JPH01149795A - α−グリコシルグリチルリチンの精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の技術分野 本発明は、α−グリコシルグリチルリチンの精製方法に
関し、ざらに詳しくは、α−グリコジルグリデルリチン
およびグリチルリチンを含有している溶液から、高純度
のα−グリコシルグリチルリチンを得るための方法に関
する。

発明の技術的背景ならびにその問題点 従来、−甘草から抽出された甘草エキス中に含まれるグ
リチルリチンの精製法に関しては、種々報告されている
（特開昭５２−１３９７１０号公報、特開昭５６−５１
５００号公報など）。しかし上記のいずれの方法におい
ても、甘草エキス中に含まれる苦み、渋み成分の除去は
極めて困難であった。

このような問題点を解決するため、特開昭５８−８７０
号公報には、グリチルリチンと澱粉質とを含有する水溶
液に、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ
を作用させ、得られたα−グリコシルグリチルリチンを
含む反応混合物を得ることにより、グリチルリチンが有
する苦み、渋みおよび他の異味なとの味質を除去するた
めの方法が開示されており、このようにして得られたα
−グリコシルグリチルリチンを含有する反応混合物は、
飲食物などへの用途に用いることができると教示されて
いる。

また上記の特開昭５８−８７０号公報には、グリチルリ
チンと澱粉質とを含有する水溶液にシクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼを作用させて得られた反応
混合物中に含まれるα−グリコシルグリチルリチンの濃
度を高めるための方法として、合成吸着剤を充填したカ
ラムに該反応混合物を通液して、α−グリコシルグリチ
ルリチンおよびグリチルリチンを合成吸着剤に吸着させ
るとともに、該反応混合物中の遊離の糖類をカラムから
流出させ、次いで、このカラムにメタノール水、エタノ
ール水溶液などを通液きせるなどの処理を行なって、α
−グリコシルグリチルリチンを溶出させ、前記反応混合
物中のα−グリコシルグリチルリチン濃度が高められた
溶出物を得る方法が開示されている。

しかしこのような方法により得られたα−グリコシルグ
リチルリチンの濃度が高められた溶出物中には、α−グ
リコシルグリチルリチンに加えて未反応のグリチルリチ
ンなどが含まれている。このため上記の溶出物から得ら
れる固体物中には、α−グリコシルグリチルリチンに加
えてグリチルリチンが含まれている。ところか固体状の
グリチルリチンは、水に対する溶解度が酸性条件下にお
いては極めて低く、もし多聞のグリチルリチンを水に溶
解しようとするとゲル化してしまう。したがってグリチ
ルリチンとα−グリコシルグリチルリチンとを含む固体
物の水に対する溶解度は、この固体物中に含まれるグリ
デルリチンの含有量によって大きく左右されてしまう。

このように、グリチルリチンとα−グリコシルグリチル
リチンとを含む固体物を水に溶解させようとすると、グ
リチルリチンがゲル化してしまうため多聞には水に溶解
させることができず、このためグリチルリチンとα−グ
リコシルグリチルリチンとを含む固体物の用途が著しく
制限されてしまうという問題点があった。

発明の目的 本発明は、上記のような従来技術に伴う問題点を解決し
ようとするものであって、グリチルリチンのα−グリコ
ジル化反応物から未反応のグリチルリチンおよび不純物
を分離除去して、高純度のα−グリコシルグリチルリチ
ンを得るためのα−グリコシルグリチルリチンの精製方
法を提供することを目的とする。

及里の且皿 本発明に係るα−グリコシルグリチルリチンの精製方法
は、α−グリコシルグリチルリチンおよびグリチルリチ
ンを含有する溶液と、巨大網状構造を有し、かつ中間極
性あるいは無極性の合成樹脂吸着剤とを酸性条件下およ
び加温条件下に接触させ、α−グリコシルグリチルリチ
ンおよびグリチルリチンを前記合成樹脂吸着剤に吸着さ
せた後、α−グリコシルグリチルリチンを、アルカリ水
、アルカリ有機溶媒、アルカリ含水有機溶媒、含水有機
溶媒または有機溶媒を用いて、前記合成樹脂吸着剤から
脱着させることを特徴としている。

本発明は、上記のような特徴を有するので、グリチルリ
チンのα−グリコジル化反応物から未反応のグリチルリ
チンおよび不純物を分離除去して、高純度のα−グリコ
シルグリチルリチンを得ることができる。ざらに、本発
明により精製されたα−グリコシルグリチルリチンは、
実質的に未反応のグリチルリチンなどを含有しないため
、酸性条件下においても水に対して高い溶解度を示し、
したがって、はとんどゲル化を生じないとともに、苦み
あるいは渋みがない。

