ES3049257T3 - Anti-c1s antibodies and methods of use thereof - Google Patents

Abstract

La presente divulgación proporciona anticuerpos que se unen específicamente al componente C1s de la vía del complemento. La presente divulgación proporciona ácidos nucleicos que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican los anticuerpos anti-C1s; y células huésped que comprenden dichos ácidos nucleicos. La presente divulgación proporciona composiciones que comprenden los anticuerpos anti-C1s. La presente divulgación proporciona métodos de uso de los anticuerpos anti-C1s. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Anticuerpos anti-C1s y métodos de uso de los mismos

[0005] ANTECEDENTES

[0007] El sistema del complemento es un mecanismo efector bien conocido de la respuesta inmune, que proporciona no sólo protección contra patógenos y otros agentes dañinos sino también recuperación de lesiones. La ruta del complemento comprende una serie de proteínas que normalmente existen en el cuerpo en forma inactiva. La ruta clásica del complemento se desencadena por la activación del primer componente del complemento, denominado complejo C1, que consisten en las proteínas C1q, C1r y C1s. Tras la unión de C1 a un complejo inmune u otro activador, el componente C1s, una serina proteasa sensible al fluorofosfato de diisopropilo (DFP), escinde los componentes del complemento C4 y C2 para iniciar la activación de la ruta clásica del complemento. La ruta clásica del complemento parece desempeñar un papel en muchas enfermedades y trastornos. El documento WO 2014/066744 divulga las secuencias de aminoácidos de los dominios de cadena pesada y ligera variables humanizados y sus respectivas CDR del anticuerpo anti-C1s IPN-M2.

[0009] SUMARIO

[0011] La presente divulgación proporciona anticuerpos anti-C1s humanizados como se define en las reivindicaciones adjuntas. La presente divulgación proporciona ácidos nucleicos que comprenden secuencias nucleotídicas que codifican los anticuerpos anti-C1s humanizados; y células hospedadoras que comprenden los ácidos nucleicos como se define en las reivindicaciones adjuntas. La presente divulgación proporciona composiciones que comprenden los anticuerpos anti-C1s humanizados como se define en las reivindicaciones adjuntas. La presente divulgación proporciona el uso de los anticuerpos anti-C1s humanizados como se define en las reivindicaciones adjuntas.

[0013] Algunos aspectos de la presente divulgación se refieren a un anticuerpo que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de cadena pesada, y la cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (VL); en el que la región VL comprende una región determinante de la complementariedad (CDR) 1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL, y en el que la región VH comprende una CDR1 de VH, una CDR2 de VH y una CDR3 de VH; en el que la CDR1 de VL comprende la SEQ ID NO: 1; en el que la CDR2 de VL comprende la SEQ ID NO: 2; en el que la C<d>R3 de VL comprende la SEQ ID NO: 3; en el que la CDR1 de VH comprende la SEQ ID NO: 4; en el que la CDR2 de VH comprende la SEQ ID NO: 5; en el que la CDR3 de VH comprende la SEQ ID NO: 6; en el que la región constante de cadena pesada comprende una secuencia al menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 28, en el que el residuo de aminoácido 308 de la región constante de cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es Leu, y el residuo de aminoácido 314 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es Ser; y en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado y tiene una vida media más larga en comparación con anticuerpos anti-C1s comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje según SEQ ID NO: 52 o una región Fc según SEQ ID NO: 53.

[0014] Otros aspectos de la presente divulgación se refieren a un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo divulgado en este documento.

[0016] Otros aspectos de la presente divulgación se refieren a un nucleótido o un conjunto de nucleótidos que codifican un anticuerpo divulgado en este documento.

[0018] Otros aspectos de la presente divulgación se refieren al anticuerpo, inmunoconjugado o nucleótido divulgado en este documento para su uso en la inhibición de una ruta del complemento en un sujeto que lo necesita.

[0020] Otros aspectos de la presente divulgación se refieren al anticuerpo, inmunoconjugado o nucleótido divulgado en este documento para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento en un sujeto que lo necesita.

[0022] Otros aspectos y realizaciones de la presente invención se definen en el conjunto de reivindicaciones adjunto.

[0024] BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0026] La FIG. 1 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VH humanizada (SEQ ID NO: 10) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 11) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0028] La FIG. 2 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VH humanizada (SEQ ID NO: 12) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 13) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0029] La FIG. 3 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 3 de VH humanizada (SEQ ID NO: 14) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 15) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0031] La FIG. 4 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 4 de VH humanizada (SEQ ID NO: 16) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 17) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0033] La FIG. 5 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VH humanizada (SEQ ID NO: 18) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 19) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0035] La FIG. 6 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de V<k>humanizada (SEQ ID NO: 20) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 21) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0037] La FIG. 7 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de V<k>humanizada (SEQ ID NO: 22) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 23) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0039] La FIG. 8 representa una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de V<k>humanizada (SEQ ID NO: 24) y una secuencia nucleotídica (SEQ ID NO: 25) que la codifica. Las definiciones de CDR y la numeración de la secuencia de proteínas se muestran según la numeración de Kabat. Los nucleótidos de CDR y las secuencias de proteínas están subrayados.

[0041] La FIG. 9 muestra las diferencias de aminoácidos entre VH anti-C1s activado murino parental (anti-aC1s; también conocido como TNT005) (SEQ ID NO: 8) y variantes humanizadas ejemplares de VH.

[0043] La FIG. 10 muestra las diferencias de aminoácidos entre VL anti-aC1s murino parental (SEQ ID NO: 7) y variantes humanizadas ejemplares de VL.

[0045] La FIG. 11 muestra las propiedades de unión de variantes humanizadas de anti-aC1s murino. Se muestran datos de unión directa a C1s activado ("aC1"), unión de competición con 50 pM de anti-aC1s biotinilado ("Biot-005"), e inhibición de la ruta clásica del complemento.

[0047] La FIG. 12 muestra las propiedades de unión de variantes humanizadas de anti-aC1s murino. Se proporcionan datos de afinidad para la unión de variantes humanizadas de anti-aC1s murino.

[0049] La FIG. 13 representa un perfil farmacocinético (PK) y un perfil farmacodinámico (PD) para una variante anti-aC1s humanizada (VH3/VK2-Fc-sub4; también conocido como TNT020) administrada por vía intravenosa a 10 mg/kg a monos cinomolgos. Los datos muestran el % de actividad de la ruta del complemento (CP) (normalizada al nivel previo a la administración) y la concentración sérica (pg/ml) del anticuerpo administrado, en veces hasta 650 horas después de la administración.

[0051] La FIG. 14 representa un perfil PK y un perfil PD para VH3/VK2-Fc-sub4 administrado por vía subcutánea a 20 mg/kg a monos cinomolgos. Los datos muestran el % de actividad de CP (normalizada al nivel previo a la administración) y la concentración sérica (pg/ml) del anticuerpo administrado, en veces hasta 55 días después de la administración. Se superponen los perfiles farmacocinéticos (círculos) y farmacodinámicos (cuadrados). CP = ruta del complemento.

[0052] Las FIGs. 15A-15C proporcionan secuencias de aminoácidos de un VH3/VK2-Fc-sub4. La FIG. 15A proporciona la secuencia de aminoácidos de Fc-sub4 presente en VH3/VK2-Fc-sub4. Las sustituciones de aminoácidos que mejoran la unión de FcRn están subrayadas (FIG. 15A). Las FIGs. 15B y 15C proporcionan las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada (FIG. 15B) y de la cadena ligera (FIG. 15C) de VH3/VK2-Fc-sub4. Las CDR de la región variable están subrayados (FIGs. 15B y 15C), y la región constante de la cadena pesada (dominio Fc) está en negrita (FIG.

[0053] 15B).

[0055] Las FIGs. 16A-16B proporcionan secuencias de aminoácidos de las cadenas pesadas y ligeras de longitud completa de VH3/VK2-Fc-sub4. Los péptidos señal están en negrita y subrayados (FIGs. 16A y 16B); las CDR están subrayadas (FIGs. 16A y 16B); y la región constante de cadena pesada (Fc) está en negrita (FIG. 16A). Las sustituciones de aminoácidos de la región constante de cadena pesada que mejoran la unión de FcRn están doblemente subrayadas (FIG. 16A).

[0056] Las FIGs. 17A-17B son representaciones gráficas que ilustran la actividad de la ruta del complemento sérico (CP) (FIG. 17A) y la hemólisis (FIG. 17B) in vitro, después de la exposición a concentraciones variables de un anticuerpo anti-C1s que se dirige tanto contra C1s activo como inactivo (cuadrados) o VH3/VK2-Fc-sub4 (círculos).

[0057] Las FIGs. 18A-18B son representaciones gráficas que ilustran los perfiles farmacocinéticos (FIG. 18A) y farmacodinámicos (FIG. 18B) de una variante de anticuerpo anti-aC1s (VH3/VK2 que tiene un Fc de IgG4 de tipo salvaje) y VH3/VK2-Fc-sub4 (que tiene una secuencia de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 28). En la FIG.

[0058] 18B también se muestra un control de "vehículo" negativo.

[0059] DEFINICIONES

[0060] El término "componente del complemento C1s" o "C1s", como se utiliza en este documento, se refiere a una serina proteasa sensible al fluorofosfato de diisopropilo (DFP), que escinde los componentes del complemento C4 y C2 para iniciar la activación de la ruta clásica del complemento. La secuencia de aminoácidos de tipo salvaje para C1 s humano se proporciona en la Tabla 1 (SEQ ID NO: 9).

[0061] Tabla 1: Secuencias

[0063]

[0064] Variante 2 (S241P;<L248E;>A STKGPSVFPLA PCSRSTSESTA ALGCLVKD YFPEPVTVSW N SGALTSG VHTFPAVLQ SSG M428L; N434S) L Y SL SSW T V PSSSLG T K T YT C N V D H K PSN T K VD K R V ESK YG PPC PPC PA PEFE G G PSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRW

[0065] S

[0066]

[0067] C

[0069] Los términos "anticuerpos" e "inmunoglobulina" incluyen anticuerpos o inmunoglobulinas de cualquier isotipo, que conservan una unión específica al antígeno. Un "anticuerpo" incluye, sin limitación, una inmunoglobulina glicoproteica que se une específicamente a un antígeno y comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, o una porción de unión a antígeno de las mismas. Cada cadena H comprende una región variable de cadena pesada (abreviada en este documento como V<h>) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios constantes, Chi,

C<h>2 y C<h3>. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada en este documento como V<l>) y una región constante de cadena ligera. La región constante de la cadena ligera comprende un dominio constante, C<l>. Las regiones V<h>y V<l>se pueden subdividir, además, en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de la complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco (FR, por sus siglas en inglés). Cada V<h>y V<l>comprende tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino hasta el extremo carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, y FR4. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del hospedador, incluidas diversas células del sistema inmunológico (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (C1 q) del sistema del complemento clásico.

[0071] El término "anticuerpo" incluye, a modo de ejemplo, anticuerpos tanto naturales como no naturales; anticuerpos monoclonales y policlonales; anticuerpos quiméricos y humanizados; anticuerpos humanos o no humanos; anticuerpos totalmente sintéticos; y anticuerpos monocatenarios. Un anticuerpo no humano puede humanizarse mediante métodos recombinantes para reducir su inmunogenicidad en el hombre. A menos que no se indique expresamente, y a menos que el contexto indique lo contrario, el término "anticuerpo" también incluye un fragmento de unión a antígeno o una porción de unión a antígeno de cualquiera de las inmunoglobulinas mencionadas anteriormente, e incluye un fragmento o porción monovalente y divalente, y un anticuerpo monocatenario. Un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo puede incluir cualquier porción de un anticuerpo que retenga la capacidad de unirse a la diana del anticuerpo. En algunas realizaciones, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo anti-C1 s retiene la capacidad de unirse a C1s. En algunas realizaciones, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo comprende 1,2, 3, 4, 5 o 6 CDR del anticuerpo. En algunas realizaciones, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo comprende 1,2, 3, 4, 5 o 6 CDR y 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 regiones marco del anticuerpo. En algunas realizaciones, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo comprende una región VH y/o una región VL del anticuerpo.

[0073] Los anticuerpos pueden marcarse de forma detectable, por ejemplo con un radioisótopo, una enzima que genera un producto detectable, una proteína fluorescente, y similares. Los anticuerpos se pueden conjugar además con otros restos, tales como miembros de pares de unión específicos, por ejemplo biotina (miembro del par de unión específico biotina-avidina), y similares. Los anticuerpos también pueden unirse a un soporte sólido, que incluye, pero no se limita a, placas o perlas de poliestireno, y similares. El término también engloba los anticuerpos monoclonales. Como se utiliza en este documento, un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo producido por un grupo de células idénticas, todas las cuales se produjeron a partir de una sola célula mediante replicación celular repetitiva. Es decir, el clon de células sólo produce una única especie de anticuerpo. Si bien se puede producir un anticuerpo monoclonal utilizando tecnología de producción de hibridomas, también se pueden utilizar otros métodos de producción conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, anticuerpos derivados de bibliotecas de presentación de fagos de anticuerpos). Un anticuerpo puede ser monovalente o bivalente. Un anticuerpo puede ser un monómero de Ig, que es una molécula en forma de "Y" que consiste en cuatro cadenas polipeptídicas: dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras conectadas por enlaces disulfuro.

[0075] La expresión "anticuerpo monoclonal" ("mAb") se refiere a una molécula de anticuerpo no natural de composición molecular única, es decir, moléculas de anticuerpo cuyas secuencias primarias son esencialmente idénticas y que exhiben una única especificidad de unión y afinidad por un epítopo particular. Un mAb es un ejemplo de un anticuerpo aislado. La expresión "anticuerpo monoclonal" no se limita a los anticuerpos preparados mediante técnicas de hibridoma. Por el contrario, los anticuerpos monoclonales, como se utilizan en este documento, pueden producirse mediante hibridoma, técnicas recombinantes, transgénicas u otras conocidas por los expertos en la técnica.

[0077] La expresión "inmunoglobulina humanizada" o "anticuerpo humanizado", como se utiliza en este documento, se refiere a una inmunoglobulina que comprende porciones de inmunoglobulinas de diferente origen, en la que al menos una porción comprende secuencias de aminoácidos de origen humano. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado puede comprender porciones derivadas de una inmunoglobulina de origen no humano con la especificidad requerida, tal como un ratón, y de secuencias de inmunoglobulina de origen humano (por ejemplo, inmunoglobulina quimérica), unidas químicamente mediante técnicas convencionales (por ejemplo, sintéticas) o preparadas como un polipéptido contiguo utilizando técnicas de ingeniería genética (por ejemplo, el ADN que codifica las porciones de proteína del anticuerpo quimérico puede expresarse para producir una cadena polipeptídica contigua). Otro ejemplo de una inmunoglobulina humanizada es una inmunoglobulina que contiene una o más cadenas de inmunoglobulina que comprenden una CDR derivada de un anticuerpo de origen no humano y una región marco derivada de una cadena ligera y/o pesada de origen humano (por ejemplo, anticuerpos injertados con CDR con o sin cambios en el marco). En algunas realizaciones, la mayoría o la totalidad de los aminoácidos fuera de las regiones CDR de un anticuerpo no humano se reemplazan por aminoácidos correspondientes derivados de inmunoglobulinas humanas. En una realización de una forma humanizada de un anticuerpo, algunos, la mayoría o todos los aminoácidos fuera de las regiones CDR se han reemplazado por aminoácidos de inmunoglobulinas humanas, mientras que algunos, la mayoría o todos los aminoácidos dentro de una o más regiones CDR no han cambiado. Los anticuerpos monocatenarios quiméricos o injertados con CDR también se incluyen en la expresión inmunoglobulina humanizada. Véase, por ejemplo, Cabilly et al., patente de EE.UU. n° 4.816.567; Cabilly et al., patente europea n° 0.125.023 B1; Boss et al., patente de EE.UU. n° 4.816.397; Boss et al., patente europea n° 0.120.694 B1; Neuberger, MS et al., WO 86/01533; Neuberger, MS et al., patente europea n° 0.194.276 B1; Winter, patente de EE.UU. n° 5.225.539; Winter, patente europea n° 0.239.400 B1; Padlan, EA et al., solicitud de patente europea n° 0.519.596 A1. Véase también, Ladner et al., patente de EE.UU. n° 4.946.778; Huston, patente de EE.UU. n° 5.476.786; y Bird, RE et al., Science, 242: 423-426 (1988)), con respecto a los anticuerpos monocatenarios. Se permiten pequeñas adiciones, deleciones, inserciones, sustituciones o modificaciones de aminoácidos siempre que no anulen la capacidad del anticuerpo para unirse a un antígeno particular. En particular, las sustituciones conservativas de aminoácidos en una o más regiones marco del anticuerpo están dentro del alcance de la presente divulgación. Un anticuerpo "humanizado" conserva una especificidad antigénica similar a la del anticuerpo original.

[0079] Por ejemplo, se pueden producir inmunoglobulinas humanizadas utilizando ácidos nucleicos sintéticos y/o recombinantes para preparar genes (por ejemplo, ADNc) que codifican la cadena humanizada deseada. Por ejemplo, las secuencias de ácidos nucleicos (por ejemplo, ADN) que codifican regiones variables humanizadas se pueden construir utilizando métodos de mutagénesis por PCR para alterar secuencias de ADN que codifican una cadena humana o humanizada, tal como una plantilla de ADN de una región variable previamente humanizada (véase, por ejemplo, Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res., 17: 5404 (1989)); Sato, K., et al., Cancer Research, 53: 851-856 (1993); Daugherty, B. L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); y Lewis, A. P y J. S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)). Utilizando estos u otros métodos adecuados, también se pueden producir variantes fácilmente. Por ejemplo, las regiones variables clonadas se pueden mutagenizar, y se pueden seleccionar secuencias que codifican variantes con la especificidad deseada (por ejemplo, de una biblioteca de fagos; véase, por ejemplo, Krebber et al., patente de EE. UU. n° 5.514.548; Hoogenboom et al., documento WO 93/06213, publicado el 1 de abril de 1993)).

[0081] La humanización de una o más regiones marco reduce el riesgo de que el anticuerpo provoque una respuesta de anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) en seres humanos. Se pueden llevar a cabo métodos reconocidos en la técnica para determinar la respuesta inmune para monitorizar una respuesta de HAMA en un paciente en particular o durante ensayos clínicos. A los pacientes a los que se les administran anticuerpos humanizados se les puede realizar una evaluación de inmunogenicidad al inicio y durante toda la administración de la terapia. La respuesta de HAMA se mide, por ejemplo, detectando anticuerpos contra el reactivo terapéutico humanizado, en muestras de suero del paciente utilizando un método conocido en la técnica, incluida la tecnología de resonancia de plasmones superficiales (BIACORE) y/o análisis de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) en fase sólida. En muchos casos, un anticuerpo anti-C1s humanizado descrito en este documento no provoca sustancialmente una respuesta de HAMA en un sujeto humano.

[0083] Se seleccionan ciertos aminoácidos de los residuos del marco de la región variable humana para su sustitución en función de su posible influencia en la conformación de CDR y/o la unión al antígeno. La yuxtaposición no natural de regiones CDR murinas con la región de marco variable humana puede generar restricciones conformacionales no naturales que, a menos que se corrijan mediante la sustitución de ciertos residuos de aminoácidos, conducen a la pérdida de afinidad de unión.

[0085] Un "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que las regiones variables derivan de una especie y las regiones constantes derivan de otra especie, tal como un anticuerpo en el que las regiones variables derivan de un anticuerpo de ratón y las regiones constantes derivan de un anticuerpo humano.

[0087] Las "cadenas ligeras" de los anticuerpos (inmunoglobulinas) de cualquier especie de vertebrado se pueden clasificar en uno de dos tipos claramente distintos, llamados kappa y lambda, tomando como base las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, las inmunoglobulinas pueden asignarse a diferentes clases.

[0089] Hay cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas clases pueden dividirse en subclases (isotipos), por ejemplo IgG 1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Las subclases se pueden dividir en tipos, por ejemplo IgG2a e IgG2b. "Isotipo" se refiere a la clase o subclase de anticuerpos (por ejemplo, IgM o IgG1) que está codificada por los genes de la región constante de cadena pesada.

[0090] Un anticuerpo "antiantígeno" se refiere a un anticuerpo que se une específicamente al antígeno. Por ejemplo, un anticuerpo anti-C1s se une específicamente a C1s.

[0092] Una "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo (también llamada "fragmento de unión a antígeno") se refiere a uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente al antígeno unido por todo el anticuerpo.

