HK192995A - Bordetella pertussis toxin with altered toxicity - Google Patents

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HK192995A
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Pizza Mariagrazia
Rappuoli Rino
Bartoloni Antonella
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Sclavo S.P.A.
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Claims (14)

  1. Polypeptide à activité immunologique ayant une toxicité nulle ou réduite, utile pour la préparation d'un vaccin anticoquelucheux (antipertussis), dans lequel ledit polypeptide contient la sous-unité S1 de la toxine de la coqueluche modifiée par la substitution d'un acide aminé par un autre apte à annihiler ou réduire la toxicité de S1 sans modifier les propriétés immunologiques de celle-ci, au moins l'acide glutamique (129) étant substitué par un autre acide aminé.
  2. Polypeptide selon la revendication 1, contenant en outre au moins l'une des sous-unités S2, S3, S4 et S5 de la toxine de la coqueluche.
  3. Polypeptide selon la revendication 2, dans lequel les sous-unités S2, S3, S4 et S5 ont le même arrangement que celles présentes dans la toxine naturelle de la coqueluche.
  4. Procédé pour la préparation d'un polypeptide selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant:
    a) la modification par mutagénèse directe du gène codant pour la sous-unité S1 de la toxine de la coqueluche par substitution sur un ou plusieurs sites de la molécule d'ADN de la séquence de bases pour un acide aminé par une séquence de base codant pour un acide aminé différent, et dans lequel au moins la séquence de bases qui code pour l'acide glutamique en position 129 est substitué par une séquence de bases codant pour un acide aminé différent ;
    b) la construction d'un plasmide hybride liant un vecteur de clonage avec le fragment d'ADN contenant le gène codant pour la sous-unité S1 modifiée;
    c) la transformation d'un microorganisme hôte par un plasmide hybride obtenu comme dans b);
    d) la culture d'un microorganisme transformé dans un milieu de culture approprié en présence de sources de carbone, d'azote et de sels minéraux, et finalement
    e) la récupération du peptide contenant la sous-unité modifiée à partir du milieu de culture ou des cellules.
  5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel dans l'étape a) le gène codant pour la sous-unité S1 est contenu dans l'opéron de la toxine de la coqueluche.
  6. Procédé selon la revendication 4, dans lequel dans l'étape b) le fragment d'ADN contient en outre au moins un gène codant pour les sous-unités S2, S3, S4 ou S5 de la toxine de la coqueluche.
  7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel les dits gènes sont groupés dans l'opéron qui code pour la toxine de la coqueluche.
  8. Procédé selon la revendication 4, dans lequel dans l'étape c) le microorganisme est choisi dans le groupe comprenant Escherichia coli, des bacilles et des levures.
  9. Procédé selon la revendication 8, dans lequel le microorganisme est Escherichia coli (E. coli).
  10. Microorganismes transformés d'E. coli (PTE 255-28), ATCC 67543.
  11. Vaccin de la coqueluche contenant une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 3.
  12. Gène codant pour un polypeptide à activité immunologique tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 3.
  13. Plasmide hybride contenant le gène tel que défini dans la revendication 12.
  14. Microorganisme transformé avec un plasmide hybride tel que défini dans la revendication 13.
HK192995A 1987-11-02 1995-12-21 Bordetella pertussis toxin with altered toxicity HK192995A (en)

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