JPH02221292A - 新規物質０２―３、その使用および製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 技術分野 本発明は新規物質に、さらに詳しくは抗腫瘍性を有する
新規物質０２−３に関する。

先行技術 抗腫瘍物質に関してはすでに多数のものが医薬として実
用化されている。一般に化学物質の生理活性はその化学
構造に依存するところが大きいため、抗腫瘍性を有する
新規な化合物に対しては不断の希求があると言えよう。

〔発明の概要〕

要旨 本発明は上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明による新規物質０２−３は次式（Ｉ）
で示されるものである。

本発明は、また、この物質の使用に関する。

すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、次式（Ｉ）で示さ
れる化合物０２−３を有効成分とするものである。

本発明は、さらにまた、この物質の製造法に関する。

すなわち、本発明による次式（Ｉ）で示される０２−３
の製造法は、ストレプトミセス属に属し、０２−３の生
産能を有する菌株を適当な培地で好気的に培養し、その
培養物より０２−３を得ること、を特徴とするものであ
る。

（式中、Ｒはアセチル基または水素原子のいずれかを表
わす。） 〔発明の詳細な説明〕 新規物質０２−３ １）化学構造 本発明による新規物質０２−３は、前記の式（Ｉ）で示
される化学構造を有する。この化学構造は、次のように
して決定されたものである。

前記（Ｉ）式におけるＲがアセチル基である０２−３Ｄ
は、そのプロトン核磁気共鳴スペクトル（第５図）およ
び炭素１３核磁気共鳴スペクトル（第７図）から推定さ
れる化学構造がクロモマイシンＡ　３（ｃｈｒｏｍｏＩ
ｌｙｃｌｎ＾３．　Ｊ、　Ｔｈ１ｅｓ　ａｔ　ａｔ、。

Ｊ、　Ｃ，Ｓ、　Ｐｅｒｋｉｎ　　■、１３３１　、１
９７９）にきわめて類似している。両者の物理化学的性
質を比較したところ、０２−３Ｄの　ＦＡＢマススペク
トルから得られた分子Ｊｉｌｌ１４０がクロモマイシン
Ａ３よりＣ２Ｈ２０分生ないことと、ＮＭＲスペクトル
においてアセチル基のシグナルが消失していることより
、０２−３ＤはクロモマイシンＡ３のモノ脱アセチル体
と判明した。さらに、残りのアセチル基の置換位置をＮ
ＭＲデータの詳細な解析により決定し、０２−３Ｄの化
学構造を前記の式（Ｉ）のように決定した。

また、同様にして、前記（Ｉ）式におけるＲが水素原子
である０２−３Ｇの構造をクロモマイシン八３のジ脱ア
セチル体と決定した。

２）物理化学的性状 （４）元素分析値（計算値）（％） （５）ＦＡＢ７ススペクトル（ｍ／ｚ）１１６３　（Ｍ
＋Ｎａ）”　　１１１２１　（Ｍ＋Ｎａ）”（６）Ｒｆ
値（メルク社製「シリカゲル６０Ｆ２５４」使用）クロ
ロホルム−メタノール（Ｉ０：１）クロロホルム−メタ
ノール−酢酸−水（Ｉ００：１０：１：１）（７）溶解
性 ０２−３の製造 （９）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディスク法）第３図
に示す　　　　　　第４図に示す（Ｉ０）プロトン核磁
気共鳴スペクトル（４００メガヘルツ）第５図に示す　
　　　　　第６図に示す（重クロロホルム−重メタノー
ル中中重酢酸中）（Ｉ１）炭素１３核磁気共鳴スペクト
ル（Ｉ００メガヘルツ）第７図に示す　　　　　　第８
図に示す（重クロロホルム−メタノール「［リ　ｌ＜重
酢酸中）概要 化合物０２−３は現在のところ微生物の培養によっての
み得られているが、類縁化合物の合成化学的修飾によっ
て製造することも、あるいは全合成化学的に製造するこ
ともできよう。

微生物の培養による場合の菌株としては、例えばストレ
プトミセス属に属する０２−３生産能を何するものが使
用される。具体的には、本発明者らの分離したストレプ
トミセス０２−３株が０２−３を生産することが本発明
者らによって明らかにされているが、その他の菌株につ
いては、抗生物質生産菌単離の常法によって適当なもの
を自然界より分離することが可能である。また、ストレ
プトミセス０２−３株を含めて０２−３の生産菌を放射
線照Ｊ］、Ｊその他の変異処理に付して、０２３の生産
能を高める余地も残されている。

０２−３株 ０２−３生産能を有するストレプトミセス属の菌株とし
て本発明者らの見出している０２−３株は、下記の内容
のものである。

１、由来および寄託番号 ０２−３株は鹿児島県桜島で採取した土壌から分離され
たものであり、平成元年２月８日に工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されて〔微工研条寄第２２７６号）
（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２２７６）の番号を得ている。

