JPH02138157A - 新規生理活性物質チロスタチン - Google Patents
新規生理活性物質チロスタチンInfo
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- JPH02138157A JPH02138157A JP63290985A JP29098588A JPH02138157A JP H02138157 A JPH02138157 A JP H02138157A JP 63290985 A JP63290985 A JP 63290985A JP 29098588 A JP29098588 A JP 29098588A JP H02138157 A JPH02138157 A JP H02138157A
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- Japan
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- tyrostatin
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- lavendastine
- culture
- formula
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、チロスタチン特異的プロティンキナーゼ阻害
活性並びに抗腫瘍活性を有する新規生理活性物質チロス
タチンに関する。
活性並びに抗腫瘍活性を有する新規生理活性物質チロス
タチンに関する。
抗腫瘍活性物質に関しては、既に多数の物質が医薬とし
て実用化されているが、これらは薬効並びに副作用の点
で必ずしも満足できるものではなく、より優れた抗腫瘍
活性物質が要望されている。
て実用化されているが、これらは薬効並びに副作用の点
で必ずしも満足できるものではなく、より優れた抗腫瘍
活性物質が要望されている。
ビショソブ（Ｂｉｓｈｏｐ、Ｊ、 Ｍ） は、ある種
の癌遺伝子産物がチロノン特異的プロテインキナーセ活
性を有することを報告している〔アンニュアル・レヒ゛
ニー・オブ・バイオケミストリー（八、 Ｒｅｖ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、） ５２３０１〜３５４（１９８３）
〕。
の癌遺伝子産物がチロノン特異的プロテインキナーセ活
性を有することを報告している〔アンニュアル・レヒ゛
ニー・オブ・バイオケミストリー（八、 Ｒｅｖ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、） ５２３０１〜３５４（１９８３）
〕。
また、コーエン（Ｃｏｈｅｎ、 Ｓ）らは、チロシン特
異的プロティンキナーゼが多くの細胞増殖因子による細
胞増殖の過程にシグナル物質として関与していると報告
している〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、＞ ２５７１５２３
〜１５３１（１９８２） 〕。
異的プロティンキナーゼが多くの細胞増殖因子による細
胞増殖の過程にシグナル物質として関与していると報告
している〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、＞ ２５７１５２３
〜１５３１（１９８２） 〕。
この〕プロテインキナーセ阻害物として、従来アープス
タチンがジャーナル・オブ・アンチバイオチック（Ｊ＾
ｎｔｉｂｉｏｔ、） ３９ ．１７３（１９８６）
に、ゲニステインがジャーナル・オブ・アンチバイオチ
ック （Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔ、） ３９ ．６０６（
１９８６） ］に開示されている。
タチンがジャーナル・オブ・アンチバイオチック（Ｊ＾
ｎｔｉｂｉｏｔ、） ３９ ．１７３（１９８６）
に、ゲニステインがジャーナル・オブ・アンチバイオチ
ック （Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔ、） ３９ ．６０６（
１９８６） ］に開示されている。
