JP2000287954A - 血液検査用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 煩雑な混和作業をそれほど必要とすることな
く、短時間で血液を凝固させることができ、フィブリン
析出がほとんど生じない血清を容易に得ることができる
血液検査用容器を提供する。 【解決手段】 容器本体内に例えばペプチド鎖のアルギ
ニンと任意のアミノ酸残基との結合及び／またはリジン
と任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る酵素の
ような血液凝固促進剤と、血液凝固後の遠心分離時にフ
ィブリンが血清中に析出するのを抑制する、血液凝固第
ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィブリン架橋阻害剤
からなるフィブリン析出抑制剤とが収納されている、血
液検査用容器。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、血清生化学検査や
血清免疫学検査などの血清を用いた臨床検査分野におい
て用いられる血液検査用容器に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、臨床検査技術の進歩に伴い、血清
生化学検査、血清免疫学検査、血球検査などの血液検査
が広く普及し、病気の予防や早期診断に大きく貢献する
に至っている。

【０００３】上記血清検査に際しては、患者から採取し
た血液から血清を分離する必要がある。血清を分離する
に際しては、まず血液検査用容器に血液を採取し、凝固
させた後、遠心分離により血清が血餅から分離されてい
る。

【０００４】分離された血清は、通常、ピペットやデカ
ンテーションなどにより他の容器に移される。もっと
も、近年、検査速度を高めるため、並びに多数の検体を
処理するために、自動分注機により血液検査用容器から
直接血清を自動分析装置に分注する方法が広く用いられ
ている。

【０００５】従来の血液検査用容器としては、ガラス製
の容器、あるいはポリスチレン、ポリメチルメタクリレ
ート、ポリエチレンなどの合成樹脂からなる容器が用い
られているが、これらの血液検査用容器では以下の問題
点があった。

【０００６】第１に、血液検査用容器に血液を注入した
後、凝固に至るまでにかなりの時間を必要としていた。
従って、緊急に血清検査を行う必要がある場合、その要
求に応えることができなかった。

【０００７】すなわち、最も血液凝固時間が短いとされ
ているガラス製血液検査容器を用いた場合でも、血液注
入後から凝固に至るまでに、４０分〜６０分の時間が必
要であった。さらに、合成樹脂製血液検査容器では、血
液凝固までに４時間以上の時間が必要であった。

【０００８】上記のような問題を解決するために、シリ
カ、カオリン、ベントナイトなどの微粒子を凝固促進剤
として血液検査容器内に投入する方法が広く用いられて
いる。

【０００９】また、特開平５−１５７７４７号公報に
は、血液凝固促進成分として、凝固反応の最終段階であ
るフィブリノーゲンがフィブリンに転化する反応を促進
するトロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤を用いる方
法が開示されている。

【００１０】上記先行技術に記載の方法では、トロンビ
ンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤が、不織布、濾紙または
布などの支持体に含浸された状態で血液検査用有底管の
中央部に収納されている。この方法では、血液検査用有
底管として合成樹脂からなるものを用いた場合であって
も、凝固時間が大幅に短縮され、５分程度でほぼ凝固が
完了するとされている。

【００１１】しかしながら、トロンビンや蛇毒酵素など
の酵素系薬剤を用いた場合、凝固反応が非常に早く進行
するため、採血直後に十分に混和しないと、部分的には
凝固は速やかに進行するものの、全体としては凝固時間
が長くなりがちであった。その結果、遠心分離後にフィ
ブリンが多量に血清中に析出するという問題が生じる。
これは、トロンビンや蛇毒酵素と直接に接触した血液部
分が急激に凝固するため、生成したフィブリンあるいは
三次元架橋したフィブリンゲルが酵素を包囲することに
なり、酵素と未凝固の血液部分とのそれ以上の接触が抑
制され、それ以降の凝固反応が進行し難くなるためであ
ると考えられる。

【００１２】しかしながら、緊急を要する場合や多量の
検体を処理する必要がある場合には、血液検査容器に血
液を採取した後、十分に混和する時間的余裕はなく、従
って、上記トロンビンや蛇毒酵素などの酵素系薬剤を用
いる方法では、多量の検体を処理する場合や緊急を要す
る場合には対応することが非常に困難であった。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上述した従
来技術の欠点を解消し、採血直後に十分に混和する煩雑
な作業を簡略化することができ、しかも、短時間に血液
を凝固させることができ、さらにフィブリンの混入が少
ない血清を確実に得ることができる血液検査用容器を提
供することにある。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を達
成するためになされたものであり、本発明に係る血液検
査用容器では、容器本体内に血液凝固促進剤と、血液凝
固後の遠心分離時にフィブリンが血清中に析出するのを
抑制するフィブリン析出抑制剤とが収納されている。