２、菌学的性状 ０２−３株の菌学的性状は以下のとおりである。

１）形態 ０２−３株はシュクロース・硝酸塩寒天培地、グルコー
ス・アスパラギン寒天培地上での生育は貧弱だが、その
他の培地上では中程度〜良好に生育する。気菌糸の着生
は、グルコース・アスパラギン寒天培地では極めて貧弱
、シュクロース・硝酸塩寒天培地および栄養寒天培地で
は貧弱である一方、スターチ・無機塩寒天培地、イース
ト・麦芽寒天培地、オートミール寒天培地上では豊富に
気菌糸を着生する。その他の培地では総じて中程度であ
る。基土菌糸より生じた気菌糸は単純分枝をなして伸長
し、胞子の連鎖は３０〜５０個程度、時には５０個以上
と長く、胞子鎖は直鎖状である。

また、胞子の形は円筒形で、大きさは０．６〜０　、８
　μｍ　Ｘ　０　、　７〜１　、　０　μｍであり、そ
の表面は弔滑である。

胞子嚢、鞭毛胞子、菌核などの特殊形態は認められない
。

２）各種培地上の生育状態 ０２−３株を各種培地に２７℃、３週間培養した結果は
第１表に示すとおりである。

３）生理的性質 ０２−３株の生理的性質は第２表に示すとおりである。

４）炭素源の利用性 ０２−３株の炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリーブ
寒天培地上）は第３表に示すとおりである。

５）ジアミノピメリン酸の分析 細胞壁構成アミノ酸の一つであるジアミノピメリン酸を
分析した結果、ＬＬ−ジアミノビメリン酸が検出された
。

以上の菌学的性状から、０２−３株はストレプトミセス
属の一菌株と判断され、以下のような特徴を有する。

（Ｉ）胞子鎖は直鎖状で、胞子の表面は平滑である。

（２）気菌糸は、黄味白色〜明るいオリーブ灰色〜にぶ
黄橙色〜うす茶色であり、裏面の色は、黄味灰色〜うす
茶黄色〜にぶ黄色〜黄茶色〜暗い黄色などの色を示す。

（３）チロシン寒天培地、ペプトン争イースト・鉄寒天
培地、トリプトン・イースト液体培地でメラニン様色素
を生成せず、可溶性色素も認められない。

（４）資化される糖の種類は比較的限られており、グル
コース、マンノース、ガラクトース、マルトース以外の
糖は総じて資化されない。

上記性状よりｌ５Ｐ（インターナショナル・ストレプト
ミセス・プロジェクト）の記載（Ｅ、　Ｂ。

Ｓｈｌｒｌｌｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｌｅｂ：
　Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔ。

１８６９−１８９．　２７９−３９２　（Ｉ９８８）、
１９３９１−５１２　（Ｉ９８９）。

２２２６５−３９４　（Ｉ９７２）　）およびバーシー
ズ・マニュアル・オブ・デターミネイティブ・バクテリ
オロジー　（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏ
ｒ　　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒ１ｏ＋
ｏｇｙ）第８版（Ｉ９７４）を参考に近縁な既知菌種を
検索すると、ストレプトミセス・アベラニウス（ｓｔｒ
ｅｐｔｏａｙｃｅｓ　ａｖｅｌｌａｎｅｕｓ　）　　（
Ｉｎｔ。

Ｊ、　５ｙｓＬ、　Ｂａｃｋ、：　２２．２７Ｂ　（Ｉ
９７２））が最も類似していると思われた。

そこで、０２−３株とストレプトミセス番アベラニウス
とを比較すると、直鎖状の胞子鎖および表面が平滑な胞
子を有する形態的特徴、ペプトン・イースト・鉄寒天培
地等でメラニン様色素を産生じない点、ならびに気菌糸
の色調などで両者は良く一致する。相違する点としては
、０２−３株がフラクトースおよびスクロースを資化し
ない点等があげられる。

以上のにように０２−３株は、若干の相違はあるものの
、基本的性状においてストレプトミセス・アベラニウス
と良く一致することから、ストレプトミセス・アベラニ
ウスと同定するのが妥当である。したがって、０２−３
株をストレプトミセ７、−７ベラニウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｅｅｓ　ａｖｅｌｌａｎｅｕｓ　）０２−３と命
名するものとする。

第１表 第２表 第３表 十二利用する　−二利用しない 培養１０２−３の生産 化合物０２−３は、ストレプトミセス属に属する０２−
３生産菌を適当な培地で好気的に培養し、その培養物か
ら目的物を採取することによって製造することができる
。

