JP2000262298A - 全血中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度の定量方法 - Google Patents

全血中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度の定量方法

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寿弘 森
Takayoshi Arai
貴喜 新井
Yoshikazu Amano
芳和 天野
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明の目的は、一体型多層化学分析素子を
用いる全血中のグルコース濃度もしくはコレステロール
濃度の定量において、ヘマトクリット値に起因する測定
誤差を確実かつ容易に補正することによって、グルコー
ス濃度もしくはコレステロール濃度を高精度に定量する
方法を提供すること。 【解決手段】 ペルオキシダーゼ、色素形成化合物及び
グルコースオキシダーゼ又はコレステロールオキシダー
ゼからなるグルコース又はコレステロール検出用発色組
成物を含有してなる一体型多層化学分析素子を用いて全
血試料中のグルコース濃度又はコレステロール濃度を定
量する方法であって、任意に定めた特定のヘマトクリッ
ト値における全血試料中のグルコース濃度又はコレステ
ロール濃度と、全血試料のヘマトクリット値とを、特定
のヘマトクリット値からのヘマトクリット値のずれに対
応するグルコース濃度もしくはコレステロール濃度のず
れの関係を示す検量線と照合して、全血試料中の当該濃
度を定量する方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一体型多層化学分
析素子を用いる全血試料に含まれるグルコース濃度もし
くはコレステロール濃度の定量において、ヘマトクリッ
ト値に起因する特有の測定誤差を確実かつ容易に補正し
たグルコース濃度もしくはコレステロール濃度の定量方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液中でのグルコース濃度およびコレス
テロール濃度は、種々の疾患・治療に重要である。それ
らの定量方法については、オキシダーゼを用いて酸化し
た場合に発生する過酸化水素を、ペルオキシダーゼの存
在下に色素の発色に導き、比色的に色素を定量する原理
に基づく湿式法と乾式法が知られている。乾式法は、湿
式法に比べて簡便性、迅速性等の点で優れており、その
分析用具としては、光透過性支持体上に少なくとも一層
の試薬層および展開層をこの順に有するフィルム状また
はシート状の一体型多層化学分析素子（特開昭５７−１
４８２５０号公報、米国特許第３２９８７８９号の明細
書等）が既に多数実用化されている。これらの一体型多
層化学分析素子は、血液や尿等の体液中のアナライトの
定量に特に有用である。
【０００３】しかし、血漿、血清、全血等の血液試料
は、試料によってヘマトクリット値（全血液に対して赤
血球が占める容積（％））、有効成分量、蛋白濃度、粘
度、脂質等に差異があり、また、経時や添加物によって
も流動その他の性状に変化が起こる多様性の試料である
ことは周知である。特に、試料が全血の場合には、ヘマ
トクリット値による影響を支配的に受ける。このヘマト
クリット値の影響は、アナライトの中では特にグルコー
スの濃度を定量する場合に大きいことが知られている。
上記の分析素子は、上述の試料の多様性に充分に対応で
きるものではなく、例えば、分析素子に試料を点着後、
素子内の発色濃度もしくは発色速度量を光透過性支持体
側から測定して得られる、単に一つの変化量または変化
速度量のみからグルコース濃度を算出する方式では、血
液試料の性状がその正常域を逸脱したものについては満
足する結果を得ることが困難である。このことは、血液
試料に関しては、遠心分離等によって全血から赤血球を
除けば解決できることであるが、特に前処理を行わずに
全血を使用できることに一体型多層化学分析素子の簡便
性があるため、充分な解決策とは言い難い。
【０００４】そこで、試料のヘマトクリット値に関わら
ず、全血中のグルコース濃度を精度良く定量するために
は、ヘマトクリット値が測定値に与える誤差を確実かつ
容易に補正する方法が必要である。
【０００５】特開昭５９−１０８９４２号公報には、ヘ
マトクリット値が測定値に与える誤差を補正する過程を
含む定量方法が開示されている。この定量方法として
は、以下の３種類の方法がある。 （１）光透過性支持体上に、ペルオキシダーゼと４−ア
ミノアンチピリン／カップリング試薬とからなる発色組
成物を有する試薬層、グルコースオキシダーゼを有する
光遮蔽層、ブロード布からなる多孔性展開層が設けられ
てなるシート状分析素子に全血を点着させ、発色後、分
析素子内の発色濃度を支持体側から５５０ｎｍにて測光
する。次いで、該発色濃度からグルコース濃度を求める
（この値を基本値とする）。さらに、展開層表面に被膜
状に残留している全血残査の赤色濃度（赤血球の赤色色
素の濃度）を展開層側から同波長にて測光する（この値
を補助値とする）。基本値と補助値とから求めた補正値
より、補正グルコース濃度を求める。 （２）上記と同様にして基本値を求め、さらに展開層側
から全血の展開面積もしくは全血が形成する円（展開
円）の直径を測定し（この値を補助値とする）、基本値
をその補助値で補正して補正グルコース濃度を求める。 （３）（１）と同様にして基本値を求め、さらに支持体
側から発色領域の面積もしくは円形の直径を測定し（こ
の値を補助値とする）、基本値をその補助値で補正して
補正グルコース濃度を求める。 上記の方法は、何れも全血中のヘマトクリット値が正常
域をはずれた試料についても、生じる測定誤差を確実か
つ容易に補正できる方法であり、全血中のグルコースだ
けでなく、コレステロール、蛋白、尿素窒素等の定量に
も適用可能であるが、以下の問題点を有している。
【０００６】上記の方法は、何れも血球濾過層である光
遮蔽層を有するため、反応の迅速性および精度に欠け
る。また、（１）の方法では、発色濃度の測定と展開層
表面の赤色濃度の測定とを同波長で行うため、赤血球の
赤色の妨害により厳密な発色濃度を測定することが難し
く、測定にも時間を要する。（２）および（３）の方法
では、分析素子内の発色濃度と共に、点着された全血の
形状や発色領域の形状を測定する必要があるが、これら
の値を同時に測定可能な分析装置の作製は困難であると
いう事情から、実用レベルには至らなかった。実際に面
積や直径を精度良く測定することが難しいという問題点
もある。
【０００７】一方、血液中のヘマトクリット値に比較的
無感応なアクリル酸ポリマー（「ヘマトクリット値調節
剤」と呼ばれる）を含む異方性膜からなる全血測定用試
薬ストリップは既に知られている（特開平９−１２１８
９４号公報）。該ストリップは、約２５〜６０％の範囲
のヘマトクリット値を有する全血試料について実質的に
一定値のグルコース濃度を与える。しかし、ヘマトクリ
ット値の影響を効果的に抑制するためには、アクリル酸
ポリマーの高い重合レベルが必要とされ、高分子量のポ
リマーは溶解性の点で製造上限界があると考えられる。
【０００８】そこで、一体型多層化学分析素子を用い
た、全血中に含まれるグルコース濃度もしくはコレステ
ロール濃度の定量において、ヘマトクリット値に起因す
る特有の測定誤差を完全かつ容易に補正することができ
る定量方法の開発が求められている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、一体
型多層化学分析素子を用いる全血中のグルコース濃度も
しくはコレステロール濃度の定量において、ヘマトクリ