従来のプロティンキナーゼ阻害活性物質は、何れもその
活性阻害性が充分ではなく、抗腫瘍剤として使用するに
は未だ満足するものではない。
活性阻害性が充分ではなく、抗腫瘍剤として使用するに
は未だ満足するものではない。
本発明は、更に強いプロティンキナーゼ阻害物質を提供
することを目的とするものである。
することを目的とするものである。
本発明者等は、チロシン特異的プロティンキナーゼ活性
の阻害物質を広く自然界から検索し、癌細胞に細胞毒を
顕著に示す物質を得て、本発明を完成した。
の阻害物質を広く自然界から検索し、癌細胞に細胞毒を
顕著に示す物質を得て、本発明を完成した。
本発明は、式（（）
〔式中、Ｒは水酸基又は水素原子を示す〕で示される新
規生理活性物質チロスタチンである。
規生理活性物質チロスタチンである。
本発明の式（１）で示される化合物の内、Ｒが水酸基を
示す化合物をチロスタチンＡ、Ｒが水素原子を示す化合
物をチロスタチンＢと言う。
示す化合物をチロスタチンＡ、Ｒが水素原子を示す化合
物をチロスタチンＢと言う。
チロスタチンＡは下記の物性を有する。
融点 １５８〜１６２ ℃
分子量 ３８１
紫外部、可視部吸収スペクトル（λｍａｘ ｎ１Ｔｌ）
２９７、２８０．２１６ 赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ） （ａｍ−’
）３７００〜２３００．１６００．１４９０．１４７０
．１３７０．１２５０゜１２１Ｇ、 ８３０．７６０ 核磁気共鳴スペクトル ５９１ｍ（’Ｈ−ＮＭＲ）４、
４９ （Ｓ） 、 ４．５５ （ｓ）、 ６．５２ （
ｄ） 、 ６．５６ （ｄｄ） 、 ６．６３（ｄ）、
６．６８ （ｄ）、 ６．７２ （（Ｉｔ）、 ６．
７８ （ｄｄ）、 ７．０３ （ｄｄ）。
２９７、２８０．２１６ 赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ） （ａｍ−’
）３７００〜２３００．１６００．１４９０．１４７０
．１３７０．１２５０゜１２１Ｇ、 ８３０．７６０ 核磁気共鳴スペクトル ５９１ｍ（’Ｈ−ＮＭＲ）４、
４９ （Ｓ） 、 ４．５５ （ｓ）、 ６．５２ （
ｄ） 、 ６．５６ （ｄｄ） 、 ６．６３（ｄ）、
６．６８ （ｄ）、 ６．７２ （（Ｉｔ）、 ６．
７８ （ｄｄ）、 ７．０３ （ｄｄ）。
７、１０ （ｄｔ）、 ７．１６ （ｄｄ） 、 ７．
６８ （ｄ）外観 白色固体 チロスタチンＢは次の物性を有する。
６８ （ｄ）外観 白色固体 チロスタチンＢは次の物性を有する。
融点 １４０〜１４４ ℃
分子ｍ３６５
紫外部、可視部吸収スペクトル（λｍａｘ ｎｍ）３１
０、２７５．２１６ 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ） （ｃｍ−
’）３７００〜２２００．１５９０．１４９０．１４６
０．１４４０．１３８０．１２５０゜８３０．７６０ 核磁気共鳴スペクトル δｐｐｍ ＜’Ｈ−ＮＭＲ）
４．３４（ｓ）、６．５９（ｄ）、６．６８（ｄｔ）、
６．７３（ｄｄ）。
０、２７５．２１６ 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｋ） （ｃｍ−
’）３７００〜２２００．１５９０．１４９０．１４６
０．１４４０．１３８０．１２５０゜８３０．７６０ 核磁気共鳴スペクトル δｐｐｍ ＜’Ｈ−ＮＭＲ）
４．３４（ｓ）、６．５９（ｄ）、６．６８（ｄｔ）、
６．７３（ｄｄ）。
７、０２（ｄａ）、 ７．０４（ｄｄ）、 ７．０４（
ｄｔ）、７．７２（ｄ）外観 白色固体 本発明の上記チロスタチンＡ及びＢは、次のごとくして
製造することができる。
ｄｔ）、７．７２（ｄ）外観 白色固体 本発明の上記チロスタチンＡ及びＢは、次のごとくして
製造することができる。
ストレプトミセス属に属するチロスタチンＡ。
Ｂ生産菌を適当な培地で好気的に培養し、培養物から目
的物を採取することにより製造することができる。
的物を採取することにより製造することができる。
培地はチロスタチンＡ、Ｂ物質生産菌が利用し得る任意
の栄養源を含有するものであればよい。
の栄養源を含有するものであればよい。
