JPH0159876B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0159876B2 JPH0159876B2 JP15982981A JP15982981A JPH0159876B2 JP H0159876 B2 JPH0159876 B2 JP H0159876B2 JP 15982981 A JP15982981 A JP 15982981A JP 15982981 A JP15982981 A JP 15982981A JP H0159876 B2 JPH0159876 B2 JP H0159876B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- proline
- serratia
- marsetuscens
- deficient
- resistant
- Prior art date
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- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−プロリンの製法に関
する。
する。
Ｌ−プロリンは医薬、飼料添加物薬として有用
なアミノ酸である。従来、発酵法によるＬ−プロ
リンの製法としては、プレビバクテリウム属、ミ
クロコツカス属、クルチア属、サツカロミセス
属、バチルス属、エシエリア属、ミクロ バクテ
リウム属、コリネバクテリウム属、アースロバク
ター属に属するＬ−プロリン生産菌を培養して培
地中にＬ−プロリンを生産せしめる方法が知られ
ている（特公昭43−11751、同44−1198、同44−
6631、同44−26911、同46−38557、同48−38876、
同51−33190、特開昭55−148096等）。しかしなが
ら、セラチア属に属する微生物を用いてＬ−プロ
リンを生成蓄積せしめた報告はない。
なアミノ酸である。従来、発酵法によるＬ−プロ
リンの製法としては、プレビバクテリウム属、ミ
クロコツカス属、クルチア属、サツカロミセス
属、バチルス属、エシエリア属、ミクロ バクテ
リウム属、コリネバクテリウム属、アースロバク
ター属に属するＬ−プロリン生産菌を培養して培
地中にＬ−プロリンを生産せしめる方法が知られ
ている（特公昭43−11751、同44−1198、同44−
6631、同44−26911、同46−38557、同48−38876、
同51−33190、特開昭55−148096等）。しかしなが
ら、セラチア属に属する微生物を用いてＬ−プロ
リンを生成蓄積せしめた報告はない。
本発明者等は発酵法によるＬ−プロリンの製法
について種々研究を重ねた結果、セラチア属に属
する微生物はＬ−プロリン分解酵素能が強く、か
つＬ−プロリン生合成が代謝調節を受けているた
め通常Ｌ−プロリンを生成蓄積しないが、該微生
物を変異誘導してＬ−プロリン分解酵素欠損性と
プロリンアナログ及び／又はプリンアナログに対
する耐性を付与することにより、Ｌ−プロリンを
著量生成蓄積することを見いだし、本発明を完成
するに至つた。
について種々研究を重ねた結果、セラチア属に属
する微生物はＬ−プロリン分解酵素能が強く、か
つＬ−プロリン生合成が代謝調節を受けているた
め通常Ｌ−プロリンを生成蓄積しないが、該微生
物を変異誘導してＬ−プロリン分解酵素欠損性と
プロリンアナログ及び／又はプリンアナログに対
する耐性を付与することにより、Ｌ−プロリンを
著量生成蓄積することを見いだし、本発明を完成
するに至つた。
すなわち、本発明はセラチア属に属し、Ｌ−プ
ロリン生産能を有する微生物を培地に培養し、培
地中にＬ−プロリンを生成蓄積せしめ、これを採
取することからなる発酵法によるＬ−プロリンの
製法である。
ロリン生産能を有する微生物を培地に培養し、培
地中にＬ−プロリンを生成蓄積せしめ、これを採
取することからなる発酵法によるＬ−プロリンの
製法である。
本発明を実施するに当つて用いられる微生物と
しては、セラチア属に属し、Ｌ−プロリン分解酵
素（例えば、Ｌ−プロリンオキシダーゼ）欠損性
でかつプロリンアナログ（例えば、３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン、Ｌ−チアゾリン−４−カ
ルボン酸、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸）及
び／又はプリンアナログ（例えば、２，６−ジブ