[0094] Como se utiliza en este documento, el término "afinidad" se refiere a la constante de equilibrio para la unión reversible de dos agentes (por ejemplo, un anticuerpo y un antígeno), y se expresa como una constante de disociación (K<d>). La afinidad puede ser al menos 1 vez mayor, al menos 2 veces mayor, al menos 3 veces mayor, al menos 4 veces mayor, al menos 5 veces mayor, al menos 6 veces mayor, al menos 7 veces mayor, al menos 8 veces mayor, al menos 9 veces mayor, al menos 10 veces mayor, al menos 20 veces mayor, al menos 30 veces mayor, al menos 40 veces mayor, al menos 50 veces mayor, al menos 60 veces mayor, al menos 70 veces mayor, al menos 80 veces mayor, al menos 90 veces mayor, al menos 100 veces mayor, o al menos 1000 veces mayor, o más, que la afinidad de un anticuerpo por secuencias de aminoácidos no relacionadas. La afinidad de un anticuerpo por una proteína diana puede ser, por ejemplo, de alrededor de 100 nanomolar (nM) a alrededor de 0,1 nM, de alrededor de 100 nM a alrededor de 1 picomolar (pM), o de alrededor de 100 nM a alrededor de 1 femtomolar (fM) o más. Como se utiliza en este documento, el término "avidez" se refiere a la resistencia de un complejo de dos o más agentes a la disociación después de la dilución. Los términos "inmunorreactivo" y "se une preferentemente" se utilizan indistintamente en este documento con respecto a los anticuerpos y/o fragmentos de unión a antígeno.

[0096] El término "unión" se refiere a una asociación directa entre dos moléculas, debido, por ejemplo, a interacciones covalentes, electrostáticas, hidrófobas, iónicas y/o de enlaces de hidrógeno, incluidas interacciones tales como puentes salinos y puentes de agua. Un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación se une específicamente a un epítopo dentro de una proteína C1s del complemento. "Unión específica" se refiere a la unión con una afinidad de al menos alrededor de 10-7 M o mayor, por ejemplo 5 x 10-7 M, 10-8 M, 5 x 10-8 M, y mayor. "Unión no específica" se refiere a la unión con una afinidad de más de alrededor de 10-7 M, por ejemplo unión con una afinidad de 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, etc. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s se une específicamente tanto a las formas activas como a las inactivas de C1s, por ejemplo con una afinidad similar. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s se une específicamente a la forma activa de C1s y no se une específicamente a la forma inactiva de C1s.

[0097] Como se utiliza en este documento, el término "CDR" o "región determinante de la complementariedad" pretende significar los sitios de combinación de antígenos no contiguos que se encuentran dentro de la región variable de los polipéptidos de cadena tanto pesada como ligera. Las CDR se han descrito por Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991) (también denominado en este documento como Kabat 1991); por Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987) (también denominado en el presente documento como Chothia 1987); y MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), en los que las definiciones incluyen superposiciones o subconjuntos de residuos de aminoácidos cuando se comparan entre sí. Sin embargo, la aplicación de cualquiera de las definiciones para referirse a una CDR de un anticuerpo o anticuerpos injertados o variantes de los mismos pretende estar dentro del alcance del término como se define y utiliza en este documento. Los residuos de aminoácidos, que abarcan las CDR, como se definen en cada una de las referencias citadas anteriormente, se presentan a continuación en la Tabla 2 a modo de comparación. Las CDR representadas en las FIGs. 1-8 se definieron de acuerdo con Kabat 1991.

[0099] Tabla 2: Definiciones de CDR

[0102]

[0103] Como se utilizan en este documento, los términos "CDR-L1", "CDR-L2" y "CDR-L3" se refieren, respectivamente, a las CDR primera, segunda y tercera en una región variable de cadena ligera. Como se utilizan en este documento, los términos "CDR-H1", "CDR-H2" y "CDR-H3" se refieren, respectivamente, a las CDR primera, segunda y tercera en una región variable de cadena pesada. Como se utilizan en este documento, los términos "CDR-1", "CDR-2" y "CDR-3" se refieren, respectivamente, a las CDR primera, segunda y tercera de la región variable de cualquiera de las cadenas.

[0105] Como se utiliza en este documento, el término "marco" o "FR", cuando se utiliza en referencia a una región variable de un anticuerpo, pretende significar todos los residuos de aminoácidos fuera de las regiones CDR dentro de la región variable de un anticuerpo. Un marco de región variable es generalmente una secuencia de aminoácidos discontinua de entre alrededor de 100 y 120 aminoácidos de longitud, pero está destinado a hacer referencia sólo a aquellos aminoácidos fuera de las CDR. Como se utiliza en este documento, la expresión "región marco" pretende significar cada dominio del marco que está separado por las CDR. Una región variable de cadena ligera (región VL) puede tener cuatro regiones marco: FR1, FR2, FR3, y FR4. De manera similar, una región variable de cadena pesada (VH) puede tener cuatro regiones marco: FR1, FR2, FR3, y FR4.

[0107] El término "dominio Fc" o "región Fc", como se utiliza en este documento, significa parejas de unión de FcR (por ejemplo, FcRn) funcionales, a menos que se especifique lo contrario. El dominio Fc es la porción de un polipéptido que corresponde al dominio Fc de Ig nativa. Un dominio Fc nativo forma un homodímero con otro dominio Fc. En una realización, la "región Fc" se refiere a la porción de una sola cadena pesada de Ig que comienza en la región bisagra justo en dirección 5’ del sitio de escisión de la papaína (es decir, el residuo 216 en IgG, tomando como primer residuo de la región constante de la cadena pesada el 114) y termina en el extremo C del anticuerpo. En algunas realizaciones, un dominio Fc completo comprende al menos un dominio bisagra, un dominio CH2, y un dominio CH3. La región Fc de una región constante de Ig, dependiendo del isotipo de Ig, puede incluir los dominios CH2, CH3 y CH4, así como la región bisagra. En ciertas realizaciones, la región Fc comprende la SEQ ID NO: 52 (Tabla 3). En ciertas realizaciones, la región Fc comprende la SEQ ID NO: 53 (Tabla 3). En ciertas realizaciones, la región Fc comprende la SEQ ID NO: 28 (Tabla 3).

[0109] Un anticuerpo "aislado" es aquel que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su entorno natural. Los componentes contaminantes de su entorno natural son materiales que podrían interferir con los usos diagnósticos o terapéuticos del anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteicos o no proteicos. En algunas realizaciones, el anticuerpo se purificará (1) hasta más del 90%, más del 95% o más del 98% en peso del anticuerpo según lo determinado por el método de Lowry, por ejemplo más del 99% en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos interna o N-terminal mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria, o (3) hasta homogeneidad mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) en condiciones reductoras o no reductoras utilizando tinción azul de Coomassie o de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de las células recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estará presente. En algunos casos, el anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.

[0111] Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína", utilizados indistintamente en este documento, se refieren a una forma polimérica de aminoácidos de cualquier longitud, que puede incluir aminoácidos codificados genéticamente y no codificados genéticamente, aminoácidos modificados o derivatizados química o bioquímicamente, y polipéptidos que tienen cadenas principales de péptidos modificados. El término incluye proteínas de fusión, incluyendo, pero no limitado a, proteínas de fusión con una secuencia de aminoácidos heteróloga, fusiones con secuencias líderes heterólogas y homólogas, con o sin residuos de metionina N-terminal; proteínas marcadas inmunológicamente; y similares. Un polipéptido, péptido o proteína puede ser natural o recombinante.

[0113] Como se utilizan en el presente documento, los términos "tratamiento", "tratando", "tratar", y similares, se refieren a la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico en términos de prevenir total o parcialmente una enfermedad o un síntoma de la misma, y/o puede ser terapéutico en términos de una cura parcial o completa de una enfermedad y/o un efecto adverso atribuible a la enfermedad, por ejemplo reduciendo o mejorando uno o más síntomas de la enfermedad. "Tratamiento", como se utiliza en este documento, abarca cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero, particularmente en un ser humano, e incluye: (a) prevenir que la enfermedad se presente en un sujeto que puede estar predispuesto a padecerla pero que aún no ha sido diagnosticado con ella; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; y (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar su regresión.

[0115] Los términos "individuo", "sujeto", "hospedante" y "paciente", utilizados indistintamente en este documento, se refieren a un mamífero, incluidos, pero sin limitarse a, murinos (ratas, ratones), primates no humanos, seres humanos, caninos, felinos, ungulados (por ejemplo, equinos, bovinos, ovinos, porcinos, caprinos), etc. Estos términos también abarcan a cualquier animal que tenga un sistema del complemento, tales como mamíferos, peces y algunos invertebrados. Como tales, estos términos incluyen mamíferos, peces y animales de compañía invertebrados, animales agrícolas, animales de trabajo, animales de zoológico y animales de laboratorio, que contienen el sistema del complemento.

[0116] Una "cantidad terapéuticamente eficaz", "cantidad farmacéuticamente eficaz", "cantidad efectiva" o "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de un anticuerpo anti-C1s del complemento que, cuando se administra a un mamífero u otro sujeto para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar dicho tratamiento para la enfermedad. La "cantidad terapéuticamente eficaz" variará dependiendo del anticuerpo anti-C1s del complemento, de la enfermedad y su gravedad, y de la edad, peso, etc., del sujeto a tratar.

[0118] Una "muestra biológica" abarca una variedad de tipos de muestras obtenidas de un individuo, y puede utilizarse en un ensayo de diagnóstico o de monitorización. La definición abarca sangre y otras muestras líquidas de origen biológico, muestras de tejido sólido tal como una muestra de biopsia o cultivos de tejidos o células derivadas de los mismos y su progenie. La definición también incluye muestras que se han manipulado de cualquier manera después de su obtención, tal como mediante tratamiento con reactivos, solubilización, o enriquecimiento de ciertos componentes, tales como polinucleótidos. La expresión "muestra biológica" abarca una muestra clínica, y también incluye células en cultivo, sobrenadantes celulares, lisados celulares, suero, plasma, fluido biológico, y muestras de tejido. La expresión "muestra biológica" incluye orina, saliva, líquido cefalorraquídeo, líquido intersticial, líquido ocular, líquido sinovial, fracciones de sangre tales como plasma y suero, y similares. La expresión "muestra biológica" también incluye muestras de tejido sólido, muestras de cultivo de tejidos, y muestras celulares.

[0120] El término "sustitución", como se utiliza en este documento, se refiere a una diferencia entre una secuencia dada y una secuencia de referencia. La "sustitución" no se limita a un método particular para llegar a la secuencia citada. "Sustitución" puede contrastarse con "eliminado", que indica que faltan uno o más aminoácidos o nucleótidos en una secuencia determinada con respecto a una secuencia de referencia. En ambos casos, se puede decir que una secuencia dada tiene un aminoácido o nucleótido sustituido o eliminado, independientemente del origen de la secuencia. Por ejemplo, se puede decir que una secuencia dada tiene una sustitución en la posición 100 con respecto a una secuencia de referencia, incluso aunque la secuencia dada se haya creado de novo, por ejemplo sintéticamente, y no a través de una mutación de la secuencia de referencia. En algunas realizaciones, una sustitución puede comprender más de un aminoácido que reemplaza a un solo aminoácido.

[0122] Las expresiones "competencia cruzada" y "competición cruzada", como se utilizan en este documento, se refieren a la capacidad de un anticuerpo para competir por la unión a un antígeno diana con un anticuerpo de referencia. Se puede utilizar cualquier método conocido en la técnica para determinar si un anticuerpo compite de forma cruzada con un anticuerpo de referencia. Por ejemplo, se pueden utilizar el análisis BIAcore, los ensayos ELISA o la citometría de flujo para demostrar la competición cruzada con los anticuerpos de la presente divulgación. La capacidad de un anticuerpo de prueba para inhibir la unión de un anticuerpo a C1 humano demuestra que el anticuerpo de prueba puede competir con un anticuerpo de referencia por la unión a C1 humano. En algunas realizaciones, un anticuerpo que compite de forma cruzada con un anticuerpo de referencia para unirse a un antígeno, por ejemplo C1s humano, se une al mismo epítopo que el anticuerpo de referencia. En algunas realizaciones, un anticuerpo que compite de forma cruzada con un anticuerpo de referencia para unirse a un antígeno, por ejemplo C1s humano, se une a un epítopo que está cerca o adyacente al epítopo reconocido por el anticuerpo de referencia. En algunas realizaciones, un anticuerpo que compite de forma cruzada con un anticuerpo de referencia para unirse a un antígeno, por ejemplo C1s humano, se une a un epítopo que es distante al epítopo reconocido por el anticuerpo de referencia; sin embargo, la unión del anticuerpo al epítopo distante es suficiente para alterar la capacidad de unión del anticuerpo de referencia al antígeno. Un anticuerpo se une al mismo epítopo que un anticuerpo de referencia si el anticuerpo interactúa con residuos de aminoácidos en el antígeno que son iguales o se solapan con los aminoácidos del antígeno que interactúan con el anticuerpo de referencia.

[0124] Antes de describir más a fondo la presente divulgación, debe entenderse que esta divulgación no está limitada a las realizaciones particulares descritas, ya que las mismas pueden, por supuesto, variar. También debe entenderse que la terminología utilizada en este documento tiene el propósito de describir realizaciones particulares únicamente, y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente divulgación estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.

[0126] Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima parte de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto indique claramente lo contrario, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor establecido o intermedio en ese intervalo establecido, está comprendido dentro de la divulgación. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse independientemente en los intervalos más pequeños, y también están abarcados dentro de la divulgación, sujetos a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo establecido. Cuando el intervalo establecido incluye uno o ambos límites, también se incluyen en la divulgación los intervalos que excluyen uno o ambos de esos límites incluidos. Además, el término "alrededor de" se utiliza aquí para significar aproximadamente, más o menos, cerca de, o en las regiones de. Cuando la expresión "alrededor de" se utiliza junto con un intervalo numérico, modifica ese intervalo extendiendo los límites por encima y por debajo de los valores numéricos expuestos. Por lo tanto, "alrededor de 10-20" significa "alrededor de 10 a alrededor de 20". En general, la expresión "alrededor de" puede modificar un valor numérico por encima o por debajo del valor expuesto mediante una variación de, por ejemplo, 10 por ciento, hacia arriba o hacia abajo (más alto o más bajo).

[0127] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos normales en la técnica a la que pertenece esta divulgación. Por ejemplo, el Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2.a ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3.a ed., 1999, Academic Press; y el Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, proporcionan a un experto un diccionario general de muchos de los términos usados en esta divulgación. Aunque cualquier método y material similar o equivalente a los aquí descritos también se pueden utilizar en la práctica o prueba de la presente divulgación, a continuación se describen los métodos y materiales preferidos.

[0129] Las unidades, prefijos y símbolos se indican en la forma aceptada por el Sistema Internacional de Unidades (SI). Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo. Salvo que se indique de otro modo, las secuencias de aminoácidos se escriben de izquierda a derecha en orientación amínica a carboxílica. Los encabezados proporcionados en este documento no son limitaciones de los diversos aspectos de la divulgación, que se puede obtener por referencia a la memoria descriptiva como un todo. Por consiguiente, los términos definidos inmediatamente a continuación se definen más completamente por referencia a la memoria descriptiva en su totalidad.

[0131] Debe tenerse en cuenta que, como se utiliza en este documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "un anticuerpo anti-C1s humanizado" incluye una pluralidad de dichos anticuerpos, y la referencia a "la región marco" incluye la referencia a una o más regiones marco y equivalentes de las mismas conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente. Se observa además que las reivindicaciones pueden redactarse de modo que excluyan cualquier elemento opcional. Como tal, esta declaración pretende servir como base antecedente para el uso de terminología exclusiva como "únicamente", "solamente" y similares con respecto a la cita de elementos de la reivindicación o el uso de una limitación "negativa".

[0133] Además, "y/o" cuando se usa en este documento debe aceptarse como divulgación específica de cada uno de los dos elementos o componentes especificados con o sin el otro. Por tanto, el término "y/o" como se usa en una frase tal como "A y/o B" en este documento pretende incluir "A y B," "A o B," "A" (en solitario) y "B" (en solitario). Asimismo, el término "y/o" como se usa en una frase tal como "A, B y/o C" pretende abarcar cada uno de los siguientes aspectos: A, B y C; A, B o C; A o C; A o B; B o C; A y C; A y B; B y C; A (en solitario); B (en solitario); y C (en solitario).

[0135] Se entiende que en cualquier parte que se describan aspectos en este documento con la expresión "que comprende", también se proporcionan aspectos análogos de otro modo descritos en términos de "que consiste en" y/o "que consiste esencialmente en".

[0137] Se aprecia que ciertas características de la divulgación, que, para mayor claridad, se describen en el contexto de realizaciones separadas, también se pueden proporcionar en combinación en una única realización. Por el contrario, diversas características de la divulgación, que, para mayor brevedad, se describen en el contexto de una única realización, también pueden proporcionarse por separado o en cualquier subcombinación adecuada. Todas las combinaciones de las realizaciones pertenecientes a la divulgación están específicamente abarcadas por la presente divulgación, y se divulgan en este documento tal como si todas y cada una de las combinaciones se divulgaran individual y explícitamente. Además, todas las subcombinaciones de las diversas realizaciones y elementos de las mismas también están específicamente abarcadas por la presente divulgación, y se divulgan en este documento tal como si todas y cada una de dichas subcombinaciones se divulgaran individual y explícitamente en este documento.

[0138] Las publicaciones aquí analizadas se proporcionan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada de lo aquí contenido debe interpretarse como una admisión de que la presente divulgación no tiene derecho a anteceder a dicha publicación en virtud de una divulgación previa. Además, las fechas de publicación proporcionadas pueden ser diferentes de las fechas de publicación reales, lo que requiere confirmación independiente.

[0140] DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0142] La presente divulgación proporciona un anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo humanizado, que se une a la proteína C1s del complemento (es decir, un anticuerpo anti-C1s del complemento, también denominado en este documento como un "anticuerpo antiC1s", un "anticuerpo C1s" y un "anticuerpo en cuestión"), y un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica dicho anticuerpo, como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C1s se une específicamente a C1s activo. En ciertas realizaciones, el anticuerpo antiC1s no se une específicamente a C1s inactivo. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-C1s es un anticuerpo humanizado. En otros aspectos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación tiene una o más propiedades farmacocinéticas mejoradas, por ejemplo vida media mejorada, estabilidad, etc. En ciertos aspectos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación se puede administrar por vía subcutánea. La presente divulgación también proporciona una composición que comprende el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo antiC1 s humanizado, de la presente divulgación. La presente divulgación proporciona además el uso del anticuerpo, el inmunoconjugado, el ácido nucleico o conjunto de ácidos nucleicos, el o los vectores, la célula hospedadora o la composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento.

[0143] A nticuerpos anti-C1s de l com plem ento

[0145] La presente divulgación proporciona anticuerpos anti-C1s del complemento, por ejemplo anticuerpos anti-C1s del complemento humanizados, y composiciones farmacéuticas que comprenden dichos anticuerpos. El C1s del complemento es una diana atractiva, ya que se encuentra aguas arriba en la cascada del complemento y tiene un intervalo estrecho de especificidad de sustrato. En algunos casos, resulta de interés un anticuerpo que se une específicamente a la forma activada de C1s, por ejemplo cuando el anticuerpo no se une sustancialmente a la forma inactiva de C1s.

[0147] La presente divulgación proporciona un anticuerpo anti-C1s del complemento, por ejemplo, un anticuerpo humanizado anti-C1s del complemento, que comprende:

[0149] a) una cadena pesada que comprende: i) una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos:

[0150] (Q/E)VQL(V/Q)QSGAE(V/L)KKPGASVK(L/V)SC(T/A)ASGFNIKDDYIHWV(K/R)QAPGQ

[0151] GLEWIGRIDPADGHTKYAPKFQVK(V/A)TITADTST(S/N)TAY(L/M)(E/Q)LSSL(R/T)SEDT

[0152] AVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:26); y ii) una región Fc que comprende una secuencia de aminoácidos con al menos 98% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:28, en el que el aminoácido 308 es Leu y el aminoácido 314 es Ser; y

[0154] b) una cadena ligera que comprende: i) una región VL que comprende la secuencia de aminoácidos:

[0156] DIVLTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK(T/P)GQPPK(I/L)LIYDA

[0157] SNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE(E/P)EDFA(I/V)YYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:27); y ii) una región constante de cadena ligera, en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado y tiene una vida media más larga en comparación con anticuerpos anti-C1 s comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje según SEQ ID NO: 52 o una región Fc según SEQ ID NO: 53.

