JP2000513343A - 炭水化物含有インスリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 優れた物理的安定性を有するインスリン製剤であって、溶解し及び／又は沈澱したヒトインスリン又はその類縁体もしくは誘導体と、炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有すろ水溶性の還元型炭水化物又は非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物又は還元型炭水化物のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、を含有するインスリン製剤が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】 炭水化物含有インスリン製剤 序説 本発明は、優れた物理的安定性を有するヒトインスリン、またはその類縁体又は 誘導体を含有する水性インスリン製剤に関する。さらに、本発明は、そのような 製剤を含む非経腸的処方剤、およびインスリン製剤の物理的安定性の改善方法に 関する。 発明の背景発明の分野 糖尿病は、真性糖尿病（diabetes mellitus）及び尿崩症（diabetes insipid us）におけるように多尿排出者の疾患をいう一般的用語である。真性糖尿病はグ ルコースを利用する能力がほぼ完全に失われている代謝性障害である。全人口の 約２％が糖尿病に罹患している。 １９２０年代にインスリンが採用されてから、真性糖尿病の治療の改善が継続 的になされてきた。血糖値が過大になることを抑制するために、糖尿病患者はし ばしば多数回の注射治療を行い、それによりインスリンが食事毎に投与される。 真性糖尿病の治療においては、レギュラーインスリン、セミレンテ のような、多種のインスリン製剤が提供され使用された。糖尿病患者は数十年間 インスリンにより治療されるため、インスリン製剤の安全性とライフクオリティ を改善するという大きな要求がある。商業的に入手可能なインスリン製剤には、 作用の発現の速さに特徴のあるものや、発現は遅いが幾分長時間作用するものも ある。通常、速効性インスリン製剤はインスリン溶液であるのに対し、遅効性イ ンスリン製剤は亜鉛塩のみの添加により、またはプロタミンの添加により、ある いは双方の組合せにより沈澱した結晶性及び／又は非晶質のインスリンを含む懸 濁液であり得る。加えて、患者の中には発現の早期作用型と、より長時間作用型 の双方を有する製剤を使用している者もいる。患者の中には、患者本人が、懸濁 製剤にインスリン溶液を望ましい割合で混合することにより最終的調製を自分自 身で調製する者もいる。 通常、インスリン製剤は皮下注射により投与される。患者にとって重要なこと は、インスリン製剤の作用プロファイルであり、これは注射からの時間の関数と してのグルコース代謝に対するインスリン作用である。とりわけ、このプロファ イルにおいては、作用の発現までの時間、最大値、及び全体的な持続時間が重要 である。異なる作用プロファイルを有する様々なインスリン製剤が患者により所 望され、要求されている。ある患者は、同じ日に非常に異なった作用プロファイ ルを有するインスリン製剤を使用し得る。例えば、所望される作用プロファイル は、その日の時間と患者により摂取されるいずれかの食事の量および内容物に依 存する。 しかしながら、等しく重要なことは、インスリン製剤の物理的安定性である。 射器が大量に使用されており、この場合、インスリン製剤はカートリッジの全体 が空になるまでその中に保存されることに起因する。１．５〜３．０ｍｌカート リッジを備えた注射器については、少なくとも１〜２週間は間に合わすことが可 能である。背景技術の説明 最初の安定な中性インスリン懸濁液は、スコットとフィッシャーにより開発さ れた（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．５８（１９３６）、７８） 。 彼らは、過剰なプロタミン及び亜鉛塩（インスリンＩＵ（国際単位）当たり２μ ｍｇの亜鉛）を存在させることにより、プロタミンインスリン製剤（ヘイジドル ン（Hagedornn）等により、Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｎ．１０６（１９３６） 、１７７〜１８０に述べられている。）を安定化させ得ることを発見した。 合衆国又はヨーロッパ薬局方に従って製造されたプロタミン亜鉛インスリンに は、非晶質プロタミン亜鉛インスリン及び結晶性プロタミン亜鉛インスリンが含 まれる。新たに調製されたプロタミン亜鉛インスリンには、非晶質沈澱物が主と して含まれる。これは貯蔵時に部分的に結晶粒子に変化し得、効果をより長引か せることになる。 ＮＰＨインスリン又はイソフェインインスリンと称される完全な結晶性プロタ ミン亜鉛インスリンの改質が、クレイエンビュール（Krayenbuhl）とローゼンベ ルグにより開発された（Ｒｅｐ．Ｓｔｅｎｏ Ｍｅｍ．Ｈｏｓｐ．Ｎｏｒｄ．Ｉ ｎｓｕｌｉｎｌａｂ．１（１９４６）、６０、およびデンマーク特許第６４，７ ０８号参照）。彼らは少量の亜鉛及びフェノール、又はフェノール誘導体、又は 好ましくはｍ-クレゾールの存在下で中性ｐＨ値にあるイソフェイン製剤中に一 緒に用いられたインスリンとプロタミンは、放置すると非晶質沈澱物を形成し得 、これは、徐々にではあるが完全に、端面が三角面で限定された横長の正方晶系 に変化する。インスリン及びサーモンプロタミンは、インスリン１ｍｇ当たりプ ロタミン硫酸塩約０．０９ｍｇに対応する重量比で一緒に結晶化する。ＩＵ当た り少なくとも０．１５μｇの亜鉛と、０．１％よりも高い濃度のフェノールが正 方晶系の調製に必要である。 初期の頃は、この種の結晶は天然の供給源由来のブタインスリン及びウシイン スリンをも用いて調製されたが、８０年代からは遺伝子工学的に、または半合成 的に作られたヒトインスリンもまた用いられている。 ヒトインスリンはいわゆるＡ鎖、Ｂ鎖の二つのポリペブチド鎖から構成され、 それぞれ２１アミノ酸および３０アミノ酸を含む。Ａ鎖及びＢ鎖は二つのシスチ ンジスルフィド結合により相互に連結される。他の大多数の種に由来するインス リンは類似構造を有するが、ヒトインスリンの鎖の対応する位置に同じアミノ酸 を含まないことがあり得る。 遺伝子工学として知られているプロセスの発達により、ヒトインスリンの類縁 体である極めて多様なインスリン化合物を容易に合成することが可能となった。 これらのインスリン類縁体においては、１以上のアミノ酸がヌクレオチド配列に よりコードされ得る他のアミノ酸と置換された。上記で説明したように、ヒトイ ンスリンは５１個のアミノ酸残基を含むため、多数のインスリン類縁体が可能で あることは明らかであり、事実、興味ある特性を備えた極めて多様な類縁体が合 成された。注射製剤のための濃度を備えたヒトインスリン溶液においては、イン スリン分子は６量体として会合形態で存在する（ブランジ等、糖尿病治療１３、 （１９９０）、９２３〜９５４）。皮下注射後、血流による吸収速度は分子の大 きさに依存すると考えられ、この６量体形成を妨げ、または抑制するアミノ酸置 換を備えたインスリン類縁体は並外れて速い発現作用を有することが見出された （ブランジ等、Ｉｂｉｄ）。これには糖尿病患者にとって大きな治療上の価値が ある。長時間作用型のプロタミンインスリン製剤の結晶においては、インスリン は６量体になっていることが見出される（バッシュミット等、Ａｃｔａ Ｃｈｒ ｙｓｔ．Ｂ４７、（１９９１）、９７５〜９８６）。 ヒトインスリンの類縁体に基づく薬学的製剤は、例えば以下の書類から知られ ている。 ＷＯ９５／００５５０はＡｓｐ^B28及びプロタミンを含むインスリン結晶に基 づく薬学的製剤に関し、それは投与されると生体内で速い発現と長時間の活性を 示す。さらに、結晶には亜鉛イオン及びフェノール及び／又はｍ-クレゾールが 含まれ得る。