ES3057444T3 - Improved method for producing antibody-drug conjugate - Google Patents

Improved method for producing antibody-drug conjugate

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ES3057444T3 ES18849765T ES18849765T ES3057444T3 ES 3057444 T3 ES3057444 T3 ES 3057444T3 ES 18849765 T ES18849765 T ES 18849765T ES 18849765 T ES18849765 T ES 18849765T ES 3057444 T3 ES3057444 T3 ES 3057444T3
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Abstract

Se proporcionan un cristal del compuesto representado por la fórmula (1), un método para producir el cristal y un método para producir un conjugado anticuerpo-fármaco utilizando dicho cristal. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Método mejorado para producir un conjugado anticuerpo-fármaco
[0003] Campo técnico
[0004] La presente invención se refiere a un método mejorado para producir un intermedio de fármaco-enlazador para un conjugado anticuerpo-fármaco, y a un método mejorado para producir un conjugado anticuerpo-fármaco en donde se usa el método mencionado anteriormente.
[0005] Antecedentes de la técnica
[0006] Por tanto, se espera que un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) que tiene un fármaco con citotoxicidad conjugado con un anticuerpo, cuyo antígeno se expresa en la superficie de las células cancerosas y que también se une a un antígeno capaz de internalización celular y, por tanto, puede administrar el fármaco selectivamente a las células cancerosas, provoque la acumulación del fármaco dentro de las células cancerosas y destruya las células cancerosas (bibliografía no relacionada con patentes 1 a 5).
[0007] Como uno de dichos conjugados anticuerpo-fármaco, se conoce un conjugado anticuerpo-fármaco que comprende un anticuerpo y exatecán, que es un inhibidor de la topoisomerasa I, como sus componentes (documentos de patente 1 a 5 y bibliografía no relacionada con patentes 6, 7). Dado que estos conjugados anticuerpo-fármaco ejercen un efecto antitumoral y una seguridad superiores, actualmente se encuentran en estudios clínicos.
[0008] Como métodos para producir intermedios de fármaco-enlazador para producir los conjugados anticuerpo-fármaco descritos anteriormente, se conocen los métodos descritos en los documentos de patente 1 a 4.
[0009] Lista de menciones
[0010] Documentos de patente
[0011] Documento de patente 1: Publicación internacional n.º WO 2014/057687 (véase también documento EP2907824) Documento de patente 2: Publicación internacional n.º WO 2015/098099 (véase también documento EP3088419) Documento de patente 3: Publicación internacional n.º WO 2015/115091 (véase también documento EP3101032) Documento de patente 4: Publicación internacional n.º WO 2015/155998 (véase también documento EP3129063) Documento de patente 5: Publicación internacional n.º WO 2018/135501
[0012] Bibliografía no relacionada con patentes
[0013] Bibliografía no relacionada con patentes 1: Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.
[0014] Bibliografía no relacionada con patentes 2: Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537.
[0015] Bibliografía no relacionada con patentes 3: Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452.
[0016] Bibliografía no relacionada con patentes 4: Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.
[0017] Bibliografía no relacionada con patentes 5: Howard A. et al., J Clin Oncol 29: 398-405.
[0018] Bibliografía no relacionada con patentes 6: Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research (2016) 22 (20), 5097-5108. Bibliografía no relacionada con patentes 7: Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046.
[0019] Sumario de la invención
[0020] Problema técnico
[0021] Un intermedio de fármaco-enlazador para producir un conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención es el compuesto representado por la fórmula (1):
[0022]
[0024] Como método para producir el compuesto representado por la fórmula (1), se conocen los métodos descritos en los documentos de patente 1 a 4. Sin embargo, no se ha sabido que el compuesto representado por la fórmula (1) pueda obtenerse como cristales, y es necesario realizar operaciones complicadas tales como la purificación necesaria mediante cromatografía. Por tanto, existe una demanda de desarrollo de un método de producción industrialmente mejor.
[0025] Un objeto de la presente invención es encontrar un método industrialmente excelente mejorado para producir un intermedio de fármaco-enlazador sin la necesidad de purificación mediante cromatografía. Otro objeto de la presente invención es construir un método mejorado para producir un conjugado anticuerpo-fármaco en donde se usa el método mejorado anteriormente mencionado para producir un intermedio de fármaco-enlazador.
[0026] Solución al problema
[0027] Los presentes inventores realizaron estudios diligentes sobre un método para producir un intermedio de fármacoenlazador y, en consecuencia, encontraron que, sorprendentemente, el compuesto representado por la fórmula (1) puede obtenerse como cristales. Los presentes inventores también mejoraron un método para producir el compuesto representado por la fórmula (1) y, en consecuencia, encontraron un método de producción industrialmente excelente sin necesidad de purificación mediante cromatografía. Los presentes inventores construyeron además un método mejorado para producir un conjugado anticuerpo-fármaco usando los cristales del compuesto representado por la fórmula (1), y completaron la presente invención.
[0028] Específicamente, la presente invención se refiere a lo siguiente.
[0029] [1] Cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
[0032]
[0034] , en donde los cristales muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6 ± 0,2°, 15,5 ± 0,2° y 22,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα.
[0035] [2] Un método para producir cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
[0036]
[0038] que comprende las etapas de: preparar una disolución que comprende una cetona inferior y un alcohol inferior como disolventes en los que se disuelve el compuesto representado por la fórmula (1), en donde el alcohol inferior es 1-propanol o 2-butanol, y la cetona inferior es acetona; y luego precipitar cristales del compuesto representado por la fórmula (1) a partir de la disolución, en donde los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6 ± 0,2°, 15,5 ± 0,2° y 22,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα.
[0039] [3] Cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10):
[0042]
[0044] , en donde los cristales muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0 ± 0,2° y 25,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα.
[0045] [4] Una sal del compuesto representado por la fórmula (5):
[0048]
[0050] y un ácido, en donde el ácido es 1-hidroxibenzotriazol.
[0051] [5] Un método para producir un conjugado anticuerpo-fármaco, en donde un fármaco-enlazador representado por la fórmula (19) se conjuga con el anticuerpo a través de un enlace tioéter:
[0052]
[0054] en donde A representa una posición de conexión con el anticuerpo,
[0055] en donde los cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
[0058]
[0060] producidos por el método según [2] se usan como material de partida, y el método comprende las etapas de: i) reducir un anticuerpo; y luego
[0061] ii) añadir una disolución en la que se disuelven los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producidos por el método según [2], para hacer reaccionar la disolución con el anticuerpo reducido.
[0062] En las reivindicaciones se exponen realizaciones adicionales de la presente invención.
[0063] Efectos ventajosos de la invención
[0064] La presente invención permite la obtención del compuesto representado por la fórmula (1) como cristales y puede proporcionar el compuesto representado por la fórmula (1) con una calidad dada. La presente invención también puede proporcionar un método industrialmente excelente para producir el compuesto representado por la fórmula (1) sin necesidad de purificación mediante cromatografía. La presente invención puede proporcionar además un método mejorado para producir un conjugado anticuerpo-fármaco en donde se usa el método mencionado anteriormente.
[0065] Breve descripción de los dibujos
[0066] [Figura 1] La figura 1 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de un anticuerpo anti-HER2 (SEQ ID NO: 1).
[0067] [Figura 2] La figura 2 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena ligera de un anticuerpo anti-HER2 (SEQ ID NO: 2).
[0068] [Figura 3] La figura 3 muestra la difracción de rayos X en polvo de cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10).
[0069] [Figura 4] La figura 4 muestra la difracción de rayos X en polvo de un cristal del compuesto representado por la fórmula (1).
[0070] [Figura 5] La figura 5 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de un anticuerpo anti-HER3 (SEQ ID NO: 3).
[0071] [Figura 6] La figura 6 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena ligera de un anticuerpo anti-HER3 (SEQ ID NO: 4).
[0072] [Figura 7] La figura 7 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de un anticuerpo anti-TROP2 (SEQ ID NO: 5).
[0073] [Figura 8] La figura 8 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena ligera de un anticuerpo anti-TROP2 (SEQ ID NO: 6).
[0074] [Figura 9] La figura 9 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de un anticuerpo anti-B7-H3 (SEQ ID NO: 7).
[0075] [Figura 10] La figura 10 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena ligera de un anticuerpo anti-B7-H3 (SEQ ID NO: 8).
[0076] [Figura 11] La figura 11 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena pesada de un anticuerpo anti-GPR20 (SEQ ID NO: 9).
[0077] [Figura 12] La figura 12 muestra una secuencia de aminoácidos de una cadena ligera de un anticuerpo anti-GPR20 (SEQ ID NO: 10).
[0078] Descripción de las realizaciones
[0079] A continuación en el presente documento, se describen modos preferidos para llevar a cabo la presente invención con referencia a los dibujos. Las realizaciones descritas a continuación se dan meramente para ilustrar un ejemplo de una realización típica de la presente invención y no pretenden limitar el alcance de la presente invención.Conjugado anticuerpo-fármaco
[0080] El conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención es un conjugado anticuerpo-fármaco en el que un fármaco-enlazador representado por la fórmula (19) se conjuga con un anticuerpo a través de un enlace tioéter:
[0083]
[0085] en donde A representa una posición de conexión con el anticuerpo.
[0086] En la presente invención, la estructura parcial que consiste en un enlazador y un fármaco en el conjugado anticuerpo-fármaco se denomina "enlazador de fármaco". El enlazador de fármaco está conectado a un grupo tiol (dicho de otro modo, el átomo de azufre de un residuo de cisteína) formado en un sitio de enlace de disulfuro intercatenario (dos sitios entre cadenas pesadas y dos sitios entre una cadena pesada y una cadena ligera) en el anticuerpo.
[0087] El fármaco-enlazador de la presente invención incluye exatecán, que es un inhibidor de la topoisomerasa I, como componente. Exatecán es el compuesto representado por la fórmula (11):
[0088]
[0090] y es un derivado de la camptotecina que tiene un efecto antitumoral.
[0091] El conjugado anticuerpo-fármaco usado en la presente invención también puede representarse mediante la fórmula (20):
[0094]
[0096] en donde el fármaco-enlazador se conjuga con un anticuerpo a través de un enlace tioéter. El significado de n es el mismo que el de lo que se denomina el número promedio de moléculas de fármaco conjugadas (DAR; razón de fármaco a anticuerpo), e indica el número promedio de unidades del fármaco-enlazador conjugado por molécula de anticuerpo.
[0097] Después de migrar a las células cancerosas, el conjugado anticuerpo-fármaco usado en la presente invención libera el compuesto representado por la fórmula (22):
[0100]
[0102] y de ese modo ejerce un efecto antitumoral.
[0103] Se infiere que el compuesto representado por la fórmula (22) es la fuente original de la actividad antitumoral del conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención, y se ha confirmado que tiene un efecto inhibidor de la topoisomerasa I (Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, 15 de octubre; 22 (20): 5097-5108, Epub 201629 de marzo).
[0104] Se infiere que el compuesto representado por la fórmula (22) se forma por descomposición de una estructura aminal del compuesto representado por la fórmula (21):
[0105]
[0107] que se infiere que se forma por escisión en la parte enlazadora del conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención.
[0108] Se sabe que el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención tiene un efecto de espectador (Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046).
[0109] El efecto de espectador se ejerce a través de un proceso en el que el conjugado anticuerpo-fármaco producido según la presente invención se internaliza en células cancerosas que expresan una diana y el compuesto representado por la fórmula (22) liberado ejerce entonces un efecto antitumoral también sobre células cancerosas que están presentes a su alrededor y que no expresan la diana.
[0110] Intermedio de fármaco-enlazador para su uso en la producción de conjugado anticuerpo-fármacoUn intermedio de fármaco-enlazador para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención es el compuesto representado por la fórmula (1):
[0113]
[0115] Según la presente invención, el compuesto representado por la fórmula (1) puede obtenerse como cristales, y los cristales pueden usarse preferiblemente para la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención.
[0116] La calidad de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) puede evaluarse, por ejemplo, basándose en índices tales como el contenido de impurezas, la cantidad de un disolvente residual y la apariencia. Además, puede evaluarse usando, como índice, la estabilidad de conservación durante 3 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses y 36 meses en un entorno de 25 °C/60 % de HR o 40 °C/75 % de HR, por ejemplo.
[0117] Mediante dicha evaluación de calidad, también puede confirmarse la superioridad sobre un compuesto amorfo representado por la fórmula (1).
[0118] El método de producción de la presente invención comprende precipitar cristales del compuesto representado por la fórmula (1) a partir de una disolución que comprende una cetona inferior y un alcohol inferior como disolventes en los que se disuelve el compuesto representado por la fórmula (1), en donde el alcohol inferior es 1-propanol o 2-butanol, y la cetona inferior es acetona, para producir cristales del compuesto representado por la fórmula (1). Como resultado, se pueden producir cristales altamente puros del compuesto representado por la fórmula (1) que tienen una calidad dada.
[0119] Los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6°, 15,5° y 22,0° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα. Dado que los ángulos de difracción (2θ) en la difracción de rayos X en polvo generalmente pueden causar un error dentro del intervalo de ± 0,2°, debe entenderse que los valores descritos anteriormente de los ángulos de difracción incluyen valores numéricos dentro del intervalo de ± 0,2° (para el sentido común técnico con respecto a la medición y evaluación mediante difracción de rayos X en polvo, véase, por ejemplo, la Farmacopea Japonesa, 16ª edición, págs. 64-68 (2.58 X-Ray Powder Diffraction Method) o la Farmacopea Japonesa, 17ª edición, págs.71-74 (2.58 X-Ray Powder Diffraction Method)).
[0120] Por consiguiente, los cristales que tienen ángulos de difracción que concuerdan completamente con los ángulos de difracción descritos anteriormente son idénticos a los cristales que tienen picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6 ± 0,2°, 15,5 ± 0,2° y 22,0 ± 0,2°, y ambos se incluyen en la presente invención. En la presente invención, el término “± 0,2°” se refiere a un valor numérico en el intervalo de -0,2° a 0,2° con respecto a un valor numérico específico. Por ejemplo, el término “5,6 ± 0,2°” se refiere a un valor numérico en el intervalo de 5,4° a 5,8°.
[0121] En la presente invención, el término “cetona inferior” se refiere a acetona.
[0122] En la presente invención, el término “alcohol inferior” se refiere a 1-propanol y 2-butanol, y 1-propanol puede ejemplificarse más preferiblemente.
[0123] Por consiguiente, la disolución para precipitar los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) es una disolución que contiene acetona y 1-propanol o una disolución que contiene acetona y 2-butanol, y más preferiblemente una disolución que contiene acetona y 1-propanol.
[0124] La precipitación de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) también puede realizarse mediante la adición de un cristal simiente de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) a una disolución que contiene el compuesto representado por la fórmula (1).
[0125] El cristal simiente de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) puede obtenerse realizando directamente el método descrito anteriormente, pero puede obtenerse preferiblemente purificando una pequeña cantidad del compuesto representado por la fórmula (1) mediante cromatografía, luego disolviéndolo en un disolvente que contiene acetona y 1-propanol o un disolvente que contiene acetona y 2-butanol, y cristalizando a partir de la disolución.
[0126] El compuesto representado por la fórmula (1) puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2014/057687, publicación internacional n.º WO 2015/098099, publicación internacional n.º WO 2015/115091, publicación internacional n .º WO 2015/155998, y así sucesivamente, pero los compuestos producidos por los métodos de producción (I), (II), (III), (V), (VI) y (IX) descritos a continuación pueden usarse preferiblemente. Como resultado, los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) pueden producirse con un alto rendimiento sin el uso de cromatografía en todas las etapas.
[0127] Método de producción (I)
[0128] El método de producción (I) es un método de conversión de un compuesto representado por la fórmula (B) en el compuesto representado por la fórmula (1) a través de las etapas 1 a 3. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 1 a 3.
[0129]
[0131] En el esquema, R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo amino protegido con un grupo benciloxicarbonilo, R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo, y X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, y preferiblemente representa un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.Etapa 1:
[0132] Esta etapa es una etapa de desprotección de grupos protectores para un grupo amino y un grupo carboxilo de un compuesto representado por la fórmula (B) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (8). La desprotección de los grupos protectores para el grupo amino y el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (B) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0133] En el caso de que R<1>sea un grupo amino protegido con un grupo benciloxicarbonilo, y R<2>sea un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método. La desprotección de los grupos protectores para el grupo amino y el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (B) no está limitada por su método siempre que la reacción proceda. Puede realizarse preferiblemente usando un catalizador de paladio, un catalizador de platino, un catalizador de níquel, un catalizador de rutenio o un catalizador de rodio en una atmósfera de hidrógeno, puede realizarse más preferiblemente usando un catalizador de paladio, y puede realizarse incluso más preferiblemente usando paladio sobre carbono, y puede usarse incluso más preferiblemente paladio sobre carbono al 5 %. La cantidad de paladio sobre carbono al 5 % usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es del 5 al 40 % en peso con respecto al compuesto representado por la fórmula (B).
[0134] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua.
[0135] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 5 horas.
[0136] Etapa 2:
[0137] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (8) con un compuesto representado por la fórmula (C) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10). Como el compuesto representado por la fórmula (C), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido por un método conocido, o un compuesto producido por un método conforme al método de producción (VII) descrito a continuación. En el caso de que X sea un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método.
[0138] La cantidad del compuesto representado por la fórmula (C) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 4 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (8).
[0139] Esta etapa emplea preferiblemente una base. La base usada en esta etapa no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Los ejemplos de los mismos pueden incluir trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina y N-metilpiperidina, y la N,N-diisopropiletilamina puede ejemplificarse preferiblemente. La cantidad de N,N-diisopropiletilamina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (8).
[0140] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de acetonitrilo y agua.
[0141] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 7 a 30 horas.
[0142] El compuesto representado por la fórmula (10) puede obtenerse preferiblemente como cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano.
[0143] La calidad de los cristales del aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10) puede evaluarse, por ejemplo, basándose en índices tales como un contenido de impurezas, una cantidad de un disolvente residual y la apariencia. Además, puede evaluarse usando, como índice, la estabilidad de conservación durante 3 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses y 36 meses en un entorno de 25 °C/60 % de HR o 40 °C/75 % de HR, por ejemplo. Mediante dicha evaluación de calidad, también puede confirmarse la superioridad sobre un compuesto amorfo representado por la fórmula (10).
