JPS59187793A - タイロシンを精製する改良方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、重合体樹脂上の選択的吸着によってタイロシ
ン（Ｔｙｌｏｓｉｎ）を精製する方法に関する。従来文
献に報告されているように、普通タイロシン塩基はジク
ロロメタンまたはクロロポルムのような塩素化有機溶剤
またはメチルイソブチルケトンのような非塩素化溶剤に
よって予め８．５のｐＨにした醗酵ブロスから抽出され
る。

次いで合した有機抽出液を真空濃縮し、そＩ〜で活性炭
素による脱色後にタイロシン塩基をｎ−ヘキサンの添加
によって沈殿させる。

あるいはまた、適当な有機または無機酸（酒石酸または
燐酸）による中和によって、タイロシン塩基を有機抽出
液から水性相に可溶性の塩の形態で移動することができ
る。次にタイロシンの可溶性塩を含有する水溶液を真空
乾燥（スプレードライヤー）して使用した酸の塩の形態
の抗生物質を得る。

前述した方法によれば、ある場合においては、特に醗酵
ブロス中に高度な量で存在する不純物の完全な除去を達
成することができず、その結果、これらの不純物（色素
または醗酵副生成物）の型によっては最終生成物の品質
は力価においておよび分析および官能性においてしばし
ば不満足である。

本発明の目的は前述Ｉまた不都合を除去しそして非常に
簡単であり且つ必要条件を満足する生成物を得ることを
可能にするタイロシンの新規な精製方法を開示するもの
である。

本発明の精製方法は、吸着作用樹脂ＥＲ−１８０■（ロ
ーム・アンド・ハース社）またはアンバーライト■（Ｘ
ＡＤ２、ＸＡＤ　４−ローム・アンド・ハース社）、も
しくはダイオン■型（ＨＦ２０、Ｉ−ＩＰ２１、ＨＦ３
０、ＨＦ２０、ＨＦ２０、三菱化成工業■）、シュオラ
イド■型（’５８６１．５８６２．５８６６．５８６６
、ダイアモンド・ジャムロック社）、カスチル■型（８
１１２、モンテエジンン社）、レワタイト■（ＯＣ１０
３１、バイエル社）のようなその他の型の重合体樹脂上
の醗酵ブロス中のタイロシンの選択的吸着からなる。

それ故に、当業者には明白であるように、本発明の精製
方法の特有の目的は、主に必要な性質要求を満足する最
終生成物を得ることを可能にする吸着条件、脱着反応に
使用される適当な溶剤または溶剤混合物、正確なｐＨ範
囲、引続いての操作を見出したことである。

以下に簡単に記載されそして例により詳細に記載される
本発明の新規な精製方法は、醗酵ブ　５− ロスを沢過しそしてタイロシンを含有するｆ液をＮａ０
Ｔ（の水溶液の添加によってｐＨ７，５〜１０となし次
いで重合体樹脂上に吸着させることからなる。

前述したｐＨ値において、ブロス中に存在する着色不純
物の大部分の量は流出液と共忙除去されそしてタイロシ
ン塩基は樹脂上に吸着される。

生成物に対する樹脂の非常に高い吸着能力（４０〜５０
ｒ／ｌ）および水−アルコールまたは水−アセトン溶液
で実施した脱着工程後に次の反応に対して樹脂を再び使
用する可能性からなるこの方法の他の利点を指摘するこ
とは重要なことである。

醗酵ブロス中に含有されている不純物の種類によっても
左右されるが２０〜６０回の操作サイクル後においての
み、同じ樹脂を再生することが必要である。この再生は
、水／イソプロパツール（７０：３０）の混合物および
４％ＮａＯＨによつ　６− て容易に実施される。樹脂からのタイロシン塩基の脱着
は好適には１：１の比の水／インプロ／セノールまたは
水／アセトンの混合物によって前述したように実施され
る。

