HUP0002811A2 - Metalloproteináz inhibitor hatású szukcinamidszármazék és ezt a vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény - Google Patents
Metalloproteináz inhibitor hatású szukcinamidszármazék és ezt a vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0002811A2 HUP0002811A2 HU0002811A HUP0002811A HUP0002811A2 HU P0002811 A2 HUP0002811 A2 HU P0002811A2 HU 0002811 A HU0002811 A HU 0002811A HU P0002811 A HUP0002811 A HU P0002811A HU P0002811 A2 HUP0002811 A2 HU P0002811A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- compound
- dimethyl
- isobutyl
- alkyl
- pyridin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/72—Nitrogen atoms
- C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4402—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 2, e.g. pheniramine, bisacodyl
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Immunology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Lubricants (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Atalálmány tárgyát az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-il-karbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, egy mátrixmetalloproteináz inhibitor képezi. Atalálmány tárgyát képezi továbbáezt a vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény, ami többek közöttreumás arthritis, rákos megbetegedések, sclerosis multiplex vagypsoriasis kezelésére alkalmazható. Ó
Description
. f':
70.066/SZE
S.B.G. & K.
Nemzetközi Szabadalmi Iroda Η-1062 Budapest, Andrássy út 113. Tclcfom 34-24-950, I9u: 34-24-323 FC1Mw
Metalloproteináz inhibitorok) keit c a ck ·ν.ű .2/k e5 a. .....h í
V Cl( i Cl < U- (O 2; 01)0¾ Oi i ki' In’ 4 «λ .
A találmány tárgyát az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, valamint gyógyszerészetileg elfogadható sói, hidrátjai és szolvátjai képezik.
A találmány háttere
A WO 95/19956 sz. szabadalmi kérelem (British Biotech Pharmaceuticals Ltd.) a vegyületek egy olyan osztályát írja le és védi, melyek mátrix metalloproteináz (MMP) inhibitorok, valamint a tumor nekrózis faktor (TNF-α) sejtből történő kibocsátásának inhibitorai. Pontosan, a kérelem az (I) általános képletű vegyületekre kér védelmet, ahol
X jelentése -CO2H vagy -CONHOH csoport;
Rt jelentése hidrogénatom; 1-6 szénatomos alkil-; 2-6 szénatomos alkenil-; fenil-; szubsztituált fenil-; fenil-(1-6 szénatomos alkil)-; szubsztituált fenil-(1-6 szénatomos alkil)-; heterociklil-; szubsztituált heterociklil-; heterociklil-(1-6 szénatomos alkil)-; szubsztituált heterociklil-(1-6 szénatomos alkil)-csoport; egy BSOnA- képletű csoport, ahol n értéke 0, 1 vagy 2
- 2 és B jelentése hidrogénatom vagy egy 1-6 szénatomos alkil-, fenil-, szubsztituált fenil-, heterociklil-, 1-6 szénatomos acil-, fenacil- vagy szubsztituált fenacil-csoport, és A jelentése 1-6 szénatomos alkil-; amino-; védett amino-; acilamino-; -OH; -SH; 1-6 szénatomos alkoxi-; 1-6 szénatomos alkilamino-; di(1-6 szénatomos alkilamino)-; 1-6 szénatomos alkiltio-; aril-(1-6 szénatomos alkil)-; amino-(1-6 szénatomos alkil)-, hidroxi-(1-6 szénatomos alkil)-, merkapto-(1-6 szénatomos alkil)- vagy karboxi-(1-6 szénatomos alkil)-csoport, ahol az amino-, hidroxil-, merkapto- vagy karboxilcsoport tetszőlegesen védett illetve a karboxilesöpört amidéit; vagy karbamoil-, mono-(alacsony szénatomszámú alkil)-karbamoil, di-(alacsony szénatomszámú alkil)-karbamoil, di-(alacsony szénatomszámú alkil)amino- vagy karboxi-(alacsony szénatomszámú alkanoilamino-csoporttal szubsztituált alacsony szénatomszámú alkilcsoport.
R2 jelentése 1-6 szénatomos alkil-, 2-6 szénatomos alkenil-, 2-6 szénatomos alkinil-, fenil-(1-6 szénatomos alkil)-, heteroaril-(1-6 szénatomos alkil)-, cikloalkil-(1 -6 szénatomos alkil)- vagy cikloalkenil-(1-6 szénatomos alkil)-csoport, melyek bármelyike tetszőlegesen egy vagy két szubsztituens tartalmazhat az alábbiak közül: 1-6 szénatomos alkil-, -O-(16 szénatomos alkil)-, -S-(1-6 szénatomos alkil)-csoport, cianocsoport (-CN) illetve halogénatom;
R3 jelentése egy természetes vagy mesterséges a-aminosav jellemző csoportja, mely aminosavban bármely funkciós csoport védve lehet;
- 3 R4 jelentése egy fenil- illetve egy 5- vagy 6-tagú heteroaril-gyűrű, amelyben bármely gyűrű-nitrogénatom oxidált állapotban lehet N-oxidként, mely gyűrű tetszés szerint kondenzálódhat egy benzolgyűrűhöz vagy egy 5-, 6- vagy 7-tagú heterociklusos gyűrűhöz, és amelyben a gyűrűk bármelyike tetszőlegesen az alábbi szubsztituenseket tartalmazhatja:
(a) egy vagy több szubsztituens, melyeket egy mástól függetlenül a hidroxilcsoport, halogénatom, -CN, -CO2H, -CO2-(1-6 szénatomos alkil)-, -(1-6 szénatomos alkil)-CO2-(1-6 szénatomos alkil)-,CONH2, -CONH-(1-6 szénatomos alkil)-, -CON-(1-6 szénatomos alkil)2-, -CHO, -CH2OH, 1-4 szénatomos perfluoralkil-, -0-(1-6 szénatomos alkil)-, -S-(1-6 szénatomos alkil)-, -S0-(1-6 szénatomos alkil)-, SO2-(1-6 szénatomos alkil)-, -N02, -NH2, -NH-(1-6 szénatomos alkil)-, -N-(1-6 szénatomos alkil)2-, és -NHC0-(1-6 szénatomos alkil)-csoport, vagy (b)egy csoport, melyet az 1-6 szénatomos alkil-, 2-6 szénatomos alkenil-, 2-6 szénatomos alkinil-, 3-8 szénatomos cikloalkil-, 4-8 szénatomos cikloalkenil-, fenil-, benzil-, heteroaril- vagy heteroarilmetil-csoport közül választunk, melyek bármelyike tetszőlegesen egy vagy több szubsztituenst tartalmazhat az alábbiak közül: halogénatom, hidroxil-, amino-, karboxil-, 1-4 szénatomos perfluoroalkil-, 1-6 szénatomos alkil-, -0-(1-6 szénatomos alkil)vagy -S-(1-6 szénatomos alkil)-csoport.
- 4 R5 jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport; vagy e vegyület sója, hidrátja vagy szolvátja.
A találmány rövid leírása
Az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid a vegyületek egy olyan osztályának tagja, melyet a WO 95/19956 sz. szabadalmi kérelemben általánosan leírnak és levédenék, de se magát az osztályt, sem annak tulajdonságait nem jellemzik közelebbről.