ロムプリン）に耐性なＬ−プロリン生産菌が挙げ
られる。かかる菌株の好ましい例としては、例え
ばＬ−プロリン分解酵素欠損性でかつプロリンア
ナログ耐性なセラチア・マルセツセンス、Ｌ−プ
ロリン分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及
びプリンアナログに耐性なセラチア・マルセツセ
ンスなどが好適な挙げられる。更に具体的には、
例えばＬ−プロリンオキシダーゼ欠損性でかつ
３，４−デヒドロ−DL−プロリンに耐性なセラ
チア・マルセツセンス、Ｌ−プロリンオキシダー
ゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−DL−プロリ
ン及びＬ−チアゾリジン−４−カルボン酸に耐性
なセラチア・マルセツセンス、Ｌ−プロリンオキ
シダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−DL−
プロリン及び２，６−ジブロムプリンに耐性なセ
ラチア・マルセツセンスなどが好適に挙げられ
る。
しては、セラチア属に属し、Ｌ−プロリン分解酵
素（例えば、Ｌ−プロリンオキシダーゼ）欠損性
でかつプロリンアナログ（例えば、３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン、Ｌ−チアゾリン−４−カ
ルボン酸、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸）及
び／又はプリンアナログ（例えば、２，６−ジブ
ロムプリン）に耐性なＬ−プロリン生産菌が挙げ
られる。かかる菌株の好ましい例としては、例え
ばＬ−プロリン分解酵素欠損性でかつプロリンア
ナログ耐性なセラチア・マルセツセンス、Ｌ−プ
ロリン分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及
びプリンアナログに耐性なセラチア・マルセツセ
ンスなどが好適な挙げられる。更に具体的には、
例えばＬ−プロリンオキシダーゼ欠損性でかつ
３，４−デヒドロ−DL−プロリンに耐性なセラ
チア・マルセツセンス、Ｌ−プロリンオキシダー
ゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−DL−プロリ
ン及びＬ−チアゾリジン−４−カルボン酸に耐性
なセラチア・マルセツセンス、Ｌ−プロリンオキ
シダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−DL−
プロリン及び２，６−ジブロムプリンに耐性なセ
ラチア・マルセツセンスなどが好適に挙げられ
る。
上記の如き変異株は次の如くして取得すること
ができる。例えば、Ｌ−プロリン分解酵素欠損性
でかつプロリンアナログ耐性な変異株は、原株
（例えば、セラチア・マルセツセンスSr41）に変
異誘起処理、例えば紫外線照射するか、又は変異
誘起剤（例えば、Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルフオネ
ートなど）で処理して、変異を誘起せしめたの
ち、Ｌ−プロリンを主たる炭素源もしくは窒素源
として含むようにした平板培地（例えばデービス
の最小培地）で30℃にて３〜５日間培養し、生じ
たコロニーのうち小さいものを釣菌分離すること
によりＬ−プロリン分解酵素欠損株を取得し、つ
いで該欠損株に上記と同様にして変異を誘起せし
めた後、プロリンアナログ（例えば、３，４−デ
ヒドロ−DL−プロリン）0.2mg／mlを添加した平
板培地（例えば、デービスの最小培地）で30℃に
て１〜３日間培養し、生じたコロニーを釣菌分離
することにより取得することができる。かくして
得られる変異株の代表的な例としては、セラチ
ア・マルセツセンスDr−９（微工研菌寄第6159
号）（Ｌ−プロリンオキシダー欠損性でかつ３，
４−デヒドロ−DL−プロリンに耐性な変異株）
が挙げられる。尚、上記で得られた変異株に、更
に上記と同様にして変異を誘起せしめた後、Ｌ−
チアゾリジン−４−カルボン酸1.0mgを含む平板
培地（例えば、炭素源をコハク酸ナトリウム0.5
％にしたデービスの最小培地）で30℃にて３〜５
日間培養し、生じたコロニーを釣菌分離すること
により、Ｌ−プロリンオキシダーゼ欠損性でかつ
３，４−デヒドロ−DL−プロリン及びＬ−チア
ゾリジン−４−カルボン酸に耐性な変異株が得ら
れる。かくして得られる変異株の代表的な例とし