例えば、炭素源としてグリセリン、グルコース。
マルトース、シュークロース、デキストリン、スターチ
、油脂類等が使用できる。窒素源として大豆粉、綿実粕
、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母。
、油脂類等が使用できる。窒素源として大豆粉、綿実粕
、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母。
酵母エキス、コーンスチープリカー等の有機物、並びに
硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、炭酸カルシウム、
塩化アンモニウム等のアンモニウム塩、又は硝酸塩等の
無機物が使用できる。また、必要に応じて食塩、塩化カ
リウム、リン酸塩１重金属塩等の無機塩類を添加するこ
とができる。醗酵中の発泡を抑制するために、常法に従
って適当な消泡剤、例えばシリコーン１大豆油等を適宜
添加することもできる。
硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、炭酸カルシウム、
塩化アンモニウム等のアンモニウム塩、又は硝酸塩等の
無機物が使用できる。また、必要に応じて食塩、塩化カ
リウム、リン酸塩１重金属塩等の無機塩類を添加するこ
とができる。醗酵中の発泡を抑制するために、常法に従
って適当な消泡剤、例えばシリコーン１大豆油等を適宜
添加することもできる。
培養法としては、一般に行われている抗生物質の生産の
方法と同様に、好気的液体深部培養法が最も適している
。培養温度は２０〜３５℃が適当であるが、２５〜３０
℃が好ましい。この方法でのチロスタチンＡ、Ｂ物質の
生産量は振盪培養２通気攪拌培養共に約６４時間で最高
に達する。
方法と同様に、好気的液体深部培養法が最も適している
。培養温度は２０〜３５℃が適当であるが、２５〜３０
℃が好ましい。この方法でのチロスタチンＡ、Ｂ物質の
生産量は振盪培養２通気攪拌培養共に約６４時間で最高
に達する。
このようにして、チロスタチンＡ、Ｂが蓄積された培養
物が得られる。培養物中ではチロスタチンＡ、Ｂ物質は
培養物土浦中に存在する。
物が得られる。培養物中ではチロスタチンＡ、Ｂ物質は
培養物土浦中に存在する。
この培養物からチロスタチンＡ、Ｂ物質を採取するには
、合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つの
方法は抽出原理に基づくものであって、具体的には培養
物上清中のチロスタチンＡ。
、合目的的な任意の方法が利用可能である。その一つの
方法は抽出原理に基づくものであって、具体的には培養
物上清中のチロスタチンＡ。
Ｂ物質を水不混和性のチロスタチンＡ、Ｂ物質用溶媒、
例えばブタノール、酢酸ブチル等で抽出する方法が挙げ
られる。
例えばブタノール、酢酸ブチル等で抽出する方法が挙げ
られる。
培養物からチロスタチンＡ、Ｂ物質を採取する他の方法
の一つは、吸着の原理に基づくものであって、既に液状
となっているチロスタチンＡ、 Ｂ物質含有物、例えば
培養濾液或いは上記のようにして抽出を行って得られた
抽出液を適当な吸着剤、例えば活性炭、アルミナ、シリ
カゲル、 「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ （三菱化成■
製）等を用いたカラムクロマトグラフィー、液体クロマ
トグラフィーその他によってチロスタチンＡ、Ｂ物質を
吸着させ、その後溶離させることにより得ることができ
る。このようにして得られたチロスタチンＡ、 Ｂ物
質の溶液を減圧濃縮乾固すれば、チロスタチンＡ、Ｂ物
質の粗標品が白色粉末として得られる。
の一つは、吸着の原理に基づくものであって、既に液状
となっているチロスタチンＡ、 Ｂ物質含有物、例えば
培養濾液或いは上記のようにして抽出を行って得られた
抽出液を適当な吸着剤、例えば活性炭、アルミナ、シリ
カゲル、 「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ （三菱化成■
製）等を用いたカラムクロマトグラフィー、液体クロマ
トグラフィーその他によってチロスタチンＡ、Ｂ物質を
