la autopsia, se retiró cada tracto reproductor, y se registraron la posición del feto en el útero, el estado fetal, el tamaño y el peso. Las muestras de líquido torácico y pulmón se recolectaron de cada feto. Las muestras de líquido torácico se recolectaron de manera aséptica de cada feto. En síntesis, 3 ml de PBS estéril se inyectaron en la cavidad torácica con una aguja estéril y jeringa. El fluido se volvió a aspirar en la jeringa y se inyectó en un tubo separador de suero (SST) estéril correspondiente de tamaño adecuado. Los líquidos torácicos se evaluaron para determinar la presencia de PPV mediante PCR y la presencia de anticuerpo contra PPV mediante inhibición de hemaglutinación (HI). El tejido pulmonar se almacenó congelado.
Viremia en cerdas nulíparas (PPV)
Todas las cerdas nulíparas dieron negativo para viremia de PPV antes de la exposición el D0, D73 (no se muestran datos) y D80 (Tabla 2). Todos los controles negativos fueron virémicos el D87, y 4/7 fueron virémicos el D94.
Después de la vacunación, las cerdas nulíparas T3 experimentaron seroconversión tras la vacunación de refuerzo. Las T2 tuvieron una respuesta serológica a la vacunación inicial y se mantuvieron seropositivas después de la vacunación de refuerzo. Las cerdas nulíparas T1 de control continuaron dando negativo en el estudio serológico para PPV hasta la exposición. Después de la exposición, todas las cerdas nulíparas de control negativo fueron virémicas el D87 (7 días después de la exposición). Una cerda nulípara T3 fue virémica el D87. Todas las otras cerdas nulíparas no fueron virémicas en estos puntos temporales (ver la Tabla 2).
Las cerdas nulíparas NTX se mantuvieron seronegativas y sus fetos dieron negativo para PPV mediante PCR en muestras de líquido torácico.
Tabla 2: Distribución de frecuencia de cerdas nulíparas positivas para PPV (PCR) tras la exposición con PPV a 4 í i n l D .
Resultados en fetos
Todos los fetos de NTX se consideraron normales en la autopsia del D80 (Tabla 3). En la autopsia final el D129 y D130, 22,5 % de los fetos de T1 (control negativo) fue normal mientras que 98,39 % de los fetos en T3 y 97,62 % de los fetos en T2 fueron normales. El tamaño y peso promedio de los fetos de T1 (control negativo) fue de 11,5 cm y 168,8 g, respectivamente, mientras que el tamaño y peso promedio de los fetos en T2 fue de 17,5 cm y 590,1 g, respectivamente.
Todos los fetos de T4 (NTX) dieron negativo para PPV según se determinó mediante PCR en muestras de líquido torácico (ver la Tabla 3). La infección por PPV se confirmó en 67/80 fetos de T1 de control negativo (83,75 %). 62 de los 67 fetos de control negativo que se confirmó estaban infectados por PPV salieron momificados. En contraposición, la infección por PPV se confirmó solo en 0,79 % de los fetos en T2.
En función del parámetro de conclusión para establecer la eficacia según se indica en la farmacopea europea (monografía 01/2008:0965), todas las vacunas [que incluyen el control positivo (PPV inactivado de célula entera)] cumplieron con los criterios de protección contra la infección (>80 % de los fetos dieron negativo para PPV).
Tabla 3: Detalles de la camada: cantidad, tamaño, peso y estado de los fetos, y confirmación del laboratorio de
^
Conclusión:
La vacuna contra PPV de la presente invención mostró protección de fetos después de la exposición heteróloga de PPV virulento. Los resultados del estudio mostraron que la vacuna es segura cuando se administra antes de la cruza y es eficaz para reducir significativamente la viremia, y la infección transplacentaria en fetos. Además, se demostró que la vacuna protege contra una cepa de PPV norteamericano de exposición heteróloga. Además, se demostró que la proteína subunitaria de VP2 de PPV es tan eficaz como el virus entero inactivado.
