JPH01500193A - 抗レトロウイルスおよびｂ型肝炎剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規な医薬的用途 発明の分野 本発明は、後天性免疫不全症候群（エイズ）、ヒト免疫不全ウィルス感染症、Ｂ 型肝炎ウィルス感染症およびレトロウィルス感染症を治療的および予防的に抑制 （コントロール）しそして処置するための既知化合物および生理学的に許容し得 る塩を動物および人間に対するかかる抑制および処置に用いることに関する。

発明の背景 １９７０年代の後半に新しい病気が報告され、そしてそれは後に後天性免疫不全 症候群（エイズ）と称されるようになった。今では、以前にヒトＴ型細胞リンパ 球好性ウィルス（ＨＴＬＶ　−ｍ　）またはリンパ腺症関連ウィルス（ＬＡＶ） として知られていた旧Ｖ（ヒト免疫不全ウィルス）と称されるレトロウィルスが エイズの病因において本質的な役割を演じているものと一般的に考えられている 。

エイズは旧Ｖ　（ＨＴＬＶ−／Ｉ［ＩＬＡＶとも称されている）感染の標的であ るリンパ球−Ｔ−ヘルパー細胞数の低下による重い免疫不全により特徴付けられ る。エイズ患者におけるこの重い免疫不全のため、これらの患者は、細菌、真菌 、原虫またはウィルス性の病因の様々な日和見感染に対する感受性が高くなる。

ウィルス日和見感染症の中での病固体はしばしばヘルペスウィルス群、すなわち 単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）　、水痘・帯状庖疹ウィルス（ＶＺＶ）　、エ プスタインバーウィルス（ＥＢＶ）そして特にサイトメガロウィルス（ＣＭＶ） の中に見出される。人間に作用するその他のレトロウィルスは、ＨＴＬＶ−Ｉお よび■であり、そして動物に作用するレトロウィルスの例は猫白血病ウィルスお よび馬感染性貧血である。

Ｂ型肝炎ウィルス感染症は相当数の人に急性肝炎、慢性肝炎、劇症肝炎のような 重い疾病を引起こす。世界には慢性Ｂ型肝炎感染症患者が２億人いると推定され る。

相当数の慢性症例は肝硬変および肝腫瘍に進行する。場合によっては、約９０％ 死亡率の劇症Ｂ型肝炎と同様の急激かつ重篤な経過をもたどる。現在のところ、 Ｂ型肝炎感染症に対する有効な治療は知られていない。

従来技術 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｆ、ｐｒａｋｔ、　Ｃｈｅｍｉｅ、　Ｖｏｌ、３１５．８９５ 〜９００（１９７３）には、３′−デオキシ−３′−フルオロ−チミジンおよび ２　’、３　’−ジデオキシー３′−フルオローシチジンという化合物がＤＮＡ 合成の選択的抑制剤としての細胞静止およびウィルス静止活性を有する剤として 記載されている。

東独特許第Ｄ　Ｄ　１５８９０３号および同Ｄ　Ｄ　２０９１９７号にはそれぞ れ２’、３’−ジデオキシ−３′−フルオロアデノシンおよび２′、３′−ジデ オキシ−３′−フルオログアノシンがウィルス静止剤として記載されている。

発明の開示 本発明により、式 （式中塩基はチミン、シトシン、アデニンまたはグアニンである）で示される化 合物またはその生理学的に許容し得る塩が、該式のヌクレオシドアナログの使用 により、ＨＴＶを含むレトロウィルスおよびＢ型肝炎ウィルスの増殖をそれぞれ ブロックする新しい可能性を提供することが見出された。すなわち前記式のヌク レオシドアナログおよびそれらの生理学的に許容し得る塩は、それぞれレトロウ ィルスおよびＢ型肝炎ウィルス感染症の抑制または処置における予防および／ま たは治療剤としての自明でない有益な性質を有している。前記ヌクレオシドは動 物および人間におけるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ　；　ＨＴＬＶ−Ｉ［Ｉ／ ＬＡＶウィルス）の活性を抑制できる剤として特に興味深い。

