JPH0146520B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はレコグニン類（Recognins）および関
連物質、特に悪性腫瘍または癌の診断および治療
に有用な、新規酸性ペプチドである、レコグニン
類およびその関連物質に関する。 レコグニン類は正常なまたは異常な細胞または
組織（たとえば腫瘍細胞、人為的癌細胞）を処理
することによつて得られるものであり、これを支
持体上に担持するかまたは担持することなく体液
と接触せしめることによりそのケモレシプロカル
類（Chemoreciprocals）を得ることができる。
これらのケモレシプロカル類はイン・ビボまたは
イン・ビトロにおいて（たとえば定量沈降試験、
ウフタロニー（Ouchterlony）寒天内抗原抗体ゲ
ル拡散試験、免疫蛍光試験）、レコグニン類と免
疫化学的特異性を持つて反応する物質である。 本発明によつて提供されるレコグニン類は、正
常または疾患細胞または組織を中性緩衝液で抽出
し、得られた可溶化蛋白抽出物からpK値１〜４
のフラクシヨンを分離し、このフラクシヨンから
採取される、以下の特性を持つた酸性ペプチドで
ある： (a) 定量沈降試験およびウフタロニー寒天内抗原
抗体ゲル拡散試験において、特異的抗体により
単一線状沈澱を形成することが出来る； (b) 酸性または中性PHで水および水性溶液に可溶
である； (c) アルカリ性PHで水および水性溶液に難溶であ
る； (d) 分光吸収ピーク波長280mμを有する； (e) 分子量4000〜10000を有する； (f) グルタミン酸とアスパラギン酸の含量が高
く、ヒスチジンに対するグルタミン酸とアスパ
ラギン酸の比率が高い； (g) 動物に注入したとき抗レコグニン抗体を産生
し、その抗体はレコグニン類に属する他の酸性
ペプチドと特異反応する； (h) 不活性担体と結合したとき特異的免疫吸着に
より抗レコグニン抗体と結合し、これにより該
抗体の定量と精製を可能とし、かつイン・ビト
ロとイン・ビボのいずれにおいても該抗体がレ
コグニン類に属する酸性ペプチドまたはこれを
含む細胞と特異的に結合することを可能にす
る。 レコグニン類には具体的に上記の特性を備えた
種々の酸性ペプチドが包含されるが、その代表的
なものはアストロシチン（Astrocytin）とマリグ
ニン（Malignin）である。 アストロシチン：− アストロシチンは脳腫瘍組織、好ましくは脳神
経膠腫組織から得られる。まず該組織からアスト
ロシチン前駆体を含む蛋白質成分を抽出するが、
この場合の好ましい抽出方法としては該組織を中
性緩衝液とホモゲナイゼーシヨンまたは他の適宜
の破壊操作条件下に処理してアストロシチン前駆
体を含む蛋白質フラクシヨンを可溶化せしめる。
この時点では、アストロシチン前駆体はまだ蛋白
質、糖蛋白質、脂蛋白質、核酸、核蛋白質等の分
子量の大きな物質と結合している。この可溶化抽
出液を清澄化して不溶性粒子を除き、蒸発濃縮技
術によつて低分子量不純物を除去する。残りの溶
液を処理して他の不純物からアストロシチン前駆
体を分離し、pK値１〜４の蛋白質フラクシヨン
を得る。この場合の処理は、たとえば前記溶液を
クロマトグラフイーカラムに注ぎ、段階的に酸性
を高めた溶媒で溶出することによつて行う。中性
またはpK4までの酸性で溶出されるフラクシヨン
を捨て、pK1〜４のフラクシヨンを集め、この集
めたフラクシヨンを処理して分子量約8000の物質
を得る。この場合の処理は、たとえば該フラクシ
ヨンを濾過して低分子量物質すなわち分子量1000
以下の物質を除去し、ついで再度濾過を行つて分
子量25000以上の物質を除去することによつて行
なわれる。分子量1000〜25000のフラクシヨンを
たとえば薄層ゲルクロマトグラフイーで処理して
アストロシチンを得る。 このようにアストロシチンは脳神経膠腫組織を
中性緩衝液で抽出し、ホモゲナイゼーシヨンと高
速遠心分離を繰り返して実施し、得られた抽出物
からpK値約１〜４のフラクシヨンを分離し、こ
の分離したフラクシヨンから約230000までの高分
子量物質を集め、これから分子量約8000の物質を
単離することによつて得ることができる。 上記の方法によつて得られたアストロシチンは
定量沈降試験やウフタロニーゲル拡散試験におい
てその特異的抗体と単一線沈降物を形成し、水も
しくは酸性または中性PHの水溶液に可溶であり、
アルカリ性PHで難溶であり、分光光度計による吸
収ピーク波長が280mμであり、約8000の分子量を
有していることを特徴としている。 アストロシチンまたはグルタミン酸とアスパラ
ギン酸の残基の割合が極めて高く、ヒスチジンに
対するこれらの酸の割合が非常に高いことも特徴
的である。 マリグニン：− マリグニンは人為的な癌細胞、すなわちイン・
ビトロ培養した癌細胞から得ることができ、約
10000の分子量を有し、アストロシチンに類似の
しかしそれとは異なつたアミノ酸残基組成を有し
ている。すなわちグルタミン酸とアスパラギン酸
の割合が高く、かつヒスチジンに対するこれらの
酸の割合が高い。 マリグニンは発酵培地中で生育させた人口的癌
細胞を中性緩衝液でホモゲナイゼーシヨンと高速
遠心分離を繰り返しながら抽出し、この抽出物か
らpK値１〜４のフラクシヨンを分離し、このフ
ラクシヨンから約230000以下の高分子量物質を採
取し、これから約分子量10000の物質を単離する
ことによつて得ることができる。人為的細胞培養
で生産されるマリグニンの量および人為的細胞培
養で生産される全蛋白質の割合は人為的癌細胞培
養を大容量培養器中で実施することによつて増大
する。 この方法で得られたマリグニンは定量的沈降試
験およびウフタロニーゲル拡散試験においてその
特異的抗体と単一線沈降物を形成し、水もしくは
酸性または中性PHの水溶液に可溶であり、アルカ
リ性PHで難溶であり、分光光度計による吸収ピー
ク波長が280mμであり、約10000の分子量を有し
ていることを特徴としている。 なお、レコグニン類はブロムアセチルセルロー
スと複合してブロムアセチルセルロース―レコグ
ニンを形成することが可能であり、哺乳動物に注
射した場合特異的抗体である抗レコグニンを生産
することができ、該抗レコグニンは特異的にレコ
グニン前駆体に付着する。たとえば一つの抗レコ
グニン、すなわち抗マリグニンはイン・ビトロに
おいて脳腫瘍細胞に毒性を示す。 アストロシチン、マリグニンおよびそれらに類
似した物質の如きレコグニン類は、生物学系に導
入されてもよい物質として有用であつて、材料を
レコグニンで被覆するが如き異質な反応を減少す
ることができる。生物学系にケモレシプロカル類
が生じるようにレコグニンを導入するその他の例
がある。レコグニンはまた、特別な生物学系の成
長を栄養的に促進するのに使用されてもよい。レ
コグニンの有用性はまた、生物学系における適応
性を促進するために担体を有するレコグニンの複
合物から成るターゲツト（Target）剤が製造で
きることにある。そして例えばそのレコグニン複
合物はレコグニン自体の物理的化学的特性を有し
ている。担体は、レコグニンと複合物を形成する
とともに生物学的に実質的に不活性である物質か
ら選定されるべきである。 ポリペプチドまたは蛋白質と安定複合物を形成
するいかなる公知物質もレコグニンと複合するの
に有用である。その一例としてブロムアセチル―
セルローズの如きセルロース材がある。生物学系
に不活性であることに加えて、その担体は、本明
細書で述べる目的に有用なレコグニンの特有の物
理的化学的性質を変更しないものでなければなら
ない。 レコグニンとその担体とから成る複合物は、接
触される生物学系のケモレシプロカル類を製造
し、分離し、確認するのに有用である。レコグニ
ン−担体複合物はまた、導入される生物学系のケ
モレシプロカル類前駆体の製造を促進するのに有
用である。 ケモレシプロカル類の一つの類は、抗レコグニ
ン類すなわち抗アストロシチンおよび抗マリグニ
ンである。これらの物質は生物学系にレコグニン
を注射して製することができる。レコグニンの免
疫学的に有効な服用量は、従来の抗体製造技術に
従つて抗体反応を誘発するように体内組織または
体液と接触させて算出される。抗レコグニンは、
抗レコグニンを有する複合形剤を生物学系に導入
して成る生物学系の特異細胞または位置に診断
剤、栄養剤および治療剤の如き物質を投与するの
に使用することができる。その抗レコグニンはま
た、着色または放射性標識が腫瘍細胞にのみ生じ
るように、染料および放射性物質の如き標識物質
を配合した抗レコグニンを生体組織に適用するこ
とによつて、生体組織に腫瘍細胞が存在するか否
かを診断するのに有用である。さらに抗レコグニ
ンを使用するのは、レコグニンの免疫的に有効な
服用量の哺乳動物その他の生物学系に注射するこ
とによつて、他の有用なケモレシプロカル類（例
えばTAG、後述）の哺乳動物から産出高を増加
するためである。 従来、糖蛋白質複合物は、脳組織から製造さ
れ、抗体が形成されていた。タイサハス（Tay−
Sachs）の病的な脳から製せられた10B糖蛋白質
として知られた分離物質は、ラビツトに注射され
抗体が製せられた。これらのタイサハス抗体は、
腫瘍を有する脳の免疫螢光性研究に使用されてい
た。腫瘍神経膠ではなく反応的な普通の非腫瘍神
経膠のみがこれらの抗体によつて着色されてい
た。 これと対照的に、アストロシチンが腫瘍組織か
ら製せられた時、アストロシチンに対する抗体
（抗アストロシチン）が製せられ、脳の免疫螢光
性研究に使用され、普通の（非腫瘍）神経膠では
なく腫瘍神経膠のみが抗アストロシチンによつて
着色されていた。したがつて、原因組織、抗体の
性質および着色された細胞特有のタイプによつ
て、抗タイサハス抗体および抗アストロシチンは
異なる物質であるのは明らかである。 ケモレシプロカル類の他の類は、それらのケモ