Ejemplo 3:
Establecimiento de la dosis inmunizante mínima de la vacuna de PPV - protección contra la cepa de PPV norteamericano heteróloga:
El objetivo de este estudio de vacunación-exposición es establecer la dosis inmunizante mínima (MID) para la vacuna de parvovirus porcino (PPV). Las cerdas nulíparas se expusieron con un aislado de PPV virulento vivo de serotipo 1 (PPV 002346-5) a aproximadamente 40 días de gestación (dG). Una vacuna se consideró eficaz si > 80 % de los fetos en el grupo vacunado dieron negativo a la exposición después de PPV. Los parámetros complementarios incluyeron el tamaño, el peso y el estado del feto, el estado de viremia después de la exposición de la cerda nulípara y el estado serológico de la cerda nulípara.
Las cerdas nulíparas (sin antecedentes de enfermedad reproductiva o vacunación contra PPV) se aleatorizaron en grupos de tratamiento: El control negativo de T01 (placebo compatible con el producto (PMP)) y T02 = dosis de 1,0 |jg de PPV/2 ml). Las cerdas nulíparas no tratadas/no expuestas (NTX) se asignaron aleatoriamente a jaulas como controles del estado de salud general.
Se administraron a las cerdas nulíparas 2 ml del tratamiento intramuscular adecuado el D0 y el D21. Después de la vacunación, las cerdas nulíparas se cruzaron entre el D37 y el D50, y luego se evaluó el estado de preñez el D74. El D81, las cerdas nulíparas gestantes se expusieron con 6,77 logiüTCID50/6 ml de PPV de serotipo 1 por vía intramuscular e intranasal. Se extrajo sangre a las cerdas nulíparas cada semana excepto durante la sincronización del ciclo de celo y la cruza (D36-D73). Los ensayos de inhibición de hemaglutinación (HI) se llevaron a cabo en el suero de D7, D14, D21, D28 y D35; HI y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (ver Ejemplo 2) para viremia se llevaron a cabo en el suero de D-3, D74, D80, D88, D95, D102 y D127. Las cerdas nulíparas se sometieron a autopsia el D128 y D129 (aproximadamente 90 dG). En la autopsia, se retiró el tracto reproductor de cada cerda primípara, y se registró la posición de cada feto en el útero, el estado fetal, el tamaño y peso. Se recolectaron las muestras de líquido torácico (ver Ejemplo 2) de cada feto y se evaluaron para determinar la presencia de PPV mediante PCR.
Viremia en cerdas nulíparas (PPV)
Las vacunas se consideraron seguras dado que los animales no mostraron temperatura corporal anormal 24 horas o 48 horas después de la vacunación, ni reacciones locales anormales atribuibles a la vacuna ni signos clínicos relacionados con la vacunación (no se muestran datos).
Todas las cerdas nulíparas fueron negativas para viremia de PPV antes de la vacunación, antes de una exposición el D74 y D80. De este modo, después de la vacunación, no se observaron signos clínicos relacionados con la administración de la vacuna. El<d>88, las 10 cerdas nulíparas T01 fueron virémicas, y todas las cerdas nulíparas vacunadas dieron negativo. Las otras muestras de sangre el D95, D102 y D127 dieron negativo para viremia de PPV para todos los grupos de tratamiento (Tabla 4).
Tabla 4: Distribución de frecuencia de cerdas nulíparas positivas para PPV (PCR) tras la exposición con PPV a ~
4 í i n l D 1.
* 2 cerdas nulíparas fueron diagnosticadas como no preñadas y por lo tanto, se retiraron del grupo
Resultados en fetos
En la autopsia final el D128 y D129, 38 % de los fetos de T01 (control negativo) estaba en estado normal mientras que 95 % de los fetos en el grupo vacuna estaba en estado normal. El tamaño y peso promedio de los fetos de Tü1 (control negativo) fue de 14,4 cm y 245,9 g, respectivamente, mientras que el tamaño y peso promedio de los fetos de madres vacunadas fue de 19,3 cm y 550 g, respectivamente (Tabla 5). De este modo, el grupo vacuna cumplió con los criterios de protección contra la infección por PPV ya que el parámetro de conclusión para la eficacia de PPV establecido por la farmacopea europea 01/2008:0965 es que > 80 % de los fetos en un grupo de tratamiento debe ser negativo para PPV.