[0144] Los cristales del aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10) muestran preferiblemente picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0° y 25,0° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα. Dado que los ángulos de difracción (2θ) en la difracción de rayos X en polvo generalmente pueden causar un error dentro del intervalo de ± 0,2°, debe entenderse que los valores descritos anteriormente de los ángulos de difracción incluyen valores numéricos dentro del intervalo de ± 0,2° (para el sentido común técnico con respecto a la medición y evaluación mediante difracción de rayos X en polvo, véase, por ejemplo, la Farmacopea Japonesa, 16ª edición, págs.64-68 (2.58 X-Ray Powder Diffraction Method) o la Farmacopea Japonesa, 17ª edición, págs. 71-74 (2.58 X-Ray Powder Diffraction Method)). Por consiguiente, los cristales que tienen ángulos de difracción que concuerdan completamente con los ángulos de difracción descritos anteriormente son idénticos a los cristales que tienen picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0 ± 0,2° y 25,0 ± 0,2°, y ambos se incluyen en la presente invención.
[0145] Etapa 3:
[0146] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1). El compuesto representado por la fórmula (11) puede usarse preferiblemente en forma de una sal de ácido metanosulfónico, puede usarse más preferiblemente en forma de una sal de ácido metanosulfónico m-hidratado, en donde m es de 0 a 3, puede usarse incluso más preferiblemente en forma de una sal de ácido metanosulfónico anhídrido, una sal de ácido metanosulfónico monohidratado, una sal de ácido metanosulfónico dihidratado o una sal de ácido metanosulfónico trihidratado, y puede usarse incluso más preferiblemente en forma de una sal de ácido metanosulfónico dihidratado, pero todos ellos pueden usarse en el método de producción de la presente invención. El número de moléculas de agua en el hidrato descrito anteriormente puede controlarse ajustando la humedad en el momento de la obtención o secado de los cristales.
[0147] La cantidad del compuesto representado por la fórmula (11) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (10).
[0148] El compuesto representado por la fórmula (10) puede derivatizarse preferiblemente en un éster activo y condensarse con el compuesto representado por la fórmula (11). La derivatización en el éster activo en esta etapa no está limitada por su método siempre que la reacción proceda. Puede realizarse, por ejemplo, usando un agente de condensación tal como clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (WSCD-HCl) o N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), y haciéndolo reaccionar con un aditivo tal como clorhidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt), N-hidroxisuccinimida, ciano(hidroxiimino)acetato de etilo o pnitrofenol, y puede realizarse preferiblemente usando clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y ciano (hidroxiimino)acetato de etilo. La cantidad de clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (10). La cantidad de ciano(hidroxiimino)acetato de etilo usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,02 a 0,2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (10).
[0149] Esta etapa emplea preferiblemente una base. La base usada en esta etapa no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Los ejemplos de las mismas pueden incluir trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina y N-metilpiperidina, y la N-metilmorfolina puede ejemplificarse preferiblemente. La cantidad de N-metilmorfolina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (10).
[0150] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua.
[0151] La sal de ácido metanosulfónico del compuesto representado por la fórmula (11) se neutraliza con una base para preparar una forma libre y, a continuación, procede la reacción. Aquí, la sal de ácido metanosulfónico del compuesto representado por la fórmula (11) es hidrófila, mientras que la forma libre del compuesto representado por la fórmula (11) es lipófila. Por tanto, con el fin de permitir que una serie de reacciones procedan de manera eficaz, esta etapa puede realizarse preferiblemente en un sistema de dos fases de una fase acuosa y una fase orgánica. En el caso de que la fase orgánica contenga tetrahidrofurano, puede usarse preferiblemente una disolución acuosa que tiene alta fuerza iónica, por ejemplo, una disolución acuosa de sulfato de sodio, como una fase acuosa menos miscible con la misma.
[0152] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 horas.
[0153] Método de producción (II)
[0154] El método de producción (II) es un método de conversión de un compuesto representado por la fórmula (B) en el compuesto representado por la fórmula (1) a través de las etapas 4 a 7. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 4 a 7.
[0156]
[0157]
[0159] En el esquema, R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, y X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, y preferiblemente representa un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.
[0160] Etapa 4:
[0161] Esta etapa es una etapa de desprotección de un grupo protector para un grupo amino de un compuesto representado por la fórmula (B) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (D).
[0162] La desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (B) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0163] Etapa 5:
[0164] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (D) con un compuesto representado por la fórmula (C) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (E).
[0165] Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 2 del método de producción (I).
[0166] Etapa 6:
[0167] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (E) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10).
[0168] La desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (B) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W.
[0169] Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0170] El compuesto representado por la fórmula (10) puede obtenerse preferiblemente como cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano de la misma manera que en la etapa 2 del método de producción (I).
[0171] Etapa 7:
[0172] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1).
[0173] Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 3 del método de producción (I).
[0174] Método de producción (III)
[0175] El método de producción (III) es un método de conversión de un compuesto representado por la fórmula (B) en el compuesto representado por la fórmula (1) a través de las etapas 8 a 11. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 8 a 11.
[0178]
[0180] En el esquema, R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo, y X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, y preferiblemente representa un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.
[0181] Etapa 8:
[0182] Esta etapa es una etapa de desprotección de un grupo protector para un grupo carboxilo de un compuesto representado por la fórmula (B) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (F).
[0183] La desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (B) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0184] En el caso de que R<2>sea un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método.
[0185] La desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (B) no está limitada por su método siempre que la reacción proceda. Puede realizarse preferiblemente usando un catalizador de paladio, un catalizador de platino, un catalizador de níquel, un catalizador de rutenio o un catalizador de rodio en una atmósfera de hidrógeno, puede realizarse más preferiblemente usando un catalizador de paladio, y puede realizarse incluso más preferiblemente usando paladio sobre carbono, y puede usarse incluso más preferiblemente un complejo de paladio sobre carbono-etilendiamina. La cantidad del complejo de paladio sobre carbono-etilendiamina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es del 34 al 136 % en peso con respecto al compuesto representado por la fórmula (B).
[0186] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de tetrahidrofurano y agua.
[0187] La temperatura de reacción de esta etapa es preferiblemente de los 10 a 40 °C, pero no se limita a la misma siempre que la reacción proceda. El tiempo de reacción de esta etapa es preferiblemente de 1 a 54 horas, pero no se limita a esto siempre que la reacción proceda.
[0188] Etapa 9:
[0189] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (F) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (G).
[0190] El compuesto representado por la fórmula (F) puede derivatizarse preferiblemente en un éster activo y condensarse con el compuesto representado por la fórmula (11). La cantidad del compuesto representado por la fórmula (11) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (F). La derivatización en el éster activo en esta etapa no está limitada por su método siempre que la reacción proceda. Puede realizarse, por ejemplo, usando un agente de condensación tal como clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (WSCD-HCl) o N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), y haciéndolo reaccionar con un aditivo tal como clorhidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt), N-hidroxisuccinimida, ciano(hidroxiimino)acetato de etilo o pnitrofenol, y puede realizarse preferiblemente usando clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y 1-hidroxibenzotriazol. La cantidad de clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (F). La cantidad de 1-hidroxibenzotriazol usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (F).
[0191] Esta etapa emplea preferiblemente una base. La base usada en esta etapa no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Los ejemplos de las mismas pueden incluir trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina y N-metilpiperidina, y la trietilamina puede ejemplificarse preferiblemente. La cantidad de trietilamina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (F).
[0192] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,Ndimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y pueden ejemplificarse preferiblemente disolventes mixtos de los mismos, y tetrahidrofurano.
[0193] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 4 horas.
[0194] Etapa 10:
[0195] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (G) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (16).
[0196] La desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (G) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0197] En el caso de que R<1>sea un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método.
[0198] La desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (G) no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Puede realizarse usando, por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno, trimetilguanidina, 1,5,7-triazabiciclo[4,4,0]dec-5-eno o 7-metil-1,5,7-triazabiciclo[4,4,0]dec-5-eno 1,5-diazabiciclo[4,3,0]-5-noneno, y puede realizarse preferiblemente usando 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno. La cantidad de 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (15).
[0199] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y pueden ejemplificarse preferiblemente disolventes mixtos de los mismos, y tetrahidrofurano.
[0200] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 5 horas.
[0201] Etapa 11:
[0202] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (16) con un compuesto representado por la fórmula (C) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1). Como el compuesto representado por la fórmula (C), puede usarse un producto disponible comercialmente, un compuesto producido por un método conocido, o un compuesto producido por un método conforme al método de producción (VII) descrito a continuación. En el caso de que X sea un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método.
[0203] La cantidad del compuesto representado por la fórmula (C) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (16).
[0204] Esta etapa emplea preferiblemente una base. La base usada en esta etapa no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Los ejemplos de las mismas pueden incluir trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina y N-metilpiperidina, y la trietilamina puede ejemplificarse preferiblemente. La cantidad de trietilamina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es 0,75 a 6 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (16).
[0205] Esta etapa puede emplear preferiblemente de manera adicional p-toluenosulfonato de piridinio. La cantidad de ptoluenosulfonato de piridinio usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 4 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (16).
[0206] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido, piridina y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de piridina, acetonitrilo y tetrahidrofurano.
[0207] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1,5 a 7 horas.
[0208] Como el compuesto representado por la fórmula (B) en los métodos de producción (I) a (III), puede usarse preferiblemente un compuesto producido por el siguiente método de producción (IV).
[0209] Método de producción (IV)
[0210] El método de producción (IV) es un método de conversión de un compuesto representado por la fórmula (H) en el compuesto representado por la fórmula (B) a través de las etapas 12 a 15. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 12 a 15.
[0213]
[0215] En el esquema, R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo amino protegido con un grupo benciloxicarbonilo o un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo, R<3>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y preferiblemente representa un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, y X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, y preferiblemente representa un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.
[0216] Etapa 12:
[0217] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (H) con tetraacetato de plomo para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (J). Como compuesto representado por la fórmula (H), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido con referencia a un método conocido. La cantidad de tetraacetato de plomo usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (H).
[0218] Esta etapa puede realizarse preferiblemente en presencia de ácido acético o piridina, y puede realizarse más preferiblemente en presencia de ácido acético.
[0219] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona y dimetilsulfóxido, y disolventes mixtos de los mismos, y el tetrahidrofurano puede ejemplificarse preferiblemente.
[0220] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 45 a 85 °C, y más preferiblemente una temperatura que alcanza el calentamiento a reflujo de tetrahidrofurano. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 3 horas.
[0221] Etapa 13:
[0222] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (J) con un compuesto representado por la fórmula (K) en presencia de un ácido o una base para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (L). La cantidad del compuesto representado por la fórmula (K) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 4 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (J).
[0223] Esta etapa puede realizarse en presencia de una base o un ácido. La base usada en esta etapa es preferiblemente una disolución acuosa de hidróxido de sodio. La cantidad de la disolución acuosa de hidróxido de sodio usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (J). El ácido usado en esta etapa es preferiblemente tris(pentafluorofenil)borano. La cantidad de tris(pentafluorofenil)borano usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,01 a 0,1 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (J).
[0224] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano y 1,4-dioxano, y puede ejemplificarse preferiblemente 1,2-dimetoxietano.
[0225] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los -10 a 15 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 6 horas.
[0226] Etapa 14:
[0227] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (L) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (M).
[0228] La desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (L) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0229] En el caso de que R<3>sea un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, esta etapa puede realizarse preferiblemente mediante el siguiente método.
[0230] La desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (L) no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Puede realizarse usando, por ejemplo, 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno, trimetilguanidina, 1,5,7-triazabiciclo[4,4,0]dec-5-eno o 7-metil-1,5,7-triazabiciclo[4,4,0]dec-5-eno 1,5-diazabiciclo[4,3,0]-5-noneno, y puede realizarse preferiblemente usando 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno. La cantidad de 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,25 a 1 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (L).
[0231] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y pueden ejemplificarse preferiblemente acetonitrilo y N,N-dimetilacetamida.
[0232] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 2 a 8 horas.
[0233] El compuesto representado por la fórmula (M) puede precipitarse a partir de la disolución de reacción formando una sal con un ácido, y preferiblemente aislarse y purificarse. Como resultado, pueden eliminarse los subproductos, que pueden ser un factor que inhibe las reacciones en las etapas posteriores.
[0234] El ácido descrito anteriormente es preferiblemente 1-hidroxibenzotriazol. El 1-hidroxibenzotriazol usado en esta etapa también puede funcionar como uno de los agentes de condensación en la siguiente etapa 15. Asimismo, puede usarse preferiblemente un ácido distinto de 1-hidroxibenzotriazol en esta etapa siempre que funcione como uno de los agentes de condensación.
[0235] Etapa 15:
[0236] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (M) con un compuesto representado por la fórmula (N) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (B). Como el compuesto representado por la fórmula (N), puede usarse un producto disponible comercialmente, un compuesto producido por un método conocido, o un compuesto producido por un método conforme al método de producción (VIII) descrito a continuación. La cantidad del compuesto representado por la fórmula (N) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (M).
[0237] El compuesto representado por la fórmula (M) puede derivatizarse preferiblemente en un éster activo y condensarse con el compuesto representado por la fórmula (N). La derivatización en el éster activo puede realizarse, por ejemplo, usando un agente de condensación tal como clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (WSCD-HCl) o N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), y haciéndolo reaccionar con un aditivo tal como clorhidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt), N-hidroxisuccinimida, ciano(hidroxiimino)acetato de etilo o p-nitrofenol, y puede realizarse preferiblemente usando clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y 1-hidroxibenzotriazol. La cantidad de clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (5). La cantidad de 1-hidroxibenzotriazol usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (M).
[0238] En el caso de que el compuesto representado por la fórmula (M) esté en forma de una sal de 1-hidroxibenzotriazol, esta etapa puede realizarse preferiblemente sin la adición de 1-hidroxibenzotriazol recién preparado.
[0239] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de acetonitrilo y agua.
[0240] En el caso de que el compuesto representado por la fórmula (M) no se aísle en la etapa 14, y esta etapa se realice de forma continua a partir de la misma, el disolvente usado en la etapa 14 puede usarse tal cual como el disolvente de esta etapa.
[0241] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los -10 a 15 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1,5 a 7 horas.
[0242] En un aspecto más específico, el compuesto representado por la fórmula (1) puede producirse preferiblemente mediante el siguiente método de producción (V) o (VI), y usarse.
[0243] Método de producción (V)
[0244] El método de producción (V) es un método de conversión del compuesto representado por la fórmula (2) en el compuesto representado por la fórmula (1) a través de las etapas 16 a 22. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 16 a 22.
[0246]
[0247]
[0249] Etapa 16:
[0250] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (2) con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (3). Como compuesto representado por la fórmula (2), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido con referencia a un método conocido. Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 12 del método de producción (IV).
[0251] Etapa 17:
[0252] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (3) con glicolato de bencilo en presencia de un ácido o una base para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (4). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 13 del método de producción (IV).
[0253] Etapa 18:
[0254] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (4) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (5). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 14 del método de producción (IV).
[0255] Etapa 19:
[0256] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (5) con el compuesto representado por la fórmula (6) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (7). Como compuesto representado por la fórmula (6), puede usarse un producto disponible comercialmente, un compuesto producido por un método conocido o un compuesto producido por el método de producción (VIII) descrito a continuación. Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 15 del método de producción (IV).
[0257] Etapa 20:
[0258] Esta etapa es una etapa de desprotección de los grupos protectores para el grupo amino y el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (7) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (8). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 1 del método de producción (I).
[0259] Etapa 21:
[0260] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (8) con el compuesto representado por la fórmula (9) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 2 del método de producción (I).
[0261] Etapa 22:
[0262] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 3 del método de producción (I).
[0263] Método de producción (VI)
[0264] El método de producción (VI) es un método de conversión del compuesto representado por la fórmula (2) en el compuesto representado por la fórmula (1) a través de las etapas 23 a 30. A continuación en el presente documento, se describirán en detalle las etapas 23 a 30.
[0266]
[0267]
[0269] Etapa 23:
[0270] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (2) con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (3). Como compuesto representado por la fórmula (2), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido con referencia a un método conocido. Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 12 del método de producción (IV).
[0271] Etapa 24:
[0272] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (3) con glicolato de bencilo en presencia de un ácido o una base para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (4). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 13 del método de producción (IV).
[0273] Etapa 25:
[0274] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (4) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (5). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 14 del método de producción (IV).
[0275] Etapa 26:
[0276] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (5) con el compuesto representado por la fórmula (12) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (13). Como compuesto representado por la fórmula (13), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido por un método conocido. Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 15 del método de producción (IV).
[0277] Etapa 27:
[0278] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (13) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (14). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 8 del método de producción (III).
[0279] Etapa 28:
[0280] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (14) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (15). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 9 del método de producción (III).
[0281] Etapa 29:
[0282] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (15) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (16). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 10 del método de producción (III).
[0283] Etapa 30:
[0284] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (16) con el compuesto representado por la fórmula (9) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 11 del método de producción (III).
[0285] Método de producción (VII)
[0286] El compuesto representado por la fórmula (9) puede producirse preferiblemente mediante el método de producción (VII) descrito a continuación y usarse. Como resultado, se pueden suprimir las impurezas que podrían influir en la calidad de los compuestos producidos en las etapas posteriores, y esto puede contribuir a la obtención del compuesto representado por la fórmula (1) con alta calidad.
[0289]
[0291] Etapa 31:
[0292] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (17) con anhídrido maleico para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (18). La cantidad de anhídrido maleico usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (17).
[0293] Esta etapa se realiza preferiblemente en ácido acético.
[0294] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 80 a 120 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 8 a 32 horas.
[0295] Etapa 32:
[0296] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (18) con Nhidroxisuccinimida para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (9). La cantidad de N-hidroxisuccinimida usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (17).
[0297] El compuesto representado por la fórmula (18) puede derivatizarse en un éster activo, un anhídrido de ácido mixto o un haluro de ácido, etc. y condensarse con la N-hidroxisuccinimida, o puede derivatizarse preferiblemente en un haluro de ácido y condensarse con la N-hidroxisuccinimida.
[0298] La derivatización en el haluro de ácido puede realizarse preferiblemente usando cloruro de tionilo. La cantidad de cloruro de tionilo usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 1,5 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (18). En esta etapa, se usa preferiblemente una base. La base usada en esta etapa es preferiblemente 2,6-lutidina. La cantidad de 2,6-lutidina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (18).
[0299] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, dietil éter, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno y clorobenceno, y los disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente acetonitrilo.
[0300] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los -25 °C a 0 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,5 a 2 horas.
[0301] Método de producción (VIII)
[0302] El compuesto representado por la fórmula (6) puede producirse mediante el siguiente método de producción (VIII) y usarse.
[0305]
[0307] Etapa 33:
[0308] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (23) con N-hidroxisuccinimida para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (24). La cantidad del compuesto representado por la fórmula (23) usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,5 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (23).
[0309] El compuesto representado por la fórmula (23) puede derivatizarse en un éster activo, un anhídrido de ácido mixto o un haluro de ácido, etc. y condensarse con la N-hidroxisuccinimida, y puede derivatizarse preferiblemente en una forma esterificada activa y condensarse con la N-hidroxisuccinimida.
