JP6869923B2 - 免疫グロブリン単一可変ドメインを伴うアッセイにおける非特異的タンパク質干渉を予測、検出及び低減するための技術 - Google Patents

免疫グロブリン単一可変ドメインを伴うアッセイにおける非特異的タンパク質干渉を予測、検出及び低減するための技術 Download PDF

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Description

本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメインの分野に関する。
免疫グロブリン単一可変ドメイン又は「ＩＳＶ」は、本明細書において一般に、
− 免疫グロブリンフォールドを含み、又はすなわち、免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ又はＶＨＨドメインなど）を形成するように、適切な条件（例えば、生理条件）下で（すなわち、フォールディングすることによって）免疫グロブリンフォールドを形成でき；
及び
− （機能的抗原結合部位を形成するために別の免疫グロブリン可変ドメインとの相互作用（例えば、ＶＨ−ＶＬ相互作用）を必要としないという意味で）機能的抗原結合部位を含む免疫グロブリン可変ドメインを形成する（又は、このような適切な条件下で前記免疫グロブリン可変ドメインを形成できる）アミノ酸配列と定義される。
当技術分野において現在公知である免疫グロブリン単一可変ドメインのいくつかの例は、ＶＨＨ及び／又は（その他の）ナノボディ、ｄＡｂ及び（単一）ドメイン抗体である。これらの中で、本出願の出願日の時点では、種々のナノボディが第Ｉ相及び第ＩＩ相臨床試験にある。このため、ＩＳＶで処置される人々（例えば、臨床試験の被験者、及びこのようなＩＳＶの上市後にこのようなＩＳＶで処置される患者）に由来する生体サンプルを分析するための信頼性のあるアッセイを利用可能にすることが重要である。
処置を処方する臨床医も、種々の処置態様をモニタリングするための信頼性のあるアッセイが利用可能になることを望んでいるので、これは、制御する目的にだけではなく、生物学的薬物による患者の処置にも重要である。
例えば、生物学的薬物分子の臨床開発では、それらの免疫原性、特にそれらがいわゆる「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ」を誘導できる程度を評価することが重要である。これは、いわゆる「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ（免疫）アッセイ」を使用して決定される（例えば、Shankarらによる総説、Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 48 (2008), 1267-1281；及びMire-Sluis et al., J. Immunol. Meth. 289 (2004), 1-16; Peng et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 54, (2011), 629-635；及びLoyet et al., J. Immunol. Meth. 345 (2009), 17-28を参照のこと）。このようなＡＤＡアッセイ、及びそれらを実施するため方法は薬理学分野の標準的な知識であり、生物学的薬物製品の臨床開発で通常使用されている（そして世界中の種々の規制当局によって必要とされている）。
例えばMire-Sluisの論文の３頁及び４頁に記載されており、例えばPengの論文の図にも概略的に例示されているように、「ELISA−ブリッジング形式」、「ELISA−直接形式」、「間接形式」、放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰ）、「表面プラズモン共鳴」及び「電気化学発光−ブリッジング形式」などの多数の異なるＡＤＡアッセイ形式が公知である。ＡＤＡ免疫アッセイを実施するためのその他の形式は、当業者には明らかである。
当業者であれば、ＡＤＡアッセイを準備及び実施するのに適切であることが示されている多数の異なる市販の技術基盤も熟知しているであろう。これらのものとしては、限定されないが、MSD platform (Mesoscale)、Gyrolab (Gyros)及びoctet platform (Fortebio)が挙げられる。
ＡＤＡアッセイ形式のいくつかの非限定的な例は、図１Ａ〜図１Ｃにも概略的に示されている。
一般に、ＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのこのようなＡＤＡアッセイでは、ＩＳＶは「分析剤」として（すなわち、ＡＤＡが、試験されるサンプル中に存在するかを検出するのに使用される化合物として）使用され、ＡＤＡは「抗原」（すなわち、試験されるサンプル中の検出されるべき化合物）であることに留意するべきである。従って、これらのアッセイでは、ＩＳＶは、通常／多くの場合、担体（例えば、ELISAプレート）に結合されるのに対して、ＡＤＡは、（もしある場合は）アッセイに供されるサンプル中に存在する。
本明細書において記載される本発明をより良く理解するためには、−対照的に−ＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせるかを予測するのに本明細書において使用される方法では、ＩＳＶは、通常、「抗原」として（すなわち、検出されるべき化合物として）使用され、抗体（これは本明細書においてさらに説明される）は、「分析剤」として（すなわち、所定のＩＳＶが結合するか否かをそれぞれ検出し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かをそれぞれ検出するための手段として）使用されることに予め留意するべきである。従って、本発明のこの方法では、分析剤として使用される抗体（これは、本明細書において「分析抗体」とも称される）は、通常、担体に（すなわち、ELISAプレートに）結合され、ＩＳＶは、試験されるべきサンプルである（前記サンプル中に存在する）。しかしながら、一般には、本発明は、「分析抗体」が担体に結合されるアッセイに限定されないことに留意するべきである。例えば、（図１に示されており、実施例に記載されているように）本発明のアッセイを実施する代替方法では、分析抗体はブリッジング剤として代わりに使用されるので、（プレート上にコーティングされるＩＳＶを介してプレートに間接的には結合されるが）プレートに結合されるというよりもむしろ溶液中に存在する。しかしながら、実施例に記載されている特定のブリッジングアッセイ（これは競合アッセイである）においても、分析抗体は、分析剤として（すなわち、目的のＩＳＶが結合するか否かをそれぞれ決定し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かをそれぞれ決定するのに）依然として使用される。本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者であれば、所定のＩＳＶが結合できるか否かをそれぞれ決定し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かを決定するのに分析抗体が分析剤として使用され得るその他のアッセイ形式を設計できることも想定される。
一本鎖Ｆｖ又は「ＳｃＦｖ」（これらは、ＩＳＶと同様に、定常ドメインと結合していない免疫グロブリン単一可変ドメインを含有する構築物である）の研究結果として、免疫グロブリン単一可変ドメインのＣ末端は、抗体では可変ドメインと定常ドメインとの間の境界面に埋まっているが、可変ドメインが定常ドメインと結合していない場合には溶媒に曝露されるようになる疎水性パッチを形成すると当技術分野では説明されている（Nieba et al., Protein Engineering, 10, 435-444 (1997)）。曝露されたＣ末端は、（新規及び／又は既存の）抗薬物抗体を生じさせることができ、及び／又は（新規及び／又は既存の）抗薬物抗体と相互作用できるＢ細胞エピトープを形成し得（国際公開第11/07586号）、次いで、これらの存在は、上述のＡＤＡアッセイを使用して決定され得ることも説明されている。この理由により、可変ドメインのＣ末端の一部を形成するアミノ酸残基のいくつかに対する突然変異を作って、前記疎水性を減少させ、及び／又は前記エピトープを除去することが提案された。例えば、Niebaらは、ＶＨ領域の１１位、１４位、４１位、８４位、８７位及び／又は８９位（Kabatのナンバリング）を突然変異させることを提案しているのに対して、国際公開第11/07586号では、ＶＬドメインの９９位、１０１位及び／若しくは１４８位（AHoのナンバリング）、又はＶＨドメインの１２位、９７位、９８位、９９位、１０３位及び／若しくは１４４位（先と同様に、AHoのナンバリング−これらの位置は、Kabatの１１位、８３位、８４位、８５位、８９位及び１０３位に対応する）を突然変異させることが提案されている。
しかしながら、これらの参考文献はいずれもが、被検体の血中または血清中に存在するある種のタンパク質が、ＩＳＶを用いるＡＤＡアッセイにおいて干渉し得ることを認識していない。そしてこのために、これらの参考文献は、ＡＤＡアッセイにが、試験されるべきサンプル中の（新規又は既存の）抗薬物抗体についての真の存在／程度を決定するために用いられることが可能になるように、このようなＡＤＡアッセイにおける非特異的タンパク質干渉をどのようにして回避するかという課題を対象としていない（前記課題の解決手段も提供していない）。
対照的に本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメインが、ＡＤＡアッセイにおいて非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を有するか否かを当業者が予測することを容易に可能にする方法及びアッセイを提供する。本明細書において記載される方法及びアッセイはまた、可変ドメインが、ＡＤＡアッセイにおいてこのようなタンパク質干渉を受ける傾向又はリスクを有し得ると思われる場合、可変ドメインに対する改変（候補）がこのようなタンパク質干渉を減少させ、又は本質的には完全に回避するかを予測するために、当業者が、可変ドメインに対する改変（候補）を容易に試験することを可能にする。
本発明はまた、このようなタンパク質干渉を減少させ、又は本質的に回避するために、可変ドメインに対して行われ得る多数の改変を説明する。非限定的な一態様によれば、この改変は、限られた数（本明細書においてさらに説明される）のアミノ酸残基（本明細書においてさらに説明される）を可変ドメインのＣ末端に付加することを含む。驚くべきことに、多数の異なる可変ドメイン又はそれに基づく構築物について、１個のアミノ酸残基（例えば、１個のアラニン残基）をＣ末端に付加さえすれば、このような１個のアミノ酸の付加それ自体によっては、NiebaらによればＩＳＶのＣ末端に存在する疎水性パッチを「覆う」か又は「埋める」のに十分ではないとしても、ＡＤＡアッセイにおけるタンパク質干渉の問題を実質的に又はさらに本質的には完全に取り除くことができることが見出された。同様に、本発明を何ら又はあらゆる機序若しくは説明に限定するものではないが、このような１個のアミノ酸の付加は、国際公開第11/07586号によれば可変ドメインのＣ末端に存在し得るＢ細胞エピトープを「覆う」か又は「埋める」のに十分ではないことも想定される。本発明のこの具体的な態様によれば、限られた数の又は１個のアミノ酸を可変ドメインのＣ末端に付加することにより（すなわち、Niebaら及び国際公開第11/07586号によって提案されているように、Ｃ末端領域それ自体の中には置換を作らない）、−多くの場合では−非特異的タンパク質干渉の問題を有意に減少させ、又はさらには本質的に取り除き得るが、Ｃ末端へのこのような付加をＣ末端領域内の突然変異と組み合わせることも本発明のこの態様の範囲内であることにも留意するべきである。しかしながら、この点において、本発明は、このような突然変異を作る論理的根拠に関しては特に限定されないことにも留意するべきである。例えば、可変ドメイン（限定されないが、ＶＨＨドメインを含む）をヒト化するために、又はＶＨドメインを「ラクダ化」するために（例えば、国際公開第08/020079号、及び本明細書において参照されるAblynx N.V.によるその他の出願のいくつかを参照のこと）、Ｃ末端内のアミノ酸残基（Niebaらによって、及び国際公開第11/07586号で明確に言及されている位置を含む）に対して突然変異を作ることが周知である。
本明細書において教示される方法、アッセイ及び改変は、定常ドメイン（又は、可変ドメインのＣ末端領域を「保護」し、覆い、又は「埋める」働きをする別の基又はペプチド部分）に連結していないか、又はさもなければ結合している種々の可変ドメインに適用され得、より一般には、溶媒に曝露されているＣ末端領域を有する可変ドメインに適用され得ると想定される。しかしながら、本発明の好ましいが非限定的な一態様によれば、この方法、アッセイ及び改変は、特に重鎖可変ドメイン（ＶＨ）に適用され得、本発明の具体的な一態様によればＶＨＨドメインに適用され得る。
本明細書において記載される方法、アッセイ及び改変は、適切には、１個以上の可変ドメインを含有するタンパク質構築物に適用され得、特に、可変ドメインが構築物のＣ末端部分を形成するか、又はさもなければ本明細書において記載される方法及びアッセイの場合では可変ドメインのＣ末端領域が溶媒に曝露されているこのような構築物に適用され得ることも想定される。先と同様に、本発明の好ましいが非限定的な一態様によれば、この方法、アッセイ及び改変は、ＶＨドメイン（特にＶＨＨドメイン）が構築物のＣ末端部分を形成するか、又はさもなければ本発明の方法及びアッセイの場合では溶媒に曝露されている構築物に適用される。
このような構築物のいくつかの非限定的な例は、直接的に又は１個以上の適切なリンカーを介して連結された２個以上のＩＳＶ（先と同様に、具体的な一態様によれば、ＶＨ又はＶＨＨドメイン）であって、このような構築物のＣ末端部分を形成する２個以上のＩＳＶを含有する多価、多重特異性（例えば、二重特異性）又は多パラトープ性（例えば、二パラトープ性）の構築物である。例えば、限定されないが、このような構築物は、先と同様に直接的に又は１個以上の適切なリンカーを介して連結されたＶＨドメイン、特にナノボディ（すなわち、ＶＨＨドメイン、ヒト化ＶＨＨドメイン又はラクダ化ＶＨドメイン）から完全に構成され得る。このような構築物のいくつかの非限定的な例、及び（特にナノボディに基づいて）このような構築物がどのようにして作製され得るかの一般的な教示については、例えば、Conrath et al., JBC 276, 10(9), 7346 (2001)及びMuyldermansによる総説論文Reviews in Mol. Biotechnol., 74: 27 (2001)を参照のこと。
しかしながら、例えば、本発明は、溶媒に曝露された可変ドメインを有し、特に可変ドメインをそのＣ末端に有するその他の構築物、例えばその重鎖可変ドメインをＣ末端に有する一本鎖Ｆｖ、特にＳｃＦｖなどに適用され得ることも想定される。
本明細書及び特許請求の範囲では、「ＩＳＶ」、「分析剤」及び「タンパク質干渉」のような用語は、本明細書においてさらに定義される意味を有する。
特に、本明細書において記載されるＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
また、ＩＳＶ（例えば、ＩＳＶ系薬物）を含む任意のタンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、前記（又は少なくとも１個の）このようなＩＳＶをそのＣ末端に有する。先と同様に、前記ＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
本明細書において記載される本発明は、特に、ＶＨドメイン（ヒトＶＨドメインを含む）などの重鎖可変ドメイン、及びＶＨＨドメイン（ヒト化及び配列最適化ＶＨＨドメインを含む）などのナノボディ、又はラクダ化ＶＨドメインを含み、これらに基づき及び／又は由来するＩＳＶに適用されることを目的とするものであり、前記ＩＳＶに適用されるのに適切である。これらは、合成の（例えば、合成ライブラリーから出発して、及び／又は一定のフレームワーク領域に基づいて得られたもの）、半合成の（例えば、天然のＶＨ又はＶＨＨドメインから出発して、ヒト化、ラクダ化若しくは配列最適化、又は親和性成熟若しくはＣＤＲ移植によって得られたもの）、若しくは完全に天然に存在するＶＨ又はＶＨＨドメインであり得る。従って、本明細書では、ＶＨ若しくはＶＨＨドメインであり、ＶＨ若しくはＶＨＨドメインに基づき及び／又は由来するＩＳＶを参照して、本発明をさらに説明する。
本発明を確立する際に、生体サンプル（例えば、全血、血清又は血漿を含む血液サンプル、眼液、気管支肺胞洗浄液／ＢＡＬＦ、脳脊髄液、又はその他の生体液のサンプル）を分析するのに使用されるいくつかのアッセイ（例えば、ＡＤＡ免疫アッセイなど）では、タンパク質干渉が起こり得ること、並びにこのようなタンパク質干渉は、これらのアッセイのいくつか又はこれらのサンプルのいくつかにおいて、非特異的シグナルを生じさせ得ることが見出された。このようなタンパク質干渉は、ＩＳＶ（特に、ナノボディ；又は、少なくとも１個のこのようなＩＳＶ若しくはナノボディを含むタンパク質、ポリペプチド若しくはその他の生物学的薬物）で処置され、及び／又は前記ＩＳＶが投与された被験体（例えば、患者又は臨床試験の被験者）から得られたサンプルだけではなく、ＩＳＶの投与を受けたことがない被験体に由来するサンプルにおいても起こり得ることも見出された（これは、このような干渉が、新規のＡＤＡよりもむしろ既存のタンパク質との非特異的タンパク質−タンパク質相互作用に起因する可能性があることを示している）。
このようなアッセイにおけるこのようなタンパク質干渉及び／又はこのようなシグナルは、ＩＳＶの薬理学的特性（例えば、薬物動態／ＰＫ特性又は薬力学的／ＰＤ特性）の変化又は減少に関連しないことが見出されたが、このような非特異的タンパク質干渉を予測し、検出し、減少させ、及び／又は可能であれば回避するための技術が利用可能であることが望ましい。これは、本発明の一般的な目的である。
特に、本発明は以下のものを提供し、ある種の具体的だが非限定的な態様では以下のものに関する：
−所定のＩＳＶが、このようなアッセイ（例えば、ＡＤＡ免疫アッセイなど）においてこのようなタンパク質干渉を受け、及び／又はこのような（非特異的）シグナルを生じさせるかを予測するのに使用され得るアッセイ。このような予測アッセイは、例えば、所定のＩＳＶが、このようなタンパク質干渉及び／又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を有し得るかを試験するのに使用され得；このようなタンパク質干渉又はこのようなシグナルの発生の傾向がないか又は前記傾向がほとんどないＩＳＶを選択するのに使用され得；ＩＳＶに対するある種の改変が、このような干渉又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を（完全に又は部分的に）減少させるかを試験するのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得；及び／又は、このようなタンパク質干渉又はシグナルを生じさせる傾向を減少させるようにＩＳＶの改変又は改善をガイドするのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得る；
−このようなタンパク質干渉又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を除去し、又は減少させるようにＩＳＶを改変及び／又は改善するための方法；
−ＩＳＶに導入され得る改変であって、このようなタンパク質干渉又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を除去し、又は減少させる改変；
−（例えば、本明細書において記載されるアッセイを使用して）特異的に選択されたＩＳＶであって、このようなタンパク質干渉又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を有しないか又は前記傾向が（より）低い／減少したＩＳＶ；
−改変及び／又は改善されたＩＳＶであって、このようなタンパク質干渉又はこのようなシグナルを生じさせる傾向を有しないか又は前記傾向が（より）低い／減少したＩＳＶ。
例えば、第１の非限定的な態様では、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、免疫アッセイにおいて（すなわち、本明細書においてさらに説明されるように、それを被験体に投与した後に前記被験体から生体液のサンプルを得て、前記サンプルを免疫アッセイに供する）、タンパク質干渉を生じさせる（又は、タンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有する）かを予測するのに使用され得る方法であって、
（ｉ）ヒト被験体から得られた抗体であって、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合する能力に基づいて選択、作製及び／又は単離された抗体（「分析抗体」）に、前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）を接触させる工程；及び
（ｉｉ）前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、前記免疫アッセイにおいて前記抗体によって結合されるかを決定する工程
を少なくとも含む免疫アッセイを実施することを含む方法に関する。
この方法では、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物が前記分析抗体によって結合される場合、前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物は、このようなタンパク質干渉（本明細書においてさらに定義される）を生じさせる（又は、このようなタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有する）と予想され得る。これに基づいて、例えば、前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物は、このようなタンパク質干渉（これは、上記アッセイを使用して再度決定され得る）を生じさせる傾向を減少させ、又は除去するように改変又は改善されてもよく、前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を改変するのに使用され得るいくつかの方策が本明細書において記載される（例えば、少数のアミノ酸残基をＣ末端に付加すること、及び／又は１個以上の特定のアミノ酸置換を導入することが挙げられる）。
従って、一般に、本発明により、当業者は、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向を予測するのに使用され得、及び／又はタンパク質干渉を生じさせる傾向を減少させ、又は回避するようにＩＳＶを改善するツールとして使用され得るアッセイ及び方法／技術が利用可能になる。そうすることによって、本発明はまた、タンパク質干渉を生じさせる低い能力又は低下した能力（又は能力の欠如）に基づいてＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を選択するための手段を当業者に提供する。従って、本発明は、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物の最適化及び開発において使用され得る重要なアッセイ及びツールを当業者に提供する。
また本明細書においてさらに説明されるように、本発明は、タンパク質干渉を生じさせる傾向を減少させ、又は回避するように、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を改変又は改善し得る多数の方法を当業者に教示する。従って、本発明はまた、一般に、改変及び／又は改善されたＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物であって、タンパク質干渉を生じさせる傾向が減少したか、前記傾向が低いか、又は前記傾向を有しないＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を利用可能にする。
本明細書においてさらに説明されるように、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、免疫アッセイ、特にＡＤＡアッセイにおいてタンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに特に使用され得る。前記ＡＤＡアッセイは、例えば、一般にはＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよいし、特に、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用されるＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよい。
先と同様に、本明細書において述べたように、本明細書において記載されるＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインである又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
また、ＩＳＶ（例えば、ＩＳＶ系薬物）を含む任意のタンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、前記（又は少なくとも１個の）このようなＩＳＶをそのＣ末端に有する。先と同様に、前記ＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインである又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
前記免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいて試験されるサンプルは、本明細書において「試験サンプル」又は「アッセイサンプル」とも称される。混乱を避けるために、このような「試験サンプル」又は「アッセイサンプル」は、本発明において使用される（ポリクローナル又はモノクローナル）「分析抗体」を得るための出発材料として本明細書において使用される生体サンプルと混同されるべきではない。
特に好ましいが非限定的な一態様では、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、このようなＩＳＶの使用を伴う免疫アッセイ（特に、ＡＤＡアッセイ）においてタンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに使用され得る。先と同様に、前記ＡＤＡアッセイは、例えば、一般にはＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよいし、特に、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用されるＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよい。
さらにより具体的だが非限定的な態様では、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、サンプルがＩＳＶに対するＡＤＡを含有するかを決定又は測定することを目的とする免疫アッセイ（特に、ＡＤＡアッセイ）において、タンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに使用され得る。先と同様に、例えば、このような免疫アッセイは、前記ＩＳＶに対するＡＤＡが「試験サンプル」中に存在するかを決定又は測定するのに実施される公知の種類のＡＤＡアッセイ（これについては、例えば、本明細書において引用されるＡＤＡアッセイの従来技術を参照のこと）のうちの１つでもよく、この場合の前記試験サンプルは、前記ＩＳＶが投与された被験体（本明細書においてさらに説明される）から得られる生体液のサンプル（本明細書において記載される）である。
本明細書においてさらに説明されるように、すべてのこれらの態様（及び、本明細書において記載される本発明のさらなる態様）では、本発明はまた、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのようなタンパク質干渉の傾向がないか又は前記傾向がほとんどないＩＳＶを選択するのに使用され得るし；ＩＳＶに対するある種の改変が、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのような干渉を生じさせる傾向を（完全に又は部分的に）減少させるかを試験するのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得るし；及び／又は、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのようなタンパク質干渉を生じさせる傾向を減少させるようにＩＳＶの改変又は改善をガイドするのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得る。
本発明のその他の態様、実施態様、利点及び用途は、本明細書におけるさらなる説明から明らかになるであろう。
本明細書では、「ＩＳＶ」という用語が使用される場合は常に、以下のことを理解するべきである：
− このようなＩＳＶは、好ましくは、ナノボディ（「ナノボディ」という用語は、一般に、国際公開第08/020079号又は国際公開第09/138519号で定義されている通りである）であるので、具体的な態様では一般に、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ若しくはラクダ化ＶＨ（例えば、ラクダ化ヒトＶＨ）、又は一般には配列最適化ＶＨＨ（例えば、化学安定性及び／又は溶解性、公知のヒトフレームワーク領域との最大限のオーバーラップ、並びに最大限の発現について最適化されたものなど）を意味する。ナノボディ（Nanobody）又はナノボディ（Nanobodies）という用語はAblynx N.V.の商標として登録されているので、Nanobody（登録商標）及び／又はNanobodies（登録商標）とも称され得ることに留意する；