レシプロカル類と複合したターゲツト剤である。
例えば、ターゲツト（ブロムアセチル−セルロー
スの如き担体と複合したアストロシチン物質）は
抗アストロシチンとの接触に使用される。このタ
イプの化合物は、複合されて、生物学系の特異細
胞または位置に診断剤、栄養剤および治療剤を投
与するために使用することができる。これらの化
合物はまた精製処理のためにも使用できる。例え
ば、抗アストロシチンは、ブロムメアセチルセル
ローズ−アストロシチン−抗アストロシチンを酸
またはプロテイナーゼ酵素で加水分解して製する
ことができる。ターゲツト剤はまた、ターゲツト
の免疫学的に有効な服用量を体内組織または体液
に接触させるなどによつて、生物学系のTAG物
質（後述）の量を増加するのに役立つ。 付加的なケモレシプロカル類はTAG剤（ター
ゲツトに付加するグロブリン）である。TAG物
質は、TAGを複合および分解するための期間を
変化するためにターゲツト剤を体液と接触させて
得られる。 二つの有用な実施態様はＳ−TAG及びＦ−
TAGである。 Ｓ−TAG（SLOW−Target−Attaching−
Globulin）の製造方法は、血清その他の体液をタ
ーゲツト（即ち、ブロモアセチルセルローズ−マ
リグニン）と約２時間又はそれ以上、低温例えば
約４℃で反応させ、Ｓ−TAGを生成物から開裂
すること、例えば約37℃の温度で約２時間希酸で
開裂することから成る。この方法に従つて製造さ
れた製品Ｓ−TAGは水性緩衝液に可溶であり、
寒天内抗原抗体ゲル拡散試験においてその相当レ
コグニンとの単系沈澱物を生成し、セロフアン膜
で透析不能であり、25000分子量以上の分子を保
持するミリポア−フイルターで留保され、マクロ
グロブリン域が約50000及びその倍数の薄層ゲ
ル・クロマトグラフイーによつて定められるよう
な異つた状態の凝固をする分子量を有し、そして
280mμの分光光度計吸収ピーク波長を有すること
を特徴とする。 Ｆ−TAG（Fast−Target−Attaching−
Globulin）を製造する方法は、血清その他の体液
をターゲツト（即ち、ブロモアセチルセルローズ
−マリグニン）と約10分間低温例えば４℃で反応
させ、Ｆ−TAGを生成物から開裂すること、例
えば約37℃の温度で約２時間希酸で開裂すること
から成る。この方法に従つて製造された製品Ｆ−
TAGは水性緩衝液に可溶であり、寒天内抗原抗
体ゲル拡散試験においてその相当レコグニンとの
単系沈澱物を生成し、セロフアン膜で透析不能で
あり、25000分子量以上の分子を保持するミリポ
ア・フイルターで留保され、マクログロブリン域
から約50000及びその倍数の薄層ゲルクロマトグ
ラフイーによつて定められるような異つた状態の
凝固をする分子量を有し、そして280mμの分光光
度計吸収ピーク波長を有することを特徴とする。 TAG製品は既知量の哺乳動物の血清その他の
体液によつて作られるＳ−TAG及びＦ−TAGの
濃度を決定してこの濃度と、癌を示すものとして
定められた値とを相関させることによつて、生き
た哺乳動物の癌腫瘍を探知するのに有用である。
TAG製品はまた組織部位の腫瘍細胞の存在を診
断するのに有用であるが、これは染料とか放射性
物質のような標識物質と接合したTAGを当該部
位に適用することから成り、それによつて腫瘍細
胞にのみ着色又は放射性標識が生じるものであ
る。更にTAG製品は腫瘍細胞に対して細胞毒性
があることが判明した。TAG製品はまた、診断、
栄養、及び施療用剤をTAG製品と錯状にしたも
のを導入することによつて、これらの剤を特定の
細胞又は部位に届かせるのに有用である。 細胞が完全に特定の場所を占めるようになる
と、植物又は動物における正常の細胞分割は制限
されるか又は抑止される。(a)正常の細胞が、自己
の占め得る場所を埋めたことを「認識する」機構
及び(b)この認識機構の作用が今度は細胞の分割を
抑止する機構は、共に知られていない。正常の認
識及び感知が生じたとき前駆体の濃度が増大し、
粒子及び細胞の認識及び感知に関係するような一
群の化合物であつて細胞を互いに連結したものが
製造されるようになつた。これらの化合物はレコ
グニン類と呼ばれる。通常の癌細胞からこれらの
化合物を製造しようと試みたところ、それらはそ
のようなものとしてはないことがわかり、また、
癌細胞が(a)その正常な体積を占めたことを認識す
る能力、及び／又は(b)その正常な体積を占めた際
に分割を止めるという能力、を失うと同時にその
分子構造に変化が生じたことがわかつた。 新規な化合物ならびにそのような化合物を製造
する方法が発見された。これらの新規化合物はレ
コグニン類と名付けられる。レコグニン類は、細
胞分割を認識し、止めることができないという点
で癌細胞の形態的特性を模倣する物理化学的特性
を有する新規化合物である。レコグニン類の使用
は癌の作用機構を見きわめる以上にすぐれたもの
である。何故ならばこれによつて癌の診断及び治
療ならびにその予防に役立つ直接製品ならびに方
法が提供されるからである。 マリグニン類を製造するのに人工的に培養した
細胞を用いることができる方法が発見された。
こゝに開示する方法の利点の一つは、マリグニン
類及びそれから作る新製品が事実上無制限の量で
効率的に製造することができるということであ
る。 本発明は癌研究の分野に優るものであり、また
すべての生長及び新陳代謝に影響を与えようと望
む一切の生物学系に直ちに適用できるものであ
る。かように、特定の化合物または人工的培養し
た適当な細胞型の化合物を製造することにより、
またこれらの物質から製品を更に製造することに
より、先ず最初に生物系における組織、細胞、細
胞小器官、亜小器官分子あるいは分子集合体に特
定の影響を及ぼすことができよう。こうして、発
育期の重要時期における特定の栄養効力、特定の
診断上の、予防上の、及び治療上の方法、及び人
工生物電気システムの構成（組織又は器管移植に
おける如く）がすべて最初に影響を受けることが
できる。これらの人工生物電気系は今やこれらに
隣接する通常の組織又は組成の特定のレコグニ
ン、マリグニン又はそれらのケモレシブロカルズ
の特性を持つようにすることができるので、「異
物」として「認識」され、それゆえ拒絶を含む異
物に対する反応を避けるものである。 本発明の他の態様は、特定の頭脳製品（アスト
ロシチン）に対する価値の高い特定の抗体状の製
品（アンチ・アストロシチン）を製造することで
あり、この抗体状製品をあらゆる種の神経系の特
定の点に特定に錯状となるように、そしてこれに
対する特定の伝達担体として用いることができる
ことである。マリグニン類及びアストロシチンは
レコグニン類である。 本発明の更に他の態様は、二つの新製品の生物
学的流体からTARGET−ATTACHING−
GLOBULINS（TAG）を製造することである。
これは二つの反応即ち第一は生物学的流体をマリ
グニン類を模倣する物理化学的形態を含む合成錯
体と反応させたものでターゲツトと呼ばれ、第二
は特定のTAGを錯体から開裂させたもので、そ
の生体に腫瘍があるかどうか生きた生体の生物学
的流体からの定量的表示を得て、即ち腫瘍の診断
試験から、そのように作られたTAGの測度によ
つてそのように命名されたものである。TAG製
品及び抗マリグニンは物理化学的にマリグニンを
補なうものであるため、これらはケモレシプロカ
ル類と命名される。 更に、血清と使用する特定のターゲツト試薬と
の反応に許される時間によつて、また錯化された
製品の開裂に許される時間によつて、二つの定量
的及び定性的に明かに区別されるTAG製品を製
造することができることが発見された。 脳腫瘍のある、及び種々の他の医学的故障のあ
る、ならびになんら明らかな疾病の徴候のない多
数の異つた人々から製造することができたこれら
の製品の量を検査した後、一定の個人について製
造することができたこれらの二つの新規製品の量
は、その個人に脳腫瘍があつたかどうかを示すも
のであることが明らかとなつた。それゆえ脳腫瘍
の新規血清診断試験法が発見されたのである。 これらの新規製品の血清その他の生物学的流液
から脳その他の腫瘍を診断する用途のほかの効用
は、TAG及びレコグニン化合物は脳腫瘍の外科
手術で取除かれた脳腫瘍及びその周囲の組織の組
織学的部位において優先的に神経膠腫瘍細胞につ
くという証拠で説明される。この腫瘍細胞の
TAG及び抗レコグニン類による優先的標識は標
準免疫螢光技術によつて証明される。このよう
に、新規方法はまた、組織学的検査によつて新規
を確度をもつて、腫瘍細胞が除去した組織の極端
部まで浸透しているかどうかを決定するのに用い
ることができ、腫瘍が脳その他の器官にまだ残つ
ている可能性又は腫瘍細胞が除去した組織の周辺
からなくなつている可能性を示し、腫瘍のすべて
が脳又は他の器官から取除かれた可能性を示すこ
とができる。更に、記述したように製造した
TAG及び抗マリグニン類は試験管内で組織培養
体に生成した膠腫脳腫瘍細胞に対して細胞毒性が
あることがわかつた。こゝでは組織培養体に生成
させた、他の媒体での腫瘍細胞に対するこの高親
和性は、新製品TAGの特定結合潜在力を更に証
明するものであり、合成製品ターゲツトに関して
及び組織学的部位における腫瘍細胞に関して
TAGの性質が表わすようにTARGET−
ATTACHING−GLOBULINS（TAG）の名称
の採用を説明するものである。更に、腫瘍細胞に
対するTAG及び抗レコグニン類の細胞毒性は腫
瘍にかゝつた疑いのある患者の血清の更に新しい
診断試験法を提供する。このように、例えば、こ
れらの患者の血清又は他の体液をターゲツトと反
応させてTAGを製造し、製品TAGは組織培養体
中で腫瘍細胞の生長を細胞毒性検査する。一定の
個人の血清から製造することができるTAGによ
つて表わされるTAGの濃度及び細胞毒性度は単