[0159] En algunas realizaciones, la cadena pesada Fc del anticuerpo anti-C1s comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98% o al menos alrededor de 99% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 28, en el que el aminoácido 308 es Leu y el aminoácido 314 es Ser. En algunas realizaciones, la cadena pesada Fc del anticuerpo anti-C1 s comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 98% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 28, en el que el aminoácido 308 es Leu y el aminoácido 314 es Ser. En algunos aspectos, la región Fc comprende una secuencia de aminoácidos al menos 99% idéntica a SEQ ID NO: 28, en el que el aminoácido 308 es Leu y el aminoácido 314 es Ser. En otros aspectos, la región Fc de un anticuerpo anti-C1s comprende, consiste esencialmente en o consiste en SEQ ID NO: 28.

[0161] En ciertos aspectos, los anticuerpos anti-C1s son más estables después de la administración subcutánea que los anticuerpos comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje, por ejemplo un Fc de IgG4 humana. Por consiguiente, en algunos aspectos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación se puede administrar por vía subcutánea.

[0163] En algunas realizaciones, el Fc de cadena pesada del anticuerpo anti-C1s comprende una sustitución con respecto al Fc de IgG4 humana. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s comprende un Fc que tiene al menos alrededord e 98% de identidad de secuencia con el Fc de IgG4 humana. En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende un Fc, en el que el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 108 de SEQ ID NO: 28, cuando está correctamente alineado, es una prolina (por ejemplo, una variante S241P de IgG4 humana). En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende un Fc, en el que el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 115 de SEQ Id NO: 28, cuando está correctamente alineado, es un ácido glutámico (por ejemplo, una variante L248E de IgG4 humana).

[0165] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende un Fc, en el que: (a) el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 108 de SEQ ID NO: 28, cuando está correctamente alineado, es una prolina; (b) el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 115 de SEQ ID NO: 28, cuando está correctamente alineado, es un ácido glutámico; (c) o cualquier combinación de (a) y (b). En algunas realizaciones, el anticuerpo antiC1s comprende un Fc, en el que: (a) el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 108 de SEQ ID NO: 28, cuando está correctamente alineado, es una prolina; (b) el residuo de aminoácido correspondiente al aminoácido 115 de SEQ ID NO: 28, cuando está correctamente alineado, es un ácido glutámico.

[0167] En algunas realizaciones, el Fc del anticuerpo anti-C1s tiene una mayor afinidad de unión a un receptor Fc, por ejemplo FcRn, que la IgG4 humana.

[0169] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, comprende un Fc que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:28. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, comprende: a) un Fc que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:28; y b) una cadena ligera que comprende una región constante V<k>humana.

[0170] Regiones variables

[0172] El anticuerpo de la presente divulgación comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de cadena pesada, y la cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (VL); en el que la región VL comprende una región 1 determinante de la complementariedad (CDR) de VL que comprende SEQ ID NO: 1, una CDR2 de VL que comprende SEQ ID NO: 2, y una CDR3 de VL que comprende<s>E<q>ID NO: 3, y en el que la región VH comprende una<c>D<r>1 de VH que comprende SEQ ID NO: 4, una CDR2 de VH que comprende SEQ ID NO: 5, y una CDR3 de VH que comprende SEQ ID NO: 6; en el que la región constante de cadena pesada comprende una región constante de IgG4, en el que el residuo de aminoácido 308 de la región constante de cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es una leucina, y el residuo de aminoácido 314 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es una serina; y en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado y tiene una vida media más larga en comparación con anticuerpos anti-C1s comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje según SEQ ID NO: 52 o una región Fc según SEQ ID NO: 53. En algunas realizaciones, el residuo de aminoácido 108 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es una prolina. En algunas realizaciones, el residuo de aminoácido 115 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es un ácido glutámico.

[0174] En algunas realizaciones, un anticuerpo de la presente divulgación comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la cadena pesada comprende una región VH y una región constante de cadena pesada, y la cadena ligera comprende una región VL; en el que la región VL comprende una CDR1 de VL que comprende SEQ ID NO: 1, una CDR2 de VL que comprende SEQ ID NO: 2, y una CDR3 de VL que comprende SEQ ID NO: 3, y en el que la región VH comprende una CDR1 de VH que comprende SEQ ID NO: 4, una CDR2 de VH que comprende SEQ iD NO: 5, y una CDR3 de VH que comprende SEQ ID NO: 6; en el que la región constante de cadena pesada comprende SEQ ID NO: 28; y en el que el anticuerpo se une específicamente a C1 activado y tiene una vida media más larga en comparación con anticuerpos anti-C1 comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje según SEQ ID NO: 52 o una región Fc según SEQ ID NO: 53.

[0176] En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo quimérico. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo murino.

[0178] En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo recombinante. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo sintético.

[0180] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación inhibe la escisión mediada por C1s del componente del complemento C4. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s inhibe la actividad enzimática del dominio de serina-proteasa de C1s. En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación inhibe la escisión mediada por C1s del componente del complemento C2. En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación inhibe la escisión de C4 y C2 mediada por C1s. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación agota C1 s/aC1 s de la circulación.

[0182] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s es un anticuerpo humanizado. En algunos casos, un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación incluye al menos una región marco V<h>humanizada. En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación incluye al menos una región marco V<l>humanizada. En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación incluye al menos una región marco V<h>humanizada y al menos una región marco V<l>humanizada.

[0184] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación incluye las CDR VL presentes en la siguiente secuencia de aminoácidos: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKTGQPPKILIYDASNLES GIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAAIYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 7). En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación incluye CDR de VH presentes en la siguiente secuencia de aminoácidos: EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPADGHTK YAPKFQVKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTLTVS S (SEQ ID NO: 8). En algunos casos, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado de la presente divulgación, incluye CDR de VL presentes en SEQ ID NO: 7, y CDR de VH presentes en SEQ ID NO: 8.

[0186] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la siguiente secuencia:

[0187] (Q /E)VQ L(V/Q )Q SG AE(V/L)KKPG ASVK(L/V)SC (T/A)ASG FN IKD D YIH W V(K /R )Q

[0189] APG Q G LEW TG RIDPADG HTKYAPKFQ VK(V/A)TITADTST(S/N)TAY(L/M )(E/Q )LSSL(R/T

[0191] ) SEDTAVYYC ARYGYGREVFDYW G QGTTVTVSS (SEQ TD NO:26).

[0193] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos de la Tabla 3. En ciertas realizaciones, la región VH del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16 y 18 (Tabla 3). En algunas realizaciones, la región VH del anticuerpo comprende SEQ ID NO:14.

[0194]

[0197] 

[0200]  En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 1, y expuesta en SEQ ID NO: 10, en el que el aminoácido 1 es Glu, el aminoácido 5 es Val, el aminoácido 11 es Leu, el aminoácido 12 es Lys, el aminoácido 13 es Lys, el aminoácido 20 es Leu, el aminoácido 23 es Thr, el aminoácido 38 es Lys, el aminoácido 40 es Ala, el aminoácido 42 es Gly, el aminoácido 67 es Ala, el aminoácido 75 es Thr, el aminoácido 76 es Asn, el aminoácido 80 es Leu, el aminoácido 81 es Gln, el aminoácido 83 es Thr, y el aminoácido 109 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se muestra en la FIG. 1.

[0202] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 1, y expuesta en SEQ ID NO: 10.

[0204] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 2 y expuesta en SEQ ID NO: 12, en el que el aminoácido 1 es Glu, el aminoácido 5 es Val, el aminoácido 11 es Val, el aminoácido 12 es Lys, el aminoácido 13 es Lys, el aminoácido 20 es Leu, el aminoácido 23 es Thr, el aminoácido 38 es Lys, el aminoácido 40 es Ala, el aminoácido 42 es Gly, el aminoácido 67 es Ala, el aminoácido 75 es Thr, el aminoácido 76 es Asn, el aminoácido 80 es Leu, el aminoácido 81 es Glu, el aminoácido 83 es Arg, y el aminoácido 109 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se muestra en la FIG. 2.

[0206] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 2, y expuesta en SEQ ID NO: 12.

[0208] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 3 y expuesta en SEQ ID NO: 14, en el que el aminoácido 1 es Gln, el aminoácido 5 es Val, el aminoácido 11 es Val, el aminoácido 12 es Lys, el aminoácido 13 es Lys, el aminoácido 20 es Leu, el aminoácido 23 es Thr, el aminoácido 38 es Lys, el aminoácido 40 es Ala, el aminoácido 42 es Gly, el aminoácido 67 es Val, el aminoácido 75 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 80 es Leu, el aminoácido 81 es Glu, el aminoácido 83 es Arg, y el aminoácido 109 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se muestra en la FIG. 3.

[0210] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 3, y expuesta en SEQ ID NO: 14.

[0212] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 4 y expuesta en SEQ ID NO: 16, en el que el aminoácido 1 es Gln, el aminoácido 5 es Val, el aminoácido 11 es Val, el aminoácido 12 es Lys, el aminoácido 13 es Lys, el aminoácido 20 es Val, el aminoácido 23 es Thr, el aminoácido 38 es Arg, el aminoácido 40 es Ala, el aminoácido 42 es Gly, el aminoácido 67 es Val, el aminoácido 75 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 80 es Met, el aminoácido 81 es Glu, el aminoácido 83 es Arg, y el aminoácido 109 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se muestra en la FIG. 4.

[0214] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 4, y expuesta en SEQ ID NO: 16.

[0216] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 5 y expuesta en SEQ ID NO: 18, en el que el aminoácido 1 es Gln, el aminoácido 5 es Val, el aminoácido 11 es Val, el aminoácido 12 es Lys, el aminoácido 13 es Lys, el aminoácido 20 es Val, el aminoácido 23 es Ala, el aminoácido 38 es Arg, el aminoácido 40 es Ala, el aminoácido 42 es Gly, el aminoácido 67 es Val, el aminoácido 75 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 80 es Met, el aminoácido 81 es Glu, el aminoácido 83 es Arg, y el aminoácido 109 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se muestra en la FIG. 5.

[0217] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 5, y expuesta en SEQ ID NO: 18.

[0219] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende la siguiente secuencia:

[0222] D IVLTQ SPDSLAVSLG ERATISCKASQ SVDYDG DSYM NW YQ Q K(T/P)G Q PPK(I/L)

[0224] LIYDASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE(E/P)EDFA(I/V)YYCQQSNEDPW TFGGGTK

[0226] VETK (SEQ ID NO:27).

[0228] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99% o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos de la Tabla 4. En ciertas realizaciones, la región VL del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 20, 22 y 24 (Tabla 4). En algunas realizaciones, la región VL del anticuerpo comprende SEQ ID NO: 22.

[0229]

[0232]  En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 6, y expuesta en SEQ ID NO:20, en el que el aminoácido 9 es Asp, el aminoácido 17 es Glu, el aminoácido 40 es Thr, el aminoácido 46 es Ile, el aminoácido 74 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 77 es Ser, el aminoácido 78 es Leu, el aminoácido 80 es Glu, el aminoácido 83 es Phe, el aminoácido 85 es Ile, y el aminoácido 104 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se representa en la FIG. 6.

[0234] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 6, y expuesta en SEQ ID NO:20.

[0236] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 7, y expuesta en SEQ ID NO:22, en el que el aminoácido 9 es Asp, el aminoácido 17 es Glu, el aminoácido 40 es Pro, el aminoácido 46 es Ile, el aminoácido 74 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 77 es Ser, el aminoácido 78 es Leu, el aminoácido 80 es Pro, el aminoácido 83 es Phe, el aminoácido 85 es Ile, y el aminoácido 104 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se representa en la FIG. 7.

[0238] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 7, y expuesta en SEQ ID NO:22.

[0240] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 8 y expuesta en SEQ ID NO:24, en el que el aminoácido 9 es Asp, el aminoácido 17 es Glu, el aminoácido 40 es Pro, el aminoácido 46 es Leu, el aminoácido 74 es Thr, el aminoácido 76 es Ser, el aminoácido 77 es Ser, el aminoácido 78 es Leu, el aminoácido 80 es Pro, el aminoácido 83 es Phe, el aminoácido 85 es Val, y el aminoácido 104 es Val, en el que la numeración de los aminoácidos es como se representa en la FIG. 8.

[0242] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende una región VL que comprende la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 8, y expuesta en SEQ ID NO:24.

[0244] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VH representada en la FIG. 1 y como se expone en SEQ ID NO: 10; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VL representada en la FIG. 6 y como se expone en SEQ ID NO: 20.

[0246] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VH representada en la FIG. 1 y como se expone en SEQ ID NO: 10; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VL representada en la FIG. 7 y como se expone en SEQ ID NO: 22.

[0248] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VH representada en la FIG. 1 y como se expone en SEQ ID NO: 10; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VL representada en la FIG. 8 y como se expone en SEQ ID NO:24.

[0250] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VH representada en la FIG. 2 y como se expone en SEQ ID NO: 12; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VL representada en la FIG. 6 y como se expone en SEQ ID NO:20.

[0252] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VH representada en la FIG. 2 y como se expone en SEQ ID NO: 12; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VL representada en la FIG. 7 y como se expone en SEQ ID NO:22.

[0254] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VH representada en la FIG. 2 y como se expone en SEQ ID NO: 12; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VL representada en la FIG. 8 y como se expone en SEQ ID NO: 24.

[0256] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 3 de VH representada en la FIG. 3 y como se expone en SEQ ID NO: 14; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VL representada en la FIG. 6 y como se expone en SEQ ID NO:20.

[0258] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 3 de VH representada en la FIG. 3 y como se expone en SEQ ID NO: 14; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VL representada en la FIG. 7 y expuesta en SEQ ID NO:22. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende: a) una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con SEQ ID NO: 14; y b) una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con la SEQ ID NO: 22. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende: a) una región VH que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; y b) una región VL que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22.

[0260] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 3 de VH representada en la FIG. 3 y como se expone en SEQ ID NO: 14; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VL representada en la FIG. 8 y como se expone en SEQ ID NO: 24.

[0262] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 4 de VH representada en la FIG. 4 y como se expone en SEQ ID NO: 16; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VL representada en la FIG. 6 y como se expone en SEQ ID NO:20.

[0264] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 4 de VH representada en la FIG. 4 y como se expone en SEQ ID NO: 16; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VL representada en la FIG. 7 y como se expone en SEQ ID NO:22.

[0266] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 4 de VH representada en la FIG. 4 y como se expone en SEQ ID NO: 16; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VL representada en la FIG. 8 y como se expone en SEQ ID NO: 24.

[0268] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VH representada en la FIG. 5 y como se expone en SEQ ID NO: 18; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 1 de VL representada en la FIG. 6 y como se expone en SEQ ID NO:20.

[0270] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VH representada en la FIG. 5 y como se expone en SEQ ID NO: 18; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 2 de VL representada en la FIG. 7 y como se expone en SEQ ID NO:22.

[0272] En algunos casos, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VH representada en la FIG. 5 y como se expone en SEQ ID NO: 18; y b) una secuencia de aminoácidos de la variante 5 de VL representada en la FIG. 8 y como se expone en SEQ ID NO:24.

[0274] En realizaciones particulares, el anticuerpo comprende una región VH que comprende SEQ ID NO: 14, una región VL que comprende SEQ ID NO: 22 y una región constante de cadena pesada; en el que la región constante de cadena pesada comprende una región constante de IgG4, en el que el residuo de aminoácido 308 de la región constante de cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es una leucina, y el residuo de aminoácido 314 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es una serina; y en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado. En otra realización, el anticuerpo comprende una región VH que comprende SEQ ID NO: 14, una región VL que comprende SEQ ID NO: 22, y una región constante de cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 28; en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado.

[0275] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con SEQ ID NO: 29. Como ejemplo no limitativo, en algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo antiC1s humanizado, de la presente divulgación comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:29.

[0277] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con SEQ ID NO: 30. Como ejemplo no limitativo, en algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo antiC1s humanizado, de la presente divulgación comprende una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:30.

[0279] En algunas realizaciones, el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende SEQ ID NO:29 y una cadena ligera que comprende SEQ ID NO:30.

[0281] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende: a) una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con SEQ ID NO:29; y b) una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, o al menos alrededor de 99% de identidad con SEQ ID NO:30. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación comprende: a) una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 29; y b) una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 30. En algunas realizaciones, para producir dicho anticuerpo, se puede utilizar un ácido nucleico que comprende una o más secuencias nucleotídicas que codifican las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID NO:31 y SEQ ID NO:32.

[0283] En ciertas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s comprende una región constante de cadena ligera. En algunas realizaciones, la región constante de cadena ligera comprende SEQ ID NO: 45 (RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC).

[0285] Afinidad de unión

[0287] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1 s del complemento de un individuo que tiene un sistema del complemento. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento de un mamífero, pez o invertebrado que tiene un sistema del complemento. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento de mamífero. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento de rata. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo antiC1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento que tiene la secuencia de aminoácidos representada en la FIG. 13 (SEQ ID NO: 9). La secuencia de aminoácidos<s>E<q>ID NO: 9 representa la proteína C1s del complemento del Homo sapiens, que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en la FIG. 13.

[0288] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una constante de disociación (K<d>) de no más de 2,5 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 2 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 1,5 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo antiC1s humanizado , de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 1 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 0,9 nM, no más de 0,8 nM, no más de 0,7 nM, no más de 0,6 nM, no más de 0,5 nM, no más de 0,4 nM, no más de 0,3 nM, no más de 0,2 nM, no más de 0,1 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 0,3 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 0,2 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación, se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 0,1 nM. Un experto en la técnica puede determinar los métodos para medir la unión del anticuerpo a la proteína C1 s.

[0289] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento con una K<d>de no más de 90 pM, no más de 80 pM, no más de 70 pM, no más de 60 pM, no más de 50 pM, no más de 40 pM, no más de 30 pM, no más de 20 pM, no más de 10 pM, no más de 9 pM, no más de 8 pM, no más de 7 pM, no más de 6 pM, no más de 5 pM, no más de 4 pM, no más de 3 pM, no más de 2 pM, no más de 1 pM.

[0291] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1 s del complemento humano con una constante de disociación (K<d>) de no más de 2,5 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1 s del complemento humano con una constante de disociación (K<d>) de no más de 1,5 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 2 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 1 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 0,9 nM, no más de 0,8 nM, no más de 0,7 nM, no más de 0,6 nM, no más de 0,5 nM, no más de 0,4 nM, no más de 0,3 nM, no más de 0,2 nM, no más de 0,1 nM. En algunas realizaciones, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 0,3 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 0,2 nM. En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una KD de no más de 0,1 nM. Un experto en la técnica puede determinar métodos para medir la unión de un anticuerpo a la proteína C1s humana. En algunos casos, se utiliza un ensayo de unión como se describe en los Ejemplos para determinar la K<d>entre un anticuerpo y una proteína C1 s humana.

[0293] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se une a una proteína C1s del complemento humano con una K<d>de no más de 90 pM, no más de 80 pM, no más de 70 pM, no más de 60 pM, no más de 50 pM, no más de 40 pM, no más de 30 pM, no más de 20 pM, no más de 10 pM, no más de 9 pM, no más de 8 pM, no más de 7 pM, no más de 6 pM, no más de 5 pM, no más de 4 pM, no más de 3 pM, no más de 2 pM, no más de 1 pM.

[0295] En algunos casos, el anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación inhibe la ruta clásica del complemento con una concentración inhibitoria semimáxima (IC50) de 10<-8>M o menos, 5 x 10<-9>M o menos, o 10<-9>M o menos.

[0297] El anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra a un individuo que lo necesita, puede reducir la actividad de la ruta del complemento (CP) del 10% al 100% (por ejemplo, del 10% al 15%, del 15% al 20%, del 20% al 25%, del 25% al 30%, del 30% al 40%, del 40% al 50%, del 50% al 60%, del 60% al 70%, del 70% al 80%, del 80% al 90% o del 90% al 100%) durante un período de tiempo de 1 día a 1 semana, de 1 semana a 2 semanas, de 2 semanas a 4 semanas, de 4 semanas a 2 meses, o más de 2 meses.

[0298] Por ejemplo, en algunos casos, una dosis única del anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra a un individuo que lo necesita, puede reducir la actividad de CP del 10% al 100% (por ejemplo, del 10% al 15%, del 15% al 20%, del 20% al 25%, del 25% al 30%, del 30% al 40%, del 40% al 50%, del 50% al 60%, del 60% al 70%, del 70% al 80%, del 80% al 90% o del 90% al 100%) durante un período de tiempo de 1 día a 1 semana, de 1 semana a 2 semanas, de 2 semanas a 4 semanas, de 4 semanas a 2 meses, o más de 2 meses.