吸着させ、その後溶離させることにより得ることができ
る。このようにして得られたチロスタチンＡ、 Ｂ物
質の溶液を減圧濃縮乾固すれば、チロスタチンＡ、Ｂ物
質の粗標品が白色粉末として得られる。
このようにして得られたチロスタチンＡ、Ｂ物質の粗標
品を更に精製し、チロスタチンＡ及びＢを採取するには
、上記抽出法及び吸着法を必要に応じて組み合わせて、
必要回数実施すればよい。
品を更に精製し、チロスタチンＡ及びＢを採取するには
、上記抽出法及び吸着法を必要に応じて組み合わせて、
必要回数実施すればよい。
例えば、シリカゲル、［セファデックスＬＨ２０Ｊ（フ
ァルマシア社製）、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ等の吸着
剤や、ゲル濾過剤を用いたカラムクロマトグラフィー法
、適当な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー法、向流
分配法及び薄層クロマトグラフィー法等を組み合わせて
実施することができる。
ァルマシア社製）、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ等の吸着
剤や、ゲル濾過剤を用いたカラムクロマトグラフィー法
、適当な溶媒を用いた液体クロマトグラフィー法、向流
分配法及び薄層クロマトグラフィー法等を組み合わせて
実施することができる。
例えば、チロスタチンＡ、Ｂ物質の粗粉末をシリカゲル
カラムを用いて適当な溶媒で展開すると、各有効成分が
分れて抽出され、目的の活性区分をまとめて減圧濃縮後
、セファデックスＬ Ｈ２０カラムクロマトグラフィー
、更に液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィ
ーを行って、目的成分をかきとることにより、単一のチ
ロスタチンＡ及びＢを得ることができる。
カラムを用いて適当な溶媒で展開すると、各有効成分が
分れて抽出され、目的の活性区分をまとめて減圧濃縮後
、セファデックスＬ Ｈ２０カラムクロマトグラフィー
、更に液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィ
ーを行って、目的成分をかきとることにより、単一のチ
ロスタチンＡ及びＢを得ることができる。
本発明のチロスタチンＡ及びＢは、以下に示すごとく、
チロシン特異的プロティンキナーゼ活性を示し、生化学
的試薬、抗腫瘍性物質又は抗菌性物質として有用である
。
チロシン特異的プロティンキナーゼ活性を示し、生化学
的試薬、抗腫瘍性物質又は抗菌性物質として有用である
。
チロシン特異的プロティンキナーゼ活性はエブダーマル
・グロース・ファクター受容体のもつチロシン特異的プ
ロティンキナーゼ活性としてヒト上皮性カルシノーマ細
胞Ａ、−４３１の膜画分を用い、カーペンタ−等（Ｇ、
Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ） Ｃザ・ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ）、 ２５４ 。
・グロース・ファクター受容体のもつチロシン特異的プ
ロティンキナーゼ活性としてヒト上皮性カルシノーマ細
胞Ａ、−４３１の膜画分を用い、カーペンタ−等（Ｇ、
Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ） Ｃザ・ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ）、 ２５４ 。
４８７４〜４８９１（１９７９） ）記載の酵素活性測
定法を改良して行った。即ち、ｌ ｍＭ Ｍｎ Ｃ１
２，５０ｎｇ エピダーマル・グロース・ファクター、
４０４＾−４３１画分、３．７５■アルブミン、６２．
５■合成基質ＲＲ−ＳＲＣ及びチロスタチンＡもしくは
チロスタチンＢを含む５０扉の２０ｍＭヘペス緩衝液（
ｐＨ７，２） を０℃／１０分間でブレインキュベーシ
ョン後、〔ガンマ−３２Ｐ〕アデノシン三リン酸（０，
２５ｍ Ｃ１１０，１２５ｍｉ？） を１０４添加し
、０℃で３０分間反応を行った、１０％ＴＣ＾２５４を