に診断上の利点があるばかりでなく、特定の患者
についての手術前及び手術後の疾病の経過を探索
する上にも価値のあるものである。放射性及び染
色探知物をTAGと結合すれば、腫瘍の診断及び
その正確な部位の判定をする場合生体に有用であ
る新規なTAG製品を作ることができる。かよう
にして、動脈内又は静脈内のいずれかに適当に標
識したTAGを脳脊髄液内に、又は直接脳組織又
はその窩に注射すれば、放射性手段により、又は
結合した染料の視覚化により、脳腫瘍の存在に説
明することができる。というのはTAGが特別に
付着するのは腫瘍細胞にのみであるからである。
更に、この方法は脳腫瘍の部位を正確に視覚化す
ることができる。これは脳腫瘍を標識するため兎
の血液で作つた抗アストロシチンを用いるこの生
体内診断方法の改良と見なすことができる。なぜ
ならば人間の血清から作つたTAGを用いれば異
蛋白反応の可能性を避けられるからである。
TAG及び抗レコグニン類は試験管内及び生体内
の双方での腫瘍細胞を含むアストロシチン前駆体
に優先的に付加することができる化学的特殊性を
持つので、例えば放射性の、プロトン補獲剤又は
他の毒性のある物理的又は化学的剤と組合わせ
て、これらの毒性のある物質が腫瘍細胞に隣接す
る正常細胞と比較して腫瘍細胞に付加する特殊性
によつて優先的に局在化することができるよう
に、診断学的にと同じく治療的にもこれらの製品
を用いることができる。。この選択性は、腫瘍の
効果的な化学的又は物理的治療を達成するための
決定的な、少くとも一つの決定的な要素として、
またこれまで達成されなかつた要素として、普偏
的に認められる。かように、TAGは優先的に腫
瘍細胞に付加する点で効果のあることを証明した
ものであり、これらの理由で新規な治療製品とし
ての有望性を持つべきものである。 悪性の腫瘍を持つた患者の血清においては、下
記の実施例に見られるように、FAST−TAG（Ｆ
−TAG）と区別される一つの型のTAG、即ち
SLOW−TAG（Ｓ−TAG）が、かような腫瘍の
ない患者におけるよりも、一定量の血清から比較
的多量に製造することができる。このことは、
TAGの自然に発生する前駆体（Ｐ−TAG）のい
ずれか一つの濃度が増大するか又はＦ−TAGよ
りもＳ−TAGが比較的試験管内で良く出来るよ
うな他の要因があることを示唆するものである。 実際の合成製品ターゲツト及びTAGのその前
駆体に対する、そして、云いかえれば、生体内に
存在することがあり得るこれらに対する仮定され
たが証明されてない細胞「抗原」及び循環する
「抗体」の作用に対する、可能な作用関係は、ま
だ解明されていない。このように例えば、抗体状
の様式で、Ｆ−TAG及びＳ−TAGは寒天内抗原
抗体ゲル拡散においてアストロシチンと単一で
別々の系統の反応を生成する。それで、兎にター
ゲツトを注射すれば、ターゲツトと反応した後、
兎の血清から作るTAG製品の収率を増やせるこ
とになる。循環する抗体に似た前駆体が分裂しな
い細胞に隠されている細胞抗原に対して正常な水
準があり得るという発見は、一対のものゝ可能な
作用についての問題を提起する。こゝで、細胞の
増殖及び細胞の死滅の制御に作用するTAG前駆
体（Ｐ−TAG）及びターゲツト状物質が生体内
に存在することを提起する。かように、例えば、
通常は直接は血清蛋白に曝されることのない細胞
構成物の露出が細胞分裂中に起ることがある。こ
の細胞構成物の露出の結果、構成物はターゲツト
状物質に変換されるようになり、これに血清から
Ｐ−TAG状分子の付加が生じ、これが細胞分裂
を刺激するか又は抑止することが考えられる。あ
るいは、傷害を受けた又は作用不良の不分裂細胞
はＰ−TAG状分子の付加が回復可能であるよう
なターゲツト状物質を露出させることがある。し
かし、ある細胞状態の下ではＰ−TAG状分子の
付加は細胞の破壊を招くことがある（例えばこゝ
に記載した合成で製造したANTIGLIOMA−
TAGは組織培養体中で生長する膠腫瘍細胞に著
しく細胞毒性がある）。かように、これは、細胞
分裂の制御について、また生体の生涯を通じて体
内の個々の細胞の修復又は除去についての正常な
機構の模範を示すものといえよう。脳内膠腫の場
合のように急速に分裂する癌細胞に生じるよう
に、細胞構成物の露出が異常に増大して異常に大
量の細胞ターゲツト状物質が形成される場合は、
一つの型の血清Ｐ−TAGの濃度が他のものに比
べて増大することが起ることがある。 前駆体の実際の作用がどのようなものであろう
と、こゝに記述した方法によつて悪性の腫瘍のあ
る患者の血清から試験管内で製造することができ
るTAGの主要な一つの型、SLOW−TAG（Ｓ−
TAG）の相当量の増加は、下記の実施例に記載
した血清診断試験の基礎となるものである。 なお、以下の実施例にレコグニン類の具体例と
してアストロシチン、マリグニンおよびリーラー
レコグニンを示すが、これらはいずれも前記(a)〜
(h)の特性を有する酸性ペプチドである。 実施例 １ 粗アストロシチン先駆体含有分画の生成：− 人間の脳膠腫腫脹組織を切り取り、表面の血管
と普通の脳組織とを可能な限り分離させる。分離
した腫脹組織の代表的な量11ｇをとり、これを
1.5ｇの部分６個および1.0ｇの部分２個に分け
る。ついで各部分を次のように処理する。 各部分を中性緩衝溶液中、超音波または他の機
械的手段により均質化する。たとえば、各部分を
ワーニング混合機中、0.005M燐酸緩衝液（PH７）
の100c.c.／ｇ組織に均質化する。蛋白の変性を防
ぐために、上記均質化処理は冷条件下に行うべき
である。たとえば、該混合機を０〜５℃の冷室で
あらかじめ冷やし、約３分間で操作すべきであ
る。 ついで、均等質を清澄にするために、たとえば
冷凍した超遠心分離で80000倍重力を30分間作用
させて遠心分離させる。可溶性上澄液を傾斜分離
し、冷下に保つ。不溶性残渣は、さらに中性緩衝
液100mlを用いて再び均質化し、上記と同様に遠
心分離処理し、得られる２番目の可溶性抽出物と
上記１番目のそれと合する。上澄液中、蛋白が50
マイクログラム／ml溶液以下となるまで均質化と
遠心分離をくりかえすとき、収率は非常に良好で
ある。このことは、ほとんどの組織の場合、５回
の抽出で達成される。 このようにして得た溶液を合し、つづく透析で
十分に蒸発させることにより濃縮する。冷下、
0.006M燐酸緩衝液の透析により15mlの溶液を得
る。この溶液の量を記録し、一部を全蛋白の分析
に用い、残余を分けてpK1〜４の蛋白質分画を得
る。以下に述べるクロマトグラフイは好ましい分
別法である。 溶液を、冷室（４℃）中、0.005M燐酸ナトリ
ウム緩衝液で平衡させたDEAEセルロース
（Cellex−Ｄ）カラム2.5×11.0cm上で分別する。
溶出溶媒は以下の溶媒（溶液）を用いることによ
り段階的に変える：溶液(1)NaH₂PO₄4.04ｇおよ
びNa₂HPO₄6.50ｇを蒸留水15000mlに溶解する
（0.005モル、PH７）；溶液(2)NaH₂PO₄8.57ｇを蒸
溜水2480mlに溶解する；溶液(3)NaH₂PO₄17.1ｇ
を蒸溜水2480mlに溶解する（0.05モル、PH4.7）；
溶液(4)NaH₂PO₄59.65ｇを蒸留水2470mlに溶解す
る（0.175モル）；溶液(5)NaH₂PO₄101.6ｇを蒸溜
水2455mlに溶解する（0.3モル、PH4.3）；溶液(6)
NaH₂PO₄340.1ｇを蒸溜水2465mlに溶解する
（1.0モル、PH4.1）；溶液(7)80％燐酸（H₃PO₄）
283.64ｇを蒸溜水2460mlに加える（1.0モル、PH
1.0） 神経組織抽出物６〜10mlを加える。これをカラ
ムに通す。ついで溶液(1)を上に加え、溶液(1)300
mlを受ける貯留器を取付けて重力でカラムに落下
させる。自動的な分画収集装置を用いて溶出液３
mlを集める。ついで、次の溶出管番号で、溶出溶
液を変えて用いる。溶液(2)：管８８で、カラム上
溶液をレジンの頂部に運び、ついで溶液(2)50mlを
上から加え貯溜器を取付ける：管９８で、溶液を
カラム上、レジンの頂部に運び、ついて、溶液(3)
75mlを上から加え、貯留器を取付ける；溶液(4)：
管１１４で、溶液をカラム上、レジンの頂部に運
び、ついで溶液(4)150mlを上から加え、貯留器を
取付ける；溶液(5)：管１５５で、溶液を、カラム
上、レジンの頂部にもつていき、ついで溶液(5)
125mlを上から加え、頂留器を取付ける；溶液
(6)：管１８７で、溶液をカラム上、レジンの頂部
にもつていき、ついで溶液(7)175mlを上から加え、
貯留器を取付ける；管２６０に到るまで溶出を続
けて溶出を完了する。組織抽出物の各容ごとに新
たに製したレジンを使用する。各管を蛋白の定量
分析に付す。管２１２〜２３０内の溶出液を合
す。これは粗生成物を含み、これよりアストロシ
チンが得られる。 この過去においてフラクシヨン１０Ｂと呼ばれ
る粗生成物についてのデータは公にされているが
〔プロテイン・メタボリズム・オブ・ザ・ナーバ
ス・システムpp555〜69（Pleum Press、1970
年）；ジヤーナル・オブ・ノイロサージヤリー，
Vol.33、pp281〜286（1970年９月）参照）〕、ここ
でアストロシチンと呼ばれる特定の生成物を分画
１０Ｂから分離することを達成した。粗分画１０
Ｂは、はじめの新鮮な神経系組織１ｇにつき0.1
〜10mgの生成物として製せられる。これはアスト
ロシチン前駆体の他に、多数のヘキソシス、すな
わちグルコース、ガラクトース、マンノース；グ
ルコースアミン、ガラクトースアミンおよびマン
ノースアミンなどを含むヘキソースアミン類；お
よび時として、他の糖類、フコース、リボースお
よび多分ランノースなどを包含する共有結合炭化
水素残基を種々の量含んでいる。また、高分子重
量の蛋白生成物、いくつかの脂質および核酸を含
