JPH01158013A - リン脂質の重合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なリン脂質から誘導された重合体に関する
。更に詳しくは、生物学的適合性表面の製造において使
用されるリン脂質の重合体に関する。

少なくともたとえば人工器官の表面及び血液透析装置の
構成部品を形成するのに生物学的適合性の重合体を使用
するのは普通に実施されていることである。しかしなが
ら、これらの材料は完全なものではなく、生きている組
織との反応は問題を残している。たとえば表面に誘発さ
れる血栓症は、特に大量の血液が人工肺及び人工腎臓に
おける如き異質の表面（ｆｏｒｅｉｇｎ　　５ｕｒｆａ
ｃｅＳ）と接 触する場合には依然として大きな困難である。人工器官
におけるクロットの形成は、もしクロットが人工表面を
破壊しく　ｂｒｅａｋＯｆｆ）そして宿作用を及ぼす。

最近、表面凝塊形成性（ｓｌＬｒｆａｃｅｔｈｒｏｍｂ
ｇｅｎｉｃｉｔｙ　）＃ｌ長期保存人工心ｒＩＩ４盆使
用せんとする試みを挫折させた。人工心臓により支持さ
れた動物に起こる死の多くは人工心臓の機械的破損によ
って引起、されるのではなくてクロット形成により引起
こされる。透析膜、代用血液（ｂｌｏｏｄ　　５ａｂｓ
ｔｉｔｕｔｅｓ　）及び人工肺はすべてこの問題全共有
する。

一般的な生物学的適合性に対して医薬用途に使用される
材料は望ましくは、 α）　純粋な物質として再生可能な製品であることがで
き、 ｂ）　劣化したり不利に変化することなく製造すること
ができ、 Ｃ）　％定の機能に対して必要な機械的特注及び透過性
特性を有し、 ｄ）　機械的透過性又は表面特性が不利に変化すること
なく滅菌可能でちり、 ｅ）　生物学的環境によって有害な方法で作用されず、 ｆ）　発癌性でないことが望ましい。

血液との直接の接触を包含する用途において制約がある
。物質は１）問題となる程の血栓症全誘発するべきでは
なく、正常なりロッティング機構を妨害するべきではな
く、ｉｉ）細胞要素又は血液の可溶性成分に問題となる
程の損傷勿引起すべきではないら生物学的適合性の荷に
血液適合性の表面、即ち、血液凝固プロセス全活性化せ
ずそして血栓形Ｉｆｃｋ促進しない表面を製造する多く
の試みがなされた。刀１刀＼る試みの例はアニオン性重
合体又は適当に配向したエレクトレット重合体の如き負
に帯電した表面、天然の抗凝固剤ヘパリン又は台底ヘパ
リン類似体、固有に低い表面自由エネルギーを有する荷
電した表面、アルブミン破贋した表面、及び血液から優
先的にアルブミンを吸収すると考えられるある樵のポリ
メタンの如き表１１ｉｌｉｔ包含する。しかしながらす
べては限界’に！している。

表面の性質の一般的事項としてその問題を考察すると、
生物学的膜は体の丁べての区域においてＭ９．であると
いうことは重大な意義があるとの印象ケうけた。丁べて
の生きでいる細胞は外側の膜を有し、細胞内には、種々
の細胞器官、たとえば、ミトコンドリア、核及び内質細
網（ｅ　ｎｄｏ　ｐ　ｌ　ａｓｍｉ　ｃｒｅｔｉｃｒｂ
ｌｗｍ）ｆ区分するように作用する膜がある。様々な細
胞膜が極性脂質（たとえばリン脂質）のマトリックスか
ら構反される。かくして赤血球は、たとえば、リン脂質
二重膜のマトリックス上に構成された細胞壁を有する。

脂質はａ＠壁の外側表面上にりン脂質レシチン（ホスフ
ァチジルコリアＪ及びスフィンゴミエリンと対称に、そ
して細胞壁の内側面上に、６スフアチジルセリン及びホ
スファチジルエタノールアミンと対称に目装置されてい
る。後者は正味の負の荷電を有しそしてそれ自身の上に
血液凝固葡引起丁ことが矧られている。前者＃２沼性イ
オ７纜造を有しへ細湘壁の、外ＩＩＷ畏Ｉ亘χ形底する
・ 本発明は、リン脂質が体全体にわたり生物学的膜の必須
の構成成分であるので、生きてい）粗織と接触するべき
異質物の表面におけるリン脂質によりこれらのＭ＃ｚ与
えられた表面の漢造物（イミテーションＪがそれら″’
ａ−虫物学約物学的適合性めることの実現に基づくもの
である、 これが実際にそのようであり、そして本出願人の提案の
必須事項は含リンオキ、シ酸（ｐｈｏｓｐｈｏ−τｕＳ
　　ＯＺｔ／−αｃｉｄ　）　／−窒素双性イオン基が
分子構造の外側面に存在している人工的生物学的適合性
の表Ｉｆｉ′３−有する物品又に物体を与えることであ
ることｔ見出した。

その最も広い観点において、本発明は下記−紋穴の共役
ジーイン１ ＣＨ，−０−Ｂ。

ＣＨ−０−Ｅ。

式中、Ｂ、及びＢ、の少なくとも一つは式−（ＣＯ）−
Ｘ、−Ｃミｃ−ｃミＣ−Ｙ１式中ｐはＯ又はｌであり、
Ｘｌは直接の結合又は二価の脂肪族又は環状脂肪族基で
あり、Ｙ、にＨ又は−価の脂肪族又は環状脂肪族基であ
り、各Ｂ。

及び／又はＢ２におけるＸｌ及びＹ□の炭素原子の総ａ
ｆ１８乃至２６であり、Ｂ８及びＢ、の他方は（α）式 ％式％ の同−又は相異なる基であるか或いは（６）少なくとも
８個の炭素原子葡含有する脂肪原文に環状脂肪族基であ
り、ｎは０又は１であり、鴬は２．３又に４であり、各
Ｒに独立に１〜４個の炭素原子ｒ金石するアルキル基を
表わ１ 全架梼することにエリ傅られた重合体を提供する。