− 「ＩＳＶ」という用語は、その最も広い意味において「ＩＳＶ系生物学的製剤」も含み、ＩＳＶがナノボディである場合は「ナノボディ系生物学的製剤」も含む。「ＩＳＶ系生物学的製剤」は、本明細書において、少なくとも１個（例えば、１個、２個又は３個）のＩＳＶを含むか、又は本質的に前記ＩＳＶからなるタンパク質、ポリペプチド又はその他の生物学的薬物と定義される。同様に、「ナノボディ系生物学的製剤」は、少なくとも１個（例えば、１個、２個又は３個）のナノボディを含むか、又は本質的に前記ナノボディからなるタンパク質、ポリペプチド又はその他の生物学的薬物と定義される。「ＩＳＶ」という用語と同様に、「ＩＳＶ系生物学的製剤」という用語が使用される場合は常に、このようなＩＳＶ系生物学的製剤は、好ましくは、ナノボディ系生物学的製剤であることを理解するべきである。本発明の文脈内では、「ＩＳＶ系生物学的製剤」及び「ナノボディ系生物学的製剤」は両方とも、例えば、それぞれ一価、二価（又は多価）、二重特異性（又は多重特異性）及び二パラトープ性（又は多パラトープ性）のＩＳＶ構築物又はナノボディ構築物であり得る。また、あらゆるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤は、例えば、１個以上（例えば、１個、２個又は３個）のＩＳＶ又はナノボディに加えて、場合により、１個以上（例えば、１個又は２個）のその他のさらなる治療部分、及び／又はＩＳＶ系生物学的製剤若しくはナノボディ系生物学的製剤の薬物動態特性若しくは薬力学的特性（例えば、その半減期）に影響を与える１個以上（例えば、１個又は２個）のその他の部分をさらに含み得る。このようなさらなる治療部分又はその他の部分の適切な例は当業者には明らかであり、例えば一般には、任意の治療的に活性なタンパク質、ポリペプチド又はその他の結合ドメイン若しくは結合単位、並びに例えば国際公開第09/138159号の１４９頁〜１５２頁に記載されているものなどの改変が挙げられ得る。ＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤は、好ましくは治療薬であるか、又は治療用途（これは、予防及び診断を含む）を目的とするものであり、この目的のために好ましくは、治療上関連のあるターゲット（例えば、ＲＡＮＫ−Ｌ、ｖＷＦ、ＩｇＥ、ＲＳＶ、ＣＸＣＲ４、ＩＬ−２３又はその他のインターロイキンなど）に対する少なくとも１個のＩＳＶを含有する。このようなＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤の具体的だが非限定的な例のいくつかについては、例えば、Ablynx N.V.による種々の出願（例えば限定されないが、国際公開第2004/062551号、国際公開第2006/122825号、国際公開第2008/020079号及び国際公開第2009/068627号など）、及び例えば（限定されないが）国際公開第06/038027号、国際公開第06/059108号、国際公開第07/063308号、国際公開第07/063311号、国際公開第07/066016号及び国際公開第07/085814号などの出願を参照のこと。また、本明細書では、特に本明細書において明確に記載しない限り、本明細書において記載されるすべての用語は、国際公開第09/138519号（又は国際公開第09/138519号で引用された従来技術）又は国際公開第08/020079号（又は国際公開第08/020079号で引用された従来技術）に示されている意味を有する。また、方法又は技術が本明細書において具体的に記載されていない場合、それは、国際公開第09/138519号（又は国際公開第09/138519号で引用された従来技術）又は国際公開第08/020079号（又は国際公開第08/020079号で引用された従来技術）に記載されているように実施され得る。
特に、以下の用語は、国際公開第09/138519号の６２頁〜７５頁に示されているのと同じ意味を有し、及び／又は適用可能な場合には前記頁に記載されているように決定され得る：「アゴニスト」、「アンタゴニスト」、「逆アゴニスト」、「非極性非荷電アミノ酸残基」、「極性非荷電アミノ酸残基」、「極性荷電アミノ酸残基」、「配列同一性」、「全く同じ」及び「アミノ酸差異」（２個のアミノ酸配列の配列比較について言及する場合）、「（から）本質的に単離された（形）」、「ドメイン」、「結合ドメイン」、「抗原決定基」、「エピトープ」、（抗原）「に対する（against）」又は「に指向性を有する（directed against）」、「特異性」並びに「半減期」。加えて、「モデュレーションする（modulating）」及び「モデュレーションするための（to modulate）」、「相互作用部位」、「に特異的」、「交差ブロッキング（cross-block）」、「交差ブロッキングされた（cross-blocked）」及び「交差ブロッキングする（cross-blocking）」、並びに「本質的にｐＨ非依存性の」という用語は、本出願人の国際公開第10/130832号の７４頁〜７９頁に定義されている通りである（及び／又は、前記頁に記載されているように決定され得る）。また、本発明の構築物、化合物、タンパク質又はポリペプチドについて言及する場合、「一価」、「二価」（又は「多価」）、「二重特異性」（又は「多重特異性」）及び「二パラトープ性」（又は「多パラトープ性」）のような用語は、国際公開第09/138.519号、国際公開第10/130832号又は国際公開第08/020079号に示されている意味を有し得る。
ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤若しくはナノボディ系生物学的製剤又は任意のその他のアミノ酸配列、化合物若しくはポリペプチドに関して本明細書において使用される「半減期」という用語は、一般に、国際公開第08/020079号の５７頁の段落ｏ）に記載されているように定義され得、そこで述べられているように、アミノ酸配列、化合物又はポリペプチドの血清濃度が、例えば、自然の機構による配列若しくは化合物の分解及び／又は配列若しくは化合物の排出又は隔離により、ｉｎ ｖｉｖｏで５０％減少するのに要する時間を指す。本発明のアミノ酸配列、化合物又はポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、それ自体が公知の任意の方法、例えば薬物動態分析によって決定され得る。適切な技術は当業者には明らかであり、例えば一般には、国際公開第08/020079号の５７頁の段落ｏ）に記載されている通りでもよい。国際公開第08/020079号の５７頁の段落ｏ）でも述べられているように、半減期は、ｔ１／２−α、ｔ１／２−β及び濃度曲線下面積（ＡＵＣ）などのパラメーターを使用して表わされ得る。この点において、本明細書において使用される「半減期」という用語は、特に、ｔ１／２−β又は最終半減期（ｔ１／２−α及び／若しくはＡＵＣ又はその両方は考慮しなくてもよい）を指すことに留意するべきである。例えば、以下の実験部分並びにKenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists及びPeters et al, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach (1996)などの標準的なハンドブックを参照のこと。"Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982)も参照のこと。同様に、「半減期の増加」又は「増加した半減期」という用語も国際公開第08/020079号の５７頁の段落ｏ）に定義されている通りであり、特に、ｔ１／２−α及び／若しくはＡＵＣ又はその両方の増加の有無にかかわらず、ｔ１／２−βの増加を指す。
用語が本明細書において具体的に定義されていない場合、それは、当業者に明らかな当技術分野におけるその通常の意味を有する。例えば、Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd.Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987); Lewin, “Genes II”, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Old et al., “Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering”, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roitt et al., “Immunology” (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh(2001); Roitt et al., Roitt’s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK(2001);及びJaneway et al., “Immunobiology” (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005)などの標準的なハンドブック、並びに本明細書において引用される一般的な背景技術を参照のこと。
また本明細書では、ナノボディのアミノ酸残基は、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195の論文においてラクダに由来するＶＨＨドメインに適用されているように；又は本明細書において参照されるように、Kabatら(“Sequence of proteins of immunological interest”, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91)によって示されたＶＨドメインの一般的なナンバリングに従ってナンバリングされる。このナンバリングによれば、ナノボディのＦＲ１はアミノ酸残基を１位〜３０位に含み、ナノボディのＣＤＲ１はアミノ酸残基を３１位〜３５位に含み、ナノボディのＦＲ２はアミノ酸残基を３６位〜４９位に含み、ナノボディのＣＤＲ２はアミノ酸残基を５０位〜６５位に含み、ナノボディのＦＲ３はアミノ酸残基を６６位〜９４位に含み、ナノボディのＣＤＲ３はアミノ酸残基を９５位〜１０２位に含み、ナノボディのＦＲ４はアミノ酸残基を１０３位〜１１３位に含む。［この点において、−ＶＨドメイン及びＶＨＨドメインについて当技術分野において周知であるように−各ＣＤＲにおけるアミノ酸残基の総数は変化してもよいし、Kabatのナンバリングによって示されたアミノ酸残基の総数に対応しなくてもよいことに留意するべきである（すなわち、Kabatのナンバリングによる１個以上の位置に実際の配列がなくてもよいし、実際の配列は、Kabatのナンバリングによって許容される数よりも多くのアミノ酸残基を含有してもよい）。これは、一般に、Kabatのナンバリングが実際の配列におけるアミノ酸残基の実際のナンバリングに対応してもよいし、対応しなくてもよいことを意味する。しかしながら、一般に、Kabatのナンバリングによれば、ＣＤＲのアミノ酸残基の数にかかわらず、Kabatのナンバリングによる１位はＦＲ１の開始に対応しその逆もまた同様であり、Kabatのナンバリングによる３６位はＦＲ２の開始に対応しその逆もまた同様であり、Kabatのナンバリングによる６６位はＦＲ３の開始に対応しその逆もまた同様であり、Kabatのナンバリングによる１０３位はＦＲ４の開始に対応しその逆もまた同様であると言うことができる。］。
ＶＨドメインのアミノ酸残基をナンバリングするための代替方法は、Chothiaら(Nature 342, 877-883 (1989))によって説明されている方法（いわゆる「ＡｂＭ定義」及びいわゆる「接触定義」）であり、この方法は、同様の方法でラクダに由来するＶＨＨドメイン及びナノボディにも適用され得る。しかしながら、本明細書、態様及び図面では、特に指示がない限り、Riechmann及びMuyldermansによってＶＨＨドメインに適用されたようにKabatのナンバリングに従う。
図面、配列表及び実験部分／実施例は本発明をさらに説明するためにのみ示すものであり、本明細書において特に明確な指示がない限り、本発明及び／又は添付の特許請求の範囲の範囲を限定するものと決して解釈又は理解されるべきではないことにも留意するべきである。
本発明は、本発明で観察され、本発明に従って低減され得るタンパク質干渉（及び／又は免疫アッセイにおいて生じるシグナル）のあらゆる原因、説明、仮説又は機序を具体的に限定するものではないことにさらに留意するべきである。しかしながら、特定の個人、若しくは個体群の血液又は血清（又は、本明細書において記載されるものなどのその他の生体液）は、このような個体から得られた血液又は血清サンプルを分析するのに使用されるある種のアッセイにおいて、ある種の環境下でＩＳＶに（非特異的に）結合して干渉シグナルをもたらし得るある種の（既存の）タンパク質を含有し得ると想定される。これは、本発明によって対処される非特異的タンパク質干渉が、ＩＳＶが過去に投与された被験体から得られたサンプルをアッセイする場合だけではなく、ＩＳＶが過去に投与されてない被験体から得られたサンプルをアッセイする場合にも起こるという本発明を確立する際に行った観察に特に基づいている。
特に、本発明を確立する際に行った観察に基づいて、このような（既存の）タンパク質はこのようなＩＳＶのＣ末端に特に結合する（できる）可能性があると考えられるが、本発明はこれに限定されない（通常の完全型４本鎖モノクローナル抗体、及びラクダで見られる「重鎖単独」抗体では、前記Ｃ末端は、抗体の残りの部分−すなわち、それぞれ通常のモノクローナルのＣＨ１領域及びラクダ重鎖抗体のヒンジ領域−に連結しているので、このような完全型抗体ではこのようなタンパク質干渉から保護される可能性がある）。
これは、ＩＳＶのＣ末端におけるある種の（単純な）改変がこのようなタンパク質干渉を実質的に減少させ、又は本質的に抑制し得るという本発明を確立する際に本発明者らによってなされた発見（この発見は、本明細書においてさらに説明される）によって裏付けている。従って、ＩＳＶをこのように改変するための方法、及びこのように改変されたＩＳＶは、本明細書においてさらに説明されるように、本発明のさらなる態様を形成する。
本発明は、（生物学的）薬物が投与された被験体から得られた生体サンプル（例えば、血液又は血清サンプル）（先と同様に、このようなサンプルは、本明細書において「試験サンプル」又は「アッセイサンプル」とも称される）に対して実施される免疫アッセイにおける非特異的結合によるタンパク質干渉及び／又はシグナルを減少させ、又は回避するのに特に使用され得る。これのいくつかの例は、生物学的薬物を被験体に投与する際の薬物体内動態及び抗体形成を特性決定するのに使用される免疫アッセイ、例えばCommittee for Medicinal Products for Human Use (CHMP) of the European Medicines Agency (EMEA)によって発行された“Guideline on the Clinical Investigation of the Pharmacokinetics of Therapeutic Proteins”（２００７年１月２７日付けの文書CHMP/EWP/89249/2004）で言及されているものである。この文書の４頁及び５頁で述べられているように：
「考えられるいくつかの欠点が判明したが、これは、薬物体内動態及び抗体形成についての誤った特性決定をもたらす可能性がある。以下の問題を考慮するべきである［．．．］：
免疫アッセイ
薬物アッセイ：
［．．．］
（ｉｉｉ）内因性物質による干渉。
（ｉｖ）血漿成分、又は検体に結合して捕捉抗体への相補的結合を阻害する抗薬物抗体による干渉。」
本発明は、ＩＳＶ（特に、ナノボディ；又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤）が投与された被験体から採取された生体液の試験サンプル／アッセイサンプルを分析するのに使用される免疫アッセイにおけるこの種の干渉を予測し、減少させ、又は回避するのに特に使用され得る。
本発明は、薬物体内動態を特性決定するのに、及び／又はＡＤＡ（抗薬物）抗体の形成を決定するのに使用される免疫アッセイにおけるこの種の（非特異的）タンパク質干渉を予測し、減少させ、又は回避するのに特に使用され得る。この点において、本明細書及び添付の特許請求の範囲では一般に、「タンパク質干渉を予測し、減少させ、又は回避する」のような表現が使用される場合、これは、このようなタンパク質干渉それ自体を予測し、減少させ、又は回避することだけではなく、免疫アッセイ（例えば、タンパク質干渉に関連する（非特異的）シグナルが発生し得るアッセイ、例えばＡＤＡアッセイ）における非特異的シグナルの発生を一般に予測し、減少させ、又は回避すること、特に、このようなアッセイにおいて観察される場合には通常は（非特異的）タンパク質干渉に起因し、関連し、及び／又は（非特異的）タンパク質干渉の兆候として考えられる非特異的シグナルの発生をこのような免疫アッセイにおいて予測し、減少させ、又は回避することも含むことに留意するべきである。この点において、一般には、本明細書において述べたように、本発明は、あらゆる原因、説明、仮説又は機序を具体的に限定するものではないことに留意するべきである。
具体的だが非限定的な一態様では、本発明は、ＩＳＶ（特に、ナノボディ；又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤）が投与された被験体から採取された生体液のサンプル（すなわち、「試験サンプル」）に対して実施される「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ」アッセイにおけるこのようなタンパク質干渉を予測し、回避し、又は減少させるのに使用され得る。
具体的だが非限定的な別の態様では、本発明は、１個以上のＩＳＶに対する（特に、ナノボディ；又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤に対する）（任意の）抗薬物抗体の存在を検出、測定及び／又は特性決定するのに使用される「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ」アッセイにおけるこのようなタンパク質干渉（及び／又は、このようなタンパク質干渉に通常は関連する非特異的シグナル）を予測し、回避し、又は減少させるのに使用され得る。特に、本発明は、生体液のサンプル（すなわち、「試験サンプル」）、より具体的には、１個以上のこのようなＩＳＶ又はナノボディ（又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤）が投与された被験体から得られた生体液のサンプルに対して実施されるこのような「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ」アッセイにおけるこのようなタンパク質干渉を予測し、回避し、又は減少させるのに使用され得る。例えば、本発明は、（臨床試験の関連及び／又は治療の関連で）サンプルが得られた被験体に投与されたＩＳＶ又はナノボディ（又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤）に対する（任意の）抗薬物抗体の存在を検出、測定及び／又は特性決定するのに使用されるこのような「抗薬物抗体」又は「ＡＤＡ」アッセイにおけるこのようなタンパク質干渉を予測し、回避し、又は減少させるのに使用され得る。
従って、具体的だが非限定的な一態様では、本発明は、１個以上のこのようなＩＳＶ又はナノボディ（又は、本明細書においてさらに定義されるＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤）が投与された被験体から得られた生体サンプル（すなわち、「試験サンプル」）であって、ＡＤＡアッセイなどの免疫アッセイに適切であり、及び／又は前記免疫アッセイにおける使用を目的とするサンプルにおけるこのようなタンパク質干渉（及び／又は、このようなタンパク質干渉に通常は関連する非特異的シグナル）を予測し、回避し、又は減少させるのに使用され得る。前述のように、このような生体サンプルは、血液（全血、血清又は血漿を含む）、眼液、気管支肺胞洗浄液／ＢＡＬＦ、脳脊髄液、又は免疫アッセイ、特にＡＤＡアッセイにおける使用に適切である任意のその他の適切な生体液若しくはサンプルであり得る。
具体的だが非限定的な一態様では、このような試験サンプルは、複数回投与（例えば、少なくとも１０日間、例えば少なくとも１カ月間又はそれよりも長い期間にわたる少なくとも１回〜３回の個別投与）、及び／又はＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤（本明細書においてさらに定義される）又はナノボディ系生物学的製剤（本明細書においてさらに定義される）による慢性処置（すなわち、少なくとも１０日間、例えば少なくとも１カ月間の処置）に供された被験体から得られたものでもよい。このようなＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤は、例えば、治療の関連又は臨床試験の関連で前記被験体に投与されたものでもよい。
具体的だが非限定的な一態様では、このような試験サンプルは、それが投与される／投与された被験体において、増加した半減期（本明細書において定義される、及び一価のＩＳＶと比較して）、例えば少なくとも１日間、好ましくは少なくとも３日間、より好ましくは少なくとも７日間、例えば少なくとも１０日間の半減期を有する（及び／又は、前記増加した半減期が与えられた）ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤が投与された被験体から得られたものでもよい。
例えば、限定されないが、このようなＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤は、機能化によって、及び／又は構築物の半減期を増加させる部分若しくは結合単位を構築物に含めることによって、増加した半減期が与えられたものでもよい。このような機能化、部分又は結合単位の例は当業者には明らかであり、例えば、本明細書において記載されるようなものでもよく、例えば、ペグ化、血清アルブミンとの融合、又は血清アルブミンなどの血清タンパク質に結合できるペプチド若しくは結合単位との融合が挙げられ得る。このような血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインは、（血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインを有しない同じ構築物と比較して）構築物の半減期を増加させることができる任意の適切な血清アルブミン結合ペプチド又は結合ドメインでもよく、特に、本出願人による国際公開第2008/068280号（及び特に、いずれも本出願人による国際公開第2009/127691号及び未公開米国出願61/301,819号）に記載されている血清アルブミン結合ペプチドでもよいし、血清アルブミン結合ＩＳＶ（例えば、血清アルブミン結合ナノボディ；例えば、Ａｌｂ−１又はＡｌｂ−１のヒト化型、例えばＡｌｂ−８（これらについては、例えば、国際公開第06/122787号を参照のこと））でもよい。
従って、具体的だが非限定的な一態様では、このような生体サンプルは、（ヒト）血清アルブミン結合結合ペプチド又は結合ドメインを含むＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系生物学的製剤又はナノボディ系生物学的製剤が投与された被験体から得られたものでもよい。
既に上述のように、非限定的な一態様では、本発明は一般に、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、免疫アッセイにおいて（すなわち、本明細書においてさらに説明されるように、前記ＩＳＶを被験体に投与した後に、前記被験体から生体液のサンプルを得て、前記生体液を免疫アッセイに供する）、タンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせる（又は、タンパク質干渉を生じさせる高い傾向又は増加した傾向を有する）かを予測するのに使用され得る方法であって、
（ｉ）ヒト被験体から得られた抗体であって、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合する能力に基づいて選択、作製及び／又は単離された抗体（「分析抗体」）に、前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）を接触させる工程；及び
（ｉｉ）前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、前記免疫アッセイにおいて前記抗体によって結合されるかを決定する工程
を少なくとも含む免疫アッセイを実施することを含む方法に関する。
繰り返しになるが、先と同様に、本明細書において述べたように、本明細書において記載されるＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
また、ＩＳＶ（例えば、ＩＳＶ系薬物）を含む任意のタンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、前記（又は少なくとも１個の）このようなＩＳＶをそのＣ末端に有する。先と同様に、前記ＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
代替的な実施態様（これも本明細書においてさらに説明される）では、ヒト被験体から得られた上記抗体の代わりに、本明細書において「２１−４−３」（又は略して「２１−４」。ＶＨ及びＶＬの配列については配列番号３５及び３６を参照のこと）と称されるモノクローナル抗体が使用され得る。２１−４は、実施例７でさらに説明されるように、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物で免疫したマウスから出発してハイブリドーマ技術を使用して作製したものであり、２１−４を発現するハイブリドーマ細胞株（「ＡＢＨ００１５」と称される）は、アクセッションナンバーＬＭＢＰ−９６８０−ＣＢでBCCM, Ghent, Belgiumに２０１２年６月４日に寄託した。モノクローナル２１−４は、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物のＣ末端であって、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）に対して作られたナノボディ（ヒト化ＶＨＨ）からなるＣ末端を認識することが示された。２１−４は、本来的には、（血清）サンプル中のタンパク質ナノボディ（特に、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物）を検出するのに使用するための分析試薬として作った；驚くべきことに、２１−４は、ＩＳＶが非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を有するかを予測するのにも使用され得ることが今回見出された（国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物に対して、又はその他のナノボディに対して作られたいくつかのその他の同程度の（マウス）モノクローナルよりももっと）。
特に、ＩＳＶ（又は、ＩＳＶをそのＣ末端に含有するタンパク質若しくはポリペプチド、又は本明細書において記載される類似のタンパク質若しくはポリペプチド）への２１−４の結合の測定が、実施例９に示されているプロトコールに従って決定すると（タンパク質の分子量についての測定ＲＵ値を式［測定ＲＵ］／［タンパク質の分子量（ＭＷ）］ｘ１０６に従って調整した後に）５００未満のＲＵ値を示す場合、前記ＩＳＶ又はタンパク質は、タンパク質干渉を受ける傾向を有しない可能性があることが見出された（以下の実施例に示されているデータによって提供される信頼性の範囲内において）。上記式のために、分子量（ＭＷ）は、ＩＳＶ中に存在する全アミノ酸残基の全分子量（ＭＷ）の合計として計算され得る。
従って、本明細書において記載されるＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、（実施例９に示されているプロトコールに従って決定し、使用したＩＳＶ又はタンパク質の分子量についての測定ＲＵ値を上に示した式に従って調整した後に）２１−４による結合について５００未満のこのようなＲＵ値を有する。
従って、本発明の本態様は一般に、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、免疫アッセイにおいて（すなわち、本明細書においてさらに説明されるように、前記ＩＳＶを被験体に投与した後に前記被験体から生体液のサンプルを得て、前記生体液を免疫アッセイに供する）、タンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせる（又は、タンパク質干渉を生じさせる高い傾向又は増加した傾向を有する）かを予測するのに使用され得る方法であって、
（ｉ）モノクローナル抗体２１−４（すなわち、「分析抗体」として使用される）に、前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）を接触させる工程；及び
（ｉｉ）前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、前記免疫アッセイにおいてモノクローナル抗体２１−４によって結合されるかを決定する工程
を少なくとも含む免疫アッセイを実施することを含む方法に関する。
前記方法は、特に、BiaCore又は類似技術を使用して、より具体的には実施例９に示されているプロトコールを使用して実施され得る。本明細書において述べたように、このプロトコールにおけるＩＳＶ又はＩＳＶ系薬物の結合が、（タンパク質の分子量についての測定ＲＵ値を式［測定ＲＵ］／［タンパク質の分子量（ＭＷ）］ｘ１０６に従って調整した後に）５００未満のＲＵ値を示す場合、前記ＩＳＶ又はＩＳＶ系タンパク質は、ヒトの血中又は血清中に存在する干渉因子によって結合されない可能性があり、及び／又はＡＤＡアッセイにおいて非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を有しない可能性がある（すなわち、以下の実験部分に示されている信頼度の範囲内において）。