んでいる。 実施例 ２ 粗アストロシチン前駆体含有分画からの精製ア
ストロシチンの生成：− アストロシチン前駆体含有分画をさらに汚染物
から単離する。好ましい具体例として、実施例１
で得た物質を代表的なカラム（40cm（長）×2.5cm
（直径）、196ml容）を用いてセフアデツクスＧ−
50レジン上クロマトグラフイに付す。使用圧力は
40mm・Hg；流量は35ml／Hr、緩衝液は0.05モル
燐酸緩衝溶液（PH7.2）を使用。最初のフロー・
スルー（flow through）のピークはアストロシ
チン前駆体と共に不純物を含むが、つづくピーク
は不純物のみを含む。 好ましい具体例では、上記最初のフロー・スル
ー・ピークにおける生成物をついで、セフアデツ
クスＧ−15上で濃縮し、ついで実施例１と同じ溶
液(1)〜(7)を用い、実施例１と同じ溶出段階を用い
てセレツクス−Ｄのカラムに通す。アストロシチ
ン生成物は、上記と同じ管（番号212〜230）内
に、鮮鋭なピークとして存在し、セレツクス−Ｄ
クロマトグラフイー上、多量の汚染物質の存在な
しに、挙動する。 ついで低分子量汚染物をミリポアー・デイスク
過などの常套手段により除去する。好ましい方
法として、アストロシチン生成物をミリポアー・
ペリコン・デイスクNo.1000、13mm（このものは、
1000より大きい分子量を有する物質をとらえ、
1000より小さい分子量を有する物質を透過させ
る。）に通して過することにより、塩および他
の分子量の小さい汚染物質を分離する。アストロ
シチン生成物はペリコン・デイスク上に残留し、
実施例１の溶液(1)で洗浄することにより回収され
る。 ついで、分子量約8000の化合物を上記溶液から
単離することによつてアストロシチンを得る。そ
の方法として、次の如き薄層ゲル（TLG）クロ
マトグラフを用いるのが好ましい。装置として、
ボツフリンゲン・マンハイムGmbH；フアーマ
シア・フアイン・ケミカルズ・アンド・
CAMAG（スイス国）によつて設計された市販の
ものが使用される。セフアデツクスＧ−200のレ
ジン（極上品質のもの）2.5ｇを
0.02MNa₂HPO₄KH₂PO₄中0.5MNaClの燐酸塩緩
衝液PH6.8（6.6〜7.0）85ml内に備える。室温で
時々ゆるやかに混合しつつ２〜３日間膨潤
（Swell）させる。（磁性およびその他の撹拌手段
を用いるべきでない。）。膨潤したゲルを冷凍温度
で３週間安定させる。しかし、細菌および菌の増
殖は膨潤ゲルを阻害する。もし、ゲルをより長時
間保持するには、少量の制菌剤（ナトリウムアジ
ド0.02％）を加えるべきである。2.5ｇの乾燥ゲ
ルを用いて、20×20cm、厚さ0.5mmのガラス・プ
レート２個を作る。このプレートは室温で10分間
乾燥し、湿潤なチヤンバー内で約２週間貯蔵する
こともできるし、また適当にあらかじめ平衡状態
にした後直ちに使用することもできる。（通常、
夜間に、最底12時間要す。）。平衡の主要な機能
は、静置層と可動層間の割合を正常化することで
ある。水平位置で予備平衡状態にしたプレートを
用い、測定される物質を、マイクロピペツトでス
タートラインにおける斑点または条痕として適用
する。0.2〜２％の蛋白溶液10〜20mlを顕微鏡カ
バー・スライド（18×18mm）の端に設置し、ゲル
表面に対持させる。数秒後、溶液はゲルに浸潤す
る。全サンプルをまずカバースライド上に置き、
ついですばやく適合させる。もし使用する物質が
十分でないと、分離後に個々の斑点を位置せしめ
ることが困難である。もし、余り多くの物質を適
用すると、明確に分離することができない。操作
を容易にするために緩衝液でサンプルを希釈し、
22゜の角度でプレートを傾斜させる技術で、サン
プルの分離を行う。流量は１〜２cm／時間が非常
に適している。標識物質（シトクロムＣ、ヘモグ
ロビン、ミオグロビンまたはブロモフエノールブ
ルーで分類・識別されるアルブミン）はプレート
を横切つて異なる位置に適用され、また未知のも
のの相対的距離（移動性）の計算のための照合蛋
白としての機能する。サンプルを適用した後、プ
レートを装置内に再置し、ペーパーの芯をかるく
下方におしてゲル層と十分に接触させる。ペーパ
ーの芯は浸漬させてはならない。過剰の水分はぬ
ぐい去る。貯留器内の液溶媒は容器上端から１cm
に一定に保つ。操作は、分離の進行に依存して通
常４〜７時間で完結する。直接、有色物質の分離
を行う。分離した蛋白の斑点は、クロマトグラフ
イの分離を完結した後に、TLGプレートのペー
パーシート・レプリカに移すことにより、および
あらかじめ洗浄したメタノール＋H₂O＋酢酸−
90：５：５上、48時間着色することにより、容易
に見えるようになる。ペーパー・シートは３mm、
紙である。20×18cmのペーパー１枚をゲル層の
上に置き、ゲルと適当・十分な接触を確実にする
ためにおしつける（ロールする）。ペーパー（レ
プリカ）の下に空気が捕われないように、かつ、
ゲル層を乱さないように注意する。ゲル層から液
層をペーパーで浸透し、約１分後に除去し、直ち
にオーブン中、60℃で15分間乾燥し、通常の染色
法で染色する。染色は、10％炭酸ナトリウム中
0.03％ジアゾ化スルフアニル酸（パウリー試薬）
を用いてレプリカーペーパーにスプレイすること
によつて達成される。また、メタノール−酢酸
（99：10v／ｖ使用）中、アミド・ブラツクの飽
和溶液を用いて染色を達成することもできる；染
色時間は５〜10分である。脱色するには１容量の
水と混合した２容量のメタノールと酢酸（90：
10）を用いて洗浄する。多量の洗浄をせずにバツ
クグランドを低く染色するのは困難である。も
し、アストロシチンが染色される場合のみ、プレ
ート自体を約60℃（空気循環手段を有するオーブ
ン中で）乾燥してもよい。単離のために、プレー
トを、室温で風乾する。過熱するとクラツクが生
ずるが、これは通常、セフアデツクスＧ−200プ
レートを15〜30分で乾燥する温度、50〜60℃を用
いて回避することができる。乾燥プレートはメタ
ノール＋H₂O＋酢酸（75：20：５）の混合物中、
10分間膨潤させ、同じ溶媒系中飽和アミノブラツ
ク中、５時間染色し、ついで乾燥する前に、同じ
溶媒中、２時間浸漬することによつて洗浄する。
分子量を決定するために、直接プリント（レプリ
カ）上またはデンシトグラム上、スターテイング
ラインから各帯の中央までの距離を0.05mmの精度
で測定する。測定結果を供試蛋白の移動距離
（dp）に対するシトクロムＣまたはミオグロビン
（対照蛋白として使用される）の移動距離（dm）
の比として定義されるR_n値で表わされる：供試
物質に対する標準物質の移動距離の関係は式：
（−R_n＝dp／dm）で表わされる。R_nに対して、使用 された標準物質の分子量の対数をプロツトするこ
とによつて直線の目盛定め線が得られる。この直
線から未知の蛋白の分子量が得られる。非常に正
確な結果を得るには、プレートに適用する前に、
等しいパーツの蛋白サンプル溶液を標準物質、こ
の場合はシトクロムＣと混合すればよい。上記
TLG法により、アストロシチン生成物は、標準
シトクロムＣと対照して約0.83＋／−0.02の距離
に個別の斑点として観察され、アストロシチンに
対し、分子量約8000が得られる。この方法によ
り、分子量の若干の相違に基づいて、いくつかの
個別の生成物がアストロシチンから分離される。
このようにして、この点に汚染物質として運ばれ
る分子量約64000，148000および230000を有する
３つの生成物およびしばしば分子量32000生成物
が見出され、上記TLG法で除去される。アスト
ロシチン生成物は、乾燥形能で、ゲルに吸われ、
溶液(1)に溶解し、遠心分離または他の類似の手段
でレジンを分離する。 この段階で製したアストロシチン生成物は蒸留
水に可溶であり、中性、酸性PHで可溶、アルカリ
PHで不溶であり、分光光度計吸収ピーク波長
280mμを有する。これは、上記の如く約8000の分
子量を有するポリペプチドである。その共有結合
したアミノ酸は、6NHClでの加水分解ついで自
動的な定量測定により次の如きアミノ酸の平均組
成を有することが示される。 残基数（約） アスパラギン酸 ９ スレオニン ５ セリン ６ グルタミン酸 13 プロリン ４ グリシン ６ アラニン ９ バリン ４ 1/2システイン ２ メチオニン １ イソロイシン ２ ロイシン ８ チロシン ２ フエニルアラニン ３ リシン ８ ヒスチジン ２ アルギニン ４ 計 88 システイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイ
シン、アンモニア、イソデスモシン、デスモシ
ン、ヒドロキシリシン、リシノノルロイシンおよ
びガンマ−イミノ酪酸はいずれも検出しうる量は
存在せず、グルコサミンが微量存在する。 実施例１における出発脳腫瘍組織11ｇから、上
記方法で精製アストロシチン約３mgが得られる。 実施例 2A リーラ（REELER）レコグニンの生成：− リーラ病は遺伝による病気であり、動物は安定
な調整のとれた運動筋肉の活動を行うことができ
ず、特定の展開時間においてある神経細胞が脳の
特定の位置、小脳へ移動することができず、リー
リング状態を呈する。電子顕微鏡での研究によれ
ば、特定の神経膠細胞が垂直の棒状軸を与え、こ
れに沿つて新しい細胞が、正常な状態において新
しい位置に移動する、ことが示された。リーラー
病で、新しい神経細胞がこれらの神経膠繊維を登
ることができないことは神経細胞もしくは神経膠
またはその両方におけるいくつかの障害によると
考えられる。 実施例１および２の方法に従い、マウスのリー
ラー脳からのレコグニンを得、正常なマウスの脳
から製したレコグニンと比較する。正常なマウス
の脳の全域から製したレコグニンの分子量は8000
である。“リーラー”レコグニンの分子量は3600