等張剤としてグリセリンが製剤に添加される。 米国特許第５，４６１，０３１号には、早期作用型単量体インスリン類縁体、 亜鉛、プロタミン及びフェノール誘導体を含有する種々の非経腸的な薬学的処方 剤が開示されている。さらに、その処方剤には等張剤として作用するグリセリン が含有される。 米国特許第５，４７４，９７８号には、６個の単量体インスリン類縁体、亜鉛 イオン、および少なくともフェノール誘導体３分子からなるヒトインスリン類縁 体の６量体複合体を含む早期作用型非経腸的処方剤が開示されている。好ましい 等張剤はグリセリンである。 残念ながら、インスリンは非共有結合性重合により不溶性且つ生物学的に不活 性なフィブリルを形成する傾向がある（c.f.例えば、ジェンス・ブランジェ、イ ンスリン公定処方製剤、スプリンゲル−ヴェルラグ、１９８７、およびその参照 ）。フィブリル形成は、温度を例えば３０℃以上に上げることにより、並びに付 随する変化により促進される。このフィブリル化プロセスは抑制することが極め て困難であり、インスリン製剤が貯蔵され得る期間に上限をもたらし、それ故ペ ンフ 一般にフィブリル形成はインスリンの単量体化を必要とするため、２量体及び ６量体を形成し難いインスリン類縁体はフィブリル化により物理的安定性は劣化 したものとなる。 したがって、改善された物理的安定性を備えたヒトインスリン、又はその類縁 体もしくは誘導体を含有するインスリン製剤を提供することが本発明の目的であ る。 本発明においては、この目的は、溶解し及び／又は沈澱したヒトインスリン又 はその類縁体もしくは誘導体と、炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子 を含有する水溶性の還元型炭水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物 の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もし くは還元型炭水化物のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合 物により達成された。図面の簡単な説明 図１はＡｓｐ^B28ヒトインスリン-プロタミン結晶及びマニトールを含有する本 発明処方剤の顕微鏡写真（倍率１０００倍）である。 図２はヒトインスリン-プロタミン結晶及びマニトールを含有する本発明処方 剤の顕微鏡写真（倍率１０００倍）である。 図３は溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリンと結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリ ンの双方を含有する本発明製剤と、溶解したヒトインスリンと結晶化したヒトイ ンスリンの双方を含有する製剤の作用プロファイルのグラフ表示である。さらに 双方の製剤にはマニトールが含有される。グラフはブタに注射後の血液グルコー ス反応である。図は安定性の高いＡｓｐ^B28ヒトインスリン製剤について、作用 発現の速さが維持されることを示す。 発明の説明定義 本明細書で用いる「ヒトインスリン類縁体」とは、１以上のアミノ酸が欠失さ れ及び／又は他のアミノ酸（コードされ得ないアミノ酸を含む）により置換され たヒトインスリン、あるいは追加のアミノ酸を含む（すなわち５１個より多くの アミノ酸を含む）ヒトインスリンを意味する。 本明細書で用いる「ヒトインスリン誘導体」とは、少なくとも１つの有機置換 基が１以上のアミノ酸と結合しているヒトインスリン又はその類縁体を意味する 。 本明細書において、「水溶性」という用語は、温度２０℃において少なくとも 約１０ｍｍｏｌ/ｌ、好ましくは少なくとも５０ｍｍｏｌ／ｌの水に対する溶解 度に対応する。 炭水化物、還元型炭水化物、単糖類、二糖類、並びにそのような化合物のエス テル及びエーテル誘導体という用語は、「Grundrlds af den organlske kemi、A lmen KemiIII、1．Ed.、Jul.Gjellerups forlag、 １９６９、２９９〜３１６頁 」におけるＫ．Ａ．ジェンセンの教義に従い用いられる。 本明細書においては、「非還元性炭水化物」という表現は、糖化されたインス リンを形成するために本発明製剤中のインスリンのアミノ基と実質的に反応し得 ない炭水化物を表す。この定義には、カルボニル基が、例えば無水物形成又は誘 導体化により不活性化され、または妨げられた炭水化物が含まれる。 ある側面において、本発明は水性インスリン製剤に関し、この製剤は、 ・溶解し及び／又は沈澱したヒトインスリン、またはその類縁体及び／又は誘導 体と、 ・１００〜４００ｍＭ、好ましくは１５０〜２５０ｍＭ、より好ましくは１８０ 〜２３０ｍＭの、炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水 溶性の還元型炭水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に 少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物または還元型 炭水化物のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、 を含有する。 他の側面において、本発明は水性インスリン製剤に関し、この製剤は、 ・溶解したヒトインスリンおよび沈澱したヒトインスリン、またはその類縁体及 び／又は誘導体と、 ・炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭水 化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４個の 炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物のエス テル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、 を含有する。 さらに他の側面において、本発明は水性インスリン類縁体製剤に関し、この製 剤は、 ・溶解し及び／又は沈澱したヒトインスリン類縁体と、 ・炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭水 化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４個の 炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物のエス テル及び／またはエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、 を含有する。好ましい態様 本発明のインスリン製剤に用いられる炭水化物又は炭水化物誘導体は、炭水化 物の主構造に５〜１８個の炭素原子を含有するものが有利であり、好ましくは以 下の化合物から選択される。すなわち、 ｉ）非還元性アルドース又はケトース、好ましくは非還元性アルドテトロース 、ケトテトロース、アルドペントース、ケトペントース、アルドヘキソース及 びケトヘキソース、より好ましくは非還元性アルドペントース、ケトペントー ス、アルドヘキソース及びケトヘキソースからなる群の中から選択される単糖 類、 ii）還元された単糖類、すなわち、アルジトールのような多価アルコールであ って、好ましくはアルドテトロース、ケトテトロース、アルドペントース、ケ トテトロース、アルドペントース、ケトペントース、アルドヘキソース、及び ケトヘキソースの還元形態、より好ましくはアルドペントース、ケトペントー ス、アルドヘキソース、及びケトヘキソースの還元形態（すなわち、ペンチト ール及びへキシトール）からなる群の中から選択される、 iii）非還元性二糖類であって、好ましくは非還元性ジヘキソースから選択さ れ る。 好適な還元型又は非還元性炭水化物の具体例は、マニトール、ソルビトール、 キシリトール、イノシトール、スクロース、及びトレハロースである。 