JPH01104165A - 安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法 - Google Patents
安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法Info
- Publication number
- JPH01104165A JPH01104165A JP62262300A JP26230087A JPH01104165A JP H01104165 A JPH01104165 A JP H01104165A JP 62262300 A JP62262300 A JP 62262300A JP 26230087 A JP26230087 A JP 26230087A JP H01104165 A JPH01104165 A JP H01104165A
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法に
関するものである。
関するものである。
（従来の技術）
α−１，６−グルコシダーゼは澱粉またはその派生物中
のα−１，６−グルコシド結合あるいは（および）プル
ランのα−１，６−グルコシド結合などを加水分解する
酵素の総称であり、その基質特異性の差からプルラナー
ゼ、あるいはインアミラーゼと呼ばれる酵素がある。
のα−１，６−グルコシド結合あるいは（および）プル
ランのα−１，６−グルコシド結合などを加水分解する
酵素の総称であり、その基質特異性の差からプルラナー
ゼ、あるいはインアミラーゼと呼ばれる酵素がある。
α−１，ｓニゲルコシ７゛−ゼはβ−アミラーゼと：ｊ
ｉ井川し用、澱粉からマルトースを収量よく製造す、″
るのに使用したり、また、酵素法による澱粉からのグル
コースの製造において、グルコアミラーゼと併ｍして、
グルコースを増収する目的に使用されている。
ｉ井川し用、澱粉からマルトースを収量よく製造す、″
るのに使用したり、また、酵素法による澱粉からのグル
コースの製造において、グルコアミラーゼと併ｍして、
グルコースを増収する目的に使用されている。
（発ｌす１が解決しようとする問題点）α−１，６−グ
ルコシダーゼは、バシルス属、クレブシラ属、シュード
モナス属など、種々の細菌や、ストレプトマイセス属な
どの放線菌により生産されることが知られているが、一
部の微生物の生産するものを除き、一般に、耐酸性や耐
熱性に劣ることが問題であった。特に、本酵素をグルコ
アミラーゼと併用する場合、グルコアミラーゼは、工業
的には、ｐｌｌ、ｉ〜５、温度約６０℃で２〜３日間使
用されるため、このような酸性と高温で長時間、活性を
保持できるプルラナーゼは少なく、これまで、パシルス
・アシドプルリティカス（Ｉｌａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉ
ｄｏｐｕｌｌｕｌｙｔｉｃｕｓ）のプルラナーゼが知ら
れているのみである（特公昭６２−２５０３６ はか）
。
ルコシダーゼは、バシルス属、クレブシラ属、シュード
モナス属など、種々の細菌や、ストレプトマイセス属な
どの放線菌により生産されることが知られているが、一
部の微生物の生産するものを除き、一般に、耐酸性や耐
熱性に劣ることが問題であった。特に、本酵素をグルコ
アミラーゼと併用する場合、グルコアミラーゼは、工業
的には、ｐｌｌ、ｉ〜５、温度約６０℃で２〜３日間使
用されるため、このような酸性と高温で長時間、活性を
保持できるプルラナーゼは少なく、これまで、パシルス
・アシドプルリティカス（Ｉｌａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉ
ｄｏｐｕｌｌｕｌｙｔｉｃｕｓ）のプルラナーゼが知ら
れているのみである（特公昭６２−２５０３６ はか）
。
シダーゼの安定化法について、鋭意、研究を行ってきた
結果、α−１，６−グルコシダーゼを生産する微生物を
、アルミニウム塩を含む培地で培養すると、安定性の向
上したα−１，６−グルコシダーゼが得られることを認
めた。本発明はこの知見に基づいてなされたものである
。
結果、α−１，６−グルコシダーゼを生産する微生物を
、アルミニウム塩を含む培地で培養すると、安定性の向
上したα−１，６−グルコシダーゼが得られることを認
めた。本発明はこの知見に基づいてなされたものである
。
すなわち、本発明は、α−１，６−グルコシダーゼを生
産する微生物をアルミニウム塩を含む培地で培養するこ
とを特徴とする安定なα−１，６−グルコシダーゼの生
産法に関するものである。
産する微生物をアルミニウム塩を含む培地で培養するこ
とを特徴とする安定なα−１，６−グルコシダーゼの生
産法に関するものである。
以下に、本発明の内容を更に具体的に説明する。
本発明において使用されるアルミニウム塩としては、例
えば、塩化アルミニウム、硫酸アルミニラ、硫酸アルミ
ニウムアンモニウム、硝酸アルミニウム、硫酸アルミニ