繰り返しになるが、先と同様に、本明細書において述べたように、本明細書において記載されるＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
また、ＩＳＶ（例えば、ＩＳＶ系薬物）を含む任意のタンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、前記（又は少なくとも１個の）このようなＩＳＶをそのＣ末端に有する。先と同様に、前記ＩＳＶは特にナノボディでもよいし、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインを含む（その他の）ＩＳＶ（すなわち、ナノボディ以外）でもよく、好ましくはナノボディである。
また本明細書において述べたように、２１−４を使用する上記方法は、ＩＳＶ又はＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、ヒトの血中又は血清中に存在する干渉因子によって結合される（又は、前記干渉因子によって結合される傾向を有する）かを決定するのにも使用され得る。
また本明細書において述べたように、２１−４を使用する前記方法は、ＶＨドメインをそのＣ末端に有する任意のタンパク質又はポリペプチド（例えば、抗体フラグメント又はＳｃＦｖ）が、ヒトの血中又は血清中に存在する干渉因子によって結合され（又は、前記干渉因子によって結合される傾向を有し）、及び／又はＡＤＡアッセイにおいてタンパク質干渉を受ける傾向を有するかを予測するのにも使用され得ると想定される。
２１−４に加えて、２１−４の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン（それぞれ配列番号３５及び３６を参照のこと）を含有するか、又は（その他の適切なＶＨ及びＶＫフレームワークに適切に移植された）２１−４のＣＤＲ配列のみを含有する抗体又は抗体フラグメント（例えば、適切なＦａｂフラグメント）もまた、本明細書において記載される方法において使用され得ると想定される。
本明細書においてさらに説明されるように、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、ＡＤＡアッセイである免疫アッセイにおいてタンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに特に使用され得る。前記ＡＤＡアッセイは、例えば、一般にはＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよいし、特に、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用されるＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよい。
特に好ましいが非限定的な一態様では、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、このようなＩＳＶの使用を伴う免疫アッセイ（特に、ＡＤＡアッセイ）においてタンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに使用され得る。先と同様に、前記ＡＤＡアッセイは、例えば、一般にはＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよいし、特に、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用されるＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでもよい。
さらにより具体的だが非限定的な態様では、本発明は、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）が、このようなＩＳＶの使用を伴う免疫アッセイ（特に、ＡＤＡアッセイ）においてタンパク質干渉（本明細書においてさらに説明される）を生じさせるかを予測するのに使用され得る。例えば、このような免疫アッセイは、前記ＩＳＶに対するＡＤＡが、前記ＩＳＶが投与された被験体（本明細書においてさらに説明される）から得られる生体液のサンプル（本明細書において記載される）である試験サンプル中に存在するかを決定又は測定するのに実施されるＡＤＡアッセイ（すなわち、ＩＳＶを含む）であり得る。例えば、本明細書においてさらに述べるように、前記サンプル（すなわち、「試験サンプル」）は、（全血、血清又は血漿を含む）サンプル、眼液、気管支肺胞洗浄液／ＢＡＬＦ、脳脊髄液、又は任意のその他の適切な生体液でもよいし、特に、ＡＤＡアッセイなどの免疫アッセイに適切であり、及び／又は前記免疫アッセイにおける使用を目的とする生体サンプルでもよい。
本明細書においてさらに説明されるように、すべてのこれらの態様（及び、本明細書において記載される本発明のさらなる態様）では、本発明はまた、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのようなタンパク質干渉の傾向がないか又は前記傾向がほとんどないＩＳＶを選択するのに使用され得；ＩＳＶに対するある種の改変が、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのような干渉を生じさせる傾向を（完全に又は部分的に）減少させるかを試験するのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得；及び／又は、このような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいてこのようなタンパク質干渉を生じさせる傾向を減少させるようにＩＳＶの改変又は改善をガイドするのに使用され得るアッセイ又は試験として使用され得る。
前述のように、本発明の方法の工程（ｉ）は、ヒト被験体から得られた抗体であって、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合する能力に基づいて選択／単離された抗体（本明細書においてさらに説明される）に、前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）を接触させることを含む。本明細書において記載される方法の前記工程（ｉ）では、「前記ＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）」は、免疫アッセイにおいて抗原として（すなわち、検出されるべき物質として）使用される。また、前記工程（ｉ）では、「ヒト被験体から得られた抗体であって、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合する能力に基づいて選択／単離された抗体」は、分析試薬として（すなわち、それらが対象とする抗原の存在を検出するのに免疫アッセイにおいて使用されるその他の抗体と同じように）使用される。
既に述べたように、本明細書において記載される本発明をより良く理解するためには、工程（ｉ）では、ＩＳＶは、通常、「抗原」として（すなわち、検出されるべき化合物として）使用され、「分析抗体」は「分析剤」として（すなわち、所定のＩＳＶが結合するか否かをそれぞれ検出し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かをそれぞれ検出するための手段として）使用されることに留意するべきである。例えば、工程（ｉ）がELISA形式で実施される場合、「抗体／分析剤」は、通常、担体（すなわち、ELISAプレート）に結合され、ＩＳＶは試験されるべきサンプル（中に存在する）である。
対照的に、ＩＳＶに対するＡＤＡを検出又は測定するためのＡＤＡアッセイでは、ＩＳＶは「分析剤」として（すなわち、ＡＤＡが存在するかを検出するのに使用される化合物として）使用され、ＡＤＡは「抗原」（すなわち、検出されるべき化合物）であることに留意するべきである。従って、これらのアッセイでは、ＩＳＶは、通常／多くの場合、担体（例えば、ELISAプレート）に結合されるのに対して、ＡＤＡは（もしある場合は）アッセイに供されるサンプル中に存在する。
しかしながら、既に述べたように、一般には、本発明は、「分析抗体」が担体に結合されるアッセイに限定されないことに留意するべきである。例えば、（実施例５に示されているように）本発明のアッセイを実施する代替方法では、分析抗体はブリッジング剤として代わりに使用されるので、（プレート上にコーティングされるＩＳＶを介してプレートに間接的には結合されるが）プレートに結合されるというよりもむしろ溶液中に存在する。しかしながら、実施例５に記載されている特定の（ブリッジング）アッセイ（これは競合アッセイである）においても、分析抗体は、分析剤として（すなわち、目的のＩＳＶが結合するか否かをそれぞれ決定し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かをそれぞれ決定するのに）依然として使用される。本明細書におけるさらなる開示に基づいて、当業者であれば、所定のＩＳＶが結合できるか否かをそれぞれ決定し、それによりタンパク質干渉を生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有するか否かを決定するために、分析抗体が分析剤として使用され得るその他のアッセイ形式を設計できることも想定される。
工程（ｉ）において使用される「分析抗体」はポリクローナル抗体でもよいし、モノクローナル抗体でもよい。
分析抗体がポリクローナル抗体である場合、それは、例えば、ヒト被験体の得られた生体サンプル（例えば、血液、血漿、Ｂ細胞、又はポリクローナル抗体が適切に単離され得る別の適切な生体サンプル若しくは生体液）から得られた／精製された／単離されたポリクローナル抗体（調製物）でもよい。これは、例えば、少なくとも１個のＩＳＶ（例えば、工程（ｉ）において使用されるＩＳＶだが、これが必要又は必須ではない）が投与されたヒト被験体から得られた適切な生体サンプルでもよいが、ＩＳＶが投与されたことがないか又はＩＳＶで処置されたことがないヒト被験体に由来する適切な生体サンプルでもよい（好ましい）。より重要なことは、ポリクローナル抗体が、アフィニティー部分としてＩＳＶを保持するアフィニティーマトリックス又はアフィニティーカラムを使用する少なくとも１つのアフィニティー工程（及び、それ自体は公知のポリクローナル抗体を得る／精製する／単離するための１つ以上のさらなる工程）を含む方法によって、前記生体サンプルから得られたものであることである。例えば、ポリクローナル抗体は、例えば実施例２に記載されているように、ＩＳＶを保持するアフィニティーカラムを使用するアフィニティークロマトグラフィーによって、このような生体サンプルから得られたものでもよい。これは、例えば、抗原としてＩＳＶを保持するアフィニティーマトリックスを使用して、生体サンプルから抗体を単離するための免疫アフィニティークロマトグラフィーの周知技術を使用して実施され得る。このような技術は当技術分野において一般に公知であり、その適切な例は、本明細書における開示に基づいて当業者には明らかである。
このようなポリクローナル抗体（調製物）は、特に、ＩｇＧ（又はＩｇＧ画分）であり得る。
例えば、それは、Ｃ末端タグを含有しない（すなわち、そのＣ末端がアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了している）ＩＳＶ（特に、ナノボディ、例えばＶＨＨ、ヒト化及び／若しくは配列最適化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨ）を、アフィニティーマトリックスに結合された抗原として使用して、ヒト被験体から得られた生体液のサンプルに対して実施される（免疫）アフィニティークロマトグラフィーを伴う方法によって得られたポリクローナル抗体であり得る。特に、アフィニティーマトリックスに結合された抗原として使用されるＩＳＶは、そのＣ末端がアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているヒト化又は配列最適化ＶＨＨ（あるいは、対応するラクダ化ヒトＶＨ）であり得る。具体的だが非限定的な一態様では、アフィニティーマトリックスに結合された抗原として使用されるＩＳＶは、このようなヒト化又は配列最適化の結果として、プロリン（Ｐ）残基を１４位（対応する「ネイティブな」ＶＨＨは、アラニン（Ａ）を１４位に含む）に含むヒト化又は配列最適化ＶＨＨであり得る（換言すれば、抗原として使用されるＩＳＶは、アラニン（Ａ）を１４位に本来含むＶＨＨのヒト化型であり、このアラニン残基は、ヒト化又は配列最適化の結果として、プロリン（Ｐ）残基で置換されている）。抗原として使用されるＩＳＶは、例えば国際公開第08/020079号又は国際公開第09/138519号に一般に記載されているこのようなヒト化又は配列最適化の結果として、１個以上のその他のアミノ酸置換も含み得る。
本発明において使用される「分析抗体」を作製／単離するのに抗原として使用され得るＩＳＶのいくつかの具体例は、配列番号１及び２に示される。
先と同様に、ポリクローナル抗体を得るのに使用される方法は、（免疫）アフィニティー工程に加えて、生体サンプルからポリクローナル抗体を単離／精製するための１つ以上のさらなる工程（アフィニティー工程の前又は後に実施される）も含み得る。先と同様に、それらを実施するためのこのような工程及び技術は、当業者には明らかである。
従って、一態様では、本発明は、本明細書において記載される工程（ｉ）及び（ｉｉ）を含む本明細書においてさらに説明される方法であって、「分析抗体」（すなわち、ヒト被験体から得られた抗体であって、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合する能力に基づいて選択／単離された抗体）が、ＩＳＶ（好ましくは、ナノボディ）が抗原として使用され、好ましくは、Ｃ末端配列としてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含むＩＳＶが抗原として使用され、より好ましくは、Ｃ末端配列としてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含むヒト化及び／又は配列最適化ナノボディが抗原として使用され、さらにより好ましくは、Ｃ末端配列としてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含み、プロリン残基を１４位に含むヒト化及び／又は配列最適化ナノボディ、例えば、Ｃ末端配列としてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含み、前記ヒト化及び／又は配列最適化（例えば、ヒト化及び／又は配列最適化されたＶＨＨの前記位置に本来存在するアラニン残基の置換）の結果としてナノボディに導入されたプロリン残基を１４位に含むナノボディが抗原として使用される少なくとも１つのアフィニティー工程（例えば、免疫アフィニティークロマトグラフィーなどのアフィニティークロマトグラフィーの工程）を含む方法を使用して、ヒト被験体から得られた生体サンプル（前記生体サンプルは、サンプルから抗体を作製／単離するための方法において使用するのに適切なサンプルである）から得られたものである方法を含む。
上記ＩＳＶは、「分析抗体」として本発明において使用するのに適切なモノクローナル抗体を（先と同様に、ヒトから得られた適切な生体サンプルから出発して）単離するための方法においても使用され得る。
例えば、このようなモノクローナル抗体は、血液、Ｂ細胞、又は抗体を単離するのに適切な別のサンプル若しくは材料から出発して得られるものでもよいし、ＩＳＶ若しくはナノボディ（のＣ末端）を認識する能力及び／又はＩＳＶ若しくはナノボディ（のＣ末端）に結合する能力に基づいて選択されるものでもよい（先と同様に、スクリーニング及び／又は選択において抗原として使用されるＩＳＶは、好ましくは、前段落に記載されているようなものであり、このようなＩＳＶ／抗原について述べた好ましいものが挙げられる）。このようなスクリーニング及び選択は、任意の適切な方法で、例えば欧州特許出願公開第0488470号、国際公開第92/02551号、欧州特許出願公開第1633787号、国際公開第01/55216号、国際公開第02/26829号、国際公開第04/051268号、国際公開第04/102198号又は国際公開第04/106377号に記載されているＢ細胞選択技術と本質的に同じか又は適切に類似のＢ細胞選択及び／又は増幅技術、又は国際公開第06/079372号に記載されているナノクローン技術と（ラクダＢ細胞よりもむしろヒトＢ細胞を使用する以外は）類似の技術を使用することによって実施され得る。
適切な抗体を発現する１個以上のＢ細胞が同定／単離されたら、前記抗体は、任意の適切な方法で単離、発現及び／又は産生され得る。例えば、前記Ｂ細胞を、（選択されたＢ細胞から出発してハイブリドーマを作製するためのそれ自体が周知の技術を使用して）所望の抗体（antibody）／抗体（antibodies）を産生するハイブリドーマとして不死化してもよく、次いで前記抗体（antibody）／抗体（antibodies）を、当技術分野において十分に確立されており、種々のハンドブック及びマニュアルに記載されており、さらには前段落で述べた特許公報に記載されており、及び／又は前記特許公報で参照されている適切な技術を再度使用して、前記ハイブリドーマ（の培養上清）から単離し得る。
あるいは、前記Ｂ細胞を、それ自体が公知のＢ細胞増幅技術を使用して増幅してもよく、増幅した前記Ｂ細胞（の培養上清）から抗体（antibody）／抗体（antibodies）を単離し得る。先と同様に、これは、当技術分野において十分に確立されており、種々のハンドブック及びマニュアルに記載されており、さらには前段落で述べた特許公報に記載されており、及び／又は前記特許公報で参照されている適切な技術を使用して実施し得る。
さらに別の代替方法では、目的の抗体（antibody）／抗体（antibodies）をコードするＤＮＡを、前記Ｂ細胞又はその他の適切な細胞から、直接的に（例えば、適切な単細胞ＰＣＲクローニング技術を使用して）、又は所望のＢ細胞を適切に増幅した後に（例えば、増幅によって）得てもよい。次いで、前記ＤＮＡを適切なホスト細胞又はホスト生物で適切に発現させて、所望の抗体（antibody）／抗体（antibodies）を提供し得る。先と同様に、これは、当技術分野において十分に確立されており、種々のハンドブック及びマニュアルに記載されており、さらには前段落で述べた特許公報に記載されており、及び／又は前記特許公報で参照されている適切な技術を使用して実施し得る。
（ヒト被験体から得られた適切なサンプルから出発して）レパートリークローニングをして、抗原として使用されるＩＳＶ（先と同様に、スクリーニング及び／又は選択において抗原として使用されるＩＳＶは、好ましくは、前段落に記載されるようなものであり、このようなＩＳＶ／抗原について述べた好ましいものが挙げられる）に結合する抗体について、クローニングしたレパートリーをスクリーニングすることを含む方法によって、「分析抗体」として使用するのに適切なモノクローナル抗体を作製することも可能である。レパートリークローニングの方法、及びクローニングしたレパートリーを選択及びスクリーニングのために提示するための種々の技術（例えば、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ及び酵母ディスプレイ）は当業者には明らかであり、例えば、欧州特許出願公開第0589877号、欧州特許出願公開第0774511号、国際公開第90/14430号及び欧州特許出願公開第0368684号、並びにこの主題に関する種々のハンドブックに記載されている。
一般に、（ポリクローナル又はモノクローナル）分析抗体を得るための開始点として使用される生体サンプルは、任意の適切なヒト被験体から得られた任意の適切な（すなわち、それぞれポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を得るための出発材料として適切な）サンプルであり得る。具体的だが非限定的な一態様では、このようなサンプルは、例えば、女性、特に経閉後の女性から得られたものでもよい。従って、具体的だが非限定的な一態様では、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用される分析抗体は、経閉後の女性から得られた／経閉後の女性に由来する生体サンプルから出発して得られたもの（又は、経閉後の女性から得られた／経閉後の女性に由来する抗体に由来するもの）である。
また、（ポリクローナル又はモノクローナル）分析抗体を得るための開始点として使用される生体サンプルは、ＩＳＶが（例えば、臨床試験の一環として又は治療上）過去に投与された被験体から得られるものでもよいが、好ましくは、ＩＳＶが過去に投与されてない被験体から得られるものである。
しかしながら、本発明は、使用される分析抗体（antibody）／抗体（antibodies）の起源に特に限定されないことに留意するべきであり、いくつかの場合では、本明細書において記載される技術を使用して、市販のヒト血液又は血漿（さらには、その他の哺乳類種又は霊長類種、例えばヒヒ又はカニクイザルに由来する血液、血漿又はＢ細胞）などのその他の起源に由来するその他の適切な分析抗体を得る（作製、単離）ことが可能であると証明されている。
上述のように、工程（ｉ）及び（ｉｉ）において使用される（ポリクローナル又はモノクローナル）分析抗体は、ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端を認識できるか、又はＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端に結合でき、最も好ましくは、ＩＳＶ又はナノボディのＣ末端に結合するこの能力に基づいて選択及び／又は単離されるようなものであるべきである。
図２から分かるように、ＩＳＶがＶＨ若しくはＶＨＨドメインに基づき又は由来する場合、ＩＳＶのＣ末端はアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含む。それに応じて分析抗体は、アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）をそのＣ末端に有するあらゆるＩＳＶを認識できるはずである。図２からさらに分かるように、配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）（のアミノ酸残基の少なくともいくつか）は、その他の残基の中でも特に１４位のアミノ酸残基（及び、アミノ酸配列の１４位のアミノ酸残基の隣の／近くの、例えば１１位、１３位及び１５位のアミノ酸残基）も含み、８３位のアミノ酸残基（及び、アミノ酸配列の８３位のアミノ酸残基の隣の／近くの、例えば８２位、８２ａ位、８２ｂ位及び８４位のアミノ酸残基）及び／又は１０８位のアミノ酸残基（及び、アミノ酸配列の１０８位のアミノ酸残基の隣の／近くの、例えば１０７位のアミノ酸残基。１０９位はＣ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）配列の最初のＶであり、例えば、１１０位もタンパク質干渉に影響を与え得ることが示された）も含み得るＩＳＶ上の推定エピトープの一部である。これは、本明細書ではまとめて「Ｃ末端領域」とも称され、このＣ末端領域は、Ｃ末端配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）及び１４位のアミノ酸残基を少なくとも含み、８３位及び１０８位のアミノ酸残基、並びに場合により１３位、１５位、８２ｂ位、８３位、８４位及び１０７位のアミノ酸残基も含み得ると理解される。
既に述べたように、先と同様にあらゆる仮説又は説明に限定されないが、完全型４本鎖モノクローナル抗体又は完全型重鎖単独抗体（例えば、ラクダに存在するもの）では、ＶＨ又はＶＨＨドメインのＣ末端は、抗体の残りの部分−すなわち、それぞれ通常のモノクローナルのＣＨ１領域又はラクダ重鎖抗体のヒンジ領域−に連結しているので、このような完全型抗体ではこのようなタンパク質干渉から保護され、及び／又は（通常の４本鎖抗体の）ＶＨ／ＶＬ相互作用によって守られる可能性があり、従って、この「Ｃ末端領域」は、通常、溶媒に曝露されず、及び／又はこのようなＩＳＶが投与されるヒトの血中、血漿中又は体内に存在するタンパク質のための相互作用部位としてアクセス可能ではない。しかしながら、ＩＳＶ若しくはナノボディそれ自体が使用される場合（すなわち、抗体の任意の他の一部と連結されない場合）、又はＩＳＶ若しくはナノボディをそのＣ末端に保有するＩＳＶ系薬物若しくはナノボディ系薬物が使用される場合、このＣ末端エピトープは、その他のタンパク質との（非特異的）相互作用に利用可能であり、先と同様にあらゆる仮説又は説明に限定されないが、Ｃ末端領域は今度は、試験されるべき「試験サンプル」中に既に存在する１個以上のタンパク質（例えば、１個以上のＩｇＧ）との（非特異的）タンパク質相互作用を受けるのにアクセス可能であり得、これが、免疫アッセイ（特に、ＡＤＡアッセイ）においてタンパク質干渉及び／又は非特異的シグナルを引き起こし得ると想定される。
前述のように、本明細書において記載される方法は、このようなタンパク質相互作用を予測し、減少させ、又は回避するのに使用され得る。そして、このようなタンパク質干渉を生じさせる傾向が（部分的に又は好ましくは本質的には完全に）抑えられたＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を提供するように、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物に対する改変に導くためのツールとしても使用され得る。
前段落から明らかであるように、先と同様にあらゆる仮説又は説明に限定されないが、「Ｃ末端領域」に対する（ある種の）改変は、ＩＳＶがこのような非特異的タンパク質相互作用を受ける傾向を変化させる（好ましくは、減少させる）ことが特に予想され（そして本発明の教示の一部であり）、これは実験的に観察されることでもある（例えば、以下の実施例１Ｃ及び実施例３に示されている実験結果を参照のこと）。
これに基づいて、先と同様にあらゆる仮説又は説明に限定されないが、本発明はまた、この目的のためにＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物のＣ末端領域内に導入され得るある種の改変（この（潜在的）有効性は、本明細書において記載される方法を使用して試験され得る）を教示する。また、本明細書における教示に基づいて、当業者であれば、この目的のために導入され得るＣ末端領域に対するその他の改変（候補）（この（潜在的）有効性は、先と同様に、本明細書において記載される方法を使用して試験され得る）を選択、設計又は提案できると想定される。
本発明において使用される分析抗体に戻るが、これは、好ましくは、ＩＳＶのＣ末端領域（上に定義される）、限定されないが特にナノボディのＣ末端領域を認識する（ポリクローナル又はモノクローナル）抗体である。
例えば、具体的だが非限定的な一態様では、「分析抗体」は、配列のＣ末端がＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているＩＳＶ又はナノボディのＣ末端領域を認識する（及び／又は、前記Ｃ末端領域に結合、特に特異的に結合できる）が、Ｃ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）に連結された１個以上のさらなるアミノ酸残基（例えば、１個〜５個のアミノ酸残基、あるいは小ペプチド配列、又はさらに別のポリペプチド若しくはタンパク質）がある場合には、ＩＳＶ又はナノボディ（これらは異なるＩＳＶでもよいが、好ましくは同じＩＳＶである）のＣ末端領域を認識しない（及び／又は、前記Ｃ末端領域に特異的に結合できない）ポリクローナル又はモノクローナルであり得る。
より具体的だが依然として非限定的な別の態様では、「分析抗体」は、配列のＣ末端がＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、１４位が１４位に本来存在しないアミノ酸であり、及び／又は（例えば、ヒト化、ラクダ化及び／又は配列最適化の結果として）１４位に本来存在するアミノ酸と比較して改変されたＩＳＶ又はナノボディのＣ末端領域を認識する（及び／又は、前記Ｃ末端領域に結合、特に特異的に結合できる）が、Ｃ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）に連結された１個以上のさらなるアミノ酸残基（例えば、１個〜５個のアミノ酸残基、あるいは小ペプチド配列、又はさらに別のポリペプチド若しくはタンパク質）があり；及び／又は、１４位が１４位に本来存在するアミノ酸（例えば、アラニン、又はＩＳＶがプロリンを１４位に本来含有する場合にはプロリン）であるＩＳＶ又はナノボディ（これらは異なるＩＳＶでもよいが、好ましくは同じＩＳＶである）のＣ末端領域を認識しない（及び／又は、前記Ｃ末端領域に特異的に結合できない）ポリクローナル又はモノクローナルであり得る。
例えば、「分析抗体」はまた、配列のＣ末端がＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、１４位がプロリンである（特に、例えばヒト化、ラクダ化及び／又は配列最適化の結果として、１４位がプロリンに改変された場合）ＩＳＶ又はナノボディのＣ末端領域を認識する（及び／又は、前記Ｃ末端領域に結合、特に特異的に結合できる）が、Ｃ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）に連結された１個以上のさらなるアミノ酸残基（例えば、１個〜５個のアミノ酸残基、あるいは小ペプチド配列、又はさらに別のポリペプチド若しくはタンパク質）があり；及び／又は、１４位がアラニンであるＩＳＶ又はナノボディ（これらは異なるＩＳＶでもよいが、好ましくは同じＩＳＶである）のＣ末端領域を認識しないポリクローナル又はモノクローナルであり得る。
「分析抗体」はまた、配列のＣ末端がＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、１４位がプロリンである（特に、プロリン残基が前記ＩＳＶの前記位置に本来存在する場合）ＩＳＶ又はナノボディのＣ末端領域を認識する（及び／又は、前記Ｃ末端領域に結合、特に特異的に結合できる）が、Ｃ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）に連結された１個以上のさらなるアミノ酸残基（例えば、１個〜５個のアミノ酸残基、あるいは小ペプチド配列、又はさらに別のポリペプチド若しくはタンパク質）があり、１４位が依然として（本来存在するか又は未改変の）プロリンであるＩＳＶ又はナノボディ（これらは異なるＩＳＶでもよいが、好ましくは同じＩＳＶである）のＣ末端領域を認識しないポリクローナル又はモノクローナルであり得る。