i）〜iii）の中で好ましい化合物は、マニトール及びソルビトール、最も好ま しくはマニトールである。 好ましいエステル及びエーテル誘導体は、それぞれＣ₁〜Ｃ₄脂肪酸エステル誘 導体、およびＣ₁〜Ｃ₄アルキルエーテル誘導体である。 本発明の具体的な態様においては、インスリン製剤にはさらにハロゲン化物、 好ましくは塩化物、より好ましくは塩化ナトリウムが含有される。ハロゲン化物 の存在により一層高い物理的安定性を有する製剤が得られることが示された。 一般的に速効性ヒトインスリン類縁体を含有するインスリン製剤はかなり低い 物理的安定性を示すため、本発明はそのような類縁体を含有する製剤に関して特 に有利である。したがって、本発明におけるインスリン製剤には、好ましくは、 １以上の速効性ヒトインスリン類縁体、特にＢ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ 、Ｖａｌ又はＡｌａであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン 類縁体、あるいはデス（Ｂ２８〜Ｂ３０）インストリン、デス（Ｂ２７）インス トリン又はデス（Ｂ３０）ヒトインスリンが含有される。インスリン類縁体は、 好ましくは、Ｂ２８位がＡｓｐ又はＬｙｓであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏ であるヒトインスリン類縁体から選択される。最も好ましい類縁体は、Ａｓｐ^{B2 8} ヒトインスリン又はＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンである。 他の態様において、本発明におけるインスリン製剤は、１以上の脂肪親和性置 換基を有するインスリンのような長時間作用型のプロファイルを有するインスリ ン誘導体を含有する。好ましい脂肪親和性インスリンはアシル化インスリン（Ｗ Ｏ９５／０７９３１（ノヴォ・ノルディスクＡ／Ｓ）に述べられていろものを含 む）であり、例えば、Ｌｙｓ^B29のε−アミノ基が少なくとも６個の炭素原子か ら構成されるアシル置換基を含むヒトインスリン誘導体である。 好ましいインスリン誘導体は以下のものである。すなわち、 Ｂ２９-Ｎ^ε-ミリストイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-ミリ ストイル-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-パルミトイル-デス（Ｂ３０）-ヒトイ ンスリン、Ｂ２８-Ｎ^ε-ミリストイルＬｙｓ^B28-ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ ２８-Ｎ^ε-パルミトイルＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-ミリ スト イル-Ｔｈｒ^B29Ｌｙｓ^B30-ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-パルミトイル-Ｔｈｒ^{B 29} Ｌｙｓ^B30-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-（Ｎ-パルミトイル-γ-グルタミル ）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、及びＢ２９-Ｎ^ε-（ω-カルボキシヘプタ デカノイル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリンであり、最も好ましいのはＢ２９ -Ｎ^ε-ミリストイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリンである。 好ましい態様において、当該インスリン製剤は溶解したインスリン又はインス リン類縁体もしくは誘導体と、沈澱したインスリン又はインスリン類縁体もしく は誘導体の両者を、好ましくは結晶体で含有し、その重量比は１：９９〜９９： １、好ましくは２０：８０〜８０：２０、より好ましくは３０：７０〜７０：３ ０である。 本発明のこの態様において、インスリン製剤はインスリン又はインスリン類縁 体及びプロタミンと、任意に亜鉛及び／又はフェノール、ｍ-クレゾール、又は それらの混合物のようなフェノール化合物を含有する結晶を含有することが有利 である。結晶中のプロタミンの量は、好ましくは、インスリン又はインスリン類 縁体１００ＩＵ当たりプロタミン塩基０．２０〜０．４０ｍｇに対応する。結晶 中のプロタミンとインスリンの比は、より好ましくはイソフェインの比に対応す る。亜鉛は、好ましくはインスリン１００ＩＵ当たり亜鉛１０〜４０μｇ、より 好ましくはインスリン１００ＩＵ当たり亜鉛１５〜３５μｇの量で存在する。フ ェノールとｍ-クレゾールは、各々、好ましくは０〜４ｍｇ/ｍｌに対応する量で 存在する。しかしながら、ｍ-クレゾール１．４〜２．０ｍｇ/ｍｌとフェノール ０．６〜２．０mg/ｍｌからなる混合物が最も好ましい。 本発明の好ましいインスリン製剤は、 ａ）６０〜３０００ｎｍｏｌ/ｍｌ、好ましくは２４０〜１２００ｎｍｏｌ/ｍ ｌのヒトインスリン又はインスリン類縁体及び／又はインスリン誘導体と、 ｂ）１００〜４００ｍＭ、好ましくは１５０〜２５０ｍＭ、より好ましくは１ ８０〜２３０ｍＭの濃度の還元型炭水化物又は非還元性炭水化物であって、好 ましくはマニトールと、 ｃ）０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より好ましくは５〜２０ｍＭ の濃度の塩化物であって、好ましくは塩化ナトリウムと、 ｄ）１〜４ｍｇ／ｍｌ量の生理学的に許容可能な緩衝剤であって、好ましくは リン酸二ナトリウム二水和物のようなリン酸塩緩衝剤とを含有する。 本発明の製剤は、さらに、グリセリンのような通常等張剤として用いられる１ 以上の化合物を含有する。 インスリン製剤のｐＨ値は、好ましくは７．０〜７．８の範囲である。 さらに、本発明は溶解したインスリン類縁体と沈澱したインスリン類縁体の双 方を含有するインスリン製剤の調製方法に関し、この方法は以下の工程、すなわ ち、 ａ）ヒトインスリン類縁体、亜鉛、及びイソフェイン量未満のプロタミンを含 有する酸性溶液を提供する工程と、 ｂ）生理学的ｐＨにおいて緩衝剤として作用する物質を含有するアルカリ性溶 液を提供する工程と、 （上の溶液の少なくとも１つはさらにフェノール化合物を含有する。） ｃ）酸性溶液とアルカリ性溶液を混合し、任意に、ｐＨ値を６．５〜８．０、 好ましくは７．０〜７．８の範囲に調製する工程と、 ｄ）得られた懸濁液を放置して沈澱させる工程と、を含む。 この方法により、溶解したインスリン類縁体と沈澱したインスリン類縁体の両 者を含有するインスリン製剤を極めて簡単な手法で得ることができる。さらに、 得られた懸濁液の沈澱物は、通常、ロッド形の結晶からなり、これはいわゆるプ レミックス（PreMix）インスリン製剤に有利である。 工程ａ）の溶液中のインスリン類縁体のプロタミンに対する重量比は、好まし くは、最終生成物中の溶解したインスリン類縁体の沈澱したインスリン類縁体に 対する重量比が１：９９〜９９：１、好ましくは２０：８０〜８０：２０、より 好ましくは３０：７０〜７０：３０の範囲で得られるように選択される。より具 体的には、好ましくは、工程ａ）の溶液は１２０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌのイ ンスリン類縁体と０．０１〜５．０ｍｇ／ｍｌのプロタミンとを含有する。 さらに、工程ａ）の溶液は亜鉛を含有し、好ましくはインスリン１００ＩＵ当 たり亜鉛１０〜４０μｇ、より好ましくはインスリン１００ＩＵ当たり亜鉛１５ 〜３５μｇ含有する。 