ウム カリウムなどの無機酸塩のほか、酢酸アルミニウ
ム、乳酸アルミニウムなどの有機酸塩など、通常、水溶
性の塩が挙げられるが、水酸化アルミニウム、燐酸アル
ミニ（ニウムなど水に不溶性または難溶性の塩も使用す
る”ことができる。
えば、塩化アルミニウム、硫酸アルミニラ、硫酸アルミ
ニウムアンモニウム、硝酸アルミニウム、硫酸アルミニ
ウム カリウムなどの無機酸塩のほか、酢酸アルミニウ
ム、乳酸アルミニウムなどの有機酸塩など、通常、水溶
性の塩が挙げられるが、水酸化アルミニウム、燐酸アル
ミニ（ニウムなど水に不溶性または難溶性の塩も使用す
る”ことができる。
（発明の効果）
アルミニウム塩として、例えば、塩化アルミニウムや硫
酸アルミニウムアンモニウムを使用する場合、培地に添
加される濃度は、通常、１Ｘ１０−’ 〜ｌＸｌ０−’
モ、ル、望ましくは、ｌＸｌ０−’〜５ＸＩＯ−’モル
程Ｉｆである。例えば、バシルス・ズプチルスの生産す
るプルラナーゼについて、１ＸＩＯ−’モルの塩化アル
ミニウムを添加した）’７Ｔｉ地で培養して得られる酵
素は無添加の培地から得られる酵素に比べ、最Ｊｐｎと
して、２〜３°Ｃ高（、対照酵素を、５％プルランを基
質として、り＋１４．５、温度６０℃で作用させたとき
、１時間以内に失活してしまうのに対し、アルミニラｌ
−塩の存在下で培養して得られた酵素は少なくとも３日
間活性を保持した。本発明はバシルス属、クレプシラ属
などの細菌、ストレプトマイセス属放線菌など、種々の
微生物の生産するα−１，６−グルコシダーゼに適用す
ることができる。例えば、α−ズブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ５ｕｂＬｉｌｉｓ）、バシルス・セレウス・ヴ
アリエークス・ミコイデス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅ
ｕｓ ｖａｒ、Ｂｃｏｉｄｅｓ）などは好適な微生物で
あるが、本発明はこれらの微生物だけに限定されるもの
でない。
酸アルミニウムアンモニウムを使用する場合、培地に添
加される濃度は、通常、１Ｘ１０−’ 〜ｌＸｌ０−’
モ、ル、望ましくは、ｌＸｌ０−’〜５ＸＩＯ−’モル
程Ｉｆである。例えば、バシルス・ズプチルスの生産す
るプルラナーゼについて、１ＸＩＯ−’モルの塩化アル
ミニウムを添加した）’７Ｔｉ地で培養して得られる酵
素は無添加の培地から得られる酵素に比べ、最Ｊｐｎと
して、２〜３°Ｃ高（、対照酵素を、５％プルランを基
質として、り＋１４．５、温度６０℃で作用させたとき
、１時間以内に失活してしまうのに対し、アルミニラｌ
−塩の存在下で培養して得られた酵素は少なくとも３日
間活性を保持した。本発明はバシルス属、クレプシラ属
などの細菌、ストレプトマイセス属放線菌など、種々の
微生物の生産するα−１，６−グルコシダーゼに適用す
ることができる。例えば、α−ズブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ５ｕｂＬｉｌｉｓ）、バシルス・セレウス・ヴ
アリエークス・ミコイデス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅ
ｕｓ ｖａｒ、Ｂｃｏｉｄｅｓ）などは好適な微生物で
あるが、本発明はこれらの微生物だけに限定されるもの
でない。
以下に、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例 １
コーン・ステイープ・リカーｌＯ％、乳糖２％、燐酸二
カリ０．３％、硫酸マグネシウム（７水塩）０．１％、
硝酸ナトリウム０．２５％、ライ−７６００，３％、硫
酸銅５Ｘ１０−’Ｍ、塩化マンガフ２．５Ｘ１０−”Ｍ
、塩化力／ｌ／ シ’７ム１ｘ１０−３Ｍ、硫酸亜鉛ｌ
Ｘｌ０−’Ｍ％硫酸鉄ｌ×１０−’Ｍからなる培地（ｐ
Ｈ７）を基本培地とし、これに塩化アルミニウムを５Ｘ
１０−’〜１ｘ１０−’Ｍ不添加た培地２０Ｉｌｌｌを
２００ｍ１容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後、
パシルスズブチリスＴυ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ ＴＵ）Ｆ Ｅ ＲＭａｒ’ −ファンチュー
ブに入れ蒸溜水に対し一夜透析したもの・を酵素液とし
て使用した。
カリ０．３％、硫酸マグネシウム（７水塩）０．１％、
硝酸ナトリウム０．２５％、ライ−７６００，３％、硫
酸銅５Ｘ１０−’Ｍ、塩化マンガフ２．５Ｘ１０−”Ｍ
、塩化力／ｌ／ シ’７ム１ｘ１０−３Ｍ、硫酸亜鉛ｌ
Ｘｌ０−’Ｍ％硫酸鉄ｌ×１０−’Ｍからなる培地（ｐ
Ｈ７）を基本培地とし、これに塩化アルミニウムを５Ｘ
１０−’〜１ｘ１０−’Ｍ不添加た培地２０Ｉｌｌｌを
２００ｍ１容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後、