このようにして得られた溶離液をＩ　ＲＡ３５■型（Ｉ
：Ｉ−ム・アンド・ハース社）の巨大網状弱陰イオン性
樹脂上に吸着せしめて完全な脱色を達成させる。

あるいはまた、レワタイト■型（ｃＡ９２２２、バイエ
ル社）またはカスチル■型（Ａ−１０５、モンｆエジソ
ン社）も使用することができる。真空濃縮し、そしてｐ
Ｅ（を調整した後、タイロシンを塩析によって溶離液か
ら沈殿させる。収率約８０％。

このようにして精製されたタイロシン塩基から、それを
水−アルコール溶剤中で化学量論的な量の酸を使用して
塩形成させそして脱色炭素を通した沢過によって得られ
た溶液す潰縮乾個することによってその塩（酒石酸塩、
燐酸塩）を得ることができる。あるい（主また精製ｌ、
た溶離液を塩形成させそしてその後溶液をスプレー乾燥
することによってこれらの塩を直接得ることができる。

以下の例は、本発明の詳細な説明するものであるが、本
発明を限定するために示すものではない。

例１１タイロシン塩基の精製 醗酵ブロス４４　Ｄ　ｌ（ｇをシカライト（Ｄｉ　ｃａ
ｌ　ｉ　ｔｅ　）（３％）と混合しそして次に回転濾過
器上で沢過する。出発有用活性度９４％を含有するその
ようにして得られたｆ過ブロス（６１５４）を２０％Ｎ
ａＯＨの添加によってｐＨ７，５となしそして１５０ｔ
／ｂの流速でカラム（樹脂の容量１００ｔ、カラムの直
径２２．５ｃ１ｎ）中の樹脂ｇＲ−１８０■（ローム・
アンド・ハース社）上に吸着させる。排出プロスは滴定
によって検査していかなる活性度も示さない。次にカラ
ムを１５０　ｔ／ｈの流速で水２０［１ｔで洗滌する。

この洗滌水はいかなる活性度も含有していない。次にカ
ラムを１：１の比の水／インプロパツールまたは水／ア
セトンの混合物で溶離しそして活性度を含有していない
オーバーヘッド５０ｔを除去した後出発活性度９０％を
含有する中心の溶離液１ｏｏｚを最終的に集める。

この溶離液を濃縮しそして次に２０　ｚ／ｈの流速で予
め塩の形としたＩＲＡ３５［Ｆ］樹脂（ローム・アンド
・ハース社）上に吸着せしめる。

このようにして得られた脱色した溶離液を＋１０℃にし
そしてＮａＯＨの水溶液の添加によってｐＨ約８．５と
なしそしてそれを塩化すトリウム４．５にりと混合する
。

３５℃で２時間攪拌した後、沈殿したタイロシン　９− 塩基をブフナー漏斗によって濾過しそしてｐＨ８，５お
よび４５℃の温度を有する水８ｔで洗滌する。

洗滌したパネルを４５℃で８時間真空乾燥しそして次に
６時間高真空乾燥する。

出発有用活性度を基にして計算した収率は正規の性質に
相当するタイロシン塩基約８０％である。

例２　タイロシン酒石酸塩（中性）の製造例１によって
得られた精製されたタイロシン塩基Ｉ　Ｋｙをメチルア
ルコール３．０ＡＫ懸濁しそして酒石酸０．０６６Ｋｙ
および活性炭素ｏ、　０５　Ｋｐと混合する。室温で３
０分攪拌した後、混合物をシカライト（０，１０に９）
上で濾過し、パネルをメタノール１．Ｏ６で洗滌しそし
てｆ液を真空濃縮乾個（蒸気の温度２０〜５０℃）する
。

このようにして得られた乾燥した砕けやすい残留物を更
に５０’Ｃで３時間乾燥器中で真空乾−１○− 燥しそして次にそれをふるいにかげる。有用活性度の９
８．５％のタイロシン酒石酸塩９１１．５ｒが得られる
。

例　　６ 醗酵ブロス５２０にりを例１に記載したように処理して
脱色および精製された溶離液を得る。この溶離液を酒石
酸６９６１と混合しそしてｐＨを６．０〜６４にする。