加えて反応を停止し、１３０００ ｇで５分間遠心した
後、上清を５０ｄサンプリングしてＰ８１ ホスホセル
ロースペーパーに吸着させた。これを３０％酢酸水、１
５％酢酸水で１５分間ずつ洗浄し、ペーパーをアセトン
で乾かした後、濾紙に付着した３２ｐのカウントを測定
した（ａ）。同時に検体だけを除いて同様に反応、処理
した時のカウント（ｂ）、また、それぞれ膜画分を除い
た測定値を（ａｏ）及び（ｂ′）としてエビダーマル・
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻害
率を式（（ａ−ａ’ ） ／（ｂ−ｂ’） ） Ｘ１
００ により計算した。
定法を改良して行った。即ち、ｌ ｍＭ Ｍｎ Ｃ１
２，５０ｎｇ エピダーマル・グロース・ファクター、
４０４＾−４３１画分、３．７５■アルブミン、６２．
５■合成基質ＲＲ−ＳＲＣ及びチロスタチンＡもしくは
チロスタチンＢを含む５０扉の２０ｍＭヘペス緩衝液（
ｐＨ７，２） を０℃／１０分間でブレインキュベーシ
ョン後、〔ガンマ−３２Ｐ〕アデノシン三リン酸（０，
２５ｍ Ｃ１１０，１２５ｍｉ？） を１０４添加し
、０℃で３０分間反応を行った、１０％ＴＣ＾２５４を
加えて反応を停止し、１３０００ ｇで５分間遠心した
後、上清を５０ｄサンプリングしてＰ８１ ホスホセル
ロースペーパーに吸着させた。これを３０％酢酸水、１
５％酢酸水で１５分間ずつ洗浄し、ペーパーをアセトン
で乾かした後、濾紙に付着した３２ｐのカウントを測定
した（ａ）。同時に検体だけを除いて同様に反応、処理
した時のカウント（ｂ）、また、それぞれ膜画分を除い
た測定値を（ａｏ）及び（ｂ′）としてエビダーマル・
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼの阻害
率を式（（ａ−ａ’ ） ／（ｂ−ｂ’） ） Ｘ１
００ により計算した。
チロスタチンの生理活性
本発明のチロスタチンは、次に示すように抗腫瘍活性並
びに抗菌活性を有しており、医薬として有用な化合物で
ある。
びに抗菌活性を有しており、医薬として有用な化合物で
ある。
（１）チロシン特異的プロティンキナーゼの阻害活性
前記の測定法で求めたチロスタチンＡ及びＢの５０％阻
害濃度は、それぞれ４．４ｎｇ／ｍ１及び０．４９■／
ｍｌであった。
害濃度は、それぞれ４．４ｎｇ／ｍ１及び０．４９■／
ｍｌであった。
（２）培養癌細胞に対する作用
本発明によるチロスタチンΔ、Ｂ物質は、Ｌ１２１０
白血病細胞、ＩＭＣカルシノーマ細胞、Δ４３１細胞の
培養細胞の増殖を非常に低濃度で阻止する。その結果は
下記表１の通りである。
白血病細胞、ＩＭＣカルシノーマ細胞、Δ４３１細胞の
培養細胞の増殖を非常に低濃度で阻止する。その結果は
下記表１の通りである。
表 １
表 ２
なお、ＩＣ５０は各細胞をデイシュにまき（３〜５ ｘ
ｌＱ’ ｃｅｌｌ／ｄｉｓｈ）、１日培養（３７℃、Ｃ
Ｏ２濃度５％）後、チロスタチンＡ、Ｂを添加し、更に
同条件で３日間培養後、細胞数を計算することにより測
定した。
ｌＱ’ ｃｅｌｌ／ｄｉｓｈ）、１日培養（３７℃、Ｃ
Ｏ２濃度５％）後、チロスタチンＡ、Ｂを添加し、更に
同条件で３日間培養後、細胞数を計算することにより測
定した。
（３） 抗菌活性
ミューラーヒントン培地を用いた寒天希釈法による各種
細菌に対する本発明のチロスタチンへの最低発育阻止濃
度（ＭＩＣ）は、下記表２の通りであった。
細菌に対する本発明のチロスタチンへの最低発育阻止濃
度（ＭＩＣ）は、下記表２の通りであった。
（以下、この頁余白）
以上のごとく、本発明の物質は低濃度で高いチロンン特
異的プロティンキナーゼ活性、培養癌細胞に対する増殖
阻止活性及び抗菌活性を示し、生化学的試薬、抗腫瘍剤
、抗菌剤として有用である。
異的プロティンキナーゼ活性、培養癌細胞に対する増殖
阻止活性及び抗菌活性を示し、生化学的試薬、抗腫瘍剤
、抗菌剤として有用である。
以下に、本発明物質チロスタチンＡ及びＢの製造例を示
し、更に本発明の詳細な説明する。
し、更に本発明の詳細な説明する。
製造例
ストレプトミセス属のＭＩ４３５−４０β６株（微工研
菌寄第１０２８５）の斜面培養物から一白金耳量を予め
