JPH012587A - 微生物を用いたエイコサペンタエン酸含有脂質の製造方法 - Google Patents
微生物を用いたエイコサペンタエン酸含有脂質の製造方法Info
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- JPH012587A JPH012587A JP62-156693A JP15669387A JPH012587A JP H012587 A JPH012587 A JP H012587A JP 15669387 A JP15669387 A JP 15669387A JP H012587 A JPH012587 A JP H012587A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、エイコサペンタエン酸（以下ＥＰＡという）
含有脂質又は、ＥＰＡの製造方法、及びそれらを製造す
る微生物に関する。
含有脂質又は、ＥＰＡの製造方法、及びそれらを製造す
る微生物に関する。
（従来の技術）
ＥＰＡに代表される多価不飽和脂肪酸は、生体膜の構成
成分として重要な役割を担っている。またこれまでに知
られているＥＰＡの薬理作用には、以下のものが知られ
ている。 ■血小板凝集抑制作用（血栓熔解作用） ■
血液中の中性脂肪低下作用 ■血液中のＶＬＤＬ−コ
レステロール、ＬＤＬ−コレステロール低下作用、ＨＤ
Ｌ−コレステロール増加作用（抗動脈硬化作用） ■血
液粘度低下作用 ■血圧降下作用 ■抗炎症作用■ 抗
腫瘍作用、さらに、プロスタグランジン−族の生成に際
し基質となり、ヒトを含む高等は乳動物の体内で必須的
な機能を発揮する。特にＥＰＡはタイプ３のプロスタグ
ランジンの生成の際の基質として重要であって、血小板
の凝集抑制作用があり、血栓症の治療及び予防剤として
の応用が検討されている。さらにＥＰＡは、血仕コレス
テロールレベルの低下に寄与する多価不飽和脂肪酸の中
でも特にその活性が高く、通常の植物油に含まれるリノ
ール酸などよりも迩かに有効である。また魚類等の必須
栄養素としても知られている。
成分として重要な役割を担っている。またこれまでに知
られているＥＰＡの薬理作用には、以下のものが知られ
ている。 ■血小板凝集抑制作用（血栓熔解作用） ■
血液中の中性脂肪低下作用 ■血液中のＶＬＤＬ−コ
レステロール、ＬＤＬ−コレステロール低下作用、ＨＤ
Ｌ−コレステロール増加作用（抗動脈硬化作用） ■血
液粘度低下作用 ■血圧降下作用 ■抗炎症作用■ 抗
腫瘍作用、さらに、プロスタグランジン−族の生成に際
し基質となり、ヒトを含む高等は乳動物の体内で必須的
な機能を発揮する。特にＥＰＡはタイプ３のプロスタグ
ランジンの生成の際の基質として重要であって、血小板
の凝集抑制作用があり、血栓症の治療及び予防剤として
の応用が検討されている。さらにＥＰＡは、血仕コレス
テロールレベルの低下に寄与する多価不飽和脂肪酸の中
でも特にその活性が高く、通常の植物油に含まれるリノ
ール酸などよりも迩かに有効である。また魚類等の必須
栄養素としても知られている。
このように、ＥＰＡがその血栓防止作用あるいは脂質低
下作用に基づく健康食品あるいは医薬品としての可能性
がデンマークのグイヤーベルグ（Ａｍ、Ｊ、ＣＩ ｉｎ
、Ｎｕｔｒ、、２８，９５８゜１９７５）の疫学調査に
より明らかにされているが、その化学構造から明らかな
ように化学合成することは、極めて困難である。このよ
うなことから我が国においてもＥＰＡを多（含有するイ
ワシ、サバ、サンマ等の青背魚の摂食が推奨されるよう
になってきた。
下作用に基づく健康食品あるいは医薬品としての可能性
がデンマークのグイヤーベルグ（Ａｍ、Ｊ、ＣＩ ｉｎ
、Ｎｕｔｒ、、２８，９５８゜１９７５）の疫学調査に