[0300] El anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra a un individuo que lo necesita, puede proporcionar una concentración sérica del anticuerpo anti-C1s humanizado que es eficaz para reducir la actividad de CP del 10% al 100% (por ejemplo, del 10% al 15%, del 15% al 20%, del 20% al 25%, del 25% al 30%, del 30% al 40%, del 40% al 50%, del 50% al 60%, del 60% al 70%, del 70% al 80%, del 80% al 90% o del 90% al 100%) durante un período de tiempo de 1 día a 1 semana, de 1 semana a 2 semanas, de 2 semanas a 4 semanas, de 4 semanas a 2 meses, o más de 2 meses.

[0302] Ácidos nucleicos, vectores de expresión, y células hospedadoras

[0304] La presente divulgación proporciona un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación.

[0306] Una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación puede estar ligada operativamente a uno o más elementos reguladores, tales como un promotor y potenciador, que permiten la expresión de la secuencia nucleotídica en las células diana previstas (por ejemplo, una célula que está modificada genéticamente para sintetizar el anticuerpo codificado). Por tanto, en algunos casos, la presente divulgación proporciona un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, en el que la secuencia nucleotídica está ligada operativamente a uno o más elementos reguladores, por ejemplo un promotor y/o un potenciador.

[0308] Se conocen en la técnica elementos promotores y potenciadores adecuados. Los promotores adecuados para su uso en células hospedadoras procariotas incluyen, pero no se limitan a, un promotor de la ARN polimerasa del bacteriófago T7; un promotor T3; un promotor T5; un promotor lambda P; un promotor trp; un promotor del operón lac; un promotor híbrido, por ejemplo un promotor híbrido lac/tac, un promotor híbrido tac/trc, un promotor trp/lac, un promotor T7/lac; un promotor trc; un promotor tac, y similares; un promotor gpt; un promotor araBAD; promotores regulados in vivo, tal como un promotor ssaG o un promotor relacionado (véase, por ejemplo, la publicación de patente de EE. UU. n.° 20040131637), un promotor pagC (Pulkkinen y Miller, J. Bacteriol., 1991: 173(1): 86-93; Alpuche-Aranda et al., PNAS, 1992; 89(21): 10079-83), un promotor nirB (Harborne et al. (1992) Mol. Micro. 6:2805-2813), y similares (véase, por ejemplo, Dunstan et al. (1999) Infect. Immun. 67:5133-5141; McKelvie et al. (2004) Vaccine 22:3243-3255; y Chatfield et al. (1992) Biotechnol. 10:888-892); un promotor sigma70, por ejemplo un promotor sigma70 de consenso (véase, por ejemplo, los números de acceso de GenBank AX798980, AX798961 y AX798183); un promotor de fase estacionaria, por ejemplo un promotor dps, un promotor spv, y similares; un promotor derivado de la isla de patogenicidad SPI-2 (véase, por ejemplo, el dcoumento WO96/17951); un promotor actA (véase, por ejemplo, Shetron-Rama et al. (2002) Infect. Immun. 70:1087-1096); un promotor rpsM (véase, por ejemplo, Valdivia y Falkow (1996). Mol. Microbiol. 22:367); un promotor tet (véase, por ejemplo, Hillen,W. y Wissmann, A. (1989) En Saenger,W. y Heinemann, U. (eds), Topics in Molecular and Structural Biology, Protein-Nucleic Acid Interaction. Macmillan, Londres, Reino Unido, vol. 10, págs. 143-162); un promotor SP6 (véase, por ejemplo, Melton et al. (1984) Nucl. Acids Res.

[0309] 12:7035); y similares. Los promotores fuertes adecuados para su uso en procariotas tal como Escherichia coli incluyen, pero no se limitan a, Trc, Tac, T5, T7 y PLambda. Los ejemplos no limitativos de operadores para uso en células hospedadoras bacterianas incluyen un operador promotor de lactosa (la proteína represora LacI cambia de conformación cuando entra en contacto con lactosa, evitando así que la proteína represora LacI se una al operador), un operador promotor de triptófano (cuando se compleja con triptófano, la proteína represora TrpR tiene una conformación que se une al operador; en ausencia de triptófano, la proteína represora TrpR tiene una conformación que no se une al operador), y un operador promotor tac (véase, por ejemplo, deBoer et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25).

[0311] En algunas realizaciones, por ejemplo para la expresión en una célula de levadura, un promotor adecuado es un promotor constitutivo, tal como un promotor ADH1, un promotor PGK1, un promotor ENO, un promotor PYK1 y similares; o un promotor regulable, tal como un promotor GAL1, un promotor GAL10, un promotor ADH2, un promotor PHO5, un promotor CUP1, un promotor GAL7, un promotor MET25, un promotor<m>ET3, un promotor CYC1, un promotor HIS3, un promotor ADH1, un promotor PGK, un promotor GAPDH, un promotor ADC1, un promotor TRP1, un promotor URA3, un promotor LEU2, un promotor ENO, un promotor TP1, y AOX1 (por ejemplo, para su uso en Pichia).

[0313] Para la expresión en una célula eucariota, los promotores adecuados incluyen, pero no se limitan a, elementos promotores y potenciadores de genes de inmunoglobulina de cadena ligera y/o pesada; promotor temprano inmediato del citomegalovirus; promotor de la timidina cinasa del virus del herpes simple; promotores SV40 temprano y tardío; promotor presente en repeticiones terminales largas de un retrovirus; promotor de metalotioneína-I de ratón; y diversos promotores específicos de tejido conocidos en la técnica. Los promotores de mamífero constitutivos incluyen, aunque sin limitación, los promotores para los siguientes genes: hipoxantina fosforribosil transferasa (HPRT), adenosina desaminasa, piruvato cinasa, promotor de beta-actina, y otros promotores constitutivos. Otros promotores virales ejemplares que funcionan de manera constitutiva en células eucariotas incluyen, por ejemplo, promotores del citomegalovirus (CMV), virus de simios (por ejemplo, SV40), virus del papiloma, adenovirus, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), virus del sarcoma de Rous, citomegalovirus, las repeticiones terminales largas (LTR) del virus de la leucemia de Moloney, y otros retrovirus, y el promotor de la timidina cinasa del virus del herpes simple. Otros promotores constitutivos son conocidos por los expertos normales en la técnica. Los promotores útiles como secuencias de expresión génica de la divulgación también incluyen promotores inducibles. Los promotores inducibles se expresan en presencia de un agente inductor. Por ejemplo, el promotor de la metalotioneína se induce para promover la transcripción y traducción en presencia de determinados iones metálicos. Otros promotores inducibles son conocidos por los expertos normales en la técnica.

[0315] La selección del vector y del promotor apropiados está dentro del nivel de habilidad normal en la técnica.

[0317] Un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación puede estar presente en cualquier vector de expresión y/o un vector de clonación conocido en la técnica. Como se usa en este documento, un vector de expresión se refiere a cualquier construcción de ácido nucleico que contiene los elementos necesarios para la transcripción y traducción de una secuencia codificante insertada, o en el caso de un vector vírico de ARN, los elementos necesarios para la replicación y traducción, cuando se introduce en una célula hospedadora apropiada. Los vectores de expresión pueden incluir plásmidos, fagómidos, virus y derivados de los mismos.

[0318] Ciertos aspectos de la presente divulgación proporcionan un vector recombinante que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, en el que el vector recombinante es un vector de clonación. Ciertos aspectos de la presente divulgación proporcionan un vector recombinante que comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, en el que el vector recombinante es un vector de expresión, por ejemplo en el que la secuencia nucleotídica está ligada operativamente a una o más secuencias reguladoras apropiadas en el vector de expresión para asegurar la expresión del anticuerpo codificado. Cuando un anticuerpo en cuestión comprende dos polipéptidos separados, los ácidos nucleicos que codifican los dos polipéptidos se pueden clonar en el mismo vector o en vectores separados para formar uno o más vectores recombinantes. Un vector recombinante puede incluir un marcador seleccionable, un origen de replicación, y otras características que permiten la replicación y/o el mantenimiento del vector recombinante (por ejemplo, vector de expresión recombinante).

[0320] Los expertos en la técnica conocen un gran número de vectores y promotores adecuados; muchos de ellos están disponibles comercialmente para generar un vector recombinante en cuestión. Los siguientes vectores se proporcionan a modo de ejemplo. Bacterianos: pBs, phagescript, PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a (Stratagene, La Jolla, Calif., USA); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, y pRIT5 (Pharmacia, Uppsala, Suecia). Eucariotas: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG (Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG y pSVL (Pharmacia).

[0322] Los vectores de expresión generalmente tienen sitios de restricción convenientes ubicados cerca de la secuencia promotora para permitir la inserción de secuencias de ácidos nucleicos que codifican proteínas heterólogas. Puede estar presente un marcador seleccionable operativo en el hospedante de expresión. Los vectores de expresión adecuados incluyen, pero no se limitan a, vectores virales. Los ejemplos de vectores virales incluyen, pero no se limitan a, vectores virales basados en: virus de la vacuna; poliovirus; adenovirus (véanse, por ejemplo, Li et al., Invest Opthalmol Vis Sci 35:25432549, 1994; Borras et al., Gene Ther 6:515 524, 1999; Li y Davidson, PNAS 92:77007704, 1995; Sakamoto et al., H Gene Ther 5:1088 1097, 1999; los documentos WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 y WO 95/00655); virus adenoasociados (véanse, por ejemplo, Ali et al., Hum Gene Ther 9:81 86, 1998, Flannery et al., PNAS 94:69166921, 1997; Bennett et al., Invest Opthalmol Vis Sci 38:28572863, 1997; Jomary et al., Gene Ther 4:683690, 1997, Rolling et al., Hum Gene Ther 10:641 648, 1999; Ali et al., Hum Mol Genet 5:591 594, 1996; Srivastava en el documento WO 93/09239, Samulski et al., J. Vir. (1989) 63:3822-3828; Mendelson et al., Virol. (1988) 166:154-165; y Flotte et al., PNAS (1993) 90:10613-10617); SV40; virus del herpes simple; un vector retroviral (por ejemplo, virus de la leucemia murina, virus de la necrosis del bazo, y vectores derivados de retrovirus tales como el virus del sarcoma de Rous, el virus del sarcoma de Harvey, el virus de la leucosis aviar, el virus de la inmunodeficiencia humana (véanse, por ejemplo, Miyoshi et al., PNAS 94:1031923, 1997; Takahashi et al., J Virol 73:7812 7816, 1999), virus del sarcoma mieloproliferativo, y virus del tumor mamario); y similares.

[0324] En algunas realizaciones, el vector es un vector viral. Los vectores virales incluyen, pero no se limitan a, secuencias de ácidos nucleicos de los siguientes virus: retrovirus, tales como el virus de la leucemia murina de Moloney, el virus del sarcoma murino de Harvey, el virus del tumor mamario murino, y el virus del sarcoma de Rous; adenovirus, virus adenoasociado; virus de tipo SV40; poliomavirus; virus de Epstein-Barr; virus del papiloma; virus del herpes; virus de la vacuna; virus de la polio; y virus de ARN tal como un retrovirus. Se pueden emplear fácilmente otros vectores bien conocidos en la técnica. Determinados vectores víricos se basan en virus eucarióticos no citopáticos en que se han remplazado genes no esenciales con el gen de interés. Virus no citopáticos incluyen retrovirus, cuyo ciclo vital implica retrotranscripción del ARN vírico genómico en ADN con posterior integración provírica en ADN de la célula hospedadora. Los retrovirus se han aprobado para ensayos de genoterapia en seres humanos. Los más útiles son aquellos retrovirus que son deficientes en replicación (es decir, capaces de dirigir la síntesis de las proteínas deseadas, pero incapaces de fabricar una partícula infecciosa). Estos vectores de expresión retrovirales genéticamente alterados tienen una utilidad general para la transducción de genes de alta eficiencia in vivo. Los protocolos estándar para producir retrovirus deficientes en la replicación (incluidos las etapas de incorporación de material genético exógeno en un plásmido, transfección de una línea celular de empaquetamiento con plásmido, producción de retrovirus recombinantes por la línea celular de empaquetamiento, recolección de partículas virales de medios de cultivo de tejidos, e infección de las células diana con partículas virales) se proporcionan en Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., Nueva York (1990) y Murry, E. J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991).

[0326] En una realización, el virus es un virus adenoasociado, un virus de ADN bicatenario. El virus adenoasociado puede diseñarse para que tenga deficiencia en la replicación y sea capaz de infectar una amplia gama de tipos y especies de células. Además, tiene ventajas tal como estabilidad frente al calor y a disolventes lipídicos; altas frecuencias de transducción en células de diversos linajes, incluidas las células hematopoyéticas; y falta de inhibición de la superinfección, lo que permite de este modo múltiples series de transducciones. Según se informa, el virus adenoasociado puede integrarse en ADN celular humano de una manera específica de sitio, minimizando de ese modo la posibilidad de mutagénesis por inserción y variabilidad de la expresión del gen insertado característica de infección retrovírica. Además, se han seguido infecciones por virus adenoasociado de tipo silvestre en histocultivo durante más de 100 pases en ausencia de presión selectiva, lo que implica que la integración genómica del virus adenoasociado es un acontecimiento relativamente estable. El virus adenoasociado también puede funcionar de una manera extracromosómica.

[0328] En otra realización, el vector viral es un virus adenoasociado (AAV) que se ha manipulado para transportar un polinucleótido que codifica el anticuerpo anti-C1s como se describe en este documento. Se han descrito métodos generales para obtener AAV recombinantes (rAAV). Véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. 8.,734.809, 2013/0195801 así como las referencias allí citadas. En algunas realizaciones, un vector rAAV comprende una o más repeticiones terminales invertidas (ITR) de AAV y un transgén de interés (por ejemplo, una secuencia polinucleotídica FIX optimizada). En ciertas realizaciones, los métodos para producir rAAV implican cultivar una célula hospedadora deseada que contiene una secuencia de ácido nucleico que codifica una proteína de la cápside de AAV o un fragmento de la misma; un gen rep funcional; un vector rAAV compuesto por repeticiones terminales invertidas (ITR) de AAV y un transgén de interés; y suficientes funciones auxiliares para permitir el empaquetamiento del vector AAV recombinante en las proteínas de la cápside de AAV. Se han descrito materiales y métodos para realizar estos procedimientos y otros relacionados, por ejemplo en la patente de EE. UU. 8.734.809, 2013/0195801, y documentos PCT/US1997/015692, PCT/US2002/033692, PCT/US2002/033630, WO2007/148971, WO00/20561, WO03/042361 y WO2007/04670.

[0330] Se pueden utilizar de acuerdo con la presente divulgación una o más secuencias de vectores AAV diferentes derivadas de casi cualquier serotipo. La elección de una secuencia de vector AAV particular estará guiada por parámetros conocidos tal como el tropismo de interés, los rendimientos de vector requeridos, etc. Generalmente, los serotipos de AAV tienen secuencias genómicas de homología significativa en los niveles de aminoácidos y ácidos nucleicos, proporcionan un conjunto relacionado de funciones genéticas, producen viriones que están relacionados, y se replican y ensamblan de manera similar. Para conocer la secuencia genómica de los diversos serotipos de AAV y obtener una descripción general de las similitudes genómicas, véase, por ejemplo, el número de acceso de GenBank U89790; el número de acceso de GenBank J01901; el número de acceso de GenBank AF043303; el número de acceso de GenBank AF085716; Chlorini et al. (1997, J. Vir. 71: 6823-33); Srivastava et al. (1983, J. Vir. 45:555-64); Chlorini et al. (1999, J. Vir. 73:1309-1319); Rutledge et al. (1998, J. Vir. 72:309-319); y Wu et al. (2000, J. Vir. 74: 8635-47). Los serotipos 1,2, 3, 4 y 5 de AAV son una fuente ilustrativa de secuencias nucleotídicas de AAV para su uso en el contexto de la presente divulgación. AAV6, AAV7, AAV8 o AAV9 o partículas similares a AAV recientemente desarrolladas obtenidas, por ejemplo, mediante técnicas de mezcla de cápsides y bibliotecas de cápsides de AAV, o de ITR recientemente diseñados, desarrollados o evolucionados, también son adecuados para ciertas aplicaciones de divulgación. Véase Dalkara, D et al. (2013), Sci Transl. Med. 5(189): 189ra76; Kotterman, MA Nat. Rev. Genet. (2014) 15(7):455.

[0332] En otras realizaciones, el vector deriva de lentivirus. En ciertas realizaciones, el vector es un vector de un lentivirus recombinante capaz de infectar células que no se dividen.

[0334] El genoma lentiviral y el ADN proviral suelen tener los tres genes que se encuentran en los retrovirus: gag, pol y env, que están flanqueados por dos secuencias de repetición terminal larga (LTR). El gen gag codifica las proteínas estructurales internas (matriz, cápside y nucleocápside); el gen pol codifica la ADN polimerasa dirigida por ARN (transcriptasa inversa), una proteasa y una integrasa; y el gen env codifica las glicoproteínas de la envoltura viral. Las LTR 5' y 3' sirven para promover la transcripción y la poliadenilación del ARN del virión. La LTR contiene todas las demás secuencias que actúan en cis necesarias para la replicación viral. Los lentivirus tienen genes adicionales, incluidos vif, vpr, tat, rev, vpu, nef y vpx (en VIH-1, VIH-2 y/o VIS).

[0336] Adyacentes a la LTR 5' hay secuencias necesarias para la transcripción inversa del genoma (el sitio de unión del cebador del ARNt) y para la encapsidación eficiente del ARN viral en partículas (el sitio Psi). Si faltan en el genoma viral las secuencias necesarias para la encapsidación (o empaquetamiento del ARN retroviral en viriones infecciosos), el defecto de cis impide la encapsidación del ARN genómico.

[0338] Sin embargo, el mutante resultante sigue siendo capaz de dirigir la síntesis de todas las proteínas del virión. La divulgación proporciona un método para producir un lentivirus recombinante capaz de infectar una célula que no se divide, que comprende transfectar una célula hospedadora adecuada con dos o más vectores que portan las funciones de empaquetamiento, a saber, gag, pol y env, así como rev y tat. Como se divulgará más adelante, los vectores que carecen de un gen tat funcional son deseables para ciertas aplicaciones. Así, por ejemplo, un primer vector puede proporcionar un ácido nucleico que codifica un gag viral y un pol viral, y otro vector puede proporcionar un ácido nucleico que codifica un env viral para producir una célula de empaquetamiento. La introducción de un vector que proporciona un gen heterólogo, identificado aquí como un vector de transferencia, en esa célula de empaquetamiento produce una célula productora que libera partículas virales infecciosas que portan el gen extraño de interés.

[0340] De acuerdo con la configuración indicada anteriormente de vectores y genes extraños, el segundo vector puede proporcionar un ácido nucleico que codifica un gen de envoltura viral (env). El gen env puede derivar de casi cualquier virus adecuado, incluidos los retrovirus. En algunas realizaciones, la proteína env es una proteína de envoltura anfotrópica que permite la transducción de células de especies humanas y de otras especies.

[0341] Los ejemplos de genes env derivados de retrovirus incluyen, pero no se limitan a: virus de la leucemia murina de Moloney (MoMuLV o MMLV), virus del sarcoma murino de Harvey (HaMuSV o HSV), virus del tumor mamario murino (MuMTV o MMTV), virus de la leucemia del mono gibón (GaLV o GALV), virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y virus del sarcoma de Rous (RSV). También se pueden utilizar otros genes env, tal como la proteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV), la de los virus de la hepatitis y la de la gripe.

[0343] El vector que proporciona la secuencia de ácido nucleico env viral está asociado operativamente con secuencias reguladoras descritas en otra parte del presente documento.

[0345] En ciertas realizaciones, el vector incluye un vector lentiviral en el que se eliminaron los genes de virulencia del VIH env, vif, vpr, vpu y nef sin comprometer la capacidad del vector para transducir células que no se dividen.

[0347] En algunas realizaciones, el vector incluye un vector lentiviral que comprende una eliminación de la región U3 de la LTR 3'. La eliminación de la región U3 puede ser una eliminación completa o una eliminación parcial.