ット値に起因する測定誤差を確実かつ容易に補正するこ
とによって、グルコース濃度もしくはコレステロール濃
度を高精度に定量する方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者の研究により、
ペルオキシダーゼ、色素形成化合物、およびグルコース
オキシダーゼもしくはコレステロールオキシダーゼから
なるグルコースもしくはコレステロール検出用発色組成
物を含有してなる一体型多層化学分析素子を用いて全血
試料中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度を
定量する方法であって、 （１）一体型多層化学分析素子に定量対象の全血試料を
点着し、その点着より分析素子内に浸透した赤血球の色
素の赤色濃度を５００〜５９０ｎｍの範囲内で予め定め
た波長にて測定する工程； （２）上記（１）の工程で測定した赤色濃度を、上記と
同一の一体型多層化学分析素子を用いて作成した、上記
波長で測定した場合のヘマトクリット値と赤色濃度との
関係を示す検量線と照合して、定量対象の全血試料のヘ
マトクリット値を求める工程； （３）上記の一体型多層化学分析素子に点着した全血試
料により発生した発色濃度を５００ｎｍより短波長側領
域もしくは５９０ｎｍより長波長側領域で予め定めた波
長にて測定する工程； （４）上記（３）の工程で測定した発色濃度を、上記と
同一の一体型多層化学分析素子を用いて作成した、任意
に定めた特定のヘマトクリット値におけるグルコース濃
度もしくはコレステロール濃度と、上記（３）の工程で
用いた波長での発色濃度との関係を示す検量線と照合し
て、定量対象の全血試料のヘマトクリット値が上記特定
のヘマトクリット値であると仮定した場合のグルコース
濃度もしくはコレステロール濃度を得る工程；そして、 （５）上記（４）の工程で求めた定量対象の全血試料の
ヘマトクリット値が該特定のヘマトクリット値であると
仮定した場合のグルコース濃度もしくはコレステロール
濃度と、上記（２）で得られた定量対象の全血試料のヘ
マトクリット値とを、予め作成した上記（４）の工程の
特定のヘマトクリット値からのヘマトクリット値のずれ
に対応するグルコース濃度もしくはコレステロール濃度
のずれの関係を示す検量線と照合して、定量対象の全血
試料のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度を得
る工程からなることを特徴とする定量方法が上記の課題
を解決できることが判明した。
【００１１】本発明の全血中のグルコース濃度もしくは
コレステロール濃度の定量方法の好ましい態様は、以下
の通りである。 （イ）上記（２）の工程で用いる検量線が、ヘマトクリ
ット値が互いに異なり、かつそれぞれのヘマトクリット
値が既知である三点以上の全血試料を用いて作成された
ものであることを特徴とする全血中のグルコース濃度も
しくはコレステロール濃度の定量方法。 （ロ）上記（３）の工程で測定に用いる波長が６００〜
７００ｎｍの範囲にあることを特徴とする全血中のグル
コース濃度もしくはコレステロール濃度の定量方法。 （ハ）上記（４）の工程で用いる検量線が、全てが該特
定のヘマトクリット値を持ち、かつそれぞれが互いに異
なる既知のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度
を持つ、三点以上の全血試料を用いて作成されたもので
あることを特徴とする全血中のグルコース濃度もしくは
コレステロール濃度の定量方法。 （ニ）上記（５）の工程で用いる検量線が、血漿中のグ
ルコース濃度もしくはコレステロール濃度が同一であっ
て、かつそれぞれが互いに異なる既知のヘマトクリット
値を持つ、三点以上の全血試料を用いて作成されたもの
であることを特徴とする全血中のグルコース濃度もしく
はコレステロール濃度の定量方法。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明は、後述する図１、２およ
び３に示すような一体型多層化学分析素子を用いる、全
血中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度の定
量値に生じる誤差を確実かつ容易に補正することによっ
て、これらの濃度を精度良く得る方法である。この方法
の特徴は、ヘマトクリット値の影響を赤血球の濾過処
理、光遮蔽層の設置、発色領域の面積の測定等によって
回避するのではなく、互いに異なる二つの波長の内の一
つの波長で発色濃度を、もう一方の波長で赤色濃度を測
定し、後者から得られる全血試料のヘマトクリット値を
用いて補正を行うことである。以下、定量の工程におい
て、ヘマトクリット値の影響が是正されていないグルコ
ース濃度もしくはコレステロール濃度を「グルコース濃
度（未補正）」もしくは「コレステロール濃度（未補
正）」、そのヘマトクリット値の影響を是正することを
「補正」、およびその補正によって得られたグルコース
濃度もしくはコレステロール濃度を「補正グルコース濃
度」もしくは「補正コレステロール濃度」として、これ
ら以外の場合のグルコース濃度もしくはコレステロール
濃度と区別する。
【００１３】以下の工程（１）〜（５）からなる本発明
の定量方法について詳述する。
【００１４】工程（１）は、一体型多層化学分析素子に
定量対象の全血試料を点着し、その点着より分析素子内
に浸透した赤血球の色素の赤色濃度を測定する工程であ
る。全血試料の点着後、必要ならばインキュベーション
を行ってもよい。点着量は、１〜１０μＬの範囲にある
ことが好ましい。
【００１５】赤色濃度の測定波長は、５００〜５９０ｎ
ｍの範囲にあることが好ましく、測定は、反射光を用
い、この範囲内で予め定めた波長にて行う。測定手段あ
るいは測定操作は、従来の一体型多層化学分析素子を用
いて試料中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃
度を定量する文献（特開昭５９−１０８９４２号公報）
に従う。赤色濃度は、エンド・ポイント法で求められた
変化量であっても、反応速度法で求められた変化速度量
であってもよいが、前者であることが好ましい。
【００１６】工程（２）は、上記（１）の工程で測定し
た赤色濃度を、上記と同一の一体型多層化学分析素子を
用いて作成した、上記波長で測定した場合のヘマトクリ
ット値と赤色濃度との関係を示す検量線（Ｉ）と照合し
て、定量対象の全血試料のヘマトクリット値を求める工
程である。
【００１７】上記検量線（Ｉ）は、ヘマトクリット値が
互いに異なり、かつそれぞれのヘマトクリット値が既知
である三点以上の全血試料について、それらの赤色濃度
を測定することによって作成することができる。全血試
料は、二点の試料であってもよいが、三点以上の試料で
あることが好ましい。
【００１８】工程（３）は、上記の一体型多層化学分析
素子に点着した全血試料により発生した発色濃度を測定
する工程である。工程（１）と同様に、点着後、必要な
らばインキュベーションを行ってもよい。点着量は、１
〜１０μＬの範囲にあることが好ましい。測定波長は、
５００ｎｍより短波長側領域もしくは５９０ｎｍより長
波長側領域にあることが好ましく、６００〜７００ｎｍ
の範囲にあることが特に好ましい。測定は、この範囲内
で予め定めた波長にて行う。発色濃度は、エンド・ポイ
ント法で求められた変化量であることが好ましい。
【００１９】工程（４）は、上記（３）の工程で測定し
た発色濃度を、上記と同一の一体型多層化学分析素子を
用いて作成した、任意に定めた特定のヘマトクリット値
における全血試料中のグルコース濃度もしくはコレステ
ロール濃度と、上記（３）の工程で用いた波長での発色
濃度との関係を示す検量線（ＩＩ）と照合して、定量対