これらの重合体に構造 式中、ＺＨ、Ｚ２　、Ｚ３及びＺ、の二つぼ前記した如
きＹ１會表わし、２１．２２．２．及びＺ４の池の二つ
は各々−Ｘｌ−（Ｃｏ）ｐ−Ｇ＠表わし、ここでＸｌ及
びｐは前記した通りであり、ＧはＨ２−０− 薗 を表わし、式中、ｎ、ｍ及びＲに前記した通りであり、
架橋した鎖は同−又は・相異なるＧ残基に結合している
、の繰返し単位ｒ通漕含有する。

式Ｉの共役ジーインは好ましくハべ性イオン性基が天然
のリン脂質レジチア及びスフィンゴミエリンのホスフェ
ート結合しｆｃ基、即チ、コリンホスフェート基： 又に関連したホスフィン結合した４： であるところの共役ジーインである。

好ましい双性イオン性基にｍが２であるがｍが３又は４
であることもできる天然に存在する生成物の類似体であ
り、そして各Ｒ基は天然に存在する生成物においてはそ
うであるが、メチルであることが好ましいが、しかしＲ
ｆ−ｌエチル、プロピル又はブチルであることもでき、
そして双性イオン性基は四級窒業において非対称に置換
さｎていてもよい。

本発明の共役ジーインにおいてａ、両Ｂ１及びＢ２は各
々式 ％式％ の基會表わ丁ことも好よ、しい。

実際問題として、対称化合物は合成するのが最も答易な
化合物、叩ちＢ、及びＢ２においてｐ、Ｘｌ及びＹｌが
同一である化合物である。しかしながら、かかる対称性
は本発明に従えば必須ではなく、そして各Ｘ１及びＹ、
が向−又は相異なる場合に８１及びＢ２の一つにおいて
ｐが０であり、Ｂ１及びＢ２の他方においてｐが１であ
る化合物を使用することが可能である。し刀瓢しながら
、か刀λる物質を合成することはエフ困虐である。

本発明の理論的２！！：鑓に関する限り、Ｂ１及びＢ２
における共役ジ−１７系の位置はＭ要ではない。

たとえば、Ｘ、は共役ジーインがカルボン酸エステル又
はエーテルに丁ぐ隣接しているように直接結合であるこ
とができ、そしてたη瓢る場合にＹ。

に少なくとも８ｍの炭素原子を含有する必要があるであ
ろう。共役ジ−イン系が、Ｙｌが水素であり、Ｘ、が少
なくとも８個の炭素原子ｒ含有するようにカルボン酸エ
ステル又はエーテル基から遠い疎水性鎖のその端部にあ
ることも同じく可能である。しか、しながら、以下に更
に詳細に議論する理由によって、共役ジ−イン系がＸｌ
及びＹｌにおいてほぼ同じ数の炭素原子がある工うに疎
水性基の中心に向かって位置するように配置されている
のが最も便利であることが通常見出さｎる。

Ｘｌ及びＹ、は各々好ましくは脂肪族又は環状脂肪族基
である。本発明者の初期の実験は脂肪族又は、螺状脂肪
族基が未分岐炭化水素基である化合物に県中されている
けれども、脂肪族又は譲状脂肪族基が分岐状炭化水素基
であるべきではない理由又は炭化水素鎖上に１置換基、
たとえばアルコキシ置換基又は・〜ロゲン會含有すべき
であるという理由は同もない。下記説明において明らか
となる理由で、共役ジ−イン系が疎水性鎖における唯一
の炭素−炭素不飽ａ全表わすが、もし追加の架橋結合が
所望されるならば、更なる炭素−炭素不飽和が基Ｘ１及
びＸ、に存在することができることが好ましい。

各疎水性鎖が総数１２〜３０個の炭素原子音含有するよ
うに各基Ｂ１及びＢ２におけるＸ、及びＹ、における炭
素原子の総数が８〜２Ｇであることは重要である。もし
基Ｂ、及び／又はＢ、が１２個より少ない炭素原子に含
有するならば得られるｖＩＪ質は非常に低い温度の揚会
紮除いて重合するのが困１碓であることｔ見出し友・笑
際問題として、４Ｂｓ及び／又はＢ、に１６乃至２６個
の炭素原子がある場合に、特に鎖が２２又は２４個の炭
素原子を含有する場きに最も満足すべき結果が得られる
こと全見出した。

Ｘ、及びＹ、における炭素原子の正確な構造配ｔｔａ本
発明にとって直装ではなく、それらの主要な機能は該化
合物に正しい程度の疎水性ｒ付与し、そして都合の良い
温度で重合を許容することであるが、炭素原子が直鎖又
は分岐構造内にあるがＸ。

及びＹ、は翼状脂肪族配置中に３〜８個又は更に多くの
炭素原子ｒ含Ｍする環状脂肪族残基を含むこともできる
ことは必須ではない。

共役ジーインの取合に関しての下記の説明から明らかに
なる０理由によって、両Ｂ、及び、Ｂ２は共役ジ−イン
系が分子内及び分子間重合に参加することができるよう
に共役ジ−イン系に含むことは好よしい。し〃１しなが
ら、卓に分子間重合によって十分な程度の架＠ｒ４るこ
とができ、その場合に、基Ｂ、及びＢ、の一つは共役ジ
−イン系を含有することのみが必須である。Ｂ１及びＢ
２の１しくに炭化水素残基であることができ、これに飽
和されていてもよく又は、孤立もしくは共役ジ−イン系
と共役していてもよいオレフィン又は多分単一のアセチ
ノン性不砲和葡含有していてもよい。