ては、セラチア・マルセツセンスDTr−12（微工
研条寄第171号）が挙げられる。又、Ｌ−プロリ
ン分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及びプ
リンアナログ耐性な変異株は、上記で得られたＬ
−プロリン分解酵素欠損性でかつプロリンアナロ
グに耐性な変異株に変異を誘起せしめた後、プリ
ンアナログ（例えば、２，６−ジブロムプリン）
２mg／mlを含む平板培地で30℃にて１〜３日間培
養し、生じたコロニーを釣菌分離することにより
取得することができる。かくして得られる変異株
の代表的な例としては、セラチア・マルセツセン
スDBr−51（微工研菌寄第6158号）（Ｌ−プロリン
オキシダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−
DL−プロリン及び２，６−ジブロムプリンに耐
性な変異株）が挙げられる。
ができる。例えば、Ｌ−プロリン分解酵素欠損性
でかつプロリンアナログ耐性な変異株は、原株
（例えば、セラチア・マルセツセンスSr41）に変
異誘起処理、例えば紫外線照射するか、又は変異
誘起剤（例えば、Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルフオネ
ートなど）で処理して、変異を誘起せしめたの
ち、Ｌ−プロリンを主たる炭素源もしくは窒素源
として含むようにした平板培地（例えばデービス
の最小培地）で30℃にて３〜５日間培養し、生じ
たコロニーのうち小さいものを釣菌分離すること
によりＬ−プロリン分解酵素欠損株を取得し、つ
いで該欠損株に上記と同様にして変異を誘起せし
めた後、プロリンアナログ（例えば、３，４−デ
ヒドロ−DL−プロリン）0.2mg／mlを添加した平
板培地（例えば、デービスの最小培地）で30℃に
て１〜３日間培養し、生じたコロニーを釣菌分離
することにより取得することができる。かくして
得られる変異株の代表的な例としては、セラチ
ア・マルセツセンスDr−９（微工研菌寄第6159
号）（Ｌ−プロリンオキシダー欠損性でかつ３，
４−デヒドロ−DL−プロリンに耐性な変異株）
が挙げられる。尚、上記で得られた変異株に、更
に上記と同様にして変異を誘起せしめた後、Ｌ−
チアゾリジン−４−カルボン酸1.0mgを含む平板
培地（例えば、炭素源をコハク酸ナトリウム0.5
％にしたデービスの最小培地）で30℃にて３〜５
日間培養し、生じたコロニーを釣菌分離すること
により、Ｌ−プロリンオキシダーゼ欠損性でかつ
３，４−デヒドロ−DL−プロリン及びＬ−チア
ゾリジン−４−カルボン酸に耐性な変異株が得ら
れる。かくして得られる変異株の代表的な例とし
ては、セラチア・マルセツセンスDTr−12（微工
研条寄第171号）が挙げられる。又、Ｌ−プロリ
ン分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及びプ
リンアナログ耐性な変異株は、上記で得られたＬ
−プロリン分解酵素欠損性でかつプロリンアナロ
グに耐性な変異株に変異を誘起せしめた後、プリ
ンアナログ（例えば、２，６−ジブロムプリン）
２mg／mlを含む平板培地で30℃にて１〜３日間培
養し、生じたコロニーを釣菌分離することにより
取得することができる。かくして得られる変異株
の代表的な例としては、セラチア・マルセツセン
スDBr−51（微工研菌寄第6158号）（Ｌ−プロリン
オキシダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−
DL−プロリン及び２，６−ジブロムプリンに耐
性な変異株）が挙げられる。
尚、Ｌ−プロリン生産能を有する変異株の取得
方法は前記方法に限定されるものではなく、例え
ばＬ−プロリン分解酵素欠損性、プロリンアナロ
グ耐性、プリンアナログ耐性などの性質を前記と
は異なつた順序で付与するか、或いは別個に各性
質を有する変異株を取得した後、形質導入などの
遺伝的組み換え手法を採用することによつても、
Ｌ−プロリン生産能を有する変異株を取得するこ
とができる。
方法は前記方法に限定されるものではなく、例え
ばＬ−プロリン分解酵素欠損性、プロリンアナロ
グ耐性、プリンアナログ耐性などの性質を前記と
は異なつた順序で付与するか、或いは別個に各性
質を有する変異株を取得した後、形質導入などの
遺伝的組み換え手法を採用することによつても、
Ｌ−プロリン生産能を有する変異株を取得するこ
とができる。
本発明方法において使用するＬ−プロリン生産
