JPH01265893A - 新規物質ｋ３６１９、その使用およびその製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は新規物質に、さらに詳しくはストレプトミセス される抗腫瘍性を有する新規物質に３６］９に関する。

抗腫瘍物質に関してはすでに多数のものか医薬として実
用化されている。一般に化学物質の生理活性はその化学
構造に依存するところが大きいため、抗腫瘍性を有する
新規な化合物に対しては不断の希求があると言えよう。

発明の概要 本発明は上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明による新規物質Ｋ　３　６　１　９は
、次の一般式（Ｉ）で示されるものである。

本発明は、また、この物質の使用に関する。

すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、次式（１）で示さ
れる化合物Ｋ　３　６　１　９を有効成分とするもので
ある。

本発明は、さらにまた、この物質の製造法に関する。

すなわち、本発明による次式（Ｉ）で示されるＫ　３　
６　１　９の製造法は、ストレプトミセス属に属し、Ｋ
３６１９の生産能を、有する菌株を適当な培地で好気的
に培養し、培養物よりに３６１Ｃｌを得ること、を特徴
とするものである。

新規物質Ｋ　３　６　１　９ ］）化学構造 本発明による新規物質に３６１９は、前記の式（　Ｉ’
）で示される化学構造を有する。

（Ｉ）で示される化学構造を有する。

Ｋ３６１９の化学構造は、プロトン核磁気共鳴スペクト
ル、炭素１３核磁気共鳴スペクトル、紫外部吸収スペク
トル、光外部吸収スペクトル、質量分析スペクトルを詳
細に検討することによって前記の通り決定された。

２）物理化学的性状 （１）外観　　　白色粉末 （２）比旋光度　＋１１３度 （クロロホルム中）（ｃＯ．５） （３）溶解性　メタノール、エタノール、アセトン、酢
酸エチル、クロロホルムに可溶、水に難溶。

（４）Ｒｆ値（メルク社製［シリカゲル６　０　Ｆ　２
５４　Ｊ使用） クロロホルム−メタノール（５０　：　１）　０．　４
５（５）ＦＤ−ＭＳスペクトル（ｍ／ｚ）　　　１０３
５（Ｍ＋１）” （６）紫外吸収スペクトル　　第１図 λ　　（ε，ｓｈ）　　２２５ｎｍ（１５０００）ａｘ （メタノール中） （７）赤外吸収スペクトル　　第２図 （ＫＢｒディスク法） （８）プロトン核磁気共鳴スペクトル　第３図（５００
メガヘルツ、重クロロホルム中）（９）炭素１３核磁気
共鳴スペクトル　第４図（１２５メカヘルツ、重クロロ
ホルム中）（１０）融点　　２０５℃ （］１）元素分析 分析値（％） Ｃ　　　　　Ｈ　　　　　　Ｏ　　　　　　Ｎ５８、１
１　　７．８８　　２３．００　　１０．７７計算値 Ｃ　　　　　Ｈ　　　　　　Ｏ　　　　　　Ｎ５８、　
　０１　　７．　　９８　　２３．　　１８　　１０．
　８２（１２）分子量（計算値）　　１０３５．２Ｋ　
３　６　１　９の製造 概要 化合物に３６１９は現在のところ微生物の培養によって
のみ得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾によ
って製造することも、あるいは全合成化学的に製造する
こともできよう。

微生物の培養による場合の菌株としてはストレプトミセ
ス属に属するに３６］９生産能を有するものが使用され
る。具体的には、本発明者らの分離したストレプトミセ
スに３６］９株かに３６１９を生産することが本発明者
らによって明らかにされているが、その他の菌株につい
ては、抗生物質生産菌単離の常法によって適当なものを
自然界より分離することが可能である。また、ストレプ
トミセスに３６１９株を含めてに３６１９の生産菌を放
射線照射その他の変異処理に付して、Ｋ　３６１９の生
産能を高める余地も残されている。