かかる基はやはりエステル又Ｃエーテル基ｒ介してグリ
セロール残基に結合゛して誉り、そして少なくとも１２
個の炭素原子γやはり含有するべきである。

本発明の共役ジーインはそれ自体公知の方法に工よって
調造することができる。故に、成性イオン性基は適当な
ホスホン家父にホスフィン酸或いは工９グリセロールの
α−ヒドロキシ基シ反応させて必要なリンエステル基を
形底することにより導入することができる。基Ｂ、及び
Ｂｔは、カルボン１毀Ｓ、ＣＯυＨもしくはアルコール
Ｂ、ＯＨ又Ｉｒｉ対応する：ｓ、ｃｏｏｎもしくはＢＯ
Ｈ物質或いニ上記カルボン虐又はアルコールの一つのグ
リセロール文にそのエーテル形成性もしくはエステル形
成性誘導体とのエステルもしくはエーテル形成性誘導体
を使用するエステル化又はエーテル化により分子中に導
入することができる。これらの反１Ｇ応は一方ではグリ
セロール又はその誘導体と、他方カルボン又はアルコー
ル及びリンエステルとの間で同時に又はいずれかの順序
で引続いて行なうことができる。本発明の好ましい化合
物である対祢リン脂質の製造に対して、我々は、笑際上
は選ばれた含リン酸又はリン順との必要なダリセロール
モノエステルｒ形成し、次いでこのモノー°リンエステ
ルを選ばれた共役ジ−インカルボン酸の無水物（上記酸
ｒジシクロへキシル−カルボジイミドと処理することに
よって得られたンと反応させ、次いでグリセロールモノ
エステルケ有機溶媒中で且つ有機塩基の存在下に無水物
と反応させるのが便利であることがわたった〇 エステル基の形成のための他の既知の方法も等しく使用
することができる。ｐが０である化合物〒製造すること
が望まれる重合には、対応する常用のエーテル形成性プ
ロセスと使用することができる。

本発明の共役ジーインに、それらｔ化学活性線放射しく
ａｃｔｉｎｉｃ　　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　）、普通は＜
３００ｎｍの範囲の波長の紫外線放射にさらすことにエ
リ重合することができる。刀豐る照射に隣接鎖の共役ジ
−イン系間の架橋盆生成する。これは下記’＋ｌｔ造の
繰返し単位を含有する重合体ｒ生じる。

式中、ＺＨ、Ｚ２　、Ｚ３及びＺ４は前記した通りであ
る。架橋に関与する共役ジ−イン系は非対称が、Ｃ１及
びＣ２は非対称置換の故に相互に同等ではないので梨型
が各鎖のＣ８及びＣ寡聞で又はＣ１及びＣ４間又ぼＣ４
及びＣ４間で超こる刀為どうかに依存シて種々の架橋し
た生反物が生じ得る友とえば、もし架橋がＣ１及びＣ１
間に起こるならば、繰返し単位は である。

重合体に関する我々の構造研究は架橋した重合体が一つ
又は一つエリ多くの可能な架橋した生成物を含有してい
る刀為いない刀為γ未だ確立していないが、それらがす
べての架橋した構造に共通である兵役系 を含有することｔ確立した。

Ｂ１及びＢ、　ｆ１両方共共役ジーイン系ヶ含有する場
合には、本発明の重合体の大抵の用途に幻して望ましい
分子内及び分子間架橋の両方が存在するであろう。この
理由で、Ｂ１及びＢ２は画万共共役ジーイン系ｒ含有す
ることが好ｆしく、そして分子内架橋２巷最適にするた
めに、Ｂ、及びＢ２の共役ジ−イン系の相対位装置がほ
ぼ同じであること、換言すれば共役ジ−イン系にグリセ
ロール残基に接続する炭素鎖に長さにおいて炭素原子が
２個工９多く異なるべきでにないことが好ましい。

本発明の重合体の意１する生物医学的用途の点から、重
合は化学活性線、普通ぼ可視線の波長よ９短い波長勿有
する化学活性線にＩ４露することによって最も良く誘発
されるが、原理的に共役ジ−イン系の重合ｒ誘発するこ
とができることが知られた任意の方法を本発明、の重合
体の製造に対してて使用することができる。共役ジーイ
ンに種々の状態で、たとえば水上の単層として、疎水性
基体たとえばチクロン上の多層として、リポソーム（ｌ
　１ｐｏｓｏｔｎｅ　）として又はＫＢｒ円板内の固体
の状態で重合することができる。

本発明の重合体の主要な用途の一つは、基体、特に血液
又は他の体液又は内部体表面と後に直接接触せしめられ
るこれらの基体上への表面被覆ｒ与えることである。か
η為る表面被覆は、実際上、本発明の共役ジーインで基
体上被覆し、次いで化学活性線に曝露することによって
その場で兵役ジーインに重合丁８ことによって普通は壷
も良ぐ導入される。本発明の共役ジーインは無色の物質
でろるが、重合が進むにつれて、共役ジーインが中間体
カルベンに先ず転化されると先ず′を色範囲にわたって
進行するきゎだった色の変化があり、次いでこの遷移状
態カルベン中間体は赤色又は紫色の着色を有する最終重
合体分子に転化される。結果として、基体上の重合は目
で視て追うことができる。基体はたとえば重合体、金属
、ガラス、セラミック及び多くの他のものであることが
でき、重合体の例はセロファン、ポリ塩化ビニル、ポリ
カーボネート、ポリメチルメタクリレート、ポリエチレ
ン、ポリテトラフルオロエチレン及びシリコーンゴムで
ある。η１かる被覆された基体は人工器官移植組織（ｐ
ｒｏｓｔｈｅｔｉｃ　　ｉｍｐｌａｎｔｓ　）、目移植
粗織（ａｙε　ｉｍｐｌａｎｔｓ　）及びコンタクトレ
ンズ、診断装置、人工肺（ｌｕｎｇ　ｍａｃｈｉｎｅ　
）人工腎臓、縫合糸、人工レンズ、随意に使用できる組
織、培養容器及び他の外科器具、手袋、カブ−チル、恒
久的入口ボート（ｅ？Ｌｔｒｙ　　ｐｏｒｔ　）医薬送
給システム、注射器、子宮内器具、を包含する避妊装置
、及び包帯に・便用することができる。

