HK192995A - Bordetella pertussis toxin with altered toxicity - Google Patents

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HK192995A
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Rappuoli Rino
Bartoloni Antonella
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Sclavo S.P.A.
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Claims (14)

  1. Immunologisch aktives Polypeptid mit keiner oder reduzierter Toxizität, verwendbar für die Herstellung eines Antipertussis-Impfstoffes, wobei das Polypeptid die S1-Untereinheit des Pertussis-Toxins enthält, modifiziert durch die Substitution einer Aminosäure durch eine andere, die fähig ist, die Toxizität von S1 zu zerstören oder zu reduzieren, ohne dessen immunologische Eigenschaften zu verändern, wobei mindestens Glutaminsäure (129) durch eine andere Aminosäure substituiert wird.
  2. Polypeptid nach Anspruch 1, zusätzlich enthaltend mindestens eine der Untereinheiten S2, S3, S4 und S5 des Pertussis-Toxins.
  3. Polypeptid nach Anspruch 2, wobei die Untereinheiten S2, S3, S4 und S5 dieselbe Anordnung wie die im natürlichen Pertussis-Toxin vorliegende haben.
  4. Verfahren zur Herstellung eines Polypeptids nach einem der vorangegangenen Patentansprüche, umfassend:
    (a) Modifizierung des für die S1-Untereinheit des Pertussis-Toxins codierenden Gens durch direkte Mutagenese durch Substitution der Basen-Sequenz für eine Aminosäure an einer oder mehreren Stellen des DNA-Moleküls durch eine Basensequenz, die eine andere Aminosäure codiert, wobei mindestens die Basensequenz, die für Glutaminsäure in Position 129 codiert, durch eine Basensequenz substituiert wird, die für eine andere Aminosäure codiert;
    (b) Konstruktion eines Hybridplasmids durch Ligierung eines Clonierungsvektors mit dem DNA-Fragment, das das Gen für die modifizierte S1-Untereinheit enthält;
    (c) Transformation eines Wirtsmikroorganismus mit einem gemäß (b) erhaltenen Hybridplasmid;
    (d) Züchtung eines transformierten Mikroorganismus in einem geeigneten Kulturmedium in Gegenwart einer Kohlenstoff-, Stickstoff- und Mineralsalz-Quelle und, schließlich
    (e) Gewinnung des Polypeptids, enthaltend die modifizierte Untereinheit aus dem Kulturmedium oder aus den Zellen.
  5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei in Schritt (a) das für die S1-Untereinheit codierende Gen im Pertussis-Toxin-Operon enthalten ist.
  6. Verfahren nach Anspruch 4, wobei in Schritt (b) das DNA-Fragment zusätzlich mindestens ein Gen enthält, das für die Untereinheiten S2, S3, S4 oder S5 des Pertussis-Toxins codiert.
  7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Gene in dem Operon angeordnet sind, das für das Pertussis-Toxin codiert.
  8. Verfahren nach Anspruch 4, wobei im Schritt (c) der Mikroorganismus aus der Gruppe ausgewählt wird, die Escherichia coli, Bacillus und Hefen umfaßt.
  9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei der Mikroorganismus Escherichia coli (E. coli) ist.
  10. E. coli (PTE 255-28), ATCC 67543, transformierte Mikroorganismen.
  11. Antipertussis-Impfstoff, enthaltend eine therapeutisch wirksame Menge mindestens eines Polypeptids nach einem der Ansprüche 1 bis 3.
  12. Gen, das ein immunologisch aktives Polypeptid wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert codiert.
  13. Hybridplasmid, enthaltend das wie in Anspruch 12 definierte Gen.
  14. Mikroorganismus, transformiert mit einem Hybridplasmid wie in Anspruch 13 definiert.
HK192995A 1987-11-02 1995-12-21 Bordetella pertussis toxin with altered toxicity HK192995A (en)

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