さらに、遺伝子工学が発展した現今では、Ｋ　３６１９
株のＫ　３６１９生産遺伝子を利用した遺伝子工学的手
法によるＫ　３６１９の生産も可能である。

Ｋ　３６１９株 に３６１９生産能を有するストレプトミセス属の菌株と
して本発明者らの見出しているに３６１．９株は、下記
の内容のものである。

１）由来および寄託番号 に３６１９株はブラジル国で採取した土壌から分離され
たものであり、昭和６３年３月５日に工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されて「微工研菌寄第９９２３号
Ｊ　　（ＦＥＲＭ　　Ｐ−９９２３）の番号をえている
。

２）菌学的性状 に３６１９株の菌学的性状は、以下のとおりである。

（１）形態 に３６１９株は観察に用いた培地で生育が遅く、不良で
、スターチ無機塩寒天培地、栄養寒天培地、イースト・
麦芽寒天培地上で中程度に生育する。

気菌糸は、スターチ無機塩寒天培地、イースト・麦芽寒
天培地で良く着生するが、その他の培地では着生しない
か、または貧弱である。基生菌糸より生じた気菌糸は曲
線状で、単純分枝をなして伸長し、１０〜５０個の胞子
鎖を形成する。胞子類は曲線状で、かぎ状やループ状の
ものも多く観察されるが、螺旋は形成しない。また、胞
子の形は円筒形ないし卵形で、大きさは０６６〜０．８
μｍＸ０１８〜１．０μｍであり、その表面は平滑であ
る。

胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は認められない
。

（２）各種培地上の生育状態 Ｋ　３６１９株を各種培地に２７℃、４週間培養した結
果は第１表に示すとおりである。

（３）生理学的性質 Ｋ　３６１９株の生理学的性質は第２表に示すとおりで
ある。

（４）炭素源の利用性 に３６１９株の炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリー
ブ寒天培地上）は第３表に示すとおりである。

（５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミノピメリン酸を
分析した結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出された
。

以上の菌学的性状から、Ｋ３６１９株はストレプトミセ
ス属に属すると判断され、以下のような特徴を有する。

（１）胞子鎖は曲線状を呈し、胞子の表面は平滑である
。

（２）気菌糸は、白色〜黄味白色〜うす黄色、ないしは
明るいオリーブ灰色である。

（３）裏面の色はうす黄茶色〜黄色である。

（４）メラニン様色素、あるいはその他の可溶性色素は
生成しない。

上記性状よりＩＳ’Ｐ（インターナショナル会ストレプ
トミセス・プロジェクト）の記載（Ｅ、Ｂ。

Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、ＧｏＬｔｌｉｅｂ：　
ＩｎＬ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔ、　１８６９−１８９
．２７９−３９２　（１９６８）、す３９１−５１２　
（１９６９）、競２８５−３９４　（１９７２））およ
びバーシーズ・マニュアル・オブ・バクテリオロジー（
ＢｅｒｇｅＹ″ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔｅｒｍｉ
ｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１
９７４）を参考に近縁な既知菌種を検索すると、ストレ
プトミセス・シトレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
　ｃｉｔｒｅｕｓ　）（Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃ
ｔ、　１９４１Ｂ　（１９６９）　）が最も近似してい
る。

そこで、Ｋ　３６１９株とストレプトミセス・シトレウ
スとを比較すると、曲線状の胞子鎖と平滑な表面を有す
る胞子を形成する形態的特徴、ならびに気菌糸の色調な
どで両者は一致する。相違する点としては、Ｋ　３６１
９株はストレプトミセス・シトレウスに比べ一般に生育
が不良である点と、糖の利用性において、特にプリドハ
ム・ゴトリーブ寒天培地上での生育が非常に貧弱で、ア
ラビノース、マンニトール、フラクト−スを利用しない
点があげられる。

以上のようにに３６１９株は、若干の相違はあるものの
、基本的性状においてストレプトミセス・シトレウスと
良く一致することから、ストレプトミセス したがって、Ｋ　３　６　１．　９株をストレプトミセ
ス・シトレウス（ＳｔｒｅｐＬｏｒｒｌｙｃｅｓ　　ｃ
ｉｔｒｅｕｓ　）Ｋ３６１９と命名する。