（ＨＩＶｌＨＴＬＶ−ＩＩＩ　／ＬＡＶ）を含むすべてのレトロウィルスはその 自然の複製周期において逆転写酵素と呼ばれる酵素を必要とする。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）は一部一零値化している独特の環状二本鎖ＤＮＡゲ ノムをもったＤＮＡウィルスである。それはウィルス複製に必要な特異的ＤＮＡ ポリメラーゼを含有している。このＤＮＡポリメラーゼはまた、ＲＮＡ中間体を 介するＨＢＶ　ＤＮＡ複製の際に逆転写酵素としても働く。

本発明の化合物は、細胞または酵素によって、ＨＩＶを含むレトロウィルスの逆 転写酵素およびＢ型肝炎ウィルスのＤＮＡポリメラーゼの活性を阻害するトリホ スフェートに変換される。

以下の既知化合物は、レトロウィルスまたはＢ型肝炎ウィルス感染症の抑制また は処置における予防および治療剤として本発明の一部を構成する。

３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンは、動物および人間において旧Ｖ　（ ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　／ＬＡＶ）を含むレトロウィルスおよびＢ型肝炎ウィルス感 染症の抑制または処置に用いる剤として特に好ましい。

臨床に実際に用いる場合には、本発明のヌクレオシドは通常、活性成分を本来の 化合物の形、または場合によっては、その薬学的に許容し得る塩の形で、固体、 半固体または液体の希釈剤または摂取可能なカプセルであってよい薬学的に許容 し得る担体と共に含有する薬学的製剤の形で、経口的に、注射または注入により 投与されることになろう。化合物を担体材料なしに用いることもできる。薬学的 製剤の例としては、錠剤、ドラジエ、カプセル、顆粒、懸濁液、エリキシル、シ ロップ、溶液などが挙げられる。通常、活性物質は、注射用製剤については０． ０５〜２０％を、また経口投与用製剤については１０〜９０％を構成する。

レトロウィルス特にＨＩＶまたはＢ型肝炎感染症に罹患した患者の処置には、経 口、非経口、直腸、鼻、局所おょび膣路を含む任意の適当な経路で化合物を投与 するのが好ましいであろう。非経口路には１、皮下、筋肉内、静脈内および舌下 投与が含まれる。局所経路には頬および舌下投与が含まれる。活性成分の投与用 量は、広い範囲にわたって変えてもよく、また感染の軽重、患者の年令等様々な 要因に左右されることになり、そして個別に調節する必要があろう。本発明の化 合物またはその生理学的に許容し得る塩の日用量の許容範囲としては約１０ｍｇ 〜１０　、０００＋＋＋ｇ、静脈内投与については好ましくは１００−５００１ １９、また経口投与については好ましくは１００〜１０００１１９が挙げ本発明 のヌクレオシドの生理学的に許容し得る塩は、無宿性の酸から導かれる適当な酸 付加塩である。かかる酸付加塩には、例えば塩酸、沃化水素酸、硫酸、燐酸およ びスルファミン酸のような無機酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸 、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、エタンスルホン酸、およびベンゼンスルホン 酸のような有機スルホン酸およびマレイン酸、リンゴ酸、乳酸、クエン酸、酒石 酸、クエン酸、シュウ酸、酢酸、イセチオン酸、グルコン酸、パントテン酸およ びラクトビオン酸のような有機カルボン酸などから導かれる酸付加塩が含まれる 。

ての３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンのＢ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）の ＤＮＡポリメラーゼに対する作用Ｂ型肝炎ウィルスは細胞培養中では増殖し得な いことから、Ｂ型肝炎ウィルスＤＮＡポリメラーゼの細胞不合検定系を用いて３ ′−デオキシ−３′−フルオロチミジンの作用を検討した。細胞中の３′−デオ キシ−３′−フルオロチミジンは３′−デオキシ−３′−フルオロチミジン−５ ′−トリホスフェートに変えられる。

ＨＢＶ関連ＤＮＡポリメラーゼ活性は試験管内で測定できる（４ａｐｌａｎ　ｅ ｔ　ａｌ、、Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、、　１２．９９５−１００５゜１９７３）。こ の方法をわずかに改良して、物質によるこのＤＮＡポリメラーゼ活性の阻害の試 験に用いた。（ＮｏｒｄｅｎｆｅＩｔ　Ｅ、、　Ｏｂｅｒｇ、　Ｂ、、　Ｈｅ１ ｇ５ｔｒａｎｄ　Ｅ、およびＭｉｌｌｅｒ　Ｅ、　Ａｃｔａ　ｐａｔｈ、、　Ｍ ｉｃｒｏｂｉｏｌ、　５ｃａｎｄ、　５ｅｃｔ　Ｂ、　８８：１６９−１７５ｅ １９８０）。この検定法を用いて、プロドラッグである３′−デオキシ−３′− フルオロチミジンの代わりに３′−デオキシ−３′−フルオロチミジン−５′− トリホスフェートを試験し、Ｂ型肝炎ウィルスＤＮＡポリメラーゼに対するその 潜在能力を評価した。