本発明は角膜内皮損傷（ｃｏｒｎｅａｌ　　ｅｎｄｏｔ
ｈｅ−１ｉａｌ　、ｄａｍａｇｅ　）　ｙ減少させるの
に眼内Ｖ　シス上に表面被６Ｉｒ与えるために特に好適
である。

眼内レンズの最初の移植に白内障抽出と関連した皮肉細
胞損失（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　　ｃｅｌｌ　　１ｏ
ｓｓ　）及び損傷を間、鴨となる程増加させることがで
きる。

この損傷はもしレンズが角膜内皮に接触するならば内皮
表面へのレンズ材料、ポリメチルメタクリレート（ＰＭ
ＭＡ）の瞬間的付着により引起こされるように見える。

電子顕微鏡を使用して、カクフマン（Ｋａｕｆ−ｍａｎ
）及びカフ　７　（Ａ’ｚ　ｔｚ　）　ｔｆｌＰＭＭＡ
７）ｈらりくられたレンズと角膜内皮細胞との間の瞬間
的接触ですら細胞膜が１０．Ｌ表面への付着力為らの引
離しｔ生じ几ことｒ示した。

ときどき起るレンズ−内皮接触における刀１η瓢る細胞
損傷を減じたり防止したりするポリメチルメタクリレー
トの表面変性に関する研究は、この重合体が問題になる
程の短期又は長期の劣化ｒ示すことなく眼内で十分に耐
性でるることが既に示されたので実際的方法であるよう
に思われる。新規物質を導入する変法は同様に広範な安
全及び有効性試験の繰返しｔ必侠とするであろう。

この分野における従来の研究にレンズと内皮との間の付
着が疎水性ポリメチルメタクリレートと親水性眼内組織
との藺の相互作用であるという考えに基づいていた。ポ
リメチルメタクリレート表面を移植に先立ちポリビニル
ピロリドンＣＰＶＰ）又はメチルセルロース溶液中に浸
漬するこ＆に工って該ポリメチルメタクリレートａ面に
現水性にする七、内皮損傷の臨床発生率（ｃｌｉｎｉｃ
ａｌ１ｎｃｉｄｅｎｃｅ　）１ｚ減少させることが示さ
れた。

・　これらの眼内レンズ表面〒−時的に変えようとする
同様な試みにおいて）？ＶＰ、シリコーン油及び血清の
！！！漬溶液が使用された。しかしながら、これらのレ
ンズを手術のすぐ前に溶液に浸漬することは面倒で且つ
不便であり、滅菌性（ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ及び再生可能
性の新しい問題が起こる。

本発明の物質は、本発明の物質のそれらの仮性基が鳳胞
外液（ｅｘｔｒａ　　ｃｅｌＬｌＬｌａｒ　ｆｌｕｉｄ
ｓ　）に面するように眼内レンズケ被榎するのに使用さ
れる。これは生きている組織及び体承ヱの短い又ぼ長い
接触に対してそれｔ好適ならしめそして皮肉細胞膜の引
裂き全滅じるであろう。次いで共役−ジーインは安定化
されて表面が親水性であり同時に生きている組織に生物
学的に適合性の重合体被覆ｒ形成する〇 眼内レンズ又は他の支持体表面は、様々な方法、友とえ
ば溶液又はエマルジョン被覆又はラングミアープロジｘ
７ト（Ｌａｎｇｍｕ　ｉｒ　−ＢＥ　ａｄ　ｇｇ　ｔ　
ｔ　）多層浸漬方法によって被覆することができ配向し
た層を得そして不規則な表面を処理することに可能とす
る＠ 被覆の付着（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　）　ｒ）：、九と
えば被覆されるべき重合体又は他の物質又はたとえば溶
媒処理の後それにより吸収された物質と反応性である基
音脂肪酸の領内又は鎖の末端に有する脂質ｒ使用して該
表面への共有結合により改良することができる。別法と
して、友とえば重合体基体で低分子量溶媒によって膨潤
させて脂肪！残基の脂肪鎖が重合体構造中にそ、の後に
吸収を生じることによって被覆の物理的付着が起こり得
る。

本発明の共役ジーインの他の重要な用途はりボンーム（
ｌｉｐｏｓｏｍｅ　）の製造にある。かかるリボソーム
は生理学的に活性な物質ｒ支持し、その故にたとえば非
代謝性医薬品又は酵素を体へ持続放出させる生物学的適
合性処方ケ与えることができるからである。

刀為かるリポソームは水性媒体中に共役ジ−イン全分散
させ、分散液の温度ｙ２　＋７ポンームの生成が起こる
温度である脂質又はチャツプマン転移温度（１ｉｐｉｄ
　　ｏｒ　　ｃｈαｐｍａｎ　　ｔｒαｎｃｉｔｉｏ、
ｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　）より高イ温度に分散液ノ
温度全上昇させ、次いで分散液を周囲温度に冷却するこ
とにエリ製造することができる。もし生理学的に活性な
物質がリポソーム生成期間中水性媒体中に存在するなら
ば、リポソームは活性物質を含有し、そしてリポソーム
膜構造の代謝の結果として長期にわたり活性物質ｔゆっ
くりと放出する。

かかる取合わせの英際上の利点の一つは、このようにし
て水溶性及び水不溶性活性も質に処方し、又は所望に工
弊≠水溶性及び水不溶性物質を同じ処方内に、水不溶性
物質γ脂肪中に先ず配合することによって処方すること
が可能であるということである。

本発明の共役ジ−インリン脂質又はリポソームの膜を形
成するそれらの重合体ｆｌ　＋７ポソーム内に導入され
た多くの生理学的に活性な物質の補助薬として作用する
ことがしばしば見出さｎる。

リポソーム形成期間中水酸化アルミニウム又に他の補助
薬を水性媒体中に導入することに１ってこれらの処方に
水酸化アルミニウム又は他の補助薬紮配合して生理学的
に活性な物質の活性７強化することも可能である。