より明らかにされているが、その化学構造から明らかな
ように化学合成することは、極めて困難である。このよ
うなことから我が国においてもＥＰＡを多（含有するイ
ワシ、サバ、サンマ等の青背魚の摂食が推奨されるよう
になってきた。
今日、健康食品として市販されているＥＰＡは、そのほ
とんどが煮取法によって得られ′た魚油の分別物であっ
て、そのＥＰＡ含量は１０〜３０％程度である。煮取法
によって抽出される魚油は構成脂肪酸として多種類の脂
肪酸を含む混合グリセリドであって、各成分を単離精製
することが困難であるばかりでなく、ＥＰＡはすべてシ
ス形の二重結合を５個有する炭素数２０の直鎖の多価不
飽和脂肪酸である為に、極めて酸化され易い不安定な脂
肪酸であり、魚油からＥＰＡをｔ＝ｔｍする場合には酸
素・光・熱等を避けて行なう必要がある。さらに、これ
ら魚油ＥＰＡの分別に使用されたアセトン、メチルエチ
ルケトン等各種の有機溶剤は通常減圧下に除去されるが
、その完全除去は技術的及びコスト的に問題点が多い。
とんどが煮取法によって得られ′た魚油の分別物であっ
て、そのＥＰＡ含量は１０〜３０％程度である。煮取法
によって抽出される魚油は構成脂肪酸として多種類の脂
肪酸を含む混合グリセリドであって、各成分を単離精製
することが困難であるばかりでなく、ＥＰＡはすべてシ
ス形の二重結合を５個有する炭素数２０の直鎖の多価不
飽和脂肪酸である為に、極めて酸化され易い不安定な脂
肪酸であり、魚油からＥＰＡをｔ＝ｔｍする場合には酸
素・光・熱等を避けて行なう必要がある。さらに、これ
ら魚油ＥＰＡの分別に使用されたアセトン、メチルエチ
ルケトン等各種の有機溶剤は通常減圧下に除去されるが
、その完全除去は技術的及びコスト的に問題点が多い。
医薬品としてのＥＰＡは、様々な方法によって抽出さた
魚油を酵素的にもしくはアルカリ条件下で処理して遊離
脂肪酸まで加水分解するか又は該遊離酸をメチルもしく
はエチルエステルに変じた後、これらを低温分別結晶法
、尿素付加法、減圧蒸留法又は、逆相クロマト法等によ
り更に精製してＥＰＡ濃度を９０％以上としたものが多
い、しかし、これらの方法を用いて得られたＥＰＡ濃縮
物は、工程中に各種の有機溶剤が使用されたりまたは、
２００℃近い高熱を加えられたりするため、有機溶剤の
残留やＥＰＡの重合、異性化あるいは酸化等による変質
の懸念をはらんでいる。更に、魚油等をＥＰＡの原料と
して用いた場合、心臓疾患の原因の一つとして疑われて
いるトコセン酸等の除去が困難であるため、健康食品、
医薬品等に利用する上で問題点を残している。
魚油を酵素的にもしくはアルカリ条件下で処理して遊離
脂肪酸まで加水分解するか又は該遊離酸をメチルもしく
はエチルエステルに変じた後、これらを低温分別結晶法
、尿素付加法、減圧蒸留法又は、逆相クロマト法等によ
り更に精製してＥＰＡ濃度を９０％以上としたものが多
い、しかし、これらの方法を用いて得られたＥＰＡ濃縮
物は、工程中に各種の有機溶剤が使用されたりまたは、
２００℃近い高熱を加えられたりするため、有機溶剤の
残留やＥＰＡの重合、異性化あるいは酸化等による変質
の懸念をはらんでいる。更に、魚油等をＥＰＡの原料と
して用いた場合、心臓疾患の原因の一つとして疑われて
いるトコセン酸等の除去が困難であるため、健康食品、
医薬品等に利用する上で問題点を残している。
一方、最近、不完全な精製・濃縮では、魚臭が残るなど
の欠点を有した魚油からの抽出法を改善することを目的
として、クロレラ、単細胞部類モノダス、ユーグレナあ
るいはけい藻等微生物を用いたＥＰＡの生産方法が散見
される様になり、微生物を利用したＥＰＡ生産が注目さ
れてきている。
の欠点を有した魚油からの抽出法を改善することを目的