A WO 95/19956 sz. szabadalmi kérelem azt állítja, hogy a közölt vegyületosztályban az aromás vagy heteroaril R4 szubsztituens általában azzal a váratlan és kívánatos hatással rendelkezik, hogy az ismert vegyietekkel összehasonlítva, melyek hasonló szerkezetűek, de eltérő (általában metil) R4 szubsztituenst tartalmaznak, növekvő aktivitással bír a stromelizinnel szemben, míg a kollagenázzal és a zselatinázzal szemben az aktivitása hasonló. Ezen osztály tagjaként a kiválasztott N1-[2,2-dimetil1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxiszukcinamid szintén rendelkezik ezekkel a tulajdonságokkal.
Mindazonáltal, ismert, hogy egyes állatokban és humán betegekben bizonyos MMP inhibitorok mellékhatásaként izom- és csontfájdalom (melyet néha “tendinitis”-nek is neveznek) lép fel az ízületekben, például a váll ízületben, ha magas és/vagy hosszantartó dózisban kapják a fenti ve
- 5 gyületeket. Bár úgy sejtik, hogy ez a hatás gyakorlatilag reverzibilis a szer szedésének abbahagyása után, mégis egy nemkívánatos hatás. A fájdalom keletkezésének mechanizmusát még nem értjük, és eddig még nem sikerült összefüggésbe hozni a vegyület fájdalomkiváltó hajlamát a molekula szerkezeti jellegzetességeivel vagy enzimgátló profiljával. Ennek megfelelően, ma még nem lehet előre megjósolni, hogy egy adott MMP inhibitor okoz-e mellékhatást, és ha okoz, milyen súlyosságban, ezért empirikusan kell tesztelni a molekulákat.
Azt találták, hogy a kiválasztott N1-[2,2-dimetil-1 S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid igen csökkent hajlandóságot mutat az izom- és csontfájdalomként jelentkező mellékhatás kiváltására. Ebből a szempontból különbözik közeli szerkezeti analógjaitól, például az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-3-ilkarbamoil)-propil]-N4hidroxi-2R-izobutil-3S-hidroxi-szukcinamidtól, mely sokkal nagyobb mértékben váltja ki e mellékhatást.
A WO 95/19956 sz. szabadalmi kérelem azt is állítja, hogy az arilamid MMP inhibitorok közölt osztálya olyan vegyületeket is tartalmaz, melyek szájon keresztül történő bevétel esetén biológiailag hasznosíthatók. Azonban a WO 95/19956 sz. szabadalmi kérelemben szereplő vegyületek közül nem mindegyik hasznosítható megfelelő mértékben biológiailag szájon keresztül történő bevétel esetén, amint azt például a szert szájon keresztül szedő állatok vérében található hatóanyagszinthez rendelhető MMP
- 6 inhibitor-aktivitás csúcsszintje vagy az aktivitásszint időbeli változása (“görbe alatti terület”) bizonyítja. Azt találták, hogy a jelen találmánynak megfelelően választott vegyület, az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid szájon át szedve biológiailag hasznosítható emberben és más emlősökben.
Ez a kombináció, mely a szájon át történő szedés melletti biológiai hasznosíthatóságot és a tendinitikus mellékhatások kiváltásának csökkent hajlamát ötvözi, magában foglalja azt, hogy a találmány szerinti vegyület viszonylag széles terápiás hatókörrel rendelkezik olyan betegségek kezelésében, melyek az MMP inhibitorok közepes vagy hosszabb ideig tartó szedését kívánják meg. A vegyület ennek megfelelően javallt például a reumás arthritis, a rákos daganatok, a sclerosis multiplex (MS), a GuillainBarre szindróma (GBS) és a psoriasis kezelésében.
A találmány részletes leírása
A jelen találmány tárgyát a (II) képletű N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, valamint gyógyszerészetileg elfogadható sói, hidrátjai és szolvátjai képezik.
A találmány szerinti vegyület három aszimmetriás szénatomot tartalmaz, melyek sztereokémiái konfigurációját a vegyület neve előtt adjuk meg, és a (II) ábrán ábrázoljuk. Mindazonáltal, figyelembe kell vennünk, hogy a találmány a (II) vegyület enantiomereinek keverékét is magában
- 7 - : ···.
*, · fc t » · * · · foglalja, feltéve, hogy a megjelölt enantiomer túlsúlyban van. Az ilyen enantiomer-keverékek előnyösen 90%-ban (tömeg%) vagy annál nagyobb arányban tartalmazzák a megjelölt enantiomert.
A találmány szintén tartalmazza azokat a gyógyszerészeti összetételeket, melyek az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamidot vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sóját, hidrátját vagy szolvátját egy gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal együtt tartalmazzák. A találmány szerinti előnyös összetételek azok, melyek alkalmasak szájon át történő bevitelre.
A találmány továbbá tartalmazza az N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sója, hidrátja vagy szolvátja felhasználását emlősök, köztük emberek esetén a reumás arthritis, a rákos daganatok, a sclerosis multiplex (MS), a Guillain-Barre szindróma (GBS) és a psoriasis kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására.
A találmány szintén tartalmaz egy eljárást a reumás arthritis, a rákos daganatok, a sclerosis multiplex (MS), a Guillain-Barre szindróma (GBS) és a psoriasis kezelésére emlősök, köztük emberek esetén, mely eljárás során az emlősnek az N1-[2,2-dimetil-1 S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sója, hidrátja vagy szolvátja olyan mennyiségét adjuk be, mely
- 8 Wt * elegendő ezen betegségek tüneti és/vagy patológiás megjelenésének csökkentésére.
A találmány szerinti vegyület sói közé tartoznak a fiziológiailag elfogadható savaddíciós sók, például a hidroklorid-, hidrobromid-, szulfát-, metánszulfonát-, ρ-toluolszulfonát-, foszfát-, acetát-, citrát-, szukcinát-, laktát-, tartarát-, fumarát- és maleát-sók. Sók képezhetők bázisokkal is, például nátrium-, kálium-, magnézium- és kalcium-sók.
A találmány szerinti kiválasztott vegyületet a továbbiakban következő példában leírt módon állíthatjuk elő és bármilyen eljárással alkalmassá tehetjük a bevételre, mely összhangban van farmakokinetikai tulajdonságaival. A szájon át bevehető összetételek lehetnek tabletta, kapszula, por, szemcse, elszopogatható tabletta alakban, folyadék- vagy gélkészítmény, mint orális, topikális vagy steril parenterális oldat vagy szuszpenzió formájában. A szájon át bevehető tabletták és kapszulák lehetnek egységnyi dózist tartalmazó alakban és tartalmazhatnak hagyományos kötőanyagokat, mint tapadást elősegítő anyagok, töltőanyagok, tabletta-nedvesítők, szétesést elősegítő anyagok vagy elfogadható nedvesítőszerek. A tablettákat a szokásos gyógyszerészeti gyakorlatban jól ismert eljárásokkal vonhatjuk be. Az orális folyadékkészítmények lehetnek például vizes vagy olajos szuszpenziók, oldatok, emulziók, szirupok vagy elixírek, illetve lehetnek por alakban, felhasználás előtt vízzel vagy más alkalmas segédanyaggal történő oldat- illetve szuszpenziókészítés céljára. Az ilyen folyadékkészítméV *» ··'»'* Ml ~ V · * » * ·
- 9 - -?· ./ ·«··* ·&.· •«e* nyék tartalmazhatnak hagyományos adalékokat, mint a szuszpendálószerek, emulgeálószerek, nem-vizes oldószerek (melyek közé tartozhatnak az étkezési olajok), tartósítószereket, és ha kívánatos, hagyományos ízesítőanyagokat és színezékeket.