発明の詳細な説明 以下、本発明に係るα−グリコシルグリチルリチンの精
製方法について具体的に説明する。

本発明において用いられる、α−グリコシルグリチルリ
チンおよびグリチルリチンを含有する溶液としては、グ
リチルリチンと澱粉質とを含有する溶液に、シクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼを作用させて得ら
れる反応液を、必要に応じて加熱失活させて得られた溶
液が用いられる。

本発明において用いられる合成樹脂吸着剤としては、巨
大網状構造を有し、かつ中間極性あるいは無極性を示す
多孔性重合体樹脂からなり、広範囲にわたる表面積、多
孔性および孔径分布を有している合成樹脂吸着剤が挙げ
られる。無極性を示す合成樹脂吸着剤としては、たとえ
ば、スチレン−ジビニルベンゼン系重合体が挙げられ、
２５０〜８００ＴＩｉ／ｇの比表面積、４０〜１００オ
ングストロームの平均孔径、３０〜５５容積％の気孔率
を有している。このような合成樹脂吸着剤は、たとえば
オルガノ（株）より商品名アンバーライト吸着剤ＸＡＤ
−２、ＸＡＤ−４あるいは三菱化成（株）からＨＰ−２
０として市販されている。

また中間極性を有する合成樹脂吸着剤としては、たとえ
ば、アクリルエステル系重合体が挙げられ、１００〜５
００′ｒ／ｉ／ｑの比表面積、７０〜２５０オングスト
ロームの平均孔径、５０〜６０容積％の気孔率を有して
いる。このような合成樹脂吸着剤は、たとえばオルガノ
社（株）より商品名アンバーライト吸着剤ＸＡＤ−７、
ＸＡＤ−８として市販されている。

本発明においては、α−グリコシルグリチルリチンを精
製する際に、まず最初に、上記・したα−グリコシルグ
リチルリチンおよびグリチルリチンを含有する溶液と、
合成樹脂吸着剤とを用いて、α−グリ・コシルグリチル
リチンおよびグリチルリチンを含有する溶液と、巨大網
状構造を有し、かつ中間極性あるいは無極性の合成樹脂
吸着剤とを接触させ、α−グリコシルグリチルリチンお
よびグリチルリチンを前記合成樹脂吸着剤へ吸着させる
。

合成吸着剤にα−グリコシルグリチルリチンおよびグリ
チルリチンを吸着させる際に、後記するような酸を用い
て、酸性条件下に、α−グリコシルグリチルリチンおよ
びグリチルリチンを含有する溶液を３０〜９０°Ｃ１好
ましくは４０〜６０℃に加温することが望ましい。３０
℃未満の加温では、グリチルリチンのゲル化が生ずる虞
れがあるために好ましくなく、９０’Ｃを超える加温で
は、用うる樹脂の耐熱温度を超えるために好ましくない
。このような酸性条件下でα−グリコシルグリチルリチ
ンおよびグリチルリチンを含有する溶液と合成、樹脂吸
着剤とを接触させることが好ましい理由は、酸性条件下
では、上記溶液中に含まれるグリチルリチンを強く吸着
剤に吸着させることができ、したがってグリチルリチン
を上記溶液から効率的に分離できるためである。

この酸性条件としては、ｐＨ値が１．５〜６．５、好ま
しくは３．０〜６．０であることが望ましい。このＤＨ
値が１．５未満では、上記溶液中のグリチルリチンが析
出ないしゲル化しやすくなり、したがって、このグリチ
ルリチンを含む上記溶液と合成樹脂吸着剤との接触が困
難となってしまうために好ましくなく、また、ｌ）Ｈ値
が６．５を超えると、酸の添加効果が充分に現われない
ために好ましくない。

このα−グリコシルグリチルリチンおよびグリチルリチ
ンを含有する溶液を酸性にするために用いられる酸とし
ては、無機酸および有機酸をあげることができる。無機
酸としては、塩酸、硫酸、リン酸などが用いられうる。

また有機酸としては、酢酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、
コハク酸などが用いられうる。これらの無機酸または有
機酸は水溶液として用いられる。