[0349] En algunas realizaciones, el vector lentiviral de la divulgación que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo anti-C1s descrito en este documento se puede transfectar en una célula con (a) una primera secuencia nucleotídica que comprende un gen gag, un pol, o gag y pol, y (b) una segunda secuencia nucleotídica que comprende un gen env heterólogo; en el que el vector lentiviral carece de un gen tat funcional. En otras realizaciones, la célula se transfecta además con una cuarta secuencia nucleotídica que comprende un gen rev. En ciertas realizaciones, el vector lentiviral carece de genes funcionales seleccionados entre vif, vpr, vpu, vpx y nef, o una combinación de los mismos.

[0351] En ciertas realizaciones, un vector lentiviral comprende una o más secuencias nucleotídicas que codifican una proteína gag, un elemento de respuesta Rev, una pista de polipurina central (cPPT), o cualquier combinación de los mismos.

[0352] Se describen ejemplos de vectores lentivirales en los documentos WO9931251, WO9712622, WO9817815, WO9817816, y WO9818934.

[0354] Otros vectores incluyen vectores plasmídicos. Los vectores plasmídicos se han descrito ampliamente en la técnica, y son bien conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. En los últimos años, los vectores plasmídicos se han encontrado particularmente ventajosos para suministrar genes a células in vivo a causa de su incapacidad de replicarse dentro e integrarse en una genoma hospedador. Estos plásmidos, sin embargo, que tienen un promotor compatible con la célula hospedadora, pueden expresar un péptido a partir de un gen codificado de forma funcional dentro del plásmido. Algunos plásmidos usados normalmente disponibles de proveedores comerciales incluyen pBR322, pUC18, pUC19, diversos plásmidos pcDNA, pRC/CMV, diversos plásmidos pCMV, pSV40 y pBlueScript. Ejemplos adicionales de plásmidos específicos incluyen pcDNA3.1, número de catálogo V79020; pcDNA3.1/hygro, número de catálogo V87020; pcDNA4/myc-His, número de catálogo V86320; y pBudCE4.1, número de catálogo V53220, todos de Invitrogen (Carlsbad, CA.). Otros plásmidos son bien conocidos por los expertos normales en la técnica. Además, los plásmidos pueden diseñarse de forma personalizada utilizando técnicas estándar de biología molecular para eliminar y/o añadir fragmentos específicos de ADN.

[0356] Células hospedadoras

[0358] La presente divulgación proporciona células hospedadoras modificadas genéticamente aisladas (por ejemplo, células in vitro) que están modificadas genéticamente con un ácido nucleico en cuestión. En algunas realizaciones, una célula hospedadora modificada genéticamente aislada en cuestión puede producir un anticuerpo en cuestión. Tal célula se denomina "célula recombinante" o "célula hospedadora modificada genéticamente". Una célula hospedadora modificada genéticamente de la presente divulgación comprende un ácido nucleico que comprende una secuencia nucleotídica que codifica el anticuerpo antiC1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación.

[0360] Las células hospedadoras adecuadas incluyen células hospedadoras eucariotas, tal como una célula de mamífero, una célula hospedadora de insecto, una célula de levadura; y células procariotas, tal como una célula bacteriana. La introducción de un ácido nucleico en cuestión en la célula hospedadora se puede efectuar, por ejemplo, mediante precipitación con fosfato de calcio, transfección mediada por DEAE dextrano, transfección mediada por liposomas, electroporación, u otro método conocido.

[0362] Las células de mamíferos adecuadas incluyen células primarias y líneas celulares inmortalizadas. Las líneas de células de mamíferos adecuadas incluyen líneas de células humanas, líneas de células de primates no humanos, líneas de células de roedores (por ejemplo, ratón, rata), y similares. sLas líneas celulares de mamíferos adecuadas incluyen, pero no se limitan a, células HeLa (por ejemplo, American Type Culture Collection (ATCC) No. CCL-2), células CHO (por ejemplo, ATCC Nos. CRL9618, CCL61, C<r>L9096), células 293 (por ejemplo, ATCC No. CRL-1573), células Vero, células NIH 3T3 (por ejemplo, ATCC No. CRL-1658), células Huh-7, células BHK (por ejemplo, AT<c>C No. CCL10), células PC12 (ATCC No. CRL1721), células COS, células COS-7 (At Cc No. CRL1651), CVI (línea de riñón de mono), células RAT1, células L de ratón (ATCC No. CCLI.3), células de riñón embrionario humano (HEK) (ATCC No. CRL1573), células HLHepG2, y similares. En algunos casos, las células son células HEK. En ciertas realizaciones, las células son células HEK 293. En algunos casos, las células son células CHO, por ejemplo, células CHO-K1 (ATCC No. CCL-61), células CHO-M, células CHO-DG44 (ATCC No. PTA-3356), DUXB11 (línea de ovario de hámster chino, DHFR menos), R1610 (fibroblasto de hámster chino), BALBC/3T3 (fibroblasto de ratón), HAK (línea de riñón de hámster), SP2/O (mieloma de ratón), P3x63-Ag3.653 (mieloma de ratón), BFA-1c1BPT (células endoteliales bovinas), RAJI (linfocito humano), PER.C6®, NS0, CAP, BHK21, y similares. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es una célula COS. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es una célula 293. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es una célula CHO.

[0364] Las células de levadura adecuadas incluyen, pero no se limitan a, Pichia pastoris, Pichia finlandica, Pichia trehalophila, Pichia koclamae, Pichia membranaefaciens, Pichia opuntiae, Pichia thermotolerans, Pichia salictaria, Pichia guercuum, Pichia pijperi, Pichia stiptis, Pichia methanolica, Pichia sp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, Kluyveromyces sp., Kluyveromyces lactis, Candida albicans, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, Fusarium sp., Fusarium gramineum, Fusarium venenatum, Neurospora crassa, Chlamydomonas reinhardtii, y similares. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es una Saccharomyces. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es una Pichia.

[0366] Las células procariotas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de una variedad de cepas de laboratorio de Escherichia coli, Bacillus (por ejemplo, B. subtilis), Lactobacillus sp., y similares. Véase, por ejemplo, Carrier et al. (1992) J. Immunol. 148:1176-1181; patente de EE.UU. n° 6.447.784; y Sizemore et al. (1995) Science 270:299-302. Normalmente, la cepa de laboratorio es aquella que no es patógena. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es Escherichia coli. En algunas realizaciones, la célula hospedadora es Bacillus subtilis.

[0368] La introducción de las moléculas de ácido nucleico aisladas de la divulgación en la célula hospedadora se puede lograr mediante diversas técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica. Estas incluyen, pero no se limitan a, transfección (incluida electroforesis y electroporación), fusión de protoplastos, precipitación con fosfato de calcio, fusión de células con ADN envuelto, microinyección, e infección con virus intacto. Véase, Ridgway, A. A. G. "Mammalian Expression Vectors" Capítulo 24.2, págs. 470-472 Vectors, Rodriguez y Denhardt, Eds. (Butterworths, Boston, Mass. 1988). Lo más preferible es que la introducción del plásmido en el hospedante se realice mediante electroporación. Las células transformadas se cultivan en condiciones apropiadas para la producción de las cadenas ligeras y cadenas pesadas, y se analizan para determinar la síntesis de proteínas de cadena ligera y/o pesada. Las técnicas de ensayo ejemplares incluyen el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), el radioinmunoensayo (RIA) o el análisis de clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS), inmunohistoquímica y similares.

[0369] Las células hospedadoras que comprenden las moléculas de ácido nucleico aisladas de la divulgación se cultivan en un medio de crecimiento apropiado. Como se usa en este documento, la expresión "medio de cultivo apropiado" significa un medio que contiene nutrientes requeridos para el crecimiento de las células. Los nutrientes necesarios para el crecimiento celular pueden incluir una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, aminoácidos esenciales, vitaminas, minerales, y factores de crecimiento. Opcionalmente, los medios pueden contener uno o más factores de selección. Opcionalmente, el medio puede contener suero bovino de ternero o suero fetal de ternero (FCS). En una realización, el medio no contiene sustancialmente IgG. El medio de cultivo en general seleccionará células que contienen la construcción de ADN por, por ejemplo, selección con fármaco o deficiencia en un nutriente esencial que se complementa mediante el marcador de selección en la construcción de ADN o se cotransfecta con la construcción de ADN. Las células de mamíferos cultivadas generalmente se cultivan en medios disponibles comercialmente que contienen suero o sin suero (por ejemplo, MEM, DMEM, DMEM/F12). En una realización, el medio es CDoptiCHO (Invitrogen, Carlsbad, CA). En otra realización, el medio es CD17 (Invitrogen, Carlsbad, CA.). La selección de un medio apropiado para la línea celular particular utilizada está dentro del nivel de los expertos normales en la técnica.

[0371] C om posiciones Farm acéuticas

[0373] La presente divulgación proporciona composiciones, incluidas composiciones farmacéuticas que comprenden el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación. En general, una composición farmacéutica, también denominada en este documento formulación, comprende una cantidad eficaz del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación. Una "cantidad eficaz" significa una dosis suficiente para producir un resultado deseado, por ejemplo reducción de un síntoma adverso asociado con una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, mejora de un síntoma de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, ralentización de la progresión de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, etc. Generalmente, el resultado deseado es al menos una reducción de un síntoma de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, en comparación con un control. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación se formula y/o modifica para permitir que el anticuerpo cruce la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se administra de tal manera que evita la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones, el anticuerpo antiC1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se formula con un agente que facilita el cruce de la barrera hematoencefálica. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se fusiona, directamente o a través de un enlazador, a un compuesto que promueve el cruce de la barrera hematoencefálica.

[0375] Form ulaciones

[0377] La composición farmacéutica puede formularse para administración parenteral (es decir, intravenosa, subcutánea o intramuscular) mediante inyección en bolo. Las formulaciones inyectables pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo en ampollas o en envases multidosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y contener agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua libre de pirógenos.

[0379] El anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se puede administrar al hospedante utilizando cualquier medio conveniente capaz de dar como resultado el efecto terapéutico o el efecto diagnóstico deseado. De esta forma, el agente puede incorporarse en una variedad de formulaciones para administración terapéutica. Más particularmente, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se puede formular en composiciones farmacéuticas mediante combinación con vehículos farmacéuticamente aceptables, diluyentes farmacéuticamente aceptables, u otros excipientes farmacéuticamente aceptables apropiados, y se puede formular en preparaciones en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes y aerosoles. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica comprende el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

[0381] En formas de dosificación farmacéuticas, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se puede administrar en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, o también se pueden usar solos o en asociación apropiada, así como en combinación, con otros compuestos farmacéuticamente activos. Los siguientes métodos y excipientes son meramente ejemplares y de ningún modo limitativos.

[0383] Para preparaciones orales, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se puede usar solo o en combinación con aditivos apropiados para hacer comprimidos, polvos, gránulos o cápsulas, por ejemplo con aditivos convencionales, tales como lactosa, manitol, almidón de maíz o almidón de patata; con aglutinantes, tales como celulosa cristalina, derivados de celulosa, goma arábiga, almidón de maíz o gelatinas; con disgregantes, tales como almidón de maíz, almidón de patata o carboximetilcelulosa sódica; con lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio; y si se desea, con diluyentes, agentes tamponantes, agentes humectantes, conservantes y agentes aromatizantes.

[0385] El anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación se puede formular en preparaciones para inyección disolviendo, suspendiendo o emulsionando el anticuerpo en un disolvente acuoso o no acuoso, tal como aceites vegetales u otros similares, propilenglicol, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres orgánicos inyectables (por ejemplo, oleato de etilo), ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilenglicol; y si se desea, con aditivos convencionales tales como solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsionantes, estabilizantes y conservantes. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer lactado, o aceites fijos. Los vehículos intravenosos incluyen reponedores de líquidos y nutrientes, reponedores de electrolitos (tales como los basados en dextrosa de Ringer), y similares. Además, la composición farmacéutica de la presente divulgación puede comprender otros agentes tales como dopamina o fármacos psicofarmacológicos, dependiendo del uso previsto de la composición farmacéutica.

[0386] Las composiciones farmacéuticas que comprenden el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se preparan mezclando el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación que tiene el grado de pureza deseado con vehículos fisiológicamente aceptables opcionales, otros excipientes, estabilizadores, tensioactivos, tampones y/o agentes de tonicidad. Los vehículos, excipientes y/o estabilizadores aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen tampones tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico, glutationa, cisteína, metionina y ácido cítrico; conservantes (tales como etanol, alcohol bencílico, fenol, mcresol, p-clor-m-cresol, metil- o propilparabenos, cloruro de benzalconio o combinaciones de los mismos); aminoácidos tales como arginina, glicina, ornitina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico, isoleucina, leucina, alanina, fenilalanina, tirosina, triptófano, metionina, serina, prolina y combinaciones de los mismos; monosacáridos, disacáridos y otros hidratos de carbono; polipéptidos de bajo peso molecular (menos de alrededor de 10 residuos); proteínas, tales como gelatina o albúmina sérica; agentes quelantes tal como EDTA; azúcares tales como trehalosa, sacarosa, lactosa, glucosa, manosa, maltosa, galactosa, fructosa, sorbosa, rafinosa, glucosamina, N-metilglucosamina, galactosamina y ácido neuramínico; y/o tensioactivos no iónicos tales como Tween, Brij Pluronics, Triton-X, o polietilenglicol (PEG).

[0387] La composición farmacéutica puede estar en forma líquida, en forma liofilizada o en forma líquida reconstituida a partir de una forma liofilizada, en la que la preparación liofilizada debe reconstituirse con una solución estéril antes de la administración. El procedimiento estándar para reconstituir una composición liofilizada es añadir nuevamente un volumen de agua pura (normalmente equivalente al volumen eliminado durante la liofilización); sin embargo, se pueden utilizar soluciones que comprenden agentes antibacterianos para la producción de composiciones farmacéuticas para administración parenteral; véase también Chen (1992) Drug Dev Ind Pharm 18, 1311-54.

[0389] Las concentraciones ejemplares de anticuerpos en una composición farmacéutica en cuestión pueden variar de alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 200 mg/ml, o de alrededor de 50 mg/ml a alrededor de 200 mg/ml, o de alrededor de 150 mg/ml a alrededor de 200 mg/ml.

[0391] Una formulación acuosa del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se puede preparar en una solución de pH tamponado, por ejemplo a un pH que oscila de alrededor de 4,0 a alrededor de 7,0, o de alrededor de 5,0 a alrededor de 6,0, o alternativamente alrededor de 5,5. Los ejemplos de tampones que son adecuados para un pH dentro de este intervalo incluyen tampones de fosfato, histidina, citrato, succinato, acetato y otros tampones de ácidos orgánicos. La concentración del tampón puede ser de alrededor de 1 mM a alrededor de 100 mM, o de alrededor de 5 mM a alrededor de 50 mM, dependiendo, por ejemplo, del tampón y de la tonicidad deseada de la formulación.

[0393] Se puede incluir un agente de tonicidad en la formulación del anticuerpo para modular la tonicidad de la formulación. Los agentes de tonicidad ejemplares incluyen cloruro de sodio, cloruro de potasio, glicerina y cualquier componente del grupo de aminoácidos, azúcares así como combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la formulación acuosa es isotónica, aunque pueden ser adecuadas soluciones hipertónicas o hipotónicas. El término "isotónico" denota una solución que tiene la misma tonicidad que alguna otra solución con la que se compara, tal como una solución salina fisiológica o suero. Los agentes de tonicidad se pueden utilizar en una cantidad de alrededor de 5 mM a alrededor de 350 mM, por ejemplo en una cantidad de 100 mM a 350 nM.

[0395] También se puede añadir un tensioactivo a la formulación del anticuerpo para reducir la agregación del anticuerpo formulado y/o minimizar la formación de partículas en la formulación y/o reducir la adsorción. Los tensioactivos ejemplares incluyen ésteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitán (Tween), éteres de alquilo de polioxietileno (Brij), éteres de alquilfenilpolioxietileno (Triton-X), copolímero de polioxietileno-polioxipropileno (Poloxamer, Pluronic), y dodecil sulfato de sodio (SDS). Ejemplos de ésteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitán adecuados son el polisorbato 20 (vendido bajo la marca comercial TWEEN 20™) y el polisorbato 80 (vendido bajo la marca comercial Tween 80™). Ejemplos de copolímeros de polietileno-polipropileno adecuados son los que se venden bajo los nombres PLURONIC® F68 o POLOXAMER 188™. Ejemplos de éteres de alquilo de polioxietileno adecuados son los que se venden bajo la marca registrada BRIJ™. Las concentraciones ejemplares de tensioactivo pueden variar desde alrededor de 0,001% hasta alrededor de 1% p/v.

[0397] También se puede añadir un lioprotector para proteger el ingrediente activo lábil (por ejemplo, una proteína) contra condiciones desestabilizadoras durante el procedimiento de liofilización. Por ejemplo, los lioprotectores conocidos incluyen azúcares (incluida la glucosa y la sacarosa); polioles (incluidos el manitol, el sorbitol y el glicerol); y aminoácidos (incluidos la alanina, la glicina y el ácido glutámico). Los lioprotectores se pueden incluir en una cantidad de alrededor de 10 mM a 500 nM.

[0399] En algunos casos, una formulación en cuestión incluye el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo antiC1s humanizado, de la presente divulgación, y uno o más de los agentes identificados anteriormente (por ejemplo, un tensioactivo, un tampón, un estabilizador, un agente de tonicidad), y está esencialmente libre de uno o más conservantes, tales como etanol, alcohol bencílico, fenol, m-cresol, p-clor-m-cresol, metil o propilparabenos, cloruro de benzalconio, y combinaciones de los mismos. En otras realizaciones, se incluye un conservante en la formulación, por ejemplo en concentraciones que oscilan de alrededor de 0,001 a alrededor de 2 % (p/v).

[0401] Por ejemplo, una formulación sujeto puede ser una formulación líquida o liofilizada adecuada para administración parenteral, y puede comprender: alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 200 mg/ml del anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación; alrededor de 0,001% a alrededor de 1% de al menos un tensioactivo; alrededor de 1 mM a alrededor de 100 mM de un tampón; opcionalmente alrededor de 10 mM a alrededor de 500 mM de un estabilizador; y alrededor de 5 mM a alrededor de 305 mM de un agente de tonicidad; y tiene un pH de alrededor de 4,0 a alrededor de 7,0.

[0403] Como otro ejemplo, una formulación parenteral en cuestión es una formulación líquida o liofilizada que comprende: alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 200 mg/ml del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación; 0,04% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5.

[0405] Como otro ejemplo, una formulación parenteral en cuestión comprende una formulación liofilizada que comprende: 1) 15 mg/ml del anticuerpo en cuestión (por ejemplo, un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación); 0,04% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 2) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,04% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 3) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 4) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,04% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina y 250 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5; o 5) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina y 250 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5.

[0407] Como otro ejemplo, una formulación parenteral en cuestión es una formulación líquida que comprende: 1) 7,5 mg/ml del anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 120 mM de L-histidina; y 250 125 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 2) 37,5 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 10 mM de L-histidina; y 125 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 3) 37,5 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,01% de Tween 20 p/v; 10 mM de L-histidina; y 125 mM de sacarosa; y tiene un pH de 5,5; o 4) 37,5 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 10 mM de L-histidina; 125 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5; o 5) 37,5 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,01 % de Tween 20 p/v; 10 mM de L-histidina; y 125 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5; o 6) 5 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5; o 7) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de manitol; y tiene un pH de 5,5; o 8) 75 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 140 mM de cloruro sódico; y tiene un pH de 5,5; o 9) 150 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de trehalosa; y tiene un pH de 5,5; o 10) 150 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 250 mM de manitol; y tiene un pH de 5,5; o 11) 150 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,02% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 140 mM de cloruro sódico; y tiene un pH de 5,5; o 12) 10 mg/ml de un anticuerpo en cuestión; 0,01% de Tween 20 p/v; 20 mM de L-histidina; y 40 mM de cloruro de sodio; y tiene un pH de 5,5.

[0409] El anticuerpo en cuestión se puede utilizar en una formulación en aerosol para administrarse por inhalación. Un anticuerpo en cuestión puede formularse en propelentes presurizados aceptables tales como diclorodifluorometano, propano, nitrógeno y similares. Las formulaciones en aerosol, tales como las formulaciones en aerosol nasal, incluyen soluciones acuosas purificadas u otras soluciones del agente activo con agentes conservantes y agentes isotónicos. Estas formulaciones se ajustan a un pH y estado isotónico compatibles con las mucosas nasales.