A hatóanyagot parenterálisan is beadhatjuk egy steril közegben. Az alkalmazott oldószertől és koncentrációtól függően a gyógyszer lehet szuszpendálva vagy oldva az oldószerben. Az adjuvánsok, mint a helyi érzéstelenítők, tartósítószerek és pufferoló vegyületek lehetnek oldva az oldószerben.
A találmány szerinti vegyület dózisa bármely adott klinikai javallat és a beadás adott módja esetén klinikai vizsgálatok során határozható meg a megfelelő hatóságok elfogadási szabályainak szokásos gyakorlatának megfelelően. Általánosan, várható, hogy emberek esetén a gyógyszert szájon át adjuk be, 5 és 100 mg közötti dózisegységenként, naponta kéthárom alkalommal.
A következő példa a találmány szerinti vegyület előállítását szemlél teti. A kiindulási anyagokat, a 2R-(2,2-dimetil-5-oxo-[1,3]-dioxolan-4S-il)-4-metil-pentánsavat és az L-terc-leucin-N-(2-piridil)-amidot a WO 95/19961 sz. szabadalmi kérelemben leírtak alapján állítjuk elő.
-10A példában a következő rövidítéseket használjuk:
DMF N,N-dimetilformamid
EDO N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid-hidroklorid
HOBt 1-hidroxi-benzotriazol
NMM N-metilmorfolin
THF tetrahidrofurán
PÉLDA
N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil1-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid
A. lépés:
2S-hidroxi-3R-izobutil-borostyánkősav-dimetilészter
2R-(2,2-dimetil-5-oxo-[1,3]-dioxolan-4S-il)-4-metil-pentánsavat (75.0 g, 0.326 mmól) feloldunk metanolban (500 ml) és lehűtjük 0°C-ra, majd a keletkezett oldatot hidrogén-klorid gázzal telítjük. A reakcióelegyet hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni és éjszakán át keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot feloldjuk diklórmetánban, majd egymás után telített nátrium-hidrogénkarbonáttal és telített sóoldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítjuk, leszűrjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, így a címvegyületet kapjuk sárga olaj formájában (53 g, 75%). 1H-NMR; δ (CDCI3);
4.10 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.60 (3H, s), 3.50 (3H, s), 3.18 (széles s), 2.78 (1H, m), 1.61-1.40 (2H, m), 1.28 (1H, m), és 0.76-0.73 (6H, m).
B. lépés
2R-izobutil-3S-metoxi-borostyánkősav-dimetilészter
2S-hidroxi-3R-izobutil-borostyánkősav-dimetilésztert (23.9 g, 110 mmól) feloldunk DMF-ban (200 ml) és desztillált jódmetánt (8.2 ml, 132 mmól), majd ezüst(l)-oxidot (27.95 g, 121 mmól) adunk hozzá. A reakcióelegyet 7 napig keverjük szobahőmérsékleten, fénytől elzárva. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, a maradékot oszlopkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, diklórmetán eluens), így a címvegyületet kapjuk viszkózus sárga olaj alakjában (19.16 g, 75%). 1H-NMR; δ (CDCI3); 3.83 (1H, d, J = 7.5 Hz), 3.71 (3H, s), 3.62 (3H, s), 3.30 (3H, s), 2.85 (1H, m), 1.651.39 (2H, m), 1.10 (1H, m), és 0.83-0.81 (6H, m).
C. lépés
Dilítium-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinát
Lítium-hidroxidot (1.76 g, 42.0 mmól) hozzáadunk 2R-izobutil-3Smetoxi-borostyánkősav-dimetilészter (4.70 g, 20.0 mmól) metanol (30 ml) és víz (30 ml) elegyében felvett oldatához. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük két órán át, ekkor az oldószereket csökkentett nyomáson eltávolítjuk, így a címvegyületet kapjuk sárga szilárd anyag formájában
- 12(4.40 g, kvantitatív). 1H-NMR; δ (CD3OD); 3.52 (1H, d, J = 5.1 Hz), 3.27 (3H, s), 2.65 (1H, m), 1.56-1.53 (2H, m), 1.31 (1H, m), és 0.82-0.78 (6H, m).
D. lépés
2R-izobutil-3S-metoxi-borostyánkősav-4-metilészter
Dilítium-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinátot (25.14 g, 116 mmól) feloldunk vízmentes THF-ban (150 ml) és az oldatot 0°C-ra hűtjük. Trifluorecetsav-anhidridet (30 ml) adunk hozzá és az elegyet 0°C-on keverjük további 4 órán át. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot feloldjuk vízmentes metanolban (200 ml) 0°C-on, majd az oldatot éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk, így a címvegyületet kapjuk sárga olaj formájában (54.3 g, beleértve 2 ekvivalens lítium-trifluoracetátot is), melyet további tisztítás nélkül használunk fel az E. lépésben. 1H-NMR; δ (CD3OD); 7.71 (1H, d, J = 7.5 Hz), 3.65 (3H, s), 3.24 (3H, s), 2.72 (1H, m), 1.56-1.42 (2H, m), 1.06 (1H, m), és 0.81-0.79 (6H, m).
E. lépés
3R-r2,2-dimetil-1S-(piridilkarbamoil)-propilkarbamoil1-2S-metoxi-5metil-hexánsav-metilészter
A D. lépés termékét (25.06 g, 53.7 mmól 2R-izobutil-3S-metoxiborostyánkősav-4-metilészterrel ekvivalens) feloldjuk DMF-ban (200 ml) és az oldatot 0°C-ra hűtjük, míg a HOBt-t (8.70 g, 53.7 mmól) és az EDC-t (12.35 g, 64.4 mmól) hozzáadjuk. Az elegyet keverés közben hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni 2 óra alatt. Az így képződött aktív észter oldatát lehűtjük 0°C-ra, L-terc-leucin-N-(2-piridil)-amidot (11.11 g, 53.7 mmól) adunk hozzá és az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot feloldjuk etilacetátban. Az oldatot egymás után mossuk 1M nátrium-karbonát oldattal és telített sóoldattal, vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítjuk, leszűrjük és szárazra pároljuk. A maradékot oszlopkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 0-5% között változó metanol-gradiens diklórmetánban), így a címvegyületet kapjuk fehér szilárd anyag formájában (13.41 g, 61%). 1HNMR; δ (CDCI3): 9.61 (1H, s), 8.47 (1H, m), 8.24 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.74 (1H, m), 7.07 (1H, m), 6.97 (1H, d, J = 8.9 Hz), 4.64 (1H, d, J = 8.9 Hz), 4.01 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.76 (3H, s), 3.41 (3H, s), 2.75 (1H, m), 1.79 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.11 (1H, m), 1.02 (9H, s), 0.84 (3H, d, J = 6.3 Hz) és 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz).