第２表 第３表 十：利用する　　−：利用しない 培養／に３６１９の生産 化合物Ｋ　３６１９は、ストレプトミセス属に属するＫ
　３６１９生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養
物から目的物を採取することによって製造することがで
きる。

培地は、Ｋ３６１９生産菌が利用しうる任意のの栄養源
を含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素
源としてグルコース、マルトース、スターチおよび油脂
類などが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、乾燥
酵母、酵母エキスおよびコーンステイープリカーなどの
有機物ならびにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニ
ウムなどの無機物が利用できる。また、必要に応じて、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸塩、重金属塩なと
無機塩類を添加することができる。発酵中の発泡を抑制
するために、常殊に従って適当な消泡剤、例えばシリコ
ン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０−３７℃が適当であるが、２５−３０℃が
好ましい。この方法でＫ　３６１９の生産量は、振盪培
養、通気攪拌培養ともに培養５日間で最高に達する。

このようにしてＫ　３６１．９の蓄積された培養物が得
られる。培養物中では、Ｋ３６１９はその一部は菌体中
に存在するが、その大部分は培養ろ液中に存在する。

このような培養物からＫ　３６１９を採取するには、合
目的的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方
法は抽出の原理に基くものであって、具体的には、培養
ろ液中のＫ　３６１９についてはこれを適当な水不混和
性のＫ　３６１９用溶媒例えば酢酸エチルなどで抽出す
る方法などがある。菌体を分離せずに培養物そのままを
上記の抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒を用い
た向流分配法も抽出の範鴫に入れることができる。

培養物からＫ　３’６１９を採取する他のひとつの方法
は吸着の原理に基づくものであって、既に液状となって
いるに３６１９含有物、たとえば培養ろ液あるいは上記
のようにして抽出操作を行うことによって得られる抽出
液を対象として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、
活性炭、「ダイヤイオンＨＰ−２０Ｊ　　（三菱化成社
製）なとを用いて１」的のＫ　３６１９を吸着させ、そ
の後、適当な溶媒にて溶離させることによってに３６１
９を得ることかできる。このようにして得られたＫ　３
６　：ｌ−９溶液を減圧濃縮乾固すれば、Ｋ　３６１．
９粗標品がえられる。

このようにして得られるＫ　３６１９の粗標品をさらに
精製するためには、上記の抽出法および吸着法にゲル濾
過法、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて
組合せて必要回数行えばよい。

たとえば、シリカゲルなどの吸着剤、「セファデックス
ＬＨ−２０Ｊ　　（ファルマシア社製）などのゲルろ過
剤を用いたクロマトグラフィー、ｒＹＭＣパック」　（
山村科学社製）などを用いた高速液体クロマトグラフィ
ーおよび向流分配法を適宜組合せて実施することができ
る。具体的には、たとえば、Ｋ　３６１９粗標品を少量
のメタノールに溶解し、［セファデックスＬＨ−２ＯＪ
カラムに対し、メタノールで活性画分を溶出させ、濃縮
乾固するとＫ　３６１９の純品が得られる。

Ｋ　３６１９の用途／抗腫瘍剤 本発明による化合物Ｋ　３６１９は、抗＋１ｆｆ瘍活性
を有するという点で有用である。

生物活性 ］）細胞増殖抑制活性 マウスＢ　１６メラノーマを５Ｘ１’Ｏ’イ固／ｍｌと
なるように］Ｏ％熱非働化仔牛血清を含むＲＰＭ１１６
４０培地に浮遊さぜ、種々の濃度のＫ　３６１．９とと
もに３７℃で２０間培養した後のＩＣ５ｏ値は、０．１
μｚ　／　ｍｌであった。

２）抗腫瘍活性 Ｋ　３６１９はマウスＰ３８８白血病に対するｊｎ■籾
抗腫瘍活性が認められた。すなわちＣＤＦＩマウスに対
し、Ｐ３８８白血病細胞の懸濁液１×１０６ケ／マウス
を腹腔内移植し、移植後１．５日に投与し、生理食塩水
を投与した対照群のマウスの生存日数を１．　ＯＯとし
た延命率（％）で効果を示すと、下記のとうりであった
。