用培地としては、炭素源としてブドウ糖、シヨ
糖、糖蜜の如き糖類、コハク酸、クエン酸、フマ
ール酸の如き有機酸、グリセロールの如き糖アル
コール類等を10〜20％、窒素源としてフマール酸
アンモニウム、コハク酸アンモニウムの如き有機
アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウムの如き無機アンモニウム塩や尿素等を１〜
５％、有機栄養物としてコーンステイープリカ
ー、ペプトン、酵母エキス、魚肉エキス等を０〜
１％の範囲でそれぞれ適当量含有し、他に無機物
としてリン酸カリウム硫酸マグネシウムを少量加
えた培地が好適に使用できる。
用培地としては、炭素源としてブドウ糖、シヨ
糖、糖蜜の如き糖類、コハク酸、クエン酸、フマ
ール酸の如き有機酸、グリセロールの如き糖アル
コール類等を10〜20％、窒素源としてフマール酸
アンモニウム、コハク酸アンモニウムの如き有機
アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウムの如き無機アンモニウム塩や尿素等を１〜
５％、有機栄養物としてコーンステイープリカ
ー、ペプトン、酵母エキス、魚肉エキス等を０〜
１％の範囲でそれぞれ適当量含有し、他に無機物
としてリン酸カリウム硫酸マグネシウムを少量加
えた培地が好適に使用できる。
これらの他に培地のPHを６〜８に保つために炭
酸カルシウムあるいはアンモニア水、クエン酸な
どを必要に応じて添加してもよい。更にこのよう
な培地にＬ−プロリン生合成の前駆物質となるＬ
−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸などを適宜
添加した培地も好適に使用できる。
酸カルシウムあるいはアンモニア水、クエン酸な
どを必要に応じて添加してもよい。更にこのよう
な培地にＬ−プロリン生合成の前駆物質となるＬ
−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸などを適宜
添加した培地も好適に使用できる。
本発明によれば、上記培地に前記のＬ−プロリ
ン生産性変異株を接種し、25〜40℃にて振盪培養
あるいは通気撹拌の如き好気的条件下で２〜７日
間培養することによつて培地中にＬ−プロリンを
著量に蓄積せしめることができる。生成したＬ−
プロリンは培養終了後、菌体その他の不溶物を除
去したのち実施例に示した如くイオン交換樹脂を
用いる通常の分離精製操作によつて容易に採取す
ることができる。
ン生産性変異株を接種し、25〜40℃にて振盪培養
あるいは通気撹拌の如き好気的条件下で２〜７日
間培養することによつて培地中にＬ−プロリンを
著量に蓄積せしめることができる。生成したＬ−
プロリンは培養終了後、菌体その他の不溶物を除
去したのち実施例に示した如くイオン交換樹脂を
用いる通常の分離精製操作によつて容易に採取す
ることができる。
以下、実施例及び参考例をあげて本発明方法を
説明するが、実施例中Ｌ−プロリンの確認はペー
パークロマトグラムのニンヒドリン反応及びイサ
チン反応によつて行ない。その定量はロイコノス
トツク・メゼンテロイデスＰ−60によるバイオア
ツセイによつて行なつた。
説明するが、実施例中Ｌ−プロリンの確認はペー
パークロマトグラムのニンヒドリン反応及びイサ
チン反応によつて行ない。その定量はロイコノス
トツク・メゼンテロイデスＰ−60によるバイオア
ツセイによつて行なつた。
実施例 １
シヨ糖10％、尿素１％、第２リン酸カリウム
0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、コーンステイ
ープリカー0.1％、炭酸カルシウム１％を含む発
酵培地（PH7.0）15mlを500ml容振盪コルベンに注
入し、加熱滅菌した。但し、シヨ糖は別滅菌後、
添加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で30
℃にて一晩培養したセラチア・マルセツセンス
Dr−９株（微工研菌寄第6159号）を一白金耳植
菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの条件下
で72時間培養した時、9.5mg／mlのＬ−プロリン
が培地中に生成蓄積した。
0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、コーンステイ
ープリカー0.1％、炭酸カルシウム１％を含む発