また、上記したような加温条件下で、α−グリコシルグ
リチルリチンおよびグリチルリチンを含有する溶液と合
成樹脂吸着剤との接触を行なうことが望ましい理由は、
酸性条件において該溶液と吸着剤との接触を行なう場合
に、溶液のＩ）Ｈ値を下げるにしたがって生ずる該溶液
中の未反応のグリチルリチンの析出ないしゲル化を防止
するためであり、またグリチルリチンおよびα−グリコ
シルグリチルリチンと吸着剤との吸着性を高めるためで
ある。

上記のように、α−グリコシルグリチルリチンおよびグ
リチルリチンを合成樹脂吸着剤に吸着させた後、水ない
し温水を用いて、この合成樹脂吸着剤を洗浄して、合成
樹脂に付着している不純物たとえば単糖、オリゴ糖、デ
キストリンなどを除去してもよい。このように不純物を
水または温水により除去することにより、グリチルリチ
ンと不純物のいずれもが実質的に含有されていない高純
度のα−グリコシルグリチルリチンが、下記のようなα
−グリコシルグリチルリチンの脱着工程を経て精製され
る。

本発明において、上記したα−グリコシルグリチルリチ
ンおよびグリチルリチンを含有する溶液と、合成樹脂吸
着剤との接触は、α−グリコシルグリチルリチンおよび
グリチルリチンを含有する溶液中に吸着剤粉末を添加す
るバッチ法によっても行ないうるが、通常はカラムに合
成樹脂吸着剤を充填して行なうカラム法により行なうこ
とが好ましい。

カラム法によってα−グリコシルグリチルリチンおよび
グリデルリチンを含有する溶液と、合成樹脂吸着剤との
接触を行なう場合には、カラム中のα−グリコシルグリ
チルリチンおよびグリチルリチンを含有する溶液の流通
速度を空間速度（ＳＶ）で毎時０．１〜３程度とするこ
とが好ましい。

上記のように、α−グリコシルグリチルリチンおよびグ
リチルリチンを合成樹脂吸着剤に吸着させた後に、脱着
剤としてアルカリ水、アルカリ有機溶媒、アルカリ含水
有機溶媒、含水有機溶媒または有機溶媒を用いて、上記
合成樹脂吸着剤からα−グリコシルグリチルリチンを脱
着させる。合成樹脂吸着剤に吸着されたα−グリコシル
グリチルリチンおよびグリチルリチンのうちで、α−グ
リコシルグリチルリチンだけが上記脱着剤により脱着さ
れるのは、α−グリコシルグリチルリチンと比較してグ
リチルリチンは強固に合成樹脂吸着剤に吸着されている
ため脱着されにくく、一方、α−グリコシルグリチルリ
チンは弱く吸着しているため脱着剤と接触させると容易
に脱着されるためと考えられる。

上記合成樹脂吸着剤から、α−グリコシルグリチルリチ
ンを脱着させるに際して、脱着剤としてアルカリ水、ア
ルカリ有機溶媒、アルカリ含水有機溶媒、含水有機溶媒
または有機溶媒が用いられるが、このような脱着剤とし
ては、具体的には次のようなものが用いられる。

アルカリ水としては、具体的には、炭酸ソーダ水、アン
モニア水、カセイソーダ水、カセイカリ水などが挙げら
れる。このようなアルカリ水のアルカリは０．０１〜２
．０規定部度であることが好ましい。

アルカリ有機溶媒としては、具体的には、アルカリを溶
解したメタノール、エタノール、イソプロパツールなど
のアルコール類が挙げられる。このようなアルカリ有機
溶媒のアルカリは０．０１〜２．０規定部度であること
が好ましい。

アルカリ含水有機溶媒は、アルカリ水と有機溶媒との混
合溶媒であって、具体的には、水酸化ナトリウム水溶液
とメタノールとの混合溶媒などが挙げられる。このアル
カリ含水有機溶媒においては、アルカリは０．０１〜２
．０規定部度で、水は４０〜８０重担％の量で、有機溶
媒は２０〜６０重量％の量で存在していることが好まし
い。

有機溶媒としては、具体的には、メタノール、エタノー
ル、イソプロパツールなどのアルコール類、アセトンな
どのケトン類、エチルエーテルなどのエーテル類などが
挙げられる。これらのうち好ましくはエタノールが用い
られる。

含水有機溶媒は、水と上記のような有機溶媒との混合溶
媒であって、具体的にはエタノールと水との混合溶媒な
どが用いられる。

このような含水有機溶媒では、水は４０〜８０重量％の
量で存在していることが好ましい。

合成樹脂吸着剤から脱着させて得られたα−グリコシル
グリチルリチン溶液を、必要に応じて、Ｈ型イオン交換
樹脂を用いてさらに脱塩績′ｙＡすることもできるが、
上記のようにして得られたα−グリコシルグリチルリチ
ン溶液を、そのまま飲食に供することもでき、場合によ
っては濃縮したり、乾燥したりして、粉末化して飲食に
供することもできる。