として、クロレラ、単細胞部類モノダス、ユーグレナあ
るいはけい藻等微生物を用いたＥＰＡの生産方法が散見
される様になり、微生物を利用したＥＰＡ生産が注目さ
れてきている。
最近では、ゲラ−マンとシェレンク（Ｊ、Ｌ。
Ｇａｌｌｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｈ，５ｃｈｌｅｎｋ
。
。
ＢＢＡ、５７３．２３．１９７９）及び、山田等（昭和
６１年度日本醗酵工学会大会、１９８６）の発表で、Ｂ
ＰＡを産生ずるかび（糸状菌）についての報告がなされ
た。
６１年度日本醗酵工学会大会、１９８６）の発表で、Ｂ
ＰＡを産生ずるかび（糸状菌）についての報告がなされ
た。
これら微生物によるＥＰＡ生産は、その脂肪酸組成から
、分離精製が比較的容易なこと、また、培養制御により
、ＥＰＡ生産をコントロールしやすい等の長所がある。
、分離精製が比較的容易なこと、また、培養制御により
、ＥＰＡ生産をコントロールしやすい等の長所がある。
しかしながらこれらの糸状菌を用いた場合には、バクテ
リア等に比較して、培養時間が長く （７日〜１ケ月程
度）、生産性の向上が大きな問題点として残っている。
リア等に比較して、培養時間が長く （７日〜１ケ月程
度）、生産性の向上が大きな問題点として残っている。
（本発明が解決しようとする問題点）
以上述べて来た様に、健康食品または、医薬品として考
えられているＥＰＡの、魚油からの抽出生産、あるいは
、藻類やかび等の培養による生産には、いくつかの問題
点が有る。これらのことから、本発明の目的は、精製が
容易で純度の高いものが得られ、かつ培養時間が短く培
養制御が容易な、バクテリアを利用したＥＰＡ含有脂質
の醗酵生産方法を見出す事にある。
えられているＥＰＡの、魚油からの抽出生産、あるいは
、藻類やかび等の培養による生産には、いくつかの問題
点が有る。これらのことから、本発明の目的は、精製が
容易で純度の高いものが得られ、かつ培養時間が短く培
養制御が容易な、バクテリアを利用したＥＰＡ含有脂質
の醗酵生産方法を見出す事にある。
（問題点を解決するための手段）
本発明者等は、ＥＰＡ産生能を有するバクテリアを、広
く海洋に求めて鋭意研究した結果、パスツレラ（Ｐａｓ
ｔａｕｒｓｌｌａ）属に属するバクテリアがＥＰＡを生
産することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成
した。
く海洋に求めて鋭意研究した結果、パスツレラ（Ｐａｓ
ｔａｕｒｓｌｌａ）属に属するバクテリアがＥＰＡを生
産することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成
した。
従って、本発明は、パスツレラ属に属し、ＥＰＡ含有脂
質を生産することが出来る微生物を培養する事によって
ＥＰＡ含有脂質を生成蓄積せしめ、所望によりＥＰＡを
単離する事を特徴とするＥＰＡ含有脂質又はＥＰＡの製
造方法、及びＥＰＡ含有脂質を生産する事ができるパス
ツレラ属微生物を提供するものである。
質を生産することが出来る微生物を培養する事によって
ＥＰＡ含有脂質を生成蓄積せしめ、所望によりＥＰＡを
単離する事を特徴とするＥＰＡ含有脂質又はＥＰＡの製
造方法、及びＥＰＡ含有脂質を生産する事ができるパス
ツレラ属微生物を提供するものである。
（具体的な説明）
（１１微生物
本発明において使用する微生物は、パスツレラ属に属し
、ＥＰＡ又はこれを含有する脂質を生産する事が出来る
ものであればよく、このような微生物は自然界から新た
に分離する事が出来る。
、ＥＰＡ又はこれを含有する脂質を生産する事が出来る
ものであればよく、このような微生物は自然界から新た
に分離する事が出来る。
パスツレラに属する微生物の例として、パスツレラ・ヘ