酵培地（PH7.0）15mlを500ml容振盪コルベンに注
入し、加熱滅菌した。但し、シヨ糖は別滅菌後、
添加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で30
℃にて一晩培養したセラチア・マルセツセンス
Dr−９株（微工研菌寄第6159号）を一白金耳植
菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの条件下
で72時間培養した時、9.5mg／mlのＬ−プロリン
が培地中に生成蓄積した。
実施例 ２
実施例１と同一組成の発酵培地にブイヨン斜面
培地で30℃にて一晩培養したセラチア・マルセツ
センスDBr−51株（微工研菌寄第6158号）を１白
金耳植菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの
条件下で72時間培養した時、12.6mg／mlのＬ−プ
ロリンが培地中に生成蓄積した。
培地で30℃にて一晩培養したセラチア・マルセツ
センスDBr−51株（微工研菌寄第6158号）を１白
金耳植菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの
条件下で72時間培養した時、12.6mg／mlのＬ−プ
ロリンが培地中に生成蓄積した。
実施例 ３
シヨ糖15％、尿素２％、第２リン酸カリウム
0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、コーンステイ
ープリカー0.6％、炭酸カルシウム１％を含む発
酵培地（PH7.0）15mlを500ml容振盪コルベンに注
入し、加熱滅菌した。但し、シヨ糖は別滅菌後、
添加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で30
℃にて一晩培養したセラチア・マルセツセンス
DTr−12株（微工研菌寄第6160号）を一白金耳
植菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの条件
下で72時間培養した時、25.6mg／mlのＬ−プロリ
ンが培地中に生成蓄積した。その培養液１を集
めて熱処理した後、ろ過することにより菌体その
他の不溶物を除外した。ろ液を陽イオン交換樹脂
アンバーライトIR−120B（H+型）を充填したカ
ラムに導通した。水洗後、吸着したＬ−プロリン
を５％アンモニア水で溶出し、溶出液を減圧濃縮
した。濃縮液を冷却し、放置したところ、Ｌ−プ
ロリンの結晶18.0ｇを得た。
0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、コーンステイ
ープリカー0.6％、炭酸カルシウム１％を含む発
酵培地（PH7.0）15mlを500ml容振盪コルベンに注
入し、加熱滅菌した。但し、シヨ糖は別滅菌後、
添加した。この発酵培地にブイヨン斜面培地で30
℃にて一晩培養したセラチア・マルセツセンス
DTr−12株（微工研菌寄第6160号）を一白金耳
植菌した。30℃、140回転／分、振幅７cmの条件
下で72時間培養した時、25.6mg／mlのＬ−プロリ
ンが培地中に生成蓄積した。その培養液１を集
めて熱処理した後、ろ過することにより菌体その
他の不溶物を除外した。ろ液を陽イオン交換樹脂
アンバーライトIR−120B（H+型）を充填したカ
ラムに導通した。水洗後、吸着したＬ−プロリン
を５％アンモニア水で溶出し、溶出液を減圧濃縮
した。濃縮液を冷却し、放置したところ、Ｌ−プ
ロリンの結晶18.0ｇを得た。
参考例 １
（セラチア・マルセツセンスDr−９株の取得
方法） セラチア・マルセツセンスSr41株をブイヨン
培地に少量接種し、30℃にて培養した。培養液中
の細菌がおよそ109細胞／mlに達したところで、
Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジンの１mg／ml水溶液を0.25mg／mlになるように
加えて、30℃で20分間培養した後、遠心分離した
この菌体を生理食塩水で洗浄した後、新しいブイ
ヨン培地を加えて30℃で６時間培養した。この培
養液を遠心分離し、上清を捨て、生理食塩水を加
えて細胞を懸濁した。この細胞懸濁液を生理食塩
水で希釈しておよそ103細胞／mlになるよう調整
した。この懸濁液0.1mlをＬ−プロリンを主たる
窒素源とする寒天平板培地（グルコース0.5％、
Ｌ−プロリン0.2％、硫酸アンモニウム0.0002％、