[0411] Se pueden proporcionar formas de dosificación unitarias para administración oral, tales como jarabes, elixires y suspensiones, en las que cada unidad de dosificación, por ejemplo cucharadita, cucharada o comprimido, contiene una cantidad predeterminada de la composición. De manera similar, las formas de dosificación unitarias para inyección o administración intravenosa pueden comprender un anticuerpo en cuestión en una composición como una solución en agua estéril, solución salina normal u otro vehículo farmacéuticamente aceptable.

[0413] La expresión "forma de dosificación unitaria", como se utiliza en este documento, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y animales, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, calculado en una cantidad suficiente para producir el efecto deseado en asociación con un diluyente, portador o vehículo farmacéuticamente aceptable. Las especificaciones para un anticuerpo en cuestión pueden depender del anticuerpo particular empleado y del efecto que se desea lograr, así como de la farmacodinámica asociada con cada anticuerpo en el hospedante.

[0415] Otros modos de administración también encontrarán utilidad con un método de la presente divulgación. Por ejemplo, un anticuerpo en cuestión puede formularse en supositorios y, en algunos casos, en composiciones intranasales y en aerosol. Para los supositorios, la composición del vehículo incluirá aglutinantes y transportadores tradicionales tales como polialquilenglicoles o triglicéridos. Dichos supositorios pueden formarse a partir de mezclas que contienen el ingrediente activo en el intervalo de alrededor de 0,5% a alrededor de 10% (p/p), por ejemplo, alrededor de 1% a alrededor de 2%.

[0417] Las formulaciones intranasales generalmente incluyen vehículos que no causan irritación de la mucosa nasal ni alteran significativamente la función ciliar. Se pueden emplear diluyentes tales como agua, solución salina acuosa u otras sustancias conocidas. Las formulaciones nasales también pueden contener conservantes tales como, pero sin limitarse a, clorobutanol y cloruro de benzalconio. Puede estar presente un tensioactivo para mejorar la absorción del anticuerpo en cuestión por la mucosa nasal.

[0419] El anticuerpo en cuestión se puede administrar como una formulación inyectable. Normalmente, las composiciones inyectables se preparan como soluciones o suspensiones líquidas; también se pueden preparar formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en vehículos líquidos antes de la inyección. La preparación también puede emulsionarse o el anticuerpo encapsularse en vehículos liposómicos.

[0421] Los vehículos excipientes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol, etanol o similares, y combinaciones de los mismos. Además, si se desea, el vehículo puede contener pequeñas cantidades de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsionantes o agentes amortiguadores de pH. Los métodos reales para preparar dichas formas de dosificación son conocidos o resultarán evidentes para los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, 17a edición, 1985. La composición o formulación a administrar contendrá, en cualquier caso, una cantidad de un anticuerpo en cuestión adecuada para lograr el estado deseado en el sujeto a tratar.

[0422] Los excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como vehículos, adyuvantes, portadores o diluyentes, están fácilmente disponibles para el público. Además, las sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables, tales como agentes de ajuste de pH y tamponantes, agentes de ajuste de tonicidad, estabilizadores, agentes humectantes y similares, están fácilmente disponibles para el público.

[0424] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se formula en una formulación de liberación controlada. Las preparaciones de liberación sostenida se pueden preparar utilizando métodos bien conocidos en la técnica. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo en el que las matrices están en forma de artículos moldeados, por ejemplo películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, copolímeros de ácido L-glutámico y L-glutamato de etilo, etileno-acetato de vinilo no degradable, hidrogeles, polilactidas, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables, y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. La posible pérdida de actividad biológica y los posibles cambios en la inmunogenicidad de los anticuerpos contenidos en preparaciones de liberación sostenida se pueden prevenir utilizando aditivos apropiados, controlando el contenido de humedad y desarrollando composiciones de matriz polimérica específicas.

[0426] La liberación controlada dentro del alcance de la presente divulgación puede entenderse como cualquiera de varias formas de dosificación de liberación prolongada. Los siguientes términos pueden considerarse sustancialmente equivalentes a liberación controlada, para los fines de la presente divulgación: liberación continua, liberación controlada, liberación retardada, depósito, liberación extendida, liberación gradual, liberación inmediata, liberación a largo plazo, liberación programada, liberación prolongada, liberación proporcionada, liberación prolongada, depósito, retardar, liberación lenta, liberación espaciada, liberación sostenida, recubrimiento temporal, liberación cronometrada, acción retardada, acción extendida, acción en capas, acción prolongada, acción repetida, acción retardada, acción sostenida, y medicamentos de acción sostenida. Se pueden encontrar debates más amplios sobre estos términos en Lesczek Krowczynski, Extended-Release Dosage Forms, 1987 (CRC Press, Inc.).

[0428] Las diversas tecnologías de liberación controlada cubren un espectro muy amplio de formas de dosificación de fármacos. Las tecnologías de liberación controlada incluyen, pero no se limitan a, sistemas físicos y sistemas químicos.

[0429] Los sistemas físicos incluyen, pero no se limitan a, sistemas de depósito con membranas de control de velocidad, tales como microencapsulación, macroencapsulación y sistemas de membrana; sistemas de depósito sin membranas de control de velocidad, tales como fibras huecas, triacetato de celulosa ultra microporoso, y sustratos y espumas poliméricas porosas; sistemas monolíticos, incluidos aquellos sistemas disueltos físicamente en matrices no porosas, poliméricas o elastoméricas (por ejemplo, no erosionables, erosionables, resistentes a la penetración de agentes ambientales y degradables), y materiales dispersos físicamente en matrices no porosas, poliméricas o elastoméricas (por ejemplo, no erosionables, erosionables, resistentes a la penetración de agentes ambientales y degradables); estructuras laminadas, incluidas capas de depósito químicamente similares o diferentes a las capas de control externas; y otros métodos físicos, tales como bombas osmóticas o adsorción sobre resinas de intercambio iónico.

[0430] Los sistemas químicos incluyen, entre otros, la erosión química de matrices poliméricas (por ejemplo, erosión heterogénea u homogénea) o la erosión biológica de una matriz polimérica (por ejemplo, heterogénea u homogénea). Se puede encontrar una discusión adicional sobre las categorías de sistemas para liberación controlada en Agis F. Kydonieus, Controlled Release Technologies: Methods, Theory and Applications, 1980 (CRC Press, Inc.).

[0432] Hay una serie de formulaciones de fármacos de liberación controlada que se desarrollan para la administración oral. Estos incluyen, pero no se limitan a, sistemas de administración gastrointestinal controlados por presión osmótica; sistemas de administración gastrointestinal controlados por presión hidrodinámica; sistemas de administración gastrointestinal controlados por permeación de membrana, que incluyen dispositivos de administración gastrointestinal controlados por permeación de membrana microporosa; dispositivos de administración gastrointestinal de liberación controlada dirigidos al intestino resistentes a fluidos gástricos; sistemas de administración gastrointestinal controlados por difusión de gel; y sistemas de administración gastrointestinal controlados por intercambio iónico, que incluyen fármacos catiónicos y aniónicos. Se puede encontrar información adicional sobre los sistemas de administración de fármacos de liberación controlada en Yie W. Chien, Novel Drug Delivery Systems, 1992 (Marcel Dekker, Inc.).

[0434] D osificación

[0436] Una dosificación adecuada se puede determinar por el médico tratante u otro personal médico calificado, basándose en diversos factores clínicos. Como es bien sabido en las técnicas médicas, las dosis para cualquier paciente dependen de muchos factores, incluidos el tamaño del paciente, la superficie corporal, la edad, el compuesto particular que se va a administrar, el sexo del paciente, el momento y la vía de administración, la salud general y otros fármacos que se administren simultáneamente. El anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación, se puede administrar en cantidades entre 1 ng/kg de peso corporal y 20 mg/kg de peso corporal por dosis, por ejemplo entre 0,1 mg/kg de peso corporal y 10 mg/kg de peso corporal, por ejemplo entre 0,5 mg/kg de peso corporal y 5 mg/kg de peso corporal; sin embargo, se prevén dosis por debajo o por encima de este intervalo ejemplar, especialmente considerando los factores antes mencionados. Si el régimen es de infusión continua, también puede estar en el intervalo de 1 gg a 10 mg por kilogramo de peso corporal por minuto.

[0438] En algunas realizaciones, una dosis del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación está en el intervalo de 0,001 gg a 1000 gg; sin embargo, se prevén dosis por debajo o por encima de este intervalo ejemplar, especialmente considerando los factores antes mencionados. En algunas realizaciones, la dosis puede variar, por ejemplo de alrededor de 0,0001 a 100 mg/kg, o de alrededor de 0,01 a 5 mg/kg (por ejemplo, 0,02 mg/kg, 0,25 mg/kg, 0,5 mg/kg, 0,75 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, etc.) de peso corporal. Por ejemplo, las dosis pueden ser 1 mg/kg de peso corporal o 10 mg/kg de peso corporal o dentro del intervalo de 1-10 mg/kg, o al menos 1 mg/kg. También se pretende que las dosis intermedias en los intervalos anteriores estén dentro del alcance de la divulgación.

[0440] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se administra en una cantidad que proporciona una concentración sérica máxima de alrededor de 1 gg/ml a alrededor de 1 mg/ml, por ejemplo de alrededor de 1 gg/ml a alrededor de 2,5 gg/ml, de alrededor de 2,5 gg/ml a alrededor de 5 gg/ml, de alrededor de 5 gg/ml a alrededor de 7,5 gg/ml, de alrededor de 7,5 gg/ml a alrededor de 10 gg/ml, de alrededor de 10 gg/ml a alrededor de 25 gg/ml, de alrededor de 25 gg/ml a alrededor de 50 gg/ml, de alrededor de 50 gg/ml a alrededor de 100 gg/ml, de alrededor de 100 gg/ml a alrededor de 250 gg/ml, de alrededor de 250 gg/ml a alrededor de 500 gg/ml, de alrededor de 500 gg/ml a alrededor de 750 gg/ml, o de alrededor de 750 gg/ml a alrededor de 1000 gg/ml. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s en cuestión se administra en una cantidad que proporciona una concentración sérica máxima de más de 1 mg/ml, por ejemplo, de alrededor de 1 mg/ml a alrededor de 2 mg/ml, de alrededor de 2 mg/ml a alrededor de 5 mg/ml, o de alrededor de 5 mg/ml a alrededor de 10 mg/ml. Un anticuerpo humanizado de la presente divulgación se puede administrar de acuerdo con cualquier programa y durante cualquier período de tiempo.

[0442] Los expertos en la técnica comprenderán fácilmente que los niveles de dosis y los esquemas de administración pueden variar en función del anticuerpo específico, la gravedad de los síntomas y la susceptibilidad del sujeto a los efectos secundarios. Las dosis preferidas y los esquemas de administración para un compuesto determinado son fácilmente determinables por aquellos expertos en la técnica mediante una variedad de medios.

[0444] Vías de adm inistración

[0446] El anticuerpo en cuestión se puede administrar a un individuo utilizando cualquier método y vía disponibles adecuados para la administración del fármaco, incluidos los métodos in vivo y ex vivo, así como las vías de administración sistémicas y localizadas.

[0448] Las vías de administración convencionales y farmacéuticamente aceptables incluyen las vías de administración intranasal, intramuscular, intratraqueal, intratecal, intracraneal, subcutánea, intradérmica, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intraarterial (por ejemplo, a través de la arteria carótida), espinal o cerebral, rectal, nasal, oral, y otras vías de administración enteral y parenteral. Las vías de administración se pueden combinar, si se desea, o ajustar dependiendo del anticuerpo y/o del efecto deseado. La composición de anticuerpos en cuestión se puede administrar en una dosis única o en dosis múltiples. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía oral. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra mediante una vía de inhalación. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía intranasal. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra localmente. En algunas realizaciones, una composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía intracraneal. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía intravenosa. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía subcutánea. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía intramuscular. En algunas realizaciones, la composición de anticuerpos en cuestión se administra por vía intratecal.

[0450] El anticuerpo de la presente divulgación se puede administrar a un hospedante utilizando cualquier método y vía convencionales disponibles adecuados para la administración de fármacos convencionales, incluidas vías sistémicas o localizadas. En general, las vías de administración contempladas en la divulgación incluyen, pero no se limitan necesariamente a, las vías enteral, parenteral o inhalatoria.

[0452] Las vías de administración parenteral distintas de la administración por inhalación incluyen, pero no se limitan necesariamente a, las vías tópica, transdérmica, subcutánea, intramuscular, intraorbitaria, intracapsular, intraespinal, intraesternal, intratecal e intravenosa, es decir, cualquier vía de administración que no sea a través del canal alimentario. La administración parenteral se puede realizar para lograr la liberación sistémica o local del anticuerpo en cuestión. Cuando se desea una administración sistémica, la administración generalmente implica la administración tópica o mucosa invasiva o de absorción sistémica de preparaciones farmacéuticas.

[0454] El anticuerpo en cuestión también puede administrarse al sujeto mediante administración enteral. Las vías de administración enteral incluyen, pero no se limitan necesariamente a, la administración oral y rectal (por ejemplo, mediante un supositorio).

[0455] Por tratamiento se entiende al menos una mejora de los síntomas asociados con la condición patológica que afecta al hospedante, en el que mejora se utiliza en un sentido amplio para referirse a al menos una reducción en la magnitud de un parámetro, por ejemplo un síntoma, asociado con la condición patológica que se está tratando, tal como una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. Como tal, el tratamiento también incluye situaciones en las que la condición patológica, o al menos los síntomas asociados con ella, se inhiben completamente, por ejempl, se evita que ocurran, o se detienen, por ejemplo se terminan, de modo que el hospedante ya no sufre la condición patológica, o al menos los síntomas que caracterizan la condición patológica.

[0457] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación se administra mediante inyección y/o administración, por ejemplo a un sitio en una arteria cerebral o directamente en el tejido cerebral. El anticuerpo en cuestión, por ejemplo un anticuerpo humanizado, también se puede administrar directamente a un sitio diana, por ejemplo mediante administración biolística al sitio diana.

[0459] Una variedad de hospedantes (en el que el término "hospedante" se utiliza indistintamente en este documento con los términos "sujeto", "individuo" y "paciente") son tratables de acuerdo con los métodos del sujeto. Generalmente, dichos hospedantes son "mamíferos" o "mamífero", en los que estos términos se utilizan ampliamente para describir organismos que están dentro de la clase mammalia, incluidos los órdenes carnívoros (por ejemplo, gatos), herbívoros (por ejemplo, ganado, caballos y ovejas), omnívoros (por ejemplo, perros, cabras y cerdos), roedores (por ejemplo, ratones, cobayas y ratas) y primates (por ejemplo, seres humanos, chimpancés y monos). En algunas realizaciones, el hospedante es un individuo que tiene un sistema del complemento, tal como un mamífero, un pez o un invertebrado. En algunas realizaciones, el hospedante es un animal de compañía, un animal agrícola, un animal de trabajo, un animal de zoológico o un animal de laboratorio mamífero, pez o invertebrado que contiene un sistema de complemento. En algunas realizaciones, el hospedante es un ser humano.

[0461] Las realizaciones incluyen composiciones que comprenden un recipiente adecuado para contener una composición que comprende el anticuerpo anti-C1s en cuestión para su administración a un individuo. Por ejemplo, un anticuerpo en cuestión puede disponerse dentro de un recipiente adecuado para contener una composición farmacéutica. El recipiente puede ser, por ejemplo, una botella (por ejemplo, con un dispositivo de cierre, como una tapa), un blíster (por ejemplo, que puede prever el cierre de una o más dosis por blíster), un vial, un envase flexible (por ejemplo, bolsas de plástico o Mylar selladas), una ampolla (para dosis únicas en solución), un gotero, una jeringa, una película fina, un tubo y similares. En algunas realizaciones, un recipiente, tal como un recipiente estéril, comprende una composición farmacéutica en cuestión. En algunas realizaciones, el recipiente es una botella o una jeringa. En algunas realizaciones el recipiente es una botella. En algunas realizaciones, el recipiente es una jeringa.

[0463] Se proporcionan kits con dosis unitarias del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, por ejemplo en dosis orales o inyectables. En dichos kits, además de los recipientes que contienen las dosis unitarias, habrá un prospecto informativo que describe el uso y los beneficios asociados del anticuerpo en el tratamiento de la condición patológica de interés. Los compuestos preferidos y las dosis unitarias son los descritos anteriormente.

[0465] M étodos de tratam iento de una enferm edad o trastorno m ediado p o r e l com plem ento

[0467] También se divulgan, pero no forman parte de la presente invención, métodos para tratar a un sujeto que lo necesita con un anticuerpo anti-C1 s o un nucleótido que codifica un anticuerpo anti-C1 s de la presente divulgación. Los métodos comprenden el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. Los métodos generalmente implican administrar una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo, a un individuo que lo necesita. En algunos casos, la administración de un anticuerpo anti-C1 s modula la actividad del complemento C1 s en una célula, un tejido, un fluido o un órgano de un individuo, y trata la enfermedad o trastorno mediado por el complemento.

[0469] Ciertos aspectos que no forman parte de la presente invención proporcionan métodos para inhibir la activación del componente del complemento C4 en un individuo, comprendiendo los métodos administrar al individuo una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo. También se divulgan pero no forman parte de la presente invención métodos para inhibir la actividad del complemento C1s en un individuo, comprendiendo los métodos administrar al individuo una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo. También se divulgan, pero no forman parte de la presente invención, métodos para reducir el nivel de un producto de escisión de un componente del complemento en un individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano de un individuo), comprendiendo los métodos administrar al individuo una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo.

[0470] En algunos casos, un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende administrar al individuo una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una cantidad eficaz de una composición farmacéutica que comprende: a) un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación; y b) un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración a dicho individuo. El individuo puede ser un mamífero, tal como por ejemplo un ser humano. La administración puede realizarse por cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las descritas en este documento. La administración puede ser intravenosa, intratecal, subcutánea o intramuscular.

[0472] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo) en al menos alrededor de 1%, en al menos alrededor de 5%, en al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de un 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, al menos alrededor de 96%, al menos alrededor de 97%, al menos alrededor de 98%, al menos alrededor de 99%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel del producto de escisión del componente del complemento en el líquido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración puede realizarse por cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las descritas en este documento. En algunas realizaciones, la administración es intravenosa. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0474] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce la actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce, en un plazo de alrededor de 48 horas, en un plazo de alrededor de 24 horas, en un plazo de alrededor de 12 horas, en un plazo de alrededor de 8 horas o en un plazo de alrededor de 4 horas tras la administración del anticuerpo anti-C1 s, la actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano del individuo), en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%. al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con la actividad de la ruta clásica del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s. El individuo es un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular. El nivel de actividad de la ruta clásica del complemento se puede determinar utilizando cualquiera de una variedad de métodos. Como ejemplo no limitativo, la actividad de la ruta clásica del complemento se puede determinar ex vivo, por ejemplo determinando el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en una muestra de sangre, suero o plasma obtenida del individuo. Por ejemplo, la ruta clásica del complemento en la muestra de sangre, suero o plasma se puede activar ex vivo, y se puede determinar la cantidad de un producto de escisión del componente del complemento (tal como C5b-9) generado por dicha activación.