La infección por PPV se confirmó en 113/146 fetos de (T01) (control negativo) (77 %). Sin embargo, la infección por PPV en el grupo vacunado (T02) fue solo de 10 %.
Tabla 5 Detalles de la camada: cantidad, tamaño, peso y estado de los fetos, y confirmación del laboratorio de inf i n r PPV P R n m r lí i r i .
Conclusión:
La vacuna subunitaria de VP2 de PPV de la presente invención muestra protección de fetos después de la exposición con PPV heterólogo virulento. Este estudio revela que la vacuna es segura y eficaz para prevenir la viremia en cerdas nulíparas y la infección por PPV en fetos cuando se usa solo 1 |jg de vacuna subunitaria de VP2 de PPV. Además, se muestra que la vacuna protege contra una cepa norteamericana de exposición heteróloga.
Ejemplo 4:
Establecimiento de la dosis inmunizante mínima de la vacuna de PPV - protección contra la cepa de PPV europea heteróloga
El objetivo de este estudio es evaluar el inicio de la inmunidad de la vacuna contra parvovirus porcino (también denominada en la presente vacuna contra PPV o vacuna de VP2 de PPV). Además, la seguridad y la eficacia se evaluó mediante un diseño de estudio de exposición aleatorizado, a ciego, de vacunación controlada negativa. Las cerdas nulíparas se asignaron aleatoriamente a tres grupos. En los grupos 1 y 2, las cerdas nulíparas se vacunaron dos veces, con un intervalo de tres semanas (el D0 y D21). La segunda dosis se administró tres veces antes de la cruza. Todos los tratamientos se administraron por vía intramuscular (IM) en un volumen de 2 ml. El grupo 2 recibió la vacuna contra PPV, mientras que el grupo 1 era el grupo placebo que recibió un diluyente estéril como producto de control y el grupo 3 sirvió como control estricto, sin ningún tratamiento.
Las cerdas nulíparas se sincronizaron según el ciclo de celo y tres semanas después de la segunda vacunación se inseminaron artificialmente. Los animales preñados se expusieron el D84, entre el día 39 y 42 de gestación, a una cepa de PPV heteróloga virulenta.
El D132-135, aproximadamente el día 90 de gestación, las cerdas nulíparas se sometieron a eutanasia y autopsia, y se evaluaron los fetos.
Tabla 6: Diseño del estudio
Evaluación de viremia de PPV en cerdas nulíparas antes y después de la exposición mediante PCR:
Todos los animales dieron negativo para PPV mediante PCR el D-6 y D-1 antes de la vacunación cumpliendo los criterios de inclusión. Después de la vacunación, todos los animales en el grupo de control estricto y de producto de control dieron negativo para el antígeno de PPV hasta la exposición, por lo tanto, se pudo excluir una infección por PPV antes de la exposición.
La viremia se investigó 7 (D90), 14 (D97) y 21 (D104) días después de la exposición y el día de la autopsia. Después de la exposición, no se detectó viremia en los animales vacunados, la viremia ocurrió solo en los animales de control no vacunados.
El D90, (7 días después de la exposición) 95 % de los animales de control no vacunados ya dio positivo para PPV. El D97, 60 % de estos animales siguió dando un resultado positivo, mientras que el D104 todos los animales dieron negativo para PPV. En contraposición, en el grupo vacunado, todos los animales evaluados el D90, D97 o D104 dieron negativo para PPV.
Tabla 7: Cantidad de animales con viremia des ués de la ex osición
Resultados en fetos
El porcentaje de fetos infectados por PPV fue de 91,4%en el grupo de control, pero solo de 4,3%en el grupo de PPV (ver Tabla 8).
1 Cantidad de fetos positivos para PPV/ Cantidad de fetos por grupo. N Cantidad total
Evaluación del estado de los fetos
Todos los fetos se evaluaron para determinar su estado y se asignaron a tres categorías: normal, momificado y autolisado.
La mayoría de los fetos momificados y autolisados se encontraban en el grupo de control. Solo 39,8 % de los fetos de este grupo estaban en estado normal mientras que en los grupos vacunados, 97,4 % (grupo PPV) de los fetos estaban en estado normal (ver Tabla 9).