３′−デオキシ−３′−フルオロチミジン−５′−トリホスフェートを反応混合 物中の最終濃度が０．Ｏ１μＭ、　０．０５ｇＭ。

０．１μ反、０．５μＭおよび１．０μＭとなるように添加した。阻害率は、３ ７℃で３時間インキュベート後に、水を添加した対照と対比されたｃｐｍに基づ いて計算される。試験結果を第１表に示す。

第１表 ３′−デオキシ−３′−フルオワチミジン−５′−トリホスフエートによるＢＷ 肝炎ウィルス（ＨＢＶ）ＤＮＡポリメラーゼ活性の阻害 ３′−デオキシ−３′−フルオロチミジ第１表に示された結果から、３′−デオ キシ−３′−フルオロチミジンの見かけＩＤ、。−値は０．１６μＭであること がわ細胞不合検定系を用いて旧Ｖ　（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　／ＬＡＶ）の逆転写酵 素に対する３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンの阻害を検討した。この検 定法は、Ｖｒａｎｇ　ｅｔ　Ｏｂｅｒｇ；Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔ ｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈａｒ、　２９．８６７−８７２（１９８６）の記載どおりに 行った。この検定法を用いてプロドラッグである３゛−デオキシ−３′−フルオ ロ−チミジンの代わりに３′−デオキシ−３′−フルオロチミジン−５′−トリ ホス７エートの旧Ｖ　（ＨＴＬＶ−ｍ　／ＬＡＶ）からの逆転写酵素に対する潜 在能力を評価した。試験結果を第■表に示す。

第■表 ３′−デオキシ−３′−フルオロチミジン−５′−トリホスフェートによるＨＩ Ｖ　（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ）逆転写酵素の阻害 ５′−トリホスフェート３′−デオキシ０．０５　２７ ０．１　３８ 第■表の結果から、ＨＩＶ逆転写酵素活性に関する３′−デオキシ−３′−フル オロチミジンのＩＤ、。は外挿により０．２μＭであることがわかった。

Ｈ９細胞（２Ｘ　１０’）を各種濃度の３′−デオキシ−３′−フルオロチミジ ンと共に一夜予めインキュベートした。次にそれらの細胞をペレット化し、そし て２μｇ／ｍＱのＰｏｌ’−ｙｂｒｅｎｅを含む２．５ｍ（２のホスフェート緩 衝食塩水（ＰＢＳ）に分散させた。３０分間インキュベートした後、細胞をペレ ット化し、そしてＨＩＶで感染させた。１時間の吸着時間後、細胞をペレット化 しそして２　、５ｍＱのＰＢＳで１回洗浄した。各培養物に供試濃度の３′−デ オキシ−３′−フルオロチミジンを含む７ｗ＋Ｑの媒質を添加した。逆転写酵素 活性試験の検体を記載の如く採取した。

検定法 各培養物の上清からの１．３＋＋１２検体を５５〜３４０−ター内で１．５時間 １８０００　ｒｐｍで遠心分離し、そしてそのウィルスペレットを５ＱｍＭ　Ｔ ｒｉｓ−ＨＣｆｆ、　ｐＨ７，５；　３５　ｍＭ　ＫＣＱ　；　４ｍＭＤＴＴ　 ；　１　ｍＭ　ＥＤＴＡ　；　１．３％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００を含有する １００μｆｆの緩衝液に再懸濁した。５０μａ検体を逆転写酵素試験にかけ、７ ５ｍＭ　Ｔｒｉｓ　−ＨＣＱＳｐＨ８，ｏ　；　６０ｍＭ　ＫＣｌ　；　６．２ ｍＭ　ＭｇＣＱｚ　；６ｍＭ　ＤＴＴ　；　０．５ｍＭ　ＥＤＴＡ　；　ＯＪ５ ％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００：　ｌｏＯμ９／　ｒｎＱ　ＢＳＡ　；　２５μＣ ｉ／ｒｎＱ　３Ｈ−ｄＴＴＰ　（比活性８０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）　；２．５μ９／ 　１ｌｌｆｆ（ｄＴ）　１２−　ｌａ　；および２．０μｇ／１ｌＩＱ（ｒＡ） 、を含有する１００μＱの反応混合物中で分析した。インキュベーションを３７ ℃で１時間行いそしてＴＣＡ不溶生成物をＷｈａｔｍａｎＧＦ／　Ａ　ｆ紙上に 沈澱させ、洗浄し、乾燥させ、そして液体シンチレーション・カウンター中で計 数した。試験結果を第■表に示す。