１２０ ℃、２０分間滅菌した培地（５００ｍｌの三角
フラスコに１１０ ｍｆｆずつ分注した。グリセロール
２％、デキストリン２％、ソイペプトン１．０ ％、イ
ースト・エキストラ０，３％、硫酸アンモニウム０２％
、炭酸カルシウム０．２ ％を含むｐＨ７，４の培地）
に接種した。２７℃／毎分１８０ 回転で好気的に振盪
培養した。経時的にチロスタチンＡ、Ｂ生産量を培養液
の抗エビダーマル・グロース・ファクター・レセプター
キナーゼ活性を測定し、エビダーマル・グロース・ファ
クター・レセプターキナーゼの阻害活性により定量した
チロスタチンＡ。
菌寄第１０２８５）の斜面培養物から一白金耳量を予め
１２０ ℃、２０分間滅菌した培地（５００ｍｌの三角
フラスコに１１０ ｍｆｆずつ分注した。グリセロール
２％、デキストリン２％、ソイペプトン１．０ ％、イ
ースト・エキストラ０，３％、硫酸アンモニウム０２％
、炭酸カルシウム０．２ ％を含むｐＨ７，４の培地）
に接種した。２７℃／毎分１８０ 回転で好気的に振盪
培養した。経時的にチロスタチンＡ、Ｂ生産量を培養液
の抗エビダーマル・グロース・ファクター・レセプター
キナーゼ活性を測定し、エビダーマル・グロース・ファ
クター・レセプターキナーゼの阻害活性により定量した
チロスタチンＡ。
Ｂ培養液濃度は、培養６４時間後に最高に達し、それ以
後は徐々に低下した。
後は徐々に低下した。
上記の条件で７２時間培養した種培養液を、上記古同様
の培地に２ｍｇ接種し、同様に６４時間培養し、得られ
た培養液２４βを遠心分離し、２０βの培養濾液を得た
。この培養濾液２０Ｅを等量の酢酸ブチルで酸性で抽出
し、酢酸ブチルを減圧下に濃縮乾固して７．０５ ｇを
瀞た。この粗粉末を１２０ ｇのシリカゲル（メルク
社製「キーゼルゲル６０」）のカラムに吸着させ、クロ
ロホルム・メタノール混液の比率を少しずつ変化させな
がら段階的に溶出させてチロスタチンＡ、Ｂを含む両分
を集め、減圧下濃縮乾固して２．１０ ｇの粗粉末を得
た。この粗粉末をメタノールに溶解し、９００ｍｆのセ
ファデックスＬＨ２００カラムに吸着させ、メタノール
で溶出した。活性画分を集め、減圧下に濃縮乾固して１
．０３４５ｇの粗粉末を得た。この粗粉末のエピダーマ
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼ阻害活
性（Ｉ Ｃ３０） は７３．４％ｇ ／ ｍｌであっ
た。この粗粉末を酢酸ブチルに溶かし、ｐＨ５，５で分
液操作を行い、酢酸ブチルを減圧下に濃縮乾固して４３
１．２ｍｇの粗粉末を得た。この粗粉末をメタノールに
溶解し、これを予め１５％アセトニ） ＩＪル水溶液で
平衡化した分取用高速液体クロマトグラフ用逆相カラム
（センシューパック・ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅ。
の培地に２ｍｇ接種し、同様に６４時間培養し、得られ
た培養液２４βを遠心分離し、２０βの培養濾液を得た
。この培養濾液２０Ｅを等量の酢酸ブチルで酸性で抽出
し、酢酸ブチルを減圧下に濃縮乾固して７．０５ ｇを
瀞た。この粗粉末を１２０ ｇのシリカゲル（メルク
社製「キーゼルゲル６０」）のカラムに吸着させ、クロ
ロホルム・メタノール混液の比率を少しずつ変化させな
がら段階的に溶出させてチロスタチンＡ、Ｂを含む両分
を集め、減圧下濃縮乾固して２．１０ ｇの粗粉末を得
た。この粗粉末をメタノールに溶解し、９００ｍｆのセ
ファデックスＬＨ２００カラムに吸着させ、メタノール
で溶出した。活性画分を集め、減圧下に濃縮乾固して１
．０３４５ｇの粗粉末を得た。この粗粉末のエピダーマ
ル・グロース・ファクター・レセプターキナーゼ阻害活
性（Ｉ Ｃ３０） は７３．４％ｇ ／ ｍｌであっ
た。この粗粉末を酢酸ブチルに溶かし、ｐＨ５，５で分
液操作を行い、酢酸ブチルを減圧下に濃縮乾固して４３
１．２ｍｇの粗粉末を得た。この粗粉末をメタノールに
溶解し、これを予め１５％アセトニ） ＩＪル水溶液で
平衡化した分取用高速液体クロマトグラフ用逆相カラム
（センシューパック・ヌクレオシル（Ｎｕｃｌｅ。
５ｌｌ）３ Ｃ＋ｅ ２０φＸ３００ ｍｍ （［セ