Tabla 9: Estado fetal
Conclusión:
La vacuna contra PPV de la presente invención mostró protección de fetos después de la exposición heteróloga a PPV virulento, lo que indica que la vacuna es segura y eficaz para prevenir la viremia y la infección por PPV en fetos cuando se usa solo 1 |jg de vacuna. Además, se muestra que la vacuna también protege contra cepas europeas de exposición heteróloga de PPV. De este modo, la vacuna demuestra tener un espectro amplio de protección, dado que protege contra cepas europeas y norteamericanas de exposición heteróloga.
Todas las composiciones y los métodos descritos y reivindicados en la presente se pueden obtener y realizar sin experimentación indebida a la luz de la presente descripción. Más específicamente, será evidente que ciertos agentes que están relacionados tanto desde el punto de vista químico como fisiológico se pueden sustituir con los agentes descritos en la presente, siempre que se obtengan los mismos resultados o resultados similares.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Una proteína viral 2 (VP2) de parvovirus porcino (PPV) que comprende
- un residuo de isoleucina en la posición de aminoácidos 25, y
- un residuo de serina en la posición de aminoácidos 36, y
- un residuo de isoleucina en la posición de aminoácidos 37, y
- un residuo de ácido glutámico o un residuo de glutamato en la posición de aminoácidos 228, y
- un residuo de serina en la posición de aminoácidos 414, y
- un residuo de glutamina en la posición de aminoácidos 419, y
- un residuo de treonina en la posición de aminoácidos 436,
en donde la numeración de posiciones de aminoácidos se refiere a la secuencia de aminoácidos de VP2 de PPV tipo silvestre como se muestra en SEQ ID NO:1.
2. Una composición inmunogénica que comprende el VP2 de PPV de acuerdo con la reivindicación 1.
3. La composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la composición inmunogénica comprende además un portador farmacéuticamente aceptable, en donde el portador farmacéuticamente aceptable es preferiblemente un carbómero.
4. La composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, en donde la composición inmunogénica es una vacuna.
5. Un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica el VP2 de PPV de acuerdo con la reivindicación 1.
6. Un vector de baculovirus que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 5.
7. Una célula que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 5 o el vector de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la célula es una célula de insecto seleccionada del grupo que consta de: Células Sf9, células Sf+.
8. Una partícula tipo virus que comprende el VP2 de PPV de acuerdo con la reivindicación 1.
9. Un método para producir el VP2 de PPV de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende transfectar una célula de insecto seleccionada del grupo que consta de: Células Sf9, células Sf+, con el vector de la reivindicación 6.
10. El VP2 de PPV de acuerdo a la reivindicación 1, la composición inmunogénica de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, el polinucleótido de acuerdo a la reivindicación 5, el vector de acuerdo a la reivindicación 6, la célula de acuerdo a la reivindicación 7, y/o las partículas tipo virus de acuerdo a la reivindicación 8 para uso como un medicamento.
11. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para usar en un método para tratar y/o prevenir una infección con PPV y/o para usar en un método de reducción, prevención y/o tratamiento de signos clínicos causados por infección por PPV en un sujeto de necesidad, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, y en donde el sujeto es una cerda nulípara o un lechón.
12. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para usarse en un método de la reivindicación 11, en donde estos signos clínicos provocados por la infección por PPV se seleccionan del grupo que consta de: leucopenia transitoria y falla reproductiva caracterizada por infección embrionaria, fetal y muerte, tamaño de camada reducido, momificación incrementada del embrión o feto por camada, autolisis del embrión o feto, tamaño reducido del embrión o feto, peso reducido del embrión o feto, viremia incrementada, carga viral incrementada dentro de los tejidos y sangre objetivo, transmisión/propagación incrementada de PPV a los compañeros de corral, o combinaciones de los mismos.
13. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para usarse en un método para reducir la falla reproductiva en un sujeto, en comparación a un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde el sujeto es una cerda nulípara o un lechón.
14. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para usarse en un método para reducir la muerte embrionaria y fetal en un sujeto, en comparación a un sujeto de un grupo de control no inmunizado de la misma especie, el método que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde el sujeto es una cerda nulípara o un lechón.