リポソーム形成は多層ラメラ構造〒生じるように既知の
方法によって行なうことができる。小さな直径の単一ラ
メラリポソームは多重ラメラリポソーム（ｍｕｌ　ｔｉ
　−ｌａｍｅ　１ｉａｒ　　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　）を
超音波振動に付することによって発生させることができ
る＠より大きい単一ラメラリポソームは共役ジーインｔ
アルコール中に溶解し、次いでこの溶液を注射器に通し
て水性媒体中に注入丁心ことに工９発生させることがで
きる。これらの単一ラ〆う物質は或ふときは微小小胞（
ｍｉｃｒｏｕｅ−ｓｉｃｌａｓ　）として知られている
。

単一ラメラであるｐ又は多層ラメラであり、そして普通
は生理学的活性物質及び場合にエリ補助薬全台む得られ
るリポソームは前記した如きイ已学活性線に曝露するこ
とによって兵役ジーイン系ケ架橋することにより安定化
することができる。かかる照射は分骨間で起こり、そし
て共役ジーインの構造、多分分子内架橋に依存して、本
発明の重合体を含んで成るリポソーム分散液七辱える。

本発明の共役ジーインの架橋の前又は後に本発明のリポ
ソーム分散液中に他のリン脂質のリポソームを含ませる
ことも可能である。

リポソーム形態にある本発明の重合体を処方することは
普通最も便利であるが、共役ジーインヶ大量に重合し、
次いで重合体音押出してリン脂質重合体カプセルを与え
ることも可能である。或いは、本発明のリン脂質重合体
は他のリン脂質ｔペースとするリポソーム系内に含ませ
ることもできる。

抗原物質、ホルモン、酵素及び抗炎症剤の如き医薬を含
む広範に種類の生理学的に活性な物質に本発明のリポソ
ーム分散液内に処決することができる。リポソーム中の
インフルエンザビールス又はそのフラグメント、シフ′
ｙ″リアトキシン、破傷風トキシン及びリポソームにお
けるウィルス源又はバクテリア源から導かれた他の抗原
性物質の配合は、インシュリンの如きホルモン、抗炎症
性ステロイドたとえばコルチコステロイド、たとえばコ
ルチゾン、コルチゾール及びそれらのΔ′−デヒドロー
及び９−フルオロ誘導体；抗炎症性非ステロイド、たと
えばペプチド、免疫抑制性化合物、たとえばメソトレキ
セート、サリチレート、フェニルブタシン、及び加水分
解性酵素に対する抑制剤と同じく現在では文献に十分に
記載されている。

これらの及び他の生理学的活性な物質がいかにしてリポ
ソーム組成物内に導入され得るかについては、たとえば
米国特許第４．１７７、ｌ１３号及び第４．１９９．５
６５号及び西ドイツ公開公報第２２４９５５２号、第２
５２８４１１号、第２６４３６４１号、第２７１２０３
０号及び第２７１２０３１号を参照することができる。

これらの物質は本発明のリポソームに編入することがで
きる生理学的に活性な物質の典型的なものである。

下記実施例により本発明を説明する。

以下の実施例において、ジアセチレンリン脂質は下記の
一般的方法に従って製造された：Ａ、材料 ｌ）長鎖ジアセチレン性脂肪酸（例えばエイコサン酸−
１０，１２−ジイン、トリフサン酸−１０゜１２−ジイ
ン、ペンタコサン酸−１０，１２−ジイン、ヘプタコサ
ンｆｌ−１０，１２−ジイン、）、２）１．３−ジシク
ロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ） ３）無水ｓｎ−グリセロー３−ホスホリルコリン塩化カ
ドミウム錯体（Ｇ　Ｐ　Ｃ、ＣｄＣＬ）４）Ｎ、Ｎ−ジ
メチル−４−アミノピリジン５）無水クロロホルムと四
塩化炭素 Ｂ０反応条件（−処法） 脂肪酸（０，１モル）を無水四塩化炭素（１５０〜２０
０−）に溶解しそしてＤＣＣ（０，０５５モル；無水四
塩化炭素２５−に溶解した）で旭理した。混合物を振と
うしそして１５分間放置した。ジシクロヘキシル尿素の
不溶性沈澱を鑓別した。濾液から溶媒を除去して脂肪酸
無水物を取得した。この工程では定量的収量が得られた
。

脂肪酸無水物を無水クロロホルム（ｌｏＯａｊｔ）中に
溶解し、ＧＰＣ，ＣｄＣＬ　（０，０２モル）を加え、
次いでＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジンを加えた。反応
フラスコを乾燥窒素で置換し、シールして光から保護し
た。次いで混合物を３０〜４８時間撹拌しその後蒸発乾
固せしめた。残液を瀦騰アセトン（１５０ｄ）と混合し
、室温まで冷却し。

てそして溶媒をデカントした。触媒（Ｎ、Ｎ−ジメチル
アミノピリジン）の未反応脂肪酸無水物をさらに除去す
るため、この方法を２度繰返した。

−緒にしたアセトン抽出物をリン脂質の不存在のためＴ
ＬＣでテストした。残渣をクロロホルム（２００ｍＪ２
）に懸濁させそして氷冷した塩酸（５％；１００ｍ１Ｘ
２）で抽出した。明澄なりロロホルム層を集めそして一
緒にした塩酸層をクロロホルム（ｌｏａｄ）で−回抽出
して上記主クロロホルム抽出物と混合した。それを乾燥
するまで蒸発させ、クロロホルム（２５ｄ）に再度溶解
せしめそしてシリカゲル（キーゼルゲル６０．７０−２
３０メツシュ；イー、メルク：５０１）のカラムを通し
た。クロロホルム：メタノール二本の混合物　（７０：
　３０　：　５）を用いて溶離を行った。

溶離物（各々２００〜２５０ａ＋ｊｌ）の部分を集め、
約２０−まで蒸発させ、そしてＴＬＣでテストした（デ
イットマーモリブデンブルー試薬で見えるようにした）
。

ジアセチレンリン脂質を含有する部分を一緒にし、蒸発
させて乾燥させそして最後にベンゼン溶液で凍結乾燥し
た。

これとは別に、全反応混合物を、アセトン抽出の変りに
、分離ロートに移し、さらにクロロホルム（１５０−２
００−）で希釈しそして氷冷した塩酸（２Ｘ１５０ｍｊ
！；５％）で抽出し、溶媒を蒸発させ、残渣をクロロホ
ルム（２５ｍｌ）に溶解させそして上記と同様にしてシ
リカゲルカラムを通して分画した。