「分析抗体」はまた、例えば、本明細書において「Ｎｂ３．４」と称されるＩＳＶの配列（配列番号５）（のＣ末端領域）を認識するが、本明細書において「Ｎｂ３．１」と称されるＩＳＶの配列（配列番号３）（のＣ末端領域）を認識せず、及び／又は（好ましくは）本明細書において「Ｎｂ３．２」と称されるＩＳＶの配列（配列番号４）を認識しないポリクローナル又はモノクローナルであり得る。
上記目的のために、「分析抗体」がＩＳＶ又はナノボディを認識する（又は認識しない）か（及び／又は、ＩＳＶ又はナノボディに（特異的に）結合できるか否か）は、任意の適切な結合アッセイ（例えば、Biacore）を使用して決定され得るが、実施例３に記載されているBIACOREアッセイ、又は実施例５に記載されているＡＤＡブリッジング／競合アッセイなどのＡＤＡアッセイを使用して決定してもよい（図１Ａ〜図１Ｃ、特に図１Ｂも参照のこと）。
このようなアッセイを実施するための適切な形式／技術は、本明細書における開示に基づいて当業者には明らかであり、例えば（限定されないが）、以下のものが挙げられる：
− 分析抗体をプレートに直接的又は間接的にコーティングし、結合したＩＳＶをモノクローナル又はポリクローナル抗ＩＳＶ抗体で検出するELISAなどの比色アッセイ。このセットアップに有用なその他の代替技術としては、限定されないが、電気化学発光（MSDプラットフォーム）、蛍光発光（DELFIA、GYROS）、及び結合したＩＳＶの二次検出に依存するその他の方法が挙げられる。
− 表面プラズモン共鳴（例えば、BIACORE）、又は分析抗体を直接的又は間接的に固定化し、続いて注入／投与したＩＳＶの結合をモニタリングするその他のリアルタイムバイオセンサー法（すなわち、ＳＰＲを使用するもの以外）。これらの方法は、結合したＩＳＶをさらに検出することを必要としない。この種のアッセイを実施するための代表的な方法は、実施例３に記載されている。
− 生体液を含有するＡＤＡの代わりに分析抗体を使用して、ブリッジングアッセイ（ＡＤＡアッセイ）においてＩＳＶの競合行動を分析する。ブリッジングアッセイについては、ELISA、MSDプラットフォームなどの様々な技術を使用できる。この種のものを実施するための代表的な方法は図１Ａ〜図１Ｃに概略的に示され、この種のアッセイの一具体例は実施例５にも記載されている。
− 分析抗体をクロマトグラフマトリックス上に固定化し、溶液からＩＳＶを特異的に捕捉／単離する任意のクロマトグラフ法。
本明細書又は実施例の１つに記載されている方法の１つ（又は、前記方法と本質的に同等の方法）を使用して適切な分析抗体が得られたら、前記分析抗体は、上記工程（ｉ）及び（ｉｉ）を実施することによって、所定のＩＳＶ又はナノボディ（又は、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）がタンパク質干渉（本明細書において定義される）を生じさせる（又は、タンパク質干渉を生じさせる高い傾向又は増加した傾向を有する）かを決定するのに使用され得る。本明細書において既に記載したように、これは、一般に、分析抗体に前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を接触させること、並びに前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物が前記分析抗体によって認識される（及び／又は、前記分析抗体によって結合、特に特異的に結合される）か（特に、前記ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端領域、又は前記ＩＳＶ系薬物若しくはナノボディ系薬物のＣ末端を形成するＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端領域が、前記分析抗体によって認識されるか）を決定することを含む。
これは、一般に、抗原（この場合は、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）に抗体が結合するか否かを決定するための任意の適切な技術を使用して実施され得る。そして、適切な（免疫）アッセイ技術は当業者には明らかである。いくつかの非限定的な例は、適切なELISA技術（例えば、サンドイッチELISAを含む）である；この場合、使用されるELISA形式（当業者には明らかである）に応じて、分析抗体又はＩＳＶをプレート上にコーティングしてもよいし、分析抗体又はＩＳＶを検出可能にラベルしてもよい。その他の技術は、例えば、BIAcore機器の使用を含み得る（この場合は先と同様に、分析抗体又はＩＳＶをチップ上にコーティングしてもよい。例えば、実施例３を参照のこと）。別の代替方法は、ＩＳＶが、分析抗体によって結合されることが公知の別のＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物と競合する（又は逆もまた同様である）能力を試験する競合ブリッジングアッセイ（例えば、実施例５に例示される）であり得る。所定のＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物が分析抗体によって（特異的に）結合又は認識されるかを決定するためのこれらの及びその他の適切な技術は、本明細書における開示に基づいて当業者には明らかである。
本明細書における開示に基づいて、本発明（特に、本発明において使用される分析抗体）は、所定のＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物が、ＡＤＡアッセイ（特に、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物に対するＡＤＡの存在を決定するためのＡＤＡアッセイ）などの免疫アッセイに供されるべき被験体から得られた生体サンプル（すなわち、「試験サンプル」）中に存在し得る１個以上のタンパク質又はその他の成分との（非特異的）タンパク質相互作用を受けることができる相互作用部位（例えば、Ｃ末端領域に若しくはＣ末端領域内に存在し、及び／又はＣ末端領域がその一部を形成する相互作用部位）を含有するか否かを決定するのに使用され得ることも明らかである。従って、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物が本発明において使用される分析抗体によって認識される場合、前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物はこのような（アクセス可能な又は曝露された）相互作用部位を含有し、それにより、試験サンプルを試験するためのこのような免疫アッセイ又はＡＤＡアッセイにおいて使用される場合に、このようなタンパク質干渉（本明細書において定義される）を生じさせる傾向を有する可能性が非常に高い。当業者には明らかであるように、これは、好ましくは、可能であれば別のＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を選択／使用することによって、又はこのようなタンパク質干渉の傾向が実質的に低減され、若しくは本質的に除去されるように、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系を改変することによって回避されるべきことである（先と同様に、これは、本明細書において開示される方法及び分析抗体を使用して試験され得る）。
また、本明細書における開示に基づいて当業者には明らかであるように、このような改変は、例えば、試験サンプル中に存在し得る１個以上のタンパク質又はその他の成分との（非特異的）タンパク質相互作用を受ける能力が抑制されるか又は除かれるように、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物上の相互作用部位に対する１個以上の改変（例えば、アミノ酸の挿入、付加、欠失又は置換）を作ることを含み得る。先と同様に、これは、１個以上の改変を導入し、次いで、本明細書において開示される方法及び分析抗体を再度使用してこの能力が抑制されたか否かを試験することによって、わずかな試行錯誤で実施され得る。例えば、１個以上のこのような改変を導入し、次いで、改変されたＩＳＶが分析抗体に結合する能力を元の／未改変のＩＳＶの能力と比較してもよい。あるいは、競合ブリッジング形式（例えば、実施例５に例示される）を使用して、又はBIAcore（例えば、実施例３を参照のこと）を使用して、分析抗体への結合について、改変されたＩＳＶが元のＩＳＶと（依然として）競合する能力を決定してもよい。
先と同様に、本発明はあらゆる仮説又は説明に限定されないが、以下の実施例に示されている実験的な証拠に基づいて、本発明者らは、この相互作用部位がＣ末端領域（本明細書において定義される）に／Ｃ末端領域の近くに位置する可能性があること、又は前記相互作用部位がＣ末端領域の一部を形成すること（又は、Ｃ末端領域がこの相互作用部位の一部を形成すること）を見出した。これは、例えば、ＩＳＶがこのようなタンパク質干渉を生じさせる傾向を有し、アミノ酸残基としてＶＴＶＳＳ（配列番号３３）をそのＣ末端に有する場合、限られた数のアミノ酸残基（例えば、１個〜１０個、例えば１個〜５個、例えば１個、２個、３個、４個又は５個）、あるいはタグ又は別のペプチド、タンパク質若しくはその他の部分をこのＣ末端に付加することにより、通常、前記傾向が実質的に低減され、又は本質的に除去されるという観察に少なくとも部分的には基づいている。いくつかの場合では、１個、２個又は３個のアミノ酸残基（これは、国際公開第09/138519号の６４頁の表Ａ−２に列挙されているアミノ酸などの天然に存在するアミノ酸、例えば限定されないが、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン又はイソロイシンからそれぞれ独立して選択され得る任意の適切なアミノ酸又はアミノ酸の組み合わせであり得る）をＣ末端ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）にさらに付加することにより、前記傾向がすぐに実質的に低減され、又は本質的に除去され得ることが見出された。これは、ＶＨＨがアラニン残基（前述のように、これはＣ末端領域の一部を形成する；図２を参照のこと）を１４位に本来含有するいくつかの場合では、天然に存在するＶＨＨは、このようなタンパク質干渉を生じさせる傾向を有しない（又は前記傾向が低い）ことが多いのに対して、（例えば、ヒト化又は配列最適化の目的のために）１４位の前記アラニンがプロリン残基で置換された対応するＶＨＨは、その結果として、（すなわち、アラニンを１４位に有するＶＨＨと比較して）このようなタンパク質干渉を生じさせる増加した傾向を有し得るという観察にも部分的には基づいている。
一態様では、本発明は、ＶＨＨ、ナノボディ（本明細書において定義され、特にヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨ）又は別のＩＳＶ（又は、ＶＨＨ、ナノボディ又はその他のＩＳＶをそのＣ末端に有するＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）であって、以下のいずれの場合でも好ましくは、改変されていない以外は同じＶＨＨ、ナノボディ又はＩＳＶと比較して、（ｉ）タンパク質干渉（本明細書において定義される）を生じさせる実質的に減少した傾向（例えば、少なくとも統計的に関連性のある減少した傾向）を有するように；及び／又は（ｉｉ）本明細書において記載される本発明の方法（例えば、実施例３又は実施例５に記載されている特定のアッセイ）において、本明細書において記載される分析抗体（例えば、実施例２に記載されており、実施例３及び実施例５で使用されているポリクローナル抗体）によって結合される能力が実質的に低下するように、（例えば、１個以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を導入することによって）改変された、特に（例えば、Ｃ末端領域内に１個以上のアミノ酸を置換又は付加することによって）Ｃ末端領域が改変されたＶＨＨ、ナノボディ又は別のＩＳＶに関する。
従って、一態様では、本発明は、ＶＨＨ若しくはＶＨドメインであり（すなわち、ＶＨドメインであり又はＶＨドメインに由来するＩＳＶ）、及び／又はＶＨＨ若しくはＶＨドメイン（のアミノ酸配列）に基づき若しくは由来するＶＨＨ、ナノボディ（本明細書において定義され、特にヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨ）又は別のＩＳＶ（又は、ＶＨＨ、ナノボディ又はその他のＩＳＶをそのＣ末端に有するＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物）であって、アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号３４）（式中、ｎは、１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４又は５（好ましくは１又は２、例えば１）であり、各Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）又はイソロイシン（Ｉ）からなる群より独立して選択される（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基である；しかしながら、以下に示されているデータから分かるように、その他の（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基、又は上記好ましいアミノ酸残基とその他のアミノ酸残基（例えば、セリン、プロリン、トレオニン及び／又はリシン）との組み合わせも使用され得る）をそのＣ末端に含むＶＨＨ、ナノボディ又は別のＩＳＶに関する。好ましくは、アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号３４）をそのＣ末端に有する前記ＶＨＨ、ナノボディ又はＩＳＶは、以下のいずれの場合でも好ましくは、アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）をそのＣ末端に有する以外は同じＶＨＨ、ナノボディ又はＩＳＶと比較して、（ｉ）タンパク質干渉（本明細書において定義される）を生じさせる実質的に減少した傾向（例えば、少なくとも統計的に有意な減少傾向）を有し；及び／又は（ｉｉ）本明細書において記載される本発明の方法（例えば、実施例３又は実施例５に記載されている特定のアッセイ）において、本明細書において記載される分析抗体（例えば、実施例２に記載されているポリクローナル抗体）によって結合される能力が実質的に低下しているようなものである。例えば、実施例３に示されているアッセイ及びデータを参照のこと。
上記ＶＨＨ、ナノボディ又は（その他の）ＩＳＶは、好ましくは、（実施例９に示されているプロトコールに従って決定し、分子（molecu）についての測定ＲＵ値を調整した後に）２１−４による結合について５００未満のＲＵ値を有するようなものである。本明細書における説明又は特許請求の範囲においてＣ末端配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（上記態様（ａ）〜（ｐ）のいずれかを含む）について言及するときは常に、本発明の具体的な一態様によれば、アミノ酸Ｘはいずれもシステイン残基ではないことにも留意するべきである。
例えば、いくつかの好ましい態様では、ＩＳＶ又はＩＳＶを含有する構築物のＣ末端（このＣ末端が、ＶＨに由来するＩＳＶ、ＶＨＨ又はナノボディである場合）は、以下のものであり得る：
（ａ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝１及びＸ＝Ａｌａ）；
（ｂ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ）；
（ｃ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ）；
（ｄ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｅ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｆ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｇ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝１及びＸ＝Ｇｌｙ）；
（ｈ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ｇｌｙ）；
（ｉ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ｇｌｙ）；
（ｊ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び少なくとも１個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｋ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｌ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；
（ｍ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）；
（ｎ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）；
（ｏ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））；又は
（ｐ）ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
態様（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｍ）及び（ｎ）が特に好ましく、ｎ＝１又は２の態様が好ましく、ｎ＝１の態様が特に好ましい。
本明細書における説明又は特許請求の範囲においてＣ末端配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（上記態様（ａ）〜（ｐ）のいずれかを含む）について言及するときは常に、本発明の具体的な一態様によれば、アミノ酸Ｘはいずれもシステイン残基ではないことにも留意するべきである。
従って、好ましい一態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝１及びＸ＝Ａｌａ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝１及びＸ＝Ｇｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ｇｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ｇｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び少なくとも１個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝２及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。又は
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝３及び少なくとも２個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）（又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質又はポリペプチド）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中、ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）に関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中：
− ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；又は
− ｎ＝２又は３、１個以外のすべてのＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）
又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質若しくはポリペプチドに関する。
別の好ましい態様では、本発明は、免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）であって、ナノボディであるか、又はＶＨ配列を含み若しくはＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶであり（ナノボディが好ましい）、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（式中：
− ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；又は
− ｎ＝２又は３、少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される）；
− ｎ＝２又は３、１個以外のすべてのＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘは天然に存在する任意のアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕ及び／又はＩｌｅから独立して選択される））のＣ末端を有する免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＩＳＶ）
又はこのようなＩＳＶ（好ましくはこのようなナノボディ）をそのＣ末端に含有するタンパク質若しくはポリペプチドに関する。
上記態様では、前記「ＶＨ配列を含み又はＶＨ配列に由来する（その他の）ＩＳＶ」は、ＶＨ配列を含み又はＶＨ配列に由来し、ナノボディではない（すなわち、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨではない）ＩＳＶを意味する。例えば、このような（その他の）ＩＳＶは、例えば、ＶＨに基づく（単一）ドメイン抗体、ＶＨに基づくdAb（商標）又はＶＨに基づくマイクロボディであり得る（国際公開第00/29004号を参照のこと）。
先と同様に、本明細書において言及されるＩＳＶのうちの１個がＣ末端配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（限定されないが、先の態様において言及されるＩＳＶを含む）を有するときは常に、本発明の具体的な一態様によれば、配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎのアミノ酸Ｘはいずれもシステイン残基ではないことに留意するべきである。
本明細書においてさらに説明されるように、このようなタンパク質又はポリペプチドは、例えば、場合により１個以上の適切なリンカーを介して連結された２個以上のＩＳＶ（例えば、２個以上のナノボディ）を含有する構築物であり得る。従って、例えば、このような構築物は二価、三価、四価又は五価の構築物（例えば、二価、三価、四価又は五価のナノボディ構築物）でもよいし、例えば、二重特異性、三重特異性又は二パラトープ性の構築物（例えば、半減期の延長のために血清アルブミン（好ましい）又は別の血清タンパク質にも結合できる一重特異性、二重特異性又は二パラトープ性の構築物を含む）である二価、三価、四価又は五価の構築物（例えば、二価、三価、四価又は五価のナノボディ構築物）でもよい。
先と同様に、上記各態様のナノボディ、ＩＳＶ及びタンパク質／ポリペプチドは、好ましくは、（実施例９に示されているプロトコールに従って決定し、使用したＩＳＶ又はタンパク質の分子量についての測定ＲＵ値を上に示した式に従って調整した後に）２１−４による結合について５００未満のＲＵ値を有するようなものである。
本明細書において述べたように、本発明はまた、ＶＨドメインをそのＣ末端に有するその他のタンパク質又はポリペプチド（特に、Ｆａｂフラグメントなどの抗体フラグメント、又は抗体フラグメントに基づくその他のタンパク質若しくはポリペプチド、例えばＳｃＦｖ）に適用され得ることも想定される。従って、別の態様では、本発明は、Ｃ末端アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎ（配列番号３４）（式中、ｎは、１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４又は５であり、各Ｘは、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）又はイソロイシン（Ｉ）からなる群より独立して選択される（好ましくは独立して選択される）（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基である）をそのＣ末端に有するＶＨドメインを有するこのようなタンパク質又はポリペプチド（例えば、ＳｃＦｖ）に関する。先と同様に、いくつかの具体的な態様によれば、前記Ｃ末端は上記（ａ）〜（ｐ）のいずれか、好ましくは（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｍ）又は（ｎ）のうちの１つでもよく、ｎは、１、２又は３であり、好ましくは１又は２である。
先と同様に、このようなタンパク質又はポリペプチドは、好ましくは、（実施例９に示されているプロトコールに従って決定し、使用したＩＳＶ又はタンパク質の分子量についての測定ＲＵ値を上に示した式に従って調整した後に）２１−４による結合について５００未満のＲＵ値を有するようなものである。また先と同様に、本発明のこの態様の具体的な一態様によれば、Ｃ末端配列ＶＴＶＳＳ（Ｘ）ｎのアミノ酸Ｘはいずれもシステイン残基ではない。
本発明はさらに、ＩＳＶ（好ましくは治療用ＩＳＶ）又は少なくとも１個のＩＳＶ（好ましくは少なくとも１個の治療用ＩＳＶ）を含むタンパク質若しくはポリペプチドであって、本明細書においてさらに説明されるようなＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド（すなわち、本明細書において記載される態様の１つ以上、特に先の頁に記載されている態様の１つ以上のＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド；より具体的には、本明細書において記載される態様の１つ以上のＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド）と、少なくとも１つの適切な（すなわち、医薬用途に適切な）担体、希釈剤又は賦形剤と、場合により１つ以上のさらなる活性物質とを含む医薬組成物に関する。このような組成物、担体、希釈剤又は賦形剤は、例えば、ナノボディ又は少なくとも１個のナノボディを含むタンパク質若しくはポリペプチドを含む医薬組成物についての国際公開第08/020079号に記載されているようなものであり得る（既に述べたように、本発明によれば、ＩＳＶは、好ましくは、ナノボディでもある）。
本発明はさらに、ヒト（例えば、このような治療を必要とする患者）における疾患の治療において使用するための、ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドであって、本明細書においてさらに説明されるようなＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド（すなわち、本明細書において記載される態様の１つ以上、特に先の頁に記載されている態様の１つ以上のＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド；より具体的には、本明細書において記載される態様の１つ以上のＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド）に関する。
本発明はさらに、医薬組成物の調製における、ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドの使用であって、前記ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドが、本明細書においてさらに説明されるようなもの（すなわち、本明細書において記載される態様の１つ以上、特に先の頁に記載されている態様の１つ以上のＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド；より具体的には、本明細書において記載される態様の１つ以上のＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド）である使用に関する。
本発明はさらに、ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドであって、本明細書においてさらに説明されるようなＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド（すなわち、本明細書において記載される態様の１つ以上、特に先の頁に記載されている態様の１つ以上のＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド；より具体的には、本明細書において記載される態様の１つ以上のＣ末端／配列を有するＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチド）；又は、少なくとも１個のこのようなＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドを含む医薬組成物（上記）を医薬組成物調製物でヒト被験体（例えば、このような処置を必要とする患者）に投与することを含む処置方法に関する。