象の全血試料のヘマトクリット値が上記特定のヘマトク
リット値であると仮定した場合の全血試料中のグルコー
ス濃度（未補正）もしくはコレステロール濃度（未補
正）を得る工程である。グルコース濃度（未補正）もし
くはコレステロール濃度（未補正）は、上記特定のヘマ
トクリット値での濃度値であり、実際に全血試料が持つ
ヘマトクリット値での濃度値ではないので、この工程で
は、未だヘマトクリット値の影響が是正されていない。
尚、特定のヘマトクリット値は、何れの値であってもよ
いが、０である場合を除く。
【００２０】上記検量線（ＩＩ）は、全てが該特定のヘ
マトクリット値を持ち、かつそれぞれが互いに異なる既
知のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度を持
つ、三点以上の全血試料について、それらの発色濃度を
測定することによって作成することができる。
【００２１】工程（５）は、上記（４）の工程で求め
た、定量対象の全血試料のグルコース濃度（未補正）も
しくはコレステロール濃度（未補正）と、上記（２）で
得られた定量対象の全血試料のヘマトクリット値との関
係を用いて、グルコース濃度（未補正）もしくはコレス
テロール濃度（未補正）の補正を行う工程である。グル
コース濃度（未補正）もしくはコレステロール濃度（未
補正）は、そのヘマトクリット値が該特定のヘマトクリ
ット値であると仮定した場合の値であるため、これらの
値は、全血試料が持つ実際のヘマトクリット値でのグル
コース濃度の値もしくはコレステロール濃度の値とは乖
離する。よって、その実際のヘマトクリット値でのグル
コース濃度もしくはコレステロール濃度に補正をする必
要がある。ここで、上記の乖離とは、ヘマトクリット値
が特定のヘマトクリット値からずれることに伴って、グ
ルコース濃度（未補正）もしくはコレステロール濃度
（未補正）が補正グルコース濃度もしくは補正コレステ
ロール濃度からずれた値を示すことを意味する。従っ
て、特定のヘマトクリット値からのヘマトクリット値の
ずれに対応するグルコース濃度もしくはコレステロール
濃度のずれの関係を示す検量線（ＩＩＩ）を作成して、
これと、グルコース濃度（未補正）もしくはコレステロ
ール濃度（未補正）と実際のヘマトクリット値とを照合
すれば、定量対象の全血試料の補正グルコース濃度もし
くは補正コレステロール濃度を得ることができる。
【００２２】上記検量線（ＩＩＩ）は、血漿中のグルコ
ース濃度もしくはコレステロール濃度が同一であって、
かつそれぞれが互いに異なる既知のヘマトクリット値を
持つ、三点以上の全血試料を用いて作成することができ
る。
【００２３】上記の工程（１）と工程（３）との順序
は、何れが先行してもよい。工程（１）と工程（３）と
を実質的に同時に行ってもよい。
【００２４】上記の工程（５）は、補正方法の一つにす
ぎず、上記特定のヘマトクリット値であると仮定した場
合のグルコース濃度（未補正）もしくはコレステロール
濃度（未補正）、および定量対象の全血試料のヘマトク
リット値を使って補正する方法であれば他の何れの方法
であってもよい。
【００２５】本発明の定量方法は、工程（１）〜（５）
を保持あるいは記憶した演算装置または演算回路を有
し、かつそこで演算を行う乾式分析装置を使って実施す
ることが好ましい。また、本発明の定量方法は、工程
（１）および（３）を該分析装置を用いずに行って得ら
れた赤色濃度および発色濃度を該分析装置に入力し、演
算を行わせることによっても実施することができる。
【００２６】本発明の定量方法では、図１、２および３
にそれぞれ示すタイプの一体型多層化学分析素子Ａ、Ｂ
およびＣの何れも用いることができる。
【００２７】一体型多層化学分析素子Ａは、ペルオキシ
ダーゼ、色素形成化合物およびグルコースオキシダーゼ
もしくはコレステロールオキシダーゼを含む発色組成物
を含有する空隙率が３０〜８０％の範囲の多孔質材料か
らなる多孔性試薬層（１１）を有する一体型多層化学分
析素子である。
【００２８】一体型多層化学分析素子Ｂは、取り扱い性
を改良するために設けられた光透過性支持体（３１）、
接着剤層（２１）、並びにペルオキシダーゼ、色素形成
化合物およびグルコースオキシダーゼもしくはコレステ
ロールオキシダーゼを含む発色組成物を含有する空隙率
が３０〜８０％の範囲の多孔質材料からなる多孔性試薬
層（１１）をこの順に有する一体型多層化学分析素子で
ある。
【００２９】一体型多層化学分析素子Ｃは、分析素子Ｂ
と同じ目的で設けられた光透過性支持体（３１）、ペル
オキシダーゼと色素形成化合物とを含む試薬層（１
２）、およびグルコースオキシダーゼもしくはコレステ
ロールオキシダーゼを含む空隙率が３０〜８０％の範囲
の多孔質材料からなる多孔性試薬層（１１）をこの順に
有する一体型多層化学分析素子である。
【００３０】上記の一体型多層化学分析素子は、何れも
特開昭６０−８２８５９号公報に記載の酸素透過性蛋白
質不透過性光遮蔽層を有しない。発色濃度および赤色濃
度の測定は、何れも光透過性支持体（３１）側から、そ
れぞれ発色濃度測定用光線（４１）、赤色濃度測定用光
線（４１）を用いて行う。一体型多層化学分析素子Ａに
ついては、何れの側から測定してもよい。
【００３１】一体型多層化学分析素子ＡおよびＢについ
て説明する。
【００３２】一体型多層化学分析素子ＡおよびＢの多孔
性試薬層は、何れもペルオキシダーゼ、色素形成化合
物、そしてグルコースオキシダーゼもしくはコレステロ
ールオキシダーゼを含む組成物を含有する空隙率が３０
〜８０％の範囲の多孔質材料からなる層である。多孔性
試薬層は、該組成物を空隙率が３０〜８０％の範囲の多
孔質材料に塗布するか、あるいは該多孔質材料を該組成
物を含む溶液に浸積する方法により形成される。
【００３３】多孔性試薬層の厚さは、１〜５００μｍの
範囲にあることが好ましく、５〜３００μｍの範囲にあ
ることが特に好ましい。
【００３４】空隙率が３０〜８０％の範囲の多孔質材料
としては、空隙率がこの範囲であれば繊維性であっても
非繊維性であってもよい。繊維性多孔質材料としては、
織編物、不織布、濾紙、短繊維の集合体を挙げることが
できる。非繊維性多孔質材料としては、メンブレンフィ
ルターが代表的である。珪酸土等を結合剤中に分散した
分散物、あるいはガラスや樹脂等を互いに点接着させた
集合体も使用することができる。多孔質材料としては、
繊維性多孔質材料を用いることが好ましい。繊維性多孔
質材料としては、織編物を用いることが好ましい。ここ
で、織編物とは、織物、編み物もしくはこれに類するも
のをすべて含む。
【００３５】織物としては、たて糸とよこ糸とで織った
平織物が好ましい。織物を構成する糸としては、綿、カ
ポック、亜麻、大麻、ラミー、絹、羊毛等の天然繊維、
ナイロン、テトロン、レーヨン、キュプラ、アセテー
ト、ビニロン、アクリル、ポリエチレンテレフタレート
等の化学繊維を挙げることができ、これらを２種以上組
み合わせてもよい。繊維の太さは、その種類にもよる
が、約２０〜３００デニールの範囲にあることが好まし
く、約４０〜１３０デニールの範囲にあることがさらに
好ましい。糸の形態としては、フィラメント糸、紡績糸
等が好ましく、紡績糸がさらに好ましい。織物の厚さ
は、約１００〜５００μｍの範囲にあることが好まし
く、約１２０〜３５０μｍの範囲にあることがさらに好
ましい。
【００３６】編み物としては、たてメリヤスもしくはよ
こメリヤスが好ましい。たてメリヤスとしては、一重ア
トラス編み生地、トリコット編み生地、ダブルトリコッ
ト編み生地、ミラニーズ編み生地、ラッシェル編み生地
等を挙げることができる。よこメリヤスとしては、平編
み生地、パール編み生地、ゴム編み生地、両面編み生地
等を挙げることができる。編み物を構成する糸および糸