Ｃ０収率は使用したＧ　Ｐ　Ｃ、ＣｄＣＱｘの量に基づ
いて４０〜６０％。

Ｄ、Ｒｆ値は鎖長に依存して０．４９０〜０．５００（
上記した溶媒；カラム中で使用）。

参考例１ （ａ）　　ジアセチレン虐の合成 ＨＣ５Ｃ（ＣＨ，）、Ｃｏ、Ｈ（Ａ） ＨＣ二Ｃ（ＣＨ２）　、ｎＣＨ。

ｎ＝９．１１ ３、　　＋Ｃ，ｔｔ、ＣＨ，ＭｇＥｒ Ｂｒ　Ｍｇ（、＝　Ｃ（ＣＨ２）、ｎＣＨ３４、＋Ｉ２
　　　ＩＣ＝Ｃ＜ＣＨ２）ｆｉＣＨ８＜Ｂ）−一→　　
　　　　　　本 ＣＨ，（ＣＨ２）　ＣＴＣ−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ，）、Ｃｏ
、Ｈ（Ｃ）（４）　　２　（Ｃ）　　Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−
Ａ！アルケン及びアルケン酸７１モル当量の臭素をゆっ
くりと加えることによって石油エーテル中において臭素
化した。ジブロモ誘導体ｔエタノール中で過剰のＫＯＨ
と還流することによってジプロ誘導体に友だちに脱臭化
水素化した。アルコール葡留去しそして希ＨＣＬ′？！
−加えた後、アルキン孕エーテル抽出により単語しそし
て真空蒸留（１０−”ｍｍＨｇ　）に−ＣりｆｆＩ製Ｌ
７’Ｃ０非対称性コドキーヴイクッ　カップリング（Ｃ
ｈｏｄｏｋｉａｗｉｃｚ　　ｃｏｕｐＬｉｎｇ　）の、
ため、反応成分の一つは′Ｂ９化しなければならない。

故に１−アル午ンｒ乾燥ジエチルｘ−ｆル（ＣａＨ２−
処理した）中の僅で１に過剰の臭化エチルマグネシウム
に卯えた。生成したア°セチレン性グリニヤー試薬を添
加し７’ＣＩ　ｔ　と直接に反応、させて所望の・・口
誘導（４髪得た。反応フラスコの内容物ｒ過剰の希酢酸
中に注ぎモしてヨー化アセチレンｒジエチルエーテル中
に抽出した。未反応のＩ、にチオ硫酸塩洗浄に１！７除
去し、そしてジエチルエーテル全蒸発さぜた後真窒蒸留
にＪ−ＯＮ製？！−達成し比。

アセチレンカップリング反応の詳ａｈ広範に検討されて
いる。希ＫＯＨ溶液に溶解した酸に痕跡量のヒドロキシ
ル塩酸塩及び水性エチルアミン中に溶解し次０．２５モ
ル当量のＣｕ２Ｃｌ２２加えた。

次いでヨ９化アルキン（１モル当ｆｋ）−時に少量ずっ
’に７Ｊｌｌえｍ０始めから黄色の溶液は緑色に変わっ
た。ア、キンの次の添加前に数滴の１０％ヒドロキシル
アミン溶液を刃口えることによって回復した。最後に、
反応混合物に酸性にし、そして生成物ｔジエチルエーテ
ル中に抽出した。ジイン酸ｒ４０−６０℃の石油エーテ
ルから再結晶した。

ばは容易に重合した。紫外線及び赤外分光法はそれぞれ
共役三重結合及びカルボン酸基の存在を示した。

ｂ）　リン脂質の合成 ｄｋ塩化メチレン中に溶解し、０．５５モルの当量のジ
シクロへキシルカルボジイミドを刀ｎえることにＬつて
無水物に転化した。無水物に赤外分光法により同足しに
０ リン脂質はグプタ等（Ｇｕｐ　ｔ　ａ　　ｅ　ｔ　　Ｃ
１）の方法に使用して合成し友。グリセロホス７アチジ
ルコリンーＣｄＣｌ２錯体（１，０モル当ｉ＃）葡乾燥
クロロホルム＜ＰｔＯｓ処理した】中で３０時間無水物
（λ５モル当電電及び４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリ
ジン（ｚＯ当ｊｔ）と攪拌した。溶媒の除去後、メタノ
ール／クロロホルム／水（５：４：１．ｖ７ｖ）に可溶
な画分にレキシンｌ−３ｏ。

（ｆｔｅｘｙｎ　　Ｉ　−３００）−４ｆ脂のカラムｒ
下へ通過させた。今度はＣｄＣｌ２及びアミノ−ピリジ
ンを含まない生成物ｔセファデックスＬＨ−２０（Ｃｅ
ｐｈａｄｅｘ　　ＬＨ−２０）によるクロマトグラフィ
に工って構製した。出発アルケンを基準とする全収″４
は５％である。

生成物及びジパルミトイルホスファチジルコリン〔ビュ
リス　グレード（ｐｕｒｉｓｓ　　ｇｒａｄｔ）Ｆｌｕ
ｋａＥｋｆｆＪ層クロマトグラフィー〔メルクシリカゲ
ル　グレート；尋媒、クロロホルム／メタノール／水（
６５：３５　：４、Ｖ／Ｖ）Ｅ及び赤外分光法にエリ比
救した。Ｒ１値及びスづクトルは同一であった。生成物
にディットマー試薬（Ｄｉｔｔｍｅｒ　　ｒｅａｇｅｎ
ｔ　）Ｔ噴ｄした場合に正の試験（ｐｏｓｉｔｉｎｅ　
　ｔｅｓｔ　）（ｌｊ色に変った］を与えた。紫外線分
光性による横歪は共役した三重結合が存在していること
ｒ示した。生成物にリン脂質１．２−ジトリコサノイル
（Ｃ２３３−及び１．２−ペンタコサノイル（Ｃ□）−
１０，１２−ジイン−５ｎ−グリセロ−３−ホスホリル
コリ　。