好ましい態様において、溶液a)及び／又は溶液b)は、塩化物、好ましくは塩化 ナトリウムを、最終生成物中に０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より 好ましくは５〜２０ｍＭ含有する。 工程ａ）の酸性溶液のｐＨは、好ましくは５以下、より好ましくは２〜３．５ の範囲である。 インスリン類縁体は、好ましくは、Ｂ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａ ｌ又はＡｌａであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン、ある いはデス（Ｂ２８〜Ｂ３０）ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）ヒトインスリン又 はデス（Ｂ３０）ヒトインスリンであり、より好ましくはＡｓｐ^B28ヒトインス リン又はＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、さらに好ましくはＡｓｐ^B28ヒト インスリンである。 工程a)及び／又は工程b)の溶液に用いられたフェノール化合物は、好ましくは 、フェノール、ｍ-クレゾール、又はそれらの混合物である。 さらに、工程a)及び／又は工程b)の溶液は、炭水化物の主構造に少なくとも４ 個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭水化物もしくは非還元性炭水化物を含 有し、または炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の 非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物のエステル及び／又はエーテル誘導体 、またはそれらの混合物を含有することが有利である。 前記炭水化物又は炭水化物誘導体は、好ましくは、炭水化物の主構造に５〜１ ８個の炭素原子を含有する。 特に好ましい態様では、工程a)及び／又は工程b)の溶液は、マニトール、ソル ビトール、キシリトール、イノシトール、トレハロース、スクロース、又はそれ らの中のいずれかとの混合物を含有し、好ましくはマニトール及び／又はソルビ トール、より好ましくはマニトールを含有する。 工程b)のアルカリ性溶液に用いられる緩衝剤物質は、好ましくは生理学的に許 容可能な緩衝剤であり、好ましくはリン酸塩緩衝剤、より好ましくはリン酸二ナ トリウム二水和物である。 沈澱したインスリン類縁体は、好ましくはインスリン類縁体及びプロタミンを 含有する結晶である。 工程d)で得られる懸濁液は、好ましくは、温度５℃〜４０℃、より好ましくは ２０℃〜３６℃、さらに好ましくは３０℃〜３４℃の範囲で放置され、沈澱され る。 さらに、本発明は以下の実施例により示されるが、これらに限定して解釈され るべきものではない。 実施例Ｉ 製剤１ 溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリンと結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリンの双 方を含有するインスリン製剤が、以下の方法で調製された。 溶液Ａ： 濃度２００ＩＵ／ｍｌのＡｓｐ^B28ヒトインスリンの溶液は、７６．５ｍｇの Ａｓｐ^B28ヒトインスリンに３２６μｌの０．２Ｎ塩酸と、１６３μｌの塩化亜 鉛溶液（０．４ｍｇ／ｍｌ）を添加することにより、これを水に溶解させること によって調製された。次いで、６．３５ｍｇのプロタミン硫酸塩溶液が撹拌しな がらインスリン溶液に加えられ、１７．２ｍｇのｍ−クレゾール、１５ｍｇのフ ェノール、及び４５５ｍｇのマニトールからなる混合物が撹拌しながらこの溶液 に加えられた。得られた透明溶液のｐＨは２．６〜２．９と測定され、１０ｍｌ の水が加えられた。溶液は２８〜３２℃で平衡化された。 溶液Ｂ： ２５ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物が注射用の水に溶解された。１７．２ ｍｇのｍ−クレゾール、１５ｍｇのフェノール及び４５５ｍｇのマニトールが撹 拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨは９と測定され、１０ｍｌの水 が加えられた。溶液は２８〜３２℃で平衡化された。 溶液ＡとＢの混合： 溶液Ｂは溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に再調製された。得られた懸濁液 は３０℃で６日間で放置され、結晶化された。 得られた製剤中の沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重量比は ７０：３０であった。 実施例II 製剤２ 溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリン及び結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリンの 双方を含有するインスリン製剤が、以下の方法で調製された。 i）結晶画分 溶液Ａ： 濃度２００ＩＵ／ｍｌのＡｓｐ^B28ヒトインスリンの溶液が、１９０．３ｍｇ のＡｓｐ^B28ヒトインスリンに８１３μｌの０．２Ｎ塩酸と、４１０μｌの塩化 亜鉛溶液（０．４ｍｇ／ｍｌ）を添加することにより、これを水に溶解させるこ とによって調製された。次いで、１６．１ｍｇのプロタミン硫酸塩溶液がインス リンの溶液に撹拌しながら加えられ、４３．０ｍｇのｍ−クレゾール、３７．５ ｍｇのフェノール、及び９０９ｍｇのマニトールからなる混合物と、１４．６ｍ ｇの塩化ナトリウムがこの溶液に撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液の ｐＨはｐＨ＝２．６〜２．９と測定され、２２ｍｌの水が加えられた。溶液は３ ２℃で平衡化された。 溶液Ｂ： ６２．４ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物が水に溶解された。４３．０ｍｇ のｍ−クレゾール、３７．５ｍｇのフェノール、９０９ｍｇのマニトール、及び １４．６ｍｇの塩化ナトリウムが撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液の ｐＨは９と測定され、２２ｍｌの水が加えられた。溶液は３２℃で平衡化された 。 溶液ＡとＢの混合： 溶液Ｂは溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に再調製され、５０ｍｌの水が加 えられた。得られた懸濁液は４日間３２℃で放置され、結晶化された。 得られた製剤中の沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重量比は ７０：３０であった。 実施例III−VI 製剤３〜６ 溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリンと結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリンの両 者を含有するインスリン製剤が、溶液ＡとＢにおいて使用されたマニトールの量 が、各々、８１８ｍｇ、１００５ｍｇ、１０４７ｍｇ、１１３７ｍｇである点を 除いて、実施例IIにおいて説明されたように調製された。 実施例VII 製剤７ 溶解したＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンと結晶化したＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29 ヒトインスリンの両者を含有するインスリン製剤が、以下の方法で調製された。 ｉ）結晶画分 溶液Ａ： 濃度２００ＩＵ／ｍｌのＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンの溶液が、水に６ ９．７ｍｇのＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンを懸濁させることにより調製さ れた。１６．０mgのｍ−クレゾール、６．５ｍｇのフェノール、３６４ｍｇのマ ニトール、及び２５．１ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物からなる混合物がこ の溶液に撹拌しながら加えられた。次いで、５０μｌの塩化亜鉛溶液（１０ｍｇ ／ｍｌ）が加えられた。得られた透明溶液のｐＨは７．４０と測定され、１０ｍ ｌの水が加えられた。溶液は１５℃で平衡化された。 溶液Ｂ： プロタミン硫酸塩溶液が、７．６１ｍｇのプロタミン硫酸塩と２５．１ｍｇの リン酸二ナトリウム二水和物を水に溶かすことにより調製された。１６．０ｍｇ のｍ−クレゾール、６．５ｍｇのフェノール、及び３６４ｍｇのマニトールが撹 拌しながら加えられた。この溶液はプロタミン硫酸塩溶液に撹拌しながら加えら れた。得られた透明溶液のｐＨは７．４０に再調製され、１０ｍｌの水が加えら れた。溶液は１５℃で平衡化された。 溶液ＡとＢの混合： 溶液Ｂは溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に再調製された。得られた懸濁液 は１５℃で３日間放置され、結晶化された。 ii）溶解画分 Ｌｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン溶液は、３４．９ｍｇのＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^{B 29} ヒトインスリンに３３μｌの１Ｎ塩酸と、２５μｌの塩化亜鉛溶液（１０ｍｇ ／ｍｌ）を添加することにより、これを水に溶解させることによって調製された 。次いで、２６．１ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物、６．５ｍｇのフェノー ル、１６．０ｍｇのｍ−クレゾール、及び３６４ｍｇのマニトールからなる混合 物がインスリン溶液に撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨはｐＨ ＝７．３と測定され、１０ｍｌの水が加えられた。 ６ｍｌの溶解画分が１４ｍｌの結晶フラクションに加えられ、ｐＨが７．３０ に調製された。 得られた製剤中の沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重量比は ７０：３０であった。 実施例VIII 製剤８ 溶解したヒトインスリンと結晶化したヒトインスリンの両者を含有するインス リン製剤が、以下の方法で調製された。 ｉ）結晶画分 溶液Ａ： ヒトインスリンの溶液は、６９．７ｍｇのヒトインスリンに６５μｌの１Ｎ塩 酸と、２６μｌの塩化亜鉛溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）とを加えることにより、これ を水に溶解させることによって調製された。次いで、６．０ｍｇのプロタミン硫 酸塩溶液がインスリン溶液に撹拌しながら加えられ、１５．０ｍｇのフェノール 及び１７．２ｍｇのｍ−クレゾールからなる混合物が溶液に撹拌しながら加えら れた。得られた透明溶液のｐＨはｐＨ＝２．７〜３．２と測定され、１０ｍｌの 水が加えられた。 溶液Ｂ： ２４．９ｍｇのリン酸ナトリウム二水和物が水に溶解された。１５ｍｇのフェ ノール、１７．２ｍｇのｍ−クレゾール、７２８ｍｇのマニトール、及び１１． ７ｍｇの塩化ナトリウムが撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨは ｐＨ＝９に調製され、１０ｍｌの水が加えられた。 溶液Ｂは溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に調製された。得られた懸濁液は 次の日まで２２〜２４℃で放置された。 ii）溶解画分 ヒトインスリンの溶液は、３４．９ｍｇのヒトインスリンに３３μｌの１Ｎ塩 酸と、１３μｌの塩化亜鉛溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）とを加えることにより、これ を水に溶解させることによって調製された。次いで、１２．５ｍｇのリン酸ナト リウム二水和物、１５ｍｇのフェノール、１７．２ｍｇのｍ−クレゾール、３６ ４ｍｇのマニトール、及び５．８ｍｇの塩化ナトリウムからなる混合物がインス リン溶液に撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨは、ｐＨ＝７．３ と測定され、１０ｍｌの水が加えられた。 ６ｍｌの溶解画分が１４ｍｌの結晶画分に加えられ、ｐＨが７．３０に調製さ れた。 得られた製剤中の沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重量比は ７０：３０であった。 実施例IX 製剤９ 溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリン及び結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリンの 双方を含有するインスリン製剤が、以下の方法で調製された。 溶液Ａ： 濃度２００ＩＵ／ｍｌのＡｓｐ^B28ヒトインスリン溶液は、１８９．９ｍｇの Ａｓｐ^B28ヒトインスリンに１６３μｌの１Ｎ塩酸と、１６３．５μｌの塩化亜 鉛溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を加えることにより、これを水に溶解させることによ って調製された。次いで、１１．５ｍｇのプロタミン硫酸塩溶液がインスリン溶 液に撹拌しながら加えられ、４４．３ｍｇのｍ−クレゾール、３８．６ｍｇのフ ェノール、及び１０４８ｍｇのマニトールからなる混合物と、７．３ｍｇの塩化 ナトリウムがこの溶液に撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨはｐ Ｈ＝２．６〜２．９と測定され、２５ｍｌの水が加えられた。溶液は２２〜２４ ℃で平衡化された。 溶液Ｂ： ６２．３ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物が水に溶解された。４４．３ｍｇ のｍ−クレゾール、３８．６ｍｇのフェノール、１０４８ｍｇのマニトール、及 び７．３ｍｇの塩化ナトリウムが撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液の ｐＨは９と測定され、２５ｍｌの水が加えられた。溶液は２２〜２４℃で平衡化 された。 溶液ＡとＢの混合： 溶液Ｂが溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に調製された。得られた懸濁液は ３２℃で２日間放置され、結晶化された。 得られた製剤中の沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重量比は ５０：５０であった。 実施例Ｘ（比較例） 製剤１０ 溶解したＡｓｐ^B28ヒトインスリンと結晶化したＡｓｐ^B28ヒトインスリンの双 方を含有するインスリン製剤が、以下の方法で調製された。 溶液Ａ： 濃度２００ＩＵ／ｍｌのＡｓｐ^B28ヒトインスリン溶液は、７６．５ｍｇのＡ ｓｐ^B28ヒトインスリンに３２６μｌの０．２Ｎ塩酸と、１６３μｌの塩化亜鉛 溶液（０．４ｍｇ／ｍｌ）を加えることにより、これを水に溶解させることによ って調製された。次いで、６．３５ｍｇのプロタミン硫酸塩溶液がインスリン溶 液に撹拌しながら加えられ、１７．２ｍｇのｍ−クレゾール、１５．０ｍｇのフ ェノール、及び１６０ｍｇのグリセリンからなる混合物がこの溶液に撹拌しなが ら加えられた。得られた透明溶液のｐＨはｐＨ＝２．６〜２．９と測定され、１ ０ｍｌの水が加えられた。