リン酸第二カリウム0.7％、リン酸第一カリウム
0.3％、硫酸マグネシウム・７水和物0.01％、寒
天1.5％）に塗布し、30℃にて３日間培養した。
生じたコロニーのうち小さいものを釣菌分離し、
Ｌ−プロリンオキシダーゼ活性をデンジンガーら
の方法〔ジヤーナル オブ バクテリオロジー、
103巻、第144頁〜第152頁、1970年〕に準じて測
定し、本酵素活性が欠損している株を取得した。
このようにして取得したＬ−プロリン分解酵素欠
損株を上記と同様にしてＮ−メチル−N′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで処理し、およそ
109細胞／mlの細胞懸濁液を調製した。この懸濁
液0.1mlを３，４−デヒドロ−DL−プロリン0.2
mg／mlを含む寒天平板培地（グルコース0.5％、
硫酸アンモニウム0.1％、リン酸第二カリウム0.7
％、リン酸第一カリウム0.3％、硫酸マグネシウ
ム・７水和物0.01％、寒天1.5％）に塗布した。
これを30℃にて２日間培養して生じたコロニーを
釣菌分離し、Ｌ−プロリン生産性を実施例１に記
載したように調べてセラチア・マルセツセンス
Dr−９株を取得した。
方法） セラチア・マルセツセンスSr41株をブイヨン
培地に少量接種し、30℃にて培養した。培養液中
の細菌がおよそ109細胞／mlに達したところで、
Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジンの１mg／ml水溶液を0.25mg／mlになるように
加えて、30℃で20分間培養した後、遠心分離した
この菌体を生理食塩水で洗浄した後、新しいブイ
ヨン培地を加えて30℃で６時間培養した。この培
養液を遠心分離し、上清を捨て、生理食塩水を加
えて細胞を懸濁した。この細胞懸濁液を生理食塩
水で希釈しておよそ103細胞／mlになるよう調整
した。この懸濁液0.1mlをＬ−プロリンを主たる
窒素源とする寒天平板培地（グルコース0.5％、
Ｌ−プロリン0.2％、硫酸アンモニウム0.0002％、
リン酸第二カリウム0.7％、リン酸第一カリウム
0.3％、硫酸マグネシウム・７水和物0.01％、寒
天1.5％）に塗布し、30℃にて３日間培養した。
生じたコロニーのうち小さいものを釣菌分離し、
Ｌ−プロリンオキシダーゼ活性をデンジンガーら
の方法〔ジヤーナル オブ バクテリオロジー、
103巻、第144頁〜第152頁、1970年〕に準じて測
定し、本酵素活性が欠損している株を取得した。
このようにして取得したＬ−プロリン分解酵素欠
損株を上記と同様にしてＮ−メチル−N′−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで処理し、およそ
109細胞／mlの細胞懸濁液を調製した。この懸濁
液0.1mlを３，４−デヒドロ−DL−プロリン0.2
mg／mlを含む寒天平板培地（グルコース0.5％、
硫酸アンモニウム0.1％、リン酸第二カリウム0.7
％、リン酸第一カリウム0.3％、硫酸マグネシウ
ム・７水和物0.01％、寒天1.5％）に塗布した。
これを30℃にて２日間培養して生じたコロニーを
釣菌分離し、Ｌ−プロリン生産性を実施例１に記
載したように調べてセラチア・マルセツセンス
Dr−９株を取得した。
参考例 ２
（セラチア・マルセツセンスDBr−51株の取得
方法） セラチア・マルセツセンスSr41から誘導した
Ｌ−プロリン分解酵素欠損性でかつ３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン耐性な変異株Dr−９を参考
例１に従つて取得した。このDr−９株を、参考
例１と同様にしてＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジンで変異誘導処理し、細胞懸
濁液を調製した。この懸濁液0.1mlを、２，６−
ジブロムプリン２mg／mlを含む寒天平板培地（グ
リセロール0.5％、硫酸アンモニウム0.1％、リン
酸第二カリウム0.7％、リン酸第一カリウム0.3
％、硫酸マグネシウム・７水和物0.01％、寒天
1.5％）に塗布した。これを30℃にて３日間培養
して生じたコロニー釣菌分離し、Ｌ−プロリン生
産性を実施例１に記載したようにして調べ、セラ
チア・マルセツセンスDBr−51株を取得した。
方法） セラチア・マルセツセンスSr41から誘導した