ES17801619T 2016-11-03 2017-11-02 Vaccine against porcine parvovirus Active ES3034089T3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16197091 2016-11-03
PCT/EP2017/078015 WO2018083154A1 (en) 2016-11-03 2017-11-02 Vaccine against porcine parvovirus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES3034089T3 true ES3034089T3 (en) 2025-08-12

Family

ID=57223617

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES17801619T Active ES3034089T3 (en) 2016-11-03 2017-11-02 Vaccine against porcine parvovirus

Country Status (23)

Country Link
US (2) US10485866B2 (es)
EP (2) EP4570264A3 (es)
JP (2) JP6876127B2 (es)
KR (2) KR20240090735A (es)
CN (1) CN109803678B (es)
AU (1) AU2017353378B2 (es)
BR (1) BR112019009133A2 (es)
CA (1) CA3042573A1 (es)
CL (1) CL2019001049A1 (es)
DK (1) DK3534945T3 (es)
EA (1) EA201991065A1 (es)
ES (1) ES3034089T3 (es)
FI (1) FI3534945T3 (es)
HU (1) HUE071883T2 (es)
MX (1) MX381132B (es)
MY (1) MY191490A (es)
PH (1) PH12019500954A1 (es)
PL (1) PL3534945T3 (es)
PT (1) PT3534945T (es)
RS (1) RS67051B1 (es)
TW (1) TWI781962B (es)
UA (1) UA127859C2 (es)
WO (1) WO2018083154A1 (es)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140170180A1 (en) 2012-12-17 2014-06-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine parvovirus 5a, methods of use and vaccine
UA130511C2 (uk) 2016-11-03 2026-03-11 Бьорінгер Інгельхайм Ветмедіка Гмбх Вакцина проти свинячого парвовірусу й вірусу свинячого репродуктивного й респіраторного синдрому та спосіб її одержання
EP4570264A3 (en) 2016-11-03 2026-01-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Vaccine against porcine parvovirus
US11013796B2 (en) 2018-08-30 2021-05-25 Iowa State University Research Foundation, Inc. Porcine parainfluenza virus type 1 isolates and immunogenic compositions therefrom
KR102117811B1 (ko) * 2018-12-05 2020-06-02 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) 재조합 돼지파보바이러스 항원 단백질 및 이의 용도
CN114222579A (zh) 2019-04-04 2022-03-22 勃林格殷格翰动物保健美国有限公司 猪圆环病毒3型（pcv3）疫苗及其生产和用途
CN110845580A (zh) * 2019-11-05 2020-02-28 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种猪细小病毒样颗粒的组装及其免疫原性鉴定方法
KR102550715B1 (ko) 2021-05-03 2023-07-05 대한민국 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 PRRS2/Kor/GBGJ22/2011 바이러스주
KR102550701B1 (ko) 2021-05-03 2023-07-05 대한민국 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 PRRS2/Kor/GGYC45/2010 바이러스주
KR102550709B1 (ko) 2021-05-03 2023-07-06 대한민국 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 PRRS2/Kor/CBJE19/2010 바이러스주
CN114480439A (zh) * 2022-02-23 2022-05-13 成都史纪生物制药有限公司 一种猪细小病毒vp2蛋白基因及其应用
EP4704977A1 (en) 2023-05-03 2026-03-11 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Immunogenic composition useful for self-administration by pigs
AR132582A1 (es) 2023-05-03 2025-07-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Método para inducir una respuesta inmunitaria
CN117866053B (zh) * 2024-01-10 2024-07-02 武汉珈创生物技术股份有限公司 同时检测多种猪细小病毒的多克隆抗体及其制备和应用
CN119192399A (zh) * 2024-09-29 2024-12-27 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) 一种日本脑炎病毒与猪细小病毒的二联病毒样颗粒疫苗的制备方法及其应用

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US382425A (en) 1888-05-08 Brandt
US920197A (en) 1906-04-25 1909-05-04 Benjamin Siegel Garment-display rack.