〜5000である。“リーラー”レコグニンは、その
非常に小さい分子量によつて示されるように異常
である。さらに、リーラーマウスの脳の小脳から
製し得るレコグニンの量は正常なものと対比する
とき大いに少い。これを表に示す。

【表】 表には、リーラーマウスの小脳にレコグニン
濃度の著じるしい減少があり、脳の他の部に同量
またはより多くのレコグニンが有ることが示され
ている。レコグニンは脳の他の部分から小脳へ移
動しないかまたは、リーラーマウスの脳の他の個
所で若干増加していることはある補償行為を反映
している。 リーラーマウスの脳における病理学的レコグニ
ンは、細胞内において、認知におけるレコグニン
の役割を確かなものとし、かつ認識する適当な位
置に位置することを達成するための、移動する脳
細胞がしなければならない接触ができないことと
関連している。 同様にして、マウスのリーラーの脳から製せら
れるレコグニンに対する抗レコグニンが製せら
れ、ここにのべたように、抗アストロシチンおよ
び抗マリグニンの使用法と同様にしてマウスに使
用されてよい。 実施例 ３ 人工ガン細胞培地発酵におけるマリグニン前駆
体の生成：− 一般に、滅菌処理は注意深く行なわれる。 すべての溶液（たとえば、ハンクの平衡塩
（BSS）、Ｆ−10栄養培地、子牛の胎児の血清、ト
リプシン溶液）を、使用前に水浴中、約35℃で約
20分もしくはそれ以上の時間培養する。 下記の如き適当な培地を用いることにより、細
胞を腫瘍組織から分離し、多世代にわたつて試験
管内で増殖する。滅菌溶液、たとえば、12−プロ
パノールおよびアムフイルまたはクレオリン溶液
であらかじめ洗浄したビーカを用いる。 好ましい具体例として、人工ガン細胞（すなわ
ち、多世代の間、試験管内で増殖した細胞）を
250ml容フラスコで生育する。細胞が増殖する液
体培地をあらかじめ洗浄したビーカに入れる。つ
いで細胞をハンクのBSSまたは他の類似の溶液を
用い、約30秒間静かに洗浄する。撹拌を避ける。
すべての壁および表面を洗浄する。冷下で約10分
間、3000rpmの遠心分離により溶液を細胞から清
澄にする。培地を上記の如く、ビーカーに注ぐ。
少量の緩衝プロテイナーゼ・エンザイム溶液を加
え、細胞の消化を避けるためにすばやく洗浄す
る。好ましい方法として、トリプシン溶液
（EDTA）１〜２mlを加え、わずか10秒間洗浄す
る。トリプシン溶液を流出させる。 同じ量の新鮮なトリプシン溶液を加え、顕微鏡
観察で細胞がチヤンバー壁から分離するのが見ら
れるまで培養する。これには通常、５〜10分間を
要する。適当な増殖培地、たとえばＦ−10栄養培
地100ml中、子牛の胎児の血清の７〜10％溶液50
mlを加える。 細胞と共に新鮮な培地25mlを新しい増殖用チヤ
ンバーに移して繁殖させる。両チヤンバーを培養
機中、35℃で約７日間置く。本実施例におけるこ
れまでの操作により、人工ガン培養細胞は約７日
ごとに２つの新しい培地に分割される。各増殖チ
ヤンバーについて、この全操作を、ほゞ７日の間
隔をおいて望ましい頻度だけくり返す。このよう
にして、試験管内の生育細胞数はほゞ７日ごとに
２倍になる。 約７日間の増殖の後、マリグニンを製するため
に細胞を抽出する。たとえば、上記各250ml増殖
用チヤンバー内の増殖細胞は以下の如く再生され
る。 培地を遠心分離管にうつし、冷下、3000rpmで
10分間遠心分離する。培地を捨てる。増殖用チヤ
ンバー内に残つている細胞をチヤンバー壁から剥
離して、中性緩衝溶液で遠心分離機内に洗い流し
込む。細胞を中性緩衝溶液で２回洗い、再び、冷
下、3000rpmで遠心分離し、培地を捨てる。粗マ
リグニン前駆体含有分画の抽出のための準備がで
きるまで中性燐酸塩緩衝液10ml中に洗浄した細胞
を懸濁させる。 実施例 ４ 粗マリグニン前駆体含有分画の生成：− 実施例３で製した、中性緩衝液中に懸濁する洗
浄した細胞を、大部分の蛋白の変性を避け得る条
件下に機械的に粉粋する。好ましい方法として、
洗浄した細胞を冷下、超音波で20秒間処理する。
超音波処理後、細胞残渣を30分間、30000rpmで
遠心分離し、上澄液を傾斜分離する。緩衝溶液10
ml部を用いて残留する細胞残渣を洗浄する。超音
波処理および遠心分離処理を上記の如く行い、上
澄液を含す。この操作を再度くりかえす。 上澄液を合し、十分に蒸発させて容量を約30ml
から約６〜７mlにする。標本を全蛋白分析に用
い、残部を、アストロシチン前駆体についての前
記実施例１に記載の方法に従つて分別する。 実施例 ５ 粗マリグニン含有分画からの精製マリグニン生
成物の生成：− アストロシチンについての実施例２の方法によ
つてマリグニン生成物をさらに汚染物質から単離
する。 好ましい具体例のTLG段階では、マリグニン
生成物は標準シトクロムＣに対比して約0.91＋／
−0.02の距離に個別の斑点として観察され、マリ
グニンに対し分子量約10000が与えられる。 この段階で製せられたマリグニン生成物は蒸留
水に可溶であり、中性または酸性PHで可溶、アル
カリPHで不溶であり、分光光度計の吸収ピーク
280mμを有す。これは分子量約10000を有するポ
リピペチドである。 薄層ゲルクロマトグラフイ測定により示される
ように、培地の継続する世代において安定せしめ
た培養培地において製したマリグニンの分子量を
表に示す。分子量測定の再現性はTLGクロマ
トグラフイの固有の制約の観点から顕著である。

【表】 マリグニンの共有結合アミノ酸は6NHClで加
水分解し、ついで定量測定によつて以下のアミノ
酸の平均組成を有することが示される。 残基の数（約） アスパラギン酸 ９ スレオニン ５ セリン ５ グルタミン酸 13 プロリン ４ グリシン ６ アラニン ９ バリン ６ 1/2システイン １ メチオニン ２ イソロイシン ４ ロイシン ８ チロシン ３ フエニルアラニン ３ リシン ６ ヒスチジン ２ アルギニン ５ 計 89 アミノ酸システイン酸、ヒドロキシプロリン、
ノルロイシン、アンモニア、イソデスモシン、デ
スモシン、ヒドロキシリシン、リシノノルロイシ
ンおよびガンマアミノ酪酸は検出し得る量存在し
ない。 実施例３の12個の250ml反応チヤンバーから得
られる純マリグニンの収量は、マリグニン約１mg
である。 マリグニンとアストロシチンの特異の構造は、
これらの組成を実質的に既知の蛋白物質と比較す
る徹底的なコンピユータによるサーチによつて確
かめられる。 マリグニンおよびアストロシチンのアミノ酸化
合物、１モルあたりのアミノ酸残基の総数の観点
からの、各アミノ酸コンポネントの絶対量および
相対量、並びに分子の分子量の観点からの、各ア
ミノ酸コンポネントの絶対量および相対量を、世
界で、蛋白組織について最も広汎に知られた文
献、すなわちナシヨナル・バイオメデイカル・リ
サーチ・フアウンデイシヨン（ワシントン・デイ
ー・シー）のそれに対してマトリツクス・コンピ
ユータ分析にゆだねた。何百、何千の蛋白および
蛋白フラグメントと比較したマトリツクス分析に
おいて、アストロシチンまたはマリグニンの組織
と同一もしくは非常に近似する組織すら見出され
ない。 とにかく組織的に関係する蛋白のみ、その個々
のアミノ化合物と分子量について比較のために表
に示す。無数の可能性の中から、構造における
各程度の類似性を確定すべくコンピユータのプロ
グラムを組んだ。このようにして、たとえば、よ
り大きなまたはより小され分子量の蛋白、または
85より少ないかもしくは95より多い残基を有する
蛋白、または12より少ないかもしくは15より多い
グルタミン酸残基を有する蛋白、または６より少
ないかもしくは11より多いアスパラギン残基を有
する蛋白などは包含される20のアミノ酸と合致し
ない。

【表】

【表】 上記のごとき指紋は適合すべき22個の変数を有
する。ある物質は１個、４個もしくは５個の変数
に関して適合するが、22個の変数すべてに関して
適合するものはないものと見られる。事実、14個
（その内、８個の変数において差異を認める。）を
越える変数に関してよく適合するものはない。 それ故、最も密に適合するものはチトクローム
b₅（人間の）である。表中に見られるように、
そのアラニン、アルギニン、アスパラギン、アス
パラギン酸、システイン、グルタミン、ヒスチジ
ン、メチオニン、チロシン、トリプトフアン残基
はすべてアストロシチンおよびマリグニンとは著
しく差異があることを識別することができる。チ
トクロムb₅はヒスチジン分子７個を含むのに対し
て、アストロシチンおよびマリグニンはこの分子
２個のみ含むので、両者が同一の化学構造を有す
る可能性はない。アストロシチンおよびマリグニ
ンの組成に関する最も異状な事柄はグルタミン酸
濃度が高い点にある。89個中、残基５〜６個のみ
を見出し得るように期待される。 上記に次いで密接に適合するものはロイカエ
ネ・グラウカ（Leucaene glauca）およびアルフ
アルフア中のフエロドキシン類であるが、これら
はそれぞれアミノ酸４個および６個を有すること
において異なり、且つこの両者はそれぞれ残基96
個および97個を有する点で異なる。その他の適合
するものとして大腸菌（E.coli）26のアシル担体
蛋白が挙げられるが、これは残基数がアミノ酸11
個においてマリグニンおよびアストロシチンと著
しく異なり、またこれは残基77個のみを有する点
で異なる。 他の脳蛋白（牛、豚のノイロフイシンおよびゴ
ナドトロピン放出ホルモン）を記録した（表参
照）が、このもののコンピユータに記憶された数
10万種の蛋白フラグメントから、いずれも非常に
適合の悪いものである。 呼吸蛋白はその元のままの状態において金属お
よび／またはヘム成分を含有することができる
が、単離された状態の蛋白フラグメント、たとえ
ばアポチトクロムb₅は金属およびヘム成分のいづ
れをも含有しない。アストロシチンおよびマリグ