の形態としては、織物の場合と同様である。繊維の太さ
は、その種類にもよるが、約３５〜１５０デニールの範
囲にあることが好ましく、約４５〜１２０デニールの範
囲にあることがさらに好ましい。編み物生地の編成工程
時のゲージ数としては、約２０〜５０の範囲にあること
が好ましい。編み物の厚さは、約１００〜６００μｍの
範囲にあることが好ましく、約１５０〜４００μｍの範
囲にあることがさらに好ましい。空隙率が３０〜８０％
の範囲のトリコット編み生地、ラッシェル編み生地、ミ
ラニーズ編み生地もしくはダブルトリコット編み生地を
用いることが好ましい。
【００３７】グルコースオキシダーゼは、Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎ
ｏｔａｔｕｍ等由来のものを用いることが好ましい。
【００３８】コレステロールオキシダーゼは、Ｎｏｃａ
ｒｄｉａ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｒｉｓ、Ｂｒｅｖｉｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｍｙｃｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ、スエヒロタケ等から得られたものを
用いることが好ましい。
【００３９】グルコースオキシダーゼもしくはコレステ
ロールオキシダーゼの多孔性試薬層中の塗布量は、何れ
も塗布後の乾燥状態で２０００〜４００００Ｕ／ｍ2の
範囲にあることが好ましく、何れも４０００〜３０００
０Ｕ／ｍ2の範囲にあることが特に好ましい。
【００４０】ペルオキシダーゼは、植物起源あるいは動
物起源のペルオキシダーゼ、微生物起源のペルオキシダ
ーゼを用いることができる。植物起源あるいは微生物起
源のペルオキシダーゼを用いることが好ましく、西洋わ
さびあるいは大根から抽出したペルオキシダーゼ、Ｃｏ
ｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓあるいはＣｕｒｖｕｌａｒｉａの
微生物から抽出したペルオキシダーゼ等を用いることが
特に好ましい。
【００４１】ペルオキシダーゼの多孔性試薬層中の塗布
量は、塗布後の乾燥状態で５０００〜１０００００Ｕ／
ｍ2の範囲にあることが好ましく、１００００〜６００
００Ｕ／ｍ2の範囲にあることが特に好ましい。
【００４２】色素形成化合物としては、過酸化水素の存
在下、ペルオキシダーゼ等の酸化作用を有する物質が触
媒として働くことにより呈色する色素形成化合物であれ
ば何れも用いることができるが、ロイコ色素、あるいは
４−アミノアンチピリン（４−ＡＡＰ）と、４−ＡＡＰ
とカップリングするカップリング試薬とからなる発色組
成物を用いることが特に好ましい。。ロイコ色素として
は、例えば、特開昭５９−１９３３５２号公報に記載の
ものを使用することができる。該公報に記載のロイコ色
素は、６００以上、好ましくは６００〜７００ｎｍの波
長の範囲に吸収ピークを有し、青色に発色する。その中
でも下記式で表される２−（３，５−ジメトキシ−４−
ヒドロキシフェニル）−４−［４−（ジメチルアミノ）
フェニル］−５−フェネチルイミダゾール、もしくは２
−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−
４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５−ベンジ
ルイミダゾールあるいはそれらの塩を用いることが好ま
しく、２−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５
−フェネチルイミダゾール酢酸塩を用いることが特に好
ましい。
【００４３】４−ＡＡＰと、４−ＡＡＰとカップリング
するカップリング試薬とからなる発色組成物は、青色に
発色し、その発色が６００ｎｍ以上、好ましくは６００
〜７００ｎｍの波長の範囲に吸収ピークを有することが
好ましい。カップリング試薬の種類によって発色の吸収
ピークが異なるので、発色組成物が上記の波長の範囲を
満足するカップリング試薬としては、フェノール類（例
えば、ｐ−クロロフェノール等）、ナフタレン誘導体
（例えば、１，７−ジヒドロナフタレン等）、トルイジ
ン誘導体（例えば、Ｎ−エチル−Ｎ−２−スルホエチル
−ｍ−トルイジン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルイジン
等）、ジヒドロインドール類、テトラヒドロキノリン
類、あるいは置換アニリン化合物（例えば、、５，６，
７，８−テトラヒドロ−１−ナフチルアミン等）を挙げ
ることができ、８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン
酸を使用することが特に好ましい。
【００４４】色素形成化合物の多孔性試薬層中の塗布量
は、塗布後の乾燥状態で０．１〜１０ｇ／ｍ2の範囲に
あることが好ましく、１〜１０ｇ／ｍ2の範囲にあるこ
とが特に好ましい。
【００４５】多孔性試薬層には、ｐＨ調整剤、界面活性
剤等を添加してもよい。ｐＨ調整剤としては、使用する
酵素（オキシダーゼおよびペルオキシダーゼ）の最適ｐ
Ｈ値がその起源によって異なるため、該酵素の最適ｐＨ
値を維持できるようなｐＨ調整剤が好ましい。ｐＨ調整
剤としては、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩
衝液、トリス緩衝液、グッド緩衝液等を用いることがで
きる。界面活性剤は、親水化処理を行うもので、多孔性
試薬層中でのロイコ色素と過酸化水素との反応を促進す
る。界面活性剤としては、水溶性のノニオン、カチオ
ン、アニオン、両性の何れの界面活性剤も用いることが
できるが、ノニオン性界面活性剤を用いることが好まし
い。ノニオン性界面活性剤としては、ジメチルシクロヘ
キサン−メチル（ポリオキシエチレン）共重合体、ポリ
オキシエチレンやポリグルセリンのアルキルアリールエ
ーテル、脂肪酸エステル等を用いることが好ましく、８
〜１５個のオキシエチレン基もしくはオキシプロピレン
基が連なった鎖状を含む構造からなるノニオン性界面活
性剤を用いることが特に好ましい。
【００４６】一体型多層化学分析素子Ｂでは、接着剤層
によって光透過性支持体と多孔性試薬層との接着を行
う。接着は、ホットメルト接着剤によって部分的に接着
を行うか、あるいは親水性接着剤によって全面的に接着
を行うことが好ましい。
【００４７】ホットメルト接着剤は、熱可塑性樹脂を主
成分とした（常温では）固体の接着剤である。これをア
プリケータの中で加熱溶融し、アプリケータによって光
透過性支持体上に点状もしくは線状に塗布することが好
ましい。ホットメルト接着剤を断続的に塗布することに
よって、接着剤層側からも多孔性試薬層へ酸素を供給す
ることができ、その結果、グルコースもしくはコレステ
ロールとそれらの酸化酵素との反応を促進することがで
きる。
【００４８】親水性接着剤としては、特開昭５５−１６
４３５６号公報、特開昭５７−２０８９９７号公報等に
記載の親水性ポリマーを用いることができる。具体例と
しては、ゼラチン、ゼラチン誘導体、プルラン、プルラ
ン誘導体、アガロース、ポリビニルアルコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポリアクリルアミドを挙げることがで
き、ゼラチンを用いることが好ましい。親水性接着剤か
らなる接着剤層の上には、前記の界面活性剤を塗布する
ことが好ましい。
【００４９】一体型多層化学分析素子Ｂでは、多孔性試
薬層における色素の発色を直接測光する。よって、特開