ンシュー科学製）に吸着させ、カラムから１５％アセト
ニトリル水溶液で７５ｄ／分の流速で溶出させた。活性
画分を集めて等量の酢酸ブチルで抽出後、濃縮乾固して
チロスタチンＡ、Ｂの混合物の粗粉末１０５．２ｍｇ
を得た。これをシリカゲル薄層クロマトグラフィー（展
開系ＣＨｆｆ３ ：ＭｅＯＨ＝２ ： １）にかけ、紫
外光で検出したチロスタチン八とチロスタチンＢ（Ｒｆ
値 Ａ ：０．４６ Ｂ ：０．５８） を別々に
かきとり、それぞれをクロロホルム：メタノール（２：
１）混液で抽出を行い、減圧下濃縮乾固し、更にそれぞ
れを再びセファデックスＬＨ２０カラムクロマトグラフ
ィー（１０ｍｆｆ） にかけ、純粋なチロスフチンへ
を３７． Ｑｍｇ 、チロスタチンＢを２９．７ｍｇ
、それぞれ白色固体として得た。このチロスタチンＡ及
びＢのエビダーマル・グロース・ファクター・レセプタ
ーキナーゼ活性阻害性（ＩＣ５０）は、チロスタチンＡ
が４．４ｎｇ ／ｍＡ（０，００４４ｇ／ｍｆ） 、Ｂ
が０．４９■／ ｍｅであった。
ンシュー科学製）に吸着させ、カラムから１５％アセト
ニトリル水溶液で７５ｄ／分の流速で溶出させた。活性
画分を集めて等量の酢酸ブチルで抽出後、濃縮乾固して
チロスタチンＡ、Ｂの混合物の粗粉末１０５．２ｍｇ
を得た。これをシリカゲル薄層クロマトグラフィー（展
開系ＣＨｆｆ３ ：ＭｅＯＨ＝２ ： １）にかけ、紫
外光で検出したチロスタチン八とチロスタチンＢ（Ｒｆ
値 Ａ ：０．４６ Ｂ ：０．５８） を別々に
かきとり、それぞれをクロロホルム：メタノール（２：
１）混液で抽出を行い、減圧下濃縮乾固し、更にそれぞ
れを再びセファデックスＬＨ２０カラムクロマトグラフ
ィー（１０ｍｆｆ） にかけ、純粋なチロスフチンへ
を３７． Ｑｍｇ 、チロスタチンＢを２９．７ｍｇ
、それぞれ白色固体として得た。このチロスタチンＡ及
びＢのエビダーマル・グロース・ファクター・レセプタ
ーキナーゼ活性阻害性（ＩＣ５０）は、チロスタチンＡ
が４．４ｎｇ ／ｍＡ（０，００４４ｇ／ｍｆ） 、Ｂ
が０．４９■／ ｍｅであった。
本発明の物質はチロシン特異的プロティンキナーゼ活性
を阻害し、抗菌性及び抗腫瘍性活性の優れた新規物質で
ある。本発明はこれら有用な性質を有する新規物質を提
供する極めて有用な発明である。
を阻害し、抗菌性及び抗腫瘍性活性の優れた新規物質で
ある。本発明はこれら有用な性質を有する新規物質を提
供する極めて有用な発明である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは水酸基又は水素原子を示す〕で示される新
規生理活性物質チロスタチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63290985A JPH02138157A (ja) | 1988-11-16 | 1988-11-16 | 新規生理活性物質チロスタチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63290985A JPH02138157A (ja) | 1988-11-16 | 1988-11-16 | 新規生理活性物質チロスタチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02138157A true JPH02138157A (ja) | 1990-05-28 |
Family
ID=17762971
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63290985A Pending JPH02138157A (ja) | 1988-11-16 | 1988-11-16 | 新規生理活性物質チロスタチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02138157A (ja) |
-
1988
- 1988-11-16 JP JP63290985A patent/JPH02138157A/ja active Pending
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