ンであった。

これらのジアセチレンリン脂質（Ｃ２，及びＣ２５）に
対する転移温度及びエンタルピーは以下に示されるニ ジアセチレンリン脂質 Ｃ０Ｃ□　ＤＭＬ　　ＤＰＬ　　　ＤＳＬ　　　ＤＢＬ
メチレン単位の数　　１７　　１９　　１２　　１４　
　１６　　２０転移温度（’０）　　　　　４２　　５
２　　２３　　４１　　５８　　７５“ジアセチレンリ
ン脂質及び四つの飽和ホスファチジルコリン、ｃ２ｓジ
乙セチレン、Ｃ□ジアセチレン、シミリストイル（Ｄ　
Ｍ　Ｌ　）、ジパルミトイル（Ｄ　Ｐ　Ｌ　）、ジステ
アロイル（ＤＳＬ）及びジベヘノイル（ＤＢＬ）ホスフ
ァチジルコリンの転移温度及びエンタルピー” 参考例２ 参考例１と同様にして、ジアセチレンリン脂質（Ｃ□）
およびジアセチレンリン脂質（Ｃｔｒ）ヲ得た。

これらの転移温度は上記の順にそれぞれ２２℃および６
３℃であった。

実症例！ 参匁例１に使用された方法全変性してＣｚｓ’）ン脂質
の共役トリーイン肩似体を生成した。アルキノイド７フ
ルボン＃ＲＨＣミＣ−（ＣＨり、Ｃ０ＯＨを参名例１に
記載の如くして製造した。段階１０ビス−（クロロメチ
ルＪ−アセチレンｒテトラヒドロフラン及びヘキサメチ
ルホスホルアミ１９３モルのプチルーリチ９ムと反応さ
せてジアセチレンＨＣミｃ−ｃ＝ｃθＬイ０のグチ９ム
塩全得、次いでこれ盆臭化ｎ−オクチルと反応させて約
４０％収率でドデカジ−イン−１，３髪形成した。

次いでドデカジ−イン−１，３ｆＮａＯＩと反応させて
ｌ−ヨード誘導体ＣＨｓ−（ＣＨ２）、ｔ−ｃ−＝Ｃ−
Ｃ＝Ｃ−１−（得、これ２次いで実施例１段階３に示さ
れた条件下に前記したアルキン酸と反応させて共役トリ
ーインＣＨ，−（ＣＨ２）、−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ
（ＣＨ２）、ＣＯ０Ｈ−（得た。

この共役トリアセチレンｒＲは参考例１の段階３で得ら
れ友共役ジアセチレンｆＩｌよりもＵＶスペクトルスペ
クトルにおける高いピーク全示し、そのより高い程度の
共役ｒ示す。共役トリアセチレンＲ”ｒｅ’　２−例１
の段階４に記載の方法によってその無水物に転化し次い
で無水物を参方例１の段階５に記載のグリセロホスファ
チジルコリンのＣｄＣｌ。

錯体と反応させて共役トリーアセチレンリン脂質ｒ形灰
し、これは活性線にさら丁と重合する。

共役トリーアセチレンリン脂質はトリーアセチレンカル
ボンｆＲ’ｒ、７′″トラヒドロフラン中のケトンをジ
メチルスルホキシド中でリン脂質のＣｄＣ，１２錯体と
反応させて兵役トリーアセチレンリン脂質を得ることに
よっても１造され′ｆｃ。

共役トリーアセチレンｔ’１２に、酸ＨＣ＝Ｃ。

（Ｃｌ２）、Ｃｏ０Ｈ−（アセチレン結合のところでヨ
９化し、ヨード−デシン１％ｌ−ジーインＣＨ，。

（ＣＨ２）ツーＣ；Ｃ−（５ＣＨと前記カップリング方
法にエリ反応させることエリ取る方法によっても製造さ
れた。

実施例２ 参房例１のジアセチレンリン酸脂質ｒラングミアーブロ
ジェット法ｒ使用してポリメチルメタクリレートからつ
くらｎた眼内レンズに被覆するのに使用した。この方法
において、脂質の表１ｆｉ層は空気−水界面において形
成される。親水性極性表面を有する最終脂質層が必要で
ある。

リン脂質単層にＣｄＣｌ、含有純水＜ｘｌ／１−ＣｄＣ
ｌ、、水の抵抗１５ＭΩ／ｃＩ！Ｌ有機汚染物孕検出で
きないコ上に広げる。レンズｔ〜６０℃の洗剤溶液（Ｒ
ＢＳ　３５　）中で２時間ソーキングすることによって
清浄化し、次いで純粋中で完全に丁丁いだ。単層は比較
的高い速度（自由に落下する又な〜７３傭／分ンで下向
きに単層食通して繰返し浸漬することによって移行せし
められる。上向きの移動期間中のみ堆積が起こる。被覆
された物体が空気中へと抜き出されるとき、それは最終
層が外側親水性我面會有する工うに０．３α／分又はそ
れ以下の速度で抜き出される。次いで被覆したレンズに
その面からｌ　２００ｕｗ／ｃｕｔ　１５．２ｃ＋＋＋
のエネルギー出力で２５４ｎｍにおいてピーク放射強度
を有する紫外線ランプで室惑で１０秒間照射し友。或い
は、最終外側表面として所望の親水性極性表面ｒ製造す
るために、ａＦＩｉｔ所望の数の単層のＪの間脂質ノー
の照射による重合は水の下で行なうことができ、レンズ
は氷表面が完全に洗浄されて後抜き出され祷る。