[0476] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce la actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce, en alrededor de 48 horas, en alrededor de 24 horas, en alrededor de 12 horas, en alrededor de 8 horas o en alrededor de 4 horas después de la administración del anticuerpo anti-C1s, el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo), en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0477] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce la actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, mantiene una reducción en el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo) de al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel de la actividad de la ruta clásica del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, en el que la reducción se mantiene durante un período de tiempo de alrededor de 4 horas a alrededor de 30 días (por ejemplo, de 4 horas a 8 horas, de 8 horas a 24 horas, de 2 días a 4 días, de 4 días a 7 días, de 7 días a 14 días, de 14 días a 21 días o de 21 días a 30 días). El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0478] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce la actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, mantiene una reducción en el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo) de alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 20%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 65%, alrededor de 70%, alrededor de 75%, alrededor de 80%, alrededor de 85%, alrededor de 90%, alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel de actividad de la ruta clásica del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, en el que la reducción se mantiene durante un período de tiempo de alrededor de 4 horas a alrededor de 21 días (por ejemplo, de 4 horas a 8 horas, de 8 horas a 24 horas, de 2 días a 4 días, de 4 días a 7 días, de 7 días a 14 días, o de 14 días a 21 días). El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0480] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo, un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce, en alrededor de 48 horas, en alrededor de 24 horas, en alrededor de 12 horas, en alrededor de 8 horas o en alrededor de 4 horas después de la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano del individuo), en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, alrededor de 65%, alrededor de 70%, alrededor de 75%, alrededor de 80%, alrededor de 85%, alrededor de 90%, alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel del producto de escisión del componente del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1 s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0482] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce, en alrededor de 48 horas, en alrededor de 24 horas, en alrededor de 12 horas, en alrededor de 8 horas o en alrededor de 4 horas después de la administración del anticuerpo anti-C1s, el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo), en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel del producto de escisión del componente del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0484] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, mantiene una reducción en el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo) de al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel del producto de escisión del componente del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, en el que la reducción se mantiene durante un período de tiempo de alrededor de 4 horas a alrededor de 30 días (por ejemplo, de 4 horas a 8 horas, de 8 horas a 24 horas, de 2 días a 4 días, de 4 días a 7 días, de 7 días a 14 días, de 14 días a 21 días, o de 21 días a 30 días). El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0486] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo). En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, mantiene una reducción en el nivel de un producto de escisión del componente del complemento en el individuo (por ejemplo, en un fluido, tejido u órgano en el individuo) de al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 85%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con el nivel del producto de escisión del componente del complemento en el fluido, tejido u órgano en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s, en el que la reducción se mantiene durante un período de tiempo de alrededor de 4 horas a alrededor de 21 días (por ejemplo, de 4 horas a 8 horas, de 8 horas a 24 horas, de 2 días a 4 días, de 4 días a 7 días, de 7 días a 14 días, o de 14 días a 21 días). El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración del anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s humanizado, puede realizarse mediante cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las que se describen en este documento. La vía de administración puede ser intratecal, intravenosa, subcutánea o intramuscular.

[0488] En algunos casos, una "cantidad eficaz" de un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, o una "cantidad eficaz" de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, es una cantidad que, cuando se administra en una o más dosis a un individuo que lo necesita, reduce la producción de C4b2a (es decir, complejo del complemento C4b y C2a; también conocido como "C3 convertasa") en el individuo (o en un fluido, tejido u órgano del individuo) en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 65%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de 95%, o alrededor de 100%, en comparación con la cantidad de C4b2a producida en el individuo, o el fluido, tejido u órgano, en ausencia de tratamiento con el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1 s. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración puede realizarse por cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las descritas en este documento. La administración puede ser intravenosa, intratecal, subcutánea o intramuscular.

[0490] También se describe, pero no forma parte de la presente invención, un método para modular la activación del complemento. El método puede inhibir la activación del complemento, por ejemplo para reducir la producción de C4b2a. También se divulga, pero no forma parte de la presente invención, un método para modular la activación del complemento en un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, comprendiendo el método administrar al individuo un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una composición farmacéutica de la presente divulgación, en el que la composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación. Este método puede inhibir la activación del complemento. El individuo puede ser un mamífero, por ejemplo un ser humano. La administración puede realizarse por cualquier vía conocida por los expertos en la técnica, incluidas las descritas en este documento. La administración puede ser intravenosa, intratecal, subcutánea o intramuscular.

[0492] Una enfermedad o trastorno mediado por el complemento es un trastorno caracterizado por una cantidad anormal de C1s del complemento o un nivel anormal de actividad proteolítica de C1s del complemento en una célula, un tejido, un fluido o un órgano de un individuo.

[0494] En algunos casos, una enfermedad o trastorno mediado por el complemento se caracteriza por la presencia en una célula, un tejido o un líquido de una cantidad elevada (superior a lo normal) de C1s o de un nivel elevado de actividad de C1s del complemento. Por ejemplo, en algunos casos, una enfermedad o trastorno mediado por el complemento se caracteriza por la presencia en el tejido cerebral y/o en el líquido cefalorraquídeo de una cantidad elevada y/o una actividad elevada de C1s. Una cantidad "superior a lo normal" de C1s en una célula, un tejido o un líquido indica que la cantidad de C1 s en la célula, el tejido o el líquido es superior a un nivel de control normal, por ejemplo superior a un nivel de control normal para un individuo o una población de individuos del mismo grupo de edad. Un nivel "superior al normal" de actividad de C1s en una célula, un tejido, un órgano o un fluido indica que la escisión proteolítica efectuada por C1s en la célula, el tejido, el órgano o el fluido es superior a un nivel de control normal, por ejemplo superior a un nivel de control normal para un individuo o una población de individuos del mismo grupo de edad. En algunos casos, un individuo que padece una enfermedad o trastorno mediado por el complemento presenta uno o más síntomas adicionales de dicha enfermedad o trastorno.

[0496] En otros casos, una enfermedad o trastorno mediado por el complemento se caracteriza por la presencia en una célula, un tejido o un fluido de una cantidad de C1s menor de lo normal o de un nivel menor de actividad de C1s del complemento. Por ejemplo, en algunos casos, una enfermedad o trastorno mediado por el complemento se caracteriza por la presencia en el tejido cerebral y/o en el líquido cefalorraquídeo de una menor cantidad y/o una menor actividad de C1s. Una cantidad "inferior al normal" de C1s en una célula, un tejido o un líquido indica que la cantidad de C1s en la célula, el tejido o el líquido es inferior a un nivel de control normal, por ejemplo inferior a un nivel de control normal para un individuo o una población de individuos del mismo grupo de edad. Un nivel "inferior al normal" de actividad de C1 s en una célula, un tejido o un fluido indica que la escisión proteolítica efectuada por C1 s en la célula, el tejido o el fluido es inferior a un nivel de control normal, por ejemplo inferior a un nivel de control normal para un individuo o una población de individuos del mismo grupo de edad. En algunos casos, un individuo que padece una enfermedad o trastorno mediado por el complemento presenta uno o más síntomas adicionales de dicha enfermedad o trastorno.

[0497] Una enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad o trastorno en el que la cantidad o actividad de C1s del complemento es tal que causa enfermedad o trastorno en un individuo. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento se selecciona del grupo que consiste en enfermedad aloinmune, enfermedad autoinmune, cáncer, enfermedad hematológica, enfermedad infecciosa, enfermedad inflamatoria, lesión por isquemia-reperfusión, enfermedad neurodegenerativa, trastorno neurodegenerativo, enfermedad ocular, enfermedad renal, rechazo del trasplante, enfermedad vascular, y enfermedad de vasculitis. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad autoinmune. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad aloinmune. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es cáncer. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad inflamatoria. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad hematológica. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una lesión por isquemia-reperfusión. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad ocular. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad renal. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es rechazo del trasplante. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es rechazo de trasplante mediado por anticuerpos. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad vascular. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es un trastorno de vasculitis. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento es una enfermedad o trastorno neurodegenerativo. En algunas realizaciones, la enfermedad mediada por el complemento es una enfermedad neurodegenerativa. En algunas realizaciones, el trastorno mediado por el complemento es un trastorno neurodegenerativo.

[0499] Los ejemplos de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento incluyen, pero no se limitan a, degeneración macular relacionada con la edad, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica, anafilaxia, demencia argirófila en grano, artritis (por ejemplo, artritis reumatoide), asma, aterosclerosis, síndrome hemolítico urémico atípico, enfermedades autoinmunes (incluidas, por ejemplo, anemia hemolítica autoinmune (AIHA); AIHA caliente; AIHA mixta; etc.), síndrome de Barraquer-Simons, enfermedad de Behget, angiopatía amiloide de tipo británico, penfigoide ampolloso, enfermedad de Buerger, nefropatía C1q, cáncer, síndrome antifosfolípido catastrófico, angiopatía amiloide cerebral, enfermedad de crioaglutininas, degeneración corticobasal, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Crohn, vasculitis crioglobulinémica, demencia pugilística, demencia con cuerpos de Lewy (DLB), ovillos neurofibrilares difusos con calcificación, lupus eritematoso discoide, síndrome de Down, síndrome de Evan, glomeruloesclerosis focal y segmentaria, trastorno del pensamiento formal, demencia frontotemporal (DFT), demencia frontotemporal con parkinsonismo ligado al cromosoma 17, degeneración lobar frontotemporal, enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad de Hallervorden-Spatz, síndrome hemolítico-urémico, angioedema hereditario, hipofosfatasia, síndrome de neumonía idiopática, enfermedades por complejos inmunitarios, miositis por cuerpos de inclusión, enfermedad infecciosa (por ejemplo, enfermedad causada por agentes bacterianos (por ejemplo, Neisseria meningitidis o Streptococcus), viral (por ejemplo, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)) u otros agentes infecciosos), enfermedad inflamatoria, lesión por isquemia/reperfusión, deterioro cognitivo leve, púrpura inmunotrombocitopénica (PTI), cofactor de molibdeno deficiencia de MoCD (MoCD) tipo A, glomerulonefritis membranoproliferativa (MPGN) I, glomerulonefritis membranoproliferativa (MPGN) II (enfermedad por depósitos densos), nefritis membranosa, demencia multiinfarto, lupus (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico [LES]), glomerulonefritis, enfermedad de Kawasaki, neuropatía motora multifocal, esclerosis múltiple, atrofia multisistémica, miastenia gravis, infarto de miocardio, distrofia miotónica, neuromielitis óptica, enfermedad de Niemann-Pick tipo C, enfermedad de la motoneurona no guameña con ovillos neurofibrilares, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Parkinson con demencia, hemoglobinuria paroxística nocturna, pénfigo vulgar, enfermedad de Pick, parkinsonismo postencefalítico, polimiositis, angiopatía amiloide cerebral por proteína priónica, enfermedad subcortical progresiva gliosis, parálisis supranuclear progresiva, soriasis, septicemia, Shiga-toxina E coli (STEC)-HuS, atrofia muscular espinal, accidente cerebrovascular, panencefalitis esclerosante subaguda, demencia solo enmarañada, rechazo de trasplante, vasculitis (por ejemplo, vasculitis asociada a ANCA), granulomatosis de Wegner, anemia de células falciformes, crioglobulinemia, crioglobulinemia mixta, crioglobulinemia mixta esencial, crioglobulinemia mixta tipo II, crioglobulinemia mixta tipo III, nefritis, trombocitopenia inducida por fármacos, nefritis lúpica, epidermólisis ampollosa adquirida, reacción hemolítica transfusional retardada, síndrome de vasculitis urticarial hipocomplementémica, queratopatía ampollosa pseudofáquica, refractariedad plaquetaria, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (PDIC), síndrome mielodisplásico (SMD), síndrome de Miller-Fisher, polineuropatía desmielinizante inflamatoria aguda (PDIA), síndrome motor agudo neuropatía axonal (AMAN), neuropatía axonal motora y sensitiva aguda (AMSAN), y variante faríngeo-cervical-braquial. En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende penfigoide ampolloso. En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende la enfermedad por crioaglutininas. En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende anemia hemolítica autoinmune (AIHA). En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende púrpura inmunotrombocitopénica (PTI). En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende neuropatía motora multifocal. En una realización, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende neuromielitis óptica.

[0501] En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende la enfermedad de Alzheimer. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende la enfermedad de Parkinson. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento comprende rechazo del trasplante. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno mediado por el complemento

[0502] es rechazo de trasplante mediado por anticuerpos.

[0504] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación previene o retrasa la aparición de al menos un síntoma de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento en un individuo. En alguna realización, el anticuerpo anti-C1 s de la presente divulgación reduce o elimina

[0505] al menos un síntoma de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento en un individuo. Los ejemplos de síntomas incluyen, pero no se limitan a, síntomas asociados con enfermedades autoinmunes, cáncer, enfermedades hematológicas, enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias, lesiones por isquemia-reperfusión, enfermedades neurodegenerativas, trastornos neurodegenerativos, enfermedades renales, rechazo de trasplantes, enfermedades oculares, enfermedades vasculares o trastornos de vasculitis. El síntoma puede ser un síntoma neurológico, por ejemplo deterioro de la función cognitiva, deterioro de la memoria, pérdida de la función motora, etc.

[0506] El síntoma también puede ser la actividad de la proteína C1 s en una célula, tejido o líquido de un individuo. El síntoma

[0507] también puede ser el grado de activación del complemento en una célula, tejido o fluido de un individuo.

[0509] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo modula la activación del complemento en una célula, tejido o fluido de un individuo. En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s en cuestión a un individuo inhibe la activación del complemento en una célula, tejido o fluido de un individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s en cuestión, por ejemplo un anticuerpo anti-C1 s humanizado, cuando se administra en una o más

[0510] dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, inhibe la activación del complemento en el individuo en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 15%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de

[0511] 25%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de

[0512] 60%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, al menos alrededor de

[0513] 95%, o 100%, en comparación con la activación del complemento en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0515] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación reduce el depósito de C3 en glóbulos rojos; por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1, de la presente divulgación reduce el depósito de C3b, iC3b, etc., sobre glóbulos

[0516] rojos). En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s, de la presente divulgación

[0517] inhibe la lisis de glóbulos rojos mediada por el complemento.

[0519] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación reduce el depósito de C3 sobre plaquetas; por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo el anticuerpo anti-C1s, de la presente divulgación reduce el depósito de C3b, iC3b, etc., sobre plaquetas).

[0521] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación da lugar a un resultado seleccionado del grupo que consiste en: (a) una reducción en la activación del complemento; (b) una mejora en la función cognitiva; (c) una reducción en la pérdida de neuronas; (d) una reducción en la activación de células gliales; (e) una reducción en la infiltración de linfocitos; (f) una reducción en

[0522] la infiltración de macrófagos; (g) una reducción en el depósito de anticuerpos, (h) una reducción en la pérdida de

[0523] células gliales; (i) una reducción en la pérdida de oligodendrocitos; (j) una reducción en la infiltración de células dendríticas; (k) una reducción en la infiltración de neutrófilos; (l) una reducción en la lisis de glóbulos rojos (m) una reducción en la fagocitosis de glóbulos rojos; (n) una reducción en la fagocitosis de plaquetas; (o) una reducción en la

[0524] lisis de plaquetas; (p) una mejora en la supervivencia del injerto del trasplante; (q) una reducción en la fagocitosis mediada por macrófagos; (r) una mejora en la visión; (s) una mejora en el control motor; (t) una mejora en la formación

[0525] de trombo; (u) una mejora en la coagulación; (v) una mejora en la función renal; (w) una reducción en la activación del complemento mediada por anticuerpos; (x) una reducción en la activación del complemento mediada por autoanticuerpos; una reducción de anticuerpos; (y) una mejora en la anemia; (aa) reducción de la desmielinización;

[0526] (ab) reducción de la eosinofilia; (ac) una reducción del depósito de C3 en glóbulos rojos (por ejemplo, una reducción

[0527] del depósito de C3b, iC3b, etc., en los glóbulos rojos); y (ad) una reducción en el depósito de C3 en plaquetas (por ejemplo, una reducción del depósito de C3b, iC3b, etc., en plaquetas); y (ae) una reducción de la producción de toxina anafilotoxina; (af) una reducción en la formación de ampollas mediada por autoanticuerpos; (ag) una reducción en el prurito inducido por autoanticuerpos; (ah) una reducción en la eritematosis inducida por autoanticuerpos; (ai) una reducción en la erosión cutánea mediada por autoanticuerpos; (aj) una reducción en la destrucción de glóbulos rojos

[0528] debido a reacciones transfusionales; (ak) una reducción en la lisis de glóbulos rojos debido a aloanticuerpos; (al) una reducción en la hemólisis debido a reacciones transfusionales; (am) una reducción en la lisis plaquetaria mediada por aloanticuerpos; (an) una reducción en la lisis plaquetaria debido a reacciones transfusionales; (ao) una reducción en

[0529] la activación de mastocitos; (ap) una reducción en la liberación de histamina de mastocitos; (aq) una reducción en la permeabilidad vascular; (ar) una reducción en el edema; (as) una reducción en el depósito del complemento en el endotelio del injerto del trasplante; (at) una reducción de la generación de anafilatoxina en el endotelio del injerto del trasplante; (au) una reducción en la separación de la unión dermoepidérmica; (av) una reducción en la generación de anafilatoxinas en la unión dermoepidérmica; (aw) una reducción en la activación del complemento mediada por aloanticuerpos en el endotelio del injerto del trasplante; (ax) una reducción en la pérdida mediada por anticuerpos de la unión neuromuscular; (ay) una reducción en la activación del complemento en la unión neuromuscular; (az) una reducción en la generación de anafilatoxinas en la unión neuromuscular; (ba) una reducción en el depósito del complemento en la unión neuromuscular; (bb) una reducción en la parálisis; (bc) una reducción en el entumecimiento; (bd) un mayor control de la vejiga; (be) un mayor control intestinal; (bf) una reducción en la mortalidad asociada con autoanticuerpos; (bg) una reducción en la morbilidad asociada con autoanticuerpos; (bh) una reducción en el daño de las células de Schwann; (bi) una reducción en la pérdida de células de Schwann; (bj) una reducción en el daño de las neuronas motoras; (bk) una reducción en la pérdida axonal de las neuronas motoras; (bl) una mejora del bloqueo de la conducción del potencial de acción; (bm) una mejora del movimiento de las extremidades superiores o inferiores; (bn) una mejora de los déficits sensoriomotores neuronales, y (bo) cualquier combinación de los mismos.

[0531] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, es efectivo para lograr una reducción de al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 15%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 25%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, o más de 90%, de uno o más de los siguientes resultados: (a) activación del complemento; (b) disminución de la función cognitiva; (c) pérdida de neuronas; (d) activación de células gliales; (e) infiltración de linfocitos; (f) infiltración de macrófagos; (g) depósito de anticuerpos, (h) pérdida de células gliales; (i) pérdida de oligodendrocitos; (j) infiltración de células dendríticas; (k) infiltración de neutrófilos; (l) lisis de glóbulos rojos; (m) fagocitosis de glóbulos rojos; (n) fagocitosis de plaquetas; (o) lisis plaquetaria; (p) rechazo del injerto del trasplante; (q) fagocitosis mediada por macrófagos; (r) pérdida de la visión; (s) activación del complemento mediada por anticuerpos; (t) activación del complemento mediada por autoanticuerpos; (u) desmielinización; (v) eosinofilia; (w) o cualquier combinación de los mismos, en comparación con el nivel o grado del resultado en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0533] En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, tiene como efecto lograr una mejora de al menos alrededor de 1 %, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 15%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 25%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, o más de 90%, de uno o más de los siguientes resultados: a) función cognitiva; b) supervivencia del injerto de trasplante; c) visión; d) control motor; e) formación de trombos; f) coagulación; g) función renal; h) hematocrito (recuento de glóbulos rojos); y i) cualquier combinación de los mismos, en comparación con el nivel o grado del resultado en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0535] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo reduce la activación del complemento en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la activación del complemento en el individuo en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 15%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 25%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la activación del complemento en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0537] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación mejora la función cognitiva en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, mejora la función cognitiva en el individuo en al menos alrededor de 1%, al menos alrededor de 5%, al menos alrededor de 10%, al menos alrededor de 15%, al menos alrededor de 20%, al menos alrededor de 25%, al menos alrededor de 30%, al menos alrededor de 40%, al menos alrededor de 50%, al menos alrededor de 60%, al menos alrededor de 70%, al menos alrededor de 80%, al menos alrededor de 90%, o más del 90%, en comparación con la función cognitiva en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0539] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación reduce la tasa de deterioro de la función cognitiva en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la tasa de disminución de la función cognitiva en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la tasa de disminución de la función cognitiva en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1 s.

[0541] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo reduce la pérdida de neuronas en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la pérdida de neuronas en el individuo en alrededor de 1 %, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la pérdida de neuronas en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0543] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo reduce la activación de las células gliales en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1 s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la activación glial en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la activación de las células gliales en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1 s. En algunas realizaciones, las células gliales son astrocitos o microglia.

[0545] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo, un anticuerpo anti-C1s humanizado de la presente divulgación a un individuo reduce la infiltración de linfocitos en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s en cuestión, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la infiltración de linfocitos en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la infiltración de linfocitos en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0547] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo reduce la infiltración de macrófagos en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la infiltración de macrófagos en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con la infiltración de macrófagos en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0549] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación a un individuo reduce el depósito de anticuerpos en el individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce el depósito de anticuerpos en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con el depósito de anticuerpos en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0551] En algunas realizaciones, la administración del anticuerpo anti-C1s de la presente divulgación a un individuo reduce la producción de anafilatoxina (por ejemplo, C3a, C4a, C5a) en un individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, cuando se administra en una o más dosis como monoterapia o en terapia combinada a un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento, reduce la producción de anafilatoxina en el individuo en alrededor de 1%, alrededor de 5%, alrededor de 10%, alrededor de 15%, alrededor de 20%, alrededor de 25%, alrededor de 30%, alrededor de 40%, alrededor de 50%, alrededor de 60%, alrededor de 70%, alrededor de 80%, alrededor de 90%, o más de 90%, en comparación con el nivel de producción de anafilatoxina en el individuo antes del tratamiento con el anticuerpo anti-C1s.