モリティカ（Ｐａｓｔｓｕｒｅｌｌａｈ ａ ａｍｏ
ｒ￥ｔ ｌ ｃ ａ）を挙げる事が出来、新菌株として
本発明者等が分離した、パスツレラ・ヘモリティカ５Ｃ
ＲＣ−２２８８を挙げる事が出来る。
モリティカ（Ｐａｓｔｓｕｒｅｌｌａｈ ａ ａｍｏ
ｒ￥ｔ ｌ ｃ ａ）を挙げる事が出来、新菌株として
本発明者等が分離した、パスツレラ・ヘモリティカ５Ｃ
ＲＣ−２２８８を挙げる事が出来る。
この新菌株は次式のように分離した。
次の第−表に示す組成の培地を調整した。
第−表
肉エキス １．０％
ヘプトン １．０％
ＮａＣ１０，５％
水道水 ｐＨ７，０
この寒天平板培地に各地の海洋より採取した海洋性生物
体サンプルを滅菌した生理食塩水で適度に希釈したもの
を接種し、２５℃で１〜２日間培養した。この寒天平板
培地に出現したコロニーを同じ培地組成の斜面培地に釣
菌した。
体サンプルを滅菌した生理食塩水で適度に希釈したもの
を接種し、２５℃で１〜２日間培養した。この寒天平板
培地に出現したコロニーを同じ培地組成の斜面培地に釣
菌した。
このようにして各地の海洋より採取した海洋性生物体サ
ンプルから多数の菌株を分離した０次に表の培地より寒
天を抜いたものを試験管に５−ずつ分注し、同様に滅菌
した。それぞれの菌株をこの培地で２５℃、１〜２日間
培養した。得られた培養液より、後記の方法によりＥＰ
Ａ産性能を検定した。このようにして、ＥＰＡを顕著に
生産する下記の菌株を北海道余市沖より採取した海洋性
生物体サンプルより得た。
ンプルから多数の菌株を分離した０次に表の培地より寒
天を抜いたものを試験管に５−ずつ分注し、同様に滅菌
した。それぞれの菌株をこの培地で２５℃、１〜２日間
培養した。得られた培養液より、後記の方法によりＥＰ
Ａ産性能を検定した。このようにして、ＥＰＡを顕著に
生産する下記の菌株を北海道余市沖より採取した海洋性
生物体サンプルより得た。
この菌株は、次のような菌学的性質を有する。
観察項目
ａ） 形態
ｌ 細胞の形 短かん菌大きさ
０．６Ｘ１．２μｍ２ 多形性の有
無 無 ３ 運動性の有無 無 鞭毛の着生状態 −本・ＦＩｊ口毛４ 胞
子の有無 無 ５ グラム染色 陰性６ 抗酸性
陰性ｂ） 各培地に於ける生育状態 １ 肉汁寒天平板培養（２５℃、２日間）イ）コロニー
形状（直径） １．５Ｘ１．５ｍｍ口）コロニ
ーの形 円形 ハ）コロニー表面の形状 平滑 二）コロニーの隆起状態 台状 ホ）コロニーの周縁 金縁 へ）コロニーの色調 黄褐色ト）コロニーの
透明度 半透明チ）コロニーの光沢
光沢 り）可溶性色素の生成 無 ２ 肉汁寒天斜面培養（２５℃、２日間）イ）生育の良
否 良好 口）コロニーの光沢 光沢 ３ 肉汁液体培地（２５℃、２日間） イ）表面の生育 側 口）濁 度 濁る ハ）沈 殿 粉状 二）ガス発生 無 ４ 肉汁ゼラチン（２５℃、２日間） ゼラチン液化 液化 ５ リドマスミルク 還元Ｃ） 生理学的
性質 １ 硫酸塩の還元 ＋ ２脱窒 − ３ＭＲ− ４ＶＰ −５
インドール生成 − ６硫化水素の生成 十 ７ デンプンの加水分解 − ８クエン酸利用 イ）Ｋｏｓｅｒ −口）Ｃｈｒｌｓ
ｔｅｎｓｅｎ − ９硝酸塩の利用 − １Ｏ色素生成 イ）Ｋｉｎｇ Ａ 培地 −口）Ｋｉｎｇ
Ｂ 培地 −１１ウレアーゼ
− １２ オキシダーゼ ＋１３ カタラー
ゼ ＋１４ 生育の範囲 イ）ｐＨ５〜９ ０）温度 ５℃〜３０℃１５ 酸
素に対する態度 通性嫌気性１６ ０−Ｆ
テスト（グルコース）＋ （Ｆ）１７ｖ１１！から酸
及びガス生成 １、Ｌ−アラビノース − ２，０−キシロース ＋ ３．０−グルコース ＋ ４．０−マンノース − ５、Ｄ−フラクトース − ６、Ｄ−ガラクトース ＋ ７、麦芽糖 ＋ ８、シｍｔＪ！ ＋９、乳糖
