JPH02120664A - 免疫学的抗原検出法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の目的］ （産業上の利用分野） 本発明は、免疫学的凝集反応により抗原を検出する方法
に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）従来、
凝集反応による抗原の検出法として、逆受身血球凝集反
応などの逆受身凝集反応が広く行われ、臨床検査に応用
されていることは周知の通りであるが、感作に用いてい
る抗体は、多クローン抗体である免疫血清である。

このため、特異性の高い抗体が必要であり、しかも、多
量の抗原を用いる労力の大きい特異精製が必須であった
。

上記の逆受身凝集反応に用いる感作用抗体として単クロ
ーン抗体を用いることができれば、抗原抗体反応は単一
の抗原決定基に基づくため、免疫血清よりもはるかに高
い特異性が得られるが、単クローン抗体は、例外的なも
のを除き全く凝集性がないので、逆受身凝集反応に応用
できなかった。

本発明者は、単クローン抗体感作粒子及び多クローン抗
体を併用することにより、凝集反応が生ずることを見出
し、これを利用することによって極めて特異性の高い抗
原検出法を開発することに成功し、本発明を完成するに
至った。

［発明の構成１ （課題を解決するための手段及び作用）本発明の免疫学
的抗原検出法は、抗原に、該抗原に対する単クローン抗
体を感作せしめた粒子及び該抗原に対する多クローン抗
体を接触せしめ、生じる凝集反応によって抗原を検出す
ることを特徴とするものである。

本発明において、検出対象となる抗原としては、抗原性
を有するものであれば、特に制限はなく、免疫原性を有
しないハブテンも含む。

かかる抗原としては、例えばフェリチン、アポリボ蛋白
、Ｃ反応性蛋白などの血漿蛋白：癌胎児性抗原、ａ−フ
ェト蛋白などの腫瘍マーカー：インシュリン、エリスロ
ボエチン、ゴナドトロピンなどのホルモン：結核菌、レ
ンザ球菌などの細菌及びその菌体成分と産生物質：ロタ
ウィルス、アデノウィルス、ＨＢウィルス、ヒト免疫不
全ウィルス（ＨＩＶ）などのウィルスとその構成蛋白：
マイコプラズマ、レプトスピラ、真菌などの微生物とそ
の構成成分等が挙げられる。

ｉ？ｉ記単クローン抗体を感作せしめる粒子としては、
赤血球、細菌菌体、ポリスチレン系などのラテックス、
ガラス、カオリン、シリカなどで作られた粒子、蛋白質
で作られた粒子、炭沫なとで、単クローン抗体を直接あ
るいは間接的に結合させつる粒子であればその成分を問
わないが、直径０．０１＝ｌＯｕｍ程度で、球形で、長
期間安定であることが望ましい。これらの粒子に感作す
る単クローン抗体は周知の常法によって得られる。

例えば、抗原免疫マウス牌臓のＢ細胞とマウス骨髄腫細
胞をポリエチレングリコールなどを使って融合させて、
単クローン抗体産生ハイブリドーマを作製し、これを培
養するか、又はマウスに接種して増殖させ、その腹水か
ら採取してもよい。

次に単クローン抗体は１周知の方法で、粒子に感作する
ことができる。例えば、ポリスチレンラテックスに感作
する場合は、ラテックスを生理食塩水などに懸濁し、こ
れに単クローン抗体を混合し、室温などでゆっくり撹拌
すればよい。感作後、洗浄によって未吸着の抗体を除去
し、その後、アルブミンなどのブロッキング剤で抗体未
吸着部分をブロックしてから適当な溶液に懸濁する。

また、多クローン抗体は周知の方法で、動物に免疫して
調製できる。この場合、不純物を含んだ抗原を免疫して
得られた抗体でも差し支えない。

本発明において、多クローン抗体と抗原との接触は、通
常、単クローン抗体感作粒子と抗原との接触の後に、又
はそれと同時に行う、単クローン抗体感作粒子と抗原と
の接触の前に、多クローン抗体と抗原との接触を行うと
、抗原が単クローン感作粒子に結合できず、凝集を生じ
ないことがある。

抗原を検出するための凝集反応の種類としては、試験管
又はマイクロタイタープレートによる管底凝集反応、ス
ライド凝集反応、試験管内凝集反応などが挙げられる。

このうち試験管内凝集反応は濁度計で凝集の強さを測定
すれば、定量値を求めることも容易である。

本発明の抗原検出法は、純粋な免疫原が得られなくても
、単クローン抗体が得られれば、これによって極めて特
異性の高い反応系をつくることができ、しかも免疫血清
による逆受身凝集反応と同等の高感度な反応とすること
ができる。

（発明の実施例） 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は本発明の範囲を何ら制限するものではな
い。

実施例 癌胎児性抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａ
ｎｔｉｇｅｎ。

ＣＥＡ）の定量 ■）抗ＣＥＡ単クローン抗体感作ラテックスの調製０．
５％ポリスチレンラテックス５ＤＬ５９（武田薬品工業
■製：直径０．９μｍ）ＰＢＳ懸濁液１容に、抗ＣＥＡ
単クローン抗体（イスラエル　バイオロジカルリサーチ
社製）１０μｇ／ｍｌを１容加え、室温で６０分間ゆっ
くり撹拌して感作し、遠心分離して感作ラテツクスを分
取し、ＰＢＳで２回洗浄後、０．１％牛血清アルブミン
加ＰＢＳに懸濁して感作ラテツクスを得た。

２１　ＣＥ　Ａの定量 ■型マイクロタイタープレートの各式に希釈液（牛血清
アルブミン０．１％加ＰＢＳ）を０．０２５ｍ１ずつ分
注し、第１六目に希釈した試料（血清）を０．０２５ｍ
１加え、ダイリュータ−で２°希釈を行った。

他方、４ｎｇ／ｍｌの標準ＣＥＡを無希釈で同様に操作
した。次いでｌ）の感作ラテツクスを０．０２５ｍ１加
えて攪拌した後、抗ＣＥＡ免疫血清（ヤギ血清）、２０
０倍希釈液を０．０２５４１加え、撹拌してから、室温
で６時間静置し、管底凝集の有無を判定した。

また、同時にＣＥＡ酵素抗体法試薬（カイノス）を用い
て酵素抗体法（Ｅ　Ｉ　Ａ）について定量した。結果を
表に示す。

本発明の抗原検出法の結果は、ＥＩＡ法とよく一致し、
感度、特異性ともに満足すべきものであった。

［発明の効果］ 本発明の抗原検出法は、極めて簡便な手段で特異的に高
感度に抗原の定性又は定量が可能で、臨床検査に極めて
有用である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 抗原に、該抗原に対する単クローン抗体を感作せしめた
   粒子及び該抗原に対する多クローン抗体を接触せしめ、
   生じる凝集反応によって抗原を検出することを特徴とす
   る免疫学的抗原検出法。