試　料　　　投与量　生　存　日　数　　延命率（ｍｇ
／ｋｇ）　（Ｍｅａｎ＝！＝ＳＤ）　　　（％）Ｋ３６
１９　２１１．７±１．０３１２３Ｃｏｎｔｒｏｌ　　
　　９．５±０．５３１００上記のように、本発明のに
３６１９は抗腫瘍活性を示すことが明らかにされた。し
たかって、本発明のＫ　３６１９は抗腫瘍剤として使用
することができる。

抗腫瘍剤 本物質を抗腫瘍剤として用いる場合の投与量は、癌の種
類、患者の症状の程度なとにより異っていて特に制限は
ないが、通常は成人１口あたり１０−１００ｍｇ程度を
ＩＬ１１回程度１経口的にあるいは非経口的に（たとえ
ば静脈注射）投与する。

投与剤型としては、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠
剤、カプセル剤、注射剤などがあげられる。製剤化の際
は、通常の製剤担体を用い、常法によって製造すること
ができる。なおマウスに対する本物質の腹腔内投与にお
ける急性毒性は、２ｍｇ／ｋｇ以上２０ｍｇ／ｋｇ以下
である。

実験例 以下において「％」はｒｗ／ｖ％」である。

１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，２に調整したものである。

グルコース　　　　　　　　４ｇ マルトエキストラクト　　１０ｇ 酵母エキス　　　　　　　　４ｇ 上記培地１００ｍ１を５００ｍ１のイボイτｊ三角フラ
スコへ分注し、殺菌後、ストレプトミセスＫ　３６１．
９株をスラントより１白金耳接種し、２７℃にて３日間
振盪培養したものを種母とした。

２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リットルの水を
溶解して１．ｐＨ７，２に調整したものである。

グルコース　　　　　　　２５．　０ｇ大豆粉　　　　
　　　　　１５．０ｇ 酵母エキス　　　　　　　　２．０ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　４，０ｇ 上記培地を２５リツトルずつ５０リツトル容ジャーファ
ーメンタ−に分注殺菌したものへ、上記種母３００ｍ１
を添加し、２７℃にて５日間、２０Ｏｒｐｍ、０．４Ｖ
ＶＭの通気攪拌培養を行った。

３）Ｋ３６１９の採取 上記の条件で培養後、培養液をろ過し、ろ液をえた。こ
れを２５リツトルの酢酸エチルで抽出し、濃縮した後、
シリカゲル（和光純薬製「ワコーゲルＣ２００Ｊ）のカ
ラム（４ｃ＋ｎφＸ２０ｃｍ）に吸着させ、クロロホル
ムで洗浄後、クロロホルム−メタノール（５０：　１）
で溶出する。溶出液を濃縮乾固し、Ｋ３６１９粗標品２
０Ｏｍｇを得た。この粗標品２００■を、少量のメタノ
ールに溶解しセファデックスＬＨ−２０カラム（４Ｘ６
０ｃｍ）によるゲルろ過にかけメタノールで展開した。

Ｋ　３６１９両分を濃縮乾固し、Ｋ　３６１９精製品１
００ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】 第１図はに３６１９のメタノール中での紫外吸収スペク
トルを模写したものである。 第２図はＫ　３６１９のＫＢｒディスク法による赤外吸
収スペクトルを模写したものである。 第３図はＫ　３６１９の重クロロホルム中における５０
０メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。 第４図はに３６１９の重クロロホルム中における１２５
メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写したも
のである。 出願人代理人　　佐　　藤　　−雄 符開平１−　Ｚｂｉｂ８９３　（９） 寸 滌 ト

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で示される新規物質 Ｋ３６１９。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、次式（ I ）で示される化合物Ｋ３６１９を有効成
   分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ３、ストレプトミセス属に属しＫ３６１９の生産能を有
   する菌株を適当な培地で好気的に培養し、培養物より次
   式（ I ）で示されるＫ３６１９を得ることを特徴とす
   る、Ｋ３６１９の製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）