上記に関して、本明細書において記載されるＩＳＶ、タンパク質及びポリペプチドの治療用途（又は、このような治療用途のためのこのようなＩＳＶ、タンパク質及びポリペプチドの臨床開発）は、前記ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドが免疫原性である（すなわち、ヒト被験体に投与された場合にＡＤＡを生じさせ得る）かを決定するためのＡＤＡアッセイの使用を伴い得るので、本明細書において記載されるＩＳＶ、タンパク質及びポリペプチドの治療用途が、本発明の非常に重要な態様であることは明らかである。この点において、治療薬がより長期間にわたって（数週間、数カ月又は数年間にわたって）使用され、及び／又はヒト被験体において、少なくとも３日間、例えば少なくとも１週間、最大１０日間又はそれ以上の半減期（好ましくは、ｔ１／２−βと表わされる）を有する場合には、考えられる免疫原性についての懸念に特に対処しなければならないことも明らかである。
従って、本発明の具体的な一態様によれば、本明細書において記載されるＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド又は医薬組成物は、ヒトにおける慢性疾患を処置することを目的とするものであり、及び／又は、本明細書において記載されるこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチドは、それが（すなわち、治療活性用量で）投与される被験体の循環系に（すなわち、薬学的に活性なレベルで）少なくとも１週間の期間、好ましくは少なくとも２週間、例えば少なくとも１カ月間にわたって存在することを目的とするものであり；及び／又は、本明細書において記載されるこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチドは、ヒト被験体において、少なくとも３日間、例えば少なくとも１週間、最大１０日間又はそれ以上の半減期（好ましくは、ｔ１／２−βと表わされる）を有するようなものであり；及び／又は、本明細書において記載されるこのようなＩＳＶ、タンパク質、ポリペプチド又は医薬組成物は、少なくとも３日間、例えば少なくとも１週間、例えば少なくとも２週間又は少なくとも１カ月間又はそれよりもさらに長い期間（すなわち、少なくとも３カ月間、少なくとも６カ月間又は少なくとも１年間）にわたって投与されるか、又はさらに慢性的に投与される２回以上の用量としてヒトに投与されることを目的とするものである。
本発明はさらに、ＩＳＶ、ナノボディ又はＩＳＶ系薬物若しくはナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向を（実質的に）減少させ、又は本質的に除去するための方法であって、
− 場合により、本明細書において言及される工程（ｉ）及び（ｉｉ）を少なくとも含む方法を使用して、ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向を決定する工程；
− １個以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を前記ＩＳＶ若しくはナノボディに、又はＩＳＶ系薬物若しくはナノボディ系薬物の（もしあれば）Ｃ末端ＩＳＶ若しくはナノボディに導入することによって；特に、１個以上のアミノ酸の置換又は付加を前記ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端領域内に、又はＩＳＶ系薬物若しくはナノボディ系薬物の（もしあれば）Ｃ末端ＩＳＶ若しくはナノボディのＣ末端領域内に導入することによって、例えば、天然に存在する任意のアミノ酸（例えば、国際公開第09/138519号の６４頁の表Ａ−２に列挙されているアミノ酸、例えば限定されないが、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン又はイソロイシン）からそれぞれ独立して選択される１個〜１０個、例えば１個〜５個、例えば１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸残基を配列のＣ末端に付加することによって、前記ＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物を改変する工程；
− 本明細書において言及される工程（ｉ）及び（ｉｉ）を少なくとも含む方法を使用して；場合により、このようにして改変されたＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向を、元のＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向と比較すること（限定されないが、本明細書において記載される分析抗体への結合について、それらを競合アッセイで比較することを含む）を可能にする方法で、このようにして改変されたＩＳＶ、ナノボディ、ＩＳＶ系薬物又はナノボディ系薬物がタンパク質干渉を生じさせる傾向を決定する工程
を少なくとも含む方法に関する。あるいは、２１−４の使用を伴う本明細書において記載される方法を使用してもよい。
次に、以下の非限定的な好ましい態様、実施例及び図面によって、本発明をさらに説明する。
図１Ａは、ＡＤＡアッセイ形式の非限定的な例を概略的に示す。このアッセイを実施するためのいくつかの代表的だが非限定的なプロトコールは、実施例４で述べる。 図１Ｂは、ＡＤＡアッセイ形式の非限定的な例を概略的に示す。このアッセイを実施するためのいくつかの代表的だが非限定的なプロトコールは、実施例４で述べる。 図１Ｃは、ＡＤＡアッセイ形式の非限定的な例を概略的に示す。このアッセイを実施するためのいくつかの代表的だが非限定的なプロトコールは、実施例４で述べる。 図２は、ナノボディなどのＩＳＶの代表的な３次元（３Ｄ）構造を概略的に示す。 図３は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４〜３．９（配列番号５〜１０）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図４は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４、３．１１、３．１２及び３．１３（配列番号５、１２、１３及び１４）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図５は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４、３．１４及び３．１５（配列番号５、１５及び１６）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図６は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．１、３．２及び３．４（配列番号３、４及び５）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図７は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ４．１及び４．２（配列番号１７及び１８）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図８は、実施例２で得られた固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ６．１、６．２、６．４及び６．５（配列番号１９〜２２）の結合を示す（実施例３に記載されているBIACOREアッセイを使用して得られた）結合曲線である。 図９−１は、実施例８で使用した配列（配列番号３７〜３９）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−２は、実施例８で使用した配列（配列番号４０〜４２）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−３は、実施例８で使用した配列（配列番号４３〜４６）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−４は、実施例８で使用した配列（配列番号４７〜５１）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−５は、実施例８で使用した配列（配列番号５２〜５８）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−６は、実施例８で使用した配列（配列番号５９〜６５）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−７は、実施例８で使用した配列（配列番号６６〜７２）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−８は、実施例８で使用した配列（配列番号７３〜７９）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−９は、実施例８で使用した配列（配列番号８０〜８６）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。 図９−１０は、実施例８で使用した配列（配列番号８７〜８９）を示し、対応する参照配列を示す表を表す。
本明細書及び特許請求の範囲において言及される配列を以下の表Ａ（配列番号１〜３７）及び図９（配列番号３８〜８９）に列挙する。
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実施例１：ポリクローナル分析抗体の作製。
「分析抗体」として使用できるポリクローナル抗体（ＩｇＧ画分）は、以下のように作製した：
Ａ．ポリクローナル抗体を単離するための適切な血漿サンプルの同定
ＩＳＶで処置されたことがない健常者に由来する血漿サンプル２０個について、本発明において分析抗体として使用できるＩＳＶに対する抗体の存在を評価した。
本実施例で最初に使用したＩＳＶは、配列番号１であった。続いて、相互作用がこの特定のＩＳＶに特異的ではないが、多数のＩＳＶで生じ得る非特異的タンパク質−タンパク質相互作用であることを確認するために、その他のＩＳＶを用いて以下のアッセイを繰り返した（以下の段落Ｃ）を参照のこと）。配列番号１の代わりとして、例えば、配列番号２を使用してもよい。
使用したアッセイはＥＣＬ（電気化学発光）ブリッジングアッセイであり、捕捉にはビオチン化ＩＳＶ（配列番号１のビオチン化変異体）を使用し、抗薬物抗体の検出にはスルホタグ化ＩＳＶを使用した。ＡＤＡアッセイを実施するのにも同様の形式を使用する。ＩＳＶのビオチン化及びスルホタグ化は、製造業者の説明書に従ってSulfo-NHS-LC-Biotin (Pierce)及びSulfo-tag NHS-Ester (MSD)をそれぞれ使用することにより、第一級アミンに対する標準的なカップリング化学反応を使用して行った。血漿サンプルをＰＢＳ／０．１％カゼインで１／５希釈し、９６ウェルポリプロピレンプレート中、３７℃、６００RPMで３０分間インキュベーションした。次いで、サンプル（５０μL）を、２μg/mlのビオチン化ＩＳＶ及び２μg/mlのスルホタグ化ＩＳＶ（配列番号１）の１：１混合液（１００μL）で１／３希釈し、室温（ＲＴ）、６００RPMで１時間インキュベーションした。MSD MA（登録商標）９６ウェル標準ストレプトアビジンプレートを１５０μL／ウェルのSuperblock（登録商標）T20を用いて室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングし、次いで、ＰＢＳ／０．０５％Tween20（＝洗浄緩衝液）で３回洗浄した。サンプル／１：１混合液（ビオチン化ＩＳＶ及びスルホタグ化ＩＳＶ（配列番号１））（５０．０μL）をポリプロピレンプレートからMSDプレートに移し、室温（ＲＴ）、６００rpmで１時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄してから2 x Read Buffer (MSD)（１５０μL／ウェル）を追加し、MSDの機器（Sector Imager 2400 reader）でＥＣＬ単位（ＥＣＬＵ）を読んだ。方法のバリデーション時に決定したスクリーニングカットポイントを使用して、サンプルをポジティブ又はネガティブとしてスクリーニングした。スクリーニングカットポイントは、ＩＳＶで処置されたことがない健常者に由来する個々の血漿サンプル１１８個のバックグラウンド値に基づいて、ＡＤＡアッセイの開発ガイドライン（Shankar, 2008）によって推奨されている適切な統計分析を使用して計算した。ノンパラメトリック評価を使用し、外れ値を除いた後の９５パーセンタイルに基づいてカットオフ値を計算した。
６個の血漿サンプルをポジティブとして明確にスコア化した：ＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−０１、ＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−０８、ＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−１０、ＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−１５、ＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−１９及びＩＨｕＰ＃００２−００１−ＡＢＬ−２０（表Ｉ）。
これらのサンプルを薬物置換セットアップ（確認アッセイ）でさらに分析して、ポジティブスクリーニング結果の特異性を確認した（表ＩＩ）。従って、サンプルを、１２．５μg/mLのＩＳＶ（配列番号１）を含有するＰＢＳ／０．１％カゼインで１／５希釈し、９６ウェルポリプロピレンプレート中、３７℃、６００RPMで３０分間インキュベーションした。次いで、サンプル（５０μL）を、２μg/mlのビオチン化ＩＳＶ及び２μg/mlのスルホタグ化ＩＳＶ（配列番号１）の１：１混合液（１００μL）で１／３希釈し、室温（ＲＴ）、６００RPMで１時間インキュベーションする。続いて、スクリーニングアッセイのために上記のように、サンプル／１：１混合液（ビオチン化ＩＳＶ及びスルホタグ化ＩＳＶ）（５０．０μL）をポリプロピレンプレートからブロッキングされたMSD MA（登録商標）９６ウェル標準ストレプトアビジンプレートに移し、室温（ＲＴ）、６００rpmで１時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄してから2 x Read Buffer (MSD)（１５０μL／ウェル）を追加し、MSDの機器（Sector Imager 2400 reader）でＥＣＬ単位（ＥＣＬＵ）を測定した。方法のバリデーション時に決定した確認カットポイントを使用してサンプルを真のポジティブと確認し、ＩＳＶで処置されたことがない健常者に由来する個々の血漿サンプル１１８個（５０μg/mlのＩＳＶ（配列番号１）でスパイクしたもの）のＥＣＬ反応に基づいて、ＡＤＡアッセイの開発ガイドライン（Shankar, 2008）によって推奨されている適切な統計分析を使用して計算した。５０％の最小シグナル減少は、９９％信頼区間に基づいて計算した。
ＥＣＬブリッジングアッセイでポジティブであり、薬物置換セットアップアッセイでポジティブと確認したサンプルを、アフィニティークロマトグラフィーを使用してポリクローナル抗体を作製するための材料として選択した。
Figure 0006869923
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ＩＳＶで処置されていない個体に由来するさらなる血清サンプル３個も上記ＥＣＬブリッジングアッセイを使用して評価し、薬物置換セットアップアッセイを使用して確認した。
２個の血清サンプルをＥＣＬブリッジングアッセイでポジティブとして明確にスコア化した：ＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３及びＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ２０（表ＩＩＩ）。ポジティブとスクリーニングした２個のサンプルを薬物置換セットアップでさらに分析して、ポジティブスクリーニング結果の特異性を確認した。
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Ｂ．精製ポリクローナルＩｇＧ画分の作製。
ポリクローナルＩｇＧは、製造業者の説明書に従ってProtein G HP Spin Trap Columns (GE Healthcare)を使用して、サンプルＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３及びＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ２０（上記を参照のこと）から精製した。手短に言えば、遠心分離（１００ｘｇで３０秒間）によってカラムから保存液を除去した後、結合緩衝液（２０mMリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０）を追加することによってカラムを平衡化した。遠心分離後、所望のポリクローナルを含有する溶液を追加し（６００μl中に最大１mg）、穏やかに混合しながらカラムを４分間インキュベーションした。次いで、カラムを遠心分離し、結合緩衝液（６００μl）を連続して追加することによって２回洗浄し、遠心分離した。４００μlの溶出液（０，１Ｍグリシン−ＨＣＬ、ｐＨ２．７）を追加し、反転させて混合した後、３０μlの中和緩衝液（１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ９．０）中で遠心分離することによって抗体を溶出した。
このようにして得られたＩｇＧ画分がＩＳＶへの非特異的結合に関与したことを確認するために、精製ＩｇＧ抗体を上記ＥＣＬブリッジングアッセイで分析し、上記Ａ）で使用した薬物置換セットアップアッセイを使用して確認した。両サンプル（ＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３及びＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ２０）において、精製ＩｇＧ抗体は非特異的結合に関与して、アッセイにおいてポジティブシグナルをもたらすことを確認した（表ＩＩＩ）。これにより、精製ポリクローナルＩｇＧが「分析抗体」として使用できることが確認されたので、実施例３及び実施例５（のアッセイ）において「分析抗体」として使用した。
Ｃ．その他のＩＳＶへの非特異的結合。
観察されたタンパク質干渉が１個のＩＳＶに特異的であり、並びに／又はＩＳＶ上の特定の領域、エピトープ又は抗原決定基に及び／若しくは野生型ＩＳＶに対して行ったある種の突然変異（例えば、１個以上のヒト化突然変異）に特異的であるかを決定するために、血漿サンプルＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３、ＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ２０及びＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ１を使用して、ＥＣＬブリッジングアッセイ及び薬物置換セットアップアッセイ（両方とも上記Ａ）に記載されているように、配列番号１をスルホタグ化ＩＳＶとして使用する）を繰り返した。これらの血漿サンプルは、上記Ｂ）で単離したポリクローナル「分析」抗体を含有するので、これは、ポリクローナル分析抗体の特異性、選択性及びエピトープ認識についての情報も提供する。
８個のＩＳＶを試験したところ（それぞれ配列番号２３〜３０−上記表Ａを参照のこと）、このうちの１個は野生型ＶＨＨ（配列番号２３）であり、その他の７個のＩＳＶは野生型配列のヒト化型であり、異なるヒト化置換を有していた。２個のＩＳＶ（配列番号２９及び３０）はまた、追加のアミノ酸残基をＣ末端に含有していた（それぞれ１個及び３個の追加のアラニン残基）。
データを表ＩＶに示す。あらゆる説明又は仮説に限定されないが、Ｃ末端領域（本明細書において定義される）に対する変異は、使用した血漿サンプルがタンパク質干渉を生じさせ得る程度に明らかに強く影響を与えることができることが分かる。例えば、Ｃ末端への１個又は３個のアミノ酸残基の付加は、タンパク質干渉が生じる傾向を強く減少させることができることが分かる（例えば、配列番号２８（Ｃ末端にアミノ酸残基が付加されていない対応するヒト化変異体）では、サンプルＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３を用いたＥＣＬＵアッセイにおける減少は９０％であるのと比較して、配列番号２９及び３０では、減少はわずかに１８％及び１３％である）。同様に、野生型配列の１４位へのプロリン残基の導入も、使用した血漿サンプルがタンパク質干渉を生じさせ得る程度に明らかに強く影響を与えることができる（例えば、配列番号２４（置換Ａ１４Ｐを有する野生型配列）ではサンプルＩＨＵＳ＃Ｂ０９０３２３１１Ａ３を用いたＥＣＬＵアッセイにおける減少は９１％であるのと比較して、配列番号２３の野生型配列では、減少はわずかに２０％である）。Ｋ８３Ｒ及びＱ１０８Ｌ（これらもＣ末端領域近くの置換である）も、タンパク質干渉を生じさせる傾向をいくらか増加させるがＡ１４Ｐ置換ほどではなく、置換Ａ１４Ｐ＋Ｋ８３Ｒ＋Ｑ１０８Ｌを合わせた全体の効果は、１個以上のアミノ酸残基をＣ末端に付加することによって無効化できる（配列番号２９及び３０のデータをその他のヒト化変異体のデータと再度比較）。
このデータに基づいて、ポリクローナル分析抗体は明らかに、ＩＳＶのＣ末端領域（本明細書において定義される）を一般に認識したと結論付けた。図２から分かるように、１４位（そしてそれよりも弱い程度だが、８３位及び１０８位）はまた、ＩＳＶのＣ末端領域の一部を形成する（ＩＳＶの３次元構造を考慮する場合）。
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実施例２：分析抗体のアフィニティー精製
本実施例では、ＩＳＶのＣ末端を認識でき、及び／又はＩＳＶのＣ末端に結合できる分析抗体を、ヒト被験体に由来する生体液から単離するのに使用できる２つの方法を説明する。実施例１に記載されている試験のＡＤＡアッセイにおいてポジティブシグナルを誘導したことを特徴とする４個の異なる血清サンプルから、抗体を単離する。
血清サンプルから出発して、これらの各プロトコールにより、本明細書において記載される方法において分析抗体として使用できる干渉因子の精製調製物が提供される。これらの方法は、より一般には、その他の目的のために干渉因子を精製するのにも使用できる（例えば、モノクローナル２１−４によるＩＳＶ又はＩＳＶ構築物への結合は、干渉因子による同じＩＳＶ又はＩＳＶ構築物への結合を予測し、それにより、前記ＩＳＶ又はＩＳＶ構築物がＡＤＡアッセイにおいて非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を予測することを示すために、以下のプロトコールを使用して精製した干渉因子を実施例８でも実験的に使用した）。
実施例２Ａ：プロテインＡ及びアフィニティークロマトグラフィーを使用する精製
最初の工程では、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して、血清サンプルからＩｇＧ抗体画分を濃縮した。この濃縮に使用した通常のカラムは、HiTrap MabselectSure及びMabSelectXtra (GE Healthcare); PorosMabCapture A (Applied Biosystems)を含んでいた。血清サンプルからのＩｇＧ抗体の精製は、すべての実験において自動で同様に実施した。クロマトグラフィーのランはAKTA purifier systems (GE Healthcare)で実施し、UNICORN protein purification software (GE Healthcare)を使用してリアルタイムでログインした。簡潔に言えば、血清サンプルをＤ−ＰＢＳ（Dulbeccoリン酸緩衝生理食塩水）で１：１希釈し、０．２２μmのろ過をしてから、０．５mL／分の一定流量でカラムにアップロードした。カラム容量の５倍超のＤ−ＰＢＳを０．５mL／分の流量で使用してカラムを洗浄し、非特異的結合成分を除去した。１００mMグリシン緩衝液（ｐＨ２．６）及び０．５mL／分の流量を使用して、酸性溶出によってＩｇＧ画分を溶出した。溶出後、１．５Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．８）を使用して、この画分を中性にした。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行って、ＩｇＧ抗体が溶出液中に単離されたことを確認した。
２番目の工程では、４個の異なる血清に由来するプロテインＡ精製ＩｇＧ画分をＩＳＶ結合アフィニティーカラムにアプライすることによって、干渉ＩｇＧをさらに濃縮した。より具体的には、配列番号１の配列のＩＳＶを含有するカラムに結合させることによって、干渉ＩｇＧをさらに濃縮した。これのために、製造業者の手順に従ったＣＮＢｒ（臭化シアン）−カップリング方法を使用して、ＩＳＶをSepharose 4 fast flow (GE Healthcare)に共有結合させた。アフィニティー精製は、すべての実験において自動で同様に実施した。クロマトグラフィーのランはAKTA purifier systemsで実施し、UNICORNでログインした。簡潔に言えば、ＩｇＧ濃縮サンプル（最大１０mLのローディング容量）を０．５mL／分の一定流量でカラムにアップロードした。カラム容量の５倍超のＤ−ＰＢＳを０．５mL／分の流量で使用してカラムを洗浄し、非特異的結合成分を除去した。１００mMグリシン緩衝液（ｐＨ２．６）及び０．５mL／分の流量を使用して、酸性溶出によってＩＳＶ結合成分を溶出した。溶出後、１．５Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．８）を使用して、この画分を中性にした。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用してこの画分を分析し、ＩｇＧ抗体が溶出液中に単離されたことを確認した（データは示さない）。
これらの画分をプールし、さらなる分析、例えば実施例３に記載されている分析に使用した。
実施例２Ｂ：CaptureSelect（商標）クロマトグラフィーを使用する精製。
あるいは、干渉因子を血漿から回収し、市販のＩｇＡ結合親和性樹脂CaptureSelect hIgA（商標）（BAC BV）（これは、ラクダに由来する重鎖単独可変ドメイン（ＶＨＨ）に基づくものである）を使用して精製した。続いて、干渉ＩｇＧと一緒にＩｇＡを含有する回収した「ＩｇＡ画分」をプロテインＡカラムにロードして、ＩｇＡ画分を除去した。一般的なＩｇＧ精製条件（ランニング緩衝液：ＰＢＳ；溶出緩衝液：１００mMグリシン（ｐＨ＝２．７）；溶出後の中性化は１Ｍ Ｔｒｉｓによる）に従って、プロテインＡカラムを処理した。干渉因子をプロテインＡ（Prot A）溶出液から収率＞９５％で回収した。
この方法の変法では、別のCaptureSelect親和性樹脂（ＶＨＨに基づく市販の親和性樹脂であり、抗体関連タンパク質をターゲティングしないCaptureSelect Alpha-1抗トリプシン樹脂）を使用した。この樹脂は高い干渉因子結合効果をもたらし、２段階の選択的溶出を可能にした：２．０Ｍ ＭｇＣｌ２を使用して中性ｐＨ溶出により抗トリプシン処理した後に、酸性段階（プロテインＡ／Ｇの溶出条件と同様に０．１Ｍグリシン（ｐＨ３．０）；１．５Ｍ Ｔｒｉｓを使用して中性化）により干渉因子を溶出する。この１段階精製により、高干渉血漿１mLあたり最大１５μgの干渉ＩｇＧ１が得られたが、これは存在する全ＩｇＧの約０．３％である。場合により、中性にした干渉画分を脱塩し、Ｄ−ＰＢＳで平衡化したサイズ排除カラムによりさらに精製できる。
実施例３：様々なＩＳＶ置換が、ＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせる傾向に与える影響
上記説明において述べたように、本発明は、所定のＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせる傾向を有するか否かを評価することを可能にするある種のアッセイ及び技術を利用可能にする。これらは、実施例１で使用したＥＣＬブリッジングアッセイ及び薬物置換セットアップアッセイ、並びにこの実施例３に記載されているBIACOREアッセイ、並びに以下のさらなる実施例に記載されているブリッジング／競合ＡＤＡアッセイを含む。
また、上記説明において述べたように、これらのアッセイは、特定の変異（例えば、アミノ酸の欠失、置換又は付加）が、所定のＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせる傾向に影響を与える（好ましくは減少させる）ことができるかを決定するのにも使用できる。これらの変異のいくつかは、本明細書における開示、並びに実施例１及びこの実施例３に示されている実験データに基づいて当業者には明らかであり、又は明らかになる。
実施例１で作成したデータによって既に示したように、ＩＳＶのＣ末端領域（本明細書において定義される）内の又はその近くのある種の突然変異は、タンパク質干渉を生じさせる傾向に（強く）影響を与えることができると思われる。例えば、Ｃ末端への数個のアミノ酸残基（例えば、１個又は３個のアラニン残基）の付加は、ＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせる傾向を強く減少させると思われ、タンパク質干渉を生じさせる傾向を増加させると思われる（例えば、Ｃ末端領域内の又はその近くの）その他の置換（例えば、置換Ａ１４Ｐ）の存在を無効化することさえできると思われる。
この実施例３では、その他の置換の効果、及び追加のアミノ酸をＣ末端に付加する効果の両方について、実施例２で作製した分析ポリクローナル抗体を使用して、異なる置換を有する関連ＩＳＶを比較することによって調査した。Biacore（商標）T100 biosensor(GE Healthcare)を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、調査した各ＩＳＶと分析ポリクローナルとの間の相互作用の動態を測定することによって、分析を行った。この実施例３で試験したＩＳＶは、配列番号３〜２２のＩＳＶであった（例えば、上記表Ａ及び以下の表Ｖを参照のこと）。