[0553] La presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento.

[0555] La presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la inhibición de la activación del complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la inhibición de la activación del complemento en un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación para su uso en la inhibición de la activación del complemento en un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la inhibición de la activación del complemento en un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento.

[0557] La presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en terapia médica.

[0559] La presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento. En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad o trastorno mediado por el complemento.

[0561] La presente divulgación proporciona el anticuerpo anti-C1s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación o la composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-C1 s, por ejemplo un anticuerpo anti-C1s humanizado, de la presente divulgación, y un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la modulación de la activación del complemento.

[0563] EJEMPLOS

[0565] Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos normales en la técnica una divulgación y descripción completas de cómo preparar y utilizar la presente divulgación, y no están destinados a limitar el alcance de las reivindicaciones ni están destinados a representar que los siguientes experimentos son todos o los únicos experimentos realizados. Se han hecho esfuerzos para garantizar la exactitud con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero se deben tener en cuenta algunos errores experimentales y desviaciones. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio, la temperatura está en grados centígrados, y la presión es atmosférica o cercana a la atmosférica. Se pueden utilizar abreviaturas estándar, por ejemplo, pb, par o pares de bases; kb, kilobase(s); pl, picolitro(s); s o seg, segundo(s); min, minuto(s); h o hr, hora(s); aa, aminoácido(s); kb, kilobase(s); pb, par o pares de bases; nt, nucleótido(s); i.m., intramuscular(mente); i.p., intraperitoneal(mente); s.c., subcutánea(mente); y similares.

[0567] Ejemplo 1: Variantes anti-aC1s humanizadas

[0569] Se generaron variantes humanizadas de anti-aC1s. También se proporciona secuencias de aminoácidos de los dominios VH de cadena pesada de las variantes humanizadas 1 -5; secuencias nucleotídicas que codifican el dominio VH de cadena pesada de las variantes humanizadas. Las secuencias de aminoácidos del dominio VL de cadena ligera de las variantes humanizadas 1,2 y 5, y las secuencias nucleotídicas que codifican el dominio VL de cadena ligera de las variantes humanizadas, se muestran en las FIGs. 6-8. Las diferencias de aminoácidos con respecto a la secuencia de aminoácidos de anti-aC1s murino (VL SEQ ID NO: 7; VH SEQ ID NO: 8) se resumen en las FIGs. 9 y 10.

[0570] Los códigos de aminoácidos de una sola letra son los siguientes (con códigos de aminoácidos de 3 letras entre paréntesis):

[0571] G - Glicina (Gly)

[0572] P - Prolina (Pro)

[0573] A - Alanina (Ala)

[0574] V - Valina (Val)

[0575] L - Leucina (Leu)

[0576] I - Isoleucina (Ile)

[0577] M - Metionina (Met)

[0578] C - Cisteína (Cys)

[0579] F - Fenilalanina (Phe)

[0580] Y - Tirosina (Tyr)

[0581] W - Triptófano (Trp)

[0582] H - Histidina (His)

[0583] K - Lisina (Lys)

[0584] R - Arginina (Arg)

[0585] Q - Glutamina (Gln)

[0586] N - Asparagina (Asn)

[0587] E - Ácido glutámico (Glu)

[0588] D - Ácido aspártico (Asp)

[0589] S - Serina (Ser)

[0590] T - treonina (Thr)

[0591] Ejemplo 2: Caracterización de variantes anti-aC1s humanizadas

[0592] Las características de unión de variantes anti-aC1s humanizadas se proporcionan en las Tablas 4 y 5 (FIG. 11 y FIG.

[0593] 12, respectivamente). Las afinidades de unión relativas para diversas variantes anti-aC1 s humanizadas a C1s activado se proporcionan en la Tabla 4 (primera columna de datos), que se presenta en la FIG. 11.

[0594] Se produjeron las 15 combinaciones (variante VH 1 variante Vk 1; variante VH 1 variante Vk 2; variante VH 1 variante Vk 5; variante VH 2 variante Vk 1; variante VH 2 variante Vk 2; variante VH 2 variante Vk 5; variante VH 3 variante Vk 1; variante VH 3 variante Vk 2; variante VH 3 variante Vk 5; variante VH 4 variante Vk 1; variante VH 4 variante Vk 2; variante VH 4 variante Vk 5; variante VH 5 variante Vk 1; variante VH 5 variante Vk 2; variante VH 5 variante Vk 5). Cada variante humanizada se evaluó para determinar la capacidad de competir con anti-aC1s murino biotinilado por la unión a C1s activo. Los datos se muestran en la FIG. 11, segunda columna de datos.

[0595] Cada variante humanizada se probó en un ensayo disponible comercialmente que mide la activación de la ruta clásica (CP). Los resultados se muestran en la FIG. 11, tercera columna de datos. Los datos muestran que las 15 variantes humanizadas inhiben la activación de CP con una IC50 similar a la de anti-aC1 s murino.

[0596] La caracterización cinética de la afinidad de unión se llevó a cabo en 8 de las variantes anti-aC1s humanizadas. Los datos se representan en la Tabla 5, que se presenta en la FIG. 12.

[0597] Ejemplo 3: Estudiosin v iv oen monos cinomolgos

[0598] Para evaluar las propiedades farmacocinéticas (PK) y farmacodinámicas (PD) de las anti-aC1s humanizadas, se realizaron estudios de dosis únicas de anti-aC1s humanizadas en monos cinomolgos (Macaca fascicularis). Además, para comparar la biodisponibilidad de anti-aC1s humanizada mediante diversas vías de administración, la variante anti-aC1s humanizada se administra mediante inyección intravenosa (IV) o subcutánea (SC). Después de la dosificación de anti-aC1s humanizada, se toman muestras de plasma y suero en puntos temporales designados para determinar las concentraciones circulantes de anti-aC1s humanizadas; y para evaluar la inhibición de la ruta clásica del complemento (CP) por anti-aC1 s humanizadas. Los niveles plasmáticos y séricos de anti-aC1s humanizadas a lo largo del tiempo proporcionan datos de PK; la inhibición de la CP a lo largo del tiempo proporciona datos de PD.

[0599] Todos los animales del estudio eran hembras, entre 2,4-3,9 kg de peso corporal, y tenían entre 3-5 años. Además, todos los animales no habían recibido dosificación farmacéutica previa.

[0601] Se reconoció sangre entera en tubos K2EDTA y tubos separadores de suero para el procesamiento de plasma y suero, respectivamente, y se almacenó inmediatamente a -15 °C a -25 °C.

[0603] Para evaluar el perfil farmacocinético de la variante VH3/VK2-Fc-sub4 anti-aC1s humanizada, se diluyeron muestras de plasma tomadas en los puntos de tiempo representados en la FIG. 13 y la FIG. 14, y se ejecutaron en un ELISA para cuantificar las concentraciones plasmáticas de VH3/VK2-Fc-sub4. Brevemente, se añadieron muestras de plasma diluidas a una placa de 96 pocillos previamente recubierta con C1 s activado. Tras la incubación de muestras de plasma y el posterior lavado, se añadió un anticuerpo de detección conjugado con peroxidasa de rábano picante específico para IgG humana, para detectar VH3/VK2-Fc-sub4 unida a C1s. Finalmente, se añadió sustrato de 3,3', 5,5'-tetrametilbencidina (TMB) para iniciar una reacción colorimétrica que se leyó en un espectrofotómetro. Mediante la interpolación a partir de una curva patrón de VH3/VK2-Fc-sub4 realizada en paralelo con las muestras de plasma, se determinaron las concentraciones plasmáticas de VH3/VK2-Fc-sub4 para todas las muestras.

[0605] Los efectos farmacodinámicos de VH3/VK2-Fc-sub4 se evaluaron utilizando el kit de ruta clásica del complemento WIESLAB®. El kit WIESLAB® está disponible comercialmente, e implica el uso de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) que está diseñado para evaluar la fuerza de la actividad de la ruta clásica del complemento en muestras de suero activando la ruta clásica de la muestra ex vivo y midiendo la generación ex vivo del producto de división final de la ruta, C5b-9. Las muestras se ensayaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, muestras de suero de los monos, recogidas en los puntos temporales indicados en la FIG. 14 y la FIG. 15, se diluyeron y se añadieron a los pocillos de la placa de 96 pocillos proporcionada. Después de la incubación, se añadió un anticuerpo de detección específico para el producto de división final de la ruta clásica, C5b-9, y la reacción colorimétrica se midió en un espectrofotómetro. Todas las muestras para un mono individual se compararon y normalizaron con la muestra antes de la dosis del mismo mono (pre-dosis = 100% de actividad).

[0607] La FIG. 13 representan datos de PD y PK de 3 animales a los que se les administra VH3/VK2-Fc-sub4, administrados por vía ntravenosa a 10 mg/kg. Como se muestra en la FIG. 13, la concentración sérica de VH3/VK2-Fc-sub4 estaba entre 70 pg/ml y 300 pg/ml durante un período de tiempo de hasta 650 horas (27 días). Durante este mismo período de tiempo, la actividad de CP se inhibió 80% a 99%.

[0609] La FIG. 14 representan datos de PD y PK de 3 animales a los que se les administra VH3/VK2-Fc-sub4, administrados por vía subcutánea a 20 mg/kg. Como se muestra en la FIG. 14, la concentración sérica de VH3/VK2-Fc-sub4 estaba entre alrededor de 50 pg/ml y alrededor de 450 pg/ml durante un período de tiempo de hasta 85 días. Durante el mismo periodo de tiempo, la actividad de CP, medida usando el kit WEISLAB® se inhibió 60% a 99%. Además, una dosis subcutánea única de 20 mg/kg de VH3/VK2-Fc-sub4 inhibió la ruta del complemento en más de 90% durante 28 días (FIG. 19).

[0611] Ejemplo 4: Caracterización de un anticuerpo anti-C1s que comprende una región Fc modificada

[0613] La variante anti-aC1 s humanizada, VH3/VK2, comprende una IgG4 humana, con sustituciones S241P y L248E. Para potenciar la vida media y la disponibilidad subcutánea, la región Fc de VH3/VK2 se modificó para incluir sustituciones M428L y N434S. Se descubrió que el anticuerpo resultante, denominado VH3/VK2-Fc-sub4, se unía específicamente a C1s activo con una constante de disociación de 1,53 x 10-9.

[0615] VH3/VK2-Fc-sub4 inhibió la ruta del complemento in vitro en un grado similar al de un anticuerpo anti-C1s general, descrito previamente como VH4/VK2 en la patente de EE. UU. n° 8.945.562. En un ensayo in vitro de actividad sérica de la ruta clásica del complemento, VH3/VK2-Fc-sub4 (círculos) presentó una ED50 similar a anti-C1s (cuadrados), aunque la inhibición de la actividad de la ruta clásica del complemento por VH3/VK2-Fc-sub4 fue más gradual que la inhibición de la actividad del complemento por anti-C1s (FIG. 17A). Además, VH3/VK2-Fc-sub4 mostró niveles de hemólisis similares a los del anticuerpo anti-C1s general (FIG. 17B).

[0617] Se planteó la hipótesis de que si la unión a FcRn está implicada en el reciclado de VH3/VK2 (VH3/VK2-Fc-sub4 sin unión a FcRn potenciada), entonces VH3/VK2-Fc-sub4 debería tener una vida media más larga y por lo tanto un efecto farmacodinámico prolongado en comparación con VH3/VK2. Se administró a monos cinomolgos una dosis intravenosa única de 10 mg/kg de VH3/VK2 o VH3/VK2-Fc-sub4, y se extrajo sangre periódicamente. A lo largo de 650 horas después de la administración, los animales a los que se les administró VH3/VK2-Fc-sub4 tuvieron niveles consistentemente más altos del anticuerpo en su sangre que los animales a los que se les administró VH3/VK2 (FIG.

[0618] 18A). Además, VH3/VK2-Fc-sub4 tuvo un efecto farmacodinámico más prolongado que VH3/VK2. Una dosis única de 10 mg/kg de VH3/VK2-Fc-sub4 inhibió la actividad de la ruta del complemento en más de 70% a lo largo de 650 horas, mientras que la misma dosis de VH3/VK2 mostró una disminución gradual en la inhibición, comenzando casi inmediatamente, y alcanzando casi el nivel del control de vehículo 650 horas después de la administración (FIG. 18B). Estos efectos también se observaron en monos cinomolgos a los que se les administra una dosis subcutánea única de 20 mg/kg de VH3/VK2-Fc-sub4 (véase la FIG. 14).

[0620] Ejemplo 5: Estudio farmacocinético del anticuerpo anti-C1s tras administraciones intravenosas y subcutáneas en monos cinomolgos

[0622] El objetivo de este estudio de investigación es evaluar la farmacocinética de VH3/VK2-Fc-sub4, después de una única inyección intravenosa (IV) en bolo, una única inyección IV en bolo seguida de inyecciones subcutáneas (SC) una vez a la semana, o inyecciones SC repetidas en monos cinomolgos hembras.

[0624] Diseño del estudio

[0626] Los animales se asignarán a grupos y se tratarán como se indica en la Tabla 2. Los animales se administrarán mediante inyección intravenosa (IV) en bolo en una vena periférica utilizando líneas de infusión de mariposa cebada o mediante inyección subcutánea (SC) en bolo en la región interescapular de la espalda. Si se observa irritación en el lugar de inyección, la región torácica inferior puede utilizarse para inyecciones SC posteriores para evitar irritaciones adicionales. La frecuencia de dosificación es consistente con la farmacocinética prevista del artículo de prueba. Se espera que el régimen para el tratamiento seleccionado para este estudio identifique concentraciones alcanzables en sangre periférica y actividad farmacológica asociada.

[0628] Tabla 2: Asignaciones de grupos

[0630]

[0633] Observaciones clínicas

[0635] Las observaciones clínicas se realizarán una vez al día, comenzando el segundo día de aclimatación para cada animal en la mañana, antes de la limpieza de la habitación. Se comprobará la mortalidad dos veces al día para evaluar la salud y el bienestar de los animales en general.

[0637] Se pueden realizar observaciones clínicas adicionales, según sea necesario. Si las observaciones clínicas de un animal demuestran una disminución del estado animal, se realizará una evaluación veterinaria y se notificará al director del estudio.

[0639] La sangre se recogerá de una vena periférica de animales conscientes e inmovilizados. Durante las primeras 24 horas después de la dosis, no se extraerá sangre de la vena (o miembro) que se usó para la administración de dosis IV. La sangre se recogerá a través de una sola extracción, y después se dividirá apropiadamente.

[0641] En el caso de una necropsia no programada, se tomarán muestras de sangre venosa de animales moribundos conscientes antes de la anestesia, si es posible.

[0642] Las muestras de sangre se recogerán en los siguientes puntos temporales, y se almacenarán en hielo húmedo antes del procesamiento:

[0644] Grupos 1 y 3: Días 1 (15 min, 30 min, 1 h, 2 h, y 4 h después de la dosis), 2 (24 h después de la dosis), 5, 8 (antes de la dosis, 30 min, 1 h, 2 h, y 4 h después de la dosis), 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 (antes de la dosis), 18, 22 (antes de la dosis), 25, 29 (antes de la dosis), 32, 36 (antes de la dosis), 39, 43 (antes de la dosis), 46, 50, 53, y 57;

[0646] Grupo 2: Días 1 (15 min, 30 min, 1 h, 2 h, y 4 h después de la dosis), 2 (24 h después de la dosis), 3 (48 h después de la dosis), 5 (96 h después de la dosis), 8 (168 h después de la dosis), 15, 22, 25, 29, 32, 36, 39, 43, 46, 50, 53, y 57; y

[0648] Grupo 4: Días 1 (30 min, 1 h, 2 h y 4 h después de la dosis), 2 (24 h después de la dosis), 3, 4, 5, 6, 11, 15, 18, 22, 25, 29 (antes de la dosis, 30 min, 1 h, 2 h y 4 h después de la dosis), 30, 31,32, 33, 34, 39, 43, 46, 50, 53 y 57.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región constante de pesada, y la cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (VL);

en el que la región VL comprende una región 1 determinante de la complementariedad (CDR) de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL, y en el que la región VH comprende una CDR1 de VH, una CDR2 de VH y una CDR3 de VH; en el que la CDR1 de VL comprende SEQ ID NO: 1;

en el que la CDR2 de VL comprende SEQ ID NO: 2;

en el que la CDR3 de VL comprende SEQ ID NO: 3;

en el que la CDR1 de VH comprende SEQ ID NO: 4;

en el que la CDR2 de VH comprende SEQ ID NO: 5;

en el que la CDR3 de VH comprende SEQ ID NO: 6;

en el que la región constante de cadena pesada comprende una secuencia al menos 95% idéntica a SEQ ID NO: 28, en el que el residuo de aminoácido 308 de la región constante de cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es Leu, y el residuo de aminoácido 314 de la región constante de la cadena pesada correspondiente a SEQ ID NO: 28 es Ser;

en el que el anticuerpo se une específicamente a C1s activado y tiene una vida media más larga en comparación con anticuerpos anti-C1s comparables que tienen una región Fc de tipo salvaje según SEQ ID NO: 52 o una región Fc según SEQ ID NO: 53.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en el que el residuo de aminoácido 108 de la región constante de cadena pesada correspondiente a la SEQ ID NO: 28 es Pro, y/o en el que el residuo aminoacídico 115 de la región constante de cadena pesada correspondiente a la SEQ ID NO: 28 es Glu.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, en el que la región constante de cadena pesada comprende la SEQ ID NO: 28.

4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la región VL comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: y en el que la región VH comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 10, 12, 14, 16 y 18.

5. La proteína de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que:

(f) la región VH comprende la SEQ ID NO:12, y la región VL comprende la SEQ ID NO:24;

(g) la región VH comprende la SEQ ID NO:14, y la región VL comprende la SEQ ID NO:20;

(h) la región VH comprende la SEQ ID NO:14, y la región VL comprende la SEQ ID NO:22;

(i) la región VH comprende la SEQ ID NO:14, y la región VL comprende la SEQ ID NO:24;

(j) la región VH comprende la SEQ ID NO:16, y la región VL comprende la SEQ ID NO:20;

(j) la región VH comprende la SEQ ID NO:16, y la región VL comprende la SEQ ID NO:22;

(k) la región VH comprende la SEQ ID NO:16, y la región VL comprende la SEQ ID NO:24;

(l) la región VH comprende la SEQ ID NO:18, y la región VL comprende la SEQ ID NO:20;

(m) la región VH comprende la SEQ ID NO:18, y la región VL comprende la SEQ ID NO:22; oh

(n) la región VH comprende la SEQ ID NO:18, y la región VL comprende la SEQ ID NO:24.

6. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la región VH comprende la SEQ ID NO:14, y la región v L comprende la SEQ ID NO:22.

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la cadena ligera comprende además una región constante de cadena ligera, en el que preferiblemente la región constante de cadena ligera comprende la SEQ ID NO: 45.

8. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la cadena pesada comprende la SEQ ID NO: 29, y/o en el que la cadena ligera comprende la SEQ ID NO: 30.

9. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que es un anticuerpo biespecífico o un anticuerpo multiespecífico.

10. Un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

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11. Un ácido nucleico o un conjunto de ácidos nucleicos que codifican el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

12. Un vector o un conjunto de vectores que comprenden el ácido nucleico o el conjunto de ácidos nucleicos de la reivindicación 11.

13. Una célula hospedadora que comprende el ácido nucleico o el conjunto de ácidos nucleicos de la reivindicación 11 o el vector o el conjunto de vectores de la reivindicación 12.

14. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, el inmunoconjugado de la reivindicación 10, el ácido nucleico o el conjunto de ácidos nucleicos de la reivindicación 11, el vector o el conjunto de vectores de la reivindicación 12, o la célula hospedadora de la reivindicación 13, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, el inmunoconjugado de la reivindicación 10, el ácido nucleico o el conjunto de ácidos nucleicos de la reivindicación 11, el vector o el conjunto de vectores de la reivindicación 12, o la célula hospedadora de la reivindicación 13, o la composición farmacéutica de la reivindicación 14, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por el complemento o para inhibir una ruta del complemento en un sujeto que lo necesita.

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