ニンの微量分析結果によれば、鉄、硫黄、リン、
マグネシウムを含有することなく（0.01％以下）、
28mμに典型的吸収スペクトル特性を有する。ア
ポプロテインと共にヘム物質を構成せしめ、その
吸収スペクトルを測定した結果、400および
450mμの間に典型的吸収が認められた。 アストロシチンおよびマリグニンは他のすべて
の蛋白および蛋白フラグメントと異なり、構造的
に異なるものであるにも拘らず、これらの構造は
呼吸蛋白のそれと密接な関連性を有するというこ
とは注目すべきことであつて、多分非常に重要で
ある。発生遺伝学的観点およびその化学構造にお
ける機能的観点の双方から、多くの重要な関連性
を引出すことができるということはこの技術分野
においてよく知られている。アストロシチンおよ
びマリグニンが新しい蛋白物質であつてその構造
的等価物がその位置で呼吸作用を示し、従つてこ
れらの蛋白が他に逆作用を示すのであるから、癌
の大問題の１つ（すなわち貧欲且つ急速に増殖す
る悪性細胞に対し、エネルギー関係をいかにして
満足なものとするかという問題）を解決するため
の光明を与えることとなつた。 かかる発見の理論的重要性はともかくとして、
より悪性な細胞中にマリグニンの割合を増加せし
めた前記データおよび抗マリグニン物質は癌細胞
のマリグニン様化学物質に結合しているばかりで
なく、かく結合した坑マリグニンもまた癌細胞に
対して毒性を有することを示した後記データは共
に重要な意義を有する。本発明における抗マリグ
ニン生成物は癌細胞中で分別的にその中のヘム化
合物に結合しているから、もしそのマリグニン様
化合物が呼吸蛋白であり、従つてその系内に呼吸
機能を有する物質を含有するものであれば、その
癌細胞を死滅せしめ得ることは容易に理解し得る
ところである。 抗マリグニン類および他の類似のケモレシプロ
カル類の治療的効果に対する可能性はマリグニン
およびアストロシチンに関する構造的知見および
マリグニン量の悪性度との間に既に証明された関
係により著しく増大される。 実施例 5A 発酵の過程においてその容量および表面積を増
加せしめたことによる収量、悪性の度合および
マリグニンの割合の増大： 250mlフラスコの代わりに1000mlフラスコを用
い、試薬の量はすべて３倍量を増加し、実施例３
〜５と同様の操作を行つた。 悪性細胞の増殖のためのスペースを250mlから
1000mlに増加することにより、接種から７日間発
育させた後のマリグニン生成物の収量はほとんど
２倍に増加した。フラスコの大きさ別に、その総
蛋白収量（mg）および生成したマリグニンを連続
的世代の発酵物質の総蛋白量に対する％として表
わし、これを表に示す。250mlフラスコを用い
たとき、生成した総蛋白量の平均値は17.5mg、
1000mlフラスコを用いたとき、生成した総蛋白量
の平均値は40.4mgであつた。

【表】 驚くべきことに、細胞増殖のためのスペースと
表面積を増加せしめることにより、７日発育期間
当り、悪性細胞増殖量（悪性の度合）が増大する
に従つて総蛋白の％として示された生成マリグニ
ン量もまた有意に増大する。７日の発育期間中に
総蛋白量に対するマリグニンの百分率は250mlフ
ラスコ使用時における平均値10.7％から、1000ml
フラスコ使用時における平均値28.3％に増加し
た。 生成したマリグニンの割合と悪性の度合（すな
わち７日間試験管内における悪性細胞増殖量に対
する生成蛋白量の関数）との関係を第１図に示
す。 第１図はフラスコの大きさが増加したのでマリ
グニン生成物の比率は約３倍に増大することを示
している。また第１図はマリグニンと悪性の度合
との関係を示すものである。破線は理想的直線関
係を示す線である。この実証的関係はその細胞の
増殖が（病理学的に）より阻止し得ないものとな
るに従つてマリグニンの存在比率が増大するもの
であるから重要な関係である。通常のレコグニン
の機能それ自体は、前記のごとく細胞に接触して
その増殖を抑制することに関連性を有する。悪性
細胞の増殖がより病的であれば、接触による抑性
効果は減少し、マリグニンがより優先的な蛋白と
なつて増加する。 実施例5Aにおいては、大なる発育容器中で発
育させた人工的癌細胞培養物は予期に反して生成
マリグニンの割合、すなわち総蛋白量中のマリグ
ニンの百分率が増大することを例証するものであ
る。この発明において用いられたような大容量の
発育容器は容器容量の実施例３による細胞入培地
総容量に対する比が約８：１（たとえばその範囲
は７：１ないし10：１）より大なる容器であるこ
とを意味する。実施例5Aにおいてはその比は約
８：１であつた。 実施例 ６ レコグニン類からターゲツト試薬の製造：− 前記実施例２で製せられたアストロシチンまた
は実施例５で製せられたマリグニンを担体と混合
してターゲツト試薬を製する。 好ましい実施態様において、アストロシチンま
たはマリグニンを0.15Mリン酸二水素ナトリウム
−クエン酸緩衝液（PH4.0）に溶解する。ブロモ
アセチル樹脂、たとえばセルロース１ｇ当り臭素
1.0〜1.5ミリモルを有するブロモアセチルセルロ
ース（BAC）を0.15Mリン酸二水素ナトリウム
緩衝液（PH7.2）中で製し、冷所に貯える。PH7.2
の緩衝溶液を注ぎ、上記0.15Mリン酸二水素ナト
リウム−クエン酸緩衝液（PH4.0）を加えること
により、得られた緩衝液のPHを４に調節する。ア
ストロシチンまたはマリグニン溶液とBACの溶
液（BACのレコグニンに対する比10：１）を室
温で30時間撹拌した後、遠心分離する。 レコグニンに結合させるために用いるBAC上
のすべてのサイトは結合に関与していることが好
ましい。これは次のようにして達成される。直上
に記載した段階において得られた上澄液を凍結乾
燥し、BACに結合していないアストロシチンま
たはマリグニンの量を知るために蛋白含量を測定
する。複合BAC−アストロシチン（またはBAC
−マリグニン）を再度0.1M炭酸水素塩緩衝液
（PH8.9）に懸濁し、４℃で24時間撹拌してBAC
およびアストロシチンまたはマリグニンの間の化
学結合を形成させる。24時間後、この懸濁液を遠
心分離し、上澄液の蛋白を分析する。複合BAC
−アストロシチンまたはBAC−マリグニンを更
に0.05Mアミノエタノール−0.1M炭酸水素塩緩
衝液（PH8.9）中に再懸濁して未反応臭素を閉塞
する。この懸濁液を遠心分離し、アミノエタノー
ルが存在するからその上澄液はこれを分析に付す
ることなくそのまま保持する。これを遠心分離
し、スペクトロホトメータで266mμに吸収が観測
されなくなるまでこの再懸濁液を0.15M塩化ナト
リウムで３回洗浄する。このBAC−アストロシ
チンまたはBAC−マリグニン複合体を8M尿素
中、38℃で２時間撹拌し、遠心分離後、洗液中
に、266mμの吸収が現われなくなるまで（通常３
回）、8M尿素で洗浄する。この複合体を0.15M塩
化ナトリウムで２回洗浄して尿素を除去する。こ
の複合体を0.25M酢酸中、37℃で２時間撹拌し、
その安定性を証明する。遠心分離し、得られた上
澄液は必然的に266mμにおける吸収が存在しな
い。それ故、この化学的複合体：BAC−アスト
ロシチンまたはBAC−マリグニンは安定であつ
て下記のごとき方法における試薬として用いるこ
とができる。この安定な試薬型において、これを
合成法により得られた錯体と呼ぶことができ、そ
の物理的および化学的性質は潜在的反応状態にお
いて血清成分として理解される時、安定細胞−ア
ストロシチンまたはマリグニンの結合前駆体と見
倣すことができる。保存のためにはこのターゲツ
ト試薬を遠心分離し、0.15Mリン酸二水素ナトリ
ウム緩衝液（PH7.2）で中性になるまで洗う。 ターゲツト試薬はセルローズ以外の配位子を有
するブロモアセチル担体、たとえばブロモアセチ
ル化樹脂もしくは紙からでさえも使用すること
ができる。 実施例 ７ アストロシチン、マリグニンおよびターゲツト
に対する抗血清の製造：− アストロシチン、マリグニンまたはターゲツト
試薬に対する抗血清は哺乳動物におけるこれら試
薬に対する抗体反応を誘発することにより製せら
れる。この目的のために満足な方法を以下説明す
る。 レコグニン（アストロシチンおよびマリグニ
ン）１mgを標準フロインド佐薬と共に白色雄家兎
の足の肉趾に注射し、１週間後、更に10日後、要
すれば更に３週間後腹腔内に同様の注射を行う。
最初の注射から１週間ないし10日後、早やこれら
の家兎の血清中に特殊な抗体を検出することがで
きる。ターゲツト抗原を得るため、アストロシチ
ンまたはマリグニン１mg（フオリン−ロウリイ蛋
白検出法により測定）を含有するターゲツト量を
注射する操作を上記同様の方法により行う。アス
トロシチンに対する特殊抗体を抗アストロシチン
（Anti−Astrocytin）と呼ぶ。マリグニンに対す
る特殊抗体を抗マリグニン（Anti−Malignin）
と呼ぶ。同様にターゲツト試薬に対する特殊抗体
を抗ターゲツト（Anti−Target）と呼ぶ。 抗原−抗体反応のための標準的な寒天内抗原抗
体（Ouchterlony）ゲル拡散試験法により、その
特殊抗原により得られた特殊抗体はその抗原との
反応における単一鋭敏な直線関係を示すことが明
らかである。 血清中における特殊抗体の存在は抗原−抗体反
応のための沈降素標準定量試験法によつても試験
することができる。この試験により良好な沈降素
定量曲線を得ることができ、これから特殊抗体の
μg数を計算することができる。 更に血清中における特殊抗体の存在は特殊抗
体：抗アストロシチンを前記のごときブロモアセ
チル−セルロース−アストロシチン（BAC−ア
ストロシチン）上に吸収させることによりその証
明を得ることができる。すなわち、特殊抗アスト
ロシチンを含有する抗血清とBAC−アストロシ
チンを反応させることができる。血清をBAC−