【００１５】血液凝固促進剤としては、例えば、ペプチ
ド鎖のアルギニンとの任意のアミノ酸残基との結合及び
／またはリジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水分
解し得る酵素を用いることができる。

【００１６】また、本発明の特定の局面では、上記フィ
ブリン析出抑制剤として、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の関
与する反応を阻害する血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤
と、フィブリン架橋を阻害するフィブリン架橋阻害剤の
少なくとも一方が用いられる。

【００１７】上記血液凝固第ＸＩＩＩ因子は、トロンビ
ンなどの酵素が血液に作用した時に生じるフィブリンモ
ノマー間にイソペプチド結合による三次元架橋を形成さ
せるトランスグルタミナーゼとして知られている。この
三次元架橋によりフィブリンが強固なゲル状態となり、
フィブリンゲルを構成するが、血液凝固第ＸＩＩＩ因子
を阻害することにより、トロンビンや蛇毒酵素のような
血液を急速に凝固させる酵素を用いたとしても、それほ
ど緊急かつ煩雑な混和を必要とすることなく、フィブリ
ン析出が生じ難い血清を得ることができる。

【００１８】以下、本発明の詳細を説明する。本発明に
おいて、血液検査用容器の容器本体構成する材料につい
ては特に限定されず、ガラス、熱可塑性樹脂、熱硬化性
樹脂、変性天然樹脂などの適宜の従来より血液検査用容
器に用いられている材料を使用することができる。ま
た、容器本体の形状についても特に限定されず、試験管
のような有底筒状管、あるいはボトル状など適宜の形状
のものを用いることができる。上記血液検査用容器に
は、血液凝固促進剤と、フィブリン析出抑制剤とが収納
されている。

【００１９】血液凝固促進剤としては、特に限定される
わけではないが、ペプチド鎖のアルギニンと任意のアミ
ノ酸残基との結合及び／またはリジンと任意のアミノ酸
残基との結合を加水分解し得る酵素が用いられる。この
ような酵素としては、トロンビン、蛇毒から得られるト
ロンビン様酵素などのセリンプロテアーゼ、カテプシン
Ｂ、フィシンなどのチオールプロテアーゼ、キニナーゼ
Ｉなどの金属プロテアーゼなどを挙げることができる
が、特に、セリンプロテアーゼが好適に用いられる。

【００２０】上記血液凝固促進剤の量は血液１ｍＬに対
し、０．１〜１００単位が好ましい。０．１単位未満の
場合には、血液凝固時間が長くなったり、凝固が不完全
になることがあり、１００単位を超えると、検査値に悪
影響を及ぼすことがあり、かつコストが高くなる。より
好ましくは、０．５〜５０単位とされる。

【００２１】フィブリン析出抑制剤としては、血液凝固
第ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィシン架橋阻害剤
が用いられる。血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤として
は、マレイミド、Ｎ−エチルマレイミド、ｐ−クロロ第
２水銀安息香酸、ｐ−クロロ第２水銀フェニルスルホン
酸、フェニル第２水銀などの物質及びその誘導体が用い
られる。

【００２２】また、フィブリン架橋阻害剤としては、グ
ルタミル残基とのイソペプチド結合を阻害する物質が用
いられ、具体的には、グリシン、グリシルグリシン、グ
リシンメチルエステル、グリシンエチルエステルなどの
グリシン誘導体及びその塩、カダベリン、プトレッシン
などのジアミン化合物及びその誘導体もしくはその塩等
が挙げられる。これらは、単独で用いられてもよく、２
種以上併用されてもよい。

【００２３】上記血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の量
は、その種類によっても異なるが、少ない場合にはＸＩ
ＩＩ因子阻害効果が十分でないとがあり、多すぎると、
検査値に悪影響を及ぼすことがある。従って、血液１ｍ
Ｌに対し、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の量は０．０
１〜２０ｍｇの範囲が好ましく、より好ましくは０．０
５〜１０ｍｇである。

【００２４】また、血液凝固第ＸＩＩＩ因子の反応を阻
害したフィブリンは、プラスミンによる線溶を受けやす
いので、上記血液凝固促進剤中に抗線溶剤または抗プラ
スミン剤を添加してもよい。