逆転写酵素分子の量およびＨＩＶ感染細胞培養で発現したそれらの全活性をＨＩ Ｖ分子の存在量に補正した。

新ＨＩＶ粒子の産生を阻害する有効な抗ウィルス剤の添加も逆転写酵素分子の量 を減少させそして全活性の減少として現れる。

第■表 ＨＩＶ　（ＨＴＬＶ−Ｉ［／ＬＡＶ）−感染Ｈ９細胞ニオける発現逆転写酵素活 性に対する３′−デオキシ−３−フルオロチミジンの作用感染後　表示量（μＭ ）の３′−デオキシ−３′−フルオロチミ日　数　ジンの存在下での逆転写酵素 活性（ｃｐｍＸＩＱ−り０　０．０１　０．０５　０．１　０．５　１．０４　 ０．９　０．５　０．３　０．２　０．３　０．３８　１９　１．３　０．３　 ０．２　０．３　０．２１１　１７　１．９　０．４　０．５　０．５　０．５ １５　１１　２．７　０．６　０．４　０．３　０．４１８　２７　２８　０． ５　０．４　０．６　０．５２２　４６　５２　１．６　０．２　０．１　０． １２９　１６　２１　３．１　０．２　０．２　０．２第■表には、数週間のイ ンキュベーション期間にオケる旧Ｖ　（ＨＴＬＶ−Ｉ［［／ＬＡＶ）の逆転写酵 素活性に対する異なる濃度の３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンの作用を 示す。０．１μＭ以上の濃度の３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンの存在 は酵素活性を少なくとも２９日間完全に抑える。０．０５μＭの３′−デオキシ −３′−フルオロチミジンでは２２日目まで有意の酵素活性は検出されず、また ０゜Ｏ１μＭ１μでは酵素活性は１１日目まで検出されなかった。

ＰＣＴ／ＳＥＢ７１００５１６

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．動物および人間における、ＨＴＶを含むレトロウィルスまたはＢ型肝炎ウィ ルス感染症を治療的にまたは予防的に抑制および処置する方法であって、かかる 処理を必要とする宿主に対して式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中塩基はチミン、シトシン、アデニンまたはグアニンである） で示される化合物またはその生理学的に許容し得る塩を有効量投与することより 成る前記方法。
2. ２．動物および人間における後天性免疫不全症候群（エイズ）を治療的にまたは 予防的に抑制するための請求項１記載の方法。
3. ３．３′−デオキシ−３′−フルオロチミジンまたはその生理学的に許容し得る 塩を投与することより成る請求項１または２記載の方法。
4. ４．経口投与より成る請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
5. ５．静脈内投与より成る請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
6. ６．非経口投与より成る請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
7. ７．動物および人間におけるＨＴＶまたはＢ型肝炎ウィルス感染症を含んだレト ロウィルスを治療的にまたは予防的に抑制または処置するための医薬を製造する ための式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中塩基はチミン、シトシン、アデニンまたはグアニンである） である示される化合物またはその生理学的に許容し得る塩の用途。
8. ８．動物および人間におけるレトロウィルスを治療的にまたは予防的に抑制また は処置するための医薬を製造するための３′−デオキシ−３′−フルオロチミジ ンまたはその生理学的に許容し得る塩の用途。
9. ９．動物および人間における後天性免疫不全症候群（エイズ）を治療的にまたは 予防的に抑制または処置するための医薬を製造するための３′−デオキシ−３′ −フルオロチミジンまたはその生理学的に許容し得る塩の用途。
10. １０．動物および人間におけるＢ型肝炎ウィルス感染症を治療的にまたは予防的 に抑制または処置するための医薬を製造するための３′−デオキシ−３′−フル オロチミジンまたはその生理学的に許容し得る塩の用途。