昭６０−１１１９６０号公報に記載の分析素子のよう
に、試薬層中で発色した色素をゼラチン層に移動させて
測光する必要がなく、発色した色素の拡散による分析精
度の低下を招くことがない。分析素子Ｂでは、発色した
色素は低拡散性であって、実際に編み物から移動しない
ことが確認されている。
【００５０】光透過性支持体は、水不浸透性の光透過性
支持体である。本発明に使用することができる水不浸透
性光透過性支持体としては、特開昭５５−１６４３５６
号公報等に記載されている多層化学分析素子の支持体に
用いられているものを使用することができる。支持体の
材質は、ポリエチレンテレフタレート、酢酸セルロー
ス、ビスフェノールＡのポリカーボネート、ポリスチレ
ン、ポリメチルメタクリレート等の親水性に乏しいある
いは疎水性のポリマー、または透明なガラスであること
が好ましく、ポリエチレンテレフタレートであることが
特に好ましい。支持体の厚さは、ポリマーの場合には、
５０μｍ〜１ｍｍの範囲にあることが好ましく、８０〜
４００μｍの範囲にあることが特に好ましい。透明なガ
ラスの場合には、１００μｍ〜２ｍｍの範囲にあること
が好ましく、１５０μｍ〜１ｍｍの範囲にあることが特
にに好ましい。
【００５１】光透過性支持体の表面は、必要により公知
の物理化学的処理（紫外線照射処理、コロナ放電処理、
グロー放電処理等）により、接着剤層との接着力を高め
ることができる。または、物理化学的処理を施して（あ
るいは施さずに）さらにゼラチン下塗り層を設けて接着
剤層との接着力を高めることができる。
【００５２】一体型多層化学分析素子Ｃについて説明す
る。
【００５３】一体型多層化学分析素子Ｃの多孔性試薬層
は、グルコースオキシダーゼもしくはコレステロールオ
キシダーゼを含む空隙率が３０〜８０％の範囲の編み物
からからなる層である。この編み物の空隙率は、５０〜
７０％の範囲にあることが特に好ましい。多孔性試薬層
の厚さは、１〜５００μｍの範囲であることが好まし
く、５〜３００μｍの範囲であることが特に好ましい。
【００５４】一体型多層化学分析素子Ｃの試薬層は、ペ
ルオキシダーゼと色素形成化合物とが親水性の被膜形成
能を有するポリマーバインダーの中に分散あるいは含有
されてなる層である。ポリマーバインダーとしては、前
記の親水性ポリマーを用いることが好ましく、ゼラチン
を用いることが特に好ましい。試薬層の厚さは、５〜２
５μｍの範囲であることが好ましい。使用するペルオキ
シダーゼの起源および含有量については、前記記載の通
りである。色素形成化合物の試薬層中の塗布量は、塗布
後の乾燥状態で０．１〜１ｇ／ｍ2の範囲にあることが
好ましい。
【００５５】光透過性支持体については、一体型多層化
学分析素子Ｂの光透過性支持体と同様である。前記記載
の光透過性支持体の表面処理によって、支持体と試薬層
との接着力を高めることができる。
【００５６】一体型多層化学分析素子Ａ、ＢおよびＣ
は、それぞれ特開昭５７−６３４５２号公報に記載の方
法により保持部材（マウント）で挟持固定される。保持
部材（マウント）の材料としては、ポリエチレン、ポリ
プロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリアミ
ド、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート、
ＡＢＳ樹脂、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）樹
脂、セラミック（例えば、アルミナ、シリカ等）、金属
（アルミニウム、ステンレス、チタン等）等を挙げるこ
とができる。
【００５７】本発明の定量方法は、グルコース濃度もし
くはコレステロール濃度が何れも２０〜６００ｍｇ／ｄ
Ｌの濃度範囲にある全血試料について実施することが好
ましい。また、本発明の定量方法は、ヘマトクリット値
が何れのレベルにある全血試料についても一定のグルコ
ース濃度もしくはコレステロール濃度を与えるが、ヘマ
トクリット値が２０〜６０容量％の範囲にある全血試料
について実施することが特に好ましい。
【００５８】
【実施例】［実施例１］ ［分析スライドの作製］ゼラチン下塗り層が設けられて
いる厚さ１８０μｍの無色透明のポリエチレンテレフタ
レート上に、下記の組成を有する水溶液を、水溶液中の
各々の成分の塗布量が下記の量となるように、そして乾
燥後の厚さが１９μｍとなるように、塗布し、５０℃で
乾燥して試薬層を形成した。 ───────────────────────────────── アルカリ処理を行ったゼラチン １４．５ｇ／ｍ2 界面活性剤 ０．２ｇ／ｍ2 ペルオキシダーゼ １００００Ｕ／ｍ2 ロイコ色素 １ｇ／ｍ2 ２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ） ０．２ｇ／ｍ2 ───────────────────────────────── 界面活性剤は、ノニルフェノキシポリエトキシエタノー
ル（オキシエチレンの重合度：平均９〜１０）（Ｓｕｒ
ｆａｃｔａｎｔ １０Ｇ、オリオン社製）を、ロイコ色
素は、２−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−４−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−５
−フェネチルイミダゾール酢酸塩を用いた。
【００５９】次に、上記試薬層上に、ノニルフェノキシ
ポリエトキシエタノール（オキシエチレンの重合度：平
均９〜１０）およびイオン交換水を、それぞれ０．１５
ｇ／ｍ2、３０ｇ／ｍ2の供給量で全面に供給して、試薬
層の表面を膨潤させた。
【００６０】さらに、上記試薬層表面に、５０デニール
相当のポリエチレンテレフタレート紡績糸を３６ゲージ
編みした厚さ約２５０μｍのトリコット編み物布地（空
隙率が６０％）をほぼ一様に軽く圧力をかけながら積層
した。次いで、上記布地上に、塗布後の量が括弧内の量
となるように、グルコースオキシダーゼ（３００００Ｕ
／ｍ2）および２−モルホリノエタンスルホン酸（１ｇ
／ｍ2）の水溶液を塗布し、５０℃にて乾燥して多孔性
試薬層とし、一体型多層化学分析素子を作製した。
【００６１】上記で得られた一体型多層化学分析素子を
１２ｍｍ×１３ｍｍ四方のチップに切断し、スライド枠
（特開昭５７−６３４５２号公報参照）に収めて、本発
明に従うＧＬＵ−Ｗ（検体として全血を用いて、全血中
のグルコース濃度を測定することを示す）分析用乾式ス
ライドを作製した。
【００６２】［グルコース濃度と発色濃度との関係を示
す検量線の作成］ Ｉ．血液試料の調製 ヒトより採血されたフッ化ナトリウム含有新鮮血を３０
００ｒｐｍで遠心分離し、血漿成分および血球成分に分
けた。両者の所定量を混合して、ヘマトクリット値が４
０容量％となるように調製した。このもののグルコース
濃度をヘキソキナーゼ法によって測定したところ、１０
０ｍｇ／ｄＬであった。この全血検体を７つに分注し、
１００ｍｇ／ｄＬよりも高い濃度については、５０容量
％ブドウ糖水溶液（大塚製薬（株）製）を下記の濃度と
なるように、各血液試料に添加する方法によって、ま
た、当該濃度より低い濃度については分注された１つの
検体を遠心分離した後、上清の一部を除いてミリＱ水を
添加する方法によって、それぞれのグルコース濃度を調
整して、ヘマトクリット値が４０容量％であって、かつ
全血中のグルコース濃度がそれぞれ５９、１００、１８
４、２９５、４１９、５２０および６００ｍｇ／ｄＬで
ある各全血試料を調製した。 ＩＩ．発色濃度の測定 上記試料６μＬをそれぞれ前記のＧＬＵ−Ｗ分析用乾式
スライドに点着した。点着６０秒後に６５０ｎｍにおけ
るそれぞれの発色濃度を富士ドライケム５５００（富士