脂質層の表面圧力ぼこれらの鳩の破帳圧に近い３５ダイ
ン／ｃｍであるように選ばれ、温間は２０〜２２℃（室
＠］であった。不純物の影響を最小にするために、サブ
７エーズ、（５ｕｂｐｈａｓ　ｅ　）（ｌｌｌ／ｌ）に
ＣｄＣ１，１（′卯えそして新たな噴霧単層のみケ使用
することが必要である。水にミリホ７　（Ｍ７１１　　
’ＰＯｒｌｌ　ｉ　７に櫂４システムにＬｖａ製し、製
造後唯ちに使用して再汚染全最小にする〇外釜表面の親
水性は水滴の表面穴がりの程度として定義されｆＣ，＠
水接触角に測定することにエフアッセイされる。水は標
準（疎水性）ＰＭＭＡの表面上にビーズ耐形成し、しか
し、被覆された表面では、それは約１０秒問直がりそし
て非常にゆっくりと押し流される（ｒｏｌｌｓｏｆｆ）
。この挙動は被覆されたパースペックス（ｐｅｒｓｐｅ
：ｘ　）が数週間後空気上に保存され又は数日水中に浸
される場合変化しない。安定性は、数日間７０％ＮαＯ
Ｈ溶液中の浸漬に含む滅菌方法が表面特性【変えないと
い５事実力島られかることができる。

γ線照射ｒ使用する眼内レンズ上への脂質重合体の恒久
的グラフト化はレンズ表面の位妙る親水性変性を生じる
。変性されないＰＭｕＡＫ対する水接触角は７２″であ
り、グラフト化の後この角度は減少する（広がりが増加
した］。

これらのレンズは臨宋試験に付した。被覆されたレンズ
は皮肉損傷を起こし７’（リニケ月の試検期間にわ７？
：、！７患者に何ら有′害な作用ｒ生じることなく人間
に導入された。

実施例３ レンズに柔軟なテフロンシート０．１ｍ厚さにより置換
えることにエリ実施例２に記載の被覆方法ｒ繰返した。

被覆されたシートを実施例２に記載の如くして空気中で
重合した。次いで柔軟なシートを管に底形し、血坂ｒ管
に導入した。トロンビン活注′に誘発する表面の能力の
目安として試験管内フィブリノペプチドＡ発生試験を使
用した。表面は血液クロッティング全開始する順向に殆
んど示さず、この点で未処理のテフロン材＄＋エリも丁
ぐれていた。

実施例４ レンズをシリコーンコンタクトレンズ、ガラスシート及
び酢酸セルロース透析膜〔クズロファン（Ｃｕｐｒｏｐ
ｈａｎｅ）　〕ＫＬｔ）ＲＩＡＬ；ｂことＶｃＬＱ実施
例２の・被覆方法を繰返した。照射後の目による検査は
これらの三つの基体の各々に幻する重合体フィルムの形
！ｙ、に示した。被覆された基体上の接触角測定は各場
合に親水性外側表面が形成されたことｔ示した・ 実施例５ 勢選例１のジーＣ２３−ジー共役リン脂質ｒ５０℃で水
中に導入した。これはそのリボゾーム形成温度エリ高い
温度であり、次いて分散液ｔ、もし電子懸微鏡が多重ラ
メラリポソームの存在ｒ示す場合には室温に冷却し友。

次いでこの分散成金紫外線で照射した色の変化が見られ
た時は共役ジイン系の架橋による重合を示す。やはり同
定されたスペクトル変化はこの有機物質の増加した共役
路と合致していた。

この方法２繰区して酵素的に活性な固有タンパク質Ｃａ
　、”　”Ａ　Ｔ　Ｐ−７−ゼ（１ｎｔｒｉｎ！ｔｉｃ
ｐｒｏｔｅｉｎ　　Ｃａ”ＡＴＰ−ａｓｅ）２＠有する
水性媒体中に共役リン脂質ｘ４人した。得らｎるリボゾ
ームのその後の検査にリポソームがいくらかの酵素がリ
ポソーム内に導入されたことを示す酵素活性を示した。

４１例１のジーＣ□共役すン脂質ｒ使用して上記の方法
を繰返したが、それヶ導入した水性体の温度はジ−Ｃ２
５物質のリボンーム形成温度より高くするために６０℃
に上げ比。この場合もやはり、リポソームにおいて酵素
活性が検出されたことが見出された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｂ＿１及びＢ＿２の少なくとも一つは式−（ＣＯ
   ）＿ｐ−Ｘ＿１−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−Ｙ＿１式中、ｐは０
   又は１であり、Ｘ＿１は直接の結合又は二価の脂肪族又
   は環状脂肪族基であり、Ｙ＿１はＨ又は一価の脂肪族又
   は環状脂肪族基であり、Ｂ＿１及び／又はＢ＿２は各々
   におけるＸ＿１及びＹ＿１の炭素原子の総数は８乃至２
   ６である、の基であり、Ｂ＿１及びＢ＿２の他方は（ａ
   ）式 −（ＣＯ）＿ｐ−Ｘ＿１−Ｃ≡Ｃ−Ｃ≡Ｃ−Ｙ＿１式中
   Ｘ＿１、Ｙ＿１又はｐは前記した通りである、の同一又
   は相異なる基であるか或は（ｂ）少なくとも８個の炭素
   原子を含有する脂肪族又は環状脂肪族基であり、ｎは０
   又は１であり、ｍは２、３又は４であり、各Ｒは独立に
   １〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を表わす、 を架橋することにより得られた重合体。 ２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｚ＿１、Ｚ＿２、Ｚ＿３及びＺ＿４の二つは特許
   請求の範囲第１項￥に￥記載した通りのＹ＿１を表わし
   、Ｚ＿１、Ｚ＿２、Ｚ＿３及びＺ＿４の他の二つは各々
   −Ｘ＿１−（ＣＯ）＿ｐ−Ｇを表わし、ここでＸ＿１及
   びｐは特許請求の範囲第１項に記載した通りであり、Ｇ
   は ▲数式、化学式、表等があります▼ を表わし、式中、ｎ、ｍ及びＲは特許請求の範囲第１項
   に記載した通りである、 を表わす、 の繰返し単位を含有し、架橋した鎖は同一又は相異なる
   Ｇ残基に結合している重合体。