[0310] La esterificación activa puede realizarse preferiblemente mediante el uso de clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La cantidad de clorhidrato de 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,5 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (23).
[0311] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,Ndimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y pueden ejemplificarse preferiblemente disolventes mixtos de los mismos, y acetonitrilo.
[0312] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de los 10 a 40 °C. El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 2 a 8 horas.
[0313] Etapa 34:
[0314] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (24) con L-fenilalanina para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (6). La cantidad de L-fenilalanina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (24).
[0315] Esta etapa emplea preferiblemente una base. La base usada en esta etapa no está particularmente limitada siempre que la reacción proceda. Los ejemplos de las mismas pueden incluir trietilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N-metilpirrolidina y N-metilpiperidina, y la trietilamina puede ejemplificarse preferiblemente. La cantidad de trietilamina usada en esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 0,7 a 1,3 equivalentes con respecto al compuesto representado por la fórmula (24).
[0316] El disolvente usado en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Los ejemplos de los mismos pueden incluir acetonitrilo, diclorometano, cloroformo, metanol, etanol, éter dietílico, 1,2-dimetoxietano, tetrahidrofurano, 2-metiltetrahidrofurano, 1,4-dioxano, acetato de etilo, hexano, pentano, heptano, ciclohexano, etilciclohexano, benceno, tolueno, clorobenceno, acetona, 2-butanona, N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, 1-metil-2-pirrolidona, dimetilsulfóxido y agua, y disolventes mixtos de los mismos, y puede ejemplificarse preferiblemente un disolvente mixto de acetonitrilo y agua.
[0317] La temperatura de reacción de esta etapa no está limitada siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es el compuesto representado por la fórmula (23). El tiempo de reacción de esta etapa no está limitado siempre que la reacción proceda. Preferiblemente es de 1 a 4 horas.
[0318] Método de producción (IX)
[0319] El compuesto representado por la fórmula (1) también puede producirse mediante el siguiente método de producción (IX) y usarse.
[0321]
[0322]
[0324] En el esquema, R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, R<3>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, y preferiblemente representa un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.
[0325] Etapa 35:
[0326] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (H) con tetraacetato de plomo para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (J). Como compuesto representado por la fórmula (H), puede usarse un producto disponible comercialmente o un compuesto producido con referencia a un método conocido. Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 12 del método de producción (IV).
[0327] Etapa 36:
[0328] Esta etapa es una etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (J) con un compuesto representado por la fórmula (K) en presencia de un ácido o una base para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (L). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 13 del método de producción (IV).
[0329] Etapa 37:
[0330] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (L) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (O).
[0331] La desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (L) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0332] Etapa 38:
[0333] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (O) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (P).
[0334] El compuesto representado por la fórmula (O) puede derivatizarse preferiblemente en un éster activo y condensarse con el compuesto representado por la fórmula (11).
[0335] Etapa 39:
[0336] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (P) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (25).
[0337] La desprotección del grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (P) puede realizarse mediante un método bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4ª edición (2007), Wiley-Interscience).
[0338] Etapa 40:
[0339] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (25) con un compuesto representado por la fórmula (N) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (G).
[0340] El compuesto representado por la fórmula (N) puede derivatizarse preferiblemente en un éster activo y condensarse con el compuesto representado por la fórmula (25).
[0341] Etapa 41:
[0342] Esta etapa es una etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (G) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (16). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 10 del método de producción (III).
[0343] Etapa 42:
[0344] Esta etapa es una etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (16) con un compuesto representado por la fórmula (C) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1). Esta etapa puede realizarse de la misma manera que en la etapa 11 del método de producción (III).
[0345] Anticuerpo para su uso en la producción de un conjugado anticuerpo-fármaco
[0346] El anticuerpo para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención puede derivarse de cualquier especie, y es preferiblemente un anticuerpo derivado de un ser humano, una rata, un ratón o un conejo. En los casos en que el anticuerpo se deriva de especies distintas de la especie humana, se quimeriza o humaniza preferiblemente usando una técnica bien conocida. El anticuerpo de la presente invención puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal y es preferiblemente un anticuerpo monoclonal.
[0347] El anticuerpo para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención es un anticuerpo que tiene preferiblemente una característica de ser capaz de dirigirse a células cancerosas, y es preferiblemente un anticuerpo que posee, por ejemplo, la propiedad de reconocer una célula cancerosa, la propiedad de unión a una célula cancerosa, la propiedad de internalización en una célula cancerosa, y/o actividad citocida contra células cancerosas.
[0348] Puede confirmarse la actividad de unión del anticuerpo contra las células cancerosas mediante citometría de flujo. La internalización del anticuerpo en las células tumorales puede confirmarse usando (1) un ensayo de visualización de un anticuerpo incorporado en las células bajo un microscopio de fluorescencia usando un anticuerpo secundario (marcado con fluorescencia) que se une al anticuerpo terapéutico (Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761), (2) un ensayo de medición de una intensidad de fluorescencia incorporada en las células usando un anticuerpo secundario (marcado con fluorescencia) que se une al anticuerpo terapéutico (Molecular Biology of the Cell, Vol. 15, 5268-5282, diciembre de 2004), o (3) un ensayo Mab-ZAP usando una unión de inmunotoxina al anticuerpo terapéutico en donde la toxina se libera tras la incorporación en las células para inhibir el crecimiento celular (Bio Techniques 28: 162-165, enero de 2000). Como inmunotoxina, puede usarse una proteína compleja recombinante de un dominio catalítico de toxina diftérica y la proteína G.
[0349] La actividad antitumoral del anticuerpo puede confirmarsein vitromediante la determinación de la actividad inhibidora contra el crecimiento celular. Por ejemplo, se cultiva una línea de células cancerosas que sobreexpresa una proteína diana para el anticuerpo y el anticuerpo se añade al sistema de cultivo a concentraciones variables para determinar la actividad inhibidora contra la formación de focos, la formación de colonias y el crecimiento de esferoides. La actividad antitumoral puede confirmarsein vivo, por ejemplo, administrando el anticuerpo a un ratón desnudo con una línea de células cancerosas trasplantada que expresa altamente la proteína diana y determinando el cambio en la célula cancerosa.
[0350] Dado que el compuesto conjugado en el conjugado anticuerpo-fármaco ejerce un efecto antitumoral, se prefiere, pero no es esencial, que el propio anticuerpo tenga un efecto antitumoral. Con el fin de ejercer específica y selectivamente la actividad citotóxica del compuesto antitumoral contra las células cancerosas, es importante y también preferido que el anticuerpo tenga la propiedad de internalizarse para migrar a las células cancerosas. El anticuerpo para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención puede obtenerse mediante un procedimiento conocido en la técnica. Por ejemplo, el anticuerpo de la presente invención puede obtenerse usando un método normalmente llevado a cabo en la técnica, que implica inmunizar animales con un polipéptido antigénico y recoger y purificar anticuerpos producidosin vivo.El origen del antígeno no se limita a seres humanos, y los animales pueden inmunizarse con un antígeno derivado de un animal no humano tal como un ratón, una rata y similares. En este caso, la reactividad cruzada de los anticuerpos que se unen al antígeno heterólogo obtenido con antígenos humanos puede analizarse para detectar un anticuerpo aplicable a una enfermedad humana.
[0351] De manera alternativa, las células productoras de anticuerpos que producen anticuerpos contra el antígeno se fusionan con células de mieloma según un método conocido en la técnica (por ejemplo, Kohler y Milstein, Nature (1975) 256, págs. 495-497; y Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, págs. 365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)) para establecer hibridomas, a partir de los cuales pueden obtenerse a su vez anticuerpos monoclonales.
[0352] El antígeno puede obtenerse mediante modificación genética de células hospedadoras para producir un gen que codifica la proteína antigénica. Específicamente, se preparan vectores que permiten la expresión del gen de antígeno y se transfieren a células hospedadoras de modo que se exprese el gen. El antígeno así expresado puede purificarse. El anticuerpo también puede obtenerse mediante un método de inmunización de animales con las células que expresan antígeno modificadas genéticamente descritas anteriormente o una línea celular que expresa el antígeno.
[0353] El anticuerpo para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención es preferiblemente un anticuerpo recombinante obtenido mediante modificación artificial con el fin de disminuir la antigenicidad heteróloga para seres humanos tal como un anticuerpo quimérico o un anticuerpo humanizado, o es preferiblemente un anticuerpo que tiene solo la secuencia génica de un anticuerpo derivado de un ser humano, es decir, un anticuerpo humano. Estos anticuerpos pueden producirse usando un método conocido.
[0354] Como anticuerpo quimérico, puede ejemplificarse un anticuerpo en el que las regiones variables y constantes del anticuerpo se derivan de diferentes especies, por ejemplo, un anticuerpo quimérico en el que una región variable del anticuerpo derivado de ratón o rata se conecta a una región constante del anticuerpo derivado de humano (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984)).
[0355] Como anticuerpo humanizado, puede ejemplificarse un anticuerpo obtenido integrando solo la región determinante de la complementariedad (CDR) de un anticuerpo heterólogo en un anticuerpo derivado de humano (Nature (1986) 321, págs. 522-525), y un anticuerpo obtenido injertando una parte de los residuos de aminoácidos del marco de un anticuerpo heterólogo, así como la secuencia de CDR del anticuerpo heterólogo a un anticuerpo humano mediante un método de injerto de CDR (WO 90/07861), y un anticuerpo humanizado usando una estrategia de mutagénesis de conversión génica (patente estadounidense n .º 5821337).
[0356] Como anticuerpo humano, puede ejemplificarse un anticuerpo generado mediante el uso de un ratón productor de anticuerpos humanos que tiene un fragmento de cromosoma humano que incluye genes de una cadena pesada y cadena ligera de un anticuerpo humano (véase Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, págs. 133-143; Kuroiwa, Y. et al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, págs.3447-3448; Yoshida, H. et al., Animal Cell Technology: Basic and Applied Aspects vol.10, págs.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. e Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999; Tomizuka, K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, págs. 722-727, etc.). Como alternativa, puede ejemplificarse un anticuerpo obtenido mediante presentación en fagos, seleccionándose el anticuerpo de una biblioteca de anticuerpos humanos (véase Wormstone, I. M. et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002)43 (7), págs.2301-2308; Carmen, S. et al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1 (2), págs.189-203; Siriwardena, D. et al., Ophthalmology (2002) 109 (3), págs.427-431, etc.).
[0358] En la presente invención, también se incluyen variantes modificadas del anticuerpo para su uso en la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención. La variante modificada se refiere a una variante obtenida sometiendo el anticuerpo según la presente invención a modificación química o biológica. Los ejemplos de la variante modificada químicamente incluyen variantes que incluyen un enlace de un resto químico a un esqueleto de aminoácido, variantes que incluyen un enlace de un resto químico a una cadena de hidratos de carbono unida a N o unida a O, etc. Los ejemplos de la variante modificada biológicamente incluyen variantes obtenidas por modificación postraduccional (tales como glicosilación unida a N o unida a O, procesamiento N- o C-terminal, desamidación, isomerización de ácido aspártico u oxidación de metionina), y variantes en las que se ha añadido un residuo de metionina al extremo N al expresarse en una célula hospedadora procariota. Además, un anticuerpo marcado para permitir la detección o el aislamiento del anticuerpo o un antígeno según la presente invención, por ejemplo, un anticuerpo marcado con enzima, un anticuerpo marcado con fluorescencia y un anticuerpo marcado con afinidad también están incluidos en el significado de la variante modificada. Dicha variante modificada del anticuerpo según la presente invención es útil para mejorar la estabilidad y retención en sangre del anticuerpo, reducir la antigenicidad del mismo, detectar o aislar un anticuerpo o un antígeno, y así sucesivamente.
[0359] Además, mediante la regulación de la modificación de un glicano que está unido al anticuerpo según la presente invención (glicosilación, desfucosilación, etc.), es posible potenciar la actividad citotóxica celular dependiente de anticuerpo. Como técnica para regular la modificación de un glicano de anticuerpos, se conocen los documentos WO 99/54342, WO 00/61739, WO 02/31140, etc. Sin embargo, la técnica no se limita a ellos. En el anticuerpo según la presente invención, también se incluyen anticuerpos en los que se regula la modificación de un glicano.
[0360] Se sabe que se deleciona un residuo de lisina en el extremo carboxilo de la cadena pesada de un anticuerpo producido en una célula de mamífero cultivada (Journal of Chromatography A, 705: 129-134 (1995)), y también se sabe que se eliminan dos residuos de aminoácido (glicina y lisina) en el extremo carboxilo de la cadena pesada de un anticuerpo producido en una célula de mamífero cultivada y se amida un residuo de prolina recién ubicado en el extremo carboxilo (Analytical Biochemistry, 360: 75-83 (2007)). Sin embargo, dicha deleción y modificación de la secuencia de cadena pesada no afecta la afinidad de unión al antígeno y la función efectora (la activación del complemento, la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos, etc.) del anticuerpo. Por tanto, en el anticuerpo según la presente invención, también se incluyen anticuerpos sometidos a dicha modificación y fragmentos funcionales del anticuerpo, y también se incluyen variantes de deleción en las que se han delecionado uno o dos aminoácidos en el extremo carboxilo de la cadena pesada, variantes obtenidas por amidación de variantes de deleción (por ejemplo, una cadena pesada en la que se ha amidado el residuo de prolina del extremo carboxilo), y similares. El tipo de variante de deleción que tiene una deleción en el extremo carboxilo de la cadena pesada del anticuerpo según la presente invención no se limita a las variantes anteriores siempre que se conserven la afinidad de unión al antígeno y la función efectora. Las dos cadenas pesadas que constituyen el anticuerpo según la presente invención pueden ser de un tipo seleccionado del grupo que consiste en una cadena pesada de longitud completa y la variante de deleción descrita anteriormente, o pueden ser de dos tipos en combinación seleccionados de los mismos. La proporción de la cantidad de cada variante de deleción puede verse afectada por el tipo de células de mamífero cultivadas que producen el anticuerpo según la presente invención y las condiciones de cultivo; sin embargo, puede ejemplificarse preferiblemente un anticuerpo en el que se ha delecionado un residuo de aminoácido en el extremo carboxilo en ambas de las dos cadenas pesadas en el anticuerpo según la presente invención.
[0362] Como isotipos del anticuerpo según la presente invención, por ejemplo, puede ejemplificarse IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), y puede ejemplificarse preferiblemente IgG1 o IgG2.
[0364] Los ejemplos de anticuerpos aplicables a la producción del conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención pueden incluir, pero no se limitan particularmente a, un anticuerpo anti-HER2, un anticuerpo anti-HER3, un anticuerpo anti-TROP2, un anticuerpo anti-B7-H3, un anticuerpo anti-CD3, un anticuerpo anti-CD30, un anticuerpo anti-CD33, un anticuerpo anti-CD37, un anticuerpo anti-CD56, un anticuerpo anti-CD98, un anticuerpo anti-DR5, un anticuerpo anti-EGFR, un anticuerpo anti-EPHA2, un anticuerpo anti-FGFR2, un anticuerpo anti-FGFR4, un anticuerpo anti-FOLR1, un anticuerpo anti-VEGF y un anticuerpo anti-GPR20, y preferiblemente pueden ejemplificarse un anticuerpo anti-HER2, un anticuerpo anti-HER3, un anticuerpo anti-TROP2, un anticuerpo anti-B7-H3 y un anticuerpo anti-GPR20.
[0366] En la presente invención, la expresión “anticuerpo anti-HER2” se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a HER2 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 2; ErbB-2), y preferiblemente tiene una actividad de internalización en células que expresan HER2 mediante la unión a HER2.
[0368] Los ejemplos del anticuerpo anti-HER2 pueden incluir trastuzumab (patente estadounidense n .º 5821337) y pertuzumab (publicación internacional n .º WO 01/00245), y puede ejemplificarse preferiblemente el trastuzumab. En la presente invención, el término "trastuzumab" es un anticuerpo monoclonal anti-HER2 humanizado que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 449 de SEQ ID NO: 1 (figura 1) y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 214 de SEQ ID NO: 2 (figura 2).
[0369] En la presente invención, la expresión “anticuerpo anti-HER3” se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a HER3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano tipo 3; ErbB-3), y preferiblemente tiene una actividad de internalización en células que expresan HER3 mediante la unión a HER3 en la superficie celular que expresa HER3.
[0370] Los ejemplos del anticuerpo anti-HER3 pueden incluir patritumab (U3-1287), U1-59 (publicación internacional n .º WO 2007/077028), MM-121 (seribantumab), un anticuerpo anti-ERBB3 descrito en la publicación internacional n .º WO 2008/100624, RG-7116 (lumretuzumab) y LJM-716 (elgemtumab), y pueden ejemplificarse preferiblemente y patritumab y U1-59.
[0371] En la presente invención, la expresión “anticuerpo anti-TROP2” se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a TROP2 (TACSTD2: transductor de señal de calcio asociado a tumor 2; EGP-1), y preferiblemente tiene una actividad de internalización en células que expresan TROP2 mediante la unión a TROP2. Los ejemplos del anticuerpo anti-TROP2 pueden incluir hTINA1-H1L1 (publicación internacional n .º WO 2015/098099).
[0372] En la presente invención, la expresión “anticuerpo anti-B7-H3” se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a B7-H3 (antígeno de células B #7 homólogo 3; PD-L3; CD276), y preferiblemente tiene una actividad de internalización en células que expresan B7-H3 mediante la unión a B7-H3.
[0373] Los ejemplos del anticuerpo anti-B7-H3 pueden incluir M30-H1-L4 (publicación internacional n .º WO 2014/057687).
[0374] En la presente invención, la expresión “anticuerpo anti-GPR20” se refiere a un anticuerpo que se une específicamente a GPR20 (receptor acoplado a proteína G 20), y preferiblemente tiene una actividad de internalización en células que expresan GPR20 mediante la unión a GPR20.
[0375] Los ejemplos del anticuerpo anti-GPR20 pueden incluir h046-H4e/L7 (publicación internacional n .º WO 2018/135501).
[0376] Conjugación entre el anticuerpo y el intermedio fármaco-enlazador
[0377] El conjugado anticuerpo-fármaco de la presente invención puede producirse haciendo reaccionar el compuesto representado por la fórmula (1) y un anticuerpo que tiene un grupo tiol (denominado alternativamente grupo sulfhidrilo).
[0378] Los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) de la presente invención se disuelven preferiblemente en un disolvente para preparar una disolución que contiene el compuesto representado por la fórmula (1), que luego puede usarse en la reacción. El disolvente para su uso en esta etapa no está particularmente limitado siempre que no se inhiba la reacción. Preferiblemente, puede usarse un disolvente que contiene dimetilsulfóxido, dimetilformamida, dimetilacetamida o N-metilpirrolidona, y puede usarse más preferiblemente un disolvente que contiene dimetilsulfóxido.