写真フィルム（株）製）によって測定した。ヘマトクリ
ット値が４０容量％である場合の、全血中のグルコース
濃度と発色濃度との関係を示す検量線を作成した。この
検量線を図４に示す。検量線は、グルコース濃度をＸ
（ｍｇ／ｄＬ）、発色濃度をＹとするとき、下記式
（１）： （１） Ｙ＝９２２．６３×（Ｘ）3−１６２６×（Ｘ）2＋１２
４７×（Ｘ）−２６９．９ で表される。
【００６３】［赤色濃度とヘマトクリット値との関係を
示す検量線の作成］ Ｉ．血液試料の調製 ヒトより採血されたヘパリン含有新鮮血を３０００ｒｐ
ｍで遠心分離し、血漿成分および血球成分に分けた。両
者の所定量を混合して、ヘマトクリット値がそれぞれ２
５、４０および５７容量％である各試料を調製した。 ＩＩ．赤色濃度の測定 上記試料６μＬをそれぞれ前記のＧＬＵ−Ｗ分析用乾式
スライドに点着した。点着３０秒後に５０５ｎｍにおけ
るそれぞれの赤色濃度（赤血球の赤色色素の濃度）を測
定し、ヘマトクリット値と赤色濃度との関係を示す検量
線を作成した。これを図５に示す。検量線は、ヘマトク
リット値をＱ（容量％）、赤色濃度をＴとするとき、下
記式（２）： （２） Ｑ＝１６２．２８×（Ｔ）−１０８．４２ で表される。
【００６４】［ヘマトクリット値と、そのヘマトクリッ
ト値のずれに起因するグルコース濃度（未補正）のずれ
との関係を示す検量線の作成］上記で同一の互いに異な
る既知のヘマトクリット値を有し、かつ血漿中のグルコ
ース濃度が同一である３種類の試料６μＬを、それぞれ
ＧＬＵ−Ｗ分析用乾式スライドに点着した。点着６０秒
後に６５０ｎｍにおけるそれぞれの発色濃度を測定し
た。各発色濃度を前記記載の式（１）に代入して、ヘマ
トクリット値が４０容量％であると仮定した場合の全血
中のグルコース濃度（未補正）をそれぞれ求めた。ま
た、それぞれのグルコース濃度（未補正）を、ヘマトク
リット値が４０容量％の全血中のグルコース濃度（未補
正）で除して、ヘマトクリット値のずれに起因する全血
中のグルコース濃度（未補正）のずれを表す値（これを
「比率（％）」とする）を求めた。結果を下記第１表に
示す。
【００６５】
【表１】 第１表 ──────────────────────────────────── ヘマトクリット値 発色濃度 グルコース濃度（未補正） 比率 （容量％） （ｍｇ／ｄＬ） （％） ──────────────────────────────────── ２５ １．０７２５ ３３６ １１５ ４０ １．０２１７ ２９１ １００ ５７ ０．９６５６ ２４９ ８５．６ ────────────────────────────────────
【００６６】次に、上記第１表より、ヘマトクリット値
と比率との関係を示す検量線を作成した（図６）。検量
線は、ヘマトクリット値をＱ（容量％）、比率をＲ
（％）とするとき、下記式（３）： （３） Ｒ＝−０．９１７２×（Ｑ）＋１３７．５ で表される。
【００６７】［全血試料に含まれるグルコース濃度の補
正］ Ｉ．血液試料の調製 ヒトより採血されたフッ化ナトリウム含有新鮮血から、
ヘマトクリット値がそれぞれ２２、４０および５５容量
％である試料を得た。これらのヘマトクリット値につい
ては、毛細管法によって決定した。これらの全血中のグ
ルコース濃度をヘキソキナーゼ法によって測定したとこ
ろ、何れも１００ｍｇ／ｄＬであった。これらの試料を
順に検体Ａ、ＢおよびＣとする。 ＩＩ．赤色濃度および発色濃度の測定 各検体をＧＬＵ−Ｗ分析用乾式スライドに６μＬ点着
し、３０秒後に５０５ｎｍにおける赤色濃度（ｔ）を、
６０秒後に６５０ｎｍにおける発色濃度（ｘ）を富士ド
ライケム５５００（富士写真フィルム（株）製）によっ
てそれぞれ測定した。 ＩＩＩ．前記記載の式（１）に発色濃度（ｘ）を代入し
て、ヘマトクリット値が４０容量％であると仮定した場
合の全血中のグルコース濃度（未補正）（ｙ）を求め
た。 ＩＶ．前記記載の式（２）に赤色濃度（ｔ）を代入し
て、実際のヘマトクリット値（ｑ）を求めた。結果を下
記第２表に示す。
【００６８】
【表２】 第２表 ──────────────────────────────────── 検体 ｘ ｔ ｙ（ｍｇ／ｄＬ） ｑ（容量％） ──────────────────────────────────── Ａ ０．６９０３ ０．８１１２ １１８ ２３．２０ Ｂ ０．６２９２ ０．９２３ １０１ ４１．４０ Ｃ ０．５７８８ ０．９９８ ８８ ５３．５０ ──────────────────────────────────── Ｖ．前記記載の式（３）に上記のｑをそれぞれ代入し
て、ｑに対応する各比率（ｒ）を求めた。上記の第２表
の、ヘマトクリット値が４０容量％であると仮定した場
合の全血中のグルコース濃度グルコース濃度（未補正）
をそれぞれ対応する比率で除して、実際のヘマトクリッ
ト値における各検体のグルコース濃度（補正グルコース
濃度）を求めた。結果を下記第３表に示す。図７に、各
補正グルコース濃度を−□−として示す。
【００６９】
【表３】 第３表 ─────────────────────────────── 検体 ｒ（％） 補正グルコース濃度（ｍｇ／ｄＬ） ─────────────────────────────── Ａ １１６．２０ １０１．５ Ｂ ９９．５０ １０１．５ Ｃ ８８．４０ ９９．５ ───────────────────────────────
【００７０】［比較例１］上記記載の、［全血試料に含
まれるグルコース濃度の補正］で使用したと同じ３種類
の血液試料（検体Ａ、ＢおよびＣ）を用いた。これらの
各検体６μＬを、それぞれＧＬＵ−Ｗ分析用乾式スライ
ドに点着した。点着６０秒後に６５０ｎｍにおけるそれ
ぞれの発色濃度（ｘ1）を測定した。各発色濃度を前記
記載の式（１）に代入して、ヘマトクリット値が４０容
量％である場合の全血中のグルコース濃度（ｙ1）をそ
れぞれ求めた。これらの結果を、下記第４表および図７
に示す。図７には、各グルコース濃度の値を−○−とし
て示す。
【００７１】
【表４】 第４表 ──────────────────────── 検体 ｘ1 ｙ1 （ｍｇ／ｄＬ） ──────────────────────── Ａ ０．６９０３ １１８ Ｂ ０．６２９２ １０１ Ｃ ０．５７８８ ８８ ────────────────────────
【００７２】図７より、ヘマトクリット値の補正を行わ
ずに求めた全血中のグルコース濃度は、ヘマトクリット
値が高くなるとともに低い値を示し、ヘマトクリット値
の影響を大きく受けていることが分かる。一方、当該補
正を行うことにより、ヘマトクリット値に関わらず、全
血中のグルコース濃度は、ほぼ一定の値として求められ
ることが分かる。
【００７３】
【発明の効果】本発明により、全血中のグルコース濃度
もしくはコレステロール濃度は、ヘマトクリット値の影
響がほぼ完全に回避された高精度な濃度値として求める
ことができる。よって、臨床医学検査の項目として特に
重要な意味を有する血糖値あるいはコレステロール値に
ついて信頼性の高い値を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の代表的な一体型多層化学分析素子
（Ａ）の模式図である。
【図２】本発明の代表的な一体型多層化学分析素子
（Ｂ）の模式図である。
【図３】本発明の代表的な一体型多層化学分析素子
（Ｃ）の模式図である。
【図４】ヘマトクリット値が４０容量％である場合の、
全血中のグルコース濃度と発色濃度との関係を示す検量
線である。
【図５】赤色濃度とヘマトクリット値との関係を示す検
量線である。
【図６】ヘマトクリット値と比率との関係を示す検量線
である。
【図７】実施例１および比較例１の結果を示すグラフで
ある。