通常の実験で、ポリクローナル抗体溶液を１０mM ＮａＯＡｃ（ｐＨ５．０）中、１０μg/mlで調製した。次いで、製造業者の手順に従ってＥＤＣ／ＮＨＳ法（ＥＤＣ＝Ｎ−エチル−Ｎ’−［３−ジエチルアミノ−プロピル］−カルボジイミド；ＮＨＳ＝Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）によるアミンカップリングを使用して、このポリクローナル抗体をCM5センサーチップ上に固定化した。固定化した量は、約２７００反応単位（RU）を示した。次いで、一定濃度５００nMのＩＳＶを１２０秒間にわたって４５μl／分の流量で表面に注入した。有効な再生緩衝液を特定できなかったので、解離時間を２４００秒に延長した。ブランクのフローセルにＩＳＶを注入することによって得られたシグナルを、ポリクローナル抗体が結合したフローセルにＩＳＶを注入することによって得られたシグナルから引いた。ブランクのフローセルは、タンパク質を追加しない以外はポリクローナル抗体のフローセルと同様の方法で活性化／非活性化した。また、ブランク（ＨＢＳ−ＥＰ＋ランニングバッファー；ＨＢＳ＝Ｈｅｐｅｓ緩衝生理食塩水：GE Healthcare）を差し引いて、考えられるベースライン変動を修正した。
アミノ酸残基をＣ末端に付加する効果を調べるために、実施例２に記載されているように作製した分析ポリクローナル抗体を使用して、異なる付加を有するＩＳＶの結合を比較することによって、１個又は２個のアラニン及び１個、２個又は３個のグリシンを付加する影響を調査した。この目的のために作製及び試験したＩＳＶは、ＮＢ３．４〜３．９（配列番号５〜１０）であった。
得られたデータ種の代表例として、図３は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４〜３．９の結合を示す。得られた結果を表Ｖに要約する。
Figure 0006869923
Ｃ末端領域内の（その他の）置換の効果を調べるために、上記と同じ分析ポリクローナル抗体を使用して、３個の置換を含有する関連ＩＳＶを比較することによって、異なる置換の影響を調査した。分析は、上記のように行った。
試験した前記置換を含有するＩＳＶは、ＮＢ３．１、３．２及び３．４（配列番号３、４及び５）；ＮＢ３．１０〜３．１５（配列番号１１〜１６）であり、これらをＮＢ３．４；ＮＢ４．１及び４．２（配列番号１７及び１８）並びにＮＢ６．１、６．２、６．４及び６．５（配列番号１９〜２２）と比較した。
得られたデータ種の代表例として：
− 図４は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４、３．１１、３．１２及び３．１３の結合を示す；
− 図５は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．４、３．１４及び３．１５の結合を示す；
− 図６は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ３．１、３．２及び３．４の結合を示す；
− 図７は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ４．１及び４．２の結合を示す；
− 図８は、固定化ポリクローナル抗体へのＮＢ６．１、６．２、６．４及び６．５の結合を示す。
得られた結果を表ＶＩ、表ＶＩＩ及び表ＶＩＩＩに要約する。
Figure 0006869923
Figure 0006869923
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先と同様にあらゆる特定の仮説又は説明に限定されないが、上に示したデータは、ＩＳＶのＣ末端領域（本明細書において定義される）に対する（種々の）置換が、タンパク質干渉を生じさせる傾向を変化／改善できることを示している。
実施例４：図１のＡＤＡアッセイを実施するための代表的なプロトコール。
本実施例では、図１に概略的に示されている競合／ブリッジングＡＤＡアッセイを実施するために使用できる代表的だが非限定的ないくつかの条件を示す：
− 図１ＡのＡＤＡアッセイ（溶液中）：サンプル１００％マトリックス、３０分間（３０’）、３７℃、酸処理（１０マトリックスで酢酸を使用）、５分間（５’）、室温（ＲＴ）、プレインキュベーション／酸中和
サンプル：ＩＳＶ−スルホ（：Ｔｒｉｓ）１：１：１（１：０，９：０，９：０，１）、１時間、室温（ＲＴ）；プレート上で１時間、室温（ＲＴ）；洗浄３回、Readbuffer 4X
− 図１ＢのＡＤＡアッセイ（溶液中）：サンプル２０％マトリックス、３０分間（３０’）、３７℃、プレインキュベーション
サンプル：ＩＳＶ−−スルホ１：１：１、１時間、室温（ＲＴ）、プレート上で１時間、室温（ＲＴ）、洗浄３回、Readbuffer 2x
− 図１Ｃの連続ＡＤＡアッセイ：捕捉ＩＳＶ−ビオチン化（Ｂｉｏ）、１時間、室温（ＲＴ）、洗浄３回、サンプル２０％マトリックス、１５分間（１５’）、室温（ＲＴ）、プレート上で：２時間、室温（ＲＴ）、洗浄３回、検出ＡＬＸ−０１４１−スルホ、１時間、室温（ＲＴ）、洗浄３回、Readbuffer 4X
実施例５：分析抗体を使用して、非特異的タンパク質干渉に対するＩＳＶの感度を予測する。
本実施例では、非特異的タンパク質干渉に対するＩＳＶの感度を予測するのに使用できる分析抗体を使用するブリッジング／競合ＡＤＡアッセイを説明する。
試験するべきＩＳＶを１０μg/mlの濃度に希釈し、４００ng/mlの分析抗体と一緒にインキュベーションし、実施例２に従って精製し、９６ウェルポリプロピレンプレート中、３７℃、６００rpmでインキュベーションする。次いで、サンプル（５０μL）を、２μg/mlのビオチン化ＩＳＶ及び２μg/mlのスルホタグ化ＩＳＶの１：１混合液（１００μL）で１／３希釈し、室温（ＲＴ）、６００RPMで１時間インキュベーションする。MSD MA（登録商標）９６ウェル標準ストレプトアビジンプレートを１５０μL／ウェルのSuperblock（登録商標）T20を用いて室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングし、次いで、ＰＢＳ／０．０５％Tween20（＝洗浄緩衝液）で３回洗浄する。サンプル／１：１混合液（ビオチン化ＩＳＶ及びスルホタグ化ＩＳＶ）（５０．０μL）をポリプロピレンプレートからMSDプレートに移し、室温（ＲＴ）、６００rpmで１時間インキュベーションする。プレートを３回洗浄してから2 x Read Buffer (MSD)（１５０μL／ウェル）を追加し、MSDの機器（Sector Imager 2400 reader）でＥＣＬ単位（ＥＣＬＵ）を読む。
このアッセイを使用して、配列番号２３〜３０のＩＳＶを試験及び比較した。データを表ＩＸに示す。これらのデータは、本実施例で説明したアッセイが、ＩＳＶがタンパク質干渉を生じさせる傾向を予測するのに使用できることを示すだけではなく、作成したデータは、Ｃ末端領域内の置換の効果についての先の実施例からの知見も裏付けている。見て分かるように、完全ヒト化ＩＳＶのＣ末端への３個の（そしてそれよりも弱い程度だが、１個の）アラニン残基の付加は、分析抗体の結合と競合する能力を無効化した。野生型ＩＳＶ変異体の１４位のアラニンからプロリンへの突然変異は、このアッセイにおける競合体としての能力を明らかに増大させた（＝ＩＳＶ変異体をより非特異的タンパク質干渉の傾向にする）のに対して、８３位及び１０８位の突然変異は、非特異的タンパク質干渉に対するＩＳＶの感度に明らかな影響を与えなかった。
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実施例６：抗ＯＸ４０ＬナノボディのＣ末端へのアミノ酸付加がそのＯＸ４０Ｌ阻害効力に与える影響。
本実施例では、Ｃ末端の伸長がナノボディの活性又は阻害効力に影響を与えないことを実証する。
三価で二重特異性の配列最適化抗ＯＸ４０ＬナノボディＮｂ３．１６（配列番号３１）のｉｎ ｖｉｔｒｏ効力を、１個の追加のＡｌａをそのＣ末端に含有する対応するナノボディＮｂ３．１７（配列番号３２）の効力と比較した。
最初のアッセイ（Ｔ細胞活性化アッセイ）は、以下のように実施した。Ficoll Paque Plus reagent (GE Healthcare)を使用して、健常ドナーに由来するバフィーコート（Red Cross, Ghent, Belgium）からＰＢＭＣを単離し、ＲＰＭＩ１６４０完全培地（ＲＰＭＩ１６４０＋GlutaMAX＋２５mM ＨＥＰＥＳ＋１０％ウシ胎仔血清＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン；Invitrogen）を使用して洗浄した。ＰＢＭＣ（細胞１ｘ１０５個／ウェル）をフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−Ｌ；最終濃度０．６μg/ml）で刺激してから、１ｘ１０４個のｈＯＸ４０Ｌ発現ＣＨＯ細胞（γシンチレータを用いて３０００RADで放射線照射したもの；UZ Gent, Belgium）及び抗ＯＸ４０ＬナノボディのＲＰＭＩ１６４０完全培地による希釈系列に添加し、ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２２時間インキュベーションした。ＰＢＭＣによるＩＬ２の産生は、ELISAで測定した。Maxisorpプレートのウェルは、抗ヒトＩＬ２モノクローナル抗体（BD Biosciences）を用いて４℃で一晩コーティングした。コーティングしたウェルを洗浄及びブロッキングした後、細胞上清の１／２希釈物を追加した。標準として、リコンビナントヒトＩＬ２（BD Biosciences）の１／２希釈系列（２０００ｐg/mlから開始）を含めた。ビオチン化抗ヒトＩＬ２モノクローナル抗体（BD Biosciences）及びＨＲＰ標識ストレプトアビジン（Thermo Scientific）及びesTMB（SDT Reagents）を使用して、検出を行った。１Ｎ ＨＣｌを用いて反応を停止させ、４５０nmでＯＤを測定した。予想通り、三価で二重特異性の配列最適化ナノボディＮｂ３．１７の効力（ＩＣ５０＝０．１３nM、９５％信頼区間（ＣＩ）＝０．０９８〜０．１７nM）は、Ｎｂ３．１６の効力（ＩＣ５０＝０．１０nM、９５％信頼区間（ＣＩ）＝０．０７１〜０．１５nM）と同程度であった。
２番目のELISA競合アッセイでは、ナノボディの希釈系列（１．５μM〜０．０８３pM）を、ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ＋０．０１％Tween-20中で１００ng/mlのヒトＯＸ４０／Ｆｃ（R&D Systems）及び１０ng/mlのビオチン化ヒトＯＸ４０Ｌ（R&D Systems；実施例１に記載されているようにｉｎ−ｈｏｕｓｅでビオチン化）と一緒に室温で一晩プレインキュベーションした。次に、１０ｕg/mlの抗ヒトＦｃナノボディ（ｉｎ−ｈｏｕｓｅで作製）でコーティングし、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％Tween-20でブロッキングしたMaxisorpプレート上で、サンプルをインキュベーションした。ＨＲＰ標識ストレプトアビジン（Thermo Scientific）及びsTMB（SDT Reagents）を使用して、結合したヒトＯＸ４０／Ｆｃを検出した。１Ｎ ＨＣｌを用いて反応を停止させ、４５０nmでＯＤを測定した。細胞アッセイと一致して、三価で二重特異性の配列最適化ナノボディＮｂ３．１７の効力（ＩＣ５０＝０．１７８nM、９５％信頼区間（ＣＩ）＝０．１５２〜０．２００nM）は、Ｎｂ３．１６の効力（ＩＣ５０＝０．１７９nM、９５％信頼区間（ＣＩ）＝０．１４９〜０．２１５nM）と同程度であった。
実施例７：モノクローナル抗体２１−４−３の作製。
２つの異なるマウス系統群（ＢＡＬＢ／ｃ及びＮＭＲＩ−各マウス３匹）を、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物（等容量の抗原とフロイント完全アジュバント又はフロイント不完全アジュバンとの油中水エマルション）を用いて、適切な抗血清力価が得られるまで追加免疫しながら３９日間の期間にわたって腹腔内免疫した。
刺激したマウスをＣＯ２で窒息させた後、脾臓を無菌状態で取り出し、プールした脾臓の単一細胞懸濁液を調製した。脾臓細胞及びミエローマ細胞をＤＭＥＭで数回洗浄し、１mlの５０％（w/v）ＰＥＧ３３５０（脾臓細胞とＳＰ２／０との比は３：１）の存在下で融合させた。融合のために、German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ GmbH, Braunschweig)のミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ１４を使用した。この細胞株は、ＢＡＬＢ／ｃの脾臓細胞とミエローマ細胞株Ｐ３ｘ６３Ａｇ８との間のハイブリッドである。このようにして生産したハイブリドーマを、２０％ＦＣＳ及びアミノプテリンを含有するＣＧＭ（HAT培地）に再懸濁し、フィーダー細胞としての腹腔滲出細胞（peritoneal excudate cells）と一緒に１４０μl／ウェルのＣＧＭ（２０％ＦＣＳ）を含有する８個の９６ウェル組織培養平底プレート（Corning-Costar）に播種（１４０μl／ウェル）した。２−メルカプトエタノール、Ｌ−グルタミン、安定グルタミン、ＨＴ及び非必須アミノ酸（供給業者によって推奨されている濃度）並びに異なる濃度（１０％、１５％又は２０％）のＦＣＳを補充したＤＭＥＭを含有する完全成長培地（ＣＧＭ）中で、プレートを１０日間インキュベーションした。この期間中、細胞をＨＡＴ培地で２回フィードした。ハイブリドーマ細胞からの細胞培養上清は、通常、１μg/ml〜２０μg/mlの抗体を含有しており、これを結合ELISAで試験して、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物への結合を確認した。
ＩｇＧ産生陽性ウェルからの細胞を４８ウェルプレートのウェルに移し、（細胞の成長特性に応じて）２日間〜４日間培養した。非特異的結合物を排除するために、ＡＬＸ０８１及びヒト／カニクイザルＩｇＧに対する結合ELISAを行った。国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物に特異的な結合物を発現するハイブリドーマ細胞を、限定希釈を使用して２回クローニングした。融合及び再スクリーニングの後、ＡＬＸ−０８１に対する抗体を産生する７個の初代培養物を同定した。これらの初代培養物はすべて、ヒト又はカニクイザルのＩｇＧと交差反応しない抗体を産生した。初代培養物を再クローニングした（２回）。
クローン２１−４（２回目のクローニングの後に、ＡＬＸ−０８１に対する抗体を安定的に産生したクローンのうちの１個）に「ＡＢＨ００１５」という名称を与え、２０１２年６月４日にアクセッションナンバーＬＭＢＰ−９６８０−ＣＢでBelgian Coordinated Collections of Micro-organisms (BCCM) in Ghent, Belgiumに寄託した。ＡＢＨ００１５によって産生されたマウスモノクローナルは、２１−４−３と称した：２１−４−３のアイソタイプを決定したところ、ＩｇＧ１重鎖及びκ軽鎖であることが示され、これらを配列決定した（それぞれ配列番号３５及び３６を参照のこと）。２１−４−３は、国際公開第2006/122825号の配列番号９８のナノボディ構築物のＣ末端領域に結合することが示された（データは示さない）。
実施例８：ＩＳＶへの２１−４の結合は、ＩＳＶが非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を予測する
本実施例では、以下の実施例９と合わせて、ＩＳＶへのモノクローナル２１−４の結合は、所定のＩＳＶが（例えば、ＡＤＡアッセイにおいて）非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を有するかを（本実施例で示した確度内において）予測するのに使用できることを実証する。
この実施例８は、所定のＩＳＶに対するある種の改変候補（例えば、ＩＳＶのＣ末端への１個以上のアミノ酸残基の付加、及び／又はＩＳＶのＣ末端領域内の１個以上のアミノ酸置換の置換）が、前記ＩＳＶが非特異的タンパク質干渉を受ける傾向の減少をもたらすかを予測するのに２１−４を使用できることを特に示す。
手短に言えば、５３個の異なるナノボディ及びナノボディ構築物のセット（図９及び配列番号３８〜８９を参照のこと）を、モノクローナル２１−４−３による結合について試験した。２１−４及び精製干渉因子による結合の間に相関関係があるかを確認するために、同じナノボディ及びナノボディ構築物を、３人の異なるヒトドナー（本明細書において「ドナー８」、「ドナー１９」及び「ドナー３０」と称される）から得られた干渉因子の精製調製物による結合についても試験した。
２１−４のＩＳＶへの結合は、干渉因子の同じＩＳＶへの結合を（ここで示したデータによって提供される全体的な信頼度の範囲内において）予測するのに実際に使用できることが立証された。
これを実証するために、以下に示されている実験データによって詳述するように、（以下に示されているプロトコールの）Biacore T100を使用して、２１−４による５３個のナノボディ又はナノボディ構築物（図９に列挙される；配列番号３８〜８９を参照のこと）の結合を測定し、同じBiacore機器及び同じプロトコールを使用して測定した場合の参照ナノボディ又は構築物（同様に図９に列挙される）の結合と比較した。結果を以下の表Ｘに示す。
Figure 0006869923
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試験した５３個の各ナノボディ又はナノボディ構築物について、参照と比較して、試験したナノボディ又はナノボディ構築物が１個以上の追加のアミノ酸残基（これらは、タンパク質干渉に対するこのような付加の効果を試験するために、特に前記干渉を減少させるために付加した）をＣ末端に有するように、及び／又は（例えば、参照と比較したヒト化の結果として）１個以上の突然変異をＣ末端領域内に有するように、参照を選択した。
結果は、所定のナノボディの結合（ＲＵ単位として測定）を参照の結合（同様にＲＵ単位で測定）と対比した減少率として表した−例えば、参照ナノボディの測定結合レベル（ＲＵ）が２７６であり、所定のナノボディの結合レベル（同様にＲＵ）が９である場合、結合レベルの減少は［９RU／２７６RU］ｘ１００％＝３％までのレベルになり、これは、参照（１００％）と比較して９７％の減少を意味する。
同様に、５３個の各ナノボディ又はナノボディ構築物への、３人の各ドナーに由来する精製干渉因子の結合を、同じBiacore機器を使用して測定し、同じ参照ナノボディ又は構築物への前記精製干渉因子の結合と比較した。結果は、同様に、所定のナノボディ又はナノボディ構築物への干渉因子の結合を参照と対比した減少率として表した。
参照と比較して１個以上のアミノ酸残基をＣ末端に付加したナノボディ又はナノボディ構築物については本質的にすべて、干渉因子の結合が劇的に減少したことが見出された。これは、ＩＳＶのＣ末端（ＶＴＶＳＳ）への１個以上のアミノ酸残基の付加が、ＡＤＡアッセイにおいて非特異的タンパク質干渉を減少させることができることを再度裏付けている。ほとんどの場合では、参照と比較してＣ末端領域内に置換を作るだけ（すなわち、１個以上のアミノ酸残基をＣ末端に付加しない）では、干渉因子の結合に対して同様の劇的な影響を与えないことが多いことも見出された。
次いで、データをさらに分析して、２１−４による結合が参照と比較して減少することは、精製干渉因子の３個の異なる各調製物による結合が参照と比較して減少することと何らかの点で相関しているかを決定した。このような相関関係が見出された。
例えば、試験した５４個のナノボディ又はナノボディ構築物のうちの３６個は、２１−４による結合について、それらの各参照配列と比較して７０％超の減少を示したことが見出された（これら３６個のほとんどは、１個以上の追加のアミノ酸残基をＣ末端に有し、いくつかの場合ではＣ末端領域内の置換と組み合わせて有する）。これら３６個のうちの３２個は、干渉因子による結合について、参照と比較して５０％超の減少も示した（そして多くの場合では、特に、付加された１個以上のアミノ酸残基をＣ末端に有するナノボディ又はナノボディ構築物については、減少は５０％よりもはるかに大きかった（例えば、７０％超又はさらに９０％超）。表Ｘに示されているデータを参照のこと）。これは、３６個の事例のうちの３２個（すなわち、８９％）では、２１−４による結合について、（参照＝１００％と比較して）７０％超の減少は、干渉因子による結合について、（同じ参照と比較して）５０％超の減少を予測することを実証している。明確にするために、各事例では、減少は、１００％−［試験したナノボディで達成された減少レベルについて以下の表に示されているパーセンテージ］として計算した。
同様に、試験した５３個のナノボディ又はナノボディ構築物のうちの３３個は、２１−４による結合について、それらの各参照配列と比較して９０％超の減少を示したことが見出された。（先と同様に、これら３３個のほとんどは、１個以上の追加のアミノ酸残基をＣ末端に有し、いくつかの場合ではＣ末端領域内の置換と組み合わせて有する）これら３３個のうちの３２個は、干渉因子による結合について、それらの各参照配列と比較して５０％超の減少も示した。これは、３３個の事例のうちの３２個（すなわち、９７％）では、２１−４による結合について、（参照と比較して）９０％超の減少は、干渉因子による結合について、（同じ参照と比較して）５０％超の減少を予測することを実証している。
（２１−４による結合についての７０％超の減少が証拠とされる）干渉因子の結合についてのこのような５０％超の減少は、このような干渉因子がもはや、問題のＩＳＶのＡＤＡアッセイに本質的に干渉しないことを意味することにも留意するべきである：ＡＤＡアッセイを使用して実験的に確認することにより、干渉因子による結合が４５％超減少する場合、干渉因子の存在がＡＤＡアッセイに与える有意な影響は観察できないことが示された。この点において、いくつかの場合で観察されるように、干渉因子による結合が５０％よりもはるかに大きい程度（例えば、７０％超又はさらに９０％超）に減少する場合には、なおさらそのような状況になることも当業者には明らかである（ここで示したデータを再度参照のこと）。
実際、２１−４による結合についての４５％超の減少は、干渉因子の結合についての４５％超の減少を示し、これは前述のように、干渉因子がもはやＡＤＡアッセイに干渉しないことを意味することが見出された。
また、２１−４による結合（の減少）と干渉因子による結合（の減少）との間の相関関係についてここで示したデータにより、本発明者らは、２１−４による結合の絶対値であって、それ未満では、ＩＳＶ又はＩＳＶ系構築物が、ＡＤＡアッセイに干渉し得る形で干渉因子による結合の影響を容易に受けないことを（この実施例８で示したデータによって提供される信頼性の範囲内において）予想できる絶対値を設定することができた。以下の実施例９に示されているように、この値は５００RUである（実施例９に示されているように決定及び計算される）。
モノクローナル２１−４は、上記実施例７で得られたハイブリドーマの培養培地から以下のように精製した：モノクローナル抗体２１−４−３を分泌するハイブリドーマ細胞を、１００mL又は５００mLの容量の無血清培地（CD Hybridoma, Gibcoに８mM Ｌ−グルタミン（Invitrogen）及び１×コレステロール（２５０×コレステロール脂質濃縮物、Gibco）を補充したもの）を含むスピナーフラスコ中で培養した。透明の上清をろ過し、マウスＩｇＧ１を弱めの流量２mL／分でプロテインＡカラム（HiTrap MabSelect SuRe, 5mL, GE Healthcare）上に捕捉した。結合した抗体を０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）で溶出し、溶出画分（５mL）を１mLの１Ｍ ＴＲＩＳ（ｐＨ９）で直接中性にした。抗体の純度は、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又は非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
ドナー８及びドナー１９に由来する干渉因子の精製調製物は、本質的には実施例２Ａに記載されているように、前記ドナーに由来する血清サンプルからアフィニティー精製によって得た。ドナー３０に由来する干渉因子は、本質的には実施例２Ｂに記載されているように、ドナー３０の血清サンプルから得た。
各ナノボディ又はナノボディ構築物への２１−４の結合を決定するために、実施例９に記載されているプロトコールを使用した。
各ナノボディ又はナノボディ構築物への、３人のドナーに由来する干渉因子の結合は、本質的には実施例３に記載されているようにBiacore T100を使用して、ドナー８、ドナー１９及びドナー３０のそれぞれに由来する干渉因子を直接固定化したCM5センサーチップを使用して決定した。
実施例９：（モノクローナル２１−４を使用して）ＩＳＶが非特異的タンパク質干渉を受ける傾向を有するかを予測するためのプロトコール。
結合測定は、CM5 T120416センサーチップを使用するBiacore T100を使用して実施した（ランニングバッファー ＨＢＳ−ＥＰ＋、２５℃）。直接固定化したmAｂ２１−４−３の表面は、効率的に再生できないことが見出されたので、固定化ウサギ抗マウスＩｇＧによって２１−４を捕捉した。使用した抗マウスＩｇＧは、すべてのＩｇＧサブクラス、ＩｇＡ及びＩｇＭと反応するポリクローナルウサギ抗マウスＩｇＧ抗体（GE Healthcare; Cat#BR-1008-38; Lot#10056316）であった。抗マウスＩｇＧの固定化は、活性化には７分間のＥＤＣ／ＮＨＳ注入及び非活性化には７分間の１ＭエタノールアミンＨＣｌ（ｐＨ８．５）注入を使用する手動のアミンカップリング（Biacore, amine coupling kit）を使用して実施した。結合条件を表ＸＩに列挙する。タンパク質の固定化レベル及び分子量（ＭＷ）に基づくと、固定化抗マウスＩｇＧに結合するｍＡｂ２１−４−３の理論Ｒｍａｘは、約１３０００RUであった（１個のｍＡｂ２１−４−３分子が１個の抗マウスＩｇＧ分子に結合している場合）。
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このように固定化した２１−４を使用する結合実験（Biacore T100）に使用した条件を表ＸＩＩに示す。抗マウスＩｇＧの表面は、ｍＡｂ２１−４−３の捕捉及びすべてのサンプルの注入後にうまく再生できた（各再生後のベースラインレベルがわずかに増加）。
Figure 0006869923
上記プロトコールを使用して、表Ｘに示されている２１−４の結合データを作成した。（ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドの分子量についての測定ＲＵ値を式（［測定ＲＵ］／［タンパク質の分子量（ＭＷ）］ｘ１０６に従って調整した後に）ＲＵの絶対値を検討したところ、表Ｘに記載されているナノボディ又はナノボディ構築物（これらは付加されたアラニン残基を有しており、２１−４及び干渉因子の両方への結合について＞９０％の減少を示した）は、一般に、３０RU〜４００RUのＲＵ値を示したことが見出された（対応する参照ナノボディ又はポリペプチド−図９に列挙されている−は、１０００超、通常は１５００超及び多くの場合には２０００超のＲＵ値を有する）。
これに基づいて、このアッセイにおける５００未満の（調整）ＲＵ値は、ＡＤＡアッセイに干渉し得る形で干渉因子によって（本質的には）結合されないＩＳＶ（又は、本明細書において記載される少なくとも１個のＩＳを含むタンパク質又はポリペプチド）を明確に示すと考えられた。
本出願全体を通して引用されたすべての参考資料（参考文献、発行特許、公開特許出願及び同時係属の特許出願を含む）の全内容は、特に本明細書において参照されている教示について、参照により本明細書に明確に組み込まれる。

Claims (31)

  1. ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶをそのＣ末端に含むタンパク質若しくはポリペプチドが、ＡＤＡアッセイなどの免疫アッセイにおいてタンパク質干渉を生じさせるか否かを予測するための方法であって、
    （ｉ）ヒト被験体から得られた抗体であって、アミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含む前記ＩＳＶのＣ末端を認識する能力及び／又は前記ＩＳＶのＣ末端に結合する能力に基づいて選択／単離された抗体に、前記ＩＳＶ又はタンパク質／ポリペプチドを接触させる工程；及び
    （ｉｉ）前記免疫アッセイにおいて、前記ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドが、前記抗体に結合するか否かを決定する工程
    を少なくとも含む免疫アッセイを実施することを含み、
    ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドが、工程（ｉｉ）において前記抗体に結合することが、ＩＳＶ、タンパク質又はポリペプチドが、前記タンパク質干渉を、生じさせることができるか又は、生じさせる高いリスク又は増加したリスクを有することを意味する、方法。
  2. ＩＳＶが、ＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ、ラクダ化ＶＨ又はＶＨドメインであるか若しくはＶＨドメインを含むその他のＩＳＶのいずれかである、請求項１に記載の方法。
  3. ＩＳＶがＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨである、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 抗体がポリクローナル抗体である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
  5. 抗体が、ヒト被験体から得られ、ポリクローナル抗体を得るための出発材料として適切である、生体サンプルから出発して得られたポリクローナル抗体であり、このポリクローナル抗体が、ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドを保持するアフィニティーマトリックスが使用され、及び／又はＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドがアフィニティー部分又は抗原として使用される、免疫アフィニティークロマトグラフィーの工程を少なくとも１つ含む方法によって得られ、場合により、前記サンプルからポリクローナル抗体を単離及び／又は精製するための１つ以上のさらなる工程とを含む方法によって得られる、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