US2909462A (en) 1955-12-08 1959-10-20 Bristol Myers Co Acrylic acid polymer laxative compositions
US4394448A (en) 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
US4769331A (en) 1981-09-16 1988-09-06 University Patents, Inc. Recombinant methods and materials
US4722848A (en) 1982-12-08 1988-02-02 Health Research, Incorporated Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus
US5505941A (en) 1981-12-24 1996-04-09 Health Research, Inc. Recombinant avipox virus and method to induce an immune response
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
US4769330A (en) 1981-12-24 1988-09-06 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus and methods for making and using the same
US5174993A (en) 1981-12-24 1992-12-29 Health Research Inc. Recombinant avipox virus and immunological use thereof
US5833975A (en) 1989-03-08 1998-11-10 Virogenetics Corporation Canarypox virus expressing cytokine and/or tumor-associated antigen DNA sequence
US5338683A (en) 1981-12-24 1994-08-16 Health Research Incorporated Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins
US5364773A (en) 1991-03-07 1994-11-15 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
EP0117767A1 (en) 1983-01-07 1984-09-05 Mgi Pharma, Inc. Production of parvovirus subunit vaccines
US4745051A (en) 1983-05-27 1988-05-17 The Texas A&M University System Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
AU7966987A (en) 1986-09-08 1988-04-07 Applied Biotechnology, Inc. Empty viral capsid vaccines
IL84154A0 (en) 1986-10-16 1988-03-31 Microgenesys Inc Polypeptides derived from the envelope gene of human immunodeficiency virus in recombinant baculovirus infected insect cells and vaccines against acquired immune deficiency syndrome containing the same
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
WO1990001543A1 (fr) 1988-07-29 1990-02-22 Intracel Corporation Procede d'expression genetique de proteines heterologues par des cellules transfectees in vivo
CA2003300A1 (en) 1988-11-21 1990-05-21 Franklin Volvovitz Skin test and test kit for aids
DK0737750T3 (da) 1989-03-21 2003-09-01 Vical Inc Ekspression af exogene polynucleotidsekvenser i vertebrater
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5552143A (en) 1989-03-24 1996-09-03 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Recombinant cytomegalovirus vaccine
US5591439A (en) 1989-03-24 1997-01-07 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Recombinant cytomegalovirus vaccine
GB9001766D0 (en) 1990-01-25 1990-03-28 Univ Court Of The University O Vaccines
EP0575491B1 (en) 1991-03-07 2003-08-13 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
US5997878A (en) 1991-03-07 1999-12-07 Connaught Laboratories Recombinant poxvirus-cytomegalovirus, compositions and uses
ES2026827A6 (es) * 1991-03-26 1992-05-01 Ercros Sa Procedimiento para la produccion de una vacuna subunidad contra el parvovirus porcino.
US5643578A (en) 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
US5846945A (en) 1993-02-16 1998-12-08 Onyx Pharmaceuticals, Inc. Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia
EP0620277A1 (en) 1993-03-18 1994-10-19 Merck & Co. Inc. Nucleic acid pharmaceuticals
FR2711670B1 (fr) 1993-10-22 1996-01-12 Pasteur Institut Vecteur nucléotidique, composition le contenant et vaccin pour l'immunisation à l'encontre d'une hépatite.
ATE475668T1 (de) 1994-01-27 2010-08-15 Univ Massachusetts Medical Immunisierung durch impfung von dns transkriptionseinheit
ES2243937T3 (es) 1994-04-29 2005-12-01 Baxter Healthcare S.A. Poxvirus recombinados en regiones esenciales con la ayuda de polinucleotidos extraños.