【符号の説明】 １１ 多孔性試薬層 １２ 試薬層 ２１ 接着剤層 ３１ 光透過性支持体 ４１ 発色濃度測定用光線もしくは赤色濃度測定用光線
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｂ (72)発明者 天野 芳和 埼玉県朝霞市泉水３−11−46 富士写真フ イルム株式会社内 Ｆターム(参考） 2G045 AA13 CA25 CA26 DA31 DA69 FA29 FB01 FB11 FB16 GA05 GC12 JA01 4B063 QA01 QQ03 QQ22 QQ23 QQ68 QQ76 QR02 QR03 QR44 QR72 QS03 QX01

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ペルオキシダーゼ、色素形成化合物、お
    よびグルコースオキシダーゼもしくはコレステロールオ
    キシダーゼからなるグルコースもしくはコレステロール
    検出用発色組成物を含有してなる一体型多層化学分析素
    子を用いて全血試料中のグルコース濃度もしくはコレス
    テロール濃度を定量する方法であって、下記の工程から
    なることを特徴とする定量方法； （１）一体型多層化学分析素子に定量対象の全血試料を
    点着し、その点着より分析素子内に浸透した赤血球の色
    素の赤色濃度を５００乃至５９０ｎｍの範囲内で予め定
    めた波長にて測定する工程； （２）上記（１）の工程で測定した赤色濃度を、上記と
    同一の一体型多層化学分析素子を用いて作成した、上記
    波長で測定した場合のヘマトクリット値と赤色濃度との
    関係を示す検量線と照合して、定量対象の全血試料のヘ
    マトクリット値を求める工程； （３）上記の一体型多層化学分析素子に点着した全血試
    料により発生した発色濃度を５００ｎｍより短波長側領
    域もしくは５９０ｎｍより長波長側領域で予め定めた波
    長にて測定する工程； （４）上記（３）の工程で測定した発色濃度を、上記と
    同一の一体型多層化学分析素子を用いて作成した、任意
    に定めた特定のヘマトクリット値におけるグルコース濃
    度もしくはコレステロール濃度と、上記（３）の工程で
    用いた波長での発色濃度との関係を示す検量線と照合し
    て、定量対象の全血試料のヘマトクリット値が上記特定
    のヘマトクリット値であると仮定した場合のグルコース
    濃度もしくはコレステロール濃度を得る工程；そして、 （５）上記（４）の工程で求めた定量対象の全血試料の
    ヘマトクリット値が該特定のヘマトクリット値であると
    仮定した場合のグルコース濃度もしくはコレステロール
    濃度と、上記（２）で得られた定量対象の全血試料のヘ
    マトクリット値とを、予め作成した上記（４）の工程の
    特定のヘマトクリット値からのヘマトクリット値のずれ
    に対応するグルコース濃度もしくはコレステロール濃度
    のずれの関係を示す検量線と照合して、定量対象の全血
    試料のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度を得
    る工程。
  2. 【請求項２】 上記（２）の工程で用いる検量線が、ヘ
    マトクリット値が互いに異なり、かつそれぞれのヘマト
    クリット値が既知である三点以上の全血試料を用いて作
    成されたものであることを特徴とする請求項１に記載の
    全血中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度の
    定量方法。
  3. 【請求項３】 上記（３）の工程で測定に用いる波長が
    ６００乃至７００ｎｍの範囲にあることを特徴とする請
    求項１もしくは２に記載の全血中のグルコース濃度もし
    くはコレステロール濃度の定量方法。
  4. 【請求項４】 上記（４）の工程で用いる検量線が、全
    てが該特定のヘマトクリット値を持ち、かつそれぞれが
    互いに異なる既知のグルコース濃度もしくはコレステロ
    ール濃度を持つ、三点以上の全血試料を用いて作成され
    たものであることを特徴とする請求項１乃至３の内の何
    れかの項に記載の全血中のグルコース濃度もしくはコレ
    ステロール濃度の定量方法。
  5. 【請求項５】 上記（５）の工程で用いる検量線が、血
    漿中のグルコース濃度もしくはコレステロール濃度が同
    一であって、かつそれぞれが互いに異なる既知のヘマト
    クリット値を持つ、三点以上の全血試料を用いて作成さ
    れたものであることを特徴とする請求項１乃至４の内の
    何れかの項に記載の全血中のグルコース濃度もしくはコ
    レステロール濃度の定量方法。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003294746A (ja) * 2002-01-31 2003-10-15 Fuji Photo Film Co Ltd 生化学解析用ユニットの製造方法
JP2005046145A (ja) * 2003-07-17 2005-02-24 Ortho Clinical Diagnostics Inc 高比重リポタンパク質コレステロール定量化のための乾式分析要素
JP2006081492A (ja) * 2004-09-17 2006-03-30 Chiba Univ コレステロールの定量方法
WO2007007849A1 (ja) 2005-07-14 2007-01-18 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. 分析装置、及び分析方法
WO2009119213A1 (ja) 2008-03-25 2009-10-01 テルモ株式会社 ヘマトクリット値または血液成分濃度の測定方法および測定装置
JP2010522336A (ja) * 2007-03-22 2010-07-01 クオシェント ダイアグノスティックス リミテッド 全血分析
WO2010140407A1 (ja) * 2009-06-05 2010-12-09 テルモ株式会社 成分測定装置
WO2013147200A1 (ja) * 2012-03-29 2013-10-03 積水メディカル株式会社 ヘマトクリット値の測定方法
JPWO2020183916A1 (ja) * 2019-03-11 2020-09-17

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7476533B2 (en) 2002-04-19 2009-01-13 Adhesives Research, Inc. Diagnostic devices for use in the assaying of biological fluids
AU2003234944A1 (en) * 2002-08-27 2004-03-18 Bayer Healthcare, Llc Methods of Determining Glucose Concentration in Whole Blood Samples
EP1447665B1 (en) 2003-02-11 2016-06-29 Bayer HealthCare LLC Method for reducing effect of hematocrit on measurement of an analyte in whole blood
CN101088003A (zh) * 2004-12-13 2007-12-12 拜尔保健有限公司 用于确定体液中被分析物的透射光谱学系统