【００２５】上記抗線溶剤または抗プラスミン剤として
は、その種類は特に限定されないが、ｔ−４−（アミノ
メチル）−シクロヘキサンカルボン酸、ε−アミノカプ
ロン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、アプロチニン、大
豆トリプシンインヒビターなどを挙げることができる。
これらは単独で用いられてもよく、２種以上併用されて
もよい。

【００２６】また、これらの抗線溶剤または抗プラスミ
ン剤は、得られる血清を用いた臨床検査に影響しない程
度の量で、血液凝固促進剤中に添加すればよい。例え
ば、ｔ−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボ
ン酸、ε−アミノカプロン酸、ｐ−アミノメチル安息香
酸については、血液１ｍＬに対し、約１０^-2〜１０^-8ｇ
程度、アプロチニンの場合には、血液１ｍＬに対し、約
１００〜６００ＫＩＵ（単位）、大豆トリプシンインヒ
ビターは、血液１ｍＬに対し、約５００〜４０００ＦＵ
（単位）の割合で血液凝固促進剤中に含有される。

【００２７】上記血液凝固促進剤は、血液検査用容器内
に収納されるが、その方法については特に限定されな
い。例を挙げると、血液凝固促進剤を溶液にして容器の
内壁に塗布し、乾燥する方法、粉末もしくは塊で管内に
収納する方法、不織布、織布、樹脂ビーズなどに担持さ
せて管内に収容する方法、血液凝固促進剤を溶液にして
管内に収容し、凍結乾燥する方法及びそれらを組合わせ
た方法などを挙げることができる。

【００２８】容器本体の内壁に血餅付着防止成分を塗布
することにより、遠心分離時の血餅剥離性を向上させる
ことができる。上記血餅付着防止成分としては、水に対
して難溶または不溶の親水性物質が挙げられる。例え
ば、ジメチルポリシロキサンのような脂肪族変性シリコ
ーンオイ、例えばメチルフェニルポリシロキサンなどの
芳香族変性シリコーンオイル、アルコール変性シリコー
ンオイル、部分ケン化ポリビニルアルコール、ビニルピ
ロリドンと酢酸ビニルとの共重合体などを挙げることが
できる。これらは単独で用いられてもよく、２種以上併
用されてもよい。

【００２９】また、上記血餅付着防止成分の量は、血液
１ｍＬに対し、０．００１〜１０ｍｇとすることが好ま
しい。０．００１ｍｇ未満の場合には、十分な血餅剥離
機能が発現しないことがあり、１０ｍｇを超えると、検
査値に悪影響を及ぼすことがある。血餅付着防止成分
は、血液検査用容器に塗布されるが、その塗布方法につ
いては特に限定されないが、溶液にして塗布し、乾燥さ
せる方法を用いることが好ましい。また、上記血液凝固
促進剤と混合し、同時に血液検査用容器の内壁に塗布し
てもよい。

【００３０】さらに、本発明に係る血液検査用容器内に
は、血清分離剤が収納されていてもよい。血清分離剤
は、通常、容器本体の底部に収容される。この場合、血
液検査用容器に採血された血液が凝固した後、遠心分離
を行うと、血清分離剤が血餅と血清との間に移動し、隔
壁を形成することにより、血清と血餅とが分離される。

【００３１】上記血清分離剤としては、公知のチクソト
ロピー性を有するゲル状物質が挙げられ、例えば、常温
で流動性を有する合成樹脂などに、チクソトロピー性付
与剤、比重調整剤及び粘度調整剤などの添加物を添加
し、混合することにより得られる。

【００３２】上記合成樹脂としては、例えば、ジシクロ
ペンタジエンなどのオリゴマーが、上記チクソトロピー
性付与剤としては、例えば、ソルビトールと芳香族アル
デヒドとの縮合物などが、上記比重調整剤としては、例
えば、シリカ、塩化パラフィンなどが、上記粘度調整剤
としては、例えば、フタル酸エステル、エポキシ化大豆
油などが挙げられる。

【００３３】

【実施例】以下、本発明の具体的な実施例を挙げること
により、本発明をより詳細に説明する。本発明は、以下
の実施例に限定されるものではない。

【００３４】（実施例１）血液凝固促進剤としてトロン
ビン（持田製薬社製）４０００単位と、血液凝固第ＸＩ
ＩＩ因子阻害剤としてのマレイミド１０ｍｇとに生理食
塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。この溶液を、内
径１６ｍｍ×長さ１００ｍｍのポリエチレン製チューブ
に４０μＬ添加し、乾燥し、実施例１の血液検査用容器
を得た。