脱着剤を用いて合成樹脂吸着剤からα−グリコシルグリ
チルリチンの脱着を行なった後に、上記の脱着に際して
用いられた脱着剤よりも高濃度にアルカリあるいは有機
溶媒を含有する脱着剤を用いて、合成吸着剤に残存吸着
しているグリチルリチンおよび一部のα−グリコシルグ
リチルリチンなどを脱着回収し、本発明において用いら
れるα−グリコシルグリチルリチンおよびグリチルリチ
ンを含有する溶液などとして再利用することができる。

この高濃度にアルカリあるいは有機溶媒を含有する脱着
剤によるグリチルリチンおよび一部のα−グリコシルグ
リチルリチンの脱着回収操作は、同時に合成樹脂吸着剤
の再生処理をも兼ねるという利点を有する。この操作を
行なうことにより、α−グリコシルグリチルリチンの精
製に用いられた合成樹脂吸着剤の再利用が可能となる。

上述のようにして精製されたα−グリコシルグリチルリ
チンは、酸性条件下においても水に対する溶解度が高く
、はとんどゲル化しないとともに、苦味あるいは渋味を
有していない。従って、本発明により得られるグリチル
リチンを実質的に含まないα−グリコシルグリチルリチ
ンは、グリチルリチンを含むα−グリコシルグリチルリ
チンと比較して、飲食物あるいは医薬品などに極めて容
易に調製することができる。さらに、高純度のα−グリ
コシルグリチルリチン自体は、無味、・無臭であるから
、α−グリコシルグリチルリチンを含有する飲食物ある
いは医薬品などの摂取は極めて容易になる。

発明の効果 本発明に係るα−グリコシルグリチルリチンの精製法は
、α−グリコシルグリチルリチンおよびグリデルリチン
を含有する溶液と、巨大網状構造を有し、かつ中間極性
あるいは無極性の合成樹脂吸着剤とを酸性条件下および
加温条件下に接触させ、α−グリコシルグリチルリチン
およびグリデルリチンを前記合成樹脂吸着剤に吸着させ
た後、α−グリコシルグリチルリチン アルカリ有機溶媒、アルカリ含水有機溶媒、含水有機溶
媒または有機溶媒を用いて、前記合成樹脂吸着剤から脱
着させることを特徴としているので、グリチルリチンの
α−グリコジル化反応物から未反応のグリチルリチンお
よび不純物を分離除去して、高純度のα−グリコシルグ
リチルリチンを得ることができる。ざらに、本発明によ
り精製されたα−グリコシルグリチルリチンは、実質的
にグリチルリチンを含んでいないため、酸性条件下にお
いても水に対して高い溶解度を示し、はとんどゲル化を
生じないとともに、無味・無臭である。

したがって、本発明により得られた高純度のα−グリコ
シルグリチルリチンを飲食物あるいは医薬品などに容易
に調製することができるとともに、α−グリコシルグリ
チルリチンを含有する飲食物あるいは医薬品は摂取が極
めて容易となる。

以下本発明を実施例により説明するが、本発明はこれら
実施例に限定されるものではない。

下記の実施例に用いられる試ｌＩ液を実施例の実施に先
立って調製した。この試料液の調製方法を次に示す。

試料液の調製 グリデルリチン（純度９８％以上、常磐植物化学研究所
製品、ＧＡＳ−Ｅ）（サンプルＡ）１６ＣＨＪと、デキ
ストリン（ＤＥ６）４８０ｇとの混合物に、温水を加え
、２ＮのＮａ　Ｏｆ−（を用いてｌ）Ｈ値を５．８に調
整し、溶解して２．０１の溶液を１ｑだ（反応前液）。

このようにして得られた反応前液にバチルスステイアサ
ーモフェラス酵素７０００単位を加え、６０°Ｃの温度
で、４０時間、グリチルリチンのα−グリコジル化反応
を行なった。

この反応により得られた液（反応後液）を９５°Ｃの温
度で加熱して、酵素を失活させ、試料液を得た。この試
料液の５０ｍ！！を分取し、真空濃縮乾燥を行ない、１
５．５Ｖの乾燥試料（サンプルＢ）を得た。