溶液は２８〜３２℃で平衡化された。 溶液Ｂ： ２５ｍｇのリン酸二ナトリウム二水和物が注射用に水に溶解された。１７．２ ｍｇのｍ−クレゾール、１５．０ｍｇのフェノール、及び１６０ｍｇのグリセリ ンが撹拌しながら加えられた。得られた透明溶液のｐＨは９と測定され、１０ｍ ｌの水が加えられた。溶液は２８〜３２℃で平衡化された。 溶液Ｂは溶液Ａに加えられ、ｐＨは７．３０に再調整された。得られた懸濁液 は２８〜３２℃で２日間放置され、結晶化された。 得られた製剤中におけろ沈澱したインスリンの溶解したインスリンに対する重 量比は７０：３０であった。 実施例ＸＩ 物理的応力試験の物理的応力試験を受けた。 たり３０回転の速度で且つ３７℃±２℃の定温で、一日当たり４時間３６０°回 定温で保存された。 における変化が次の原則：２１に従い記録された。 ｉ）撹拌時に再び懸濁可能であり、塊や細粒のない白色懸濁液を含むカートリ ッジは「非フィブリル化」と分類された。 ii）塊及び／又は細粒を含み撹拌時に再懸濁し得ない懸濁液、及び／又はカー トリッジ壁に堆積している懸濁液を含むカートリッジは「フィブリル化した」 と仮定された。これはカートリッジへの６μｌの６Ｎ塩酸の添加により確かめ られた。すなわち、フィブリル化したカートリッジは、酸添加後は視覚的に透明 ではない。 カートリッジの回転はすべてのサンプルがフィブリル化されるまで続けられた。 結果は次の表Ｉに要約されている。 表Ｉ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ジェンセン、スティーン デンマーク国、デーコー―2791 ドラゲ ル、ソプフス・ファルクス・アレ 34

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．水性インスリン製剤であって、 溶解し及び／又は沈澱したヒトインスリン、又はその類縁体及び／又は誘導 体と、 １００〜４００ｍＭ、好ましくは１５０〜２５０ｍＭ、より好ましくは１８ ０〜２３０ｍＭの、炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有す る水溶性の還元型炭水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主 構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もし くは還元型炭水化物のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの 混合物と、 を含有する前記水性インスリン製剤。 ２．前記炭水化物又は炭水化物誘導体は炭水化物の主構造に５〜１８個の炭素原 子を含有する請求項１に記載のインスリン製剤。 ３．マニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール、トレハロース、 スクロース、又はそれらの中のいずれかとの混合物、好ましくはマニトール 及び／又はソルビトール、より好ましくはマニトールを含有する請求項２に 記載のインスリン製剤。 ４．前記インスリン製剤が、さらに、ハロゲン化物、好ましくは塩化物、より好 ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のイ ンスリン製剤。 ５．Ｂ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌａであり、Ｂ２９位 がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン類縁体、あるいはデス（Ｂ２８〜 Ｂ３０）ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）ヒトインスリン、又はデス（Ｂ３ ０）ヒトインスリンを含有する請求項１〜４のいずれか１項に記載のインス リン製剤。 ６．Ｂ２８位がＡｓｐ又はＬｙｓであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒ トインスリン類縁体、好ましくはＡｓｐ^B28ヒトインスリン又はＬｙｓ^B28 Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンを含有する請求項５に記載のインスリン製剤。 ７．１以上の脂肪親和性置換基、好ましくはアシル化インスリンを有するヒトイ ンスリン誘導体を含有する請求項１〜４のいずれか１項に記載のインスリン 製剤。 ８．Ｂ２９-Ｎ^ε-ミリストイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε- ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-パルミトイルヒトインスリン、 Ｂ２８-Ｎ^ε-ミリストイルＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ２８-Ｎ ^ε-パルミトイルＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-ミリス トイル-Ｔｈｒ^B29Ｌｙｓ^B30ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-パルミトイル-Ｔ ｈｒ^B29Ｌｙｓ^B30ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ^ε-（Ｎ-パルミトイル-γ-グ ルタミル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-（Ｎ-リトコリ ル-γ-グルタミル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、及びＢ２９-Ｎ^ε-（ ω-カルボキシヘプタデカノイル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリンからな る群から選択されるヒトインスリン誘導体、好ましくはＢ２９-Ｎ^ε-ミリス トイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリンを含有する請求項７に記載のインス リン製剤。 ９．前記インスリン製剤が、ヒトインスリン又はその類縁体もしくは誘導体及び プロタミンを含有する結晶を含有する請求項１〜８のいずれか１項に記載の インスリン製剤。 10．前記結晶が、さらに、亜鉛及び任意にフェノール化合物、好ましくはフェノ ール、ｍ-クレゾール、又はそれらの混合物を含有する請求項９に記載のイ ンスリン製剤。 11．溶解したインスリン又はインスリン類縁体および沈澱したインスリン又はイ ンスリン類縁体（好ましくは結晶化している）を、重量比で１：９９〜９９ ：１、好ましくは２０：８０〜８０：２０、より好ましくは３０：７０〜７ ０：３０含有する請求項１〜１０のいずれか１項に記載のヒトインスリン製 剤。 12．６０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌ、好ましくは２４０〜１２００ｎｍｏｌ／ｍ ｌのヒトインスリン又はインスリン類縁体もしくは誘導体を含有する請求項 １〜１１のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 13．０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より好ましくは５〜２０ｍＭの 塩化物、好ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項１〜１２のいずれか１ 項に記載のインスリン製剤。 14．さらに、生理学的に許容可能な緩衝剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤を含有す る請求項１〜１３のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 15．水性インスリン製剤であって、 溶解したヒトインスリン又はその類縁体及び／又は誘導体、および沈澱した ヒトインスリン又はその類縁体及び／又は誘導体と、 炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭 水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４ 個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物 のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、 を含有する前記水性インスリン製剤。 16．前記炭水化物又は炭水化物誘導体は炭水化物の主構造に５〜１８個の炭素原 子を含有する請求項１５に記載のインスリン製剤。 17．マニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール、トレハロース、 スクロース、またはそれらのいずれかとの混合物、好ましくはマニトール及 び／又はソルビトール、より好ましくはマニトールを含有する請求項１６に 記載のインスリン製剤。 18．前記インスリン製剤は、さらに、ハロゲン化物、好ましくは塩化物、より好 ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項１５〜１７のいずれか１項に記載 のインスリン製剤。 19．Ｂ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌａであり、Ｂ２９位 がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン類縁体、もしくはデス（Ｂ２８〜 Ｂ３０）ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）ヒトインスリン、又はデス（Ｂ３ ０）ヒトインスリンを含有する請求項１５〜１８のいずれか１項に記載のイ ンスリン製剤。 20．Ｂ２８位がＡｓｐ又はＬｙｓであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒ トインスリン類縁体、好ましくはＡｓｐ^B28ヒトインスリン又はＬｙｓ^B28 Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンを含有する請求項１９に記載のインスリン製剤。 21．１以上の脂肪親和性置換基、好ましくはアシル化インスリンを有するヒトイ ンスリン誘導体を含有する請求項１５〜１８のいずれか１項に記載のインス リン製剤。 22．Ｂ２９-Ｎ^ε-ミリストイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε- ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-パルミトイルヒトインスリン、 Ｂ２８-Ｎ^ε-ミリストイルＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ２８-Ｎ ^ε-パルミトイルＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-ミリス トイル-Ｔｈｒ^B29Ｌｙｓ^B30-ヒトインスリン、Ｂ３０-Ｎ^ε-パルミトイル- Ｔ ｈｒ^B29Ｌｙｓ^B30-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-（Ｎ-パルミトイル-γ- グルタミル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｎ^ε-（Ｎ-リトコ リル-γ-グルタミル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、及びＢ２９-Ｎ^ε- （ω-カルボキシヘプタデカノイル）-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリン、か らなる群から選択されるヒトインスリン誘導体、好ましくはＢ２９-Ｎ^ε-ミ リストイル-デス（Ｂ３０）-ヒトインスリンを含有する請求項２１に記載の インスリン製剤。 23．前記インスリン製剤は、インスリン、インスリン類縁体、又はインスリン誘 導体、及びプロタミンを含有する結晶を含有する請求項１５〜２２のいずれ か１項に記載のインスリン製剤。 24．前記結晶は、さらに、亜鉛、及び任意にフェノール化合物、好ましくはフェ ノール、ｍ-クレゾール、またはそれらの混合物を含有する請求項２３に記 載のインスリン製剤。 25．溶解したインスリン又はインスリン類縁体、および沈澱したインスリン又は インスリン類縁体（好ましくは結晶化している）を重量比で１：９９〜９９ ：１、好ましくは２０：８０〜８０：２０、より好ましくは３０：７０〜７ ０：３０含有する請求項１５〜２４のいずれか１項に記載のインスリン製剤 。 26．還元型炭水化物又は非還元性炭水化物であって、好ましくはマニトールが、 １００〜４００ｍＭ、好ましくは１５０〜２５０ｍＭ、より好ましくは１８ ０〜２３０ｍＭに対応する量で存在する請求項１５〜２５のいずれか１項に 記載のインスリン製剤。 27．６０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌ、好ましくは２４０〜１２００ｎｍｏｌ／ｍ ｌのヒトインスリン又はインスリン類縁体もしくは誘導体を含有する請求項 １３〜２６のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 28．０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より好ましくは５〜２０ｍＭの 塩化物、好ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項１５〜２７のいずれか １項に記載のインスリン製剤。 29．さらに、生理学的に許容可能な緩衝剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤を含有す る請求項１５〜２９のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 30．水性インスリン類縁体製剤であって、 溶解した及び／又は沈澱したヒトインスリン類縁体と、 炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭 水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４ 個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物 のエステルおよび／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物と、を含有 する前記水性インスリン類縁体製剤。 31．前記炭水化物又は炭水化物誘導体は炭水化物の主構造に炭素原子を５〜１８ 個含有する請求項３０に記載のインスリン製剤。 32．マニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール、トレハロース、 スクロース、又はそれらの中のいずれかとの混合物、好ましくはマニトール 及び／又はソルビトール、より好ましくはマニトールを含有する請求項３１ に記載のインスリン製剤。 33．前記インスリン製剤は、さらに、ハロゲン化物、好ましくは塩化物、より好 ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項３０〜３２のいずれか１項に記載 のインスリン製剤。 34．前記ヒトインスリン類縁体は、Ｂ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ 、 又はＡｌａであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン、あ るいはデス（Ｂ２８〜３０）ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）ヒトインスリ ン、又はデス（Ｂ３０）ヒトインスリンである請求項３０〜３３のいずれか １項に記載のインスリン製剤。 35．前記ヒトインスリン類縁体は、Ｂ２８位がＡｓｐ又はＬｙｓであり、Ｂ２９ 位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン、好ましくはＡｓｐ^B28ヒトイ ンスリン又はＬｙｓ^B28Ｐｒｏ^B29ヒトインスリンである請求項３４に記載 のインスリン製剤。 36．前記ヒトインスリン類縁体はＡｓｐ^B28ヒトインスリンである請求項３５に 記載のインスリン製剤。 37．前記インスリン製剤は、インスリン類縁体及びプロタミンを含有する結晶を 含有する請求項３０〜３６のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 38．前記結晶は、さらに、亜鉛、および任意にフェノール化合物、好ましくはフ ェノール、ｍ-クレゾール、又はそれらの混合物を含有する請求項３７に記 載のインスリン製剤。 39．溶解したインスリン類縁体、および沈澱したインスリン類縁体（好ましくは 結晶化している）を重量比で１：９９〜９９：１，好ましくは２０：８０〜 ８０：２０、より好ましくは３０：７０〜７０：３０含有する請求項３０〜 ３８のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 40．６０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌ、好ましくは２４０〜１２００ｎｍｏｌ／ｍ ｌのヒトインスリン類縁体を含有する請求項３０〜３９のいずれか１項に記 載のインスリン製剤。 41．０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より好ましくは５〜２０ｍＭの 塩化物、好ましくは塩化ナトリウムを含有する請求項３０〜４０のいずれか １項に記載のインスリン製剤。 42．さらに、生理学的に許容可能な緩衝剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤を含有す る請求項３０〜４１のいずれか１項に記載のインスリン製剤。 43．請求項１〜４２のいずれか１項に記載のインスリン製剤を含有する、非経腸 的な薬学的処方剤。 44．炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭 水化物もしくは非還元性炭水化物、または炭素原子の主構造に少なくとも４ 個の炭素原子を含有する水溶性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物 のエステル及び／又はエーテル誘導体、またはそれらの混合物の使用であっ て、ヒトインスリン又はその類縁体及び／又は誘導体を含有するインスリン 製剤の物理的安定性を改善するための使用。 45．マニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール、トレハロース、 スクロース、又はそれらの中のいずれかとの混合物、好ましくはマニトール 及び／又はソルビトール、より好ましくはマニトールの使用であって、ヒト インスリン又はその類縁体及び／又は誘導体を含有するインスリン製剤の物 理的安定性を改善するための使用。 46．溶解したインスリン類縁体および沈澱したインスリン類縁体の双方を含有す るインスリン製剤の調整方法であって、 a)ヒトインスリン類縁体、亜鉛、及びイソフェイン量未満のプロタミン を含有する酸性溶液を提供する工程と、 b)生理学的ｐＨにおいて緩衝剤として作用する物質を含有するアルカ リ性溶液を提供する工程と、 （上記溶液の少なくとも１つは、さらに、フェノール化合物を含有す る。） c)酸性溶液とアルカリ性溶液を混合し、任意に、ｐＨ値を６．５〜８． ０、好ましくは７．０〜７．８の範囲に調整する工程と、 d)得られた懸濁液を放置し沈澱させる工程と、 を含有する前記調製方法。 47．工程a)の溶液中のインスリン類縁体のプロタミンに対する重量比は、最終 生成物中の溶解したインスリン類縁体の沈澱したインスリン類縁体に対する 重量比が１：９９〜９９：１、好ましくは２０：８０〜８０：２０、より好 ましくは３０：７０〜７０：３０の範囲で得られるように選択される請求項 ４６に記載の方法。 48．工程a)の溶液は１２０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌのインスリン類縁体と、０ ．０１〜５．０ｍｇ／ｍｌのプロタミンとを含有する請求項４７に記載の方 法。 49．工程a)の溶液は、さらに、亜鉛、好ましくは塩化亜鉛を、インスリン１００ ＩＵ当たり亜鉛１０〜４０μｇ、好ましくはインスリン１００ＩＵ当たり亜 鉛１５〜３５μｇに対応する量で含有する請求項４８に記載の方法。 50．溶液a)及び／又は溶液b)は、最終生成物中に塩化物、好ましくは塩化ナト リウムを、０〜１００ｍＭ、好ましくは５〜４０ｍＭ、より好ましくは５〜 ２０ｍＭに対応する量で含有する請求項４６〜４９のいずれか１項に記載の 方法。 51．工程a)の酸性溶液のｐＨは５以下、好ましくは２〜３．５の範囲である請求 項４６〜５０のいずれか１項に記載の方法。 52．インスリン類縁体はＢ２８位がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、又はＡｌ ａであり、Ｂ２９位がＬｙｓ又はＰｒｏであるヒトインスリン、またはデス （Ｂ２８〜Ｂ３０）ヒトインスリン、デス（Ｂ２７）ヒトインスリン、又は デス（Ｂ３０）ヒトインスリンである請求項４６〜５１のいずれか１項に記 載の方法。 53．前記インスリン類縁体はＡｓｐ^B28ヒトインスリン又はＬｙｓ^B28Ｐｒｏ ^B29ヒトインスリン、好ましくはＡｓｐ^B28ヒトインスリンである請求項５２ に記載の方法。 54．工程a)及び／又は工程b)は、さらに、フェノール化合物、好ましくはフェ ノール、ｍ-クレゾール、又はそれらの混合物を含有する請求項４６〜５３ のいずれか１項に記載の方法。 55．工程a)及び／又は工程b)の溶液は、さらに、炭水化物の主構造に少なくと も４個の炭素原子を含有する水溶性の還元型炭水化物もしくは非還元性炭水 化物、または炭水化物の主構造に少なくとも４個の炭素原子を含有する水溶 性の非還元性炭水化物もしくは還元型炭水化物のエステル及び／又はエーテ ル誘導体、またはそれらの混合物を含有する請求項４６〜５４のいずれか１ 項に記載の方法。 56．前記炭水化物又は炭水化物誘導体は炭水化物の主構造に５〜１８個の炭素原 子を含有する請求項５５に記載の方法。 57．工程a)及び／又は工程b)の溶液はマニトール、ソルビトール、キシリトー ル、イノシトール、トレハロース、スクロース、又はそれらの中のいずれか との混合物、好ましくはマニトール及び／又はソルビトール、より好ましく はマニトールを含有する請求項５６に記載の方法。 58．工程b)のアルカリ性溶液に用いられた緩衝剤物質は、生理学的に許容可能な 緩衝剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤、より好ましくはリン酸二ナトリウム二 水和物である請求項４６〜５７のいずれか１項に記載の方法。 59．沈澱したインスリン類縁体は、インスリン類縁体及びプロタミンを含有する 結晶である請求項４６〜５８のいずれか１項に記載の方法。 60．工程d)で得られた懸濁液は５℃〜４０℃、好ましくは２０℃〜３６℃、より 好ましくは３０℃〜３４℃の範囲の温度で放置され、沈澱された請求項４６ 〜５９のいずれか１項に記載の方法。