[0379] El anticuerpo que tiene un grupo sulfhidrilo puede obtenerse mediante un método bien conocido en la técnica (Hermanson, G. T, Bioconjugate Techniques, págs.56-136, págs.456-493, Academic Press (1996)). Por ejemplo, usando de 0,3 a 3 equivalentes molares de un agente reductor tal como clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP) por disulfuro intercatenario dentro del anticuerpo y haciendo reaccionar con el anticuerpo en una disolución tampón que contiene un agente quelante tal como ácido etilendiaminatetraacético (EDTA), puede obtenerse un anticuerpo que tiene un grupo sulfhidrilo con disulfuros intercatenarios parcial o completamente reducidos dentro del anticuerpo.
[0380] Además, usando de 2 a 20 equivalentes molares del compuesto representado por la fórmula (1) por anticuerpo que tiene un grupo sulfhidrilo, puede producirse un conjugado anticuerpo-fármaco en el que se conjugan de 2 a 8 moléculas de fármaco por molécula de anticuerpo.
[0381] El número promedio de moléculas de fármaco conjugado por molécula de anticuerpo del conjugado anticuerpofármaco producido puede determinarse, por ejemplo, mediante un método de cálculo basándose en la medición de la absorbancia de UV para el conjugado anticuerpo-fármaco y el precursor de conjugación del mismo a dos longitudes de onda de 280 nm y 370 nm (método de UV), o un método de cálculo basándose en la cuantificación a través de la medición de HPLC para fragmentos obtenidos tratando el conjugado anticuerpo-fármaco con un agente reductor (método de HPLC).
[0382] La conjugación entre el anticuerpo y el intermedio de fármaco-enlazador (compuesto representado por la fórmula (1)) y el cálculo del número promedio de moléculas de fármaco conjugado por molécula de anticuerpo del conjugado anticuerpo-fármaco puede realizarse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2014/057687, publicación internacional n.º WO 2015/098099, publicación internacional n.º WO 2015/115091, publicación internacional n.º WO 2015/155998, y publicación internacional n.º WO 2018/135501, y así sucesivamente.
[0383] En la presente invención, la expresión “conjugado anticuerpo anti-HER2-fármaco” se refiere a un conjugado anticuerpo-fármaco en el que el anticuerpo en el conjugado anticuerpo-fármaco es un anticuerpo anti-HER2. El anticuerpo anti-HER2 es preferiblemente un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 449 de SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 214 de SEQ ID NO: 2, o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 2.
[0384] El número promedio de unidades del conjugado fármaco-enlazador por molécula de anticuerpo en el conjugado anticuerpo anti-HER2-fármaco producido según la presente invención es preferiblemente de 2 a 8, más preferiblemente de 3 a 8, incluso más preferiblemente de 7 a 8, incluso más preferiblemente de 7,5 a 8, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 8.
[0385] El conjugado anticuerpo anti-HER2-fármaco puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2015/115091 y así sucesivamente mediante el uso de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producido mediante el método de producción de la presente invención.
[0386] En la presente invención, la expresión “conjugado anticuerpo anti-HER3-fármaco” se refiere a un conjugado anticuerpo-fármaco en el que el anticuerpo en el conjugado anticuerpo-fármaco es un anticuerpo anti-HER3. El anticuerpo anti-HER3 es preferiblemente un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 3 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4, o una variante del anticuerpo en la que se deleciona un residuo de lisina en el extremo carboxilo de la cadena pesada del anticuerpo.
[0387] El número promedio de unidades del conjugado fármaco-enlazador por molécula de anticuerpo en el conjugado anticuerpo anti-HER3-fármaco producido según la presente invención es preferiblemente de 2 a 8, más preferiblemente de 3 a 8, incluso más preferiblemente de 7 a 8, incluso más preferiblemente de 7,5 a 8, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 8.
[0388] El conjugado anticuerpo anti-HER3-fármaco puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2015/155998 y así sucesivamente mediante el uso de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producido mediante el método de producción de la presente invención.
[0389] En la presente invención, la expresión “conjugado anticuerpo anti-TROP2-fármaco” se refiere a un conjugado anticuerpo-fármaco de modo que el anticuerpo en el conjugado anticuerpo-fármaco es un anticuerpo anti-TROP2. El anticuerpo anti-TROP2 es preferiblemente un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 20 a 470 de SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 21 a 234 de SEQ ID NO: 6, o una variante del anticuerpo en la que se deleciona un residuo de lisina en el extremo carboxilo de la cadena pesada del anticuerpo.
[0390] El número promedio de unidades del conjugado fármaco-enlazador por molécula de anticuerpo en el conjugado anticuerpo anti-TROP2-fármaco producido según la presente invención es preferiblemente de 2 a 8, más preferiblemente de 3 a 5, incluso más preferiblemente de 3,5 a 4,5, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 4.
[0391] El conjugado anticuerpo anti-TROP2-fármaco puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2015/098099 y así sucesivamente mediante el uso de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producido mediante el método de producción de la presente invención.
[0392] En la presente invención, la expresión “conjugado anticuerpo anti-B7-H3-fármaco” se refiere a un conjugado anticuerpo-fármaco de modo que el anticuerpo en el conjugado anticuerpo-fármaco es un anticuerpo anti-B7-H3. El anticuerpo anti-B7-H3 es preferiblemente un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 20 a 471 de SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 21 a 233 de SEQ ID NO: 8, o una variante del anticuerpo en la que se deleciona un residuo de lisina en el extremo carboxilo de la cadena pesada del anticuerpo.
[0393] El número promedio de unidades del conjugado fármaco-enlazador por molécula de anticuerpo en el conjugado anticuerpo anti-B7-H3-fármaco producido según la presente invención es preferiblemente de 2 a 8, más preferiblemente de 3 a 5, incluso más preferiblemente de 3,5 a 4,5, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 4.
[0394] El conjugado anticuerpo anti-B7-H3-fármaco puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2014/057687 y así sucesivamente mediante el uso de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producido mediante el método de producción de la presente invención.
[0395] En la presente invención, la expresión “conjugado anticuerpo anti-GPR20-fármaco” se refiere a un conjugado anticuerpo-fármaco de modo que el anticuerpo en el conjugado anticuerpo-fármaco es un anticuerpo anti-GPR20. El anticuerpo anti-GPR20 es preferiblemente un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 20 a 472 de SEQ ID NO: 9 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 21 a 234 de SEQ ID NO: 10, o una variante del anticuerpo en la que se deleciona un residuo de lisina en el extremo carboxilo de la cadena pesada del anticuerpo.
[0396] El número promedio de unidades del conjugado fármaco-enlazador por molécula de anticuerpo en el conjugado anticuerpo anti-GPR20-fármaco producido según la presente invención es preferiblemente de 2 a 8, más preferiblemente de 3 a 8, incluso más preferiblemente de 7 a 8, incluso más preferiblemente de 7,5 a 8, e incluso más preferiblemente de aproximadamente 8.
[0397] El conjugado anticuerpo anti-GPR20-fármaco puede producirse con referencia a las descripciones en la publicación internacional n .º WO 2018/135501 y así sucesivamente mediante el uso de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producido mediante el método de producción de la presente invención.
[0398] Composiciones farmacéuticas
[0399] El conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede contener al menos un ingrediente farmacéuticamente adecuado y puede administrarse. El ingrediente farmacéuticamente adecuado puede seleccionarse y aplicarse adecuadamente a partir de aditivos de formulación o similares que se usan generalmente en la técnica, según la dosificación, concentración de administración, etc. del conjugado anticuerpofármaco producido mediante la presente invención. Por ejemplo, el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede administrarse como una composición farmacéutica que contiene un tampón tal como un tampón histidina, un excipiente tal como sacarosa o trehalosa, y un tensioactivo tal como polisorbato 80 o polisorbato 20.
[0400] Puede esperarse que la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención ejerza un efecto terapéutico mediante la aplicación como una terapia sistémica a pacientes, y adicionalmente, mediante la aplicación local a tejidos cancerosos.
[0401] La composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede usarse preferiblemente para un mamífero, y puede usarse más preferiblemente para un ser humano.
[0402] La composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede usarse preferiblemente como una inyección, puede usarse más preferiblemente como una inyección acuosa o una inyección liofilizada, e incluso puede usarse más preferiblemente como una inyección liofilizada.
[0403] En el caso de que la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención sea una inyección acuosa, preferiblemente, puede diluirse con un diluyente adecuado y luego administrarse por vía intravenosa mediante infusión por goteo. Los ejemplos del diluyente pueden incluir una disolución de glucosa (preferiblemente una disolución de glucosa al 5 %) y solución salina fisiológica.
[0404] En el caso de que la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención sea una inyección liofilizada, preferiblemente, puede disolverse en agua para inyección, y luego, puede diluirse una cantidad necesaria con un diluyente adecuado y luego administrarse por vía intravenosa mediante infusión por goteo. Los ejemplos del diluyente pueden incluir una disolución de glucosa (preferiblemente una disolución de glucosa al 5 %) y solución salina fisiológica.
[0406] Los ejemplos de vías de administración que pueden usarse para administrar la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención pueden incluir las vías intravenosa, intradérmica, subcutánea, intramuscular e intraperitoneal, y puede ejemplificarse preferiblemente una vía intravenosa.
[0408] El conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede administrarse a un ser humano a intervalos de una vez al día a cada 180 días, preferiblemente puede administrarse a intervalos de una vez a la semana, cada 2 semanas, cada 3 semanas o cada 4 semanas, e incluso más preferiblemente puede administrarse a intervalos de una vez cada 3 semanas. Además, el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede administrarse a una dosificación de aproximadamente 0,001 a 100 mg/kg por dosis, y preferiblemente puede administrarse a una dosificación de 0,8 a 12,4 mg/kg por dosis. En el caso de que el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención sea un conjugado anticuerpo anti-HER2-fármaco, puede administrarse preferiblemente a una dosificación de 5,4, 6,4 ó 7,4 mg/kg por dosis, y más preferiblemente puede administrarse a una dosificación de 5,4 mg/kg o 6,4 mg/kg por dosis.
[0410] La composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede usarse para tratar el cáncer, y puede usarse preferiblemente para tratar al menos un tipo de cáncer seleccionado del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer gástrico (también llamado adenocarcinoma gástrico), cáncer colorrectal (también llamado cáncer de colon y rectal, e incluyendo cáncer de colon y cáncer rectal), cáncer de pulmón (incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas y cáncer de pulmón de células no pequeñas), cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, adenocarcinoma de unión esofagogástrica, cáncer de conductos biliares, enfermedad de Paget, cáncer del páncreas, cáncer de ovario, carcinosarcoma uterina, cáncer urotelial, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, tumor del estroma gastrointestinal, tumor del estroma digestivo, cáncer de cuello uterino, carcinoma de células escamosas, cáncer peritoneal, cáncer de hígado, cáncer hepatocelular, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer endometrial, cáncer uterino, cáncer de riñón, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, cáncer de pene, leucemia, linfoma maligno, plasmacitoma, mieloma, tumor de tejido neuroepitelial, tumor de vaina nerviosa, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, cáncer de faringe, cáncer de vesícula biliar, cáncer de conductos biliares, mesotelioma y sarcoma, y en el caso de que el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención sea un conjugado anticuerpo anti-HER2-fármaco, por ejemplo, puede usarse más preferiblemente para tratar al menos un tipo de cáncer seleccionado del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, adenocarcinoma de unión esofagogástrica, cáncer de conductos biliares, enfermedad de Paget, cáncer de páncreas, cáncer de ovario y carcinosarcoma uterino, y puede usarse incluso más preferiblemente para tratar al menos un tipo de cáncer seleccionado del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, adenocarcinoma de unión esofagogástrica, cáncer de conductos biliares y enfermedad de Paget, y puede usarse incluso más preferiblemente para tratar cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer colorrectal o cáncer de pulmón de células no pequeñas.
[0412] La composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede usarse selectivamente como agente para la terapia con fármacos, que es un método principal para tratar el cáncer y, como resultado, puede retrasar el desarrollo de células cancerosas, inhibir el crecimiento de las mismas y destruir adicionalmente las células cancerosas. Estos efectos pueden permitir que los pacientes con cáncer estén libres de síntomas causados por el cáncer o lograr una mejora en la calidad de vida de los pacientes con cáncer y lograr un efecto terapéutico al mantener la vida de los pacientes con cáncer. Incluso si la composición farmacéutica y el método terapéutico de la presente invención no logran destruir las células cancerosas, pueden lograr una mayor calidad de vida de los pacientes con cáncer mientras se logra una supervivencia a más largo plazo, al inhibir o controlar el crecimiento de las células cancerosas.
[0414] En dicha terapia farmacológica, la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede usarse como agente solo y, además, puede usarse en combinación con una terapia adicional en terapia adyuvante y puede combinarse con cirugía, radioterapia, terapia hormonal o similares. Además, también puede usarse como un agente para terapia farmacológica en terapia neoadyuvante.
[0416] Además del uso terapéutico tal como se describió anteriormente, por ejemplo, también puede esperarse un efecto profiláctico tal como supresión del crecimiento de células cancerosas metastásicas pequeñas y adicionalmente su destrucción para la composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención. Por ejemplo, puede esperarse un efecto de inhibición y destrucción de células cancerosas en un fluido corporal en el curso de la metástasis o un efecto de, por ejemplo, inhibición y destrucción de células cancerosas pequeñas inmediatamente después de la implantación en cualquier tejido. Por consiguiente, puede esperarse la inhibición de la metástasis del cáncer o un efecto profiláctico, particularmente, después de la extirpación quirúrgica del cáncer.
[0417] La composición farmacéutica que contiene el conjugado anticuerpo-fármaco producido mediante la presente invención puede administrarse en combinación con otros agentes para el tratamiento del cáncer. El efecto anticancerígeno puede potenciarse en consecuencia. Los ejemplos de otros agentes para el tratamiento del cáncer usados para tal fin pueden incluir 5-fluorouracilo (5-FU), pertuzumab, trastuzumab, paclitaxel, carboplatino, cisplatino, gemcitabina, capecitabina, irinotecán (CPT-11), docetaxel, pemetrexed, sorafenib, vinblastina, vinorelbina, everolims, tanespimicina, bevacizumab, oxaliplatino, lapatinib, trastuzumab emtansina (T-DM1) o agentes descritos en la publicación internacional n.º WO 2003/038043, análogos de LH-RH (leuprorelina, goserelina o similares), fosfato de estramustina, antagonistas de estrógeno (tamoxifeno, raloxifeno o similares) e inhibidores de aromatasa (anastrozol, letrozol, exemestano o similares), pero no se limitan siempre que sean agentes que tengan una actividad antitumoral.
[0418] Ejemplos
[0419] A continuación se describe la presente invención en más detalle a modo de ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a estos.
[0420] En los ejemplos, los términos “<1>H-RMN” y “<13>C-RMN” significan “espectro de resonancia magnética nuclear”. Entre paréntesis, CDCl<3>significa cloroformo deuterado que es un disolvente de medición, DMSO-d<6>significa dimetilsulfóxido deuterado que es un disolvente de medición, D<2>O significa óxido de deuterio que es un disolvente de medición, y MeOH-d<4>significa metanol deuterado que es un disolvente de medición. Se usó TMS (tetrametilsilano) como patrón interno. Los significados de multiplicidad en<1>H-RMN son s = singlete, d = doblete, t = triplete, q = cuarteto, m = multiplete y s a = singlete ancho.
[0421] Ejemplo 1
[0422] 2,5-Dioxopirrolidin-1-il N-[(benciloxi)carbonil]glicilglicinato
[0425]
[0427] A una mezcla de N-[(benciloxi)carbonil]glicilglicina (200,00 g, 0,751 mol) y acetonitrilo (2,0 l), se le añadieron N-hidroxisuccinimida (95,10 g, 0,826 mol) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (172,80 g, 0,901 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 4 horas. La disolución de reacción se enfrió hasta 1 °C y se agitó durante aproximadamente 3 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con acetonitrilo (400 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener 2,5-dioxopirrolidin-1-il N-[(benciloxi)carbonil]glicilglicinato (221,6 g, 0,610 mol, rendimiento: 81,2 %).
[0428] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 2,81 (4H, s), δ 3,69 (2H, d, 6,7 Hz), δ 4,28 (2H, d, 6,1 Hz), δ 5,04 (2H, s), δ 7,29-7,39 (5H, m), δ 7,56 (1H, t, 6,4 Hz), δ 8,55 (1H, t, 5,8 Hz).
[0430] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 25,4, 38,2, 43,3, 65,6, 127,7, 127,8, 128,3, 137,0, 156,5, 166,3, 170,0, 170,0. EM (IEN) (m/z): 364 ([M+H]<+>).
[0431] Ejemplo 2
[0432] N-[(Benciloxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanina
[0434]
[0435]
[0437] A una mezcla de L-fenilalanina (80,0 g, 0,487 mol), acetonitrilo (400 ml), y agua (400 ml), se le añadieron trietilamina (74,7 ml, 0,536 mol) y N-[(benciloxi)carbonil]glicilglicinato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il (212,4 g, 0,585 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas. Se añadieron agua (800 ml) y ácido clorhídrico concentrado (40,6 ml) a la disolución de reacción, luego se añadió N-[(benciloxi)carbonil] glicilglicil-L-fenilalanina (80 mg), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 6 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con agua (160 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener N-[(benciloxi)carbonil] glicilglicil-L-fenilalanina (157,2 g, 0,380 mol, rendimiento: 78,0 %).
[0438] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 2,86-2,91 (1H, m), δ 3,03-3,08 (1H, m), δ 3,64-3,78 (4H, m), δ 4,41-4,47 (1H, m), δ 5,04 (2H, s), δ 7,18-7,40 (10H, m), δ 7,50 (1H, t, 6,1 Hz), δ 8,05 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,17 (1H, d, 7,9 Hz), δ 12,77 (1H, s).
[0439] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 36,8, 41,6, 43,5, 53,5, 65,5, 126,5, 127,7, 127,8, 128,2, 128,3, 129,1, 137,0, 137,4, 156,5, 168,6, 169,3, 172,7.
[0440] EM (IEN) (m/z): 412 ([M-H]-).