培地は、０２−３生産菌が利用しつる任意の栄養源を含
有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源と
してグルコース、シュークロース、マルトース、可溶性
でんぷん、グリセリンおよび油脂類などが使用でき、窒
素源として大豆粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキ
スおよび肉エキスおよびコーンステイープリカーなどの
有機物ならびにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニ
ウムなどの無機物が利用できる。また、必要に応じて、
炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸
塩、重金属塩など無機塩類を添加することができる。発
酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡
剤、例えばシリコーン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０〜３７℃が適当であるが、２５〜３０℃が
好ましい。この方法で０２−３の生産量は、振盪培養、
通気撹拌培養ともに培養３日間で最高に達する。

このようにして０２−３の蓄積された培養物が得られる
。培養物では、０２−３は、その一部は菌体中に存在す
るが、その大部分は培養濾液中に存在する。

このような培養物から０２−３を採取するには、合目的
的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方法は
抽出の原理に基づくものであって、具体的には、培養濾
液中の０２−３についてはこれを水不混和性の０２−３
用溶媒（前記参照）、例えばクロロホルム、などで抽出
する方法、あるいは菌体内の０２−３についてはｉ濾過
、遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、エタノー
ル、アセトンなどで処理して回収する方法等がある。

菌体を分離せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範鴫に入れることができる。

培養物から０２−３を採取する他のひとつの方法は吸着
の原理に基づくものであって、既に液状となっている０
２−３含有物、たとえば培養濾液あるいは上記のように
して抽出操作を行うことによって得られる抽出液、を対
象として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、活性炭
、［ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　　（三菱化成社製）など
を用いて目的の０２−３を吸着させ、その後、適当な溶
液にて溶離させることによって０２−３を得ることがで
きる。このようにして得られた０２−３溶液を減圧濃縮
乾固すれば、０２−３組機品が得られる。

このようにして得られる０２−３の粗標品をさらに精製
するためには、上記の抽出法および吸着法にゲル濾過法
、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて組合
せて必要回数行えばよい。

たとえば、シリカゲルなどの吸着剤、「セファデックス
ＬＨ−２０Ｊ　　（ファルマシア社製）などのゲル濾過
剤を用いたカラムクロマトグラフィーｒＹＭｃパック」
　（山村科学社製）などを用いた高速液体クロマトグラ
フィーおよび向流分配法を適宜組合せて実施することが
できる。具体的には、たとえば、０２−３Ｄ粗組機を［
セファデックスＬＨ−２ＯＪカラムに付し、クロロホル
ム−メタノール（Ｉ：　１）混合液で活性画分を溶出さ
せ、濃縮乾固すると０２−３Ｄの純品が得られる。

０２−３の用途 本発明による化合物０２−３は、抗腫瘍活性を有すると
いう点で有用である。

生物活性 ０２−３は腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制活性を示した
。たとえばマウスＰ３８８白血病細胞を５Ｘ１０’個／
ｍｌとなるように１０％熱非働化仔牛血清を含むＲＰＭ
１１６４０培地に浮遊させ、種々の濃度の０２−３Ｄお
よび０２−３Ｇとともに３７℃で３日間培養した後のＩ
Ｃ５０値は、それぞれ０．１８および０．０８μｇ／ｍ
ｌであった。

さらに０２−３はマウスＰ３８８白血病に対し、ｉｎ　
ｖｌｖｏでも制癌活性が認められた。すなわち、ＣＤＦ
　Ｉマウスに対し、Ｐ３８８白血病細胞の懸濁液ｌＸ１
０６ケ／マウスを腹腔内移植し、移植後０２−３Ｇを腹
腔内投与し、生理食塩水を投与した対照群（コントロー
ル）のマウスの生存日数を１００とした延命率（％）で
効果を示すと下記の通りであった。

試　料　　　投与量　　　投与量　　生存日数　　　　
延命率（癌細胞移植後）　　（ＩＩ１ｇ／ｋｇ）　　　
（Ｍｅａｎ±ＳＤ）　　　　　Ｃ％）０２−３０　１．
５日目　　　　８０１１．６±０．　５３　１０９〃　
　　１．５日目　　　１６０　１２．９±０．６９１２
４Ｉ〆　　　１〜５日連続　　　８０１４．４±０．　
５３　１３８投与 コントロール　　　　　　　　　　　１０．４±０．　
５２　１００上記のように、本発明の０２−３は抗腫瘍
性を示すことが明らかにされた。したがって、本発明の
０２−３は抗腫瘍剤として使用することができる。

抗腫瘍剤 このように、本発明の０２−３は、動物の腫瘍、特に悪
性腫瘍に対して抗腫瘍性を示すことが明らかにされた。

したがって、本発明化合物は抗腫瘍剤もしくは腫瘍治療
剤として使用することができる。

抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的な任意の投与
経路で、また採用投与経路によって決まる剤型で投与す
ることができる。薬剤としては、製薬上許容される担体
あるいは希釈剤で希釈された形態が普通である。

抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与する場合には
、これらを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注
射する方法が代表的なもののひとつとして挙げられる。

具体的には、動物の場合には腹腔内注射、皮下注射、静
脈または動脈への血管内注射および注射による局所投与
などの方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内
注射または注射による局所投与などの方法がある。

本発明化合物の投与量は、動物試験の結果および柾々の
状況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに
総投与量が一定量を越えないように定められる。具体的
な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、
たとえば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することは言うまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記指針をちととして専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。具体
的には、成人１日あたり０．１〜１ｇ程度である。

実験例 実施例 １）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して調製したものである。

可溶性でんぷん　　１０ｇ ポリペプトン　　　１０ｇ 廃糖蜜　　　　　　１０ｇ 肉エキス　　　　　１０ｇ 上記培地１００ｍ１を５００ｍ１の三角フラスコへ分注
し、殺菌後、ストレプトミセス・アベラニウス０２−３
をスラントより１白金耳接種し、２７℃にて４日間振虐
培養したものを種母とした。

２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して調製したものである。

グリセリン　　　　８ｇ 可溶性でんぷん　　８ｇ 大豆粉　　　　　　３ｇ 魚粉　　　　　　　８ｇ 炭酸カルシウム　　２ｇ 上記培地を１００ｍ１ずつ５００ｍ１三角フラスコに分
注殺菌したものへ、上記種母２ｍｌを添加し、２７℃に
て３日間、振盪培養を行った。

３）０２−３の採取 上記の条件で培養後、培養液（Ｉ０リツトル）をか遇し
、′ａ液を６規定塩酸でｐＨ２に調整後、ダイアイオン
ＨＰ２０カラム（三菱化成社製、７ａｍφＸ５０ｃｍ）
に吸着させる。カラムを５０％メタノール水５リツトル
で洗浄後、メタノール５リツトルにて溶出する。溶出液
を１リツトルまで濃縮し、等量の酢酸エチルで抽出後、
濃縮乾固してシリカゲルカラム（５ｃｍφＸ５０ｃｍ）
に吸着させる。カラムをクロロホルム−メタノール−酢
酸（Ｉ００：１：１）１リツトルで洗浄後、クロロホル
ム−メタノール−酢酸（Ｉ００：２：１）１リツトルで
溶出すると０２−３Ｄの粗分歯が得られ、さらにタロロ
ホルムーメタノールー酢酸（Ｉ００：４：　１）１リツ
トルで溶出すると０２３６粗分画が得られる。

０２−３Ｄ粗分画はセファデックスＬＨ−２０カラム（
ファルマシア社製、５ｃａＩφＸ５ｃｍ）にかけ、メタ
ノールで展開し、活性画分を濃縮する。

さらに、０ＤＳ−５２５１−Ｎ　（センシュー科学社製
）を用いた高速液体クロマトグラフィーにて、アセトニ
トリル−水−酢酸（４０：　６０　：　１）を展開溶媒
として精製分取すると０２−３Ｄ純品１０ｍｇが得られ
る。

０２−３０粗分画はセファデックスＬＨ−２０カラム（
ファルマシア社製、５ｃＩＩＩφＸ５０ｃｍ）にかけ、
メタノールで展開し、活性画分を濃縮する。

さらに、０ＤＳ−５２５１Ｎ　（センシュー科学社製）
を用いた高速液体クロマトグラフィーにて、アセトニト
リル−水−酢酸（３５：　６５　：　１）を展開溶媒と
して精製分取すると０２−３Ｇ純品２０纒ｇが得られる
。

【図面の簡単な説明】 第１図は、メタノール中での０２−３Ｄの紫外吸収スペ
クトルを模イしたものである。 第２図は、メタノール中での０２−３Ｇの紫外吸収スペ
クトルを模写したものである。 第３図は、０２−３ＤのＫＢｒディスク法による赤外吸
収スペクトルを模写したものである。 第４図は、０２−３０のＫＢｒディスク法による赤外吸
収スペクトルを模写したものである。 第５図は、０２−３Ｄの重クロロホルム−重メタノール
中における４００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペク
トルを模写したものである。 第６図は、０２−３Ｇの重酢酸中における４００メガヘ
ルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写したものであ
る。 第７図は、０２−３Ｄの重クロロホルム−重メタノール
中における１００メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペク
トルを模写したものである。 第８図は、０２−３Ｇの重酢酸中における１００メガヘ
ルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写したものであ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で示される化合物０２−３。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒはアセチル基または水素原子のいずれかを表
   わす。） ２、次式（ I ）で示される化合物０２−３を有効成分
   とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ３、ストレプトミセス属に属し、０２−３の生産能を有
   する菌株を適当な培地で好気的に培養し、その培養物よ
   り化合物０２−３を得ることを特徴とする、次式（ I
   ）で示される０２−３の製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）