次に、室温で３０分攪拌下に維持しながら、活性炭素３
０Ｌｌを反応混合物に加える。シカライト上で沢過した
後、溶液を真空濃縮して約２５１の容量に［２そして次
にスプレー乾燥する。有用活性度の９８％のタイロシン
酒石酸塩４４ＤＯｒが得られる。

例　　４ 醗酵ブロス５２ＤＫｒを例１に記載したように処理して
中心部の溶離液を得る。次にこの溶離液をオーバーヘッ
ドからの同時的なイソプロパノ・−ルの除去によって７
０ｔまで真空濃縮する。

塩化メチレン３５７に加えそしてｐＨをＮａ０Ｉ（の２
０係水溶液の添加によって８．５にする。

１５分攪拌した後、有機抽出液を分離し、９０ｔまで真
空濃縮しそして攪拌下でシクロヘキザン６０．ＯＬと混
合する。反応混合物を１０〜１５℃の温度で攪拌下に約
６時間維持しそして沢過によって分離した沈殿を４０℃
で４時間真空乾燥する。有用活性度の９５条のタイロシ
ン塩基４６００９が得られる。

例　　５ カスチル■５１１２樹脂１ｏｏｔ上の吸着を実施しなが
ら、醗酵ブロス４９　ＯＫ９を例１に記載したように処
理する。

樹脂を脱イオン化水で洗滌した後、タイロシン塩基を１
時間当り床容ｔ（Ｂ／ｖ／ｈｒ）の流速で２．３：１の
比のアセトン／水の混合物３０１：ｌで溶離する。

中心部溶離液１００ｔを集めモしてＨ３ＰＯ４の１２多
溶液をｐＨ５，５まで加えることによって塩形成させそ
して次に１０ｔまで真空濃縮してタイロシン燐酸塩５０
００９に相当する濃厚溶液を得る。

特許出願人　　ファーミタリア・カル口・エルパ・ソシ
エタ・はル・アツイオーニ ー］　３− 第１頁の続き （塑合　　明　者　ダニルロ・ファブリスイタリア国ト
リノ・セラティー モトリネーゼ・ヴイアエルレバ ルコ３６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）醗酵ブロス中に含ｍされているタイロシンの選択的
   吸着によって精製を実施することを特徴とする、タイロ
   シンの精製方法。 ２）重合体樹脂上の吸着前に予めＰ　：ｉＭ　した醗酵
   ブロスをＮａＯＨの水溶液の添加によってｐＨ７，５〜
   １０．０にする前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６）重合体樹脂を水で洗滌しそして吸着したタイロシン
   塩基を次に１＝１（各階）の水／インプロパツール、１
   ：１（各階）の水／アセトンまたは１：２．３（容量）
   の水／アセトンの混合物によって溶離する前記特許請求
   の範囲第１項記載の方法。 ４）より完全な脱色および不純物の最高の除去を得るた
   めに溶離液を更に巨大網状弱陰イオン性樹脂上で濾過し
   そしてそのようにして得られたｒ液を濃縮し、ｐＨ約８
   ５となしそして塩化ナトリウムを加えて純粋なタイロン
   塩基を沈殿させる前記特許請求の範囲第１項ない１−第
   ６項のいずれか一つに記載の方法。 ５）樹脂上の吸着工程後Ｖ：、Ｐ液に含有されているタ
   イロシン塩基をジクロロメタンのような有機溶剤で抽出
   しそしてｎ−ヘキサンおよびシクロヘキサンの添加によ
   って単離する前記特許請求の範囲第１項ないし第４項の
   いずれか一つに記載の方法。 ６）陰イオン性樹脂上の水−アルコールまたは水−アセ
   トン溶離液の吸着後に得られたｅ液を化学喰論的な１＠
   ′、の酒石酸または燐酸と混合してタイロシン塩基を相
   当する塩に変換しそしてこの塩を含有する溶液をスプレ
   ー乾燥することによって純粋な形態で単離する前記特許
   請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか一つに記載の
   方法。