[0441] Ejemplo 3
[0442] Acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo
[0445]
[0447] A N-[(9H-fluoren-ilmetoxi)carbonil]glicilglicina (650,0 g, 1,834 mol), se le añadieron tetrahidrofurano (9,75 l) y ácido acético (1,95 l), y se disolvió la mezcla resultante calentando a 40 °C. Se añadió tetraacetato de plomo (1301,3 g, 2,935 mol) a la misma, y se calentó la mezcla resultante a reflujo durante aproximadamente 1,5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la materia insoluble se retiró por filtración, después la materia insoluble separada por filtración se lavó con acetato de etilo (3,25 l) y los lavados se combinaron con el filtrado. Se añadió una disolución acuosa de citrato de trisodio dihidratado al 20 % (p/v) (3,25 l) a la disolución obtenida, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. La fase orgánica obtenida se lavó dos veces con una disolución acuosa de citrato de trisodio dihidratado al 20 % (p/v) (3,25 l) y luego, la fase orgánica se concentró hasta 6,5 l a presión reducida. Se añadió agua (1,95 l) al residuo, luego se añadió acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo (0,65 g), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. Se añadió agua (6,5 l) gota a gota a la misma, y se enfrió la mezcla resultante hasta de 0 a 5°C y se agitó durante aproximadamente 3 horas. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por filtración se lavó con una disolución acuosa de tetrahidrofurano al 30 % (v/v) fría (2,6 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo (617,1 g, 1,675 mol, rendimiento: 91,3 %).
[0448] <1>H-RMN (400 MHz, CDCl<3>) δ 2,06 (3H, s), δ 3,90 (2H, d, 4,9 Hz), δ 4,23 (1H, t, 6,7 Hz), δ 4,45 (2H, d, 6,7 Hz), δ 5,25 (2H, d, 7,3 Hz), δ 5,39 (1H, s a), δ 7,05 (1H, s a), δ 7,30-7,34 (2H, m), δ 7,41 (2H, t, 7,3 Hz), δ 7,59 (2H, d, 7,3 Hz), δ 7,77 (2H, d, 7,3 Hz).
[0449] <13>C-RMN (100 MHz, CDCl<3>) δ 20,8, 44,4, 47,0, 63,9, 67,2, 120,0, 125,0, 127,1, 127,7, 141,3, 143,6, 156,6, 169,8, 171,7.
[0451] EM (IEN) (m/z): 369 ([M+H]<+>).
[0453] Ejemplo 4
[0455] [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo
[0458]
[0461] A una mezcla de acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo (610,0 g, 1,656 mol) y 1,2-dimetoxietano (9,15 l), se le añadió glicolato de bencilo (470 ml, 3,312 mol), y se enfrió la mezcla resultante hasta de 0 a 5 °C. Se añadió una disolución de hidróxido de sodio 10 mol/l (162,6 ml, 1,626 mol) a la misma, y se agitó la mezcla resultante durante aproximadamente 1 hora. Se añadió ácido acético (47,4 mL) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a 1 °C durante aproximadamente 1 hora. Luego, se añadió agua (2,0 l) gota a gota a la misma, luego se añadió [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (0,61 g), y se agitó la mezcla resultante a de 0 a 5 °C durante aproximadamente 1 hora. Se añadió agua (4,7 l) gota a gota a la misma, y se agitó la mezcla resultante a de 0 a 5 °C durante aproximadamente 2,5 horas. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por filtración se lavó con una disolución acuosa de 1,2-dimetoxietano al 50 % (v/v) fría (2,44 l). Al polvo húmedo obtenido, se le añadió 1,2-dimetoxietano (9,15 l) y se disolvió la mezcla resultante agitando a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. Se añadió agua (3,66 l) a la misma, luego se añadió [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (0,61 g), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. Se añadió agua (3,05 l) gota a gota a la misma, y se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de enfriar hasta de 0 a 5 °C y agitar durante aproximadamente 1 hora, se filtraron los precipitados, y un polvo separado por filtración se lavó con una disolución acuosa de 1,2-dimetoxietano al 50 % (v/v) fría (2,44 l). Al polvo húmedo obtenido, se le añadió 1,2-dimetoxietano (9,0 l) y se disolvió la mezcla resultante agitando a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. Se añadió agua (3,6 l) a la misma, luego se añadió [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (0,01 g), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. Se añadió agua (3,0 l) gota a gota a la misma y, se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de enfriar hasta de 0 a 5 °C y agitar durante aproximadamente 1 hora, se filtraron los precipitados, y un polvo separado por filtración se lavó con una disolución acuosa de 1,2-dimetoxietano al 50 % (v/v) fría (2,4 l). Al polvo húmedo obtenido, se le añadió 1,2-dimetoxietano (9,0 l) y se disolvió la mezcla resultante agitando a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 minutos. Se añadió agua (3,6 l) a la misma, luego se añadió [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (0,15 g), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas. Se añadió agua (3,0 l) gota a gota a la misma y, se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de enfriar hasta de 0 a 5 °C y agitar durante aproximadamente 2 horas, se filtraron los precipitados, y un polvo separado por filtración se lavó con una disolución acuosa de 1,2-dimetoxietano al 50 % (v/v) fría (2,4 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo bruto. Al [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo bruto obtenido se le añadió tolueno (12 l) y se disolvió la mezcla resultante calentando a 70 °C. Después de enfriar hasta de 0 a 5 °C y agitar durante aproximadamente 2 horas, se filtraron los precipitados y un polvo separado por filtración se lavó con tolueno frío (2,4 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (575,5 g, 1,213 mol, rendimiento: 73,2 %).
[0463] <1>H-RMN (400 MHz, CDCl<3>) δ 3,82 (2H, d, 4,9 Hz), δ 4,19-4,22 (3H, m), δ 4,45 (2H, d, 6,7 Hz), δ 4,83 (2H, d, 6,7 Hz), δ 5,15 (2H, s), δ 5,34 (1H, s a), δ 6,95 (1H, s a), δ 7,29-7,37 (7H, m), δ 7,40 (2H, t, 7,3 Hz), δ 7,58 (2H, d, 7,3 Hz), δ 7,76 (2H, d, 7,9 Hz).
[0465] <13>C-RMN (100 MHz, CDCl<3>) δ 44,5, 47,1, 66,6, 66,8, 67,1, 70,6, 120,0, 124,9, 127,1, 127,8, 128,4, 128,5, 128,6, 135,2, 141,3, 143,6, 170,2, 170,2, 170,4.
[0467] EM (IEN) (m/z): 475 ([M+H]<+>).
[0468] Ejemplo 5
[0469] Glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida
[0472]
[0474] A una mezcla de [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (340,0 g, 0,717 mol) y acetonitrilo (10,2 l), se le añadió 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (53,6 mL, 0,358 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas. Después de enfriar hasta de 0 a 5 °C, se añadieron 1-hidroxibenzotriazol monohidratado (132,0 g, 0,862 mol) y N-[(benciloxi)carbonil] glicilglicil-L-fenilalanina (311,0 g, 0,752 mol) a la misma, luego se añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (158,0 g, 0,824 mol) en porciones divididas, y se agitó la mezcla resultante a de 0 a 5 °C durante aproximadamente 1 hora. Se añadió una disolución tampón de fosfato al 10 % (p/v) (pH 3, 3,4 l) a la misma, y se calentó la mezcla resultante a temperatura ambiente. Después de la separación en fases orgánica y acuosa y la eliminación de la fase acuosa, se concentró la fase orgánica hasta 3,7 l a presión reducida. Se añadieron acetato de etilo (3,4 l) y agua (1,7 l) al residuo, y se separó la mezcla resultante en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió a la misma una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 10 % (p/v) (3,4 l), y se separó la mezcla resultante en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió a la misma una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 10 % (p/v) (3,4 l), y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió agua (3,4 l) a la misma, y se agitó la mezcla resultante. Después de la separación en fases orgánica y acuosa y la eliminación de la fase acuosa, se concentró la fase orgánica hasta 1,5 l a presión reducida. Se añadió 2-metoxietanol (3,74 l) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 3,06 l a presión reducida. Se transfirió el residuo a un autoclave de 20 l, luego se añadieron al mismo tetrahidrofurano (1,36 l), agua (3,4 l) y paladio sobre carbono al 5 % (72,6 g, contenido de agua: 53,2 %), y la atmósfera se intercambió por hidrógeno. Después de agitar a temperatura ambiente durante aproximadamente 19 horas, la atmósfera se intercambió por nitrógeno, luego se añadió agua (360 mL) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. Se separó el paladio sobre carbono por filtración, luego se lavó el paladio sobre carbono con agua (1,36 l) y se combinaron los lavados con el filtrado. Se añadieron acetato de etilo (0,85 l) y n-heptano (2,55 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica se retiró y se concentró hasta a 1,6 L a presión reducida. Se añadieron agua (221 ml) y 2-metoxietanol (126 ml) al residuo, luego se añadió glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (0,34 g), y se calentó la mezcla resultante a 40 °C y se agitó durante aproximadamente 19 horas. Se añadió etanol (3,4 l) gota a gota a la misma y, se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 horas. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con etanol (1,02 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (243,7 g, 0,576 mol, rendimiento: 80,3 %).
[0476] <1>H-RMN (400 MHz, D<2>O) δ 3,03-3,20 (2H, m), δ 3,79-3,96 (6H, m), δ 3,97 (2H, s), δ 4,64 (1H, t, 7,9 Hz), δ 4,67-4,75 (2H, m), δ 7,29-7,42 (5H, m).
[0478] <13>C-RMN (100 MHz, D<2>O) δ 37,3, 41,0, 42,7, 43,2, 56,0, 67,3, 70,0, 127,8, 129,4, 129,8, 136,9, 168,4, 171,7, 172,9, 174,4, 178,1.
[0479] EM (IEN) (m/z): 422 ([M-H]-).
[0480] Ejemplo 6
[0481] [(Glicilamino)metoxi]acetato de bencilo 1H-benzotriazol-1-ol
[0483]
[0484]
[0486] A una mezcla de [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (50,00 g, 105,4 mmol) y acetonitrilo (1,5 l), se le añadió 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (8,02 g, 52,7 mmol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 4 horas. Se añadió 1-hidroxibenzotriazol monohidratado (35,51 g, 231,9 mmol) a la misma en porciones divididas a temperatura ambiente, y se agitó la mezcla resultante durante aproximadamente 30 minutos. La disolución de reacción se enfrió hasta 1 °C y se agitó durante aproximadamente 11 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con acetonitrilo (250 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener [(glicilamino)metoxi]acetato de bencilo 1H-benzotriazol-1-ol (38,98 g, 100,6 mol, rendimiento: 95,4 %).
[0488] <1>H-RMN (500 MHz, MeOH-d4) δ 3,63-3,68 (2H, s a), δ 4,19-4,23 (2H, s a), δ 4,79 (2H, s), δ 5,16-5,20 (2H, s a), δ 7,25-7,38 (7H, m), δ 7,64-7,72 (2H, dd, 17,3 Hz, 7,8 Hz).<13>C-RMN (125 MHz, MeOH-d<4>) δ 41,9, 66,3, 67,6, 71,0, 112,3, 118,7, 125,24, 125,27, 128,8, 129,25, 129,30, 129,5, 136,9, 144,4, 169,5, 171,8.
[0489] Ejemplo 7
[0490] N-[(Benciloxi)carboxil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-{[2-(benciloxi)-2-oxoetoxi]metil}glicinamida
[0493]
[0495] A una mezcla de N-[(benciloxi)carbonil] glicilglicil-L-fenilalanina (10,99 g, 26,58 mmol), acetonitrilo (120 ml) y agua (20 ml), se le añadió [(glicilamino)metoxi]acetato de bencilo 1H-benzotriazol-1-ol (10,00 g, 25,81 mmol), y se enfrió la mezcla resultante hasta 2 °C. Se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (5,70 g, 29,73 mmol), y se agitó la mezcla resultante a de 0 a 5 °C durante aproximadamente 3,5 horas. Se añadieron etanol (100 ml) y agua (150 ml) a la disolución de reacción, y se agitó la disolución resultante a temperatura ambiente durante 14 horas. Se añadió agua (130 ml) a la misma en porciones divididas, y se agitó la mezcla resultante durante 2 horas, luego se enfrió hasta 1 °C, y se agitó durante aproximadamente 1 hora. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con acetonitrilo:agua = 1:2 (60 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener N-[ (benciloxi)carboxil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-{[2-(benciloxi)-2-oxoetoxi]metil}glicinamida (15,34 g, 23,68 mmol, rendimiento: 91,7 %).
[0497] <1>H-RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 2,79 (1H, dd, 14 Hz, 9,2 Hz), δ 3,06 (1H, dd, 14 Hz, 4,5 Hz), δ 3,55-3,80 (6H, m), δ 4,15 (2H, s), δ 4,51 (1H, ddd, Hz, 9,2 Hz, 8,6 Hz, 4,5 Hz), δ 4,63 (2H, d, 6,5 Hz), δ 5,03 (2H, s), δ 5,15 (2H, s), δ 7,15-7,40 (15H, m), δ 7,15-7,40 (15H, m), δ 7,50 (1H, t, 6 Hz), δ 8,02 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,15 (1H, d, 8,6 Hz), δ 8,33 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,60 (1H, t, 7 Hz)
[0499] <13>C-RMN (125 MHz, DMSO-d<6>) δ 37,4, 41,9, 42,2, 43,6, 54,2, 64,5, 65,6, 65,7, 69,1, 126,3, 127,77, 127,85, 128,10, 128,14, 128,2, 128,4, 128,5, 129,2, 135,8, 137,0, 137,9, 156,6, 168,9, 169,5, 169,9, 170,2, 171,5.
[0500] Ejemplo 8
[0501] Glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida
[0503]
[0504]
[0506] A una mezcla de N-[(benciloxi)carboxil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-{[2-(benciloxi)-2-oxoetoxi]metil}glicinamida (15,0 g, 23,16 mmol), tetrahidrofurano (315 ml) y agua (210 ml), se le añadió paladio sobre carbono al 5 % (3,31 g, contenido de agua: 54,7 %) y la atmósfera se intercambió por hidrógeno. Después de agitar a temperatura ambiente durante aproximadamente 2,5 horas, la atmósfera se intercambió por nitrógeno. Se separó el paladio sobre carbono por filtración, luego se lavó el paladio sobre carbono con agua (60 Ml) y se combinaron los lavados con el filtrado. Se concentró el filtrado resultante hasta 240 ml a presión reducida. Se añadió etanol (150 ml) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 180 ml a presión reducida. Se añadió etanol (150 ml) al residuo, y se concentró la mezcla resultante a 135 ml a presión reducida. Se añadió etanol (150 ml) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 90 ml a presión reducida. Se añadió etanol (300 ml) al residuo, y se agitó la disolución resultante durante 17 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con etanol (75 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (8,95 g, 21,14 mmol, rendimiento: 91,3 %).
[0508] <1>H-RMN (400 MHz, D<2>O) δ 3,03-3,20 (2H, m), δ 3,79-3,96 (6H, m), δ 3,97 (2H, s), δ 4,64 (1H, t, 7,9 Hz), δ 4,67-4,75 (2H, m), δ 7,29-7,42 (5H, m).
[0510] <13>C-RMN (100 MHz, D<2>O) δ 37,3, 41,0, 42,7, 43,2, 56,0, 67,3, 70,0, 127,8, 129,4, 129,8, 136,9, 168,4, 171,7, 172,9, 174,4, 178,1.
[0511] EM (IEN) (m/z): 422 ([M-H]-).
[0512] Ejemplo 9
[0513] Ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico
[0516]
[0518] A una disolución de ácido 6-aminohexanoico (2,5 kg, 19,1 mol) en ácido acético (10 l), se le añadió gota a gota una disolución de anhídrido maleico (1,87 kg, 19,1 mol) en ácido acético (10 l) a de 25 a 30 °C durante 1 hora, y se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 2 horas. A la suspensión obtenida, se le añadió gota a gota ácido sulfúrico (0,93 kg, 9,55 mol), y se calentó la mezcla resultante a 100 °C y luego se agitó durante 16 horas. La disolución de reacción se enfrió hasta 30 °C y luego se concentró hasta 7,0 l a presión reducida. El concentrado obtenido (aproximadamente 7,0 l) se añadió gota a gota a agua fría (20 l) de 0 a 5 °C durante 1 hora en condiciones de agitación, y se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 1 hora. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con agua fría (5,0 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico (1,46 kg, 6,95 mol, rendimiento: 36,4 %).
[0519] El ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico obtenido (1,40 kg, 6,66 mol) se disolvió en una disolución mixta de ácido acético (2,1 l) y agua purificada (1,4 l) a de 25 a 30 °C. A la disolución, se le añadió agua purificada (0,7 l) y luego se enfrió la mezcla resultante hasta de 20 a 25 °C y luego se agitó durante 2 horas. A la suspensión obtenida, se le añadió agua purificada (7,0 l) gota a gota durante 1 hora, y se enfrió la mezcla resultante hasta de 0 a 5 °C y después se agitó durante 1 hora. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con agua fría (2,1 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico (1,27 kg, 6,02 mol, rendimiento: 90,4 %).
[0521] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,18-1,24 (2H, m), δ 1,45-1,52 (4H, m), δ 2,18 (2H, t, 7,5 Hz), δ 3,38 (2H, t, 7,5 Hz), δ 7,01 (2H, s), δ 11,98 (1H, s).
[0522] Ejemplo 10
[0523] 1-{6-[(2,5-Dioxopirrolidin-1-il)oxi]-6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona
[0526]
[0528] A una mezcla de ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico (5,0 g, 23,6 mmol), N-hidroxisuccinimida (3,0 g, 26,0 mmol) y acetonitrilo (50 ml), se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (5,45 g, 28,4 mmol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 3,5 horas. Se añadieron agua (100 ml) y tolueno (100 ml) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. La fase orgánica se lavó dos veces con agua (50 ml) y la fase orgánica se concentró hasta 25 ml a presión reducida. Se cargó un cartucho de gel de sílice (KP-sil 10 g) con el residuo, luego se pasó tolueno:acetona = 9:1 (100 ml) a través del mismo, y se recuperó un eluato y se concentró hasta 25 ml a presión reducida. Se añadió 1-butanol (50 ml) al residuo, luego se añadió 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi] -6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (10 mg), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió 1-butanol (50 ml) gota a gota a la misma, y se enfrió la mezcla resultante hasta -10 °C y se agitó. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con 1-butanol frío (20 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi] -6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (6,52 g, 21,1 mmol, rendimiento: 89,4 %).
[0530] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,27-1,35 (2H, m), δ 1,48-1,56 (2H, m), δ 1,59-1,67 (2H, m), δ 2,65 (2H, t, 7,3 Hz), δ 2,81 (4H, s), δ 3,39 (2H, t, 7,0 Hz), δ 7,00 (2H, s).
[0532] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 23,7, 25,1, 25,4, 27,4, 30,0, 36,8, 134,4, 168,9, 170,2, 171,1.
[0533] EM (IEN) (m/z): 309 ([M+H]<+>).