US20060281187A1 (en) 2005-06-13 2006-12-14 Rosedale Medical, Inc. Analyte detection devices and methods with hematocrit/volume correction and feedback control
US8801631B2 (en) 2005-09-30 2014-08-12 Intuity Medical, Inc. Devices and methods for facilitating fluid transport
EP2559381B1 (en) 2005-09-30 2014-12-31 Intuity Medical, Inc. Arrangement for body fluid sample extraction and analysis
EP2293719B1 (en) 2008-05-30 2015-09-09 Intuity Medical, Inc. Body fluid sampling device -- sampling site interface
US9636051B2 (en) 2008-06-06 2017-05-02 Intuity Medical, Inc. Detection meter and mode of operation
JP2011522594A (ja) 2008-06-06 2011-08-04 インテュイティ メディカル インコーポレイテッド 医用診断装置及び方法
CA2782047C (en) 2009-11-30 2019-10-29 Intuity Medical, Inc. Calibration material delivery devices and methods
US9782114B2 (en) 2011-08-03 2017-10-10 Intuity Medical, Inc. Devices and methods for body fluid sampling and analysis
FR3005505B1 (fr) * 2013-05-13 2015-05-01 Biomerieux Sa Procede de mesure de la concentration plasmatique d'un analyte directement sur un echantillon de sang total
EP3008454B1 (en) 2013-06-10 2024-03-27 Roche Diagnostics GmbH Method and system for detecting an analyte in a body fluid
JP6757400B2 (ja) 2016-03-08 2020-09-16 テルモ株式会社 成分測定装置、成分測定方法及び成分測定プログラム

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57174099A (en) * 1981-04-17 1982-10-26 Fuji Photo Film Co Ltd Color indicator composition for detecting hydrogen peroxide and quantitative analytical film having reagent layer containing the same
US4627014A (en) * 1984-04-09 1986-12-02 Eastman Kodak Company Method and apparatus for determination of an analyte and method of calibrating such apparatus
US4935346A (en) * 1986-08-13 1990-06-19 Lifescan, Inc. Minimum procedure system for the determination of analytes
EP0345781B1 (en) * 1988-06-09 1995-08-30 Boehringer Mannheim Corporation Defined volume test device
US5126275A (en) * 1990-09-19 1992-06-30 Miles Inc. Analytical method using tetrazolium salt indicators having a reflectance plateau
EP0522674B1 (en) * 1991-07-12 1998-11-11 Mark R. Robinson Oximeter for reliable clinical determination of blood oxygen saturation in a fetus

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003294746A (ja) * 2002-01-31 2003-10-15 Fuji Photo Film Co Ltd 生化学解析用ユニットの製造方法
JP2005046145A (ja) * 2003-07-17 2005-02-24 Ortho Clinical Diagnostics Inc 高比重リポタンパク質コレステロール定量化のための乾式分析要素
JP2006081492A (ja) * 2004-09-17 2006-03-30 Chiba Univ コレステロールの定量方法
WO2007007849A1 (ja) 2005-07-14 2007-01-18 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. 分析装置、及び分析方法
JP2010522336A (ja) * 2007-03-22 2010-07-01 クオシェント ダイアグノスティックス リミテッド 全血分析
JP2009236487A (ja) * 2008-03-25 2009-10-15 Terumo Corp ヘマトクリット値または血液成分濃度の測定方法および測定装置
WO2009119213A1 (ja) 2008-03-25 2009-10-01 テルモ株式会社 ヘマトクリット値または血液成分濃度の測定方法および測定装置
WO2010140407A1 (ja) * 2009-06-05 2010-12-09 テルモ株式会社 成分測定装置
JP2010281751A (ja) * 2009-06-05 2010-12-16 Terumo Corp 成分測定装置
WO2013147200A1 (ja) * 2012-03-29 2013-10-03 積水メディカル株式会社 ヘマトクリット値の測定方法
JPWO2013147200A1 (ja) * 2012-03-29 2015-12-14 積水メディカル株式会社 ヘマトクリット値の測定方法
JPWO2020183916A1 (ja) * 2019-03-11 2020-09-17
WO2020183916A1 (ja) * 2019-03-11 2020-09-17 テルモ株式会社 血糖値算出プログラム、血糖値算出方法及び血糖値測定装置
JP7372310B2 (ja) 2019-03-11 2023-10-31 テルモ株式会社 血糖値算出プログラム、血糖値算出方法及び血糖値測定装置

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EP1037048A2 (en) 2000-09-20

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