＝ １０、）レバロース − １１、Ｄ−ソルビット − １２、Ｄ−マンニット ＋ １３、イノシフト − １４、グリセリン − １５、デンプン −（ただしガスの
生成 全項目−） ｄ） その他の諸性質 ｓｓ寒天培地での生育 − マフコンキー寒天培地での生育 − ６，５％ＮａＣｊ耐塩性 十 ＤＮａｓｓ ＋オ
ルニチンの分解 − アルギニンの分解 − Ｎａ゛要求性 − 以上のような諸性質から、本菌株 ５ＣＲＣ−２２８８
は下記の大きな特徴を持つ。
０．６Ｘ１．２μｍ２ 多形性の有
無 無 ３ 運動性の有無 無 鞭毛の着生状態 −本・ＦＩｊ口毛４ 胞
子の有無 無 ５ グラム染色 陰性６ 抗酸性
陰性ｂ） 各培地に於ける生育状態 １ 肉汁寒天平板培養（２５℃、２日間）イ）コロニー
形状（直径） １．５Ｘ１．５ｍｍ口）コロニ
ーの形 円形 ハ）コロニー表面の形状 平滑 二）コロニーの隆起状態 台状 ホ）コロニーの周縁 金縁 へ）コロニーの色調 黄褐色ト）コロニーの
透明度 半透明チ）コロニーの光沢
光沢 り）可溶性色素の生成 無 ２ 肉汁寒天斜面培養（２５℃、２日間）イ）生育の良
否 良好 口）コロニーの光沢 光沢 ３ 肉汁液体培地（２５℃、２日間） イ）表面の生育 側 口）濁 度 濁る ハ）沈 殿 粉状 二）ガス発生 無 ４ 肉汁ゼラチン（２５℃、２日間） ゼラチン液化 液化 ５ リドマスミルク 還元Ｃ） 生理学的
性質 １ 硫酸塩の還元 ＋ ２脱窒 − ３ＭＲ− ４ＶＰ −５
インドール生成 − ６硫化水素の生成 十 ７ デンプンの加水分解 − ８クエン酸利用 イ）Ｋｏｓｅｒ −口）Ｃｈｒｌｓ
ｔｅｎｓｅｎ − ９硝酸塩の利用 − １Ｏ色素生成 イ）Ｋｉｎｇ Ａ 培地 −口）Ｋｉｎｇ
Ｂ 培地 −１１ウレアーゼ
− １２ オキシダーゼ ＋１３ カタラー
ゼ ＋１４ 生育の範囲 イ）ｐＨ５〜９ ０）温度 ５℃〜３０℃１５ 酸
素に対する態度 通性嫌気性１６ ０−Ｆ
テスト（グルコース）＋ （Ｆ）１７ｖ１１！から酸
及びガス生成 １、Ｌ−アラビノース − ２，０−キシロース ＋ ３．０−グルコース ＋ ４．０−マンノース − ５、Ｄ−フラクトース − ６、Ｄ−ガラクトース ＋ ７、麦芽糖 ＋ ８、シｍｔＪ！ ＋９、乳糖
＝ １０、）レバロース − １１、Ｄ−ソルビット − １２、Ｄ−マンニット ＋ １３、イノシフト − １４、グリセリン − １５、デンプン −（ただしガスの
生成 全項目−） ｄ） その他の諸性質 ｓｓ寒天培地での生育 − マフコンキー寒天培地での生育 − ６，５％ＮａＣｊ耐塩性 十 ＤＮａｓｓ ＋オ
ルニチンの分解 − アルギニンの分解 − Ｎａ゛要求性 − 以上のような諸性質から、本菌株 ５ＣＲＣ−２２８８
は下記の大きな特徴を持つ。
■ ダラム陰性
■ 運動性を持たない
■ カタラーゼ、オキシダーゼ陽性
［Ｆ］ 硝酸塩還元能陽性
このような諸性質を有する本菌株 ５ＣＲＣ−２２８８
株の分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オブ
・システマティッ′り・バクテリオロジー（Ｂａｒｇｅ
ｙｌｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｒＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｌｏｌｏ −ｇｙ）第１＠、５５０
ページ、１９８４年の分類基準により、パスツレラ・ヘ
モリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｓｍｏｌ
ｔ −上上土）であると同定される。
株の分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オブ