[0534] Ejemplo 11
[0535] 1-{6-[(2,5-Dioxopirrolidin-1-il)oxi]-6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona
[0538]
[0540] Se enfrió hasta -15 °C una disolución mixta de ácido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico (1,1 kg, 5,21 mol), N-hidroxisuccinimida (0,72 kg, 6,25 mol) y acetonitrilo (11 l). Se añadió 2,6-lutidina (1,34 kg, 12,50 mol) a la misma, y luego, se añadió cloruro de tionilo (0,74 kg, 6,25 mol) gota a gota a de -15 °C a -10 °C durante 1 hora. Se añadieron agua (11 l) y tolueno (11 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. La fase orgánica se lavó dos veces con agua fría (11 l) de 0 a 5 °C y se lavó con solución salina al 20 % (11 l) de 0 a 5 °C, y la fase orgánica se concentró hasta 5,5 l a presión reducida. Luego, se añadió tolueno (5,5 l) al residuo, y se concentró de nuevo la mezcla resultante a 5,5 l a presión reducida. Se rellenó un embudo con gel de sílice neutro (gel de sílice 60 N, 3,3 kg) humedecido con tolueno, luego se pasó el concentrado a través del mismo y se lavó el embudo con tolueno:acetona = 9:1 (29 l) para obtener un filtrado. Se concentró el filtrado obtenido hasta 5,5 l a presión reducida, luego se añadió 1-butanol (8,8 l) al residuo, y luego se agitó la mezcla resultante a de 20 a 25 °C durante 16 horas. Se añadió 1-butanol (13,2 l) gota a gota a la misma, y se enfrió la mezcla resultante hasta -15 °C y se agitó durante 1 hora. Los precipitados se filtraron, y un polvo separado por la filtración se lavó con 1-butanol frío (4,4 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi] -6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (1,45 kg, 4,72 mol, rendimiento: 90,5 %).
[0541] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,27-1,35 (2H, m), δ 1,48-1,56 (2H, m), δ 1,59-1,67 (2H, m), δ 2,65 (2H, t, 7,3 Hz), δ 2,81 (4H, s), δ 3,39 (2H, t, 7,0 Hz), δ 7,00 (2H, s).
[0543] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 23,7, 25,1, 25,4, 27,4, 30,0, 36,8, 134,4, 168,9, 170,2, 171,1.
[0544] EM (IEN) (m/z): 309 ([M+H]<+>).
[0545] Ejemplo 12
[0546] N-[6-(2,5-Dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida
[0549]
[0551] A una disolución de 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi] -6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (291,3 g, 0,945 mol) en acetonitrilo (1,8 l), se le añadieron glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (200,0 g, 0,472 mol), agua (4,2 l) y N,N-diisopropiletilamina (48,8 g, 0,378 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 9 horas. Se añadieron acetato de isopropilo (2,0 l), dihidrogenofosfato de sodio anhidro (400,0 g) e hidrogenofosfato de disodio anhidro (26,0 g) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase orgánica. Se añadieron tetrahidrofurano (1,0 l), acetato de etilo (1,0 l) y dihidrogenofosfato de sodio anhidro (160,0 g) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió una disolución tampón de fosfato al 10 % (p/v) (pH 3,4, 0,6 l) a la misma, y se agitó la mezcla resultante. Después de la separación en fases orgánica y acuosa y la eliminación de la fase acuosa, se concentró la fase orgánica hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (4,0 l) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadieron 1,2-dimetoxietano (4,0 l) y acetonitrilo (0,4 l) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió acetonitrilo (20 ml) al residuo, y se midió el contenido de agua de la disolución y, en consecuencia, fue del 6,1 % (correspondiente a 18,8 ml de agua). Se añadió agua (19 mL) a la misma, luego se añadió N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (0,2 g), luego se añadió 1,2-dimetoxietano (0,8 l) gota a gota, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas. Se añadió 1,2-dimetoxietano (3,2 l) gota a gota a la misma, y se concentró la mezcla resultante hasta 4,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (1,0 l) al residuo, y se enfrió la mezcla resultante hasta de 0 a 5 °C y se agitó durante aproximadamente 19,5 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con 1,2-dimetoxietano (0,8 l). El polvo obtenido se secó a presión reducida a 40 °C para obtener N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (268,3 g, 0,435 mol, rendimiento: 92,1 %).
[0553] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,15-1,23 (2H, m), δ 1,43-1,52 (4H, m), δ 2,11 (2H, t, 7,3 Hz), δ 2,78-2,84 (1H, m), δ 3,04-3,09 (1H, m), δ 3,37 (2H, t, 7,0 Hz) δ 3,61-3,79 (6H, m), δ 3,94 (2H, s), δ 4,47-4,52 (1H, m), δ 4,61 (2H, d, 6,7 Hz), δ 6,99 (2H, s), δ 7,15-7,27 (5H, m), δ 8,11-8,15 (2H, m), δ 8,22 (1H, d, 8,5 Hz), δ 8,31 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,63 (1H, t, 6,4 Hz).
[0555] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 24,6, 25,8, 27,8, 34,9, 37,0, 37,2, 41,9, 42,1, 42,1, 54,2, 65,1, 69,2, 126,2, 128,1, 129,1, 134,4, 137,9, 168,9, 169,5, 169,8, 171,1, 171,4, 171,9, 172,6.
[0556] EM (IEN) (m/z): 615 ([M-H]-).
[0557] Ejemplo 13
[0558] Aducto de 1,2-dimetoxietano de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida
[0559]
[0562] A una disolución de 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi] -6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (72,8 g, 0,236 mol) en acetonitrilo (450,0 ml), se le añadieron glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (50,0 g, 0,118 mol), agua (1050,0 ml) y N,N-diisopropiletilamina (16,5 ml, 0,095 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 horas. Se añadieron acetato de isopropilo (500,0 ml), dihidrogenofosfato de sodio anhidro (100,0 g) e hidrogenofosfato de disodio anhidro (6,5 g) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase orgánica. Se añadió acetato de isopropilo (500,0 ml) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase orgánica. Se añadieron 1,2-dimetoxietano (250,0 ml), acetato de etilo (250,0 ml), acetonitrilo (25,0 ml) y dihidrogenofosfato de sodio anhidro (400,0 g) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadieron acetonitrilo (750,0 ml), agua (113,0 ml), cloruro de sodio (30,0 g), dihidrogenofosfato de sodio anhidro (7,5 g) y ácido fosfórico (85 %, 1,5 g, 0,012 mol) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadieron agua (113,0 ml), cloruro de sodio (30,0 g) y dihidrogenofosfato de sodio anhidro (7,5 g) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadieron agua (113 ml), cloruro de sodio (30,0 g) y dihidrogenofosfato de sodio anhidro (7,5 g) a la misma, y se agitó la mezcla resultante. Después de la separación en fases orgánica y acuosa y la eliminación de la fase acuosa, se concentró la fase orgánica hasta 500,0 ml a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (750,0 ml) al residuo y, a continuación, se concentró la mezcla resultante hasta 500,0 ml a presión reducida. Se midió el contenido de agua de la disolución y, en consecuencia, fue del 6,9 % (correspondiente a 31,3 g de agua). Se añadieron agua (9,5 ml) y 1,2-dimetoxietano (1,0 l) a la misma y, luego se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 13 horas. Se añadió 1,2-dimetoxietano (250,0 mL) gota a gota a la misma, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 5 horas y luego se concentró hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (1,0 l) gota a gota al residuo, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora y luego se concentró hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (250,0 ml) gota a gota al residuo, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas. Luego, los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con 1,2-dimetoxietano (250,0 l). Al polvo húmedo obtenido, se le añadieron 1,2-dimetoxietano (2,0 l) y agua (65,0 mL), y se calentó la mezcla resultante a 45 °C. Después de agitar durante 30 minutos, se separó el cloruro de sodio por filtración, luego se lavó el cloruro de sodio con 1,2-dimetoxietano/agua (97/3, 150 mL), y se combinaron los lavados con el filtrado. Se concentró la mezcla resultante hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (1,0 l) al residuo, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 horas y luego se concentró hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (1,0 l) gota a gota al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 1,0 l a presión reducida. Se añadió 1,2-dimetoxietano (250,0 ml) gota a gota al residuo, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas. Luego, los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con 1,2-dimetoxietano (250 ml). El polvo obtenido se secó a presión reducida (4 kPa) a 25 °C para obtener un aducto de 1,2-dimetoxietano de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (65,7 g, 0,107 mol, rendimiento: 90,3 %) en forma de cristales.
[0564] <1>H-RMN (500 MHz, DMSO-d<6>) δ 1,16-1,23 (2H, m), δ 1,44-1,52 (4H, m), δ 2,11 (2H, t, 7,5 Hz), δ 2,79-2,84 (1H, m), δ 3,05-3,09 (1H, m), δ 3,24 (6H, s), δ 3,37 (2H, t, 7,3 Hz), δ 3,43 (4H, s), δ 3,56-3,78 (6H, m), δ 3,99 (2H, s), δ 4,48-4,52 (1H, m), δ 4,61 (2H, d, 6,5 Hz), δ 7,00 (2H, s), δ 7,16-7,27 (5H, m), δ 8,02-8,10 (2H, m), δ 8,15 (1H, d, 8,0 Hz), δ 8,32 (1H, t, 6,0 Hz), δ 8,58 (1H, t, 6,8 Hz),δ 12,61 (1H, s a)
[0566] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 25,5, 26,8, 28,7, 35,9, 37,9, 38,2, 42,8, 43,0, 43,1, 55,1, 59,0, 65,2, 69,8, 72,0, 127,2, 129,0, 130,1, 135,4, 138,8, 169,8, 170,4, 170,9, 172,0, 172,3, 172,4, 173,6.
[0568] EM (IEN) (m/z): 615 ([M-H]-).
[0570] Difracción de rayos X en polvo:
[0572] Se sometieron los cristales del compuesto del título a difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα. Los resultados se muestran en la tabla 1 y la figura 3. Se observaron los picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0° y 25,0°.
[0573] Tabla 1
[0575] Ángulo de difracción 2θ (°) Espaciado interplanar d (Å) Intensidad relativa (%)
[0577] 7,0 12,6 32,0
[0578] 12,4 7,1 40,9
[0579] 19,0 4,7 82,9
[0580] 25,0 3,6 100,0
[0581] 25,2 3,5 59,5
[0583] Ejemplo 14
[0585] N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0588]
[0591] A una suspensión de metanosulfonato de (1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-aminio dihidratado (cantidad bruta: 154,6 g, contenido interno después de la corrección con un valor de contenido de agua de 2,95 %: 150,0 g, 0,282 mol) en tetrahidrofurano (1,8 l), se le añadieron una disolución acuosa de sulfato de sodio al 5 % (p/v) (1,5 l) y N-metilmorfolina (28,5 g, 0,282 mol), y se agitó la mezcla resultante a 32 °C durante aproximadamente 1 hora. Se añadieron ciano(hidroxiimino)acetato de etilo (8,0 g, 56,3 mmol), N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (cantidad bruta: 232,0 g, contenido interno después de la conversión en 1,2-dimetoxietano al 2,50 %: 226,2 g, 0,367 mol) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (108,2 g, 0,564 mol), y la mezcla resultante se agitó a de 29 a 32°C durante aproximadamente 1 hora y después se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadieron acetato de etilo (1,8 l) y una disolución acuosa de ácido acético al 5 % (v/v) (0,45 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió carbón activado (15,0 g, Kyoryoku Shirasagi (fabricado por Osaka Gas Chemicals Co., Ltd.)), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. Luego se separó el carbón activado por filtración, luego se lavó el carbón activado con tetrahidrofurano (0,45 l), y se combinaron los lavados con el filtrado. Se concentró la mezcla resultante hasta 0,75 l a presión reducida. Se añadió 1-propanol (1,5 l) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 0,75 l a presión reducida. Se añadió acetona:1-propanol = 1:1 (3,0 l) al residuo. Se añadió N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (0,15 g) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 45 horas. Los precipitados se filtraron y un polvo separado por filtración se lavó con acetona:1-propanol = 1:1 (0,6 l). El polvo húmedo obtenido se disolvió mediante la adición de tetrahidrofurano (1,5 l) y agua (0,3 l), y la disolución se concentró a 0,75 l a presión reducida. Se añadió 1-propanol (1,5 l) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 0,75 l a presión reducida. Se añadió acetona:1-propanol = 1:1 (3,0 l) al residuo. Se añadió N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (0,15 g) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 24 horas. Los precipitados se filtraron y los cristales separados por filtración se lavaron con acetona:1-propanol = 1:1 (0,6 l). Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 40 °C para obtener N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (254,6 g, rendimiento: 87,3 %) en forma de cristales.
[0593] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,87 (3H, t, 7,3 Hz), δ 1,14-1,21 (2H, m), δ 1,41-1,50 (4H, m), δ 1,78-1,93 (2H, m), δ 2,09 (2H, t, 7,3 Hz), δ 2,13-2,23 (2H, m), δ 2,36 (3H, s), δ 2,74-2,80 (1H, m), δ 3,00-3,04 (1H, m), δ 3,08-3,25 (2H, m), δ 3,32-3,37 (2H, m), δ 3,56-3,77 (6H, m), δ 4,02 (2H, s), δ 4,44-4,50 (1H, m), δ 4,64 (2H, d, 6,7 Hz), δ 5,17 (2H, d, 5,5 Hz), δ 5,41 (2H, s), δ 5,57-5,62 (1H, m), δ 6,51 (1H, s), δ 6,99 (2H, s), δ 7,14-7,26 (5H, m), δ 7,30 (1H, s), δ 7,75 (1H, d, 11,0 Hz), δ 8,00 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,06 (1H, t, 5,3 Hz), δ 8,12 (1H, d, 7,9 Hz), δ 8,29 (1H, t, 5,8 Hz), δ 8,49 (1H, d, 8,5 Hz), δ 8,62 (1H, t, 6,7 Hz).
[0595] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 7,6, 10,8, 10,9, 23,5, 24,6, 25,7, 27,7, 30,2, 30,6, 34,8, 36,9, 37,1, 41,7, 42,0, 44,4, 49,5, 54,1, 65,1, 66,9, 69,7, 72,2, 96,6, 109,6, 109,8, 119,0, 121,5, 123,4, 123,6, 125,3, 126,2, 128,0, 129,0, 134,3, 136,2, 136,3, 137,7, 140,4, 145,0, 147,7, 147,8, 149,9, 152,2, 156,6, 160,2, 162,7, 168,8, 169,1, 169,3, 170,0, 171,0, 171,3, 172,3, 172,5.
[0597] EM (IEN) (m/z): 1034 ([M+H]<+>).
[0599] Difracción de rayos X en polvo:
[0601] Se sometieron los cristales del compuesto del título a difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα. Los resultados se muestran en la tabla 2 y la figura 4. Se observaron los picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6°, 15,5° y 22,0°.
[0603] Tabla 2
[0605] Ángulo de difracción 2θ (°) Espaciado interplanar d (Å) Intensidad relativa (%)
[0607] 5,6 15,9 100,0
[0608] 5,8 15,3 41,6
[0609] 15,5 5,7 73,6
[0610] 17,9 5,0 35,0
[0611] 20,5 4,3 35,1
[0612] 21,4 4,2 31,4
[0613] 22,0 4,0 74,9
[0615] Ejemplo 15
[0617] Acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo
[0620]
[0623] A una suspensión de N-9-fluorenilmetoxicarbonilglicilglicina (2,85 kg, 8,04 mol) en tetrahidrofurano anhidro (38,0 kg), se le añadieron ácido acético (2,41 kg, 40,1 mol) y tetraacetato de plomo(IV) (5,35 kg, 12,0 mol) en una atmósfera de nitrógeno, y se sometió la mezcla resultante a reflujo durante 1,5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se separó el sólido precipitado por filtración y se lavó el sólido así separado por filtración con tetrahidrofurano (10,1 kg). Se concentraron el filtrado y los lavados obtenidos a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 16 l. Al concentrado obtenido, se le añadieron acetato de etilo (26 kg), una disolución acuosa de ácido cítrico al 10 % (17,1 l) y solución salina al 20 % (5,7 l), y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó con una disolución acuosa de ácido cítrico al 10 % (17,1 l), una disolución acuosa de bicarbonato de sodio al 9 % (28,5 l) y solución salina al 20 % (14,3 l) en este orden. A la fase orgánica obtenida, se le añadieron gel de sílice 60 (5,7 kg) y acetato de etilo (10,3 kg), y se agitó la mezcla resultante durante 1 hora. Luego se separó un sólido por filtración, y se lavó el sólido así separado por filtración con acetato de etilo (7,7 kg).
[0624] Se concentraron el filtrado obtenido y los lavados a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 5 l. Se añadió ciclopentil metil éter (24,5 kg) al residuo. Se concentró de nuevo la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 5 l. Al concentrado obtenido, se le añadió ciclopentil metil éter (14,7 kg) y se agitó la mezcla resultante a aproximadamente 5 °C durante 1 hora. Se filtró el sólido precipitado y se lavaron los cristales obtenidos con ciclopentil metil éter (4,9 kg) enfriado a aproximadamente 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 40 °C para obtener el compuesto del título (2,01 kg, rendimiento: 68 %) como un sólido incoloro.
[0625] Ejemplo 16
[0626] [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo
[0629]
[0631] A una suspensión de acetato de ({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metilo (2,01 kg, 5,46 mol) en 1,2-dimetoxietano anhidro (21 kg), se le añadió glicolato de bencilo (1,81 kg, 10,9 mol) en una atmósfera de nitrógeno, y se enfrió la mezcla resultante hasta aproximadamente 0 °C. Se añadió tris(pentafluorofenil)borano (142 g, 0,27 mol) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 3 horas. Luego se añadieron acetato de etilo (27,1 kg) y una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 10 % a la misma, y se calentó la mezcla resultante hasta temperatura ambiente y se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó mediante la adición de solución salina al 10 % (20,1 l). Se concentró la fase orgánica obtenida a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 4 l. Se añadió metanol (15,7 kg) al residuo. Se concentró la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 4 l. Al concentrado obtenido, se le añadió metanol (7,8 kg). Se concentró la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 4 l. Al concentrado obtenido, se le añadió metanol (12,5 kg), y se enfrió la mezcla resultante hasta aproximadamente 5 °C y se agitó durante 1 hora. Se filtraron los cristales precipitados y se lavaron los cristales obtenidos con metanol (4,7 kg) enfriado hasta aproximadamente 5 °C. Se secó el sólido obtenido a presión reducida a 40 °C para obtener el compuesto del título (2,28 kg, rendimiento: 88 %).