F. lépés
Lítium-3R-í2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propilkarbamoil1-2Smetoxi-5-metil-hexanoát
3R-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propilkarbamoil]-2S-metoxi5-metil-hexánsav-metilésztert (13.4 g, 32.9 mmól) feloldunk THF (265 ml) és víz (65 ml) keverékében, és lítium-hidroxid-monohidrátot (1.396 g, 33.3 mmól) adunk hozzá. Az oldatot két órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, így egy sárga olajat kapunk, melyet tovább szárítunk toluollal történő azeotrópos elegy képzésével. A terméket (13.4 g, oldószermaradványokat tartalmaz) azonnal felhasználjuk további tisztítás nélkül. 1H-NMR; δ (CD3OD, 3.5:1 arányú diasztereomerkeverék): 8.31 (1H, m), 7.99 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.66 (1H, m), 7.00 (1H, m), 4.49 (0.23H, s; kisebb arányban jelen lévő diasztereomer), 4.37 (0.77H, s, nagyobb arányban jelen lévő diasztereomer), 3.52 (0.77H, d, J = 7.6 Hz, nagyobb arányban jelen lévő diasztereomer), 3.21 (0.69H, s; kisebb arányban jelen lévő diasztereomer), 3.20 (2.31 H, s, nagyobb arányban jelen lévő diasztereomer), 2.64 (1H, m), 1.53 (2H, széles m), 1.18 (1H, m), 1.01 (9H,s) 0.85 (3H, d, J = 6.4 Hz) és 0.81 (3H, d J = 6.3 Hz).
G. lépés
N4-benziloxi-N1-í2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil1-2Rizobutil-3S-metoxi-szukcinamid
Az F. lépés termékét (13.4 g, kb.33 mmól) feloldjuk vízmentes DMFban (250 ml) majd argonatmoszférába helyezzük és -10°C-ra hűtjük keverés közben. Etil-kloroformátot (3.47 ml, 36 mmól) adunk hozzá cseppenként, majd NMM-t (1.8 ml, 16.5 mmól). Az elegyet 30 percig keverjük, mielőtt cseppenként hozzáadunk O-benzil-hidroxilamint (6 g, 49 mmól) DMFban (10 ml). A reakcióelegyet hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni és éjszakán át keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot etil-acetát és telített sóoldat között megosztjuk. A szerves fázist 1M nátrium-karbonát oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk, leszűrjük és bepároljuk. A maradékot flash kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 5% metanol diklórmetánban). A kívánt terméket tartalmazó frakciókat összeöntjük és bepároljuk. A terméket dietil-éterrel elmorzsoljuk, hogy a nyomnyi színes szennyeződést eltávolítsuk. Termelés: 9.44 g (58%, >10:1 arányú diasztereomer-elegy). 1H-NMR; δ (CDCI3, a nagyobb arányban jelen lévő diasztereomerre) 10.26 (1H, s), 9.93 (1H, s), 8.32 (1H, m), 8.23 (1H, d, J = 8.2 Hz), 7.63 (1H, m), 7.25 (5H, m), 7.12 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.02 (1H, m), 4.94 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.76 (2H, d, J = 3.8 Hz), 3.88 (1H, d, J = 5.5 Hz), 3.32 (3H, s), 2.91 (1H, m), 1.72 (1H, m), 1.55 (1H, m),
1.35 (1H, m), 1.02 (9H, s), 0.89 (3H, d, J = 6.5 Hz) és 0.85 (3H, d, J = 6.5 Hz).
H. lépés
N1-f2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propill-N4-hidroxi-2Rizobutil-3S-metoxi-szukcinamid
N4-benziloxi-N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-2Rizobutil-3S-metoxi-szukcinamidot feloldunk metanol (75 ml) és etanol (75 ml) keverékében és argonatmoszféra alá helyezzük. 10% palládiumot tartalmazó aktív szenet adunk hozzá és hidrogéngázt buborékoltatunk keresztül az oldaton 2 órán át, mely idő alatt TLC-analízissel bizonyítva valamennyi kiindulási anyag elfogy. A rendszert átöblítjük argonnal és a katalizátort szűréssel eltávolítjuk. Az oldószereket csökkentett nyomáson eltávolítjuk, így a címvegyületet kapjuk fehér szilárd anyag formájában (8.8 g, kvantitatív; 12:1 arányú diasztereomer-keverék). Op.: 163-164°C. 1H-NMR; δ ((CD3)2SO): 10.67 (1H, s), 10.13 (1H, s), 8.90 (1H, s), 8.15 (1H, m), 7.89 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.81 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.60 (1H, m), 6.93 (1H, m), 4.53 (0.12H, d, J = 9.4 Hz), 4.43 (0.88H, d, J = 8.8 Hz), 3.74 (0.12H, d, J = 10.0 Hz), 3.32 (0.88H, d, J = 9.8 Hz), 2.98 (0.3H, s), 2.96 (2.64H, s), 2.78 (1H, m), 1.23 (2H, m), 0.84 (10H, s és m), 0.65 (3H, d, J = 6.4 Hz) és 0.56 (3H, d, J = 6.3 Hz). 13C-NMR; δ (CD3OD), 172.6, 170.0, 166.0, 151.5,
147.9, 136.0, 119.5, 113.6, 61.2, 60.6, 56.7, 46.2, 37.0, 34.0, 26.5, 25.2, 23.7 és 21.7. IR: vmax (KBr): 3255, 2957, 1700, 1645, 1524, 1467, 1435, 1370, 1301, 1213 és 1152 cm'1. Számított elemi összetétel C20H32N4O5 . 0.2 H2O esetén: C 58.40, H 7.92, N 13.61%. Talált értékek: C 58.29, H 7.92, N 13.60%.
A. biológiai példa
A találmány szerinti vegyület hatékonyságát a szövetek közötti kollagenáz inhibitoraként Cawston és Barrett, (Anal. Biochem., 99. 340345, 1979) módszerével határozzuk meg, mely szerint a vizsgálni kívánt vegyület 1 mM oldatát, vagy annak hígítását 37°C-on kollagénnel és kollagenázzal (melyet 5 mM CaCI2-ot, 0.05% Brij 35-öt és 0.02% NaN3-ot tartalmazó 25 mM HEPES, pH 7.5 oldattal pufferolunk) együtt inkubáljuk 16 órán keresztül. A kollagén acetilezett 14C-kollagén, melyet Cawston és Murphy (Methods in Enzymology, 80, 711, 1981) módszere szerint állítunk elő, melyet itt hivatkozásként említünk. A mintákat lecentrifugáljuk, hogy az emésztetlen kollagén leülepedjen, és a radioaktív felülúszót eltávolítjuk szcintillációs számlálóban történő mérés céljára, mellyel a hidrolízis mértékét határozzuk meg. A tesztvegyület 1 mM koncentrációja illetve annak hígítása jelenlétében mért kollagenáz aktivitást összehasonlítjuk az inhibitort nem tartalmazó kontroll minta aktivitásával és az eredményeket az alábbi
-18akban tüntetjük fel a kollagenáz aktivitás 50%-ának gátlását előidéző inhibitor-koncentráció megadásával (IC50).
A találmány szerinti vegyület hatékonyságát a stromelizin-1 inhibitoraként Cawston et al., (Biochem. J·, 195, 159-165, 1981) módszere szerint határozzuk meg, ahol a vizsgálni kívánt vegyület 1 mM oldatát, vagy annak hígítását 37°C-on stromelizinnel és 14C-acetilezett kazeinnel (melyet 5 mM CaCI2-ot, 0.05% Brij 35-öt és 0.02% NaN3-ot tartalmazó 25 mM HEPES, pH 7.5 oldattal pufferolunk) együtt inkubáljuk 16 órán keresztül. A kazein a Cawston et al., (fent idézett munka) eljárása szerint előállított 14Cacetilezett kazein. A tesztvegyület 1 mM koncentrációja illetve annak hígítása jelenlétében mért stromelizin aktivitást összehasonlítjuk az inhibitort nem tartalmazó kontroll minta aktivitásával és az eredményeket az alábbiakban tüntetjük fel a stromelizin aktivitás 50%-ának gátlását előidéző inhibitor-koncentráció megadásával (IC50).