Ｌ−プロリン分解酵素欠損性でかつ３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン耐性な変異株Dr−９を参考
例１に従つて取得した。このDr−９株を、参考
例１と同様にしてＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジンで変異誘導処理し、細胞懸
濁液を調製した。この懸濁液0.1mlを、２，６−
ジブロムプリン２mg／mlを含む寒天平板培地（グ
リセロール0.5％、硫酸アンモニウム0.1％、リン
酸第二カリウム0.7％、リン酸第一カリウム0.3
％、硫酸マグネシウム・７水和物0.01％、寒天
1.5％）に塗布した。これを30℃にて３日間培養
して生じたコロニー釣菌分離し、Ｌ−プロリン生
産性を実施例１に記載したようにして調べ、セラ
チア・マルセツセンスDBr−51株を取得した。
参考例 ３
（セラチア・マルセツセンスDTr−12株の取
得方法） セラチア・マルセツセンスSr41から誘導した
Ｌ−プロリン分解酵素欠損性でかつ３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン耐性な変異株Dr−９を参考
例１に従つて取得した。このDr−９株を参考例
１と同様にしてＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジンで変異誘導処理し、細胞懸濁
液を調製した。この懸濁液0.1mlを、Ｌ−チアゾ
リジン−４−カルボン酸1.0mg／mlを含む寒天平
板培地（コハク酸ナトリウム0.5％、硫酸アンモ
ニウム0.1％、第１リン酸カリウム0.3％、第２リ
ン酸カリウム0.3％、硫酸マグネシウム0.01％、
寒天1.5％）に塗布した。これを30℃、４日間培
養して生じたコロニーを釣菌分離し、Ｌ−プロリ
ン生産性を実施例１に記載したようにして調べ、
セラチア・マルセツセンスDTr−12株を取得し
た。
得方法） セラチア・マルセツセンスSr41から誘導した
Ｌ−プロリン分解酵素欠損性でかつ３，４−デヒ
ドロ−DL−プロリン耐性な変異株Dr−９を参考
例１に従つて取得した。このDr−９株を参考例
１と同様にしてＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジンで変異誘導処理し、細胞懸濁
液を調製した。この懸濁液0.1mlを、Ｌ−チアゾ
リジン−４−カルボン酸1.0mg／mlを含む寒天平
板培地（コハク酸ナトリウム0.5％、硫酸アンモ
ニウム0.1％、第１リン酸カリウム0.3％、第２リ
ン酸カリウム0.3％、硫酸マグネシウム0.01％、
寒天1.5％）に塗布した。これを30℃、４日間培
養して生じたコロニーを釣菌分離し、Ｌ−プロリ
ン生産性を実施例１に記載したようにして調べ、
セラチア・マルセツセンスDTr−12株を取得し
た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ セラチア属に属し、Ｌ−プロリン生産能を有
する微生物を培養して培地中にＬ−プロリンを生
成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
発酵法によるＬ−プロリンの製法。 ２ 微生物が、セラチア属に属し、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及び／又
はプリンアナログに耐性なＬ−プロリン生産菌で
ある特許請求の範囲第１項記載の製法。 ３ 微生物が、セラチア属に属し、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ耐性なＬ
−プロリン生産菌である特許請求の範囲第１項記
載の製法。 ４ 微生物が、セラチア属に属し、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及びプリ
ンアナログに耐性なＬ−プロリン生産菌である特
許請求の範囲第１項記載の製法。 ５ 微生物が、Ｌ−プロリン生産能を有するセラ
チア・マルセツセンスである特許請求の範囲第１
項記載の製法。 ６ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及び／又
はプリンアナログに耐性なＬ−プロリン生産能を
有するセラチア・マルセツセンスである特許請求
の範囲第５項記載の製法。 ７ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ耐性なＬ