  6. アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドであるか、又はアフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項５に記載の方法。
  7. アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、プロリン残基を１４位に有するＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドであるか；又は、アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、プロリン残基を１４位に有するＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドをそのＣ末端に有する、請求項５又は６に記載の方法。
  8. アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、配列最適化及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨ、ラクダ化ＶＨ、又はラクダ化ヒトＶＨであるか；又は、アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、配列最適化及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨ、ラクダ化ＶＨ、又はラクダ化ヒトＶＨである、ＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項５〜７のいずれかに記載の方法。
  9. アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、その対応する天然に存在するＶＨＨのヒト化及び／又は配列最適化の一環として導入されたプロリン残基を１４位に有する配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、又は配列最適化及び/又はヒト化ラクダ化ＶＨであるか；又は、アフィニティーマトリックス上に保持されており、及び／又はアフィニティー部分若しくは抗原として使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、その対応する天然に存在するＶＨＨのヒト化及び／又は配列最適化の一環として導入されたプロリン残基を１４位に有する配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、又は配列最適化及び/又はヒト化ラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項７又は８のいずれかに記載の方法。
  10. 抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
  11. 抗体が、ヒト被験体から得られ、モノクローナル抗体を得るための出発材料として適切である生体サンプルから出発して得られたモノクローナル抗体であり、ＩＳＶ、ＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、ＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、前記ＩＳＶ、ＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、ＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物に結合するモノクローナル抗体をスクリーニング及び選択するのに使用される少なくとも１つのスクリーニング又は選択工程と、場合により、前記サンプルからモノクローナル抗体を単離及び／又は精製するための１つ以上のさらなる工程とを含む方法によって得られる、請求項１〜３又は１０のいずれかに記載の方法。
  12. スクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているか、又はスクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しているＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項１１に記載の方法。
  13. スクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、プロリン残基を１４位に有するか、又は、スクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、プロリン残基を１４位に有するＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項１１又は１２に記載の方法。
  14. スクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、又は配列最適化及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨ、ラクダ化ＶＨ、又はラクダ化ヒトＶＨであるか；又は、スクリーニング若しくは選択工程において使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、ＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又は配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨであるラクダ化ＶＨ、又は配列最適化及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨ、ラクダ化ＶＨ又はラクダ化ヒトＶＨをそのＣ末端に有する、請求項１１、１２又は１３に記載の方法。
  15. スクリーニング又は選択工程において使用されるＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨが、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、その対応する天然に存在するＶＨＨのヒト化及び／又は配列最適化の一環として導入されたプロリン残基を１４位に有する配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、又は配列最適化ＶＨＨ及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨであるか；又は、スクリーニング又は選択工程において使用されるＩＳＶ系薬物又はＶＨＨ系、配列最適化ＶＨＨ系、ヒト化ＶＨＨ系又はラクダ化ＶＨ系薬物が、そのＣ末端においてアミノ酸配列ＶＴＶＳＳ（配列番号３３）で終了しており、その対応する天然に存在するＶＨＨのヒト化及び／又は配列最適化の一環として導入されたプロリン残基を１４位に有する配列最適化及び／又はヒト化ＶＨＨ、又は配列最適化及び／又はヒト化ラクダ化ＶＨをそのＣ末端に有する、請求項１３〜１４のいずれかに記載の方法。
  16. ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドが、免疫アッセイにおいてタンパク質干渉を生じさせるか、又は、タンパク質干渉を生じさせる高い傾向又は増加した傾向を有するかを予測する及び／又は、前記ＩＳＶ又は少なくとも１個のＩＳＶを含むタンパク質若しくはポリペプチドに、ヒトの血中又は血清中に存在する干渉因子が結合するか否かを予測するための、請求項１に記載の方法であって、
    （ｉ）アクセッションナンバーＬＭＢＰ−９６８０−ＣＢでBelgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM)に寄託したハイブリドーマ細胞株によって発現されるモノクローナル抗体２１−４に、前記ＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、又は前記ＩＳＶ系薬物、ＶＨＨ系薬物、配列最適化ＶＨＨ系薬物、ヒト化ＶＨＨ系薬物又はラクダ化ＶＨ系薬物を接触させる工程；及び
    （ｉｉ）前記免疫アッセイにおいて、前記ＩＳＶ又はＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨ、又はＩＳＶ系薬物、ＶＨＨ系薬物、配列最適化ＶＨＨ系薬物、ヒト化ＶＨＨ系薬物又はラクダ化ＶＨ系薬物に、モノクローナル抗体２１−４が結合するか否かを決定する工程
    を少なくとも含む免疫アッセイを実施することを含む、方法。
  17. ＩＳＶがＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨであるか、又はＶＨドメインであり若しくはＶＨドメインを含むその他のＩＳＶである、請求項１６に記載の方法。
  18. ＩＳＶがＶＨＨ、配列最適化ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨ又はラクダ化ＶＨである、請求項１６又は１７に記載の方法。
  19. 該モノクローナル抗体２１−４が、固定化ウサギ抗マウスＩｇＧを介して捕捉される、請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法。
  20. １〜１０個のアミノ酸残基をＩＳＶのＣ末端に付加することによって該ＩＳＶを改変する工程、及び、ＡＤＡなどの免疫アッセイによって、タンパク質干渉を生じさせる傾向が、そのＣ末端に配列ＶＴＶＳＳを有するＩＳＶと比べて実質的に減少していることを測定する工程を含む、方法。
  21. ＩＳＶのＣ末端に１、２、３、４、又は５個のアミノ酸残基を付加することを含む、請求項２０に記載の方法。
  22. 該アミノ酸残基が、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン又はイソロイシンから独立して選択される、請求項２０又は２１に記載の方法。
  23. 位置１１のセリン（Ｓ）又はバリン（Ｖ）、位置１４のアラニン（Ａ）、位置８３のリシン、位置８４のアラニン（Ａ）、位置１０８のロイシン（Ｌ）、位置１１０のグルタミン（Ｑ）、位置１１２のグリシン（Ｇ）、及び位置１１３のグリシン（Ｇ）の１以上から選択される１以上のアミノ酸置換を導入することをさらに含む、請求項２０〜２２のいずれかに記載の方法。
  24. ＩＳＶのＣ末端領域に１以上のアミノ酸置換を導入することを含む、請求項２３記載の方法。
  25. タンパク質干渉を生じさせる傾向の減少が、請求項１〜１９のいずれか記載の方法を用いて決定される、請求項２０〜２４のいずれかに記載の方法。
  26. １〜１０個のアミノ酸残基をＩＳＶのＣ末端に付加することによって該ＩＳＶを改変する工程、及び、ＡＤＡなどの免疫アッセイによって、タンパク質干渉を生じさせる傾向が、そのＣ末端に配列ＶＴＶＳＳを有するＩＳＶと比べて実質的に減少していることを測定する工程を含む方法におけるＣ末端伸長の使用。
  27. 該Ｃ末端伸長が、１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基を含む、請求項２６に記載の使用。
  28. 該アミノ酸残基が、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン又はイソロイシンから独立して選択される、請求項２６又は２７に記載の使用。
  29. 該Ｃ末端伸長が、式（Ｘ）ｎ
    （式中、
    ａ）ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；又は
    ｂ）ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ａｌａ；又は
    ｃ）ｎ＝１、２又は３、各Ｘ＝Ｇｌｙ；又は
    ｄ）ｎ＝２又は３、少なくとも１個のＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ；又は
    ｅ）ｎ＝２又は３、１個を除いてＸ＝Ａｌａ又はＧｌｙ）
    を有する、請求項２６〜２８のいずれかに記載の使用。
  30. 該Ｃ末端伸長が、式（Ｘ）ｎ
    （式中、
    ａ）Ｘ＝Ａｌａ、ｎ＝１、２又は３、；又は
    ｂ）Ｘ＝Ｇｌｙ、ｎ＝２又は３）、
    を有する、請求項２９に記載の使用。
  31. 該Ｃ末端伸長が、式（Ｘ）ｎ
    （式中、
    Ｘ＝Ａｌａ、ｎ＝１）
    を有する、請求項２９に記載の使用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2691717T3 (es) 2009-10-30 2018-11-28 Novartis Ag Bibliotecas universales del dominio de unión del lado inferior de tipo iii de la fibronectina de tipo III
EP2566892B1 (en) 2010-05-06 2017-12-20 Novartis AG Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein-related protein 6 (lrp6) antibodies
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
EP2621953B1 (en) 2010-09-30 2017-04-05 Ablynx N.V. Biological materials related to c-met
EP2723771B1 (en) 2011-06-23 2019-09-11 Ablynx NV Serum albumin binding proteins
RS55775B2 (sr) 2011-06-23 2022-10-31 Ablynx Nv Tehnike za predviđanje, otkrivanje i smanjenje nespecifične proteinske interferencije u testovima koji uključuju pojedinačne varijabilne domene imunoglobulina
SG10201805064SA (en) * 2011-06-23 2018-07-30 Ablynx Nv Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
PE20141522A1 (es) * 2011-08-17 2014-11-17 Glaxo Group Ltd Proteinas y peptidos modificados
WO2013073968A2 (en) * 2011-09-12 2013-05-23 Industrial Research Limited Agents for modulation of cell signalling
US9346884B2 (en) 2011-09-30 2016-05-24 Ablynx N.V. Biological materials related to c-Met
ES2666856T3 (es) 2011-11-04 2018-05-08 Novartis Ag Proteína 6 relacionada con lipoproteínas de baja densidad (LRP6) - constructos extensores de la vida media
US9950282B2 (en) 2012-03-15 2018-04-24 Flodesign Sonics, Inc. Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation
US10967298B2 (en) 2012-03-15 2021-04-06 Flodesign Sonics, Inc. Driver and control for variable impedence load
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
US9458450B2 (en) 2012-03-15 2016-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves
US9328174B2 (en) 2012-05-09 2016-05-03 Novartis Ag Chemokine receptor binding polypeptides
WO2014043509A2 (en) * 2012-09-13 2014-03-20 Novartis Ag Antigen binding molecule with terminal modifications
WO2015105955A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber
IL318433A (en) 2014-05-16 2025-03-01 Ablynx Nv Improved immunoglobulin variable complexes
EP4707303A2 (en) * 2014-05-16 2026-03-11 Ablynx NV Improved immunoglobulin variable domains
US11009511B2 (en) * 2014-05-16 2021-05-18 Ablynx N.V. Methods for detecting and/or measuring anti-drug antibodies, in particular treatment-emergent anti-drug antibodies
NL2013661B1 (en) 2014-10-21 2016-10-05 Ablynx Nv KV1.3 Binding immunoglobulins.
JP7001474B2 (ja) 2015-01-21 2022-01-19 インヒブルクス，インコーポレイティド 非免疫原性単一ドメイン抗体
CA3255406A1 (en) 2015-03-31 2025-07-03 Sorriso Pharmaceuticals, Inc. Tnf-alpha binding polypeptides
SG11201706840WA (en) 2015-03-31 2017-09-28 Vhsquared Ltd Peptide construct having a protease-cleavable linker
WO2016156468A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Vhsquared Limited Polypeptides
ES3029413T3 (en) 2015-04-02 2025-06-24 Ablynx Nv Bispecific cxcr4-cd-4 polypeptides with potent anti-hiv activity
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
US11021699B2 (en) 2015-04-29 2021-06-01 FioDesign Sonics, Inc. Separation using angled acoustic waves
LT3611192T (lt) 2015-05-13 2025-06-25 Ablynx N.V. T ląstelių rekrutingo polipeptidai tcr alfa/beta reaktyvumo pagrindu
CN114920848B (zh) 2015-05-13 2024-10-11 埃博灵克斯股份有限公司 基于cd3反应性的t细胞募集多肽
US11474085B2 (en) 2015-07-28 2022-10-18 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
US11459540B2 (en) 2015-07-28 2022-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
CN108350069B (zh) 2015-10-30 2021-11-12 埃博灵克斯股份有限公司 针对il-23的多肽
TWI746473B (zh) * 2015-11-02 2021-11-21 美商辛分子醫藥有限公司 針對細胞內抗原之單域抗體
EP3374395A1 (en) 2015-11-12 2018-09-19 Ablynx NV Improved p2x7 receptor binders and polypeptides comprising the same
NO2768984T3 (ja) 2015-11-12 2018-06-09
LT3374392T (lt) 2015-11-13 2022-01-25 Ablynx Nv Patobulinti serumo albuminą surišantys imunoglobulino kintami domenai
AU2016355569B2 (en) 2015-11-18 2020-01-02 Merck Sharp & Dohme Llc CTLA4 binders
CA3003777A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Pd1/ctla4 binders
IL300122A (en) 2015-11-18 2023-03-01 Merck Sharp ַ& Dohme Llc Substances that bind to PD1 and/or LAG3
AU2016357460B2 (en) * 2015-11-18 2023-07-27 Ablynx Nv Improved serum albumin binders
KR20180080337A (ko) 2015-11-27 2018-07-11 아블린쓰 엔.브이. Ｃｄ40ｌ을 억제하는 폴리펩티드
UA122079C2 (uk) 2015-12-04 2020-09-10 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Поліпептид, що специфічно зв'язується з lrp5 і lrp6
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
US11085035B2 (en) 2016-05-03 2021-08-10 Flodesign Sonics, Inc. Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis
AU2017281421B2 (en) * 2016-06-23 2024-07-25 Ablynx N.V. Improved pharmacokinetic assays for immunoglobulin single variable domains
US11098113B2 (en) 2016-09-15 2021-08-24 Vib Vzw Immunoglobulin single variable domains directed against macrophage migration inhibitory factor
EP3519438A1 (en) 2016-09-30 2019-08-07 VHsquared Limited Compositions
WO2018075830A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Flodesign Sonics, Inc. Affinity cell extraction by acoustics
BR112019010061A2 (pt) 2016-11-16 2019-08-13 Ablynx Nv polipeptídeos de recrutamento de células t capazes de se ligarem ao cd123 e tcr alfa/beta
RU2022101604A (ru) 2016-12-07 2022-03-29 Аблинкс Нв Улучшенные отдельные вариабельные домены иммуноглобулина, связывающиеся с сывороточным альбумином
JP7219220B2 (ja) 2017-01-17 2023-02-07 アブリンクス エン．ヴェー． 改善された血清アルブミン結合剤
IL267897B2 (en) 2017-01-17 2025-02-01 Ablynx Nv Improved serum albumin binders
US12480957B2 (en) 2017-03-31 2025-11-25 Ablynx N.V. Method of screening for anti-drug antibodies against immunoglobulin single variable domain-based drugs
EP3630816B1 (en) 2017-05-31 2024-03-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Polypeptides antagonizing wnt signaling in tumor cells
TW202417517A (zh) 2017-06-02 2024-05-01 德商麥克專利有限公司 與ｍｍｐ１３結合之免疫球蛋白
JP7249961B2 (ja) 2017-06-02 2023-03-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ａｄａｍｔｓ５、ｍｍｐ１３およびアグリカンに結合するポリペプチド
CN118894939A (zh) * 2017-06-02 2024-11-05 默克专利股份有限公司 结合adamts的免疫球蛋白
NZ759601A (en) 2017-06-02 2023-06-30 Merck Patent Gmbh Aggrecan binding immunoglobulins
CA3070253A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 Vib Vzw Serum albumin binding agents
JP6708797B2 (ja) 2017-08-23 2020-06-10 本田技研工業株式会社 鞍乗り型車両のエアバッグ装置
KR20200091400A (ko) 2017-10-31 2020-07-30 브이아이비 브이지더블유 신규한 항원-결합 키메라 단백질 및 이의 방법 및 용도
KR102439221B1 (ko) 2017-12-14 2022-09-01 프로디자인 소닉스, 인크. 음향 트랜스듀서 구동기 및 제어기
EP3569618A1 (en) 2018-05-19 2019-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Antagonizing cd73 antibody
TWI848953B (zh) 2018-06-09 2024-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 針對癌症治療之多特異性結合蛋白
AU2019301614B2 (en) 2018-07-10 2025-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for mitigating drug target interference in an anti-drug antibody (ADA) immunoassay
FR3088640A1 (fr) 2018-10-14 2020-05-22 Smart Diagnostix Pharma Nouveau polypeptide se liant specifiquement a la proteine p16
EP3962599A1 (en) 2019-04-30 2022-03-09 Vib Vzw Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator stabilizing agents
KR20220063148A (ko) 2019-06-21 2022-05-17 소리소 파마슈티컬스 인크. 조성물
US12559552B2 (en) 2019-06-21 2026-02-24 Sorriso Pharmaceuticals, Inc. IL-23 and TNF-alpha binding bi-specific heavy chain polypeptides
CA3144567A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Scott Crowe Polypeptides
TWI878355B (zh) 2019-10-02 2025-04-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 用於癌症治療之多重專一性結合蛋白
GB201914468D0 (en) 2019-10-07 2019-11-20 Crescendo Biologics Ltd Binding Molecules
US20220411495A1 (en) 2019-11-27 2022-12-29 Vib Vzw Positive allosteric modulators of the calcium-sensing receptor
KR20220111313A (ko) 2019-12-06 2022-08-09 아블린쓰 엔.브이. TNFα 및 OX40L을 표적으로 하는 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드
IL293561A (en) 2019-12-06 2022-08-01 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin with one variable domain targeting TNFa and IL-23
MX2022007035A (es) 2019-12-09 2022-06-23 Ablynx Nv Polipeptidos que comprenden dominios variables unicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp.