[0632] Ejemplo 17
[0633] [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanil}amino)metoxi]acetato de bencilo
[0636]
[0638] A una disolución de [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil}amino)metoxi]acetato de bencilo (2,28 kg, 4,81 mol) en N,N-dimetilacetamida (15,0 kg), se le añadió 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (0,37 kg, 2,4 mol) en una atmósfera de nitrógeno, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron p-toluenosulfonato de piridinio (0,60 kg, 2,4 mol), 1-hidroxibenzotriazol monohidratado (0,74 kg, 4,8 mol), N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanina (2,19 kg, 4,37 mol) y clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (0,84 kg, 4,37 mol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron acetato de etilo (21,0 kg) y solución salina al 10 % (34 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó con una disolución acuosa de ácido cítrico al 10 % (11,4 l). A la fase orgánica obtenida, se le añadieron tetrahidrofurano (20 kg) y una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 15 % (22,8 l), y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó con solución salina al 10 % (22,8 l). Se concentró la fase orgánica obtenida a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 6,8 l. Se añadió 2-propanol (12,4 kg) al residuo. Se concentró de nuevo la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 6,8 l. Al concentrado obtenido, se le añadió 2-propanol (30,2 kg) con calentamiento a aproximadamente 50 °C. Se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 1 hora, luego se enfrió a aproximadamente 5 °C y se agitó adicionalmente durante 2 horas. Se filtró el sólido precipitado y se lavó el sólido separado por filtración con 2-propanol (14,2 kg) enfriado hasta aproximadamente 5 °C. Se suspendieron los cristales 2 obtenidos en 2-propanol (36 kg), y se agitó la suspensión a aproximadamente 5 °C durante 1 hora. Luego, se filtró el sólido precipitado y se lavó el sólido separado por filtración con 2-propanol (28,5 kg) enfriado a aproximadamente 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 50 °C para obtener el compuesto del título (3,34 kg, rendimiento: 94 %).
[0640] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 2,79 (1H, dd, J=14,0, 9,8 Hz), 3,05 (1H, dd, J=14,0, 4,3 Hz), 3,58-3,79 (6H, m), 4,15 (2H, s), 4,20-4,24 (1H, m), 4,28-4,30 (2H, m), 4,48-4,53 (1H, m), 4,63 (2H, d, J=6,7 Hz), 5,14 (2H, s), 7,15-7,43 (13H, m), 7,58 (1H, t, J=6,1 Hz), 7,71 (2H, d, J=7,3 Hz), 7,89 (2H, d, J=7,9 Hz), 8,01 (1H, t, J=5,5 Hz), 8,15 (1H, d, J=7,9 Hz), 8,33 (1H, t, J=5,8 Hz), 8,59 (1H, t, J=6,4 Hz).
[0642] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 37,3, 41,8, 42,1, 43,5, 46,6, 54,1, 64,4, 65,6, 65,7, 69,0, 120,1, 125,2, 126,3, 127,1, 127,6, 128,0, 128,1, 128,1, 128,4, 129,1, 135,8, 137,8, 140,7, 143,8, 156,5, 168,8, 169,4, 169,9, 170,1, 171,4.
[0644] EM (IEN) (m/z): 736 ([M+H]<+>).
[0646] Ejemplo 18
[0648] N-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida
[0651]
[0654] A una suspensión de [({N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil] glicilglicil-L-fenilalanil}amino)metoxi]acetato de bencilo (367 g, 0,499 mol) en tetrahidrofurano (5,88 kg) y agua (1,61 l), se le añadió un complejo de paladio sobre carbonoetilendiamina (28 g), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 hora a 3 horas en una atmósfera de gas hidrógeno a presión ordinaria. Se separó el catalizador por filtración, y se lavó el catalizador así separado por filtración con tetrahidrofurano (1,63 kg) para obtener un filtrado y lavados. La operación descrita anteriormente de reacción y separación de un catalizador por filtración se realizó repetidamente 9 veces, y se combinaron las 9 porciones obtenidas de filtrados y lavados. Se concentró la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 17 l. Al concentrado obtenido, se le añadió 2-propanol (39 kg), y la operación de concentración a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 17 l se realizó repetidamente tres veces. Al concentrado obtenido, se le añadió acetato de etilo (45 kg), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 6 horas. Se agitó esta suspensión adicionalmente a aproximadamente 5 °C durante 1 hora. Se filtró el sólido precipitado y se lavó el sólido separado por filtración con una disolución mixta 1:3 de 2-propanol y acetato de etilo (23,1 l) enfriada hasta aproximadamente 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 40 °C para obtener una forma en bruto del compuesto del título (2,18 kg, rendimiento: 75 %). Se suspendió la forma en bruto obtenida (400 g, 0,62 mol) en tetrahidrofurano (2,4 l) y acetato de etilo (5,6 l). A la suspensión, se le añadió una disolución acuosa de bisulfato de potasio al 1 % (4 l), y se disolvió la mezcla resultante calentando hasta aproximadamente 32 °C y agitando. Después de la separación en fases orgánica y acuosa, la fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó con agua (2 l). Se concentró la fase orgánica obtenida a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 2 l. Al concentrado obtenido se le añadió acetonitrilo (6 l) y se concentró la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 2,8 l. Como resultado, se precipitó un sólido. Se añadió acetato de etilo (6 l) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 horas, luego se enfrió hasta aproximadamente 5 °C y se agitó durante 3 horas. Se filtró el sólido precipitado y se lavaron los cristales separados por filtración con una disolución mixta 1:2 de acetonitrilo y acetato de etilo (7 l). Se secó el sólido obtenido a presión reducida a 40 °C para obtener el compuesto del título (356 g, rendimiento: 89 %).
[0656] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 2,79 (1H, dd, J=14,0, 9,8 Hz), 3,06 (1H, dd, J=13,7, 4,6 Hz), 3,58-3,79 (6H, m), 3,98 (2H, s), 4,21-4,25 (1H, m), 4,28-4,30 (2H, m), 4,48-4,54 (1H, m), 4,61 (2H, d, J=6,7 Hz), 7,16-7,20 (1H, m), 7,22-7,27 (4H, m), 7,33 (2H, t, J=7,3 Hz), 7,42 (2H, t, J=7,3 Hz), 7,59 (1H, t, J=6,1 Hz), 7,71 (2H, d, J=7,3 Hz), 7,89 (2H, d, J=7,3 Hz), 8,03 (1H, t, J=5,5 Hz), 8,16 (1H, d, J=7,9 Hz), 8,33 (1H, t, J=5,8 Hz), 8,57 (1H, t, J=6,7 Hz).
[0657] <13>C-RMN (100 MHz, CDCl<3>) δ 37,4, 41,8, 42,1, 43,5, 46,6, 54,1, 64,2, 65,7, 68,8, 120,1, 125,2, 126,3, 127,1, 127,6, 128,1, 129,1, 137,8, 140,7, 143,8, 156,5, 168,8, 169,4, 170,0, 171,4, 171,4.
[0659] EM (IEN) (m/z): 646 ([M+H]<+>).
[0661] Ejemplo 19
[0663] N-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0666]
[0669] A una suspensión de metanosulfonato dihidratado de (1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-aminio (260 g, 0,458 mol) en dimetilsulfóxido (1,8 l) y tetrahidrofurano (1,3 l), se le añadieron trietilamina (55,6 g, 0,549 mol), 1-hidroxibenzotriazol monohidratado (84,2 g, 0,549 mol), clorhidrato de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi) carbonil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (325 g, 0,503 mol) y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (114 g, 0,595 mol) en una atmósfera de nitrógeno, y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron tetrahidrofurano (3,9 l), acetato de etilo (2,6 l) y una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 11 % (5,2 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se lavó la fase orgánica obtenida con una disolución acuosa de ácido cítrico al 19 % (3,9 l), una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 22 % (2,6 l) y solución salina al 18 % (0,78 l) en este orden. A la fase orgánica obtenida, se le añadió carbón activado (52 g) y se agitó la mezcla resultante durante 30 minutos. Luego se añadieron a la misma tetrahidrofurano (0,78 l) y sulfato de magnesio anhidro (0,78 g), y se agitó la mezcla resultante durante 30 minutos. Se separó un sólido por filtración, y se lavó el sólido así separado por filtración con tetrahidrofurano (0,78 l). Se concentraron el filtrado y los lavados obtenidos a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 200 mL. Al concentrado obtenido se le añadió acetato de etilo (1,3 l) y se concentró la mezcla resultante a presión reducida hasta que la cantidad del líquido se convirtió en aproximadamente 200 ml. Al concentrado obtenido, se le añadió tetrahidrofurano (1,8 l). Se añadió la disolución obtenida gota a gota durante 12 minutos a una disolución mixta de acetato de etilo (1,3 l) y ciclopentil metil éter (1,3 l) preparada en otro recipiente. A esta suspensión, se le añadió ciclopentil metil éter (2,6 l), y se agitó la mezcla resultante durante 18 horas, luego se enfrió hasta aproximadamente 5 °C y se agitó adicionalmente durante 1 hora. Se filtró el sólido precipitado y se lavó el sólido separado por filtración con una disolución mixta 1:3 de tetrahidrofurano y ciclopentil metil éter (1,3 l). Se secó el sólido obtenido a presión reducida a 40 °C para obtener el compuesto del título (408 g, rendimiento: 84 %).
[0671] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,86 (3H, t, J=7,3), 1,79-1,90 (2H, m), 2,11-2,22 (2H, m), 2,37 (3H, s), 2,77 (1H, dd, J=14,0, 9,8 Hz), 3,02 (1H, dd, J=13,7, 4,6 Hz), 3,07-3,25 (2H, m), 3,58-3,79 (6H, m), 4,02 (2H, s), 4,18-4,23 (1H, m), 4,26-4,30 (2H, m), 4,45-4,54 (1H, m), 4,64 (2H, d, J=6,7 Hz), 5,17 (2H, dd, J=23,5, J=19,2 Hz), 5,40 (2H, s), 5,56-5,61 (1H, m), 6,52 (1H, s), 7,14-7,43 (10h, m), 7,58 (1H, t, J=6,1 Hz), 7,68 (2H, d, J=7,3 Hz), 7,76 (1H, d, J=11,0 Hz), 7,86 (2H, d, J=7,3 Hz), 8,02 (1H, t, J=5,5 Hz), 8,15 (1H, d, J=7,9 Hz), 8,32 (1H, t, J=5,8 Hz), 8,50 (1H, d, J=8,5 Hz), 8,63 (1H, t, J=6,4 Hz).
[0673] <13>C-RMN (100 MHz, DMSO-d<6>) δ 7,7, 10,9, 11,0, 23,1, 23,7, 27,8, 30,3, 31,4, 37,3, 41,8, 42,1, 43,5, 44,6, 46,6, 49,6, 54,2, 55,6, 65,2, 65,8, 67,0, 69,8, 72,3, 82,0, 96,7, 109,7, 109,9, 119,1, 120,0, 121,6, 123,5, 123,7, 125,2, 125,3, 126,3, 127,0, 127,6, 128,1, 129,1, 136,3, 136,4, 137,8, 140,5, 140,7, 143,8, 143,8, 145,1, 147,8, 147,9, 150,0, 152,3, 156,5, 156,7, 160,3, 162,8, 168,9, 169,2, 169,4, 170,2, 171,4, 172,4.
[0674] EM (IEN) 1063: (M+H)<+>
[0675] Ejemplo 20
[0676] Glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0679]
[0681] A una suspensión de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (400 g, 0,376 mol) en tetrahidrofurano deshidratado (8 l), se le añadió 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (51,6 g, 0,339 mol) cada 5 minutos en 8 porciones divididas bajo una corriente de gas nitrógeno, y se agitó la mezcla resultante durante 2,5 horas. Se filtró el sólido precipitado bajo la corriente de gas nitrógeno, y se lavó el sólido separado por la filtración con tetrahidrofurano (2,4 l). Se secó el sólido obtenido a presión reducida a 40 °C para obtener una mezcla que contenía el compuesto del título (363 g, rendimiento: 115 %).
[0683] <1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 0,87 (3H, t, J=7,3), 1,57-1,67 (6H, m), 1,80-1,92 (2H, m), 2,06-2,25 (2H, m), 2,35-2,38 (3H, m), 2,61-2,63 (2H, m), 2,73-2,89 (1H, m), 3,00-3,79 (29h, m), 3,80 (1H, dd, J=16,2, 7,0 Hz), 3,99-4,10 (2H, m), 4,30-4,51 (1H, m), 4,58 (1H, dd, J=9,8, 6,1 Hz), 4,63-4,69 (1H, m), 5,01 (0,5H, a), 5,15 (1H, t, J=18,3 Hz), 5,24 (1H, t, J=18,3 Hz), 5,41 (2H, s), 5,54-5,62 (1H, m), 6,52 (0,6H, a), 7,11-7,31 (6H, m), 7,75-7,79 (1H, m), 8,12-8,15 (0,6H, m), 8,22 (0,2H, d, J=8,5 Hz), 8,36 (0,2H, t, J=5,8 Hz), 8,52 (0,2H, t, J=5,5 Hz), 8,66 (0,2H, t, J=6,4 Hz), 8,93 (0,6H, t, J=5,5 Hz), 9,10 (1H, dd, J=20,1, 9,2 Hz), 9,82 (0,6H, a).
[0684] EM (IEN) 841: (M+H)<+>
[0685] Ejemplo 21
[0686] Preparación de cristales simientes de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0688]
[0689]
[0692] A una suspensión de glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (200 mg, 0,24 mmol) en piridina (0,2 mL), tetrahidrofurano (2,0 mL) y acetonitrilo (0,6 mL), se le añadieron p-toluenosulfonato de piridinio (120 mg, 0,48 mmol), trietilamina (100 µL, 0,72 mmol) y 6-maleimidohexanoato de N-succinimidilo (73 mg, 0,24 mmol), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 horas. Se purificó la disolución de reacción mediante cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (Biotage AB) [tetrahidrofurano:acetona = 3:7 a 7:3 (v/v)] para obtener el compuesto del título como un aceite. A 19,5 mg del aceite obtenido, se le añadieron acetona (0,4 ml) y 2-butanol (0,2 ml), y se calentó la mezcla resultante hasta aproximadamente 60 °C. Se filtró el sólido precipitado a temperatura ambiente y se lavó el sólido separado por filtración con 2-butanol (aproximadamente 0,2 ml) para obtener el compuesto del título (14,3 mg) como un polvo incoloro. Se usó el polvo obtenido como un cristal simiente en la siguiente reacción.
[0693] Ejemplo 22
[0695] N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0698]
[0701] En piridina (0,35 l), acetonitrilo (1,1 l) y tetrahidrofurano (3,5 l), se disolvieron p-toluenosulfonato de piridinio (209 g, 0,832 mol), 6-maleimidohexanoato de N-succinimidilo (128 g, 0,415 mol) y glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (350 g, 0,416 mol) en una atmósfera de nitrógeno. Luego se añadió trietilamina (63,2 g, 0,625 l) a la disolución y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3,5 horas. Se añadieron tetrahidrofurano (3,5 l), una disolución acuosa de ácido cítrico al 19 % (3,5 l), acetato de etilo (2,5 l) y solución salina al 18 % (2,5 l) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. A la fase orgánica obtenida, se le añadieron una disolución acuosa de ácido cítrico al 19 % (2,5 l) y solución salina al 18 % (2,5 l), y la mezcla resultante se agitó y después se separó en fases orgánica y acuosa. La fase orgánica obtenida se separó en fases orgánica y acuosa y se lavó con una disolución acuosa de bicarbonato de potasio al 22 % (2,1 l) y posteriormente con solución salina al 18 % (1,8 l). Se añadió la fase orgánica obtenida gota a gota a una suspensión de carbón activado (35 g) en acetonitrilo (35 l) preparada en otro recipiente, y se agitó la mezcla resultante durante 30 minutos. Luego se separó el carbón activado por filtración, y se lavó el carbón activado así separado por filtración con acetonitrilo (1,8 l). Se concentraron el filtrado obtenido y los lavados a presión reducida a una temperatura externa de aproximadamente 40 °C hasta que el disolvente ya no se retiró por destilación. Al residuo concentrado obtenido, se le añadieron acetona (1,8 l) y 1-propanol (3,5 l) en este orden, y se disolvió la mezcla resultante calentando hasta 55 °C. Luego se enfrió la disolución hasta temperatura ambiente. Se añadió el polvo (0,2 g) obtenido en el ejemplo 21 a la misma como un cristal de siembra, y se agitó la mezcla resultante durante 86 horas. Luego se filtró el sólido precipitado y se lavó el sólido separado por filtración con acetona (1,1 l). Se secó el sólido obtenido a presión reducida a 40 °C para obtener el compuesto del título (191 g, rendimiento: 44 %) en forma de cristales.
[0703] Ejemplo 23
[0705] N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0708]
[0711] A sulfato de sodio anhidro (1,8 g), ciano(hidroxiimino)acetato de etilo (0,16 g, 1,13 mmol), y una disolución mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (24 ml y 18 ml) que contiene N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (cantidad bruta: 5,76 g, contenido interno después de la conversión en 12,40 % de 1,2-dimetoxietano: 5,05 g, 8,18 mmol), se le añadió una suspensión mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (9 mL y 15 mL) que contenía metanosulfonato de (1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-aminio (3,0 g, 5,64 mmol) a de 20 a 30 °C. A la disolución mixta, se le añadieron tetrahidrofurano (9 mL) y una disolución de tetrahidrofurano (7,5 mL) que contenía N-metilmorfolina (0,63 g, 6,23 mmol), y se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 15 minutos. A continuación, se le añadieron clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,16 g, 11,27 mmol) y una disolución mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (1,5 ml y 1,5 ml). Se agitó la disolución mixta a de 20 a 30 °C durante 30 minutos o más. Después de la confirmación de la terminación de la reacción, se separó la mezcla de reacción en fases orgánica y acuosa, y se retiró la fase acuosa. Se ajustó la temperatura de la fase orgánica a de 15 a 25 °C, luego se añadieron acetato de etilo (36 ml), sulfato de sodio anhidro (1,26 g) y agua purificada (24 ml) que contenía N-metilmorfolina (0,14 g, 1,38 mmol) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió agua purificada (9 ml) a la fase orgánica, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se añadió adicionalmente agua purificada (9 mL) que contenía ácido acético (0,45 mL) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa para obtener una fase orgánica. Se añadió carbón activado (0,30 g, Kyoryoku Shirasagi (fabricado por Osaka Gas Chemicals Co., Ltd.)), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos. Luego se separó el carbón activado por filtración, luego se lavó el carbón activado con tetrahidrofurano (9 ml) y se combinaron los lavados con el filtrado. Se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Se añadió tetrahidrofurano (75 ml) al concentrado, y se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Se añadió adicionalmente tetrahidrofurano (45 ml) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Después de la confirmación de que el contenido de agua del concentrado era del 8,0 % (v/v) o menos, se añadió una disolución mixta de acetona y 1-propanol (30 ml y 71 ml) a la misma. Se añadió N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (30 mg) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a de 20 a 30 °C durante 12 horas o más. Se enfrió la suspensión hasta de 0 a 5 °C y luego se agitó adicionalmente durante 24 horas o más. Se filtraron los precipitados y se lavó un polvo separado por filtración con una disolución mixta 1:1 de acetona y 1-propanol (30 ml) de 0 a 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 35 °C para obtener cristales en bruto de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (5,23 g, rendimiento: 89,6 %).