【００３５】（実施例２）実施例１において、マレイミ
ドの使用量を１０ｍｇから４０ｍｇに変更したことを除
いては、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。

【００３６】（実施例３）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）２０００単位及びフィブリン架
橋阻害剤としてのグリシンエチルエステル２００ｍｇ
に、生理食塩水を加え、全量を２．０ｍＬとした。この
溶液を、実施例１と同様にして、ポリエチレン製チュー
ブに添加し、乾燥し、実施例３の血液検査用容器を得
た。

【００３７】（実施例４）グリシンエチルエステルの使
用量を２００ｍｇから８００ｍｇに変更したことを除い
ては、実施例３と同様にして血液検査用容器を得た。

【００３８】（実施例５）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）８０００単位と、フィブリン架
橋阻害剤としての塩酸グリシンメチルエステル１００ｍ
ｇとに生理食塩水及び水酸化リチウムを加え、ｐＨ＝
７．５の全量２．０ｍＬの溶液を得た。この溶液を、ポ
リエチレン製チューブに実施例１と同様にして添加し、
乾燥し、実施例５の血液検査用容器を得た。

【００３９】（実施例６）塩酸グリシンメチルエステル
の使用量を１００ｍｇから４００ｍｇに変更したことを
除いては、実施例５と同様にして血液検査用容器を得
た。

【００４０】（実施例７）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架
橋阻害剤としてのグリシルグリシン４００ｍｇに生理食
塩水を加え、全量を２．０ｍＬとした。以下、この溶液
を用い、実施例１と同様にして実施例７の血液検査用容
器を得た。

【００４１】（実施例８）グリシルグリシンの使用量を
４００ｍｇから１６００ｍｇに変更したことを除いて
は、実施例７と同様にして血液検査用容器を得た。

【００４２】（実施例９）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架
橋阻害剤として塩酸グリシンエチルエステル４００ｍｇ
を配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加え、ｐＨ
を７．５に合わせ、全量を２．０ｍＬとした。この溶液
を用い、以下、実施例１と同様にして、血液検査用容器
を得た。

【００４３】（実施例１０）塩酸グリシンエチルエステ
ルの使用量を４００ｍｇから８００ｍｇに変更したこと
を除いては、実施例９と同様にして血液検査用容器を得
た。

【００４４】（実施例１１）血液凝固促進剤としての蛇
毒トロンビン様酵素（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）（アメリ
カンダイアグノスティカ製）４０００単位及びフィブリ
ン架橋阻害剤として塩酸グリシンエチルエステル８００
ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加えて
ｐＨ値を７．５とし、全量２．０ｍＬの溶液を得た。こ
の溶液を用い、以下実施例１と同様にして血液検査用容
器を得た。

【００４５】（実施例１２）塩酸グリシンエチルエステ
ルの配合量を４００ｍｇから８００ｍｇに変更したこと
を除いては、実施例１１と同様にして血液検査用容器を
得た。

【００４６】（実施例１３）血液凝固促進剤としてのト
ロンビン（持田製薬社製）４０００単位及び血液凝固第
ＸＩＩＩ因子阻害剤としてマレイミド４０ｍｇ、及び血
餅剥離剤としてアルコール変性シリコーンオイル２０ｍ
ｇを配合し、生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとし
た。この溶液を用い、以下、実施例１と同様にして、血
液検査用容器を得た。

【００４７】（実施例１４）血液凝固促進剤としてのト
ロンビン（持田製薬社製）４０００単位、フィブリン架
橋阻害剤として塩酸グリシンメチルエステル２００ｍ
ｇ、血餅剥離剤としてアルコール変性シリコーンオイル
２０ｍｇを配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加
えて、ｐＨ＝７．５とし、かつ全量を２．０ｍＬとし
た。この溶液を用いて、以下実施例１と同様にして血液
検査用容器を得た。

【００４８】（比較例１）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）４０００単位に生理食塩水を加
えて、全量を２．０ｍＬとした。この溶液を用いて、以
下、実施例１と同様にして血液検査用容器を得た。

【００４９】（比較例２）トロンビンの使用量を４００
０単位から８０００単位に変更したことを除いては、比
較例１と同様にして血液検査用容器を得た。

【００５０】（比較例３）血液凝固促進剤としての蛇毒
（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）トロンビン様酵素（ナスカ
製）４０００単位に、生理食塩水を加えて全量を２．０
ｍＬとした。この溶液を用いて、以下、実施例１と同様
にして血液検査用容器を得た。