−プロリン生産能を有するセラチア・マルセツセ
ンスである特許請求の範囲第５項記載の製法。 ８ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリン
分解酵素欠損性でかつプロリンアナログ及びプリ
ンアナログに耐性なＬ−プリン生産能を有するセ
ラチア・マルセツセンスである特許請求の範囲第
５項記載の製法。 ９ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリン
オキシダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−
DL−プロリンに耐性なＬ−プロリン生産能を有
するセラチア・マルセツセンスである特許請求の
範囲第５項記載の製法。 １０ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリ
ンオキシダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−
DL−プロリン及び２，６−ジブロムプリンに耐
性なＬ−プロリン生産能を有するセラチア・マル
セツセンスである特許請求の範囲第５項記載の製
法。 １１ セラチア・マルセツセンスが、Ｌ−プロリ
ンオキシダーゼ欠損性でかつ３，４−デヒドロ−
DL−プロリン及びＬ−チアゾリジン−４−カル
ボン酸に耐性なＬ−プロリン生産能を有するセラ
チア・マルセツセンスである特許請求の範囲第５
項記載の製法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15982981A JPS5860995A (ja) | 1981-10-06 | 1981-10-06 | 発酵法によるｌ−プロリンの製法 |
| US06/422,730 US4455372A (en) | 1981-10-06 | 1982-09-24 | Method for fermentative production of L-proline |
| EP82109197A EP0076516B1 (en) | 1981-10-06 | 1982-10-05 | Method for fermentative production of l-proline |
| DE8282109197T DE3273210D1 (en) | 1981-10-06 | 1982-10-05 | Method for fermentative production of l-proline |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15982981A JPS5860995A (ja) | 1981-10-06 | 1981-10-06 | 発酵法によるｌ−プロリンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5860995A JPS5860995A (ja) | 1983-04-11 |
| JPH0159876B2 true JPH0159876B2 (ja) | 1989-12-20 |
Family
ID=15702155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15982981A Granted JPS5860995A (ja) | 1981-10-06 | 1981-10-06 | 発酵法によるｌ−プロリンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5860995A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1409659A1 (ru) * | 1985-05-11 | 1988-07-15 | Научно-Исследовательский Технологический Институт Аминокислот | Способ получени L-пролина |
-
1981
- 1981-10-06 JP JP15982981A patent/JPS5860995A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5860995A (ja) | 1983-04-11 |
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