[0713] A los cristales en bruto de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (4,50 g, 4,35 mmol), se le añadió una disolución mixta de acetona y agua purificada (10,6 ml y 2,9 ml) que contenía ácido acético (15 µl), y se agitó la mezcla resultante a de 34 a 38 °C durante 1 hora o más. Después de la confirmación de la disolución, se enfrió la disolución hasta de 20 a 25 °C. Se añadió una disolución mixta de acetona y 1-propanol (31,5 ml y 64,8 ml) a la misma, luego se añadió N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (27 mg), y se agitó la mezcla resultante a de 20 a 25 °C durante 24 horas o más. Se enfrió la suspensión hasta de 0 a 5 °C y luego se agitó adicionalmente durante 12 horas o más. Se filtraron los precipitados y se lavó un polvo separado por filtración con una disolución mixta 1:1 de acetona y 1-propanol (27 ml) de 0 a 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 35 °C para obtener cristales purificados de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (4,37 g, rendimiento: 93,0 %).
[0715] Los datos instrumentales fueron similares a los del compuesto descrito en el Ejemplo 14.
[0717] Ejemplo 24
[0719] N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida
[0722]
[0725] A sulfato de sodio anhidro (1,8 g), se le añadieron ciano(hidroxiimino)acetato de etilo (0,16 g, 1,13 mmol) y una disolución mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (24 ml y 18 ml) que contenía N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(carboximetoxi)metil]glicinamida (cantidad bruta: 5,76 g, contenido interno después de la conversión en 1,2-dimetoxietano al 12,40 %: 5,05 g, 8,18 mmol), una suspensión mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (9 ml y 15 ml) que contenía metanosulfonato de (1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b] quinolin-1-aminio (3,0 g, 5,64 mmol) a de 20 a 30 °C. A la disolución mixta, se le añadieron tetrahidrofurano (9 ml) y una disolución de tetrahidrofurano (7,5 ml) que contenía N-metilmorfolina (0,63 g, 6,23 mmol), y se agitó la mezcla resultante a la misma temperatura que la anterior durante 15 minutos. A continuación, se le añadieron clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,16 g, 11,27 mmol) y una disolución mixta de agua purificada y tetrahidrofurano (1,5 ml y 1,5 ml). Se agitó la disolución mixta a de 20 a 30 °C durante 30 minutos o más. Después de la confirmación de la terminación de la reacción, se separó la mezcla de reacción en fases orgánica y acuosa, y se retiró la fase acuosa. Se ajustó la temperatura de la fase orgánica a de 15 a 25 °C, luego se añadieron acetato de etilo (36 ml), sulfato de sodio anhidro (1,26 g) y agua purificada (24 ml) que contenía N-metilmorfolina (0,14 g, 1,38 mmol) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se retiró la fase acuosa. Se añadió agua purificada (9 ml) a la fase orgánica, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa. Se añadió adicionalmente agua purificada (9 mL) que contenía ácido acético (0,45 mL) a la misma, y la mezcla resultante se agitó y se separó en fases orgánica y acuosa para obtener una fase orgánica. Se añadió carbón activado (0,30 g, Kyoryoku Shirasagi (fabricado por Osaka Gas Chemicals Co., Ltd.)), y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos o más. Luego se separó el carbón activado por filtración, luego se lavó el carbón activado con tetrahidrofurano (9 ml) y se combinaron los lavados con el filtrado. Se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Se añadió tetrahidrofurano (75 ml) al concentrado, y se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Se añadió adicionalmente tetrahidrofurano (45 ml) al residuo, y se concentró la mezcla resultante hasta 30 ml a presión reducida. Después de la confirmación de que el contenido de agua del concentrado era del 8,0 % (v/v) o menos, se añadió una disolución mixta de acetona y 1-propanol (30 mL y 71 mL) a la misma, y se agitó la mezcla resultante a de 20 a 30°C durante 22 horas. Se enfrió la suspensión hasta de 0 a 5 °C y luego se agitó adicionalmente durante 24 horas o más. Se filtraron los precipitados y se lavó un polvo separado por filtración con una disolución mixta 1:1 de acetona y 1-propanol (30 ml) de 0 a 5 °C. Se secaron los cristales obtenidos a presión reducida a 35 °C para obtener cristales de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicilglicil-L-fenilalanil-N-[(2-{[(1S,9S)-9-etil-5-fluoro-9-hidroxi-4-metil-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahidro-1H,12H-benzo [de]pirano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-il]amino}-2-oxoetoxi)metil]glicinamida (5,08 g, rendimiento: 87,0 %).
[0726] Los datos instrumentales fueron similares a los del compuesto descrito en el Ejemplo 14.
[0727] Texto libre del listado de secuencias
[0728] SEQ ID NO: 1 - Secuencia de aminoácidos de una cadena pesada del anticuerpo anti-HER2
[0729] SEQ ID NO: 2 - Secuencia de aminoácidos de una cadena ligera del anticuerpo anti-HER2
[0730] SEQ ID NO: 3 - Secuencia de aminoácidos de una cadena pesada del anticuerpo anti-HER3
[0731] SEQ ID NO: 4 - Secuencia de aminoácidos de una cadena ligera del anticuerpo anti-HER3
[0732] SEQ ID NO: 5 - Secuencia de aminoácidos de una cadena pesada del anticuerpo anti-TROP2
[0733] SEQ ID NO: 6 - Secuencia de aminoácidos de una cadena ligera del anticuerpo anti-TROP2
[0734] SEQ ID NO: 7 - Secuencia de aminoácidos de una cadena pesada del anticuerpo anti-B7-H3
[0735] SEQ ID NO: 8 - Secuencia de aminoácidos de una cadena ligera del anticuerpo anti-B7-H3
[0736] SEQ ID NO: 9 - Secuencia de aminoácidos de una cadena pesada del anticuerpo anti-GPR20
[0737] SEQ ID NO: 10 - Secuencia de aminoácidos de una cadena ligera del anticuerpo anti-GPR20

Claims (61)

1. REIVINDICACIONES
1. Cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
, en donde los cristales muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6 ± 0,2°, 15,5 ± 0,2° y 22,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα.
2. Método para producir cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
que comprende las etapas de:
preparar una disolución que comprende una cetona inferior y un alcohol inferior como disolventes en los que se disuelve el compuesto representado por la fórmula (1), en donde el alcohol inferior es 1-propanol o 2-butanol, y la cetona inferior es acetona; y luego
precipitar cristales del compuesto representado por la fórmula (1) a partir de la disolución, en donde los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 5,6 ± 0,2°, 15,5 ± 0,2° y 22,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con una radiación de cobre Kα.
3. Método según la reivindicación 2, en donde el alcohol inferior es 1-propanol.
4. Método según la reivindicación 2, en donde el alcohol inferior es 2-butanol.
5. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, que comprende una etapa de adición de un cristal simiente de los cristales del compuesto representado por la fórmula (1).
6. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el compuesto representado por la fórmula (1) se produce mediante un método de producción (I),
en donde el método de producción (I) es un método de producción que comprende las etapas de: desproteger grupos protectores para un grupo amino y un grupo carboxilo de un compuesto representado por la fórmula (B):
en donde R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (8):
luego condensar el compuesto representado por la fórmula (8) con un compuesto representado por la fórmula (C):
en donde X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1):
7. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el compuesto representado por la fórmula (1) se produce mediante un método de producción (II),
en donde el método de producción (II) es un método de producción que comprende las etapas de: desproteger un grupo protector para un grupo amino de un compuesto representado por la fórmula (B):
en donde R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (D):
en donde R<2>representa el mismo significado que anteriormente; luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (D) con un compuesto representado por la fórmula (C):
en donde X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (E):
en donde R<2>representa el mismo significado que anteriormente; luego
desproteger el grupo protector para el grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (E) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1):
8. Método de producción según la reivindicación 6 ó 7, que comprende las etapas de:
disolver el compuesto representado por la fórmula (10) en un disolvente que contiene 1,2-dimetoxietano; y luego
precipitar cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10).
9. Método de producción según la reivindicación 8, en donde los cristales del aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10) muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0 ± 0,2° y 25,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con una radiación de cobre Kα.
10. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, en donde la etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (10) y el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1) se realiza en un sistema de dos fases de una disolución acuosa de sulfato de sodio y tetrahidrofurano.
11. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el compuesto representado por la fórmula (1) se produce mediante un método de producción (III),
en donde el método de producción (III) es un método de producción que comprende las etapas de: desproteger un grupo protector para un grupo carboxilo de un compuesto representado por la fórmula (B):
en donde R<1>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, y R<2>representa un grupo carboxilo protegido con un grupo protector, para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (F):
en donde R<1>representa el mismo significado que anteriormente; luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (F) con el compuesto representado por la fórmula (11):
para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (G):
en donde R<1>representa el mismo significado que anteriormente; luego
desproteger el grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (G) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (16):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (16) con un compuesto representado por la fórmula (C):
en donde X representa un grupo éster activo o un grupo carboxilo, para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1):
12. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico.
13. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico m-hidratado, en donde m está en el intervalo de 0 a 3.
14. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 11, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico dihidratado.
15. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, en donde el compuesto representado por la fórmula (B) se produce mediante un método de producción (IV),
en donde el método de producción (IV) es un método de producción que comprende las etapas de: hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (H):
en donde R<3>representa un grupo amino protegido con un grupo protector, con tetraacetato de plomo para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (J):
en donde R<3>representa el mismo significado que anteriormente; luego
hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (J) con un compuesto representado por la fórmula (K):
en donde R<2>representa el mismo significado que el R<2>tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, en presencia de un ácido o una base para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (L):
en donde R<2>y R<3>representan los mismos significados que anteriormente; luego
desproteger el grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (L) para convertirlo en un compuesto representado por la fórmula (M):
en donde R<2>representa el mismo significado que anteriormente; y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (M) con un compuesto representado por la fórmula (N):
en donde R<1>representa el mismo significado que el R<1>tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14, para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (B):
en donde R<1>y R<2>representan los mismos significados que anteriormente.
16. Método de producción según la reivindicación 15, en donde la etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (H) con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (J) se realiza en presencia de ácido acético.
17. Método de producción según la reivindicación 15 ó 16, en donde la etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (J) con el compuesto representado por la fórmula (K) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (L) se realiza en presencia de una disolución acuosa de hidróxido de sodio.
18. Método de producción según la reivindicación 15 ó 16, en donde la etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (J) con el compuesto representado por la fórmula (K) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (L) se realiza en presencia de tris(pentafluorofenil)borano.
19. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, que comprende una etapa de adición de un ácido para precipitar una sal del compuesto representado por la fórmula (M) y el ácido después de la etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (L) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (M).
20. Método de producción según la reivindicación 19, en donde el alcohol inferior es 1-hidroxibenzotriazol.
21. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 20, en donde R<1>es un grupo amino protegido con un grupo benciloxicarbonilo.
22. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 20, en donde R<1>es un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo.
23. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 22, en donde R<2>es un grupo carboxilo protegido con un grupo bencilo.
24. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 23, en donde R<3>es un grupo amino protegido con un grupo (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo.
25. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 24, en donde X es un grupo (2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxicarbonilo.
26. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el compuesto representado por la fórmula (1) se produce mediante un método de producción (V),
en donde el método de producción (V) es un método de producción que comprende las etapas de: hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (2):
con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (3):
luego
hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (3) con glicolato de bencilo en presencia de un ácido o una base para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (4):
luego
desproteger un grupo protector para un grupo amino del compuesto representado por la fórmula (4) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (5):
luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (5) con el compuesto representado por la fórmula (6):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (7):
luego
desproteger grupos protectores para un grupo amino y un grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (7) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (8):
luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (8) con el compuesto representado por la fórmula (9):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (10):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1):
27. Método de producción según la reivindicación 26, que comprende las etapas de: disolver el compuesto representado por la fórmula (10) en un disolvente que contiene 1,2-dimetoxietano; y luego precipitar cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10).
28. Método de producción según la reivindicación 27, en donde los cristales del aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10) muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0 ± 0,2° y 25,0 ± 0,2° en difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con una radiación de cobre Kα.
29. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en donde la etapa de condensación del compuesto representado por la fórmula (10) con el compuesto representado por la fórmula (11) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1) se realiza en un sistema de dos fases de una disolución acuosa de sulfato de sodio y tetrahidrofurano.
30. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el compuesto representado por la fórmula (1) se produce mediante un método de producción (VI),
en donde el método de producción (VI) es un método de producción que comprende las etapas de: hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (2):
con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (3):
luego
hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (3) con glicolato de bencilo en presencia de un ácido o una base para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (4):
luego
desproteger un grupo protector para un grupo amino del compuesto representado por la fórmula (4) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (5):
luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (5) con el compuesto representado por la fórmula (12):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (13):
luego
desproteger un grupo protector para un grupo carboxilo del compuesto representado por la fórmula (13) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (14):
luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (14) con el compuesto representado por la fórmula (11):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (15):
luego
desproteger un grupo protector para un grupo amino del compuesto representado por la fórmula (15) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (16):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (16) con el compuesto representado por la fórmula (9):
para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (1):
31. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30, en donde la etapa de hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (2) con tetraacetato de plomo para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (3) se realiza en presencia de ácido acético.
32. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 31, en donde la etapa de convertir el compuesto representado por la fórmula (3) en el compuesto representado por la fórmula (4) se realiza en presencia de una disolución acuosa de hidróxido de sodio.
33. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 31, en donde la etapa de convertir el compuesto representado por la fórmula (3) en el compuesto representado por la fórmula (4) se realiza en presencia de tris(pentafluorofenil)borano.
34. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 33, que comprende una etapa de adición de un ácido para precipitar una sal del compuesto representado por la fórmula (5) y el ácido después de la etapa de desprotección del grupo protector para el grupo amino del compuesto representado por la fórmula (4) para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (5).
35. Método de producción según la reivindicación 34, en donde el alcohol inferior es 1-hidroxibenzotriazol.
36. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 35, en donde el compuesto representado por la fórmula (6) se produce mediante un método que comprende las etapas de: condensar el compuesto representado por la fórmula (23):
con N-hidroxisuccinimida para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (24):
y luego
condensar el compuesto representado por la fórmula (24) con L-fenilalanina para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (6).
37. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 36, en donde el compuesto representado por la fórmula (9) se produce mediante un método que comprende las etapas de: hacer reaccionar el compuesto representado por la fórmula (17):
con anhídrido maleico para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (18):
y luego
añadir cloruro de tionilo al compuesto representado por la fórmula (18) y una disolución mixta que contiene N-hidroxisuccinimida y 2,6-lutidina para convertirlo en el compuesto representado por la fórmula (9).
38. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 37, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico.
39. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 37, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico m-hidratado, en donde m está en el intervalo de 0 a 3.
40. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 37, en donde el compuesto representado por la fórmula (11) está en forma de una sal de ácido metanosulfónico dihidratado.
41. Método de producción según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 40, en donde no se usa cromatografía.
42. Cristales de un aducto de 1,2-dimetoxietano del compuesto representado por la fórmula (10):
, en donde los cristales muestran picos principales en ángulos de difracción (2θ) de 19,0 ± 0,2° y 25,0 ± 0,2° en la difracción de rayos X en polvo obtenida mediante irradiación con radiación de cobre Kα.
43. Sal del compuesto representado por la fórmula (5):
y un ácido, en donde el ácido es 1-hidroxibenzotriazol.
44. Método para producir un conjugado anticuerpo-fármaco, en donde un fármaco-enlazador representado por la fórmula (19) se conjuga con un anticuerpo a través de un enlace tioéter:
en donde A representa una posición de conexión con el anticuerpo,
, en donde los cristales del compuesto representado por la fórmula (1):
producidos por el método según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 41 se usan como material de partida, y el método comprende las etapas de:
i) reducir un anticuerpo; y luego
ii) añadir una disolución en la que se disuelven los cristales del compuesto representado por la fórmula (1) producidos por el método según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 41, para hacer reaccionar la disolución con el anticuerpo reducido.
45. Método de producción según la reivindicación 44, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-HER2, un anticuerpo anti-HER3, un anticuerpo anti-TROP2, un anticuerpo anti-B7-H3 o un anticuerpo anti-GPR20.
46. Método de producción según la reivindicación 45, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-HER2.
47. Método de producción según la reivindicación 46, en donde el anticuerpo anti-HER2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 449 de SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 214 de SEQ ID NO: 2, o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 2.
48. Método de producción según la reivindicación 47, en donde el anticuerpo anti-HER2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 449 de SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 214 de SEQ ID NO: 2.
49. Método de producción según la reivindicación 47, en donde el anticuerpo anti-HER2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 1 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 2.
50. Método de producción según la reivindicación 45, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-HER3.
51. Método de producción según la reivindicación 50, en donde el anticuerpo anti-HER3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 3 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4, o es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 1 a 446 de SEQ ID NO: 3 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4.
52. Método de producción según la reivindicación 51, en donde el anticuerpo anti-HER3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 3 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4.
53. Método de producción según la reivindicación 51, en donde el anticuerpo anti-HER3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácido 1 a 446 de SEQ ID NO: 3 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4.
54. Método de producción según la reivindicación 45, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-TROP2.
55. Método de producción según la reivindicación 54, en donde el anticuerpo anti-TROP2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 470 de SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 234 de SEQ ID NO: 6, o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 469 de SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 234 de SEQ ID NO: 6.
56. Método de producción según la reivindicación 55, en donde el anticuerpo anti-TROP2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 470 de SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 234 de SEQ ID NO: 6.
57. Método de producción según la reivindicación 55, en donde el anticuerpo anti-TROP2 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los
residuos de aminoácidos 20 a 469 de SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 234 de SEQ ID NO: 6.
58. Método de producción según la reivindicación 45, en donde el anticuerpo es un anticuerpo anti-B7-H3.
59. Método de producción según la reivindicación 58, en donde el anticuerpo anti-B7-H3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 471 de SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 233 de SEQ ID NO: 8, o un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 470 de SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 233 de SEQ ID NO: 8.
60. Método de producción según la reivindicación 59, en donde el anticuerpo anti-B7-H3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 471 de SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 233 de SEQ ID NO: 8.
61. Método de producción según la reivindicación 59, en donde el anticuerpo anti-B7-H3 es un anticuerpo que comprende una cadena pesada que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 20 a 470 de SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera que consiste en una secuencia de aminoácidos que consiste en los residuos de aminoácidos 21 a 233 de SEQ ID NO: 8.
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