【００５１】（比較例４）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）４０００単位、血液凝固第ＸＩ
ＩＩ因子阻害剤としてマレイミド３．０ｍｇを配合し、
これらに生理食塩水を加えて全量を２．０ｍＬとした。
この溶液を用いて、以下、実施例１と同様にして血液検
査用容器を得た。

【００５２】（比較例５）血液凝固促進剤としてのトロ
ンビン（持田製薬社製）４０００単位及びフィブリン架
橋阻害剤として塩酸グリシンメチルエステル３．０ｍｇ
を配合し、生理食塩水及び水酸化リチウムを加えてｐＨ
を７．５に合わせ、かつ全量を２．０ｍＬとした。この
溶液を用い、以下、実施例１と同様にして血液検査用容
器を得た。

【００５３】〔評価〕上記のようにして得た実施例１〜
１４及び比較例１〜５の各血液検査用容器を用い、ヒト
新鮮血８ｍＬを各血液検査用容器に加え、緩やかに１回
だけ混和し、５分間静置した。５分後に、毎分３０００
回転で５分間遠心分離し、分離後の血清の状態を目視に
より確認した。結果を下記の表１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】上記５分間の遠心分離後に、実施例１〜１
４及び比較例１〜５の何れの血液検査用容器においても
凝固は一応完了していたが、比較例１〜５では血清中に
フィブリンが析出していた。すなわち、架橋した強固な
フィブリンが凝固成分の拡散を妨げ、部分的に未凝固な
部分が残っているものと考えられる。

【００５６】これに対して、実施例１〜１４では、分離
後の血清にフィブリンの析出は認められなかった。

【００５７】

【発明の効果】以上のように、本発明に係る血液検査用
容器では、容器本体に血液凝固促進剤と、フィブリン析
出抑制剤とが収納されているので、採血後に血液凝固が
速やかに進行し、血液凝固時間を短縮することができる
とともに、凝固に際し、フィブリン析出抑制剤によりフ
ィブリンの血清中への析出が抑制されるので、フィブリ
ンの混入がほとんど生じない血清を得ることができる。

【００５８】よって、短時間で血清を得ることができる
ので、緊急を要する医療現場において用いることがで
き、かつフィブリンの析出がほとんど生じないので、信
頼性に優れた検査結果を得ることが可能となる。

【００５９】本発明において、上記血液凝固成分が、ペ
プチド鎖のアルギニンと任意のアミノ酸残基との結合及
び／またはリジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水
分解し得る酵素で構成されている場合には、血液凝固が
より一層速やかに進行する。従って、血清を得るまでの
時間を短縮することができ、さらに上記フィブリン析出
抑制剤が添加されているので、フィブリンの析出が抑制
されるだけでなく、採血直後それほど十分に混和する必
要がない。

【００６０】フィブリン析出抑制剤として、血液凝固第
ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィブリン架橋阻害剤
を用いた場合には、血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤の関
与する反応が阻害され、あるいはフィブリン架橋阻害剤
によりフィブリンの架橋が阻害されるので、血清中への
フィブリンの析出を効果的に抑制することができる。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 容器本体内に血液凝固促進剤と、血液凝
   固後の遠心分離時にフィブリンが血清中に析出するのを
   抑制するフィブリン析出抑制剤とが収納されていること
   を特徴とする、血液検査用容器。
2. 【請求項２】 前記血液凝固促進剤は、ペプチド鎖のア
   ルギニンと任意のアミノ酸残基との結合及び／またはリ
   ジンと任意のアミノ酸残基との結合を加水分解し得る酵
   素である請求項１に記載の血液検査用容器。
3. 【請求項３】 前記フィブリン析出抑制剤が、血液凝固
   第ＸＩＩＩ因子阻害剤及び／またはフィブリン架橋阻害
   剤であることを特徴とする請求項１または２に記載の血
   液検査用容器。
4. 【請求項４】 前記血液凝固第ＸＩＩＩ因子阻害剤がマ
   レイミド、Ｎ−エチルマレイミド、ｐ−クロロ第二水銀
   安息香酸、ｐ−クロロ第二水銀フェニルスルホン酸及び
   フェニル第二水銀並びにこれらの誘導体もしくは塩から
   なる群から選択した少なくとも１種である請求項３に記
   載の血液検査用容器。
5. 【請求項５】 前記フィブリン架橋阻害剤が、グリシ
   ン、ジアミン化合物及びこれらの誘導体もしくはその塩
   からなる群から選択した少なくとも１種である、請求項
   ３に記載の血液検査用容器。