上記のようにして行なったグリチルリチンのα−グリコ
ジル化反応の反応率を調べるため、反応前液と反応後液
とのグリチルリチン量を高速液体クロマトグラフィー（
ＨＰＬＣ）を用いて測定した。測定条件は、ＬＪＶ２５
４ｎｍ，ＯＤＳカラム、水／アセトニトリル／酢酸＝６
０／４０／１、流ｆｆｉ１ｍＮ／Ｍとした。その測定の
結果、反応後液には反応前液の２４％のグリチルリチン
が未反応のまま残っており、グリチルリチンのα−グル
コシル化反応率は７６％であることがわかった。

実施例１ 中間極性多孔性樹脂３．２ＯＮをカラムに充填し、エタ
ノール／水＝６０／４０の混合液６．４１で洗浄し、該
樹脂を活性化した後、充分な但の温水でこの樹脂を洗浄
した。中間極性多孔性樹脂を水洗した後、試料液１．２
０．［ｌを、２ＮのＨＣＩを添加してｌ）Ｈ値を４．０
に調整し、５５℃の温度に加温した状態で、５Ｖ＝２．
０で流下させた。続いて試料液の流下を終えたカラムに
温水を流下させ充分洗浄し、樹脂に吸着されない単糖、
オリゴ糖、デキストリンなどの不純物を流出させた。

次に、水／エタノール＝７５／２５の混合液６．４ｇを
該カラムに流下させ、脱着液７．２．１！を得た。

ＨＰＬＣで脱着液を分析したところ、グリチルリチンの
ピークは認められなかった。

次いで、実施例１の脱着液のサンプルを真空濃縮、乾燥
および粉末化処理を行なってサンプルＣを得、サンプル
Ｃ，Ａ、Ｂについて以降の測定を行なった。

溶解度の比較テスト サンプルＣ，Ａ、Ｂの水に対する溶解度を測定（吐１４
．５の緩衝液、２５’Ｃ１た。

その結果を表１に示す。

表ニー ＊１　α−グリコシルグリチルリチンは、水１００９に
対して、１００！ｌ？溶解すれば実用上充分なため、そ
れ以上は未試験で必る。

＊２　サンプル８０．４０９の中には未反応のデキスト
リンなどが含まれている。

（註）本発明により精製されたサンプルＣのα−グリコ
シルグリチルリチンは、サンプル八を基準とした場合、
溶解度が２５００倍以上に向上している。

サンプルＢには、未反応のデキストリンなどが含まれて
いるため、見かけ上はサンプルＢの溶解度が上がってい
るが、実際上はサンプルＢの溶解度はあまり改善されて
いない。

味質の比較テスト サンプルＣ，Ａ、Ｂについて、１０名のパネラ−により
、２５°Ｃの室温下で味質の比較テストを行なった。

その結果を表２に示す（サンプルＡ、Ｂ：水１００！Ｊ
に対する最大溶解量による〉。

表２ （註）ただしサンプルＣ１サンプルＡ１サンプルＢはＤ
　Ｉ−１値を４．５とした水に溶解させた。サンプルＡ
の０．０２％液は甘味と同時に苦味・渋味、異味が強か
った。サンプルＢの０．４％液はサンプルＡの０．０２
％液より甘味は減少するが、まだかなり甘味があり、ま
た苦味・渋味・異味も残っていた。サンプルＣの１０％
液は高濃度にもかかわらず、甘味が消失し、苦味、渋味
、異味もなくなっていた。

ゲル化′ａ度 サンプルＣ，Ａ、Ｂのゲル化濃度（すなわち流動性を失
う濃度）を測定した（　ｐＨ３，５，５℃、１２時間）
。

その結果を表３に示す。

表３ （註）サンプルＣはサンプルＡに較べ、ゲル化の生じな
い濃度が５０００倍以上になっており、サンプルＢに対
しても２５００倍以上になっている。

代理人　　弁理士　　鈴　木　俊一部

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 　α−グリコシルグリチルリチンおよびグリチルリチン
   を含有する溶液と、巨大網状構造を有し、かつ中間極性
   あるいは無極性の合成樹脂吸着剤とを酸性条件下および
   加温条件下に接触させ、α−グリコシルグリチルリチン
   およびグリチルリチンを前記合成樹脂吸着剤に吸着させ
   た後、α−グリコシルグリチルリチンを、アルカリ水、
   アルカリ有機溶媒、アルカリ含水有機溶媒、含水有機溶
   媒または有機溶媒を用いて、前記合成樹脂吸着剤から脱
   着させることを特徴とするα−グリコシルグリチルリチ
   ンの精製方法。