A találmány szerinti vegyület hatékonyságát a 72 kDa zselatináz inhibitoraként a Sellers et al., (Biochem. J.. 171, 493-496, 1979) módszerén alapuló eljárás szerint határozzuk meg. A 72 kDa zselatinázt RPMI-7951 sejtekből nyerjük és zselatin-agaróz kromatográfiéval tisztítjuk. Az enzimet aminofenil-higany-acetáttal történő inkubálással aktiváljuk, és körülbelül 0.05 egységnyi mennyiséget 50 pg [14C]-radiojelzett zselatinnal inkubálunk egy megfelelő pufferban 16 órán keresztül 37°C-on. Az inkubációs idő el-
-le teltével 50 pg borjú szérumalbumint és triklórecetsavat (végkoncentráció 16%) adunk az elegyhez a reakció leállítására és a lebontatlan szubsztrát kicsapására. A reakciócsöveket jégre helyezzük 15 percre, majd 10,000 g fordulatszámmal 15 percig centrifugáljuk, hogy a kicsapódott szubsztrát kiülepedjen. A reakcióelegy felülúszójából 200 μΙ-t kiveszünk és a radioaktivitását szcintillációs számlálóval megmérjük. Az inhibitorok hatását egy dózis-válasz görbével történő összehasonlítással határozzuk meg. Az IC50 értéket (az az inhibitorkoncentráció, mely az enzimaktivitás 50%-os csökkenéséhez szükséges) az adatokhoz történő görbeillesztéssel és az enzimaktivitás 50%-ának gátlásához szükséges inhibitorkoncentráció kiszámolásával határozzuk meg. Minden IC50 meghatározásához az inhibitor legalább 8 koncentrációját vizsgáljuk. Az inhibitorokat DMSO-ban oldjuk fel és hígítjuk.
A találmány szerinti vegyülettel végzett fenti vizsgálatok eredményei a következők:
Enzim ICS0(nM) kollagenáz10 kDa zselatináz70 stromelizin30
B. biológiai példa
A laboratóriumi állatokkal végzett vizsgálatokban a találmány szerinti vegyület beadása után mérjük az állatok vérében a tesztvegyület koncent-20rációjának időbeli változását. A vegyületet gyomorszondán keresztül kezelési csoportonként 6 hím (300 g súlyú) patkánynak adjuk be. A vérmintákat a farokvénából történő vérvétellel nyerjük a beadás után 0.5, 1.0, 2.0, 6.0 és 24 órával. 0.4 ml vért 4.5 ml-es csövekbe helyezünk, melyek 0.1 ml savas citrát-dextrózt (ACD) tartalmaznak véralvadásgátlóként. Az extraháláshoz 3 ml metanolt adunk a csövekhez és a kicsapódott vért centrifugálással ülepítjük (30 perc 3000 fordulat/perc sebességgel). A felülúszó 2 ml-es alikvotját eltávolítjuk és liofilezéssel betöményítjük. Az extraktumot feloldjuk 200 μΙ DMSO-ban és egy 10 μΙ-es alikvotot felhasználunk a klllagenázinhibitor aktivitás meghatározásához. Az extraktumok kollagenáz-inhibitor aktivitását a fenti A. biológiai példában említett kollagenáz-mérés felhasználásával határozzuk meg, az inhibitor (azaz a gyógyszer és bármely aktív metabolitja) koncentrációját standard görbékkel történő összehasonlítással kapjuk meg. Az eredményeket ng/ml-ben kifejezett csúcskoncentrációként, a görbe alatti területként (AUC) ng/ml x óra egységben kifejezve 0.5 és 24 óra között, valamint a görbe alatti területként az IC50-ek száma x óra egységben kifejezve adjuk meg.
Eredmények
Csúcskonc.
ng/ml
212
-21 AUC (0.5-24 óra) ng/ml x óra 2966
AUC (0.5-24 óra)
IC50-ek száma x óra
674
A találmány szerinti vegyületet szájon keresztül történő beadás mellett szintén teszteljük fehér selyemmajmokon és egészséges önkéntes embereken, és jelentős inhibitoraktivitási szinteket találunk ezen alanyok vérében ilyen beadás után.
C. biológiai példa
A találmány szerinti vegyületet két rákos állatmodellen teszteljük és aktívnak találjuk:
B16 egér melanoma modell
Ebben a modellben C57/BL6J egerek bőre alá 105 B16 egér melanoma sejtet injektálunk. A tumorokat 18 napig hagyjuk nőni, a tumor tömegét kalibráló mérések és a következő képlet segítségével számítjuk ki: tömeg (mg) - hossz (mm) x szélesség (mm) + 4. Az egerek egy csoportja (n=19) a vizsgálandó vegyületet kapja, melyet a B16 tumorral átellenes oldallágyék bőre alá ültetett miniatűr ozmotikus pumpa juttat a szervezetükbe. A pumpát a tumor injektálása előtti napon ültetjük be és a vegyületet 360 pg/nap adagban juttatjuk az egerekbe. A kontrollcsoport (n=17) a
-22megfelelő hordozóanyag azonos térfogatát kapja azonos beültetett pumpák segítségével.
A 18. napon a kontroli-tumorok átlagtömege 1145 ± 97 mg (a 15. ábrán látható). A vegyülettel kezelt tumorok átlagtömege 774 ± 50 mg. Ez a csökkenés (32%-os a tesztvegyület esetében) szignifikáns (p < 0.005). A vizsgálat végén vett minták mérése azt mutatja, hogy a plazmaszint 26.8 ± 3.2 ng/ml a tesztvegyület esetében.
MDA-435 emlő-karcinóma modell
Ebben a modellben az állatokba MDA-435 sejteket injektálunk (105 sejt/egér), a tumorokat négy napig hagyjuk nőni, ekkor az állatokat a tumor tömege szerint három kezelési csoportba osztjuk (n = 15 csoportonként). Az 5. napon minipumpákat ültetünk be sebészeti úton, melyek vagy a hordozót, vagy a tesztvegyületet tartalmazzák 15 mg/ml illetve 60 mg/ml koncentrációban (180 illetve 720 pg/egér/nap mennyiségben juttatják a vegyületet az állatba). A pumpákat a 19. napon újakra cseréljük és a vizsgálatot a 32. napon fejezzük be. A tumornövekedés dózisfüggő gátlását figyelhetjük meg, 19%-os gátlással a 180 pg/egér/nap dózisnál, és 33%-os gátlással a 720 pg/egér/nap dózisnál. A gátlás a magasabb dózisnál statisztikailag szignifikáns (p < 0.005). A vizsgálat végén vett minták mérése
-234*· azt mutatja, hogy a plazmaszint 99 ± 6 ng/ml és 136 ± 42 ng/ml a tesztvegyület alacsony és magas dózisát kapó csoport esetében.
D. biológiai példa
A találmány szerinti vegyületnek azon hajlamát teszteljük, hogy okoze megfigyelhető, tendinitisre utaló jeleket patkányokban. A találmány szerinti vegyület (“A vegyület”) tendinitist okozó hatását patkányokban összehasonlítjuk egy közeli szerkezeti izomer, nevezetesen az N1-[2,2-dimetil1S-(piridin-3-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-hidroxiszukcinamid (“B vegyület”) hasonló hatásával.
Hím Lewis patkányokat használunk. Minden vizsgálatnál 30 patkányt lemérünk és testsúly szerint csoportokba osztjuk, n=6/csoport. Minden vizsgálatban egy megfelelő hordozót kapó kontrollcsoportot vizsgálunk a kezelt csoportokkal párhuzamosan.
Az A vegyületet a mezilát-só alakjában használjuk beadásra, míg a B vegyületet a szabad bázis alakban adjuk be. Az A vegyület 15 mg/ml-es oldatánál a hordozó 50% DMSO, 37% 0.1 M metánszulfonsav, 13% steril víz; a 30 mg/ml-es oldatánál a hordozó 50% DMSO, 37% 0.2 M metánszulfonsav, 13% steril víz. A B vegyület 15 mg/ml-es oldatánál a hor dozó 50% DMSO/víz.
-24- · ···:·
Alzet (márkanév) ozmotikus minipumpákat (2ML2, 14 napos, δμΙ/óra kapacitással az Alza Corp.-tól, Palo Alto CA 94303) lemérünk üresen és telítve, hogy megbizonyosodjunk a pontos töltési térfogatról. A beültetés előtt a megtöltött pumpákat 37°C-os inkubátorba helyezzük. Valamennyi patkányt halothannal altatjuk el. Amint az állatok elalszanak, a bőrüket a kívánt helyen leborotváljuk és fertőtlenítjük. Egy hosszanti, kb. 2 cm-es bevágást ejtünk az előkészített bőrön, és egy bőr alatti zsebet alakítunk ki két érszorító segítségével. A minipumpákat behelyezzük úgy, hogy a pumpa kimenete a sebbel átellenes oldalon helyezkedik el. A vágott sebet varratokkal összezárjuk és a seb körüli területet újra fertőtlenítjük. A műtét után közvetlenül valamennyi patkány fájdalomcsillapítót kap (Temgesickereskedelmi márka- Reckitt and Colman), 0.1 mg/kg dózisban bőr alá az oldallágyékba. Az altatásból való ébredés után az állatokat visszahelyezzük a ketrecekbe, melyek száraz almot tartalmaznak, hogy biztosítsuk a seb pormentességét a gyógyulásig. A műtétet követő napon valamennyi patkányt visszahelyezzük standard alomra és 3-as csoportokba osztjuk, hogy a tendinitis jeleit pontosabban megfigyelhessük.
A minipumpák beültetését követően a patkányokat lemérjük és figyeljük az esetlegesen fellépő tendinitis jeleit. A tendinitis megjelenését és súlyosságát egy megfigyelésen alapuló pontozásos rendszerrel értékeljük. A patkányokat 16 napon keresztül naponta megfigyeljük. A 2-nél nagyobb
átlagértékeket tartjuk szignifikánsnak. Az alkalmazott pontozási rendszer a következő:
| Támaszkodás: | Ha mozgásra késztetjük az állatot: | ||
| normális | 0 | normálisan mozog | 0 |
| egy lábon támaszkodik | 1 | kelletlenül mozog | 1 |
| egy lábon sem támaszkodik | 2 | közepesen kelletlenül mozog | 2 |
| nagyon kelletlenül mozog | 3 |
Testtartás normális 0 nem használ egy hátsó lábat 1 nem használja egyik hátsó lábát sem 2
Az eredmény azt mutatja, hogy az A vegyületet kapott patkányok (mind a 15 mg/ml, mind a 30 mg/ml dózis esetében, valamint a csak hordozót kapott állatok is) nem mutatnak tendinitisre utaló szignifikáns jeleket, míg azok az állatok, melyek a B vegyületet kapták, a 8 naptól szignifikáns jeleket mutatnak (a 8. napon az átlagérték >2, amely a 15-16. napon 6-ra emelkedik).
Annak megerősítésére, hogy a fenti vizsgálatban az A és B vegyületet kapó patkányok plazmájában megtalálhatók a minipumpák által közvetített anyagok, a minipumpák beültetését követő 3. és 10 napon vérmin-26tákat veszünk a patkányoktól, melyeket enyhén elaltatunk halothannal a farokvénán keresztül. A vérmintákat (0.5 ml) 3.0 ml metanolt tartalmazó csövekbe helyezzük, hogy a szabad és kötött vegyületeket extraháljuk. Az A illetve B vegyület vérbeli koncentrációját fluorimetrikus eljárással határozzuk meg, a kumarin-peptid szubsztrát, Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-AlaArg-NH2 fel használásával (Mca = (7-metoxikumarin-4-il)-acetil, Dpa = N-3(2,4-dinitrofenil)-L-2,3-diaminopropil) (lásd Knight et al., FEBS Lett. 1992, 296, 263-266). A beültetést követő 16. vagy 17. napon a vizsgálat véget ér, ekkor az állatokat halothannal túlaltatjuk és vérmintákat (0.5 ml) veszünk a szívüregből, és az A illetve B vegyület vérbeli koncentrációját meghatározzuk.
E. biológiai példa
A találmány szerinti vegyület hatását vizsgáljuk a GBS egy állatmodelljében.
A kísérleti autoimmun neuritis (ΕΑΝ) a perifériás idegrendszer egy Tsejt által közvetített, autoimmun zavara. A modell rendelkezik a GBS sok patológiás jellemzőjével, például az ataxia, gyengeség és bénulás tüneteivel. Az EAN-t előidézhetjük úgy, hogy az állatokba perifériás idegekből származó mielint, vagy a mielin egy fehérjekomponensét, például 0 Fehérjét injektálunk adjuvánsban. Az EAN sérülés a gerincgyökérben és a perifériás idegekben történik, és a mononukleáris sejtek ér körüli beszűrődése,
-27az axonok demielinizációja és az idegek vezetőképességének csökkenése jellemzi. A TNFa szerepet játszik a GBS és az EAN patológiájában; a GBS-betegek vérében a TNFa-szintek megemelkednek és az anti-TNFa antitestek csökkentik a betegség súlyosságát az EAN-ben (Hartung HP. Annals of Neurology 1993;33:563-567.)
A találmány szerinti vegyületet teszteljük a patkány EAN modellben, melyben a betegség tüneteit perifériás idegek mielinjének adjuvánsban történő injektálásával váltjuk ki.
A vegyületet sebészeti úton beültetett minipumpák segítségével juttatjuk be, 15 vagy 30 mg/ml koncentrációban 5pl/óra sebességgel (lásd a D. biológiai példát), 7 illetve 14 mg/kg/nap dózisban. A vegyülettel végzett kezelés a kísérlet egész időtartama alatt, az 1.-15 napig szignifikánsan, dózisfüggő módon csökkenti a klinikai tünetek kialakulását. A vegyület akkor is dózisfüggően csökkenti a klinikai tüneteket az EAN modellben, ha terápiásán a 8.-15 napok között adjuk, 15 illetve 30 mg/ml koncentrációban, 10μΙ/óra sebességgel, tehát 14 illetve 28 mg/kg/nap dózisban.
F. biológiai példa
A találmány szerinti vegyület aktivitása az MS egy kísérleti modelljé ben:
-28Módszer
Az MS Matyszak és Perry által leírt hiperszenzitivitási modellt alkalmazzuk (Matyszak MK and Perry VH. 1995. Demyelination in the central nervous system following a delayed type hypersensitivity response to bacillus Calmette-Guerin. Neuroscience 64:967-977). Him Lewis patkányokat elaltatunk és 105 hővel elölt Calmette-Guerin bacillust (BCG) tartalmazó foszfáttal pufferolt sóoldat 1 μΙ-ét injekciózzuk a bal félteke striatumába. Az injektálást egy 27G, 10μΙ kapacitású fecskendővel végezzük, sztereotaxikusan. Az injektálás koordinátái: bregma + 1.2 mm, laterális + 3.0 mm és mélység 4.5 mm. 4 hét elteltével 200μΙ, 107 hővel elölt BCG organizmust komplett Freund adjuvánsban tartalmazó oldatot injektálunk a hátsó végtag bőrébe. Újabb 15 nap elteltével a patkányok 2750U II típusú torma-peroxidázt (HRP) tartalmazó intravénás injekciót kapnak. 30perccel ezután a patkányokat mélyen elaltatjuk nátrium-pentobarbitonáttal és a szíven keresztül 100 ml, 5000 U/l heparint tartalmazó 0.9% (w/v) NaCI oldatot, majd ezt követően 200 ml, 2% paraformaldehidet és 0.05% glutáraldehidet tartalmazó parformaldehid-lizin-perjodát fixáló oldatot (PLP) áramoltatunk át. Az állatok agyát eltávolítjuk, még egyszer fixáljuk PLP-ben további 4 órán keresztül, és 30%-os szacharózban 4°C-on éjszakán át történő áztatással védjük a fagyasztás káros hatásaitól, mielőtt egy Tissue-Tek O.C.T (miles inc Elkhart USA) készülékben beágyazzuk és folyékony nitrogénben
-29lefagyasztjuk. Koronális, szabadon lebegő 50 μΓη-es metszeteket készítünk a HRP Hanker-Yates módszerrel történő lokalizálására (Perry VH et al., 1992). Ez az eljárás egy késleltetett hiperszenzitivitási reakciót vált ki a sztereotaxikus BCG-injekció helyén, melyre jellemző a vér-agy gát lokális lebomlása, melyet a HRP ereken kívüli jelenlétére irányuló festés jelez; a limfociták beszűrődése, melyet a leukocita általános antigén magas molekulasúlyú formájára specifikus OX-22 antitesttel történő festés mutat; a leukociták aktiválása, melyet a II osztályú fő hisztokompatibilitási antigénre specifikus OX-6 antitesttel végzett festés jelez; és a mielin lebomlás, melyre a mielin bázisfehérje elleni antitesttel történő festés utal. Mindezek a jellemzők az MS-ban szenvedő betegek központi idegrendszerében található aktív sérüléseket vagy plakkokat fémjelzik. A limfociták számát úgy becsüljük meg, hogy a legintenzívebben festődött területeken megszámoljuk az OX-22 pozitív sejteket. Az egy látómezőben lévő sejtek számát feljegyezzük és sejt/mm2-ben fejezzük ki. A II osztályú MHC kifejeződésének, a vér-agy gát szivárgásának és a demielinizációnak a területét számítógépes képanalízis segítségével számítjuk ki és mm2-ben fejezzük ki.
A találmány szerinti vegyület hatását patkányokon vizsgáljuk, a vegyület 30 mg/kg dózisát naponta kétszer szájon át beadva az állatoknak, a második BCG-injekció után 5 nappal kezdve és a 15. napig folytatva. A találmány szerinti vegyületet 0.01% Tween 80-at tartalmazó foszfáttal pufferolt sóoldatban formulázzuk. A kontrollállatok csak a hordozót kapják.
-30A találmány szerinti vegyülettel kezelt állatokban a vér-agy gát szivárgásának, a II osztályú MHC kifejeződésének, a demielinizációnak a területét és a T-sejtek számát összehasonlítjuk a csak hordozóval kezelt kontrollállatok megfelelő értékeivel, a Student-féle T-teszt alkalmazásával.
Eredmények
A hordozóval kezelt állatokban a DTH-választ a vér-agy gát lebomlása, a limfociták beszűrődése, a II osztályú MHC kifejeződése és a demielinizáció jellemzi. A találmány szerinti vegyülettel kezelt állatokban jelentős csökkenés tapasztalható a vér-agy gát szivárgásának területe (p<0.05) és a beszűrődő T-sejtek száma (p<0.0001) esetén. A demielinizáció és a II osztályú MHC kifejeződése területének nagyságában is megfigyelhető csökkenés, habár ez statisztikailag nem szignifikáns.
A találmány szerinti vegyület hatása a MS DTH-modelljében:
| Hordozó | Vegyület | |
| vér-agy gát szivárgása | 6.325 ± 1.953 | 2.042 ± 0.487 |
| T-sejt beszűrődés | 851.1 ±66.5 | 341.2 ±21.9 |
| III osztályú MHC kifejeződés | 1.763 ± 0.370 | 1.318 ±0.300 |
demielinizáció
0.960 ± 0.329 0.758 ± 0.227
Az értékek középérték ± a középérték standard deviációja alakban vannak megadva.
Claims (4)
- -31 SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. A (II) képletű N1-[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sója, hidrátja vagy szolvátja.
- 2. Olyan gyógyszerészeti összetétel, mely az N1-[2,2-dimetil-1S(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamidot, vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját, hidrátját vagy szolvátját egy gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal együtt tartalmazza.
- 3. A 2. igénypont szerinti összetétel, mely alkalmas a szájon keresztül történő beadásra.