・システマティッ′り・バクテリオロジー（Ｂａｒｇｅ
ｙｌｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｒＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｌｏｌｏ −ｇｙ）第１＠、５５０
ページ、１９８４年の分類基準により、パスツレラ・ヘ
モリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｓｍｏｌ
ｔ −上上土）であると同定される。
なお、糖からの酸およびガスの生成テストの項目の中に
は必ずしも文献記載のそれと一致しない項目があるが、
これらは分類学上さほど重要な項目ではなく、同一種で
も一般的によ（変化するものであり、これらの記載に必
ずしも規定されるものではない。
は必ずしも文献記載のそれと一致しない項目があるが、
これらは分類学上さほど重要な項目ではなく、同一種で
も一般的によ（変化するものであり、これらの記載に必
ずしも規定されるものではない。
以上、自然界から分離した菌株について詳細に記載した
が、これらの菌に変異を生じさせて一層生産性の高い菌
株を得ることも出来る。
が、これらの菌に変異を生じさせて一層生産性の高い菌
株を得ることも出来る。
この発明の菌株は、常法に従って保存することが出来、
例えば寒天スラント塘地上で、または凍結乾燥法により
保存することが出来る。寒天スラント培地としては、パ
スツレラ属細菌の保存に常用されている培地、例えば菌
の分離に関して前記した培地を使用することが出来る。
例えば寒天スラント塘地上で、または凍結乾燥法により
保存することが出来る。寒天スラント培地としては、パ
スツレラ属細菌の保存に常用されている培地、例えば菌
の分離に関して前記した培地を使用することが出来る。
また、凍結乾燥保存も常法に従って行なうことができる
。
。
上記の菌株 パスツレラ・ヘモリティカ５ＣＲＣ−２２
８８は工業技術院微生物工業技術研究所に徽工研菌寄第
９４２５号（ＦＥＲＭ Ｐ−９４２５）として寄託さ
れている。
８８は工業技術院微生物工業技術研究所に徽工研菌寄第
９４２５号（ＦＥＲＭ Ｐ−９４２５）として寄託さ
れている。
偉ＩＢＰＡの製造方法
前記の微生物を培養して本発明のＥＰＡを製造しようと
する場合、基礎栄養培地として、この発明の微生物が増
殖しうるちのであればいずれを使用しても良い。
する場合、基礎栄養培地として、この発明の微生物が増
殖しうるちのであればいずれを使用しても良い。
この培地は、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス等の１種類または複数種類を含有する。また
この培地には必要に応じて炭素源として各種の１１１８
を加えることが出来る。
、肉エキス等の１種類または複数種類を含有する。また
この培地には必要に応じて炭素源として各種の１１１８
を加えることが出来る。
培養は固体培地または液体培地のいずれを用いても良い
が、目的とするＥＰＡを多量に得る為には、液体培地を
用い、培養を行なうのが好ましい。
が、目的とするＥＰＡを多量に得る為には、液体培地を
用い、培養を行なうのが好ましい。
培養温度は菌が生育し、ＥＰＡが生産される温度範囲で
あればいずれの温度でも良く、好ましくは５〜３０℃で
あり、より好ましくは１５〜２５℃である。ｐＨは５〜
９、好ましくは、７〜８の範囲である。培養時間は採取
し得る量のＥＰＡ含有脂質が生産される時間を選べば良
く、好ましくは８〜４８時間である。
あればいずれの温度でも良く、好ましくは５〜３０℃で
あり、より好ましくは１５〜２５℃である。ｐＨは５〜
９、好ましくは、７〜８の範囲である。培養時間は採取