アストロシチン上に通すとき、アストロシチンに
対する特殊抗体のみがその特殊抗原アストロシチ
ンに結合する。アストロシチンはブロモアセチル
−セルロースと共有結合により結合するので、特
殊抗体：抗アストロシチンはBAC−アストロシ
チンと結合してBAC−アストロシチン−抗アス
トロシチン（BACA−抗アストロシチン）を生
成する。これは洗浄によりBAC−アストロシチ
ンから分離された血清残留物を試験することによ
り証明される。標準的寒天内抗原抗体拡散試験法
により、血清中にアストロシチンと反応し得る抗
体は残留していないことが認められた。それ故、
血清中にあらかじめその存在が示された特殊抗体
（抗アストロシチン）はすべてBAC−アストロシ
チンに吸収されたことが明らかである。更に、抗
アストロシチンをBAC−アストロシチンとの結
合から開放するとき、これがすべての汚染抗体か
ら分離される。この抗アストロシチンの開放は上
記で示したBAC−アストロシチン結合を破壊し
ない0.25M酢酸でBACA−抗アストロシチンを洗
浄（４℃で２時間）することにより行うことがで
きる。 また、血清中における特殊抗体の存在は特殊抗
体：抗マリグニンを前記のごときブロモアセチル
−セルロース−マリグニン（BAC−マリグニン）
上に吸収させることによりその証明を得ることが
できる。すなわち、特殊抗マリグニンを含む抗血
清とBAC−マリグニンを反応させることができ
る。血清をBAC−マリグニン上に通すとき、マ
リグニンに対する特殊抗体のみが特殊抗原マリグ
ニンに結合する。マリグニンはブロモアセチル−
セルロースと共有結合により結合するので、特殊
抗体：抗マリグニンはBAC−マリグニンと結合
してBAC−マリグニン−抗マリグニン（BACM
−抗マリグニン）を生成する。これは洗浄により
BAC−マリグニンから分離された血清残留物を
試験することにより証明される。標準的寒天内抗
原抗体拡散試験法により、血清中にマリグニンと
反応し得る抗体は残留していないことが認められ
た。それ故、血清中にあらかじめその存在が示さ
れた特殊抗体（抗マリグニン）はすべてBAC−
マリグニンに吸収されたことが明らかである。更
に抗マリグニンをBAC−マリグニンとの結合か
ら開放するとき、これがすべての汚染抗体から分
離される。この抗マリグニンの開放は上記で示し
たBAC−マリグニン結合を破壊しない0.25M酢
酸でBACA−抗マリグニン複合体を洗浄（４℃
で２時間）することにより行うことができる。 抗原−抗体反応のための標準的な寒天内抗原抗
体・ゲル拡散試験法により、ターゲツト抗原によ
り得られたそのターゲツトに対する特殊抗体は前
記の抗アストロシチンまたは抗マリグニンのごと
き抗血清（すなわちアストロシチンまたはマリグ
ニン自体を注射して得られる抗血清）と同様、そ
の抗原との間の反応における単一直線関係を示す
ことが明らかである。注意すべきことは、家兎の
内のあるものはターゲツトを注射する前にある量
の抗ターゲツトを保持している。これらの抗ター
ゲツト物質は人血清のテストにおいて記載された
ように特にターゲツト試薬と反応させるとき、
TAG、Ｓ−TAGおよびＦ−TAGの約当モル量
（２タイプ）を生成する（後記実施例参照）。 実施例 ８ 生物学的液体からターゲツト−アタツチング−
グロブリン（TAG）を試験管内で定量的に生
成させることによる悪性腫瘍の検出：− 実施例６により製せられたターゲツト試薬の劣
化により存在することもある未結合レコグニンを
除去するため、これを洗浄する。その満足すべき
方法は次のとおりである。ターゲツト試薬を酢酸
と共に37℃で２時間撹拌し、遠沈し、上澄液を傾
瀉分離し、この上澄液の266mμにおける光学密度
を測定する。もしその波長における吸収が存在す
るならば、物質が溶解しなくなるまで上記のごと
き洗浄を反復実施する。次いでこのターゲツトを
リン酸緩衝食塩溶液（PH7.2）に再懸濁する（タ
ーゲツト試薬を試験するための標準法を参照し、
もし他のターゲツト製剤によりＳ−TAGおよび
Ｆ−TAGを含むことが試験により明らかとなつ
た家兎全血清を得ることができるならば、後記方
法により人血清の反応から精製した標準的Ｓ−
TAGおよびＦ−TAGを使用することができる）。 次の方法によりスロー−バインデング（Ｓ−
TAG）を決定する：数日間保存した凍結血清は
これを使用すべきでない。常套の方法により、新
しく得られた全血液もしくは他の体液から注意し
ながら血清をつくる。満足すべき方法を述べれば
次のとおりである。採取した血液をガラス製試験
管中、室温で２時間放置し、凝血させる。ガラス
製撹拌棒を用い、凝血を試験管壁から分離し、こ
の血液を４℃で最低２時間（もしくは一夜）放置
する。４℃で45分間遠心分離（20000rpm）する
ことにより凝血を血清から分離し、血清を遠心分
離管中に傾瀉分離し、更に４℃で45分間遠心分離
（2000rpm）する。この血清を傾瀉し、メチオレ
ート１％溶液（水95mlおよび0.2M炭酸水素塩緩
衝液（PH10）５ml中、１ｇ）を血清に対して１％
（容量）の限度で加える。 上記方法または他の方法で得られた血清それぞ
れ0.2mlを、ターゲツト試薬0.25ml当りレコグニ
ン100〜200mg含有のターゲツト懸濁液試薬それぞ
れ0.25mlに加え、２個の検査試料とする。ペレツ
ト生成が避けられるような方法により、上記懸濁
液を４℃で混合する。たとえば小さいゴム製キヤ
ツプを用いて１〜２秒間強く振りまぜた後、管を
ゆるやかに傾瀉させてこれをトーマスシエーカ
中、約２時間またはそれ以上振盪させる。ターゲ
ツト試薬とそれに結合した蛋白を血清から分離す
る。この発明で見出された満足すべき方法によ
り、上記管を４℃で20分間遠沈（2000rpm）、上
澄を傾瀉した後、これを0.15M食塩水0.2〜0.3ml
と再混合し、室温で振盪し、遠沈して上澄液を分
離する操作を３回行うことにより生成したペレツ
トを洗浄する。 ターゲツトに付着して残留する蛋白をそれから
分離し、この蛋白を定量する。たとえば0.25M酢
酸0.2mlを加え、この懸濁液を37℃のふ卵器中で
１〜２時間振りまぜる。管を４℃で30分間遠沈
（2000rpm）する。粒状物が移行するのを避ける
ように注意しながら上澄液を傾瀉し、280mμにお
ける上澄液の光学密度を測定する。血清蛋白（Ｓ
−TAG）ml当りμgの結果を得るため、上記光学
密度の測定値を1.46の因子で割る。検査資料２個
の間に５％以上の差があつてはならない。蛋白含
量を検査するため、他の方法たとえばフオリン−
ロウリイ検査法を用いることができるが、対照試
料の濃度と（Ｓ−TAG）−（Ｆ−TAG）濃度の値
の範囲を標準法において特定しておかねばならな
い。 フアスト−バインデイング（Ｆ−TAG）値は
次のように検査する：数日以上凍結して保存され
た血清は使用すべきではない。常套の方法によ
り、新しく得られた全血液もしくはその他の体液
から注意して血清を作成する。血清をつくる方法
はこの実施例の前部に記載した方法で充分であ
る。 上記の又は他の手法で作成された血清見本は、
Ｓ−TAG血清測定剤が上記のターゲツト試剤と
接触させられる全時間よりも10分間少ない時間の
間、４℃で放置する（例えば「２時間」のＳ−
TAG測定をしたならば１時間50分）。この方法で
はＳ−TAGとＦ−TAGの測定剤の温度履歴が平
衡される。 温度平衡した血清の見本0.2mlを、二重測定に
おいて、ターゲツト試剤0.25mlについてレコグニ
ン100乃至200マイクログラム含有するターゲツト
けん濁試剤の0.25ml整除数のそれぞれに加える。
けん濁物は、顆粒形成を避けるようにして約10分
間４℃で混合する。例えば、急速に振り動かした
小ゴムキヤツプを１〜２秒間用いて、それから管
を僅かに傾けてこれらをトーマス振とう器で約10
分間振とうすればよい。それについているターゲ
ツト試剤及び蛋白質は血清から分離される。満足
であると認められた手法の一つは下記のものであ
る。次に管を2000rpmで20分間４℃で遠心分離
し、上澄液を傾瀉し、遠心分離で形成した顆粒を
0.15M塩水0.2〜0.3mlと再混合し室温で振とうす
ることによつて３回洗浄し、遠心分離して、上澄
液を廃棄する。 ターゲツトに付着したまゝになつている蛋白質
をそこから開裂し、定量的に測定する。Ｓ−
TAG濃度を測定するための本実施例における上
記の手法は満足なものである。フオリン・ロウリ
ー測定法のような、蛋白質含有量を測定するのに
効果のある他の手法を用いてもよい、しかし制御
の範囲及びＳ−TAGマイナスＦ−TAG濃度の腫
瘍値を決定するため基準を定めなければならな
い。 最終結果は血清１mlにつきTAGマイクログラ
ムとして表わされ、これはＳ−TAGマイナスＦ
−TAGに等しい。非脳腫瘍患者及び他の制御に
おけるTAG値は現在のところ血清１mlにつきゼ
ロ（又は負数）から135マイクログラムまでの範
囲に亘る。１mlにつき100mμを越える結果につい
ては、反復測定を表示する。他の腫瘍のあるもの
は高いTAG値を表わすことがある、特に脳内に
二次的（転移した）腫瘍がある場合にそうであ
る。脳腫瘍患者のTAG値は現在では血清１mlに
つき136乃至500以上マイクログラムに及ぶ。アス
トロシチン及びブロモアセチルセルローズから調
製したターゲツト試剤を利用する本実施例の手法
に従つて行なつた50の血液見本についての最初の
「盲検」においては、11の脳腫瘍のうち11、及び
32の正常のものゝうち28が正確に判別された。４
件の正常と思われていたもの（即ち、非脳腫瘍対
照）のうち１件は、明らかに何年か前に良く手当
した甲状腺癌のあることが判明した。残りの３件
の正常者は健康のすぐれない、多分診断のついて
いない癌を持つた、年令60〜70の個人であつた。
残りの７例のうち、ホジキンス病の３件中の３件
は正確に判別された。腫瘍の範囲に入る１例