- 4. Az N1-[2,2-dimetil-1 S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sója, hidrátja vagy szolvátja felhasználása gyógyszerészeti öszszetétel készítésére a reumás arthritis, a rákos megbetegedések, a sclerosis multiplex, a Guillain-Barre szindróma vagy a psoriasis kezelésére emlősökben, beleértve az embert is.-325. Eljárás a reumás arthritis, a rákos megbetegedések, a sclerosis multiplex, a Guillain-Barre szindróma vagy a psoriasis kezelésére emlősökben, beleértve az embert is, melynek során az emlősnek az N1[2,2-dimetil-1S-(piridin-2-ilkarbamoil)-propil]-N4-hidroxi-2R-izobutil-3S-metoxi-szukcinamid, vagy annak gyógyszerészetileg elfogadható sója, hidrátja vagy szolvátja olyan mennyiségét adjuk be, mely hatásosan csökkenti a betegség tüneti és/vagy patológiás megjelenéseit.A meghatalmazott
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/GB1997/003132 WO1999025693A1 (en) | 1997-11-13 | 1997-11-13 | Metalloproteinase inhibitors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0002811A2 true HUP0002811A2 (hu) | 2001-01-29 |
| HUP0002811A3 HUP0002811A3 (en) | 2002-11-28 |
Family
ID=10807699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0002811A HUP0002811A3 (en) | 1997-11-13 | 1997-11-13 | Succinamide derivative as metalloproteinase inhibitors and pharmaceutical compositions containing it |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1030842B1 (hu) |
| JP (1) | JP2001523666A (hu) |
| KR (1) | KR100485479B1 (hu) |
| AT (1) | ATE236126T1 (hu) |
| AU (1) | AU740420B2 (hu) |
| BR (1) | BR9714934A (hu) |
| CA (1) | CA2310593C (hu) |
| DE (1) | DE69720554T2 (hu) |
| DK (1) | DK1030842T3 (hu) |
| ES (1) | ES2195122T3 (hu) |
| GB (1) | GB2333524A (hu) |
| HU (1) | HUP0002811A3 (hu) |
| IL (1) | IL135210A0 (hu) |
| NO (1) | NO315702B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ503642A (hu) |
| PL (1) | PL189542B1 (hu) |
| PT (1) | PT1030842E (hu) |
| RU (1) | RU2198164C2 (hu) |
| TR (1) | TR200001353T2 (hu) |
| TW (1) | TW474919B (hu) |
| WO (1) | WO1999025693A1 (hu) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PE20030701A1 (es) | 2001-12-20 | 2003-08-21 | Schering Corp | Compuestos para el tratamiento de trastornos inflamatorios |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2024507C1 (ru) * | 1991-11-18 | 1994-12-15 | Евгений Яковлевич Левитин | 5-хлор-2-пиридиламид-4-нитро-n-(карбоксиметил)антраниловой кислоты, проявляющий противовоспалительную активность |
| DE69502378T2 (de) * | 1994-01-20 | 1998-10-01 | British Biotech Pharm | Metalloproteinaseinhibitoren |
| WO1997003966A1 (en) * | 1995-07-19 | 1997-02-06 | British Biotech Pharmaceuticals Limited | N-(amino acid) substituted succinic acid amide derivatives as metalloproteinase inhibitors |
-
1997
- 1997-11-13 PT PT97912351T patent/PT1030842E/pt unknown
- 1997-11-13 HU HU0002811A patent/HUP0002811A3/hu unknown
- 1997-11-13 KR KR10-2000-7004964A patent/KR100485479B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-13 TR TR2000/01353T patent/TR200001353T2/xx unknown
- 1997-11-13 IL IL13521097A patent/IL135210A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-11-13 DE DE69720554T patent/DE69720554T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-13 AT AT97912351T patent/ATE236126T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-11-13 DK DK97912351T patent/DK1030842T3/da active
- 1997-11-13 BR BR9714934-9A patent/BR9714934A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-11-13 GB GB9816317A patent/GB2333524A/en not_active Withdrawn
- 1997-11-13 AU AU49584/97A patent/AU740420B2/en not_active Ceased
- 1997-11-13 ES ES97912351T patent/ES2195122T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-13 EP EP97912351A patent/EP1030842B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-13 NZ NZ503642A patent/NZ503642A/en unknown
- 1997-11-13 CA CA002310593A patent/CA2310593C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-13 PL PL97340494A patent/PL189542B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-11-13 WO PCT/GB1997/003132 patent/WO1999025693A1/en not_active Ceased
- 1997-11-13 JP JP2000521077A patent/JP2001523666A/ja not_active Withdrawn
- 1997-11-13 RU RU2000114634/04A patent/RU2198164C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-12-02 TW TW086118078A patent/TW474919B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-05-12 NO NO20002480A patent/NO315702B1/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE236126T1 (de) | 2003-04-15 |
| NO315702B1 (no) | 2003-10-13 |
| IL135210A0 (en) | 2001-05-20 |
| TW474919B (en) | 2002-02-01 |
| HUP0002811A3 (en) | 2002-11-28 |
| PT1030842E (pt) | 2003-07-31 |
| DE69720554D1 (de) | 2003-05-08 |
| EP1030842A1 (en) | 2000-08-30 |
| AU740420B2 (en) | 2001-11-01 |
| KR100485479B1 (ko) | 2005-04-27 |
| KR20010031879A (ko) | 2001-04-16 |
| ES2195122T3 (es) | 2003-12-01 |
| PL340494A1 (en) | 2001-02-12 |
| GB2333524A (en) | 1999-07-28 |
| CA2310593A1 (en) | 1999-05-27 |
| AU4958497A (en) | 1999-06-07 |
| CA2310593C (en) | 2007-05-08 |
| BR9714934A (pt) | 2000-10-03 |
| NZ503642A (en) | 2001-10-26 |
| TR200001353T2 (tr) | 2000-10-23 |
| NO20002480D0 (no) | 2000-05-12 |
| EP1030842B1 (en) | 2003-04-02 |
| PL189542B1 (pl) | 2005-08-31 |
| NO20002480L (no) | 2000-05-12 |
| GB9816317D0 (en) | 1998-09-23 |
| DE69720554T2 (de) | 2004-01-08 |
| WO1999025693A1 (en) | 1999-05-27 |
| DK1030842T3 (da) | 2003-07-28 |
| RU2198164C2 (ru) | 2003-02-10 |
| JP2001523666A (ja) | 2001-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4259615B2 (ja) | 薬物常用および特にアルコール中毒の治寮へのγ―ヒドロキシ酪酸アミドの使用 | |
| RU2126791C1 (ru) | Производные гидроксамовой кислоты, способ их получения и фармацевтическая или ветеринарная композиция на их основе | |
| JP2000516575A (ja) | インテグリンインヒビターとしてのフェニルアラニン誘導体 | |
| KR20010022499A (ko) | 메탈로프로테아제억제제로서사용되는술포닐아미노치환히드록삼산유도체 | |
| JPH06508135A (ja) | 抗変性活性剤としての置換ｎ−カルボキシアルキルペプチジル誘導体 | |
| KR20010005627A (ko) | 아릴- 또는 헤테로아릴술폰아미드 치환된 히드록삼산 유도체, 그의 제조 방법 및 약제로서의 그의 용도 | |
| JPWO2003002554A1 (ja) | ピペラジン化合物 | |
| JPH11501288A (ja) | 金属タンパク質分解酵素阻害剤 | |
| KR20030022145A (ko) | 피리딘-2-일-아미노알킬 카르보닐 글리실-β-알라닌 및이의 유도체 | |
| US3843796A (en) | Antihypertensive agents | |
| US20040024000A1 (en) | Dihydropyrimidine derivatives as cysteine protease inhibitors | |
| JP2002527350A (ja) | 発作を治療するのに有用なアミノ酸誘導体 | |
| JP3922431B2 (ja) | 可溶性ヒトｃｄ２３形成阻害剤としてのヒドロキサム酸誘導体 | |
| HUP0002811A2 (hu) | Metalloproteináz inhibitor hatású szukcinamidszármazék és ezt a vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmény | |
| JP3541230B2 (ja) | ホスホノメチルジペプチド類 | |
| RU2451013C2 (ru) | Винилогические производные кислот как ингибиторы химазы | |
| CN1125050C (zh) | 金属蛋白酶抑制剂 | |
| JP2001524522A (ja) | トロンビン阻害剤 | |
| CZ20001750A3 (cs) | Pyridylpyrrolové deriváty | |
| JPH0121129B2 (hu) | ||
| PL190637B1 (pl) | Terapeutycznie aktywne estry i tioestry, kompozycje farmaceutyczne i zastosowanie estrów i tioestrów | |
| MXPA00004642A (en) | Metalloproteinase inhibitors | |
| US5608078A (en) | Phosphonomethyldipeptides and process for preparation thereof | |
| EP1240906A1 (en) | Preventives or remedies for arrhythmia | |
| JP2002322197A (ja) | ペプチジルヒドロキサム酸誘導体およびその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FD9A | Lapse of provisional protection due to non-payment of fees |