パシルスズブチリスＴυ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ ＴＵ）Ｆ Ｅ ＲＭａｒ’ −ファンチュー
ブに入れ蒸溜水に対し一夜透析したもの・を酵素液とし
て使用した。
各酵素液０．０５単位を、プルラン５％、酢酸緩衝液（
ｐＨ１４，５）Ｏ，ＯＩＭ、塩化カルシウム０．０１Ｍ
、全１ｄ１ｍｌ−からなる反応液で、６０℃で反応させ
た。■、５．２０および６６時間目に一定量をとり、生
成した還元糖（マルトトリオース）をソモギー・ネルラ
ン法により、グルコースとして定量した。得られた結果
を第１表に示す。
ｐＨ１４，５）Ｏ，ＯＩＭ、塩化カルシウム０．０１Ｍ
、全１ｄ１ｍｌ−からなる反応液で、６０℃で反応させ
た。■、５．２０および６６時間目に一定量をとり、生
成した還元糖（マルトトリオース）をソモギー・ネルラ
ン法により、グルコースとして定量した。得られた結果
を第１表に示す。
第 １ 表
培地に添加した 生成還元糖（ｍｇ／ｍ１）ＡＩＣ
１ａ濃度（Ｍ） １ ５ ２０ ６６（時
間）０ ４．２１ ５．４６ ５．４７ ６．
１１５ＸＩＯ−’ ４．７３ ５．８７ ６．１
８ ６．６０７．５ＸＩＯ−Ｉｉ５．３７ ７．２７
７．４１ ７．６３ＩＸＩＯ−’ ５．１２ ６
．７’９ ７．３６ ８．１４表から明らかなように、
塩化アルミニウムを、７．５Ｘ １０−’ 〜ＩＸ １
０−’Ｍ不添加た培地でのようにして測定した。
１ａ濃度（Ｍ） １ ５ ２０ ６６（時
間）０ ４．２１ ５．４６ ５．４７ ６．
１１５ＸＩＯ−’ ４．７３ ５．８７ ６．１
８ ６．６０７．５ＸＩＯ−Ｉｉ５．３７ ７．２７
７．４１ ７．６３ＩＸＩＯ−’ ５．１２ ６
．７’９ ７．３６ ８．１４表から明らかなように、
塩化アルミニウムを、７．５Ｘ １０−’ 〜ＩＸ １
０−’Ｍ不添加た培地でのようにして測定した。
０．１Ｍ酢酸緩衝液に溶解した２％プルラン液（ａｌｌ
５．０）０．５ｍｌに適当ｉｔの酵素液を加え、蒸留
水で全ｆｆ１１ｍ１とし、４０℃で反応させる。この条
件下で、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を１単位とした。
５．０）０．５ｍｌに適当ｉｔの酵素液を加え、蒸留
水で全ｆｆ１１ｍ１とし、４０℃で反応させる。この条
件下で、１分間に１マイクロモルのグルコースに相当す
る還元力を生成する酵素量を１単位とした。
実施例２
実施例１において、塩化アルミニウムの代わりに、硫酸
アルミニウムアンモニウムを添加した培地を使用し、実
施例１と同様にして酵素を調製し、これを用いてプルラ
ンの糖化を行った。得られた結果を第２表に示す。
アルミニウムアンモニウムを添加した培地を使用し、実
施例１と同様にして酵素を調製し、これを用いてプルラ
ンの糖化を行った。得られた結果を第２表に示す。
表から明らかなように、硫酸アルミニウムアンモニウム
を添加した培地で培養した酵素は、無添加の培地で培養
して得られる酵素よりも、安定性に優れていることがわ
かる。
を添加した培地で培養した酵素は、無添加の培地で培養
して得られる酵素よりも、安定性に優れていることがわ
かる。
第 ２ 表
０ ２．８２４．６１５．７４
３Ｘ １Ｇ−’ ２．１３７．２２７．５４実施例
３
３
Claims (1)
- α−１，６−グルコシダーゼを生産する微生物をアルミ
ニウム塩を含む培地で培養することを特徴とする安定な
α−１，６−グルコシダーゼの生産法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62262300A JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62262300A JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104165A true JPH01104165A (ja) | 1989-04-21 |
| JPH0246195B2 JPH0246195B2 (ja) | 1990-10-15 |
Family
ID=17373870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62262300A Granted JPH01104165A (ja) | 1987-10-16 | 1987-10-16 | 安定なα−１，６−グルコシダーゼの生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01104165A (ja) |
-
1987
- 1987-10-16 JP JP62262300A patent/JPH01104165A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0246195B2 (ja) | 1990-10-15 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |