HK65594A - Hybrid DNA synthesis of mature insulin-like growth factors - Google Patents

Hybrid DNA synthesis of mature insulin-like growth factors

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Claims (17)

  1. Procédé pour la production efficace de facteurs de croissance I ou II analogues à l'insuline humaine (IGF I ou II) dans des cellules hôtes unicellulaires, ce procédé comprenant :    la fourniture d'une construction d'ADN fonctionnel comprenant une séquence d'ADN codant pour cet IGF I ou II, la séquence d'ADN codant pour cet IGF I étant la suivante : et la séquence d'ADN codant pour cet IGF II étant la suivante : réunies dans un cadre de lecture correct avec les séquences signal, sécrétoires, leader et de maturation reconnues par ces cellules hôtes pour former un gène structural en aval et sous le contrôle de régulation transcriptionnelle d'une région d'initiation transcriptionnelle dans un vecteur compatible avec ces cellules hôtes;    l'introduction de ce vecteur dans ces cellules hôtes;    la culture de ces cellules hôtes contenant ce vecteur; et    l'isolement de l'IGF I ou II humain sécrété
  2. Procédé suivant la revendication 1, dans lequel les séquence d'ADN de l'IGF I ou II sont des gènes synthetiques ayant des codons utilisés par l'hote.
  3. Procédé suivant la revendication 1, dans lequel l'hôte est une levure.
  4. Procédé suivant la revendication 3, dans lequel le vecteur est un dérivé du plasmide 2 µm.
  5. Procédé pour exprimer des facteurs de croissance I et II (IGF I ou II) analogues a l'insuline humaine dans une levure aboutissant à la sécrétion de cet IGF I ou II induite par les signaux de sécrétion et de maturation de l'hôte, ce procédé comprenant :    la préparation de premiers fragments d'ADN contenant des premières séquences d'ADN codant pour IGF I ou II, la séquence d'ADN codant pour cet IGF I étant la suivante : et la séquence d'ADN codant pour cet IGF II étant la suivante : et ayant l'extrémité 5' des brins codants au niveau ou en aval des premières bases de ces séquences d'ADN;    la préparation de seconds fragments d'ADN contenant des secondes séquences d'ADN codant pour des signaux de sécrétion et de maturation moléculaire reconnaissables par la levure et ayant l'extrémité 3' des brins codants au niveau ou en amont de la base terminale de ces signaux de maturation moléculaire, au moins l'un de ces premier et second fragments ayant sa terminaison à l'intérieur des séquences codantes si bien qu'il manque des paires de bases;    la jonction de ces premier et second fragments d'ADN au moyen d'un adaptateur codant pour les paires de bases manquantes de ces premier et second fragments, ces premier et second fragments d'ADN étant dans le même cadre de lecture;    la fourniture de codons de terminaison en aval adjacents des premiers fragments pour fournir des gènes "pré"-IGF I ou II; et    le clonage de ces gènes "pré"-IGF I ou II dans des vecteurs d'expression dans une levure dans laquelle le "pré"-IGF I ou le "pré"-IGF II est sécrété et fait l'objet d'une maturation moléculaire.
  6. Procédé suivant la revendication 5, dans lequel ce vecteur d'expression comprend un système de réplication reconnu par des bactéries.
  7. Procédé suivant la revendication 6, dans lequel ce vecteur d'expression de levure comprend le plasmide 2 µm ou une partie de celui-ci.
  8. Construction d'ADN comprenant une séquence d'ADN codant pour un facteur de croissance I ou II analogue à l'insuline humaine (IGF I ou II), la séquence d'ADN codant pour cet IGF I étant la suivante : et la séquence d'ADN codant pour cet IGF II étant la suivante : sous la régulation transcriptionnelle de signaux de régulation utilisés par une levure.
  9. Construction d'ADN suivant la revendication 8, incluant un système de réplication reconnu par une levure.
  10. Construction d'ADN suivant la revendication 8, dans lequel la séquence d'ADN a des codons utilisés par une levure et différents des codons humains.
  11. Construction d'ADN suivant la revendication 8, qui comprend un système de réplication utilisé par des bactéries.
  12. Construction d'ADN suivant la revendication 9, dans lequel ce système de réplication de levure comprend le plasmide 2 µm ou une partie de celui-ci.
  13. Construction d'ADN suivant la revendication 8, incluant la séquence d'ADN :
  14. Construction d'ADN suivant la revendication 8, incluant la séquence d'ADN :
  15. Construction d'ADN comprenant une séquence d'ADN codant pour un facteur de croissance I ou II analogue à l'insuline humaine, la séquence d'ADN codant pour cet IGF I étant la suivante : et la séquence d'ADN codant pour cet IGF II étant la suivante : réunie à des séquences de régulation de la transcription et de traduction pour l'expression d'un hôte unicellulaire dans une culture.
  16. Cellule hôte unicellulaire comprenant les constructions d'ADN suivant la revendication 15.
  17. Procédé pour la production d'un facteur de croissance I ou II analogue à l'insuline humaine (IGF I ou II) comprenant :    l'obtention d'une cellule hôte unicellulaire suivant la revendication 16, et    la culture de cette cellule hôte unicellulaire dans des conditions dans lesquelles un IGF I ou II est exprimé.
HK65594A 1983-04-25 1994-07-07 Hybrid DNA synthesis of mature insulin-like growth factors HK65594A (en)

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