し得る量のＥＰＡ含有脂質が生産される時間を選べば良
く、好ましくは８〜４８時間である。
次に得られた培養物から本発明のＥＰＡが採取される。
精製法として通常の脂質精製法を用いることが出来る０
例えば、培養液から遠心分離、ろ過等の常用の集菌手段
によって菌体を集める０次に、この菌体を所望により水
、食塩水、又は緩衝液、例えばリン酸緩衝液等により洗
浄した後、これらの液中に再懸濁棲する。この懸濁液を
、脂質の抽出のために常用されている溶剤、例えばクロ
ロホルム／メタノール混合液により抽出し、相分離して
クロロホルム相を得る０次に、このクロロホルム相を蒸
発除去することによりＥＰＡ含有脂質を含む材料が得ら
れる。常法によりこれを鹸化することにより遊離のＥＰ
Ａ又はその塩を得る事が出来る。
例えば、培養液から遠心分離、ろ過等の常用の集菌手段
によって菌体を集める０次に、この菌体を所望により水
、食塩水、又は緩衝液、例えばリン酸緩衝液等により洗
浄した後、これらの液中に再懸濁棲する。この懸濁液を
、脂質の抽出のために常用されている溶剤、例えばクロ
ロホルム／メタノール混合液により抽出し、相分離して
クロロホルム相を得る０次に、このクロロホルム相を蒸
発除去することによりＥＰＡ含有脂質を含む材料が得ら
れる。常法によりこれを鹸化することにより遊離のＥＰ
Ａ又はその塩を得る事が出来る。
かくして、本発明によれば上記のバクテリアを使用して
醗酵生産することにより、精製が容易でかつ短時間で多
量にＥＰＡ含有脂質及びＥＰＡを得ることが出来る。
醗酵生産することにより、精製が容易でかつ短時間で多
量にＥＰＡ含有脂質及びＥＰＡを得ることが出来る。
次に本発明のＥＰＡ含有脂質の製造方法の具体的な１例
を示す。
を示す。
実施例１
肉エキス １．０％、ペプトン ｌ 、０％、 Ｎ ａ
Ｃｊ！０．５％を含有し、ｐＨ７，０に調整した培地
２０ｊを１２１℃、１５分間加熱殺菌したのち、パスツ
レラ・ヘモリティカ ５ＣＲＣ−２２８８＜？ｌＬ工研
菌寄第９４２５号）を接種し、２５℃で２４時間培養し
た。培養後、遠心分離機で菌体を採取し温室置駒１９５
ｇ （乾燥重量で１７．６ｇ）の菌体を得た。ｍ体を０
．８５％の食塩水で１回洗浄した後、１１に懸濁した。
Ｃｊ！０．５％を含有し、ｐＨ７，０に調整した培地
２０ｊを１２１℃、１５分間加熱殺菌したのち、パスツ
レラ・ヘモリティカ ５ＣＲＣ−２２８８＜？ｌＬ工研
菌寄第９４２５号）を接種し、２５℃で２４時間培養し
た。培養後、遠心分離機で菌体を採取し温室置駒１９５
ｇ （乾燥重量で１７．６ｇ）の菌体を得た。ｍ体を０
．８５％の食塩水で１回洗浄した後、１１に懸濁した。
この菌体懸濁液を１１のクロロホルム−メタノール溶液
（２： Ｉ Ｖ／Ｖ）で良く振とう抽出した後、遠心
分離し、クロロホルム相を得た。更に水相及び菌体をク
ロロホルム６００−で振とう抽出したのち、遠心分離し
、クロロホルム相を得た。クロロホルム抽出画分を濃縮
乾固して得られた脂質画分は１．５４ｇ（乾燥菌体当た
り８．７５％）であった。
（２： Ｉ Ｖ／Ｖ）で良く振とう抽出した後、遠心
分離し、クロロホルム相を得た。更に水相及び菌体をク
ロロホルム６００−で振とう抽出したのち、遠心分離し
、クロロホルム相を得た。クロロホルム抽出画分を濃縮
乾固して得られた脂質画分は１．５４ｇ（乾燥菌体当た
り８．７５％）であった。
この両分を０．３Ｎ−ＮａＯＨを含有する９５％エタノ
ール中で８０℃にて１時間鹸化し、これを６Ｎ−ＨＣＩ
により中和し、遊離脂肪酸混合物を得た。
ール中で８０℃にて１時間鹸化し、これを６Ｎ−ＨＣＩ
により中和し、遊離脂肪酸混合物を得た。
この遊離脂肪酸混合物をジアゾメタンによりメチルエス
テル化した後、ガスクロマトグラフにて分析して、測定
した所０．１６６ｇ（脂質画分の１０．８％、乾燥菌体