AU711702B2 (en) 1995-03-23 1999-10-21 Cambridge University Technical Services Limited Vectors for gene delivery
AU737243B2 (en) 1996-07-03 2001-08-16 Merial, Inc. Recombinant canine adenovirus (CAV) containing exogenous DNA
US6183752B1 (en) 1997-02-05 2001-02-06 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Restenosis/atherosclerosis diagnosis, prophylaxis and therapy
FR2789695B1 (fr) * 1999-02-11 2003-03-07 Merial Sas Vecteurs et vaccins viraux a base d'adenovirus porcins recombines et replicatifs
RU2269361C2 (ru) 2004-03-25 2006-02-10 Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ) Вакцина ассоциированная эмульсионная инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
US20090017064A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Wyeth Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus
WO2011107534A1 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Intervet International B.V. Recombinant attenuated parvovirus
TWI508974B (zh) 2010-12-22 2015-11-21 Sbc Virbac Ltd 豬第二型環狀病毒(Porcine Circovirus Type 2)、含彼之免疫組合物、檢測套組及其應用
CN102488895A (zh) 2011-12-30 2012-06-13 重庆大学 一种猪圆环病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒三联病毒样颗粒疫苗及其制备方法
CN102727881A (zh) 2012-07-04 2012-10-17 广东大华农动物保健品股份有限公司 高致病性猪繁殖与呼吸综合征jxa1-r株-猪细小病毒病二联活疫苗及其制备方法和应用
US20140170180A1 (en) 2012-12-17 2014-06-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine parvovirus 5a, methods of use and vaccine
US20140234354A1 (en) 2013-02-15 2014-08-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine parvovirus 5b, methods of use and vaccine
CN104288760A (zh) 2013-07-18 2015-01-21 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
ES2778425T3 (es) * 2013-10-02 2020-08-10 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Variante de la proteína ORF2 del PCV2 y partículas similares a virus compuestas por esta
CN106039304B (zh) * 2016-05-28 2021-02-05 青岛易邦生物工程有限公司 一种猪细小病毒、猪流行性腹泻、大肠埃希氏菌三联疫苗
UA130511C2 (uk) 2016-11-03 2026-03-11 Бьорінгер Інгельхайм Ветмедіка Гмбх Вакцина проти свинячого парвовірусу й вірусу свинячого репродуктивного й респіраторного синдрому та спосіб її одержання
EP4570264A3 (en) * 2016-11-03 2026-01-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Vaccine against porcine parvovirus

Also Published As

Publication number Publication date
MY191490A (en) 2022-06-28
TWI781962B (zh) 2022-11-01
CN109803678B (zh) 2023-08-22
US20180133309A1 (en) 2018-05-17
RS67051B1 (sr) 2025-08-29
CL2019001049A1 (es) 2019-08-16
AU2017353378A1 (en) 2019-05-02
AU2017353378B2 (en) 2024-03-14
EP4570264A2 (en) 2025-06-18
EP3534945A1 (en) 2019-09-11
JP6876127B2 (ja) 2021-05-26
PL3534945T3 (pl) 2025-09-22
KR102669319B1 (ko) 2024-05-28
PH12019500954A1 (en) 2019-12-02
FI3534945T3 (fi) 2025-06-26
KR20240090735A (ko) 2024-06-21
US10799578B2 (en) 2020-10-13
KR20190089899A (ko) 2019-07-31
CA3042573A1 (en) 2018-05-11
TW201829446A (zh) 2018-08-16
WO2018083154A1 (en) 2018-05-11
US10485866B2 (en) 2019-11-26
CN109803678A (zh) 2019-05-24
DK3534945T3 (da) 2025-06-30
PT3534945T (pt) 2025-06-30
HUE071883T2 (hu) 2025-09-28
EP3534945B1 (en) 2025-04-02
EP4570264A3 (en) 2026-01-21
MX381132B (es) 2025-03-12
US20200030438A1 (en) 2020-01-30
JP2021097679A (ja) 2021-07-01
EA201991065A1 (ru) 2019-11-29
MX2019005137A (es) 2019-06-20
JP2020500012A (ja) 2020-01-09
BR112019009133A2 (pt) 2019-07-16
UA127859C2 (uk) 2024-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10799578B2 (en) Vaccine against porcine parvovirus
ES2942749T3 (es) Vacuna contra el parvovirus porcino y el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino, y métodos de producción de la misma
ES2550258T3 (es) Nueva cepa del PRRSV europea
US10905758B2 (en) Intranasal vector vaccine against porcine epidemic diarrhea
BRPI0014155B1 (pt) Prevention of myocardial, abortion and intra-uterine infection, associated with porcine circovirus-2
ES2962449T3 (es) Expresión recombinante de la proteína ORF2 del PCV2b en células de insecto
ES2778649T3 (es) Vacunas pestivirales para temblores congénitos
US10512685B2 (en) HEV vaccine
EA045363B1 (ru) Вакцина против свиного парвовируса
EA044956B1 (ru) Вакцина против свиного парвовируса и вируса свиного репродуктивного и респираторного синдрома и способы ее получения