（136〜500μgTAG／ml）はひどい神経膠症を持
つ患者に該当し、非腫瘍の範囲（０〜
135μgTAG／ml）に入る３例は、それぞれ不明
確ではあるが腫瘍ではない頭蓋内塊の診断、及び
骨肉腫（非脳腫瘍）及び黒皮肉腫（非脳腫瘍）を
持つた患者に相当した。 マリグニンおよび悪性脳腫瘍及び全正常者から
調製したターゲツト試剤を利用して本実施例の手
法に従つてその後の検討を行なつた。 本実施例の手法に従つて行なつた更にそれ以上
の検討では試験した人間の腫瘍の見本の総数が50
から114に及んだ。これらの製品及び手法の有用
性を第５表に示すが、これはこれらの試験の結果
を記録するものである。 実施例 ９ 免疫蛍光法による腫瘍細胞の診断化合物抗−ア
ストロシチン、抗−マリグニンおよびＳ−TAG
は腫瘍細胞に優先的に付着することを示す。この
特異性は組織学の部門において染料または放射性
物質を抗−アストロシチン、抗−マリグニンまた
はＳ−TAGに結合させてこれらの化合物を腫瘍
細胞の診断に用い得る。標準の標識技術がそれゆ
え用いられる。Ｓ−TAGの使用法は次のとおり
である。 満足であると認められた一つの方法はセント・
マリー（St・Marie）法の変形である。人間の脳
腫瘍検体を凍結し５ミクロンの厚さに切る。これ
らを湿容器中に染色前に−70℃に４〜８週間貯え
る。結合体は山羊の抗−ウサギ結合体のような標
準の抗血清である。結合体はフルオレツセントま
たは他の標準物質でこの技術分野で既知の技法に
よつて標識される。市販のフルロエツセイン標識
山羊抗−ウサギ結合体を用い得る。用いるフルオ
レツセント技法は標準のものであつて、TAGの
１：200〜１：400溶液を腫瘍切片上に30分間また
はそれ以上保温し、次に洗浄して付着しない
TAGを除く。燐酸緩衝食塩水で３回洗浄するの
がよい。フルオレツセイン−標識結合体で結合保
温し、洗浄したら顕微鏡検査をする。正規の細胞
およびその突起は腫瘍切片および正規の非腫瘍脳
の対照切片共に染色されない。フルオレツセンス
は腫瘍神経膠およびその突起に明るく存在する。 実施例 10 組織培養で増殖する腫瘍細胞に対して抗−アス
トロシチン、抗−マリグニンおよびＳ−TAG
が細胞毒性を有することの実験 細胞毒性を測定する標準試験を用いる。一般
に、固定した計算箱中の細胞の数、普通約100の
生きた細胞を含有するように準備されるが、これ
を計算する。次にこれらの細胞を試験する試剤で
処理し、なお生きている細胞の数を計算する。 実施例８の方法で得られたＳ−TAG溶液の、
神経膠発生が十分に特徴づけられる、神経膠芽細
胞〜級の患者からの組織培養中の細胞に対す
る細胞毒性の標準試験において、Ｓ−TAGは溶
液ml当りＳ−TAG0.2および0.02μgのような少量
に相当する１：100および１：1000の高希釈度の
場合でも計算箱中のすべての細胞を死滅させる。
同様な結果が抗−アストロシチンおよび抗−マリ
グニンの高希釈液で得られる。 実施例９で示す特異性および実施例10で示す細
胞毒性は共に人間の脳腫瘍に対する抗−アストロ
シチン、抗−マリグニンおよびＳ−TAGの治療
可能性に非常に関係がある。これらの治療的使用
は手術で除去された腫瘍組織に対するこれらの両
方の現象の実際の診断可能性に加えて既に証明し
た組織学による診断を必要とする。

【表】

【表】 実施例 11 レコグニンの加水開裂 レコグニンの溶液、この場合はアストロシチン
がマリグニンをPH１〜２で冷置する。７〜14日後
に薄層クロマトグラフイーでこの生成物は分子量
が約200減少することを示す。この溶液を更に長
く放置すると約200分子量の単位が７〜10日に開
裂する。すなわちアストロシチンでは8000から分
子量が減少し、マリグニンでは10000から分子量
が減少し、各場合引続いて約200の単位減少する。 アストロシチンの生理化学的特異性は各生成物
で4000分子量まで維持される。マリグニンの生理
化学的特異性は各生成物で5000分子量まで維持さ
れる。これは抗−アストロシチンおよび抗−マリ
グニンのそれぞれに対する寒天内抗原抗体ゲル拡
散試験で示される。 この開裂はまたトリプシンおよびその他のプロ
テアーゼと共のように酵素的にも同じ結果で達成
することができる。 レコグニンの加水開裂によつて調製されたこれ
らの化合物の分子量は次式によつてほぼ定義され
る。 アストロシチンの生理化学的特異性を有する生
成物に対しては：4000＋200X＝Ｙ マリグニンの生理化学的特異性を有する生成物
に対しては：5000＋200X′＝Ｙ ここにＹは生成物の分子量でＸおよびX′は０
〜19の整数である。 実施例 12 レコグニンとの人工組織または器官の製造 プラスチツク、金属またはその他の適当なかた
い材料のかたい壁の管をレコグニン（この場合ア
ストロシチンまたはマリグニン）の高濃度（即ち
10mg／ml）のヴイスコース溶液を、すべての表面
が被覆されるまで浸すか含ませる。あるいはまた
レコグニン溶液をすべての表面が十分に被覆され
るまで加圧下に管の中および周を通す。次に管を
風乾または減圧下に乾燥するか凍結乾燥する。被
覆操作をレコグニンの多くの分子層の被覆ができ
るように数回繰返えす。 この管は生きている哺乳動物の隣接する組織ま
たは体液中にアストロシチンまたはマリグニンの
ような前駆物質を含有する空洞または組織中に置
く準備がかくしてできる。この人工組織または器
官はレコグニン被覆のない異種物質が刺激をする
反応を最少にするか除くために用いられる。 その他の形状の人工組織または器管が同様にし
製することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明におけるマリグニン生成量（生
成全蛋白量（mg）として）を悪性度合の（全蛋白
量の％として）の関数として示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 確立されたまたは分離された正常または疾患
   細胞または組織を中性緩衝液で抽出し、得られた
   可溶化蛋白抽出物からpK値１〜４のフラクシヨ
   ンを分離し、このフラクシヨンから採取される、
   以下の特性を持つた酸性ペプチド「レコグニン
   類」： (a) 定量沈降試験およびウフタロニー寒天内抗原
   抗体ゲル拡散試験において、特異的抗体により
   単一線状沈澱を形成することが出来る； (b) 酸性または中性PHで水および水性溶液に可溶
   である； (c) アルカリ性PHで水および水性溶液に難溶であ
   る； (d) 分光吸収ピーク波長280mμを有する； (e) 分子量4000〜10000を有する； (f) グルタミン酸とアスパラギン酸の含量が高
   く、ヒスチジンに対するグルタミン酸とアスパ
   ラギン酸の比率が高い； (g) 動物に注入したとき抗レコグニン抗体を産生
   し、その抗体はレコグニン類に属する他の酸性
   ペプチドと特異反応する； (h) 不活性担体と結合したとき特異的免疫吸着に
   より抗レコグニン抗体と結合し、これにより該
   抗体の定量と精製を可能とし、かつイン・ビト
   ロとイン・ビボのいずれにおいても該抗体がレ
   コグニン類に属する酸性ペプチドまたはこれを
   含む細胞と特異的に結合することを可能にす
   る。 ２ 確立されたまたは分離された正常または疾患
   細胞または組織が脳膠腫瘍組織の反復破壊組織で
   あり、分子量約8000を有し、アミノ酸組成として
   アスパラギン酸９、スレオニン５、セリン６、グ
   ルタミン酸13、プロリン４、グリシン６、アラニ
   ン９、バリン４、1/2システイン２、メチオニン
   １、イソロイシン２、ロイシン８、チロシン２、
   フエニルアラニン３、リジン８、ヒスチジン２、
   アルギニン４、合計88（検出し得る量のシステイ
   ン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、アン
   モニア、イソデスモシン、デスモシン、ヒドロキ
   シリジン、リジノノルロイシン、γ―アミノ酪酸
   は存在しない。）の残基概略数を有する、アスト
   ロシンと称される物質である、特許請求の範囲第
   １項記載のレコグニン。 ３ 確立されたまたは分離された正常または疾患
   細胞または組織が培地内で生育した人工癌細胞で
   あり、分子量約10000を有し、アミノ酸組成とし
   てアスパラギン酸９、スレオニン５、セリン５、
   グルタミン酸13、プロリン４、グリシン６、アラ
   ニン７、バリン６、1/2システイン１、メチオニ
   ン２、イソロイシン４、ロイシン８、チロシン
   ３、フエニルアラニン３、リジン６、ヒスチジン
   ２、アルギニン５、合計89（検出し得る量のシス
   テイン酸、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、
   アンモニア、イソデスモシン、デスモシン、ヒド
   ロキシリジン、リジノノルロイシン、γ―アミノ
   酪酸は存在しない。）の残基概略数を有する、マ
   リグニンと称される物質である、特許請求の範囲
   第１項記載のレコグニン。 ４ 式： 4000＋200X＝Ｙ ［式中、Ｙは生成物の分子量、Ｘは０または１
   〜19の整数を表す。］で示される分子量を有する
   ことを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載の
   レコグニン。 ５ 式： 5000＋200X＝Y′ ［式中、Y′は生成物の分子量、Ｘは０または
   １〜19の整数を表す。］で示される分子量を有す
   ることを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載
   のレコグニン。