の０．９４％）のＥＰＡが含まれていることが分かった
。
テル化した後、ガスクロマトグラフにて分析して、測定
した所０．１６６ｇ（脂質画分の１０．８％、乾燥菌体
の０．９４％）のＥＰＡが含まれていることが分かった
。
このＥＰＡを含む遊離脂肪酸混合物をシリカゲルカラム
を用い、メタノールを溶出液としてカラム逆相分配クロ
マトグラフィーを行なうことにより精製されたＥＰＡｏ
、１５２ｇを得た。
を用い、メタノールを溶出液としてカラム逆相分配クロ
マトグラフィーを行なうことにより精製されたＥＰＡｏ
、１５２ｇを得た。
Claims (3)
- （１）パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）属に属し
、エイコサペンタエン酸含有脂質を生産することができ
る微生物を培養することによって、エイコサペンタエン
酸含有脂質を生成蓄積せしめ、所望によりさらにエイコ
サペンタエン酸を単離することを特徴とするエイコサペ
ンタエン酸含有脂質又はエイコサペンタエン酸の製造方
法。 - （２）エイコサペンタエン酸含有脂質を生産することが
出来るパスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）属の微生
物。 - （３）パスツレラ・ヘモリティカ（￥Ｐａｓｔｅｕ−￥
￥ｒｅｌｌａ￥￥ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ￥）ＳＣＲＣ
−２２８８である特許請求の範囲第２項に記載の微生物
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62156693A JPH0761271B2 (ja) | 1987-06-25 | 1987-06-25 | 微生物を用いたエイコサペンタエン酸含有脂質の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62156693A JPH0761271B2 (ja) | 1987-06-25 | 1987-06-25 | 微生物を用いたエイコサペンタエン酸含有脂質の製造方法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS642587A JPS642587A (en) | 1989-01-06 |
| JPH012587A true JPH012587A (ja) | 1989-01-06 |
| JPH0761271B2 JPH0761271B2 (ja) | 1995-07-05 |
Family
ID=15633272
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62156693A Expired - Lifetime JPH0761271B2 (ja) | 1987-06-25 | 1987-06-25 | 微生物を用いたエイコサペンタエン酸含有脂質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0761271B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0324018A (ja) * | 1989-06-22 | 1991-02-01 | Tosoh Corp | 脂質代謝改善剤 |
-
1987
- 1987-06-25 JP JP62156693A patent/JPH0761271B2/ja not_active Expired - Lifetime
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