AR120698A1 (es) 2019-12-09 2022-03-09 Ablynx Nv Polipéptidos que comprenden dominios variables únicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp
US20240027467A1 (en) 2019-12-20 2024-01-25 Vib Vzw Nanobody Exchange Chromatography
WO2021156490A2 (en) 2020-02-06 2021-08-12 Vib Vzw Corona virus binders
KR20230012464A (ko) 2020-02-25 2023-01-26 브이아이비 브이지더블유 류신-풍부 반복 키나제 2 알로스테릭 조절제
WO2022003156A1 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Oncurious Nv Ccr8 non-blocking binders
AU2021350156A1 (en) 2020-09-25 2023-06-08 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting il-13 and ox40l
WO2022117569A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv A ccr8 antagonist antibody in combination with a lymphotoxin beta receptor agonist antibody in therapy against cancer
JP2024508207A (ja) 2020-12-02 2024-02-26 ブイアイビー ブイゼットダブリュ がんに対する組み合わせ治療におけるｌｔｂｒアゴニスト
PH12023500013A1 (en) 2020-12-04 2024-03-11 Tidal Therapeutics Inc Ionizable cationic lipids and lipi nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
CN116964090A (zh) 2020-12-14 2023-10-27 武田药品工业有限公司 条件性双特异性结合蛋白
EP4263602A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Ablynx N.V. Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting il-6 and tnf-alpha
IL303740A (en) 2020-12-18 2023-08-01 Sanofi Sa T cell recruiting polypeptides based on tcr alpha/beta reactivity
CA3205422A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting glypican-3 and t cell receptor
GB202020502D0 (en) 2020-12-23 2021-02-03 Vib Vzw Antibody composistion for treatment of corona virus infection
CN117794566A (zh) 2021-02-05 2024-03-29 Vib研究所 沙贝病毒结合剂
IL304929A (en) 2021-02-05 2023-10-01 Vib Vzw [Be/Be Sarbevirus binders
EP4294516A1 (en) 2021-02-19 2023-12-27 Vib Vzw Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders
CN113173978B (zh) * 2021-04-22 2024-03-01 温州医科大学 一种对hpv16e6蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用
EP4377352A2 (en) 2021-07-30 2024-06-05 Vib Vzw Cation-independent mannose-6-phosphate receptor binders for targeted protein degradation
US20250026842A1 (en) * 2021-11-29 2025-01-23 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Modified protein or polypeptide
EP4448783A1 (en) 2021-12-13 2024-10-23 Heraeus Medical GmbH Tests and methods for detecting bacterial infection
KR20240122867A (ko) 2021-12-17 2024-08-13 아블린쓰 TCRαβ, CD33, 및 CD123을 표적화하는 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드
WO2023135198A1 (en) 2022-01-12 2023-07-20 Vib Vzw Human ntcp binders for therapeutic use and liver-specific targeted delivery
AR128593A1 (es) 2022-02-23 2024-05-22 Takeda Pharmaceuticals Co Proteínas de unión condicionalmente biespecíficas
US20250235534A1 (en) 2022-04-13 2025-07-24 Vib Vzw An LTBR Agonist In Combination Therapy Against Cancer
CA3249283A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Vib Vzw BINDERS OF SARBECOVIRUS SPICULE S2 SUBUNITS
WO2023240156A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
AU2023290487A1 (en) 2022-06-14 2025-01-30 Ablynx Nv Immunoglobulin single variable domains targeting t cell receptor
US20240132624A1 (en) 2022-07-27 2024-04-25 Ablynx N.V. Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
EP4594348A1 (en) 2022-09-27 2025-08-06 Vib Vzw Antivirals against human parainfluenza virus
EP4605077A1 (en) 2022-10-18 2025-08-27 Confo Therapeutics N.V. Amino acid sequences directed against the melanocortin 4 receptor and polypeptides comprising the same for the treatment of mc4r-related diseases and disorders
EP4357778A1 (en) 2022-10-20 2024-04-24 Heraeus Medical GmbH Treatment of microbial infections diagnosed using the biomarker d-lactate
CN120380024A (zh) 2022-12-21 2025-07-25 建新公司 抗pd-1×4-1bb结合蛋白
AR131494A1 (es) 2022-12-23 2025-03-26 Ablynx Nv Vehículos de conjugación a base de proteína
JP2026503077A (ja) 2023-01-09 2026-01-27 オデッセイ セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗ｔｎｆｒ２抗原結合タンパク質及びその使用
KR20250133776A (ko) 2023-02-10 2025-09-08 아뮤닉스 파마슈티컬스, 인크. 전립선-특이적 막 항원(psma)을 표적화하는 조성물 및 이의 제조 방법 및 사용 방법
TW202448926A (zh) 2023-02-17 2024-12-16 比利時商艾伯霖克斯公司 結合新生兒fc受體之多肽
WO2024175787A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Vrije Universiteit Brussel Anti-inflammatory pannexin 1 channel inhibitors
TW202444757A (zh) 2023-03-14 2024-11-16 美商奧迪希治療公司 抗cd25抗原結合蛋白及其用途
AU2024243709A1 (en) 2023-04-03 2025-11-06 Katholieke Universiteit Leuven Blood-brain barrier crossing antibodies
KR20260008776A (ko) 2023-05-08 2026-01-16 사노피 면역글로불린 단일 가변 도메인의 글리코실화
EP4713364A1 (en) 2023-05-17 2026-03-25 Odyssey Therapeutics, Inc. Modified single-domain antibodies
EP4731770A1 (en) 2023-06-22 2026-04-29 Ablynx NV Chimeric proteins for modulating cytokine receptor activity
KR20260032566A (ko) 2023-06-29 2026-03-09 오디세이 테라퓨틱스, 인코포레이티드 항-trailr2 항원-결합 단백질 및 그의 용도
WO2025008537A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Ablynx Nv Improved fcrn antagonists for treatment of igg-related diseases and disorders
WO2025051767A1 (en) 2023-09-04 2025-03-13 Sanofi Polypeptides for use in the treatment of glypican-3-expressing tumours
TW202532432A (zh) 2023-09-22 2025-08-16 比利時商艾伯霖克斯公司 二及多價白蛋白結合劑
TW202530265A (zh) 2023-10-13 2025-08-01 美商奧迪希治療公司 抗cdh17抗原結合蛋白及其用途
TW202540169A (zh) 2023-11-08 2025-10-16 法商賽諾菲公司 基於ｃｄ２５的溶酶體降解物及其用途
WO2025109176A1 (en) 2023-11-22 2025-05-30 Exevir Bio Bv Optimized sarbecovirus spike s2 subunit binders and compositions comprising the same
WO2025114529A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 Ablynx Nv Multispecific antibodies recognising human serum albumin, tcr and a tumor antigen recognising moiety
WO2025125577A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 Vib Vzw Antibodies against influenza b virus
TW202543670A (zh) 2023-12-22 2025-11-16 比利時商艾伯霖克斯公司 用於核內投予之基於蛋白質的接合載劑
TW202542180A (zh) 2023-12-22 2025-11-01 比利時商艾伯霖克斯公司 用於位點特異性胺軛合的基於蛋白質的載體
WO2025174825A2 (en) 2024-02-12 2025-08-21 Aera Therapeutics, Inc. Delivery compositions
WO2025181155A1 (en) 2024-02-26 2025-09-04 Vib Vzw Human beta-glucocerebrosidase binders and uses thereof
WO2025217240A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-tnfr2 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2025219231A1 (en) 2024-04-15 2025-10-23 Vib Vzw Computer-implemented means and methods for the de novo design of antibodies targeting a specific epitope
WO2025255558A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-thymic stromal lymphopoietin (tslp) antigen-binding proteins and uses thereof
WO2025255435A2 (en) 2024-06-07 2025-12-11 Odyssey Therapeutics, Inc. Antigen-binding proteins against serum albumin and uses thereof
US20260007757A1 (en) 2024-06-18 2026-01-08 Ablynx Nv Antibody-recruiting molecules
WO2025265116A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Georgia State University Research Foundation, Inc. Nanobodies to henipavirus and uses thereof
WO2026006708A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-cd25 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2026006809A1 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Odyssey Therapeutics, Inc. Multispecific molecules binding tnfr2 and cd25 and uses thereof
WO2026008665A1 (en) 2024-07-01 2026-01-08 Vib Vzw Binders of the pd-1•pd-l1 complex and their use
WO2026024863A2 (en) 2024-07-24 2026-01-29 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Compositions targeting prostate-specific membrane antigen (psma) in combination with androgen receptor antagonists
WO2026030375A2 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles and methods of manufacture and use thereof
WO2026052756A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Ablynx Nv Her2 binding immunoglobulin single variable domains, constructs comprising the same and uses thereof
WO2026062214A1 (en) 2024-09-19 2026-03-26 Sanofi Formulations comprising lunsekimig
WO2026072557A2 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Genzyme Corporation Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
WO2026078159A1 (en) 2024-10-10 2026-04-16 Ablynx Nv Immune cell engagers and methods comprising the same
WO2026083296A1 (en) 2024-10-16 2026-04-23 Bright Peak Therapeutics Ag Trispecific compositions comprising il-18, vegf binding domains, and pd-1 binding domains
WO2026083295A1 (en) 2024-10-16 2026-04-23 Bright Peak Therapeutics Ag Trispecific compositions comprising il-2, vegf binding domains, and pd-1 binding domains

Family Cites Families (120)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1545106C3 (de) 1963-07-16 1979-05-31 Union Carbide Corp., New York, N.Y. (V.St.A.) Verfahren zur Herstellung von linearen Polyarylenpolyäthern
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
US6150584A (en) * 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
GB9016299D0 (en) * 1990-07-25 1990-09-12 Brien Caroline J O Binding substances
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5608039A (en) * 1990-10-12 1997-03-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Single chain B3 antibody fusion proteins and their uses
DK0488470T3 (da) 1990-11-26 1997-12-22 Akzo Nobel Nv Fremgangsmåde til fremstilling af antistoffer
DE69321823T2 (de) 1992-10-21 1999-06-02 Taito Co., Ltd., Tokio/Tokyo 2-amino-1, 3- propandiolverbindung und immunosuppressium
JPH1180026A (ja) 1997-09-02 1999-03-23 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd 新規免疫抑制剤、その使用方法およびその同定方法
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
ATE497171T1 (de) 1999-07-05 2011-02-15 Leuven K U Res & Dev Von willebrand-faktor-aktivitätsnachweis
US6541225B1 (en) 2000-01-26 2003-04-01 Raven Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for generating human monoclonal antibodies
US20020155574A1 (en) 2000-08-01 2002-10-24 Novozymes A/S Alpha-amylase mutants with altered properties
WO2002026829A1 (en) 2000-09-25 2002-04-04 Rega Stichting Vzw Method for the production of human antibodies, antibodies thus obtained and their use in therapy and diagnosis
ATE513854T1 (de) 2000-12-13 2011-07-15 Bac Ip B V Proteinraster aus variablen domänen der schweren immunoglobulinkette von kamelen
US20060002935A1 (en) 2002-06-28 2006-01-05 Domantis Limited Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor
US9321832B2 (en) 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
FR2846667B1 (fr) 2002-11-06 2004-12-31 Pasteur Institut Fragments variables d'anticorps de camelides a chaine unique diriges contre le peptide beta-amyloide 1-42 et leurs applications pour le diagnostic et le traitement des maladies neuroagregatives
WO2004041863A2 (en) 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against interferon- gamma and uses therefor
ES2374068T3 (es) 2002-12-03 2012-02-13 Ucb Pharma, S.A. Ensayo para identificar células productoras de anticuerpos.
EP1578801A2 (en) * 2002-12-27 2005-09-28 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
JP2006517789A (ja) 2003-01-10 2006-08-03 アブリンクス エン．ヴェー． 治療用ポリペプチド、その相同物、その断片、および血小板媒介凝集の調節での使用
WO2004065416A2 (en) * 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1623229A2 (en) 2003-05-15 2006-02-08 Cytos Biotechnology AG Selection of b cells with specificity of interest: method of preparation and use
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
KR20070118199A (ko) 2003-11-04 2007-12-13 도꾸리쯔교세이호징 가가꾸 기쥬쯔 신꼬 기꼬 고지혈증·고알부민혈증 모델 동물
CA2575402A1 (en) 2004-08-05 2006-02-09 Genentech, Inc. Humanized anti-cmet antagonists
MX2007006593A (es) 2004-12-02 2008-03-04 Domantis Ltd Anticuerpos de dominio simple anti-il 1r1 y sus usos terapeuticos.
AU2005325801A1 (en) 2005-01-31 2006-08-03 Ablynx N.V. Method for generating variable domain sequences of heavy chain antibodies
US8188223B2 (en) 2005-05-18 2012-05-29 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins
ES2694247T3 (es) * 2005-05-20 2018-12-19 Ablynx N.V. NanobodiesTM mejorados para el tratamiento de trastornos mediados por agregación
DE102005023617A1 (de) 2005-05-21 2006-11-23 Aspre Ag Verfahren zum Mischen von Farben in einem Display
WO2006129843A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Canon Kabushiki Kaisha Bispecific capturing molecule
US7875465B2 (en) 2005-05-31 2011-01-25 Canon Kabushiki Kaisha Target substance capturing molecule
JP2007008925A (ja) * 2005-05-31 2007-01-18 Canon Inc 標的物質捕捉分子
JP2009519011A (ja) 2005-12-01 2009-05-14 ドマンティス リミテッド インターロイキン１受容体１型に結合する非競合ドメイン抗体フォーマット
EA200801166A1 (ru) 2005-12-01 2008-12-30 Домантис Лимитед Форматы конкурентного доменного антитела, которые связываются с рецептором интерлейкина 1 первого типа
FR2894741B1 (fr) 2005-12-08 2009-12-04 Centre Nat Etd Spatiales Chaine de reception par satellite
US20100047171A1 (en) * 2006-01-24 2010-02-25 Roland Beckmann Fusion Proteins That Contain Natural Junctions
US8101727B2 (en) 2006-03-30 2012-01-24 Novartis Ag Compositions and methods of use for antibodies of c-Met
US7741273B2 (en) 2006-04-13 2010-06-22 Warsaw Orthopedic, Inc. Drug depot implant designs
EP2064244B1 (en) 2006-08-03 2019-06-05 MedImmune Limited ANTIBODIES DIRECTED TO alphaVbeta6 AND USES THEREOF
WO2008020079A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of deseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
AU2007293614A1 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
ATE536369T1 (de) 2006-10-11 2011-12-15 Ablynx Nv Im wesentlichen ph-wert-unabhängigerweise an serumproteine bindende aminosäuresequenzen, verbindungen, die diese enthalten, und deren verwendung
US20080267949A1 (en) 2006-12-05 2008-10-30 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins
WO2008073300A2 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Monoclonal antibodies against angptl3
AU2007331672A1 (en) 2006-12-15 2008-06-19 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
WO2008077945A2 (en) 2006-12-22 2008-07-03 Ablynx N.V. Anti-chemokine (ccl2, ccl3, ccl5, cxcl11, cxcl12) single-domain antibodies
EP2121757A2 (en) 2007-02-21 2009-11-25 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against vascular endothelial growth factor and polypeptides comprising the same for the treatment of conditions and diseases characterized by excessive and/or pathological angiogenesis or neovascularization
GB0706793D0 (en) 2007-04-05 2007-05-16 Evotec Ag Compounds
CA2687903C (en) 2007-05-24 2016-09-13 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against rank-l and polypeptides comprising the same for the treatment of bone diseases and disorders
EP2014681A1 (en) 2007-07-12 2009-01-14 Pierre Fabre Medicament Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
AR062123A1 (es) 2007-07-27 2008-10-15 Inst Nac De Tecnologia Agropec Dominio vhh monomerico derivado de anticuerpos de camelidos anti-vp6 dominio dimerico, metodo de inmunodeteccion de rotavirus, composiciones, metodos de prevencion y tratamiento de infecciones con rotavirus
WO2009032949A2 (en) * 2007-09-04 2009-03-12 The Regents Of The University Of California High affinity anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting and detection
WO2009042589A1 (en) * 2007-09-24 2009-04-02 Vanderbilt University Monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus and uses thereof
US8206966B2 (en) 2007-11-05 2012-06-26 Danisco Us Inc. Alpha-amylase variants with altered properties
EP2650311A3 (en) 2007-11-27 2014-06-04 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same
US8030454B2 (en) 2007-12-28 2011-10-04 Genentech, Inc. Anti-hedgehog antibodies
US8603474B2 (en) * 2008-01-29 2013-12-10 Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd. Membrane transporter NaPi2b (SCL34A1) epitope for antibody therapy, antibodies directed thereto, and target for cancer therapy
WO2009127691A1 (en) * 2008-04-17 2009-10-22 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum proteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
DE102008023620A1 (de) 2008-05-15 2009-11-19 Mettler-Toledo (Albstadt) Gmbh Funktionseinheit mit einer aufrufbaren Funktion und Verfahren zu deren Aufruf
EP2285833B1 (en) 2008-05-16 2014-12-17 Ablynx N.V. AMINO ACID SEQUENCES DIRECTED AGAINST CXCR4 AND OTHER GPCRs AND COMPOUNDS COMPRISING THE SAME
US7858729B2 (en) 2008-05-29 2010-12-28 Novomer, Inc. Methods of controlling molecular weight distribution of polymers and compositions thereof
LT2285408T (lt) 2008-06-05 2019-01-25 Ablynx N.V. Aminorūgščių sekos, nukreiptos prieš viruso apvalkalo baltymus, ir tokias sekas turintys polipeptidai, skirti virusinių ligų gydymui
EP2143735A1 (en) * 2008-07-10 2010-01-13 Institut Pasteur Variable domains of camelid heavy-chain antibodies directed against glial fibrillary acidic proteins
WO2010042815A2 (en) * 2008-10-09 2010-04-15 Duke University Vhh antibody fragments for use in the detection and treatment of cancer
US8372808B2 (en) 2008-10-31 2013-02-12 Wisconsin Alumni Research Foundation Suppression of glial fibrillary acidic protein
US10005830B2 (en) † 2009-03-05 2018-06-26 Ablynx N.V. Antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof
CN104127880A (zh) 2009-03-27 2014-11-05 葛兰素集团有限公司 药用融合体和缀合物
NZ595461A (en) 2009-04-10 2013-01-25 Ablynx Nv Improved amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of il-6r related diseases and disorders
US8450888B2 (en) 2009-04-20 2013-05-28 General Electric Company Integrated brushless starter/generator system
WO2010130832A2 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against dickkopf-1 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with bone loss and/or osteolytic lesions
WO2011003622A1 (en) * 2009-07-10 2011-01-13 Ablynx N.V. Method for the production of variable domains
US8306355B2 (en) 2009-07-13 2012-11-06 Sharp Laboratories Of America, Inc. Methods and systems for reducing compression artifacts
WO2011064382A1 (en) * 2009-11-30 2011-06-03 Ablynx N.V. Improved amino acid sequences directed against human respiratory syncytial virus (hrsv) and polypeptides comprising the same for the prevention and/or treatment of respiratory tract infections
EP3309176B1 (en) 2009-12-14 2025-10-01 Ablynx N.V. Immunoglobulin single variable domain antibodies against ox40l, constructs and their therapeutic use
CA2784498A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Sanofi Novel antagonist antibodies and their fab fragments against gpvi and uses thereof
KR101721187B1 (ko) 2009-12-23 2017-03-29 에스바테크 - 어 노바티스 컴파니 엘엘씨 면역원성의 감소 방법
NZ601117A (en) 2010-03-03 2014-06-27 Boehringer Ingelheim Int Biparatopic abeta binding polypeptides
PT3904391T (pt) 2010-03-10 2024-10-14 Genmab As Anticorpos monoclonais contra c-met
WO2011117423A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Ablynx N.V. Immunoglobulin single variable domains directed against cxcr7
WO2011135026A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Ablynx Nv Amino acid sequences of nanobodies directed against p19 subunit of the heterodimeric cytokine il-23
EP2571901B1 (en) 2010-05-20 2019-01-02 Ablynx N.V. Biological materials related to her3
EP2621953B1 (en) 2010-09-30 2017-04-05 Ablynx N.V. Biological materials related to c-met
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
WO2012093125A1 (en) * 2011-01-06 2012-07-12 Glaxo Group Limited Ligands that bind tgf-beta receptor ii
MX361242B (es) 2011-03-30 2018-11-30 Ablynx Nv Anticuerpos de dominio sencillo contra tnf-alfa y usos de los mismos.
WO2012130314A1 (en) † 2011-03-31 2012-10-04 Elara Pharmaceuticals Gmbh Composition comprising docetaxel
SG10201805064SA (en) 2011-06-23 2018-07-30 Ablynx Nv Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
EP2723771B1 (en) * 2011-06-23 2019-09-11 Ablynx NV Serum albumin binding proteins
US20150344568A1 (en) 2011-06-23 2015-12-03 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
JP5987057B2 (ja) 2011-07-27 2016-09-06 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｆｃドメインと融合した抗ｖｅｇｆ単一可変ドメイン
PE20141522A1 (es) 2011-08-17 2014-11-17 Glaxo Group Ltd Proteinas y peptidos modificados
US9346884B2 (en) 2011-09-30 2016-05-24 Ablynx N.V. Biological materials related to c-Met
US8614548B2 (en) 2012-01-19 2013-12-24 Sonoco Development Incorporated Electroluminescent display and method for production
US9328174B2 (en) 2012-05-09 2016-05-03 Novartis Ag Chemokine receptor binding polypeptides
WO2013177271A2 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Owens Corning Intellectual Capital, Llc Laminated foam product and methods for making laminated foam products
WO2014111550A1 (en) † 2013-01-17 2014-07-24 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Modified anti-serum albumin binding proteins
US11009511B2 (en) * 2014-05-16 2021-05-18 Ablynx N.V. Methods for detecting and/or measuring anti-drug antibodies, in particular treatment-emergent anti-drug antibodies
EP4707303A2 (en) 2014-05-16 2026-03-11 Ablynx NV Improved immunoglobulin variable domains
CA2963712A1 (en) 2014-10-21 2016-04-28 Ablynx Nv Treatment of il-6r related diseases
NO2768984T3 (ja) 2015-11-12 2018-06-09
LT3374392T (lt) 2015-11-13 2022-01-25 Ablynx Nv Patobulinti serumo albuminą surišantys imunoglobulino kintami domenai
AU2016357460B2 (en) 2015-11-18 2023-07-27 Ablynx Nv Improved serum albumin binders
CA3003777A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Pd1/ctla4 binders
AU2016355569B2 (en) 2015-11-18 2020-01-02 Merck Sharp & Dohme Llc CTLA4 binders
IL300122A (en) 2015-11-18 2023-03-01 Merck Sharp ַ& Dohme Llc Substances that bind to PD1 and/or LAG3
EP3408299A1 (en) 2016-01-26 2018-12-05 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-vwf d'd3 single-domain antibodies and polypeptides comprising thereof
RU2022101604A (ru) * 2016-12-07 2022-03-29 Аблинкс Нв Улучшенные отдельные вариабельные домены иммуноглобулина, связывающиеся с сывороточным альбумином
JP7219220B2 (ja) * 2017-01-17 2023-02-07 アブリンクス エン．ヴェー． 改善された血清アルブミン結合剤
NZ759601A (en) 2017-06-02 2023-06-30 Merck Patent Gmbh Aggrecan binding immunoglobulins
TW202417517A (zh) 2017-06-02 2024-05-01 德商麥克專利有限公司 與ｍｍｐ１３結合之免疫球蛋白
JP7249961B2 (ja) 2017-06-02 2023-03-31 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ａｄａｍｔｓ５、ｍｍｐ１３およびアグリカンに結合するポリペプチド
CN118894939A (zh) * 2017-06-02 2024-11-05 默克专利股份有限公司 结合adamts的免疫球蛋白
EP3749696A1 (en) 2018-02-06 2020-12-16 Ablynx N.V. Methods of treating initial episode of ttp with immunoglobulin single variable domains
AR120698A1 (es) 2019-12-09 2022-03-09 Ablynx Nv Polipéptidos que comprenden dominios variables únicos de inmunoglobulina que se dirigen a il-13 y tslp
CA3205422A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting glypican-3 and t cell receptor

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020230299A1 (en) 2020-10-01
CN108653728B (zh) 2022-11-18
IL229503A0 (en) 2014-01-30
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AU2024200309A1 (en) 2024-02-08
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DK2723769T3 (en) 2017-04-03
US11192938B2 (en) 2021-12-07
ES2622006T3 (es) 2017-07-05
KR102025035B1 (ko) 2019-11-04
SG194982A1 (en) 2013-12-30
US20210388061A1 (en) 2021-12-16
EP2723769B1 (en) 2017-01-11
JP2014520134A (ja) 2014-08-21
EP2723769A2 (en) 2014-04-30
KR20220114104A (ko) 2022-08-17
CN108663504A (zh) 2018-10-16
BR112013032145B1 (pt) 2022-09-20
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CA3141978A1 (en) 2012-12-27
LT2723769T (lt) 2017-04-10
US12516105B2 (en) 2026-01-06
PT2974737T (pt) 2026-01-20
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SG10201707604SA (en) 2017-11-29
PH12022550312A1 (en) 2023-01-23
US20210403536A1 (en) 2021-12-30
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CN104203975B (zh) 2018-05-11
US20140199295A1 (en) 2014-07-17
KR102246924B1 (ko) 2021-04-30
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MX2018007826A (es) 2021-12-08
IN2014CN00373A (ja) 2015-04-03
AU2019201606A1 (en) 2019-04-04
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RU2014102007A (ru) 2015-11-27
US20200325221A1 (en) 2020-10-15
IL324872A (en) 2026-01-01
PH12017501178A1 (en) 2018-07-23
IL293163B1 (en) 2026-04-01
IL293155A (en) 2022-07-01
JP2021107426A (ja) 2021-07-29
PH12013502669A1 (en) 2014-02-10
MX2013014614A (es) 2014-08-01
FI2974737T3 (fi) 2026-01-22
AU2017204339A1 (en) 2017-07-13
MX350074B (es) 2017-08-25
AU2012273929B2 (en) 2017-04-27
US20200216532A1 (en) 2020-07-09
CN108659121A (zh) 2018-10-16
US20220298227A9 (en) 2022-09-22
LT2974737T (lt) 2026-02-10
US20210388062A1 (en) 2021-12-16
CN108659120A (zh) 2018-10-16
ZA201309295B (en) 2015-01-28
RS67664B1 (sr) 2026-02-27
KR20140040779A (ko) 2014-04-03
BR112013032145A2 (pt) 2017-12-05
IL250396B (en) 2022-06-01
AU2017204339B2 (en) 2019-03-28
AU2021201506B2 (en) 2023-10-19
KR102430693B1 (ko) 2022-08-08
EP2723769B2 (en) 2022-06-15
JP2022031790A (ja) 2022-02-22
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